EA041662B1

EA041662B1 - Способ ингибирования протеин- или тирозинкиназы в клетке с применением диарильного макроциклического соединения

Info

Publication number: EA041662B1
Application number: EA201892241
Authority: EA
Inventors: Цзинжун Джин Цуй; Ишань ЛИ; Эван В. РОДЖЕРС; Даюн ЧЖАЙ
Original assignee: Тёрнинг Поинт Терапьютикс, Инк.
Priority date: 2014-01-24
Filing date: 2015-01-23
Publication date: 2022-11-18

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки

В заявке на данное изобретение заявлен приоритет согласно 35 U.S.C. § 119(e) предварительных заявок США серийный номер 61/931506, поданной 24 января 2014 г., серийный номер 62/049326, поданной сентября 2014 г., и серийный номер 62/106301, поданной 22 января 2015 г., полное содержание которых настоящим включено в данный документ путем ссылки во всей их полноте.

Область техники

Данное изобретение относится к определенным диарил макроциклическим производным, фармацевтическим композициям, содержащим их, и способам их использования для лечения рака, боли, неврологических заболеваний, аутоиммунных заболеваний и воспаления.

Уровень техники

Протеинкиназы являются основными регуляторами клеточного роста, пролиферации и выживания. Генетические и эпигенетические изменения накапливаются в раковых клетках, приводя к ненормальной активации путей сигнальной трансдукции, которая запускает злокачественные процессы. Manning, G. et al., Science, 2002, 298, 1912-1934. Фармакологическое ингибирование таких сигнальных путей представляет собой многообещающие возможности вмешательства для направленного лечения рака. Sawyers, С., Nature, 2004, 432, 294-297.

МЕТ, вместе с RON, относится к уникальному подсемейству рецепторных тирозинкиназ и главным образом продуцируется в клетках эпителиального или эндотелиального происхождения. Park, М. et al., Cell, 1986, 45, 895-904. Фактор роста гепатоцитов (HGF), также известный как рассеивающий фактор (SF), является единственным известным природным высокоаффинным лигандом МЕТ и в основном экспрессируется в клетках мезенхимального происхождения. Bottaro, D.P. et al., Science, 1991, 251, 802-804. HGF/MET сигналы контролируют МЕТ-зависимые процессы клеточной пролиферации, выживания и миграции, которые являются критическими для инвазивного роста во время развития зародышей и постнатальной регенерации органов, и полностью активны у взрослых только для процессов исцеления ран и регенерации тканей, Trusolino, L. et al., Nature Rev. Mol. Cell Biol. 2010, 11, 834-848. HGF/MET ось часто положительно регулируют при многих видах рака посредством активирующей мутации, генной модификации, аберрантного паракрина или продуцирования аутокринного лиганда и сильно связан с опухолегенезом, инвазивным ростом и метастазами, Gherardi, E. et al., Nature Rev. Cancer, 2012, 12, 89-103. Дополнительно, активация HGF/MET сигнализации возникает как важный механизм сопротивления EGFR и BRAF ингибиторных лечений посредством МЕТ амплификации и/или положительной регуляции стромальной HGF, Engelman, J.A. et al., Science, 2007, 316, 1039-1043; Wilson, T.R. et al., Nature, 2012, 487, 505-509. Благодаря роли в аберрантной HGF/MET сигнализации в человеческом онкогенезе, инвазии/метастазах и сопротивлению ингибирование HGF/MET сигнального пути имеет огромный потенциал в терапии рака.

ALK вместе с лейкоцит-тирозинкиназой (LTK) группируется внутри инсулинового рецепторного (IR) суперсемейства рецепторных тирозинкиназ. ALK главным образом экспрессируется в центральной и периферических нервных системах, предполагая возможную роль в нормальном развитии и функционировании нервной системы, Pulford, K. et al., Cell Mol. Life Sci. 2004, 61, 2939. ALK сначала открыли как химерный белок, NPM (нуклeофосмин)-ALK, кодированный химерным геном, возникающим из t(2; 5)(p23; q35) хромосомальной транслокации в клеточных линиях анапластической немелкоклеточной лимфомы (ALCL). Morris, S.W. et al., Science, 1994, 263, 1281. Более 200 отчетливо различимых ALK партнеров транслокации были обнаружены во многих видах рака, включая ALCL (60-90% встречаемость), воспалительных миофибробластомных опухолях (IMT, 50-60%), немелкоклеточных легочных карциномах (NSCLC, 3-7%), видах рака ободочной и прямой кишки (CRC, 0-2,4%), видах рака молочной железы (0-2,4%) и других карциномах. Grande, E. et al., Mol. Cancer Ther. 2011,10, 569-579. ALK-химерные белки расположены в цитоплазме, и партнеры слияния с ALK участвуют в димеризации или олигомеризации химерных белков посредством взаимодействия виток-виток для генерации конститутивной активации ALK киназной функции. Bischof, D. et al., Mol. Cell Biol., 1997, 17, 2312-2325. ЕМЛ4-ALK, содержащая части микротубулин-ассоциированный белково-образный е4 (ЕМЛ4) ген иглокожих и ALK ген, впервые обнаруженный в NSCLC, является высокоонкогенным и, как было показано, вызывает аденокарциному легких у трансгенных мышей. Soda, M. et al., Nature, 2007, 448, 561-566. Онкогенные точечные мутации ALK происходят как в семейных, так и в спорадических случаях нейробластомы. Mosse, Y.P. et al., Nature, 2008, 455, 930-935. ALK является привлекательной молекулярной мишенью для терапевтического вмешательства при раке ввиду важной роли в гематопоэтических, солидных и мезенхимальных опухолях. Grande, supra.

Тропомиозин-связанные рецепторные тирозинкиназы (Trks) являются высокоаффинным рецептором для нейротрофинов (NTs), семейства факторов роста нервов (NGF) белков. Члены семьи Trk сильно экспрессируются в клетках нервного происхождения. Активация Trks (TrkA, TrkB и TrkC) их предпочтительными нейротрофинами (NGF в TrkA, полученный из головного мозга нейротрофический фактор [BDNF] и NT4/5 в TrkB и NT3 в TrkC) опосредует выживание и дифференциацию нейронов во время развития. Сигнальный путь NT/Trk функционирует в качестве эндогенной системы, которая защищает нейроны после биохимических инсультов, преходящей ишемии или физической травмы. Thiele, C.J. et

- 1 041662 al., Clin. Cancer Revs. 2009, 15, 5962-5967. Тем не менее Trk первоначально был клонирован как онкоген, слитый с геном тропомиозина во внеклеточном домене. Активирующие мутации, вызванные хромосомными перестройками или мутациями в NTRK1 (TrkA), были идентифицированы в папиллярной и медуллярной карциноме щитовидной железы и в последнее время в немелкоклеточном раке легких. Pierotti, M.A. et al., Cancer Lett. 2006, 232, 90-98; Vaishnavi, A. et al., Nat. Med. 2013, 19, 14 69-1472. Поскольку Trks играют важную роль в болевых ощущениях, а также в росте опухолевых клеток и сигнализации выживаемости, ингибиторы Trk рецепторных киназ могут обеспечить преимущества в качестве способов лечения боли и рака.

Рецепторная тирозинкиназа AXL относится к семейству ТАМ белков и первоначально была обнаружена у пациентов с хронической миелоидной лейкемией (CML) как неидентифицированный трансформирующий ген. Verma, A. et al., Mol. Cancer Ther. 2011,10, 1763-1773. Первичный лиганд для рецепторов ТАМ является рост-останавливающим специфичным 6 белком (Gas6). AXL экспрессируется повсеместно и был обнаружен в самых разных органах и клетках, в том числе гиппокампе и мозжечке, моноцитах, макрофагах, тромбоцитах, эндотелиальных клетках (ЕС), сердце, скелетных мышцах, печени, почках и семенниках. Положительная регуляция Gas6/AXL сообщалась при многих раковых заболеваниях человека, включая рак толстой кишки, пищевода, щитовидной железы, молочной железы, легких, печени и астроцитому-глиобластому. Повышенная активация AXL наблюдалась в моделях рака легкого EGFR-мутантов in vitro и in vivo с приобретенной устойчивостью к эрлотинибу в отсутствие изменения EGFR T790M или активации MET. Zhang, Z. et al., Nat. Genet. 2012, 44, 852-860. Генетическое или фармакологическое ингибирование AXL восстанавливало чувствительность к эрлотинибу в этих моделях опухолей. Повышенная экспрессия AXL и в некоторых случаях его лиганда Gas6 была найдена в EGFR-мутантном раке легких, полученном от лиц с приобретенной устойчивостью к ингибиторам тирозинкиназ. Поэтому AXL является перспективной терапевтической мишенью для пациентов с EGFR-мутантным раком легких, которые приобрели устойчивость к действию ингибиторов EGFR.

Кризотиниб (PF-02341066) является тирозинкиназным препаратом, направленным на MET/ALK/ROS1/RON с умеренной активностью против TRKs и AXL. Cui, J.J. et al., J. Med. Chem. 2011, 54, 6342-6363. Он был одобрен для лечения некоторых пациентов с поздней стадией (местнораспространенного или метастатического) NSCLC, экспрессирующего аномальный слитый ген ALK, идентифицированный с помощью диагностического теста-компаньона (набор Vysis ALK Break Apart FISH Probe). Подобно иматинибу и другим препаратам ингибиторам киназы, сопротивление неизменно развивается через определенное время лечения кризотинибом. Механизмы сопротивления включают амплификацию гена ALK, вторичные мутации ALK и аномальную активацию других киназ, включая KIT и EGFR. Katayama, R. et al., Sci. Transl. Med. 2012, 4, 120ral7. На основании клинического успеха второго поколения ABL ингибиторов для лечения резистентности к иматинибу у пациентов с CML возникает второе поколение ингибиторов ALK. Эти препараты нацелены на лечение кризотиниб-резистентных пациентов с NSCLC с более мощным ингибированием против как диких, так и мутантных белков ALK. Gridelli, С. et al., Cancer Treat Rev. 2014, 40, 300-306.

Модулируя несколько мишеней в группе структурно родственных тирозинкиназ MET, ALK, AXL и TRK, соединения, описанные в данном документе, направлены на резистентность к кризотинибу, резистентности к препарату ингибитору EGFR и другие первичные показания с аномальной клеточной сигнализацией вследствие МЕТ, ALK, AXL и/или TRK мутаций и генной амплификации. Соединения, которые описаны в настоящем документе, являются ингибиторами МЕТ, диких и мутантных ALKs, AXL и TRKs и будут полезны при лечении онкологических больных с аномальными сигналами от любого одного или нескольких из MET, ALK, AXL или TRKs.

Семейство янус-киназ (JAKs) включает JAK1, JAK2, JAK3 и TYK2, и они являются цитопластическими тирозинкиназами, необходимыми для физиологической сигнализации цитокинов и факторов роста. Quintas-Cardama, A. et al., Nat. Rev. Drug Discov. 2011, 10(2), 127-40; Pesu, M. el al., Immunol. Rev. 2008, 223, 132-142; Murray, P.J., J. Immunol. 2007, 178(5), 2623-2329. JAKs активируются с помощью индуцированной лигандами олигомеризации, что приводит к активации нижнего пути транскрипционной передачи сигнала под названием STAT (преобразователи сигналов и активаторов транскрипции). Фосфорилированные STATs димеризуются и транслоцируются в ядро для запуска экспрессии специфических генов, участвующих в пролиферации, апоптозе, дифференциации, которые необходимы для кроветворения, воспаления и иммунного ответа. Murray, supra.

Исследования мышиного нокаута подразумевали основные роли JAK-STAT сигналов с некоторым их перекрыванием. JAK1 играет критическую роль в сигнализации различных провоспалительных цитокинов, таких как IL-1, IL-4, IL-6 и альфа-фактор некроза опухолей (TNFa). Muller, M. et al., Nature, 1993, 366(6451), 129-135. JAK2 функции для для сигналов гематопоэтичных факторов роста, таких как Еро, IL-3, IL-5, GM-CSF, тромбопоэтинового соматотропина и пролактин-опосредованных сигналов. Neubauer, H. et al., Cell, 1998 93(3), 397-409. JAK3 участвует в опосредовании иммуных ответов, и TYK2 связан с JAK2 или JAK3 для передачи сигналов цитокинов, таких как IL-12. Nosaka, Т. et al., Science, 1995, 270(5237), 800-802; Vainchenker, W. et al., Semin. Cell. Dev. Biol. 2008, 19(4), 385-393.

Аберрантное регулирование JAK/STAT путей участвовало во многих человеческих патологических

- 2 041662 заболеваниях, включая рак (JAK2) и ревматоидный артрит (JAK1, JAK3). Мутация восстановления функций JAK2 (JAK2V617F) была обнаружена у многих пациентов с MPN. Levine, R.L. et al., Cancer Cell, 2005, 7(4), 387-397; Kralovics, R. et al., N. Engl. J. Med. 2005, 253(17), 1779-1790; James, С. et al., Nature, 2005, 434(7037), 1144-1148; Baxter, E.J. et al., Lancet, 2005, 365(9464), 1054-1061. Мутация в JH2 псевдокиназном домене JAK2 приводит к существенно киназной активности. Клетки, содержащие JAK2V617F мутацию, приобретают цитокин-независимую способность к росту и часто превращаются в опухоль, обеспечивая надежную основу для развития JAK ингибиторов в качестве целевой терапии.

Многие ингибиторы JAK в клинических испытаниях продемонстрировали значительное преимущество при спленомегалии и связанными с заболеванием конституциональными симптомами для пациентов с миелофиброзом, включая первый одобренный FDA (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США) ингибитор руксолитиниб в 2011 г. Quintas-Cardama, supra, Sonbol, M.B. et al., Ther. Adv. Hematol. 2013, 4(1), 15-35; La Fave, L.M. et al., Trends Pharmacol. Sci. 2012, 33(11), 574-582. Недавно собранные клинические данные относились к лечению руксолитинибом, указывая на то, что ингибиторы JAK работают как в случаях JAK2 дикого типа, так и в случаях JAK2 мутаций. Verstovsek, S. et al., N. Engl. J. Med. 2012, 366(9), 799-807; Quintas-Cardama, A. et al., Blood, 2010, 115(15), 3109-3117. Открытие селективных ингибиторов JAK2 в отношении JAK1/3 остается нерешенной задачей. Кроме того, гиперактивация JAK2/преобразователей сигналов и активаторов транскрипции 3 (JAK2/STAT3) отвечает за ненормальную дифференциацию дендритных клеток, что приводит к ненормальной дендритной дифференциации клеток и накоплению иммуносупрессивных миелоидных клеток при раке (Nefedova, Y. et al., Cancer Revs. 2005; 65(20):9525-35). В Pten-нулевых стареющих опухолях активация пути Jak2/Stat3 устанавливает иммунодепрессивное микроокружение опухоли, что способствует росту опухолей и резистивности к химиотерапевтическим средствам (Toso, A. et al., Cell Reports 2014, 9, 75-89). Таким образом, фармакологическое ингибирование JAK2/STAT3 пути может быть важной новой терапевтической стратегией для повышения противоопухолевой активности с помощью регуляции противоопухолевого иммунитета.

ROS1 киназа представляет собой рецепторную тирозинкиназу с неизвестным лигандом. Нормальные функции человеческой ROS1 киназы не были полностью понятны. Однако сообщалось, что ROS1 киназа претерпевает генетические перестановки для создания конститутивно активных химерных белков во множестве видов человеческого рака, включая глиобластому, немелкоклеточный рак легких (NSCLC), холангиокарциному, рак яичников, аденокарциному желудка, рак ободочной и прямой кишки, воспалительную миофибробластную опухоль, ангиосаркому и эпителиоидную гемангиоэндотелиому (Davies, K.D. et al., Clin. Cancer Revs. 2013, 19(15):4040-4045). Направленные на ROS1 химерные белки с кризотинибом показали многообещающую клиническую эффективность у пациентов с NSCLC, опухоли которых являются позитивными для ROS1 генетических аномалий (Shaw, А.Т. et al., N. Engl. J. Med. 2014, 371(21):1963-1971). Приобретенные резистентные мутации наблюдались у пациентов, которых лечили кризотинибом (Awad, М.М. et al., N. Engl. J. Med. 2013, 368(25):2396-2401). Необходимо срочно разработать второе поколение ингибиторов ROS1 для преодоления резистентности к кризотинибу ROS1.

Остается потребность в малых молекулах ингибиторов этих нескольких белковых или тирозинкиназных мишеней с желательными фармацевтическими свойствами. Определенные диарильные макроциклических соединения, как было обнаружено в контексте в соответствии с данным изобретением, имеют такой благоприятный профиль активности.

Сущность изобретения

В одном аспекте данное изобретение относится к способу ингибирования в клетке протеин- или тирозинкиназы, выбранной из MET, ALK, ROS1, AXL, TRK и/или JAK, включающему приведение в контакт клетки с эффективным количеством соединения формулы

или его фармацевтически приемлемой соли, где приведение в контакт происходит in vitro, ex vivo или in vivo.

Для краткости, описания публикаций, процитированных в данном описании, включая патенты, настоящим включены в данный документ путем ссылки.

Описание графических материалов

Фиг. 1 иллюстрирует порошковую рентгенограмму кристаллической полиморфной формы 1 свободного основания 11 -фторо-14-метил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-1] [1,4,8,10] бензоксатриазациклотридецин-4(5Н)-она (пример 20).

Фиг. 2 демонстрирует термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии кристаллической полиморфной формы 1 свободного основания 11-фторо-14-метил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15тиенопиразоло[4,3-Щ1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5Н)-она (пример 20).

- 3 041662

Подробное описание изобретения

Перед тем как настоящее изобретение описывать далее, следует понимать, что данное изобретение не ограничено конкретными описанными вариантами реализации, поскольку таковые могут, конечно, варьироваться. Кроме того, следует понимать, что терминология, используемая в данном документе для целей описания конкретных вариантов реализации изобретения, не предназначена для ограничения, поскольку объем данного изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается обычным специалистом в данной области техники, к которой относится данное изобретение. Все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, указанные в данном документе, включены в него качестве ссылки во всей их полноте. Если определение, изложенное в данном разделе, противоречит или иным образом не согласуется с определением, изложенным в патенте, патентной заявке, или другой публикации, которая включена в данный документ в качестве ссылки, то определение, изложенное в этом разделе, превалирует над определением, которое включено в данный документ путем ссылки.

Как используют в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают множественное число, если из контекста явно следует иное. Следует также отметить, что пункты формулы изобретения могут быть составлены таким образом, чтобы исключить любой необязательный элемент. Таким образом, это утверждение предназначено служить в качестве предшествующей основы для использования такой исключительной терминологии, как исключительно, только и т.п., в связи с перечислением элементов пункта формулы изобретения или для использования негативного ограничения.

Как используют в данном документе, термины включая и содержащий используют в их открытом, не ограничивающем смысле.

Для обеспечения более краткого описания некоторые количественные выражения, приведенные в данном документе, определяются термином приблизительно. Понятно, что, будет ли использован термин приблизительно явным образом или нет, каждое количество, указанное в данном документе, предназначено для обозначения фактического заданного значения и также предназначено для обозначения приближения к такому данному значению, которое разумно будет выведено исходя из обычной квалификации в данной области техники, включая эквиваленты и приближения вследствие экспериментальных условий и/или условий измерения для такой заданной величины. Всякий раз, когда выход приведен в процентах, такой выход относится к массе объекта, для которого выход приведен относительно максимального количества того же объекта, который может быть получен в соответствии с конкретными стехиометрическими условиями. Концентрации, которые выражены в процентах, относятся к массовым соотношениям, если не указано иное.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно понимает средний специалист в данной области, к которой относится данное изобретение. Хотя любые способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в данном документе, также могут быть использованы при реализации на практике или при тестировании в соответствии с данным изобретением, предпочтительные способы и материалы описаны ниже. Все публикации, указанные в данном документе, включены в данный документ в качестве ссылки для раскрытия и описания способов и/или материалов, в связи с которыми эти публикации цитируются.

Если иное не указано, методы и приемы вариантов реализации данного изобретения, как правило, выполняют в соответствии с обычными способами, хорошо известными в данной области техники и как описано в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании. См., например, Loudon, Organic Chemistry, Fourth Edition, New York: Oxford University PRevss, 2002, p. 360-361, 1084-1085; Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, 2001.

Химическая номенклатура для соединений, описанных в настоящем документе, в целом была получена с использованием коммерчески доступных программы ACD/Name 2014 (ACD/Labs) или ChemBioDraw Ultra 13.0 (Perkin Elmer).

Следует понимать, что определенные признаки изобретения, которые для ясности описаны в контексте отдельных вариантов реализации изобретения, также могут быть представлены в комбинации в одном варианте реализации изобретения. Наоборот, различные признаки изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта реализации изобретения, могут также быть представлены по отдельности или в любой подходящей подкомбинации. Все комбинации вариантов реализации изобретения, относящиеся к химическим группам, представленные переменными, конкретно охватываются настоящим изобретением и описаны в данном документе таким образом, как если бы каждая и все комбинации были описаны по отдельности и в явном виде в той степени, что такие комбинации охватывают соединения, которые являются стабильными соединениями (т.е. соединениями, которые могут быть выделены, охарактеризованы и испытаны на биологическую активность). Дополнительно, все подкомбинации химических групп, перечисленные в вариантах исполнения изобретения, описывающих такие переменные, также конкретно охватываются настоящим изобретением и описаны в данном документе так,

- 4 041662 как если бы каждые и все такие подкомбинации химических групп были описаны по отдельности и в явном виде в данном документе.

Химические определения

Любая формула, изображенная в данном документе, предназначена для представления соединения этой структурной формулы, а также определенных вариантов или форм. Например, формула, приведенная в данном документе, предполагает включение рацемической формы или одного или нескольки энантиомерных, диастереомерных или геометрических изомеров или их смеси. Кроме того, любая формула, приведенная в данном описании, предназначена для обозначения также гидрата, сольвата, или полиморфной формы такого соединения или их смеси.

Любая формула, представленная в данном документе, также предназначена для представления немаркированных форм, а также меченных изотопами форм соединений. Меченные изотопами соединения имеют структуры, изображенные формулами, приведенными в данном документе, за исключением того, что один или более атомов заменены атомами, имеющими выбранную атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения в соответствии с данным изобретением, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора, хлора и йода, такие как ²Н, ³Н, ^ПС, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷О,³¹Р, ³²Р, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl и ¹²⁵I соответственно. Такие изотопно меченые соединения полезны в метаболических исследованиях (предпочтительно с ¹⁴С), исследованиях кинетики реакций (например, с ²Н или ³Н), методах детекции или визуализации [таких как позиционноэмиссионная томография (PET) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (SPECT)], включая анализы распределения лекарственных средств или субстратов в тканях, или радиоактивном лечении пациентов. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий (т.е. ²Н), может давать определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например повышенного in vivo полураспада или уменьшения требований к дозировке. Меченные изотопами соединения в соответствии с данным изобретением и их пролекарства обычно могут быть получены путем проведения процедур, описанных в схемах или в примерах и препаратах, описанных ниже, путем замены легкодоступного меченного изотопами реагента на немеченный изотопами реагент.

Настоящее изобретение также включает фармацевтически приемлемые соли соединения и фармацевтические композиции, содержащих такие соли, и способы применения таких солей.

Фармацевтически приемлемая соль означает соль свободной кислоты или основания соединения, представленного в данном документе, которая является нетоксичной, биологически переносимой или иным образом биологически пригодной для введения субъекту. См., в общем, S.M. Berge, et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются фармакологически эффективные и пригодные для контакта с тканями субъектов без чрезмерной токсичности, раздражения или аллергической реакции. Соединение, описанное в данном документе, может обладать достаточно кислотной группой, достаточно основной группой, обоими типами функциональных групп или более чем одной каждого типа и, соответственно, реагировать с рядом неорганических или органических оснований и неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемой соли.

Примеры фармацевтически приемлемых солей включают сульфаты, пиросульфаты, бисульфаты, сульфиты, бисульфиты, фосфаты, монокислые фосфаты, дикислые фосфаты, метафосфаты, пирофосфаты, хлориды, бромиды, йодиды, ацетаты, пропионаты, деканоаты, каприлаты, акрилаты, формиаты, изобутираты, капроаты, гептаноаты, пропиолаты, оксалаты, малонаты, сукцинаты, субераты, себацаты, фумараты, малеаты, бутен-1,4-диоаты, гексин-1,6-диоаты, бензоаты, хлоробензоаты, метилбензоаты, динитробензоаты, гидроксибензоаты, метоксибензоаты, фталаты, сульфонаты, метилсульфонаты, пропилсульфонаты, бесилаты, ксилосульфонаты, нафталин-1-сульфонаты, нафталин-2-сульфонаты, фенилацетаты, фенилпропионаты, фенилбутираты, цитраты, лактаты, γ-гидроксибутираты, гликоляты, тартраты и манделаты. Списки других подходящих фармацевтически приемлемых солей см. в REmington's Pharmaceutical Sciences, 17^th Edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985.

Для соединения по изобретению, которое содержит основной азот, фармацевтически приемлемая соль может быть получена любым подходящим способом, доступным в данной области техники, например обработкой свободного основания неорганической кислотой, такой как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, сульфаминовая кислота, азотная кислота, борная кислота, фосфорная кислота и т.п., или органической кислотой, такой как уксусная кислота, фенилуксусная кислота, пропионовая кислота, стеариновая кислота, молочная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, гидроксималеиновая кислота, изэтионовая кислота, янтарная кислота, валериановая кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, олеиновая кислота, пальмитиновая кислота, лауриновая кислота, пиранозидильная кислота, такая как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфа-гидрокси кислота, такая как миндальная кислота, лимонная кислота, или винная кислота, аминокислота, такая как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматическая кислота, такая как бензойная кислота, 2-ацетоксибензойная кислота, нафтойная кислота, или коричная кислота, сульфоновая кислота, такая как лаурилсульфоновая

- 5 041662 кислота, п-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, или любая совместимая смесь кислот, таких как те, которые приведены в качестве примеров в данном документе, и любая другая кислота и их смесь, которые рассматриваются в качестве эквивалентов или приемлемых заместителей с учетом обычного уровня знаний в данной технологии.

Фармацевтические композиции

Для лечебных целей фармацевтические композиции, содержащие соединение, описанное в данном документе, могут дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов. Фармацевтически приемлемый эксципиент представляет собой вещество, которое является нетоксичным и иным образом биологически пригодным для введения субъекту. Такие эксципиенты облегчают введение соединений, описанных в данном документе, и совместимы с активным ингредиентом. Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей включают стабилизаторы, смазывающие вещества, поверхностно-активные вещества, разбавители, антиоксиданты, связывающие вещества, окрашивающие агенты, наполнители, эмульгаторы или модифицирующие вкус агенты. В предпочтительных вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, предлагаемые в данном изобретении, являются стерильными композициями. Фармацевтические композиции могут быть получены с использованием методов компаундирования, известных или которые становятся доступными специалистам в данной области техники.

Стерильные композиции также охвачены данным изобретением, в том числе композиции, которые соответствуют национальным и местным правилам, регулирующим такие композиции.

Фармацевтические композиции и соединение, описанные в данном документе, могут быть приготовлены в виде растворов, эмульсий, суспензий или дисперсий в подходящих фармацевтических растворителях или носителях, или как пилюли, таблетки, пастилки, суппозитории, саше, драже, гранулы, порошки, порошки для восстановления, или капсулы вместе с твердыми носителями в соответствии с обычными способами, известными в данной области техники, для приготовления различных лекарственных форм. Фармацевтические композиции в соответствии с данным изобретением могут быть введены с помощью подходящего способа доставки, такого как пероральная, парентеральная, ректальная, назальная, местная, или глазными маршрутами, или путем ингаляции. Предпочтительно композиции составляют для внутривенного или перорального введения.

Для перорального введения соединения изобретение может быть представлено в твердой форме, такой как таблетки или капсулы, или в виде раствора, эмульсии или суспензии. Для приготовления композиций для полости рта соединения в соответствии с данным изобретением могут быть приготовлены, чтобы получить дозу, например, от приблизительно 0,1 мг до 1 г в день, или приблизительно от 1 до 50 мг в день, или приблизительно от 50 до 250 мг в день, или приблизительно 250 мг до 1 г в день. Пероральные таблетки могут содержать активный ингредиент(ы) в смеси с совместимыми фармацевтически приемлемыми наполнителями, такими как разбавители, дезинтеграторы, связующие агенты, смазывающие агенты, подсластители, агенты, ароматизаторы, красящие агенты и консервирующие агенты. Подходящие инертные наполнители включают карбонат натрия и кальция, фосфат натрия и кальция, лактозу, крахмал, сахар, глюкозу, целлюлозу, метил стеарат магния, маннит, сорбит и т.п. Иллюстративные жидкие пероральные эксципиенты включают этанол, глицерин, воду и т.п. Крахмал, поливинилпирролидон (PVP), натрийкрахмалгликолят, микрокристаллическая целлюлоза и альгиновая кислота являются иллюстративными дезинтегрирующими агентами. Связующие вещества могут включать крахмал и желатин. Смазочное вещество, если оно присутствует, может быть стеаратом магния, стеариновой кислотой или тальком. При желании, таблетки могут быть покрыты таким материалом, как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, чтобы задерживать всасывание в желудочно-кишечном тракте, или могут быть покрыты энтеросолюбильным покрытием.

Капсулы для перорального введения включают твердые и мягкие желатиновые капсулы. Для приготовления твердых желатиновых капсул активный ингредиент(ы) может быть смешан с твердым, полутвердым или жидким разбавителем. Мягкие желатиновые капсулы могут быть получены путем смешивания активного ингредиента с водой, маслом, таким как арахисовое масло или оливковое масло, жидким парафином, смесью моно- и диглицеридов короткоцепочечных жирных кислот, полиэтиленгликолем 400 или пропиленгликолем.

Жидкости для перорального введения могут быть в виде суспензий, растворов, эмульсий или сиропов или могут быть лиофилизированными или представлены в виде сухого продукта для восстановления водой или другой подходящей основой перед использованием. Такие жидкие композиции могут необязательно содержать: фармацевтически приемлемые наполнители, такие как суспендирующие агенты (например, сорбит, целлюлоза, метил альгинат натрия, желатин, гидроксиэтилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гель стеарата алюминия и т.п.); неводные основы, например масло (например, миндальное масло или фракционированное кокосовое масло), пропиленгликоль, этиловый спирт или воду; консерванты (например, метил, или пропил-п-гидроксибензоат, или сорбиновую кислоту); смачивающие агенты, такие как лецитин; и, при желании, ароматизатор или красители.

Для парентерального применения, в том числе внутривенного, внутримышечного, внутрибрюшинного, интраназального или подкожного маршрутов, агенты в соответствии с данным изобретением могут

- 6 041662 быть представлены в виде стерильных водных растворов или суспензий, забуферированы до соответствующего рН и изотоничности или в парентерально приемлемом масле. Подходящие водные носители включают раствор Рингера и изотонический хлорид натрия. Такие формы могут быть представлены в виде единичной дозы, такой как ампулы или одноразовые устройства для инъекций, в формах для многократных дозировок, таких как флаконы, из которых соответствующая доза может быть извлечена, или в твердой форме или предварительного концентрированы, что может быть использовано для получения препарата для инъекций.

Иллюстративные инфузионные дозы находятся в диапазоне от приблизительно 1 до 1000 мкг/кг/мин агента в смеси с фармацевтическим носителем в течение периода времени от нескольких минут до нескольких дней.

Для назального, ингаляционного или перорального введения фармацевтические композиции в соответствии с данным изобретением можно вводить с использованием, например, препарата в виде спрея, также содержащего соответствующий носитель. Композиции в соответствии с данным изобретением могут быть получены для ректального введения в виде суппозитория.

Для местного применения соединения в соответствии с данным изобретением предпочтительно получают в виде кремов или мазей или подобной основы, пригодной для местного применения. Для местного применения соединения в соответствии с данным изобретением могут быть смешаны с фармацевтическим носителем при концентрации от приблизительно 0,1 до приблизительно 10% лекарственного средства на основу. Другой способ применения агентов в соответствии с данным изобретением может использовать композицию для пластырей для осуществления трансдермальной доставки.

Как использовано в данном документе, термины лечить или лечение охватывают как профилактическое, так и лечебное лечение. Профилактическое лечение предназначено для указания на отсрочку развития заболевания, симптома заболевания или заболевания, подавляя симптомы, которые могут возникнуть, или уменьшая риск развития или рецидива заболевания или симптома. Лечебное лечение включает снижение тяжести или подавление ухудшения существующего заболевания, симптома, или состояния.

Таким образом, лечение включает ослабление или предотвращение ухудшения существующих симптомов заболевания, предотвращая возникновение дополнительных симптомов, ослабление или предотвращение лежащих в основе системных причин симптомов, ингибирование расстройства или заболевания, например купирование развития расстройства или заболевания, облегчение расстройства или заболевания, регрессию расстройства или заболевания, облегчение состояния, вызванного заболеванием или расстройством, или прекращение симптомов заболевания или расстройства.

Термин субъект относится к млекопитающему пациенту, который нуждается в таком лечении, такому как человек.

Иллюстративные заболевания включают рак, боль, неврологические заболевания, аутоиммунные заболевания и воспаление. Рак включает, например, рак легких, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, гепатоцеллюлярную карциному, почечно-клеточный рак, рак желудка и пищеводно-желудочный рак, глиобластому, рак головы и шеи, воспалительные миофибробластические опухоли и анапластические немелкоклеточные лимфомы. Боль включает, например, боль от любого источника или этиологии, в том числе боль при раке, боль от химиотерапевтического лечения, нервную боль, боль от травмы или от других источников. Аутоиммунные заболевания включают, например, ревматоидный артрит, синдром Шегрена, сахарный диабет I типа и волчанку. Иллюстративные неврологические заболевания включают болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз и болезнь Хантингтона. Иллюстративные воспалительные заболевания включают атеросклероз, аллергию и воспаление от инфекции или травмы.

В одном аспекте соединения и фармацевтические композиции в соответствии с данным изобретением специфически направлены на рецепторные тирозинкиназы, в частности MET, ALK, AXL, TRK и JAK. Таким образом, эти соединения и фармацевтические композиции могут быть использованы для профилактики, изменения хода, замедления или ингибирования активности одной или нескольких из этих киназ. В предпочтительных вариантах реализации изобретения способы лечения направлены на рак. В других вариантах реализации изобретения способы представляют собой способы лечения рака легких или немелкоклеточного рака легких.

В ингибирующих способах в соответствии с данным изобретением эффективное количество означает количество, достаточное для ингибирования целевого белка. Измерение такой целевой модуляции может быть выполнено с помощью обычных аналитических методов, таких как те, которые описаны ниже. Такая модуляция полезна в различных ситуациях, в том числе в анализах in vitro. В таких способах клетка предпочтительно представляет собой клетку рака с аномальной сигнализацией вследствие повышающей регуляции Met, ALK, AXL, TRKs и/или JAK.

В способах лечения согласно данному изобретению эффективное количество означает количество или дозу, достаточную для общего получения желаемого терапевтического эффекта у субъектов, нуждающихся в таком лечении. Эффективные количества или дозы соединений в соответствии с данным изобретением могут быть установлены с помощью обычных методов, таких как моделирование, эскала

- 7 041662 ция дозы, или клинических испытаний с учетом обычных факторов, например режима или маршрута введения или доставки лекарственных средств, фармакокинетики агента, тяжести и течения инфекции, состояния здоровья субъекта, состояния и веса, а также суждения лечащего врача. Иллюстративная доза находится в диапазоне от приблизительно от 0,1 мг до 1 г в день, или приблизительно от 1 до 50 мг в день, или приблизительно от 50 до 250 мг в день, или приблизительно от 250 мг до 1 г в день. Общая дозировка может быть дана в виде одной или раздельных единиц дозировки (например, BID, TID, QID).

После того как произошло улучшение заболевания пациента, доза может быть скорректирована для профилактического или поддерживающего лечения. Например, доза или частота введения или оба компонента могут быть уменьшены в зависимости от симптомов до уровня, при котором сохраняется желаемый терапевтический или профилактический эффект. Конечно, если симптомы были облегчены до соответствующего уровня, лечение может быть прекращено. Пациенты могут, однако, требовать периодического лечения на долговременной основе при любом рецидиве симптомов. Пациенты могут также потребовать хронического лечения на долгосрочной основе.

Химический синтез

Иллюстративные химические соединения, используемые в способах в соответствии с данным изобретением, будут описаны со ссылкой на иллюстративные схемы синтеза для их общего получения, приведенные ниже, и на конкретные примеры, которые приведены ниже. Специалист в данной области техники понимает, что для получения различных соединений в данном документе исходные материалы могут быть соответствующим образом выбраны таким образом, чтобы, в конечном счете, желаемые заместители будут перенесены по схеме реакции с или без защиты по мере необходимости, с получением целевого продукта. В качестве альтернативы может быть необходимо или желательно использовать вместо, в конечном счете, желаемого заместителя подходящую группу, которая может быть перенесена через схему реакции и заменена в соответствующих случаях желаемым заместителем. Кроме того, специалисту в данной области техники будет понятно, что преобразования, показанные на схемах ниже, могут быть выполнены в любом порядке, который совместим с функциональностью конкретных подвешенных (боковых) групп. Каждую из реакций, изображенных на общих схемах, предпочтительно проводят при температуре от приблизительно 0°С до температуры дефлегмации используемого органического растворителя. Если не указано иное, то переменные имеют значения, указанные выше в ссылке на формулу (I). Меченные изотопами соединения, описанные в данном документе, получают в соответствии со способами, описанными ниже, с использованием соответствующим образом меченых исходных материалов. Такие материалы, как правило, доступны от коммерческих поставщиков химических радиоактивно мече ных реактивов.

Общий способ А:

Будет оценено, что соединения формулы А или A-1 могут быть получены в соответствии с общим методом с использованием соответствующим образом функционализированных исходных материалов и промежуточных веществ.

Стадия 1. К раствору соответствующим образом функционализированного соединения A-1 (~1,00 экв.), TD, где RA и RB представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе, и Nu представляет собой нуклеофильную группу, такую как анион, или группу, способную образовывать нуклеофил, такоой как галид, в реагенте, способном усиливать сочетание А-1 и А-2, таком как кислота (например, TfOH (0,6 М)) или алкил галид (например, n-BuLi), может быть добавлена А-2, где R^C представляет собой группу, совместимую с условиями реакции, описанными в данном документе, и X² представляет собой, например, отходящую группу (~1,00 экв.) при соответствующей температуре (например, 0°С). Смесь может быть перемешана при соответствующей температуре (например, 60°С) до завершения реакции. Реакция затем может быть возвращена до температуры окружающей среды, реакционная смесь может быть погашена, нейтрализована, промыта, экстрагирована, высушена и/или концентрирована в вакууме по мере необходимости с получением А-3.

Стадия 2. Смесь А-3, где R^A, RB и R^C представляют собой группы, совместимые с условиями реак

- 8 041662 ции, описанными в данном документе (в некоторых иллюстративных вариантах реализации изобретения, описанных в данном документе, А-3 может быть коммерчески доступным альдегидом или кетоном или А-3 может быть получен на стадии 1, ~1,00 экв.), и A-4 (A-4 может быть коммерчески доступным амином, где R^C представляет собой группу, совместимую с условиями реакции, описанными в данном документе, (~1,50 экв.) в соответствующем растворителе (например, метаноле (0,5 М)), может быть перемешана при соответствующей температуре (например, температуре окружающей среды) в течение соответствующего периода времени или до завершения превращения согласно данным ТСХ или ЖХ-МС. В реакционный раствор может быть добавлен восстановитель (например, NaBH4 (~2,00 экв.)) по порциям. Смесь может быть перемешана при соответствующей температуре (например, температуре окружающей среды), пока ТСХ или ЖХ-МС не продемонстрирует завершение реакции. Реакцию можно погасить, промыть, экстрагировать, высушить и/или концентрировать в вакууме по мере необходимости с получением А-5.

Стадия 3. Смесь, полученная или коммерчески доступная А-5, где RA, RB и R^C представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе (~1 экв.), коммерчески доступный этил 5-хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат (А-6, ~1 экв.) и соответствующее основание (например, диизопропилэтиламин (~5 экв.)) в соответствующем растворителе (например, бутаноле (0,4 М)) может быть перемешана при соответствующей температуре (например, 110°С) в течение установленного периода времени или пока завершение реакции не будет продемонстрировано. Реакция может быть возвращена до температуры окружающей среды и разбавлена водой по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована, промыта, высушена, концентрирована при пониженном давлении и/или очищена хроматографическими методами по мере необходимости с получением А.

В некоторых примерных вариантах реализации изобретения общий способ А может выполняться следующим образом:

NaBH4

R^B η Метанол ίΐ ₊ 1 ---- £ J _Rc ⁺ H2N-R^d -----raA^ R^c><CI о

A-1 A-2 A-3 A-4

Стадия 1. К раствору А-1 (1,00 экв.) в TfOH (0,6 М) может быть добавлен А-2 (1,00 экв.) при 0°С. Смесь может быть перемешана при 60°С в течение 4 ч или до завершения реакции. После охлаждения до температуры окружающей среды реакционную смесь можно выливать в ледяную воду (мас./мас. = 1/1), нейтрализовать NaHCO₃ до рН ~9 и экстрагировать EtOAc трижды по мере необходимости. Соединенные органические слои могут быть промыты солевым раствором, их высушивали над безводным Na₂SO₄по мере необходимости и концентрировали с получением А-3.

Стадия 2. Смесь А-3 (коммерчески доступный альдегид или кетон или полученная на стадии 1, 1,00 экв.) и коммерчески доступный амин А-4 (1,50 экв.) в метаноле (0,5 М) может быть перемешана при температуре окружающей среды в течение 2 ч или пока завершение образования имина не будет показано при помощи данных ТСХ или ЖХ-МС. В реакционный раствор может быть добавлен NaBH4 (2,00 экв.) по порциям. Смесь может быть перемешана при температуре окружающей среды, пока ТСХ или ЖХ-МС не продемонстрирует завершение реакции. Реакцию можно погасить водой и она может быть экстрагирована трижды дихлорметаном по мере необходимости. Комбинированная органическая фаза может быть промыта солевым раствором, высушена безводным Na₂SO₄, отфильтрована и концентрирована в вакууме с получением А-5.

Стадия 3. Полученный или коммерчески доступный А-5 (1 экв.), этил 5-хлоропиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоксилат (А-6, 1 экв.) и диизопропилэтиламин (5 экв.) в бутаноле (0,4 М) может быть нагрет при 110°С в течение 30 мин или пока завершение реакции не будет продемонстрировано. Реакция может быть охлаждена и разбавлена водой. Смесь может быть экстрагирована дихлорметаном четырежды (по мере необходимости) и соединенные экстракты могут быть высушены над безводным сульфатом натрия. После фильтрования смесь может быть концентрирована при пониженном давлении и остаток может быть очищен при помощи флэш-хроматографии с получением А.

- 9 041662

Альтернативный общий способ А:

АА-1 АА-2 А-6

АА-3 АА-4

Стадия сочетания 1. Смесь соответствующим образом функционализированного АА-1 (~1,00 экв.), соответствующим образом функционализированного винилового агента сочетания (~1,00-1,50 экв.) и палладиевого катализатора (~0,05 экв.) в соответствующих условиях реакции может быть нагрета до температуры окружающей среды (например, ~90°С) в течение соответствующего периода времени в инертной атмосфере, пока ТСХ не покажет полное израсходование исходного материала. Реакционная смесь может быть вылита в Н2О по мере необходимости.

Смесь может быть экстрагирована и органическая фаза промыта, высушена, концентрирована и очищена при помощи хроматографии на силикагелевой колонке по мере необходимости с получением АА-2.

Стадия сочетания 2. Смесь соединения типа АА-2 (~1,00 экв.), этил 5-хлоропиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоксилата (А-6, ~1,00 экв.) и палладиевого катализатора в соответствующих условиях реакции может быть нагрета до температуры окружающей среды (например, 120°С) в течение соответствующего периода времени в инертной атмосфере, пока ТСХ не покажет полное израсходование исходного материала. Реакционная смесь может быть вылита в H2O по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована и органическая фаза может быть промыта, высушена, концентрирована и очищена при помощи хроматографии на силикагелевой колонке по мере необходимости с получением АА-3.

Стадия 3. В смесь АА-3 (~1,00 экв.) и 4-метилбензолсульфоногидразида (в молярном избытке) в подходящем растворителе может быть добавлено соответствующее основание (в молярном избытке) при соответствующей температуре в инертной атмосфере. Смесь может быть нагрета до температуры окружающей среды (например, 65°С) и перемешана в течение соответствующего периода времени, пока ТСХ не покажет завершение реакции. Смесь может быть охлаждена и концентрирована при пониженном давлении по мере необходимости. Концентрированная реакционная смесь может быть разбавлена водой по мере необходимости и экстрагирована. Комбинированная органическая фаза может быть промыта, высушена, отфильтрована, концентрирована в вакууме и очищена с получением АА-4.

Общий способ В:

r^cnh₂

Востанавливающий

NH ______агент______

PG Растворитель

θ^-^NHPG if

В-4 А-6 _в

Стадия 1. Раствор альдегида В-1 (~1,0 экв.), где R^A и R^B представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе, В-2 (~1,0 экв.), где X¹ представляет собой отходящую группу и PG представляет собой защитную группу, подходящего основания (в молярном избытке) и катализатора в подходящем растворителе может быть нагрет и перемешан в течение соответствующего периода времени до завершения реакции. Дополнительный В-2 может быть добавлен и дополнительное нагревание прикладывают по мере необходимости. Смесь может быть охлаждена до температуры окружающей среды и разбавлена водой по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована и соединенные экстракты могут быть промыты, высушены и концентрированы при пониженном давлении по мере необходимости. Неочищенный продукт реакции может быть очищен при помощи флэшхроматографии с получением В-3.

Стадия 2. Альдегид В-3 (~1,0 экв.) и соответствующим образом функционализированный амин (~2,0-4,0 экв.), где R^A представляет собой группу, совместимую с условиями реакции, описанными в

- 10 041662 данном документе, в соответствующем растворителе могут быть нагреты и перемешаны в течение соответствующего периода времени. Смесь может быть охлаждена до температуры окружающей среды? и соответствующий восстановитель (~1,0 экв.) может быть добавлен. Смесь может быть перемешана в течение соответствующего периода времени и затем погашена путем добавления воды по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована в соответствующем органическом растворителе, и соединенные экстракты могут быть промыты, высушены и концентрированы при пониженном давлении по мере необходимости. Неочищенный продукт реакции может быть очищен при помощи флэш-хроматографии по мере необходимости с получением В-4.

Стадия 3. Соединение В-4 (~1,0 экв.), этил 5-хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат (А-6, ~1,0 экв.) и подходящее основание (в молярном избытке) в подходящем растворителе может быть нагрето в течение соответствующего периода времени. Реакция может быть охлаждена и разбавлена водой по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована подходящим органическим растворителем, и соединенные экстракты могут быть высушены и концентрированы при пониженном давлении по мере необходимости. Неочищенный продукт реакции может быть очищен при помощи флэш-хроматографии с получением В1.

В некоторых иллюстративных вариантах реализации изобретения общий способ В может быть выполнен следующим образом:

Стадия 1. Раствор альдегида В-1 (~1,0 экв.), где R^A и R^B представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе, В-2 (~1,0 экв.), где X¹ представляет собой отходящую группу и PG представляет собой защитную группу, карбонат калия (в молярном избытке) и йодид калия (каталитическое количество) в DMF, может быть нагрет до 60°С и перемешан в течение ~15 ч. Дополнительный хлорид В-2 может быть добавлен, и дополнительный нагрев 80°С может быть приложен по мере необходимости, пока завершение реакции не будет продемонстрировано. Смесь может быть охлаждена до температуры окружающей среды и разбавлена путем добавления воды (250 мл) по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована этилацетатом (3x300 мл), и соединенные экстракты могут быть промыты водой (200 мл) и солевым раствором (100 мл), могут быть высушены сульфатом натрия и концентрированы при пониженном давлении по мере необходимости. Неочищенный продукт реакции может быть очищен при помощи флэш-хроматографии с получением В-3.

Стадия 2. Альдегид В-3 (~1,0 экв.) и метиламин (~2,5 экв.) в метаноле могут быть нагреты до 60°С и перемешаны в течение ~1 ч. Смесь может быть охлаждена до температуры окружающей среды, и может быть добавлен борогидрид натрия (~1,0 экв.). Смесь может быть перемешана в течение ~30 мин и затем погашена путем добавления воды (200 мл) по мере необходимости. Смесь может быть экстрагирована дихлорметаном, и соединенные экстракты могут быть промыты солевым раствором (50 мл), могут быть высушены сульфатом натрия и концентрированы при пониженном давлении по мере необходимости. Неочищенный продукт реакции может быть очищен при помощи флэш-хроматографии с получением В-4.

Стадия 3. Амин В-4 (~1,0 экв.), этил 5-хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат (А-6, ~1,0 экв.) и основание Хунига (в молярном избытке) в бутаноле могут быть нагреты при 110°С в течение ~25 мин. Реакция может быть охлаждена и разбавлена водой (250 мл). Смесь может быть экстрагирована дихлорметаном, и соединенные экстракты могут быть высушены сульфатом натрия по мере необходимости. Смесь может быть концентрирована при пониженном давлении по мере необходимости. Неочищенный продукт реакции может быть очищен при помощи флэш-хроматографии с получением В.

- 11 041662

Общий способ С:

Стадия 1. К раствору С-1 (~1,0 экв.), где R^A, R^B, R^C, RD и RE представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе, X1AlkNHPG (~1,5-2,0 экв.), где X¹ представляет собой отходящую группу, Alk представляет собой соответствующим образом функционализированную алкильную группу и PG представляет собой защитную группу в подходящем растворителе, может быть добавлено подходящее основание (~3,0 экв.). Смесь может быть нагрета до температуры окружающей среды в течение соответствующего периода времени в инертной атмосфере до полного превращения исходного материала в продукт, показанный при помощи ЖХ-МС. Смесь может быть охлаждена до температуры окружающей среды, разбавлена водой и экстрагировална подходящим органическим растворителем по мере необходимости. Соединенные органические экстракты могут быть промыты водой и солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, и концентрировали по мере необходимости. Полученный в результате остаток может быть очищен при помощи хроматографии на силикагелевой колонке по мере необходимости с получением С-2.

Стадия 2. К раствору С-2 (1 экв.), где R^A, R^C, RD и RE представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе, Alk представляет собой соответствующим образом функционализированную алкильную группу и PG представляет собой защитную группу в подходящем растворителе, может быть добавлено подходящее основание (в молярном избытке). Раствор может быть нагрет до температуры окружающей среды в течение соответствующего периода времени. Реакция может быть нейтрализована подходящей кислоты до рН<5, реакционная смесь может быть экстрагирована подходящим органическим растворителем. Соединенные органические слои могут быть промыты и могут быть высушены по мере необходимости. Неочищенный продукт реакционной смеси может быть отфильтрован, концентрирован при пониженном давлении и высушен в высоком вакууме по мере необходимости с получением С-3.

Стадия 3. К раствору С-3 (~1,0 экв.) в подходящем органическом растворителе может быть добавлена подходящая кислота (~4 экв.) при соответствующей температуре (например, 0°С). Реакционная смесь может быть перемешана при соответствующей температуре в течение соответствующего периода времени, пока завершение реакции не будет продемонстрировано при помощи ЖХ-МС. Неочищенный продукт может быть отфильтрован, промыт и может быть высушен в высоком вакууме с получением С-4.

Стадия 4а. К раствору С-4 (~1,0 экв.) в подходящем растворителе может быть добавлено подходящее основание (в молярном избытке). Раствор может быть охлажден в бане с ледяной водой, и подходящий агент сочетания (~1,5 экв.) может быть добавлен с получением активированного сложного эфира. Раствор может быть нагрет до температуры окружающей среды медленно и будет перемешиваться до тех пор, пока не будет показано, что исходный материал превращен в желаемый продукт при помощи ЖХ-МС. Смесь может быть разбавлена водой и экстрагирована подходящим органическим растворителем по мере необходимости. Соединенные органические экстракты могут быть промыты, высушены и концентрированы при пониженном давлении по мере необходимости. Полученный в результате остаток может быть очищен при помощи хроматографии на силикагелевой колонке с получением С.

В некоторых иллюстративных вариантах реализации изобретения общий способ С может быть выполнен следующим образом:

- 12 041662

с

Стадия 1. К раствору С-1 (~1,0 экв.), где R^A, R^B, R^C, RD и RE представляют собой группы, совместимые с условиями реакции, описанными в данном документе, X1AlkNHPG (~1,5-2,0 экв.), где X¹ представляет собой отходящую группу, Alk представляет собой соответствующим образом функционализированную алкильную группу и PG представляет собой защитную группу в DMF (0,5 М), может быть добавлен K₂CO₃ (~3,0 экв.). Смесь может быть нагрета при ~80°С в течение ~2 ч или пока полное превращение исходного материала в продукт не будет показано при помощи ЖХ-МС. Смесь может быть охлаждена до температуры окружающей среды, разбавлена водой по мере необходимости и экстрагирована трижды EtOAc по мере необходимости. Соединенные органические слои могут быть затем промыты водой и солевым раствором, могут быть высушены над Na₂SO₄ и концентрированы по мере необходимости. Полученный в результате остаток может быть очищен при помощи хроматографии на силикагелевой колонке, элюируя EtOAc/гексаном (5-100%, 10CV) с получением С-2.

Стадия 2. К раствору С-2 (~1 экв.) в метаноле/THF/H₂O (3:1:1, 0,2 М) может быть добавлен LiOH-H₂O (~5,0 экв.). Раствор может быть нагрет при ~70°С в течение ~2 ч. Реакция может быть нейтрализована при -0°С водн. HCl (2 М) до рН <5 и экстрагирована четырежды CH₂Cl₂ по мере необходимости. Соединенные органические экстракты могут быть промыты солевым раствором и высушены над Na₂SO₄ по мере необходимости. Неочищенная смесь продуктов может быть отфильтрована, концентрирована при пониженном давлении и высушена в высоком вакууме по мере необходимости с получением С-3.

Стадия 3. К раствору С-3 (~1,0 экв.) в CH₂Cl₂ (0,25 М) может быть добавлена HCl в диоксане (4 М, ~4 экв.) при ~0°С. Реакция может быть перемешана и оставлена нагреваться от 0°С до комнатной температуры в течение приблизительно 27 ч или пока завершение реакции не будет продемонстрировано при помощи ЖХ-МС. Полученная в результате реакционная смесь может быть отфильтрована, промыта CH₂Cl₂ и высушена в высоком вакууме по мере необходимости с получением С-4.

Стадия 4а. Циклизация HATU.

К раствору С-4 (~1,0 экв.) в ~10 мл DMF (~0,005М) может быть добавлен DIPEA (~5,0 экв.). Раствор может быть охлажден в бане с ледяной водой, и HATU (~1,5 экв.) может быть добавлен. Раствор можно оставить нагреваться до температуры окружающей среды и перемешивать до того момента, пока полное превращение исходного материала в желаемый продукт не будет показано при помощи ЖХ-МС. Смесь может быть разбавлена водой и экстрагирована трижды EtOAc по мере необходимости. Соединенные органические экстракты могут быть промыты водой и солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении по мере необходимости. Полученный в результате остаток может быть очищен при помощи хроматографии на силикагелевой колонке (0-5% MeOH/DCM) с получением С.

Стадия 4b. Циклизация FDPP.

К раствору DIPEA (~5 экв.) в DMF/CH₂Cl₂ (3:1, ~0,005 М) может быть добавлен С-4 (~1,00 экв.). После того как С-4 полностью растворится, пентафторофенил дифенилфосфинат (FDPP, ~1,05 экв.) может быть добавлен. Сочетание можно оставить перемешиваться в течение 30 мин или до того момента, пока не будет показано, что реакция завершена при помощи ЖХ-МС. Смесь реакционного раствора может быть разбавлена CH₂Cl₂, промыта трижды водой, водным Na₂CO₃ (2 М) и солевым раствором, может быть высушена над Na₂SO₄ по мере необходимости. После фильтрования и концентрирования при пониженном давлении остаток может быть очищен при помощи хроматографии на силикагелевой колонке с элюированием МеОН/CH₂Cl₂ (0-5%) с получением С.

Примеры

Следующие примеры предложены для иллюстрации, а не для ограничения данного изобретения. Специалист в данной области техники признает, что приведенные ниже синтетические реакции и схемы могут быть модифицированы путем выбора подходящих исходных материалов и реагентов для получе- 13 041662 ния других соединений изобретения. Бициклические гетероароматические группы с подходящими функциональными группами для использования в синтетических методах коммерчески доступны.

Сокращения.

Примеры, описанные в данном документе, используют материалы, включая, но не ограничиваясь приведенным, описанные при помощи следующих аббревиатур, известных специалистам в данной области техники:

Аббревиатура	Название
тех	Тонкослойная хроматография
PLC	препаративная жидкостная хроматография
ВЭЖХ	высокоэффективная жидкостная хроматография
ЖХМС, ЖХ-МС	жидкостная хроматография масс-спектрометрия
LRESIMS	масс-спектрометрия ионизации методом электрораспыления низкого разрешения
ELISA	Метод иммунной пробы, связанный с ферментом
DCM	дихлорме т анм
ДМСО	диметилсульфоксид
DIPEA, DIEA	диизопропилэтил амин
GDI	1,1 '-карбонилдиимидазол
THF	тетрагидрофуран
XantPhos	4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен
TBSC1	трет-бутилдиме тилсилилхлорид
DMF	N,N-диметилформамид
HATU	1-[бис(диметиламино)метилен]-1Н-1,2,3- триазоло[4,5- Ь]пиридиний 3-оксид гексафторофосфат
ACN	ацетонитрил
EtOAc	этил ацетат
DTAD	Ди-трет-бутил азодикарбоксилат
FDFF	пентафторофенил дифенилфосфинат
FBS	Фетальная бычья сыворотка
BSA	Албумин бычьей сыворотки
PBS	Фосфатный буферный солевой
DMEM	среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко
EDTA	Этилендиаминтетрауксусная кислота
RIPA	Радиоиммунопреципитационный анализ
HEPES	(4-(2-гидроксиэтил)-1 -пиперазинэтансульфоновая кислота)

Ссылочный пример А6.

А6-3 А6-4 А6-5

Стадия 1. К раствору 5-фторо-2-гидроксибензальдегида (500,00 мг, 3,57 ммоль, 1,00 экв.) в МеОН (20,00 мл) добавляли 1-метилпирролидин-3-амин (357,43 мг, 3,57 ммоль, 1,00 экв.) одной порцией при 16°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 16°С в течение 10 ч в атмосфере N2. Затем NaBH4 (270,00 мг, 7,14 ммоль, 2,00 экв.) добавляли и смесь перемешивали при 16°С в течение 6 ч в атмосфере N₂. TCX (DCM:MeOH = 15:1) показала завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления МеОН. Остаток разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали DCM (3x20 мл). Соединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением А6-5 (350,00 мг, 1,56 ммоль, 43,71% выход) в виде желтого твердого вещества.

1H ЯМР (300 МГц, ДМСО-а₆) δ 6,94 (дд, J=2,7, 9,3 Гц, 1Н), 6,86 (дт, J=3,0, 8,6 Гц, 1Н), 6,67 (дд, J=4,7, 8,7 Гц, 1Н), 3,71 (с, 2Н), 3,24-3,09 (м, 1Н), 2,58 (дд, J=7,1, 8,8 Гц, 1Н), 2,48-2,32 (м, 2Н), 2,30-2,17 (м, 4Н), 2,05-1,82 (м, 1Н), 1,60-1,43 (м, 1Н).

Стадия 2. К раствору А6-5 (300,00 мг, 1,34 ммоль, 1,00 экв.) и этил 5-хлоропиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоксилата (302.,34 мг, 1,34 ммоль, 1,00 экв.) в n-BuOH (40,00 мл) добавляли DIPEA

- 14 041662 (1,04 г, 8,04 ммоль, 6,00 экв.) при 16°С в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 120°С в течение 2 ч.

ТСХ (РЕ:EtOAc = 1:1) показала завершение реакции. Смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали

DCM (3x50 мл). Смесь очищали при помощи пре-PLC с получением А6 соли муравьиной кислоты (290,00 мг, 701,43 мкмоль, 52,35% выход) в виде белого твердого вещества.

Ссылочный пример А8.

К раствору этил 5-хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (1,25 г, 5,54 ммоль) и (R)-2-(1-аминоэтил)-4-фторофенол HCl соли (приобретены у NetChem, Inc.) в EtOH (15,83 мл) добавляли основание Хунига (3,58 г, 27,70 ммоль) и нагревали до 70°С в течение 1,5 ч. Реакцию испаряли до сухого остатка, суспендировали в воде, экстрагировали DCM (5x50 мл). Соединенные экстракты высушивали Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Флэш-хроматография (ISCO система, силикагель (40 г), 0-5% метанол в дихлорметане) обеспечила А8 (1,89 г, 5,49 ммоль, 99% выход).

Ссылочный пример А9.

Стадия 1. К раствору 4-фторофенола (2,00 г, 17,84 ммоль, 1,00 экв.) в TfOH (30,00 мл) добавляли пропаноил хлорид (1,65 г, 17,84 ммоль, 1,00 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 60°С в течение 4 ч ТСХ показала завершение реакции. Смесь охлаждали до 25°С, выливали в ледяную воду (мас./мас. = 1/1) (120 мл), нейтрализовали NaHCO₃ с получением рН ~9, and экстрагировали EtOAc (3x120 мл). Соединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали безводным Na₂SO₄ и концентрировали с получением А9-3 (1.80 г, 10.70 ммоль, 59,98% выход) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl.J δ 12,09 (с, 1Н), 7,45 (дд, J=3,0, 9,0 Гц, 1Н), 7,26-7,20 (м, 1Н), 6,97 (дд, J=4,5, 9,0 Гц, 1Н), 3,02 (кв., J=7,3 Гц, 2Н), 1,27 (т, J=7,2 Гц, 3Н).

Стадия 2. Пары аммиака продували через МеОН (20 мл) при -78°С в течение 10 мин. А9-3 (1,00 г, 5,95 ммоль, 1,00 экв.) добавляли в раствор и перемешивали при 25°С в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляли Ti(i-PrO)₄ (1/63 г, 7,14 ммоль, 1,20 экв.) и смесь перемешивали в течение еще 1 ч. Затем добавляли NaBH₄ (449,93 мг, 11,89 ммоль, 2,00 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 12 ч, пока ТСХ не показала полное израсходование исходного материала. Остаток выливали в воду (50 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Смесь фильтровали и фильтрат доводили HCl (1 М) до рН ~1 и экстрагировали EtOAc (2x50 мл). Бикарбонат натрия добавляли к водной фазе для регулирования рН ~9 и экстрагировали DCM (2x50 мл). Соединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), высушивали безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением А9-5 (310,00 мг, 1,83 ммоль, 30,79% выход) в виде желтого твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 6, 86 (дт, J=3,0, 8,4 Гц, 1Н), 6,79-6,74 (м, 1Н), 6,67 (дд, J=2,9, 8,9 Гц, 1Н), 3,98 (т, J=7,0 Гц, 1Н), 1,92-1,81 (м, 1Н), 1,80-1,68 (м, 1Н), 0,95 (т, J=7,4 Гц, 3Н).

Стадия 3. А9-5 сочетали с этил 5-хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилатом в присутствии DIPEA в n-BuOH с получением А9, как описано в общем способе А.

Ссылочный пример А13-5. Получение 2-(1-амино-2-циклопропилэтил)-4-фторофенола.

Стадия 1. В смесь 2-циклопропилуксусной кислоты (4,47 г,

44,60 ммоль, 1,00 экв.) в DCM

- 15 041662 (150,00 мл) добавляли CDI (7,96 г, 49,10 ммоль, 1,10 экв.) одной порцией при 25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Затем добавляли N-метоксиметанамин гидрохлорид (4,79 г, 49,06 ммоль, 1,10 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение еще 12 ч. Реакцию гасили 1н. водной соляной кислотой (50 мл) и разделяли на слои. Водный слой экстрагировали DCM (2x30 мл). Соединенный органический слой промывали 50% насыщенным водным карбонатом натрия (50 мл) и насыщенным солевым раствором (30 мл), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2-циклопропил-N-метокси-N-метилацетамида (6,00 г, 41,91 ммоль, 93,96% выход) в виде масла.

1H ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ 3,65 (с, 1Н), 3,18 (с, 1Н), 2,33 (д, J=6, 8 Гц, 2Н), 1,13-1,02 (м, 1Н), 0,570,49 (м, 2Н), 0,19-0,11 (м, 2Н).

Стадия 2. В смесь 2-циклопропил-N-метокси-N-метилацетамида (6.00 г, 29,27 ммоль, 1,00 экв.) в THF (100,00 мл) добавляли n-BuLi (2,5 М, 12,88 мл, 1,10 экв.) по каплям при -78°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при -78°С в течение 10 мин. Затем смесь обрабатывали 2-бромо-4-фторо-1метоксибензолом (4,19 г, 29,27 ммоль, 1,00 экв.) в THF (20 мл) в течение периода 20 мин. После перемешивания при -78°С в течение 1 ч смесь оставляли нагреваться до 25°С и перемешивали в течение еще 1 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь выливали в 10% водный HCl раствор (100 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (3x300 мл). Комбинированная органическая фаза была промыта солевым раствором (200 мл), высушена над безводным Na₂SO₄, ее фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 50/1, 10/1) с получением 2-циклопропил-1-(5-фторо-2-метоксифенил)этан-1она (2,4 г, 39,38% выход) в виде бесцветного масла.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ 7,42 (дд, J=3,3, 8,8 Гц, 1Н), 7,15 (ддд, J=3,3, 7,5, 9,0 Гц, 1Н), 6,91 (дд, J=4,0, 9,0 Гц, 1Н), 3,91-3,85 (м, 3Н), 2,89 (д, J=6,8 Гц, 2Н), 1,18-1,05 (м, 1Н), 0,61-0,50 (м, 2Н), 0,20-0,09 (м, 2Н).

Стадия 3. К раствору 2-циклопропил-1-(5-фторо-2-метоксифенил)этан-1-она (500,00 мг, 2,40 ммоль, 1,00 экв.) в DCM (10,00 мл) добавляли BCl₃ (1 М, 3,00 мл, 1,25 экв.) по каплям при -78°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при -78°С в течение 2 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь нагревали до 25°С и выливали в ледяную воду (мас./мас.=1/1) (10 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (3x30 мл). Комбинированную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2-циклопропил-1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этан-1-она (430,00 мг, 2,21 ммоль, 92,3% выход) в виде масла.

1H ЯМР (400 МГц, CDC13) δ 12,12 (с, 1Н), 7,40 (дд, J=3,0, 8,8 Гц, 1Н), 7,24 (ддд, J=3,0, 7,8, 9,0 Гц, 1Н), 6,98 (дд, J=4,5, 9,3 Гц, 1Н), 2,88 (д, J=6,8 Гц, 2Н), 1,23-1,11 (м, 1Н), 0,70-0,63 (м, 2Н), 0,25 (кв., J=5,0 Гц, 2Н).

Стадия 4. К раствору 2-циклопропил-1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этан-1-она (400,00 мг, 1,92 ммоль, 1,00 экв.) в МеОН (20,00 мл) добавляли NH2OH-HC1 (160,18 мг, 2,31 ммоль, 1.20 экв.) и AcONa (189,09 мг, 2,31 ммоль, 1,20 экв.) при 25°С в атмосфере N2 в течение 12 ч. ТСХ (петролейный эфир/этилацетат = 3:1) не показала полное израсходование исходного материала. Реакцию гасили водой и затем экстрагировали DCM (3x30 мл). Комбинированную органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением чистого продукта 2-циклопропил-1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этан-1-он оксима (400,00 мг, 1,79 ммоль, 93,32% выход) в виде белого твердого вещества. Твердое вещество использовали для следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 5. К раствору 2-циклопропил-1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этан-1-он оксима (260,00 мг, 1,16 ммоль, 1,00 экв.) в МеОН/HCl (10,00 мл, 4н.) добавляли Pd-C (10%, 100 мг) в атмосфере N2. Суспензию дегазировали в вакууме и продували Н₂ несколько раз. Смесь перемешивали в Н₂(50 фунтов/кв.дюйм) при 50°С в течение 12 ч. ЖХ-МС не показала полное израсходование исходного материала. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали с получением 2-(1-амино-2циклопропилэтил)-4-фторофенола (200,00 мг, 955,75 мкмоль, 82,39% выход) в виде белого твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 10,44-9,82 (м, 1Н), 8,52 (уш.с, 2Н), 7,36 (дд, J=2,8, 9,5 Гц, 1Н), 7,076,93 (м, 2Н), 4,49 (д, J=5,5 Гц, 1Н), 1,82-1,72 (м, 2Н), 0,67-0,55 (м, 1Н), 0,43-0,28 (м, 2Н), 0,12-0,06 (м, 1Н), (-0,03)-(-0,09) (м, 1Н).

- 16 041662

Ссылочный пример А14-5. Получение 2-(амино(фенил)метил)-4-фторофенола.

Стадия 1. К раствору А14-3 (2,00 г, 9,25 ммоль, 1,00 экв.) и AcOK (1,10 г, 11,20 ммоль, 1,20 экв.) в этаноле (30,00 мл) добавляли NH₂OH-HCl (642,80 мг, 9,25 ммоль, 1,00 экв.) одной порцией при 25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 30 мин, затем нагревали до 90°С и перемешивали в течение 5 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь концентрировали и воду (50 мл) добавляли. Смесь экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Комбинированную органическую фазу промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением (5-фторо-2-гидроксифенил)(фенил)метанон оксима (1,50 г, 6,49 ммоль, 70,13% выход) в виде жел того твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,50-7,37 (м, 5Н), 7,19-7,07 (м, 2Н), 6,71 (дд, J=2,9, 8,9 Гц, 1Н).

А17

Стадия 2. В смесь (5-фторо-2-гидроксифенил)(фенил)метанон оксима (900,00 мг, 4,18 ммоль, 1,00 экв.) и Zn порошка (1,09 г, 16,73 ммоль, 4 экв.) в THF (10,00 мл) добавляли NH4Cl (2.24 г, 41,82 ммоль, 10,00 экв.) одной порцией при 25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 30 мин, затем нагревали до 60°С и перемешивали в течение 15 ч. Смесь концентрировали и воду (100 мл) добавляли с последующей экстракцией этилацетатом (3x50 мл). Соединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением А14-5 (630,00 мг, 2,90 ммоль, 69,38% выход) в виде желтого твердого вещества.

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,42 (д, J=7,5 Гц, 2Н), 7,33 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 7,27-7,20 (м, 1Н), 6,93-6,80 (м, 2Н), 6,70 (дд, J=4,9, 8,7 Гц, 1Н), 5,28 (с, 1Н).

Стадия 1. К раствору этил 5-((2-бромо-5-фторобензил)(метил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3карбоксилата (получен в соответствии с общим методом А) (300,00 мг, 0,736 ммоль, 1,00 экв.), 2-метилпропан-2-тиола (166,10 мг, 1,84 ммоль, 2,50 экв.), Pd₂(dba)₃ (84,72 мг, 0,147 ммоль, 0,20 экв.) в диоксане (8,00 мл) добавляли XantPhos (127,87 мг, 0,221 ммоль, 0,30 экв.) и K₂CO₃ (101,81 мг, 0,736 ммоль, 1,00 экв.). Смесь дегазировали и нагревали до 120°С в течение 24 ч в атмосфере N₂. ТСХ (петролейный эфир/этилацетат = 1:1) показала полное израсходование исходного материала. Реакционную смесь выливали в Н₂О (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, концентрировали и очищали при помощи хроматографии на силикагелевой колонке (петролейный эфир/этилацетат = 2:1-1:1) с получением этил 5-((2-(трет-бутилтио)-5-фторобензил)(метил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3карбоксилата (200,00 мг, 0,48 ммоль, 65,18% выход,) в виде желтого твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 8,34 (с, 1Н), 8,29 (уш.с, 1Н), 7,60 (дд, J=5,9, 8,4 Гц, 1Н), 7,00 (т, J=7,7 Гц, 1Н), 6,29 (уш.с, 2Н), 5,00 (уш.с, 2Н), 4,37 (д, J=6,8 Гц, 2Н), 3,41 (уш.с, 3Н), 1,36-1,20 (м, 12Н).

Стадия 2. К раствору этил 5-((2-(трет-бутилтио)-5-фторобензил)(метил)амино)пиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоксилата (300,00 мг, 0,720 ммоль, 1,00 экв.) в DCM (8,00 мл) добавляли BBr₃(902,21 мг, 3,60 ммоль, 5,00 экв.) по каплям при 0°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 0°С в течение 2.5 ч. ТСХ (петролейный эфир/этилацетат = 1:1) показала завершение реакции. Смесь выливали в воду (20 мл). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (3x50 мл). Комбинированную органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали пре-ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi C18 150x30 ммх4 мкм и условие: 0,05% HCl-ACN) и лиофилизировали с получением А17 HCl соли (38,00 мг, 0,098 ммоль, 13,61% выход) в виде белого твердого вещества.

- 17 041662

Ссылочный пример А18.

А18

Стадия 1. Смесь 2-бромо-4-фторофенол (10,00 г, 52,36 ммоль, 1,00 экв.), трифторо(винил)боран калиевой соли (9,84 г, 66,50 ммоль, 1,27 экв.), Cs₂CO₃ (51,18 г, 157,08 ммоль, 3,00 экв.) и Pd(PPh₃)₂Cl₂(1,84 г, 2,62 ммоль, 0,05 экв.) в THF (90,00 мл) и Н₂О (10,00 мл) дегазировали и затем нагревали до 90°С в течение 12 ч в атмосфере N₂. ТСХ (петролейный эфир/этилацетат = 10/1) показала полное израсходование исходного материала. Реакционную смесь выливали в Н₂О (100 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3x300 мл). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (200 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, концентрировали и очищали хроматографией на колонке на силикагеле (элюировали EtOAc/петролейный эфир = 1/30) с получением 4-фторо-2-винилфенола (3,50 г, 25,34 ммоль, 48,39% выход) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCla) δ 7,12 (дд, J=3,0, 9,5 Гц, 1Н), 6,89-6,81 (м, 1Н), 6,79-6,73 (м, 1Н), 5,75 (д, J=17,6 Гц, 1Н), 5,64 (с, 1Н), 5,39 (д, J=11,3 Гц, 1Н).

Стадия 2. Смесь 4-фторо-2-винилфенола (1,95 г, 14,12 ммоль, 1,00 экв,), TBSCl (6,38 г, 42,35 ммоль, 3,00 экв,) и 1H-имидазола (5,77 г, 84,70 ммоль, 6,00 экв,) в DCM (20,00 мл) перемешивали при 20°С в течение 5 ч в атмосфере N₂. ТСХ (петролейный эфир/этилацетат = 10:1) показала полное израсходование исходного материала. Реакционную смесь выливали в Н₂О (30 мл). Смесь экстрагировали дихлорметаном (3x50 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, концентрировали и очищали при помощи хроматографии на силикагелевой колонке, элюировали петролейным эфиром с получением три-бутил(4-фторо-2-винилбензил)силана (2,30 г, 9,11 ммоль, 64,54% выход) в виде бесцветного масла.

Стадия 3. Смесь три-бутил(4-фторо-2-винилбензил)силана (2,30 г, 9,11 ммоль, 1,00 экв.), этил 5-хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (2,06 г, 9,11 ммоль, 1,00 экв.), Pd(PhCN)₂Cl₂(118,20 мг, 0,455,63 ммоль, 0,05 экв.) и трис-о-толилфосфана (277,36 мг, 0,911 ммоль, 0,10 экв.), DIPEA (7,07 г, 54,68 ммоль, 6,00 экв.) в DMF (25,00 мл) дегазировали и затем нагревали до 120°С в течение 24 ч в атмосфере N₂. ТСХ (петролейный эфир/этилацетат = 1:1) показала полное израсходование исходного материала. Реакционную смесь выливали в Н₂О (30 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным Na2SO4, концентрировали и очищали при помощи хроматографии на силикагелевой колонке (EtOAc/петролейный эфир = 1:3) с получением этил (Е)-5-(5-фторо-2-гидроксистирил)пиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоксилата (1,00 г, 2,26 ммоль, 24.86% выход) в виде белого твердого вещества.

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 9,29 (уш.с, 1Н), 8,50 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 8,28 (уш.с, 1Н), 7,84 (д, J=16,6 Гц, 1Н), 7,20-7,04 (м, 3Н), 6,69 (д, J=5,8 Гц, 2Н), 4,20 (кв., J=6,9 Гц, 2Н), 1,30-1,19 (м, 3Н).

Стадия 4. В смесь этил (Е)-5-(5-фторо-2-гидроксистирил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилата (378,22 мг, 1,04 ммоль, 1,00 экв.) и 4-метилбензолосульфоногидразида (3,29 г, 17,68 ммоль, 17,00 экв.) в THF (4,00 мл) добавляли NaOAc (1,71 г, 20,80 ммоль, 20,00 экв.) одной порцией при 20°С в атмосфере N₂. Смесь затем нагревали до 65°С и перемешивали в течение 12 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь охлаждали до 20°С и концентрировали при пониженном давлении при 45°С. Water (100 мл) добавляли в остаток. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (2x300 мл). Комбинированную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали пре-ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250х50хммх10 мкм, 0,225% FA-ACN) с получением А18 (120,00 мг, 0,347 ммоль, 33,42% выход) в виде белого твердого вещества.

Ссылочный пример А20.

А20

В смесь 4-фторо-2-метиламинометил-фенол (305,2 мг, 1,97 ммоль) и этилового сложного эфира 6-хлороимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-карбоновой кислоты (230 мг, 1,02 ммоль) в ДМСО (5 мл) добавляли

- 18 041662

KF (180 мг, 3,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 18 ч в атмосфере азота.

Раствор затем охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x50 мл). Соединенные органические слои дополнительно промывали водой (3x50 мл) и солевым раствором (50 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток затем очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-50%, 10 CV) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (240 мг, 69%).

Ссылочный пример А22.

А22-1 _А22

А21-1 был получен в соответствии с общим методом А. К раствору А22-1 (150 мг, 0,387 ммоль) в этаноле (2 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (2 мл) и реакционный раствор нагревали при 75 °С в течение 2 ч. Растворители испаряли и остаток нейтрализовали Et₃N и очищали при помощи картриджа на силикагеле, элюируя метанолом/CH₂Cl₂ (0-12,5%) с получением А22 (144 мг, 100%).

Ссылочный пример А23.

Стадия 1. В смесь (5-фторо-2-метоксифенил)метантиола (496,1 мг, 2,88 ммоль) и сложного этилового эфира 6-хлороимидазо[1,2-b]пиридазин-3-карбоновой кислоты (650,0 мг, 2,88 ммоль) в этаноле (14,4 мл) добавляли DIPEA (1,12 г, 8,64 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 1 ч. Раствор охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали

DCM (3x50 мл). Соединенные экстракты высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией (ISCO система, силикагель (120 г), элюируя EtOAc/гексаном (0-50%) с получением А23-2 (560 мг, 54% выход). А23-2 выходил из колонки во время очистки.

Стадия 2. К раствору А23-2 (498,7 мг, 1,38 ммоль) в метаноле (100 мл) добавляли 4 М HCl в диоксане (10 мл) и реакционный раствор нагревали при 75 °С в течение 2 ч. Растворители испаряли и остаток нейтрализовали Et₃N и очищали при помощи картриджа на силикагеле, элюируя метанолом/CH₂Cl₂(0-12,5%) с получением А23 (470 мг, 98%).

А1-А24 были получены в соответствии с общим методом А и способами, описанными в данном документе.

- 19 041662

Пример	Структура	Название	Аналитические данные
Al	О А*уг О /—-Z.	этил 5-( (5-фторо-2гидроксибензил) (метил)амино)пиразо ло[1,5-а]пиримидин3-карбоксилат	МС: 345, 2 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 9,71 (уш. с, 1Н) , 8,32 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 8,30 (с, 1Н), 6, 98-6, 87 (м, ЗН) , 6,37 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 4,82 (с, 2Н) , 4,42 (кв., J=7,l Гц, 2Н) , 3,21 (с, ЗН), 1,39 (т, J=7,1 Гц, ЗН) ,
А2	о . А о ф	этил 5-(этил(5- фторо-2- гидроксибензил)амин о)пиразоло[1,5- а]пиримидин-3- карбоксилат	МС: 359, 3 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) δ 9,75 (уш.с, 1Н) , 8,30-8,27 (м, 2Н), 6, 95-6, 86 (м, ЗН) , 6,34 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 4,79 (с, 2Н) , 4,40 (кв., Я=7,2Гц, 2Н), 3,56 (кв., J=7,2 Гц, 2Н), 1,38 (т, J=7,2 Гц, ЗН), 1,25 (t,J=7,2 Гц, ЗН) ,

- 20 041662

АЗ	Λ __/ τ о	этил 5-((5-фторо-2гидроксибензил)амин о)пиразоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 331,3 (М+Н)⁺; ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) δ 9,61 (уш.с, 1Н), 8,52 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 8,28 (bt, J=5, 1 Гц, 1Н) , 8,13 (с, 1Н), 7,25-7,23 (м, 1Н), 6, 93-6, 86 (м, 1Н) , 6,81-6,77 (м, 1Н) , 6,44 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 4,51 (д, J=5, 1 Гц, 2Н) , 4,20 (кв., J=6, 9 Гц, 2Н) , 1,39 (т, J=6,9 Гц, ЗН),
А4	о т / О ^Z 1'	этил 5-((2- гидроксибензил) (метил)амино)пиразо ло[1,5-а]пиримидин3-карбоксилат	МС: 327,5 (М+Н)⁺; ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) δ 9,79 (с, 1Н), 8,30-8,27 (м, 2Н), 7,26-7,21 (м, 2Н), 6,96 (д, J=7,8 Гц, 1Н) , 6,84 (t,J=7,5 Гц, 1Н) , 6,34 (д, J=8,l Гц, 1Н), 4,85 (с, 2Н), 4,42 (кв., J=6,9 Гц, 2Н) , 3,18 (с, ЗН) , 1,40 (т, J=6,9 Гц, ЗН) ,

- 21 041662

A5	О о н ^то	этил 5-((5-фторо-2гидроксибензил) (2гидрокси-2- метилпропил)амино)п иразоло[1,5— а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 403,2 (М+Н)⁺; % ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,32 (с, 1Н) , 8,26 (д, J=8, 0 Гц, 1Н) , 7,05-6, 80 (м, ЗН) , 6,59 (уш.с, 1Н), 5,06 (уш. с, 2Н) , 4,43 (кв., 1=7,1 Гц, 2Н) , 3,62 (уш . с, 2Н) , 1,60 (с, 1Н), 1,46- 1,36 (м, 9Н) ,
Аб	4Л о	этил 5-((5-фторо-2гидроксибензил) (1ме тилпирролидин-3у!)амино)пиразоло[1 ,5-а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 414,2 (М+Н)⁺; Щ ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,67 (уш.с, 2Н) , 8,35 (д, J=8,0 Гц, 1Н) , 8,24 (с, 1Н) , 7,14-7,07 (м, 1Н) , 6,83 (дт, J=2,8, 8,4 Гц, 1Н) , 6,73 (уш.с, 1Н) , 6,60 (уш.с, 1Н), 5,13 (уш.с, 1Н) , 4,75- 4,62 (м, 2Н) , 4,34 (кв., J=6, 9 Гц, 2Н) , 3,88 (уш.с, ЗН) , 3,41 (уш.с, 1Н), 3,04 (уш.с, ЗН) , 2,54 (уш.с, 2Н) , 1,40 (т, J=7,2 Гц, ЗН) ,

- 22 041662

A7	τι ,Α о о	этил 5- ( (1-(5- фторо-2- гидроксифенил)этил) амино)пиразоле[1,5а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 345,3 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) δ 9,61 (уш.с, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 8,17 (д, J=7,2 Гц, 1Н) , 6,96-6,91 (м, 2Н) , 6,88-6,81 (м, 1Н) , 6,09 (д, J=7,8 Гц, 1Н) , 5, 72-5, 63 (м, 1Н) , 5,45 (уш . д, J=8,7 Гц, 1Н), 4,43 (кв., J=7,2 Гц, 2Н) , 1,64 (д, J=6, 9 Гц, ЗН) , 1,41 (т, J=7,2 Гц, ЗН) ,
A8	А <f4 О	этил (R)-5-( (1-(5фторо-2гидроксифенил)этил) амино)пиразоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 345, 2 (М+Н)⁺,

- 23 041662

A9		этил 5-( (1-(5- фторо-2- гидроксифенил)пропи л)амино)пиразоло[1, 5-а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 359, 2 (М+Н)⁺; F ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,99 (уш.с, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 8,20 (д, J=7,5 Гц, 1Н) , 6, 98 (дд, J=5, 0, 8,8 Гц, 1Н), 6,946,84 (м, 2Н) , 6,13 (д, J=7,5 Гц, 1Н) , 5,41 (уш.с, 2Н), 4,57-4,40 (м, 2Н), 2,11-1,95 (м, 2Н), 1,44 (т, J=7,2 Гц, ЗН), 1,02 (т, J=7,4 Гц, ЗН),
АЮ	о г	этил 5-( (1- (5- фторо-2- гидроксифенил)-2метилпропил)амино)п иразоло[1,5- а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 373,2 (М+Н)⁺; F ЯМР (4 00 МГц, Хлороформ-d) δ 8,25 (с, 1Н) , 8,19 (д, J=7,5 Гц, 1Н) , 6,99 (дд, J=5,l, 8,7 Гц, 1Н) , 6,91 -6,81 (м, 2Н) , 6,14 (д, J=7,5 Гц, 1Н) , 5,11 (т, J=9,7 Гц, 1Н) , 4, 62-4,37 (м, 2Н) , 2,22 (кв.д, J=6,5, 17,1 Гц, 1Н), 1,43 (т, J=7,2 Гц, ЗН) , 1,22 (д, J=6,5 Гц, ЗН) , 0,89 (д, J=6,5 Гц, ЗН),
All	f	этил 5- ((циклопропил(5- фторо-2- гидроксифенил)метил )амино)пиразоло[1,5 -а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 371,2 (М+Н)⁺; F ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 8,25 (с, 1Н), 8,21 (д,Я=7,5 Гц, 1Н) , 7,13 (дд,Я=3,0, 9,4 Гц, 1Н), 7,006,94 (м, 1Н) , 6,91-6,84 (м, 1Н) , 6,14 (д, J=7,7 Гц, 1Н) , 5,69 (д, J=8,0 Гц, 1Н), 4,70 (т, J=8,3 Гц, 1Н), 4,49-4,38 (м, 2Н), 1,42 (т, J=7,l Гц, 4Н), 0,83-0,74 (м, 1Н), 0,72-0, 63 (м, 1Н) , 0,57 (кв.д, J=4,8, 9, 6 Гц, 1Н) , 0,480,40 (м, 1Н),

- 24 041662

МС: 385, 2 (М+Н)⁺;

циклопропил-1-(5фторо-2гидроксифенил)этил) амино)пиразоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат

ТИЛ

МГц, ^гН ЯМР (400

	Хлороформ-d) δ 8 9,09 (уш.с, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 8,20
этил 5-	(д, J=7,5 Гц, 1Н) , 6, 98 (дд, J=5, 0, 8,8 Гц, 1Н), 6,91-
((циклобутил(5-	6,78 (м, 2Н) , 6,12
фторо-2-	(д, J=7,5 Гц, 1Н) ,
гидроксифенил)метил	5,45 (т, J=9,4 Гц,
)амино)пиразоло[1,5	1Н), 5,27 (д,
-а]пиримидин-3-	J=8,4 Гц, 1Н),
карбоксилат	4,51-4,45 (м, 2Н),
	2,98-2,89 (м, 1Н), 2,29 (дд, J=3,8, 7,5 Гц, 1Н), 2,071,90 (м, 4Н) , 1,75-1,66 (м, 1Н), 1,45 (т, J=7,l Гц, ЗН) ,

МС: 385,2 (М+Н)⁺;

ЯМР (400

Хлороформ-d)

5- ( (26, 15

1Н)

2Н)

Гц, (Д

МГц,

8,27 (с (д,J=7,5

7,00-6, 82 δ 9

0 (уш

с,	1Н),
1Н) ,	8,19
Гц,	1Н) ,
(м,	ЗН) ,

J=7,5 Гц.

5,57 (уш . с

4,52-4,40 (м,

2,01-1,77 (м,

1,44 (t,J=7,2

ЗН), 0,72 (д

J=6,5 Гц,

0,56-0,41 (м,

0,24-0, 07 (м,

1Н)

2Н)

МС: 407,2 (М+Н)⁺;

МГц, ^гН ЯМР (400

	Хлороформ-d) δ
	9,66 (с, 1Н) , 8, 64-8,55 (м, 2Н) ,
этил 5-(((5-фторо-	8,16 (с, 1Н) , 7,33
2-	(д, J=4,4 Гц, 4Н) ,
гидроксифенил)(фени	7,25 (кв.д, J=4,3,
л)метил)амино)пираз	8,5 Гц, 1Н) , 7,11
оло[1,5—	(дд, J=3,l, 9,7
а]пиримидин-3-	Гц, 1Н) , 6,98-6,91
карбоксилат	(м, 1Н) , 6,88-6,78 (м, 2Н) , 6,58 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 4,18 (кв., J=7,0 Гц, 2Н) , 1,30 (т, J=7,1 Гц, 4Н),

- 25 041662

Al 5	О О	этил 5-( (1-(5- хлоро-2- гидроксифенил)этил )амино)пиразоло[1,5 -а]пиримидин-3- карбоксилат	МС: 361,2 (М+Н)⁺; ^гН ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 9,42 (уш.с, 1Н) , 8,27 (с, 1Н), 8,20 (д, J=7,5 Гц, 1Н) , 7,28 (с, 1Н), 7,25 (д, J=2,5 Гц, 1Н) , 7,13 (дд,Я=2,5, 8,8 Гц, 1Н) , 6,95 (д, J=8,5 Гц, 1Н) , 6,11 (д,О=7,5 Гц, 1Н) , 5,75- 5,64 (м, 1Н) , 5,46 (д, J=8,3 Гц, 1Н), 4,52-4,40 (м, 2Н), 1,68 (д, J=6, 8 Гц, ЗН) , 1,61 (с, 2Н) , 1,44 (т, J=7,2 Гц, ЗН) ,
Al 6	^^/0^н \ jQCx/ о γ 4=0	этил 5-((1-(5- фторо-2- гидроксифенил)этил )(метил)амино)пираз оло[1,5- а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 359, 2 (М+Н)⁺; ^гН ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 9,61 (с, 1Н) , 8,35-8,29 (м, 2Н), 7,08-7,03 (м, 1Н), 6,92 (дд,Я=1,3, 6,1 Гц, 2Н) , 6,45 (кв., J=6,9 Гц, 1Н) , 6,35 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 4,51-4,36 (м, 2Н), 3,00 (с, ЗН) , 1,65 (д, J=7,0 Гц, ЗН), 1,41 (т, J=7,2 Гц, ЗН) ,
Al 7	XX < ^F ι y=° /N	этил 5-( (5-фторо-2меркаптобензил) (мет ил)амино)пиразоло[1 ,5-а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 361,2 (М+Н)⁺; ^гН ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 9,19 (уш.с, 1Н), 9,09 (д, J=7,3 Гц, 1Н) , 8,51 (с, 1Н) , 7,91-7,81 (м, 2Н), 7,48 (дт, J=2,8, 8,5 Гц, 1Н) , 7,14 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 4,29 (уш.с, 2Н), 4,18 (кв., J=7,0 Гц, 2Н), 2,56 (уш.с, ЗН), 1,16 (т, J=7,2 Гц, ЗН) ,

- 26 041662

Al 8	^-o I / о /— о LL	этил 5-(5-фторо-2гидроксифенэтил)пир азоло[1,5— а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 330,2 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ 9,42 (с, 1Н), 9,14 (д,Я=7,0 Гц, 1Н) , 8,55 (с, 1Н) , 7,18 (д, J=7, 0 Гц, 1Н) , 7, 05 (дд, J=3, 0, 9, 5 Гц, 1Н) , 6,866,80 (м, 1Н) , 6, 79-6, 74 (м, 1Н) , 4,30 (kb.,J=7,2 Гц, 2Н), 3,21 - 3,13 (м, 2Н) , 3, 06-2,99 (м, 2Н) , 1,33 (т, J=7,2 Гц, ЗН) ,
Al 9	--A Ο /—z. LL	этил 5-( (5-фторо-2гидроксибензил)(мет ил)амино)-2метилпиразоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 359, 2 (М+Н)⁺,
A2 0	XX / ___N.J χ П	этил 6-((5-фторо-2гидроксибензил)(мет ил)амино)имидазо[1, 2-Ь]пиридазин-3карбоксилат	МС: 345, 2 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,61 (с, 1Н) , 8,17 (с, 1Н), 7,91 (д, J=10,0 Гц, 1Н), 7,00-6, 86 (м, 4Н) , 4,78 (с, 2Н) , 4,47 (кв.д, J=7,2, 0,5 Гц, 2Н) , 3,17 (с, ЗН) , 1,41 (тд, J=7,l, 0,5 Гц, ЗН) ,
A21	о x О /—ζ С	этил 5-(((5-фторо2-гидроксипиридин- 3- ил)метил)(метил)ами но)пиразоло[1,5- а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 346, 2 (М+Н)⁺,
A22	о гз л LL	этил 5-(((5-фторо2-гидроксипиридин- 3- yl)метил)(изопропил )амино)пиразоло[1,5 -а]пиримидин-3- карбоксилат	МС: 374,2 (М+Н)⁺,

- 27 041662

этил 5-( (5-фторо-2гидроксибензил)тио) пиразоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат этил фторо-2гидроксифенил)-2пиразоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат

5-( (1- (5гидроксиэтил)амино) МС : 361,2 (М+Н)⁺,

Ссылочный пример В7.

В7-1 В7-2

В7-3

В7

Стадия 1. В смесь 1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этанона (773 мг, 5,0 ммоль) и трет-бутилового сложного эфира (2-хлороэтил)карбамовой кислоты (1,80 г, 10,0 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли KI (2,0 мг, 0,012 ммоль) и CS₂CO₃ (3,26 г, 10,0 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С всю ночь. Смесь затем охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли EtOAc и промывали 1н. NaOH (5x10 мл), пока ЖХМС не показывала отсутствие пика 1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этанона. Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток затем очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-30%, 10 CV) с получением целевого продукта В7-2 в виде желтого твердого вещества (1,1 г, 73,8%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 320,3 (M+Na)⁺.

Стадия 2. К раствору В7-2 (1,0 г, 3,36 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли NaBH4 (640 мг, 16,8 ммоль) по порциям. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч, пока по данным ЖХМС не осталось исходного материала. Раствор затем разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали DCM (3x20 мл). Соединенные DCM слои высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-50%, 10 CV) с получением целевого продукта В7-3 в виде бледно-желтого твердого вещества (0,75 г, 75%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 322,3 (M+Na)⁺;

¹H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,11 (дд, J=9,2, 3,4 Гц, 1Н), 6,89 (ддд, J=9,0, 7,9, 3,2 Гц, 1Н), 6,77 (дд, J=8,9, 4,4 Гц, 1Н), 5,09 (кв., J=6,6 Гц, 1Н), 4,92 (д, J=4,4 Гц, 1Н), 4,03 (т, J=5,2 Гц, 2Н), 3,62-3,50 (м, 2Н), 1,49 (д, J=6,4 Гц, 3Н), 1,45 (с, 9Н).

Стадия 3. К раствору В7-3 (600 мг, 2,0 ммоль) и трет-бутилового сложного эфира {2-[4-фторо-2-(1гидроксиэтил)фенокси]этил}карбамовой кислоты (450 мг, 2,0 ммоль) в сухом THF (40,0 мл) при -78°С добавляли NaH (60%, 80 мг, 2,0 ммоль) по порциям, суспензию перемешивали при -78°С в течение 4 ч и оставляли нагреваться до 0°С и перемешивали в течение еще 4 ч. Смесь затем помещали в холодильник при -20°С на всю ночь. ЖХ-МС показала хорошее превращение в желаемый продукт. Смесь затем гасили смесью льда и 1н. HCl и экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, концентрировали и очищали дважды с получением целевого продукта В7 в виде желтого твердого вещества (240 мг, 25%):

В1-В7 были получены в соответствии с общим способом В и способами, описанными в данном до кументе.

- 28 041662

Пример	Структура	Название	Аналитические данные
Bl	I^NHBoc Γϊ° > /X JX о V° XX?	этил 5-( (2-(2((трет- бутоксикарбонил )амино)этокси)5-фторобензил) (метил)амино)пи разоло[1,5а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 4 8 8,3, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,30 (с, 1Н), 8,26 (с, 1Н), 6,92 (тд, J=8,6, 3,3 Гц, 1Н) , 6, 83-6, 76 (м, 1Н) , 6,31 (с, 1Н) , 4,93 (с,2Н), 4,51-4,44 (м, 1Н), 4,36 (кв., J=7,2 Гц, 2Н), 4,03 (т, J=4,9 Гц, 2Н) , 3, 69-3, 63 (м, 1Н) , 3,51 (с, 2Н) , 3,30 (с,2Н), 1,44 (с, 9Н), 1,41-1,35 (т, J=7,2 Гц, ЗН),
В2	I^NHBoc XX о	этил 5- ( (2- (2( (трет- бутоксикарбонил )амино)этокси)- 5- фторобензил)(эт ил)амино)пиразо ло[1,5- а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 502,2 (М+Н)⁺,
ВЗ	I^NHBoc гх > _/XJX o₄ ^F i \=o XX?	этил 5- ( (2-(2( (трет- бутоксикарбонил )амино)этокси)- 5- фторобензил)(пр опил)амино)пира золо[1,5- а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 516,3 (М+Н)⁺,
В4	^ХИВос rr° > V⁰	этил 5- ( (2-(2( (трет- бутоксикарбонил )амино)этокси)5- фторобензил)(ци клопропил)амино )пиразоло[1,5— а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 514,2 (М+Н)⁺,
В5	У 2-/ О—< /4 J <kX^{v 8}о	этил 5- ( (2-(2( (трет- бутоксикарбонил )амино)этокси)- 5- фторобензил)(2гидроксиэтил)ам ино)пиразоло[1, 5-а]пиримидин3-карбоксилат	МС: 518,3 (М+Н)⁺,

- 29 041662

В6	^^NHBoc w	этил 5-( (6-(2( (трет- бутоксикарбонил ) амино)этокси)2-хлоро-Зфторобензил)(ме тил)амино)пираз оло[1,5- а]пиримидин-3карбоксилат	МС: 522.5 (М+Н)⁺.
В7	.NHBoc Ύ Ί ) Hi	этил б- (1- (2(2- ( (трет- бутоксикарбонил )амино)этокси)5- фторофенил)эток си)имидазо[1,2Ь]пиридазин-3карбоксилат	ЖХ-МС (ESI) m/z 511,6 (M+Na)⁺; ^ХН ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,16 (с, 1Н), 7,90 (д, J=9,7 Гц, 1Н), 7,16 (дд, J=9,0, 3,2 Гц, 1Н), 0,95 (д, J=9_r5 Гц, 1Н), 6,90-6,88 (м, 1Н), 6,81-6,78 (м, 1Н) , 6,68 (кв., J=6,2 Гц, 1Н), 5,84-5,68 (м, 1Н) , 4,38 (кв., J=7,2 Гц, 2Н), 4,15-4,09 (м, 2Н), 3,60-3,52 (м, 2Н), 1,65 (д, J=6,4 Гц, ЗН), 1,38 (д, J=7_r2 Гц, ЗН), 1,35 (с, 9Н) .

Ссылочные примеры 2 и 2-1.

Синтез А.

Пример 2 может быть получен так, как показано на следующей схеме, из рацемических или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

Стадия 1. В смесь соединения 2А (1 экв.) и 2В (1,2 экв.) в безводном DMF (0,2 М) добавляли CS2CO3 (1,5 экв.) и реакцию нагревали на масляной бане при 80°С в атмосфере азота всю ночь. Смесь охлаждали, выливали в воду и экстрагировали EtOAc трижды. Соединенные органические слои промы- 30 041662 вали водой пять раз, промывали солевым раствором и высушивали над Na₂SO₄. После конденсации остаток очищали на флэш-колонке, элюируя EtOAc/гексаном, с получением соединения 2С.

Стадия 2. К раствору соединения 2С (1 экв.) в безводном THF (0,2 М) добавляли NaH (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 0,5 ч. В смесь добавляли соединение 2D и реакцию нагревали при кипячении с обратным холодильником в атмосфере азота всю ночь. Реакцию охлаждали до температуры окружающей среды и разбавляли порцией воды (1/3 THF объ ема) и NaOH (3 экв.). Смесь перемешивали и нагревали при 70°С в течение 2 ч или до те пор, пока сложный эфир не гидролизовался полностью в соответствующую кислоту. После охлаждения органический слой отделяли и водный слой нейтрализовали до рН ~5. Полученный в результате осадок фильтровали, промывали водой трижды и высушивали в вакууме с получением соединения 2Е, которое использовали без дополнительной очистки.

Стадия 3. К раствору соединения 2Е (1 экв.) в CH₂Cl₂ (0,2 М) добавляли 4 М HCl/диоксана (10 экв.) и смесь перемешивали, пока соединение 2Е полностью не превратилось в соединение 2F. Смесь концентрировали и остаток очищали обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ с получением соединения 2F.

Стадия 4. Раствор соединения 2F (1 экв.) и DIPEA (10 экв.) в DMF (0,2 М) добавляли по каплям к раствору HATU (1,4 экв.) в DMF (0,1 М) при 0°С. После завершения добавления смесь перемешивали при 0°С в течение еще 30 мин. Добавляли воду и смесь экстрагировали EtOAc трижды. Соединенные органические слои промывали насыщенным NaHCO₃ дважды, затем солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением примера 2.

Синтез В.

Примеры 2 и 2-1 могут быть также получены в соответствии со следующей схемой с использованием рацемических или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

Стадия 1. Соединение 2С реагирует с соединением 2G в условиях, описанных в синтезе А, стадия 2, с получением соединения 2Н.

Стадия 2. Соединение 2Н превращается в соединение 2I в условиях, описанных в синтезе А, стадия 3.

Стадия 3. К раствору соединения 2I (1 экв.) и DIPEA (2 экв.) в толуоле (0,01 М) добавляли Pd(P-tBu₃)₂ (1 экв.). Реакционную смесь нагревали при 100°С при 4 бар СО всю ночь и затем концентрировали. Остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением примера 2.

Ссылочные примеры 10 и 10-1.

Примеры 10 и 10-1 могут быть получены так, как показано на следующей схеме с использованием рацемических или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

- 31 041662

получали из соединения 10А и 10В с использованием способа, описанСтадия 1. Соединение 10С ного в примере 2, синтез А, стадия 1.

Стадия 2. Соединение 10Е получали из соединения 10С и 10D с использованием способа, описанного в примере 2, синтез А, стадия 2.

Стадия 3. Смесь соединения 10Е (1 экв.) и NH2-NH2 (10 экв.) в метаноле (0,2 М) нагревали при кипячении с обратным холодильником, пока соединение 10Е полностью не превращалось в соединение 10F. Смесь концентрировали и остаток очищали при помощи обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ с получением соединения 10F.

Стадия 4. Соединение 10F превращали в пример 10 в соответствии со способом, описанным для примера 2, синтез А, стадия 4.

Ссылочный пример 11-1.

Стадия 1. К раствору 2-хлоро-3-фторо-6-гидроксибензальдегида (175 мг, 1,0 ммоль) добавляли бис-этиленгликоль (740 мг, 2,0 ммоль) в ACN (5 мл), K₂CO₃ (276 мг, 2,0 ммоль) и KI (2 мг). Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 24 ч. Твердое вещество отфильтровали и фильтрат концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением целевого продукта 11-1В в виде белого твердого вещества. Материал использовали непосредственно на следующей стадии.

Стадия 2. К раствору 11-1В (373 мг, 1 ммоль) в ACN (5 мл), NaN₃ (650 мг, 10 ммоль) добавляли и смесь перемешивали при 120°С в течение 24 ч Твердое вещество отфильтровали и остаток концентрировали и очищали колоночной хроматографией с получением 11-1С в виде белого твердого вещества (200 мг, 82%).

1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 10,49 (д, J=1,1 Гц, 1Н), 7,31 (дд, J=9,2, 8,2 Гц, 1Н), 6,88 (дд, J=9,2, 3,7 Гц, 1Н), 4,21 (дд, J=5,4, 4,5 Гц, 2Н), 3,67 (дд, J=5,4, 4,5 Гц, 2Н).

- 32 041662

Стадия 3. К раствору 11-1С (100 мг, 0,41 ммоль) в безводном THF (5 мл) при -78 °С добавляли метил магний бромид (1н. в Et2O, 0,82 мл, 0,82 ммоль). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч, пока ТСХ не продемонстрировала отсутствие исходного материала. Раствор затем охлаждали до 0°С и гасили нас. водн. NH₄OAc и экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Соединенный органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток 11-1D использовали непосредственно на следующей стадии.

1Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 6,97 (дд, J=9,2, 8,3 Гц, 1Н), 6,77 (дд, J=9,1, 4,1 Гц, 1Н), 5,27 (кв., J=6,7 Гц, 1Н), 4,34-4,29 (м, 1Н), 4,22-4,16 (м, 1Н), 4,04-3,98 (м, 1Н), 3,95-3,88 (м, 2Н), 1,51 (д, J=6,7 Гц, 3Н).

Стадия 4. К раствору сложного этилового эфира 5-хлоро-пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (100 мг, 0,44 ммоль) и 11-1D (110 мг, 0,41 ммоль) в безводном THF (5,0 мл) при -78°С добавляли NaH (60%, 17 мг, 0,44 ммоль). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 8 ч до образования достаточного количества целевого продукта. Смесь затем разбавляли водой/льдом и экстрагировали DCM (3x20 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, концентрировали и очищали при помощи хроматографии с колонкой на силикагеле с получением 11-1Е в виде желтой жидкости (20 мг, 0,045 ммоль, 6%), который непосредственно использовали на следующей стадии.

Стадия 5. К раствору 11-1Е (20 мг, 0,045 ммоль) в МеОН (1 мл), LioH (16 мг, 0,38 ммоль) добавляли с последующим добавлением 1 мл Н₂О. Смесь оставляли перемешиваться при 60°С в течение 4 ч, пока ЖХМС и ТСХ не продемонстрировали завершение реакции. Раствор охлаждали до комнатной температуры, частично концентрировали и подкисляли 1н. HCl до рН 2-3. Водную смесь экстрагировали DCM (3x10 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток 11-1F использовали непосредственно на следующей стадии.

Стадия 6. К раствору 11-1F (20 мг, 0,045 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли PPh₃ (24 мг, 0,09 ммоль). Раствор перемешивали в течение 1 ч, пока ТСХ не продемонстрировала полное превращение исходного материала в желаемый продукт. Смесь затем использовали непосредственно на следующей стадии без дополнительной характеристики.

11-1G MS ESI⁺ m/z 417,7 (M+Na)⁺.

Стадия 7. К раствору 11-1G, полученному на предыдущих стадиях DMF (10 мл), добавляли DIPEA (0,20 мл, 1,15 ммоль). Раствор охлаждали на бане с сухим льдом/ацетоном и добавляли HATU (40,0 мг, 0,11 ммоль). Раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры медленно, и ЖХМС демонстрирует полное превращение исходного материала в желаемый продукт. Смесь затем разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (3x50 мл). Соединенный органический слой промывали водой (3x50 мл) и солевым раствором (50 мл) и высушивали над Na₂SO₄. Растворитель удаляли и полученный в результате остаток очищали при помощи хроматографии с колонкой на силикагеле (0-5% MeOH/DCM) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (2,6 мг, 20% выход).

Ссылочные примеры 14 и 14-1.

Примеры 14 и 14-1 могут быть получены в соответствии со следующей схемой с использованием рацемических или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

Стадия 1. В смесь соединения 14А (1 экв.) и 14В (1,2 экв.) в безводном DMF (0,2 М) добавляли

Cs₂CO₃ (1,5 экв.) и реакцию нагревали на масляной бане при 80°С в атмосфере азота всю ночь. Смесь

- 33 041662 охлаждали, выливали в воду и экстрагировали EtOAc трижды. Соединенные органические слои промывали водой пять раз, промывали солевым раствором и высушивали над Na₂SO₄. После конденсации остаток очищали при помощи флэш-колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 14С.

Стадия 2. В охлажденный (-78°С) раствор 14С (1 экв.) в безводном THF (0,2 М) добавляли MeMgBr (3 экв, 3 М в диэтиловом эфире). Реакцию перемешивали в течение 2 ч от -78 до 0°С, гасили насыщенным водным NH₄Cl и затем экстрагировали EtOAc (2х). Органические слои высушивали над MgSO₄, фильтровали и концентрировали. Данный остаток очищали при помощи хроматографии на силикагелевой колонке, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 14D.

Стадия 3. К раствору соединения 14D (1 экв.) в безводном THF (0,2 М) добавляли NaH (1.2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 0,5 ч. В смесь добавляли 14Е и реакцию нагревали до дефлегмации в атмосфере азота всю ночь. Реакцию охлаждали до температуры окружающей среды и затем выливали в воду. Продукт экстрагировали EtOAc трижды. Соединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением продукта 14F.

Стадия 4. К раствору соединения 14F (1 экв.) в CH₂Cl₂ (0,2 М) добавляли 4 М HCl/диоксан (10 экв.) и смесь перемешивали, пока весь 14F не превращался в 14G. После концентрирования остаток очищали при помощи обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ с получением 14G.

Стадия 5. К раствору 14G (1 экв.) и DIPEA (2 экв.) в толуоле (0,01 М) добавляли Pd(P-t-Bu₃)₂(1 экв.). Реакционную смесь нагревали до 100°С при 4 бар СО всю ночь и затем концентрировали. Остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 14.

Ссылочные примеры 15 и 15-1.

Примеры 15 и 15-1 могут быть получены в соответствии со следующей схемой с использованием рацемических или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

Стадия 1. К суспензии 15А (1,0 экв.) в THF (0,15 М) добавляли раствор 2,0 М водного NaOH (3 экв.). Гомогенную реакционную смесь перемешивали всю ночь и затем органические слои удаляли при пониженном давлении. Водный остаток доводили до рН ~4 1,0 М водной HCl. Полученный в результате осадок собирали фильтрованием и промывали Н₂О с получением твердого вещества 15В. Фильтрат экстрагировали EtOAc (2х) и органические слои концентрировали при пониженном давлении с получением дополнительной порции 15В.

Стадия 2. Маточный раствор реагента Джонса (2,67 М) получали путем осторожного добавления концентрированной H2SO4 (2,3 мл) в CrO₃ (2,67 г) и последующего разбавления до 10 мл Н₂О. К суспензии 15В (1,0 экв.) в ацетоне (0,067 М) медленно добавляли реагент Джонса (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин и затем гасили i-PrOH и фильтровали через прокладку с диатомитовой землей, промывая ацетоном. Фильтрат концентрировали с получением 15С, который использовали без дополнительной очистки.

Стадия 4. К раствору 15С (1,0 экв.) в DMF (0,40 М) при 0°С добавляли NaH (60% в минеральном масле, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и затем

- 34 041662 снова охлаждали до 0°С и медленно добавляли 2-(триметилсилилэтоксиметил)хлорид (4,3 мл, 1,2 экв.).

Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение 1 ч и затем гасили

Н₂О и экстрагировали EtOAc (3х). Соединенные органические слои промывали Н₂О (3х) и солевым раствором и затем высушивали над MgSO₄ и концентрировали. Остаток очищали при помощи флэшхроматографии на силикагеле, элюируя 20-30% EtOAc/гексан с получением 15D.

Стадия 5. К реакционной смеси 14D (1,0 экв.), йодиду меди(I) (0,05 экв.), 8-гидроксихинолину (0,1 экв.) и трехосновному фосфату калия (2,0 экв.) в DMF (0,2 М) в атмосфере азота добавляли 15D (1,2 экв.), реакционную смесь нагревали при 120°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc. Смесь фильтровали через прокладку с диатомитовой землей и фильтровали, испаряя в вакууме. Неочищенный остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAC/гексаном с получением 15Е.

Стадия 6. Суспензию 15Е (1,0 экв.) в 1,4-диоксане (0,062 М) и воде (1/3 THF) обрабатывали сульфамовой кислотой (6,0 экв.). Раствор хлорита натрия (1,3 экв.) и дикислый фосфат калия (12 экв.) в воде (1,2 М) добавляли через капельную воронку в течение 20 мин. После завершения добавления ледяную баню удаляли, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. THF добавляли, реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 3 ч. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали EtOAc (2х). Соединенные органические слои промывали водой и солевым раствором и затем высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток растирали этилацетатом/гексаном с получением 15F.

Стадия 7. К раствору соединения 15F (1 экв.) в CH₂Cl₂ (0,2 М) добавляли 4 М HCl/диоксан (10 экв.) и смесь перемешивали до тех пор, пока весь 15F не превратился в 15G. После концентрирования остаток очищали при помощи обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ с получением 15G.

Стадия 8. Раствор соединения 15G (1 экв.) и DIPEA (10 экв.) в DMF (0,2 М) добавляли по каплям к раствору HATU (1,4 экв.) в DMF (0,1 М) при 0°С. После завершения добавления смесь перемешивали при 0°С в течение еще 30 мин. Добавляли воду и смесь трижды экстрагировали EtOAc. Соединенные органические слои промывали насыщенным NaHCO₃ дважды, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и испаряли. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 15.

Ссылочные примеры 18 и 18-1.

Примеры 18 и 18-1 могут быть получены в соответствии со следующей схемой с использованием рацемических или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

13В ^1SC

Стадия 1. К реакционной смеси 14D (1,0 экв.), 18А (1,2 экв.) и йодида меди(I) (0,05 экв.) в DMF (0,2 М) в атмосфере азота добавляли NaH (3,0 экв.). Реакционную смесь нагревали при 120°С в течение 24 ч, затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc. Смесь фильтровали через прокладку с диатомитовой землей и фильтровали, испаряя в вакууме. Неочищенный остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 18В.

Стадия 2. К реакционной смеси 18В (1,0 экв.) в DMF (0,2 М) добавляли KOH (2 экв.) и I₂ (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем гасили NaHSO₃ и экстрагировали EtOAc. Соединенные органические слои промывали насыщенным NaHCO₃ дважды, солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄ и испаряли. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 18С.

- 35 041662

Стадия 3. К раствору соединения 18С (1 экв.) в CH2C12 (0,2 М) добавляли 4 М HCl/диоксан (10 экв.) и смесь перемешивали, пока весь 18С не превращался в 18D. После концентрирования остаток очищали при помощи обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ с получением 18D.

Стадия 4. К раствору 18D (1 экв.) и DIPEA (2 экв.) в толуоле (0,01 М) добавляли Pd(P-t-Bu₃)₂ (1 экв.). Реакционную смесь нагревали при 100°С при 4 бар СО всю ночь и затем концентрировали. Остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 18.

Ссылочный пример 20.

Пример 20 был получен в соответствии со следующей схемой:

Стадия 1. трет-Бутил (2-(4-фторо-2-формилфенокси)этил)карбамат (20С).

Раствор альдегида 20А (1,5 г, 11 ммоль), хлорида 20В (2,1 г, 12 ммоль), карбоната калия (7,4 г, 54 ммоль) и йодида калия (36 мг, 0,2 ммоль) в DMF (11 мл) нагревали до 60°С и перемешивали в течение 15 ч. Добавление дополнительного хлорида 20В (1,0 г, 6 ммоль) и дополнительное нагревание при 80°С в течение 5 ч завершило реакцию. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли путем добавления воды (250 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3x300 мл) и соединенные экстракты промывали водой (200 мл) и солевым раствором (100 мл), высушивали сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Флэш-хроматография (ISCO система, силикагель, 0-20% этилацетат в гексане) привела к получению 20С (3,0 г, 99%) в виде вязкого масла.

LRESIMS m/z 306,1 [M+Na]+, в расчете на C^^NiN^ 306,1.

Стадия 2. трет-Бутил (2-(4-фторо-2-((метиламино)метил)фенокси)этил)карбамат (20D).

Альдегид 20С (2,5 г, 8,8 ммоль) и метиламин (0,69 г, 22 ммоль) в метаноле (88 мл) нагревали до 60°С и перемешивали в течение 1 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли борогидрид натрия (,33 г, 8,8 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин, а затем гасили путем добавления воды (200 мл). Смесь экстрагировали дихлорметаном (4x100 мл) и соединенные экстракты высушивали солевым раствором (50 мл), сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Флэшхроматография (ISCO система, силикагель, 0-100% (10% метанол в этилацетате) в гексане) привела к получению соединения (2,1 г, 80%) в виде геля.

LRESIMS m/z 299,2 [М+Н]⁺, в расчете на C₁₅H₂₄F1N₂O₃ 299,2.

Стадия 3. Этил 5-((2-(2-((трет-бутоксикарбонил)амино)этокси)-5-фторобензил)(метил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат (20F).

Амин 20D (2,1 г, 7,0 ммоль), сложный эфир 20Е (1,59 г, 7,0 ммоль) и основание Хунига (7,0 мл, 5,2 г, 40 ммоль) в бутаноле (17 мл) нагревали при 110°С в течение 25 мин. Реакцию охлаждали и разбавляли водой (250 мл). Смесь экстрагировали дихлорметаном (4x100 мл) и соединенные экстракты высу- 36 041662 шивали сульфатом натрия. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Флэш-хроматография (ISCO система, силикагель, 20-100% этилацетат в гексане) привела к получению титульного соединения (2,1 г, 75%) в виде твердого вещества.

LRESIMS m/z 488,3 [М+Н]⁺, в расчете на C24H31F1N5O5 488,2.

Стадия 4. 5-((2-(2-((трет-Бутоксикарбонил)амино)этокси)-5-фторобензил)(метил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота (20G).

Гидроксид натрия (40 мл, 2 M в воде) добавляли к перемешивающемуся раствору сложного эфира 20F (2,1 г, 4,3 ммоль) в тетрагидрофуран:метанол (3,2, 100 мл) при комнатной температуре. Реакцию нагревали до 60°С и перемешивали в течение 6,5 ч. Смесь охлаждали до 0°С и подкисляли соляной кислотой (45 мл, 2 M в воде), затем разбавляли водой (100 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (4x150 мл) и соединенные экстракты высушивали солевым раствором (50 мл) и сульфата натрия. Смесь концентрировали при пониженном давлении с получением титульного соединения (1,92 г, 97%) в виде твердого вещества.

LRESIMS m/z 460,2 [М+Н]⁺, в расчете на C₂₂H₂₇F1N₅O₅ 460,2.

Стадия 5. 5-((2-(2-Аминоэтокси)-5-фторобензил)(метил)амино)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3карбоновая кислота (20Н).

Соляную кислоту (5 мл, 4 М в диоксане) добавляли к перемешивающемуся раствору карбоновой кислоты 20G (1,92 г, 4,2 ммоль) в дихлорметане (25 мл) при комнатной температуре. Реакцию перемешивали в течение 2 ч, а затем концентрировали при пониженном давлении с получением титульного со единения в виде твердого вещества.

LRESIMS m/z 360,2 [М+Н]⁺, в расчете на C₁₇H₁₀F1N₅O₃ 360,2.

Стадия 6. В атмосфере аргона HATU (1,67 г, 4,4 ммоль) добавляли к перемешивающемуся раствору карбоновой кислоты 20Н (1,50 г, 4,2 ммоль) и основанию Хунига (7,28 мл, 5,40 г, 41,8 ммоль) в DMF:дихлорметане (5:1, 60 мл) при -78°С. Реакцию медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч, а затем гасили водой (300 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3x100 мл), затем дихлорметаном (2x100 мл) и соединенные экстракты высушивали солевым раствором (50 мл) и сульфатом натрия. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Флэш-хроматография (ISCO система, силикагель, 1-4% метанол в дихлорметане) с последующей рекристаллизацией из этилацетата/метанола обеспечила пример 20 (0,98 г, 68%, 2 стадии) в виде твердого вещества.

LRESIMS m/z 342,2 [М+Н]⁺, в расчете на C17H17F1N5O2 342,1;

1H ЯМР (500 МГц, ДМСО-06) δ 9,43 (дд, J=6,9, 2,7 Гц, 1Н), 8,76 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 8,10 (с, 1Н), 7,197,25 (м, 1Н), 7,03-7,07 (м, 2Н), 6,72 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 5,64 (дд, J=14,9, 1,5 Гц, 1Н), 4,48 (дт, J=10,2, 4,3 Гц, 1Н), 4,04-4,10 (м, 2Н), 3,81-3,87 (м, 1Н), 3,58 (с, 3Н), 3,38-3,46 (м, 1Н).

Альтернативный синтез примера 20.

Пример 20 также получали по следующему альтернативному пути:

^В1 20

Стадия 1. Этил 5-оксо-4Н-пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат (20J).

К смеси 201 (150,00 г, 1,08 ммоль) и этил (Е)-3-этоксипроп-2-еноата (292,16 г, 2,03 моль) в DMF (3,2 л) добавляли Cs₂CO₃ (656,77 г, 2,02 моль) одной порцией при 20°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 110°С в течение 6 ч. Смесь охлаждали до 20°С и фильтровали через прокладку с диатомитовой землей. Осадок на фильтре промывали этилацетатом (3x30 мл). Фильтрат добавляли в Н₂О (2 л) и подкисляли НОАс до рН 4. Полученный в результате осадок фильтровали с получением 20J (173,00 г, 834,98 ммоль, 86,36% выход) в виде белого твердого вещества.

- 37 041662 ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8,54 (д, J=7,91 Гц, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 6,13 (д, J=7,91 Гц, 1Н), 4,27 (кв.,

J=7,11 Гц, 2Н), 1,28 (т, J=7,09 Гц, 3Н).

Стадия 2. 5-Хлоропиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксилат (20K).

В смесь 20J (158,00 г, 762,59 ммоль) в MeCN (1,6 л) добавляли POCl₃ (584,64 г, 3,81 моль) при 20°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 100°С в течение 2 ч. Смесь охлаждали до 20°С и выливали в ледяную воду (5000 мл) порциями в 0°С и перемешивали в течение 20 мин. Осадок фильтровали и высушивали с получением 20K (110,00 г, 487,52 ммоль, 63,93% выход) в виде белого твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 9,33 (д, J=7,28 Гц, 1Н), 8,66 (с, 1Н), 7,41 (д, J=7,15 Гц, 1Н), 4,31 (кв., J=7,15 Гц, 2Н), 1,32 (т, J=7,09 Гц, 3Н).

Стадия 3. 4-Фторо-2-метиламинометил-фенол (20М).

К раствору 20 л (5,00 г, 35,69 ммоль, 1,00 экв.) в МеОН (50,00 мл) добавляли водный метанамин (8,8 мл, 71,38 ммоль, 25%, 2,00 экв.) одной порцией при 25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 25°С в течение 3 ч, затем NaBH₄ (2,70 г, 71,38 ммоль, 2,00 экв.) добавляли по порциям. Затем смесь перемешивали при 25°С в течение еще 9 ч. ТСХ показала завершение реакции. Смесь концентрировали при пониженном давлении при 45°С. Остаток выливали в воду (50 мл). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (3x200 мл) и комбинированную органическую фазу промывали солевым раствором (200 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 20М (5,10 г, 32,87 ммоль, 92,09% выход) в виде бесцветного твердого вещества.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ 6,86 (дт, J=3,0, 8,7 Гц, 1Н), 6,78-6,69 (м, 2Н), 3,93 (с, 2Н), 2,48 (с, 3Н).

Стадия 4. Сложный этиловый эфир 5-[(5-фторо-2-гидроксибензил)метиламино]пиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (А1).

К суспензии 20М (33,70 г, 217,17 ммоль, 1,00 экв.) и 20К (49,00 г, 217,17 ммоль, 1,00 экв.) в n-BuOH (740,00 мл), добавляли DIPEA (159,98 г, 1,24 моль, 5,70 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 2 ч в атмосфере азота. ТСХ показала завершение реакции. Раствор охлаждали до 25°С и затем удаляли растворитель. Остаток разбавляли водой (500 мл) и экстрагировали дихлорметаном (3x500 мл). Соединенные органические экстракты промывали солевым раствором (300 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄ и концентрировали в вакууме. Остаток растирали с EtOAc (100 мл) с получением А1 (60,00 г, 174,25 ммоль, 80,24% выход) в виде белого твердого вещества.

1H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 9,71 (с, 1Н), 8,32 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 8,30 (с, 1Н), 6,98-6,87 (м, 3Н), 6,37 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 4,82 (с, 2Н), 4,42 (кв., J=7,1 Гц, 2Н), 3,21 (с, 3Н), 1,39 (т, J=7,1 Гц, 3Н).

Стадия 5. Сложный этиловый эфир 5-{[2-(2-трет-бутоксикарбониламиноэтокси)-5-фторобензил]метиламино}пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (В1).

К раствору А1 (102,85г, 298,6 ммоль, 1 экв.), трет-бутилового сложного эфира (2-хлороэтил)карбамовой кислоты (56,33 г, 313,5 ммоль, 1,05 экв.) в DMF (854 мл) добавляли K2CO3 (206,41 г, 1493 ммоль, 5,0 экв.). Смесь нагревали при 80°С в течение 20 ч с -85% превращением исходного материала в продукт при помощи ЖХ-МС. Дополнительные порции трет-бутилового сложного эфира (2-хлороэтил)карбамовой кислоты (5,633 г, 31,35 ммоль, 0,1 экв.) и K2CO3 (41,282 г, 298,6 ммоль, 1 экв.) добавляли в реакционную колбу. Реакцию продолжали при 80°С в течение еще 21 ч. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры, гасили водой (1000 мл) и экстрагировали EtOAc (3x900 мл). Соединенные органические экстракты затем промывали водой (3x700 мл) и солевым раствором (500 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-70% с получением В1 в виде белого твердого вещества (128,74 г, 96,7% выход).

ЖХ-МС (ESI) m/z 510,1 (M+Na)+;

¹H ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,30 (с, 1Н), 8,26 (с, 1Н), 6,92 (тд, J=8,6, 3,3 Гц, 1Н), 6,83-6,76 (м, 1Н), 6,31 (с, 1Н), 4,93 (с, 2Н), 4,51-4,44 (м, 1Н), 4,36 (кв., J=7, 2 Гц, 2Н), 4,03 (т, J=4,9 Гц, 2Н), 3,69-3,63 (м, 1Н), 3,51 (с, 2Н), 3,30 (с, 2Н), 1,44 (с, 9Н), 1,41-1,35 (т, J=7,2 Гц, 3Н).

Стадия 6. 11-Фторо-14-метил-6,7,13,14-тетрагидро-1,15-этенопиразоло[4,3-1][1,4,8,10]бензоксатриазациклотридецин-4(5Н)-он (20).

К раствору В1 (128,74 г, 264,07 ммоль, 1 экв.) в метаноле (750 мл) и THF (250 мл) добавляли LiOH-H₂O (55,40 г, 1320 ммоль, 5,0 экв.) в Н₂О (250 мл). Прозрачный раствор нагревали при 70°С в течение 2 ч. Реакцию нейтрализовали при 0°С водн. HCl (2 М, 250 мл) до рН <5 и затем экстрагировали CH₂Cl₂ (1x1000 мл, 3x500 мл). Соединенные органические слои промывали солевым раствором (300 мл) и высушивали над Na2SO4. После фильтрования, выпаривания и сушки в высоком вакууме получали белое твердое вещество (126,47 г, 275,25 ммоль, 104% выход). К раствору кислоты (121,30 г, 264 ммоль) в CH₂Cl₂ (996 мл) добавляли HCl в диоксане (4 М, 204 мл) при 0°С. Продолжали перемешивание от 0°С до комнатной температуры в течение 27 ч до завершения de-Boc при помощи ЖХ-МС. Белое твердое вещество фильтровали, промывали DCM (400 мл), высушивали в высоком вакууме с получением белого твердого вещества аминной HCl соли (123,55 г), которую использовали непосредственно без дополнительной очистки. К раствору DIPEA (169,4 г, 228 мл, 1310 ммоль) в DMF (3,7 л) и CH₂Cl₂ (1,0 л) добавляли ки

- 38 041662 слотную аминную HCl соль (22,92 г, 49,0 ммоль, 1,00 экв.). После полного растворения твердой соли добавляли пентафторофенил дифенилфосфинат (FDPP) в CH₂Cl₂ (1,1 М, 19,76 г, 51,44 ммоль, 1,05 экв.). Сочетание завершали за 30 мин при помощи ЖХ-МС и затем вторые порции соли и FDPP добавляли, следуя той же процедуре, что и первая порция. Добавление соли с последующим добавлением FDPP повторяли каждые 30 мин и контролировали при помощи ЖХ-МС для каждого цикла добавления. Всю соль (123,55 г, 264 ммоль, 1,00 экв.) и FDPP (106,44 г, 277 ммоль, 1,05 экв.) добавляли в реакционную колбу частями. Реакционный раствор концентрировали до объема ~500 мл, и образовывалось большое количе ство осадка. Твердое вещество 20 фильтровали и промывали DMF (3x50 мл). Фильтрат выливали в воду (2 л) и дополнительный продукт осаждали. Твердое вещество фильтровали и промывали водой (3x100 мл). Соединенный твердый продукт высушивали, повторно растворяли в 10% метаноле в дихлорметане (1,5 л) и затем этилацетат добавляли (1 л). Раствор конденсировали до ~500 мл, и образовывалось большое количество белого твердого вещества. После фильтрования и высушивания в высоком ваккуме получали белое твердое соединение 20 (74,58 г, 83% выход).

Порошковая рентгеновская дифракция (PXRD) примера 20.

Образец примера 20, кристаллическую полиморфную форму 1, переносили на планшет для фоновой калибровки для PXRD анализа. PXRD данные получали при помощи Bruker D8 рентгеновского дифрактометра в соответствии с процедурами, рекомендованными производителем. Параметры для сканирования: 2-тэта диапазон: 4,5-39,1°; размер стадии: 0,02°; время стадии: 1 с; время анализа: 180 с.

Дифракционные пики типично измеряли с ошибкой ±0,1° (2θ).

Результаты проиллюстрированы на фиг. 1. Данные подытожены в табл. 1.

Таблица 1

2-Θ(градусов)	d-значение	Интенсивность пика (единиц)	Интенсивность пика (%)
10, 68	9, 611	31, 15	5, 2
11,96	8,586	19, 11	2, 9
15, 26	6, 737	20, 92	4,4
19, 64	5, 244	27,57	6, 4
21,94	4,701	452,41	100
23, 96	4,309	91, 85	18,2
26, 82	3, 857	10, 92	2,2

Дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC) примера 20.

DSC измерения, проиллюстрированные на фиг. 2, были проведены при помощи дифференциального сканирующего калориметра Seiko Model SSC/5200. 7,92 мг образца примера 20, кристаллическая полиморфная форма 1, уравновешивали при 36°С и затем линейно увеличивали температуру до 380°С при скорости 10°С/мин. Образец примера 20, кристаллическая полиморфная форма 1, показал температуру плавления 298,9°С.

Ссылочный пример 26.

- 39 041662

Пример 26 может быть получен в соответствии со следующей схемой:

Стадия 1. Изопропоксид титана(IV) (1,3 экв.) добавляли в коммерчески доступный раствор метиламина в метаноле (2 М, 3 экв.) с последующим добавлением исходного альдегида 14С (1,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 5 ч, после чего борогидрид натрия (1,0 экв.) добавляли и полученную в результате смесь дополнительно перемешивали в течение дополнительного 2-часового периода. Реакцию затем гасили добавлением воды, полученный в результате неорганический осадок фильтровали и промывали EtOAc. Органический слой разделяли и водную фракцию дополнительно экстрагировали EtOAc (х2). Соединенные экстракты высушивали (K₂CO₃) и концентрировали in vacuo с получением 26А.

Стадия 2. Смесь соединения 26А (1 экв.) и DIPEA (2 экв.) в n-BuOH (0,2 М) нагревали при 120°С всю ночь, охлаждали до температуры окружающей среды и затем концентрирован. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением продукта 26В.

Стадия 3. К раствору соединения 26В (1 экв.) в CH₂Cl₂ (0,2 М) добавляли 4 М HCl/диоксан (10 экв.) и смесь перемешивали, пока весь 26В не превращался в 26С. После концентрирования остаток очищали при помощи обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ с получением 26С.

Стадия 4. К раствору 26С (1 экв.) и DIPEA (2 экв.) в толуоле (0,01 М) добавляли Pd(P-t-Bu₃)₂(1 экв.). Реакционную нагревали при 100°С при 4 бар СО всю ночь и затем концентрировали. Остаток очищали на колонке на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном, с получением 26.

Ссылочные примеры 37 и 37-1.

Примеры 37 и 37-1 могут быть получены в соответствии со следующей схемой из рацемически или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

о

37С ³⁷

Стадия 1. Соединение 37В получали из соединения 2С и соединения 37А с использованием спосо- 40 041662 ба, описанного в примере 2, синтез А, стадия 2.

Стадия 2. Соединение 37С получали из соединения 37В с использованием способа, описанного в примере 2, синтез А, стадия 3.

Стадия 3. Пример 37 получали из соединения 37С с использованием способа, описанного в примере 2, синтез А, стадия 4.

Ссылочные примеры 38 и 38-1.

Примеры 38 и 38-1 могут быть получены в соответствии со следующей схемой из рацемически или энантиомерно обогащенных исходных материалов:

Стадия 1. Соединение 38В получали из соединений 2С и 38А, как описано в примере 2, синтез А, стадия 2.

Стадия 2. Соединение 38С получали из соединения 38В с использованием способа, описанного в примере 2, синтез А, стадия 3.

Стадия 3. Пример 38 получали из соединения 38С с использованием способа, описанного в примере 2, синтез В, стадия 4.

Ссылочный пример 39.

- 41 041662

Пример 39 получали в соответствии со следующей схемой:

Стадия 1. трет-Бутиловый сложный эфир 2-(3-хлоро-4-фторо-2-формилфенокси)этил]карбамовой кислоты (39В).

К раствору 2-хлоро-3-фторо-6-гидроксибензальдегида (39А, 53 мг, 0,3 ммоль) и трет-бутилового сложного эфира (2-хлороэтил)карбамовой кислоты (135 мг, 0,75 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли KI (2,0 мг, 0,012 ммоль) и K₂CO₃ (105 мг, 0,75 ммоль). Смесь подвергали воздействию микроволн при 100°С в течение 2 ч. Смесь затем разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Соединенные органические слои промывали водой (3x20 мл) и солевым раствором (20 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали с получением 39В. Неочищенный остаток использовали непосредственно на следующей стадии.

ЖХ-МС: (ESI) m/z 340,3 (M+Na)+.

Стадия 2. трет-Бутиловый сложный эфир {[2-(3-хлоро-4-фторо-2-метиламинометилфенокси)этил]карбаомовой кислоты (39С).

К раствору 39В (95,4 мг, 0,3 ммоль) в МеОН (3 мл) добавляли метиламин гидрохлорид (50,7 мг, 0,75 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 30 мин. Раствор затем охлаждали до температуры окружающей среды и добавляли NaBH₄ (11,1 мг, 0,3 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Раствор затем разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали DCM (3x20 мл). Соединенные органические слои высушивали над Na2SO4 и концентрировали с получением 39С. Неочищенный остаток использовали непосредственно на следующей стадии.

ЖХ-МС: (ESI) m/z 333,3 (М+Н)⁺.

Стадия 3. Этиловый сложный эфир 5-{[6-(2-трет-бутоксикарбониламиноэтокси)-2-хлоро-3фторобензил] метиламино} пиразоло [1,5-а] пиримидин-3 -карбоновой кислоты (3 9D).

К раствору 20K (67,5 мг, 0.3 ммоль) и 39С (99,9 мг, 0,3 ммоль) в n-BuOH (2,0 мл) добавляли DIEA (1,0 мл). Смесь нагревали под воздействием микроволн при 150°С в течение 2 ч. Смесь затем разбавляли водой и экстрагировали DCM (3x20 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, концентрировали и очищали при помощи хроматографии с колонкой на силикагеле с получением 17 в виде желтой жидкости.

ЖХ-МС: (ESI) m/z 522,5 (М+Н)⁺.

Стадия 4. 5-{[6-(2-трет-Бутоксикарбониламиноэтокси)-2-хлоро-3-фторобензил]метиламино}пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновая кислота (39Е).

К раствору 39D (40 мг, 0,0776 ммоль) в МеОН (1 мл) добавляли LioH (16 мг, 0,38 ммоль) и Н₂О (1 мл). Смесь перемешивали при 60°С в течение 4 ч. Раствор охлаждали до температуры окружающей среды, частично концентрировали и подкисляли водным HCl (1н.) до рН 2-3. Водную смесь экстрагировали DCM (3x10 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали с получением 39Е. Неочищенный остаток использовали непосредственно на следующей стадии.

ЖХ-МС: (ESI) m/z 494,3 (М+Н)+.

Стадия 5. 5-{ [6-(2-Аминоэтокси)-2-хлоро-3 -фторобензил]метиламино} пиразоло[1,5-а]пиримидин-3 карбоновая кислота (39F).

- 42 041662

К раствору 39Е (40 мг, 0,0776 ммоль) в DCM (2 мл) добавляли TFA (0,4 мл). Раствор перемешивали в течение 1 ч. Растворитель удаляли при помощи роторного испарителя. Остаток повторно растворяли

DCM и повторно концентрировали (3 х) с получением 39F в виде пенообразной жидкости.

ЖХ-МС: (ESI) m/z 393,5 (М+Н)+.

Стадия 6. К раствору 39F (36 мг, 0,078 ммоль) в 10 мл DCM добавляли DIEA (0,20 мл, 1,15 ммоль). Раствор охлаждали на бане с сухим льдом/ацетоном и добавляли HATU (40,0 мг, 0,11 ммоль). Раствор оставляли медленно нагреваться до температуры окружающей среды. Смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (3х50 мл). Соединенный органический слой промывали водой (3х50 мл) и солевым раствором (50 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали при помощи колонки на силикагеле (0-5% MeOH/DCM) с получением примера 39 в виде белого твердого вещества (6,2 мг, 23,4%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 376,5 (М+Н)⁺.

¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 9,51 (с, 1Н), 8,40-8,33 (м, 2Н), 7,03 (ддд, J=8,9, 8,0, 0,7 Гц, 1Н), 6,78 (дд, J=9,3, 4,2 Гц, 1Н), 6,40 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 5,97 (дд, J=15,0, 2,1 Гц, 1Н), 4,49-4,43(м, 1Н), 4,31 (ддд, J=10,9, 6,4, 4,5 Гц, 1Н), 4,12-4,03 (м, 1Н), 3,91 (д, J=14,9 Гц, 1Н), 3,72-3, 63 (м, 1Н), 3,56 (с, 3Н).

Ссылочный пример 40.

Пример 40 получали так, как показано на следующей схеме:

А19 40А

40В ₄₀

Стадия 1. 5-[(5-Фторо-2-гидроксибензил)метиламино]-2-метилпиразоло[1,5-а]пиримидин-3карбоновая кислота (40В).

К раствору 19А (75 мг, 0,14 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли LiOH (60 мг, 1,4 ммоль) и Н₂О (2 мл). Смесь перемешивали при 60°С в течение 4 ч. Раствор охлаждали до температуры окружающей среды, частично концентрировали и подкисляли водным HCl (1н.) до рН 2-3. Полученную в результате суспензию экстрагировали EtOAc (3х20 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали с получением 40А.

ЖХ-МС (ESI) m/z 331,6 (М+Н)⁺.

Стадия 2. 5-[(5 -Фторо-2-гидроксибензил)метиламино]-2-метилпиразоло [1,5-а] пиримидин-3 карбоновая кислота (2-гидроксиэтил)амид (40В).

К раствору 40А (140 мг, 0,42 ммоль) и 2-аминоэтанола (244 мг, 4 ммоль) в DCM (5 мл) при 0°С добавляли DIEA (0,20 мл, 1,15 ммоль) и HATU (380,0 мг, 1,0 ммоль). Раствор медленно оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Смесь затем разбавляли водой (25 мл) и экстрагировали EtOAc (3х25 мл). Соединенные органические слои промывали HCl (1н., 3х20 мл) и солевым раствором (50 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя 0-5% MeOH/DCM (10 CV) с получением 40В в виде белого твердого вещества (74 мг, 47%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 374,3 (М+Н)⁺.

Стадия 3. К раствору 40В (74 мг, 0,2 ммоль) в THF (3 мл) и DCM (3 мл) при 0°С добавляли PPh₃(131 мг, 0,5 ммоль) и ди-трет-бутил азодикарбоксилат (DTAD) (115 мг, 0,5 ммоль). Смесь оставляли нагреваться до температуры окружающей среды и перемешивали в течение еще 4 ч. Растворитель затем удаляли и остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя 0-10%, MeOH/DCM (10 CV), с последующей препаративной ТСХ с получением примера 40 в виде белого твердого вещества (15 мг).

ЖХ-МС (ESI) m/z 356,5 (М+Н)⁺;

1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 8,12 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 6,93 (ддд, J=9,0, 3,1,0 ,9 Гц, 1Н), 6,78 (ддд, J=9,0, 7,3, 3,0 Гц, 1Н), 6,71 (дд, J=9,1, 4,5 Гц, 1Н), 6,28 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 5,77 (дд, J=15,2, 1,7 Гц, 1Н), 4,38- 43 041662

4,33 (м, 1Н), 3,98 (с, 1Н), 3,91 (д, J=1,4 Гц, 1Н), 3,78 (дд, J=15,1, 0,9 Гц, 1Н), 3,45 (с, 3Н), 3,43-3,36 (м, 1Н),

2,45 (с, 3Н).

Ссылочный пример 41.

Пример 41 получали с использованием способа, показанного на следующей схеме:

трет-Бутиловый сложный эфир [2-(2-ацетил-4-фторофенокси)этил]карбамовой

Стадия 1. кислоты (41В).

В смесь 1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этанона (41А, 773 мг, 5,0 ммоль) и трет-бутилового сложного эфира (2-хлороэтил)карбамовой кислоты (1,80 г, 10,0 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли KI (2,0 мг,

0,012 ммоль) и Cs₂CO₃ (3,26 г, 10,0 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С всю ночь. Смесь затем охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли EtOAc и промывали 1н. NaOH (5x10 мл), пока ЖХМС не показала отсутствие пика 1-(5-фторо-2-гидроксифенил)этанона. Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток затем очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-30%, 10 CV) с получением целевого продукта 41В в виде желтого твердого вещества (1,1 г, 73,8%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 320,3 (M+Na)+.

Стадия 2. трет-Бутил (2-(4-фторо-2-(1-гидроксиэтил)фенокси)этил)карбамат (41С).

К раствору 41В (1,0 г, 3,36 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли NaBH₄ (640 мг, 16,8 ммоль) частями. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Раствор затем разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали DCM (3x20 мл). Комбинированные DCM слои высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-50%, 10 CV), с получением целевого продукта в виде бледно-желтого твердого вещества (0,75 г, 75%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 322,3 (M+Na)⁺;

Стадия 3. Этиловый сложный эфир 6-{1-[2-(2-трет-бутоксикарбониламиноэтокси)-5фторофенил]этокси}имидазо[1,2-Ъ]пиридазин-3-карбоновой кислоты (41D).

К раствору 41С (600 мг, 2,0 ммоль) и трет-бутилового сложного эфира {2-[4-фторо-2-(1гидроксиэтил)фенокси]этил}карбамовой кислоты (450 мг, 2,0 ммоль) в сухом THF (40,0 мл) при -78 °С добавляли NaH (60%, 80 мг, 2,0 ммоль) порциями. Суспензию перемешивали при -78 °С в течение 4 ч и оставляли нагреваться при 0°С и перемешивали в течение еще 4 ч. Смесь затем помещали в морозильник при -20°С на всю ночь. Смесь затем гасили смесью льда и 1н. HCl и экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄, концентрирован и очищали дважды с получением целевого продукта в виде желтого твердого вещества (240 мг, 25%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 511,6 (M+Na)⁺;

1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 8,16 (с, 1Н), 7,90 (д, J=9,7 Гц, 1Н), 7,16 (дд, J=9,0, 3,2 Гц, 1Н), 0,95 (д, J=9,5 Гц, 1Н), 6,90-6,88 (м, 1Н), 6,81-6,78 (м, 1Н), 6,68 (кв., J=6,2 Гц, 1Н), 5,84-5,68 (м, 1Н), 4,38 (кв., J=7,2 Гц, 2Н), 4,15-4,09 (м, 2Н), 3,60-3,52 (м, 2Н), 1,65 (д, J=6,4 Гц, 3Н), 1,38 (д, J=12 Гц, 3Н), 1,35 (с, 9Н).

Стадия 4. Соединение 41D превращали в пример 41 при помощи способов, аналогичных описанным в данном документе.

МС: 34 3,2 (М+Н)⁺;

1Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 9,82 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 8,27 (с, 1Н), 8,09 (д, J=9,5 Гц, 1Н), 7,18 (дд,

- 44 041662

J=8,9, 3,2 Гц, 1Н), 7,01-6,94 (м, 2Н), 6,83 (дд, J=9,0, 4,3 Гц, 1Н), 6,60-6,53 (м, 1Н), 4,63-4,52 (м, 1Н), 4,274,16 (м, 1Н), 4,16-4,04 (м, 1Н), 3,70-3,56 (м, 1Н), 1,70 (д, J=6,4 Гц, 3Н).

Ссылочный пример 42.

Пример 42 получали при помощи способов, показанных на следующей схеме:

Стадия 1. Этиловый сложный эфир 6-[(5-фторо-2-гидроксибензил)метиламино]имидазо[1,2b]пиридазин-3-карбоновой кислоты (42В).

В смесь 4-фторо-2-метиламинометилфенол (20L, 305,2 мг, 1,97 ммоль) и этиловый сложный эфир 6-хлороимидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-карбоновой кислоты (42А, 230 мг, 1,02 ммоль) в ДМСО (5 мл) добавляли KF (180 мг, 3,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 18 ч в атмосфере азота. Раствор затем охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x50 мл). Соединенные органические слои дополнительно промывали водой (3x50 мл) и солевым раствором (50 мл), высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток затем очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-50%, 10 CV), с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (240 мг, 69%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 345,2 (М+Н)+;

1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 8,61 (с, 1Н), 8,17 (с, 1Н), 7,91 (д, J=10,0 Гц, 1Н), 7,00-6,86 (м, 4Н), 4,78 (с, 2Н), 4,47 (кв.д, J=7,2, 0,5 Гц, 2Н), 3,17 (с, 3Н), 1,41 (тд, J=7,1, 0,5 Гц, 3Н).

Стадия 2. Этиловый сложный эфир 6-{[2-(2-трет-бутоксикарбониламиноэтокси)-5фторобензил]метиламино}имидазо[1,2-Ь]пиридазин-3-карбоновой кислоты (42С).

К раствору этилового сложного эфира 6-[(5-фторо-2-гидроксибензил)метиламино]имидазо[1,2Ь]пиридазин-3-карбоновой кислоты (2В, 200 мг, 0,58 ммоль) и трет-бутилового сложного эфира (2-хлороэтил)карбамовой кислоты (209 мг, 1,16 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли K₂CO₃ (200 мг, 1,45 ммоль) и KI (2,0 мг, 0,012 ммоль). Смесь нагревали при 90°С в течение 4 ч в атмосфере азота. Смесь затем разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали EtOAc (3x10 мл). Соединенные органические слои затем промывали водой (3x5 мл) и солевым раствором (2x5 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Полученный в результате остаток очищали при помощи колонки на силикагеле, элюируя EtOAc/гексаном (0-100%, 10 CV), с получением 42С в виде белого твердого вещества (203 мг, 76%).

ЖХ-МС (ESI) m/z 510,1 (M+Na)+;

1H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ (ч./млн) 8,16 (с, 1Н), 7,85 (д, J=9, 9 Гц, 1Н), 7,00 (дд, J=8,9, 3,2 Гц, 1Н), 6,95-6,87 (м, 2Н), 6,80 (дд, J=8,9, 4,3 Гц, 1Н), 4,95 (с, 1Н), 4,74 (с, 2Н), 4,41 (кв., J=7,2 Гц, 2Н), 4,04 (т, J=5,2 Гц, 2Н), 3,56-3,50 (м, 2Н), 3,26 (с, 3Н), 1,43 (с, 9Н), 1,40 (т, J=7,2 Гц, 3Н).

Стадия 3. Соединение 42С превращали в пример 42 при помощи способов, аналогичных описанным в данном документе.

МС: 342,5 (М+Н)+;

¹Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 10,01 (д, J=6,9 Гц, 1Н), 8,17 (с, 1Н), 8,04 (д, J=10,0 Гц, 1Н), 7,077,04 (м, 1Н), 7,00 (д, J=10,0 Гц, 1Н), 6,96-6,92 (м, 1Н), 6,84 (дд, J=9,1, 4,5 Гц, 1Н), 5,69 (дд, J=15,8, 1,6 Гц, 1Н), 4,55 (дт, J=9,9, 3,7 Гц, 1Н), 4,20-4,09 (м, 2Н), 3,98 (дд, J=15,9, 1,0 Гц, 1Н), 3,66-3,62 (м, 1Н), 3,61 (с, 3Н).

- 45 041662

Ссылочный пример 51-1.

Стадия 1. К раствору А8 (399,4 мг, 1,16 ммоль) и трет-бутил (2-хлороэтил)карбамата (260,5 мг, 1,45 ммоль) в DMF (5,8 мл) добавляли K₂CO₃ (801,6 мг, 5,80 ммоль) и нагревали при 80°С при перемешивании в течение 6 ч. Реакцию охлаждали до температуры окружающей среды и разбавляли DCM (3 мл), фильтровали через шприцевой фильтр и концентрировали при пониженном давлении. Флэшхроматография (ISCO система, силикагель (12 г), 0-70% этилацетатом в гексане) приводила к получению 51-1А (407,4 мг, 0,836 ммоль, 72% выход).

Стадия 2. К раствору 51-1А (407,4 мг, 0,836 ммоль) в МеОН (6 мл) и THF (4 мл) добавляли LiOH водный раствор (2 М, 4,0 мл) при температуре окружающей среды. Реакционный раствор нагревали при 70°С в течение 2 ч. Реакционную колбу охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой и метанолом и затем гасили водным раствором HCl (2 М, 4 мл) до рН <5. Смесь экстрагировали DCM (3x5 мл), высушивали над Na₂SO₄, концентрировали при пониженном давлении и высушивали в высоком вакууме всю ночь. К раствору кислотного продукта в DCM (6 мл) добавляли 4 М HCl в 1,4-диоксане (2,97 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали при пониженном давлении и высушивали в высоком вакууме. К раствору de-Boc продукта и FDPP (352,9 мг, 0,918 ммоль) в DMF (21 мл) добавляли основание Хунига (539,5 мг, 0.327 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2,5 ч и затем гасили реакцию 2 М Na₂CO₃ раствором (21 мл). Смесь перемешивали в течение 15 мин и затем экстрагировали DCM (4x10 мл). Соединенные экстракты высушивали Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией (ISCO система, силикагель (12 г), 0-11,25% метанол в дихлорметане) с получением 51-1 (164,0 мг, 0,480 ммоль, 57,55 % выход в три стадии).

Ссылочный пример 53.

Пример 53 получали при помощи способов, показанных на следующей схеме:

Стадия 1. 5-[1-(5-Фторо-2-гидроксифенил)этиламино]пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (53А).

К раствору этилового сложного эфира 5-[(5-фторо-2-гидроксибензил)метиламино]пиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбоновой кислоты (20М, 300 мг, 0,87 ммоль) в МеОН (5 мл), добавляли LiOH (420 мг, 10 ммоль), с последующим добавлением 5 мл Н₂О. Смесь оставляли перемешиваться при 60°С в течение 4 ч. Раствор охлаждали до температуры окружающей среды, частично концентрировали и подкисляли

1н. HCl до рН 2-3. Полученную в результате суспензию экстрагировали EtOAc (3x20 мл). Соединенные органические слои высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток использовали непосредственно на следующей стадии.

ЖХМС (ESI+) m/z 317,4 (М+Н)+.

Стадия 2. Метиловый сложный эфир 3-({5-[(5-фторо-2-гидроксибензил)метиламино-пиразоло[1,5а]пиримидин-3-карбонил-амино)-2-гидрокс-пропионовой кислоты (53В).

К раствору 53А (80 мг, 0,25 ммоль) и метилового сложного эфира гидрохлорида 3-амино-2

- 46 041662 гидроксипропионовой кислоты (70 мг, 0,5 ммоль) в DCM (5 мл) при 0°С добавляли DIPEA (1,0 мл, 5,7 ммоль) с последующим добавлением HATU (140,0 мг, 0,5 ммоль). Раствор оставляли медленно нагреваться до температуры окружающей среды. Смесь разбавляли водой (25 мл) и экстрагировали EtOAc (3x25 мл). Соединенные органические слои промывали 1н. HCl (3x20 мл) и солевым раствором (50 мл) и высушивали над Na₂SO₄. Растворитель удаляли и полученное в результате белое твердое вещество использовали непосредственно на следующей стадии.

ЖХ-МС (ESI+) m/z 418,4 (М+Н)⁺.

Стадия 3. Метил 11-фторо-14-метил-4-оксо-4,5,6,7,13,14-гексагидро-1,15-этенопиразоло[4,3f][1,4,8,10] бензоксатриазациклотридецин-7-карбоксилат (53С).

К раствору 53В (83 мг, 0,2 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли PPh₃ (263 мг,1,0 ммоль) с последующим добавлением CBr₄ (332 мг, 1,0 ммоль). Смесь перемешивали при температуре окружающей среды всю ночь. Растворитель удаляли и остаток повторно растворяли в DMF (5 мл) с последующим добавлением K₂CO₃ (116,8 мг, 0,84 ммоль). Смесь затем перемешивали при 80°С до завершения образования целевого продукта. Смесь затем разбавляли EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали при помощи колонки на силикагеле (0-10%, MeOH/DCM) с получением 53С в виде белого твердого вещества (40 мг).

ЖХ-МС (ESI +) m/z 400,2 (М+Н)⁺.

Стадия 4. К 53С (20 мг, 0,05 ммоль) добавляли NH₃ в МеОН растворе (7н., 2 мл). Смесь перемешивали при 60°С всю ночь. Растворитель удаляли и остаток очищали при помощи колонки на силикагеле (0-10%, MeOH/DCM) с получением примера 53 как грязно-белого твердого вещества (8 мг).

ЖХ-МС (ESI⁺) m/z 385,5 (М+Н)⁺;

¹H ЯМР (300 МГц, хлороформ-d) δ 8,41 (с, 1Н), 8,34 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 8,17 (с, 1Н), 6,99-6,92 (м, 2Н), 6,77 (дд, J=6,2, 3,5 Гц, 1Н), 6,38 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 5,63-5,44 (м, 2Н), 5,09 (дд, J=11,0, 8,4 Гц, 1Н), 4,38 (дд, J=14,7, 11,0 Гц, 1Н), 4,28-4,17 (м, 1Н), 4,17-4,07 (м, 2Н), 3,22 (с, 3Н).

Ссылочный пример 54.

Пример 54 был получен при помощи способа, показанного на следующей схеме:

К раствору соединения 53С (20 мг, 0,05 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли NaBH₄ (19 мг, 0,5 ммоль) по порциям. Смесь перемешивали в течение 4 ч. Растворитель удаляли и остаток очищали при помощи колонки на силикагеле (0-10%, MeOH/DCM) с получением целевого продукта в виде белого твердого вещества (8 мг).

ЖХ-МС (ESI⁺) m/z 372,5 (М+Н)⁺;

¹H ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) δ 8,39 (с, 1Н), 8,32 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 7,01-6,85 (м, 3Н), 6,35 (д, J=8, 0 Гц, 1Н), 5,55-5,43 (м, 1Н), 4,92-4,82 (м, 1Н), 4,09-3,98 (м, 2Н), 3,80-3,70 (м, 3Н), 3,23 (с, 3Н).

Пример 93.

Стадия 1. К раствору трет-бутил (R)-2-гидроксипропилкарбамата (1,00 г, 5,71 ммоль) и тозилхлорида (1,14 г, 6,00 ммоль) в DCM (29 мл) добавляли триэтиламин (1,44 г, 14,28 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 48 ч. Реакционный раствор концентрировали при пониженном

- 47 041662 давлении и остаток очищали при помощи флэш-хроматография (ISCO система, силикагель (40 г), 0-20% этилацетат в гексане) с получением (R)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропан-2-ил 4-метилбензолсульфоната (1,12 г, 3,40 ммоль, 59,54% выход).

Стадия 2. К раствору А8 (100,00 мг, 0,290 ммоль) и (R)-1-((трет- бутоксикарбонил)амино)пропан-2ил-4-метилбензолсульфоната (143,50 мг, 0,436 ммоль) в DMF (1,45 мл) добавляли K₂CO₃ (200,7 мг, 1,45 ммоль) и нагревали при 80°С при перемешивании в течении 16 ч. Реакцию охлаждали до температуры окружающей среды и разбавляли DCM (3 мл), фильтровали через шприцевой фильтр и концентрировали при пониженном давлении. Флэш-хроматография (ISCO система, силикагель (12 г), 0-60% этилацетат в гексане) привела к получению 93А (32,90 мг, 0,0656 ммоль, 22,59% выход).

Стадия 3. К раствору 93А (32,90 мг, 0,0656 ммоль) в МеОН (3 мл) и THF (2 мл) добавляли LiOH водный раствор (2 М, 2 мл) при температуре окружающей среды. Реакционный раствор нагревали при 70°С в течение 2 ч. Реакционную колбу охлаждали до температуры окружающей среды, разбавляли водой и метанолом и затем гасили HCl водным раствором (2 М, 2 мл) до рН <5. Смесь экстрагировали DCM (3x5 мл), высушивали над Na₂SO₄, концентрировали при пониженном давлении и высушивали в высоком вакууме всю ночь. К раствору кислого продукта DCM (4 мл) добавляли 4 М HCl в 1,4-диоксане (2,0 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем концентрировали при пониженном давлении и высушивали в высоком вакууме. К раствору de-Boc продукта и FDPP (27,62 мг, 0,0719 ммоль) в DMF (1,6 мл) добавляли основание Хунига (42.23 мг, 0,327 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2,5 ч и затем гасили реакцию 2 М Na₂CO₃ раствором (2 мл). Смесь перемешивали в течение 15 мин и затем экстрагировали DCM (4x10 мл). Соединенные экстракты высушивали Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии (ISCO система, силикагель (12 г), 0-10% метанол в дихлорметане) с получением 93 (10,1 мг, 0,0284 ммоль, 43,49% выход в три стадии).

Ссылочные примеры 104, 106 и 107.

106 107

Стадия 1. К раствору А17 HCl (38 мг, 0,096 ммоль) и трет-бутил (2-хлороэтил)карбамата (12.9 мг, 0,072 ммоль) в DMF (0,5 мл) добавляли K₂CO₃ (33,1 мг, 0,24 ммоль) и нагревали при 80°С при перемешивании в течение 1,5 ч. Реакцию охлаждали до температуры окружающей среды и разбавляли DCM (3 мл), фильтровали через шприцевой фильтр и концентрировали при пониженном давлении. Флэшхроматография (ISCO система, силикагель (12 г), 0-60% этилацетат в гексане) приводила к получению 104А (20,8 мг, 0,0413 ммоль, 86,3% выход).

Стадия 2. Раствор 104 был получен в соответствии с общим способом С из 104А в виде белого твердого вещества.

Стадия 3. К раствору 104 (4,6 мг, 0,0129 ммоль) в DCM (0,3 мл) добавляли метил 3-хлоробензопероксоат (2,2 мг, 0,0129 ммоль) и реакцию перемешивали в течение 20 мин с последующим добавлением насыщенного раствора NaHCO₃ (3 мл) и экстракцией DCM (4x4 мл). Соединенные экстракты высушивали Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Флэш-хроматография (ISCO система, силикагель (12 г), 0-12,5% метанол в дихлорметане) приводила к получению 106 (0,5 мг, 10,4% выход) и 107 (1,7 мг, 33,9% выход).

Следующие примеры были получены при помощи способов, аналогичных описанным в данном документе, в особенности общих способов А, В и С, как описано в данном документе.

Пр.	Аналитические данные
11-1	МС: 377,7 (М+Н)⁺; ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 8,49 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 8,29 (с, 1Н) , 7,13 (дд, J=9,2, 7,8 Гц, 1Н) , 7,02 (д, J=7,3 Гц, 1Н) , 6,92 (дд, J=9,4, 3,9 Гц, 1Н), 6,82 (д, J=7,7 Гц, 1Н) , 4, 63-4,55 (м, 1Н), 4,45 (дд, J=10,8,5,4 Гц, 1Н) , 4,31-4,23 (м, 1Н) , 4,00 (дд, J=16,2, 8,7 Гц, 1Н), 1,70 (д, J=6,9 Гц, ЗН).

- 48 041662

20	МС: 342,2 [М+Н]⁺, ³Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,43 (дд, J=6,9, 2,7 Гц, 1Н) , 8,76 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 8,10 (с, 1Н), 7,19-7,25 (м, 1Н), 7,03-7,07 (м, 2Н), 6,72 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 5,64 (дд, J=14,9, 1,5 Гц, 1Н) , 4,48 (дт, J=10,2, 4,3 Гц, 1Н) , 4,04-4,10 (м, 2Н) , 3,81-3,87 (м, 1Н), 3,58 (с, ЗН), 3,38-3,46 (м, 1Н).
39	ЖХ-МС (ESI) m/z 376,5 (М+Н)⁺, ³Н ЯМР (500 МГц, хлороформci) δ 9,51 (с, 1Н), 8,40-8,33 (м, 2Н), 7,03 (ддд, J=8,9, 8,0, 0,7 Гц, 1Н), 6,78 (дд, J=9,3, 4,2 Гц, 1Н), 6,40 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 5,97 (дд, J=15,0, 2,1 Гц, 1Н) , 4,49- 4,43(м, 1Н) , 4,31 (ддд, J=10,9, 6,4, 4,5 Гц, 1Н) , 4,124,03 (м, 1Н) , 3,91 (д, J=14,9 Гц, 1Н) , 3,72-3, 63 (м, 1Н), 3,56 (с, ЗН).
40	МС: 356, 5 (М+Н)⁺; ³Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 8,12 (д, J=7,71 Гц, 1Н) , 6,93 (ддд, J=9,0, 3,1, 0,9 Гц, 1Н) , 6,78 (ддд, J=9,0, 7,3, 3,0 Гц, 1Н) , 6,71 (дд, J=9,l, 4,5 Гц, 1Н) , 6,28 (д, J=7,7 Гц, 1Н) , 5,77 (дд, J=15,2, 1,7 Гц, 1Н) , 4,38-4,33 (м, 1Н), 3,98 (с, 1Н) , 3,91 (д, J=l,4 Гц, 1Н) , 3,78 (дд, J=15,l, 0,9 Гц, 1Н) , 3,45 (с, ЗН) , 3,43-3,36 (м, 1Н), 2,45 (с, ЗН).
41	МС: 343,2 (М+Н)⁺; ³Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 9,82 (д, J=7,0 Гц, 1Н) , 8,27 (с, 1Н) , 8,09 (д, J=9, 5 Гц, 1Н) , 7,18 (дд, J=8,9, 3,2 Гц, 1Н) , 7,01-6,94 (м, 2Н) , 6,83 (дд, J=9,0, 4,3 Гц, 1Н) , 6, 60-6, 53 (м, 1Н) , 4,63-4,52 (м, 1Н), 4,27-4,16 (м, 1Н), 4,16-4,04 (м, 1Н), 3,70-3,56 (м, 1Н), 1,70 (д, J=6,4 Гц, ЗН).
42	МС: 342,5 (М+Н)⁺; ³Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 10,01 (д, J=6, 9 Гц, 1Н) , 8,17 (с, 1Н) , 8,04 (д, J=10,0 Гц, 1Н) , 7, 07-7, 04 (м, 1Н) , 7,00 (д, J=10,0 Гц, 1Н) , 6,966,92 (м, 1Н) , 6,84 (дд, J=9,l, 4,5 Гц, 1Н) , 5,69 (дд, J=15,8, 1,6 Гц, 1Н) , 4,55 (дт, J=9,9, 3,7 Гц, 1Н) , 4,204,09 (м, 2Н) , 3,98 (дд, J=15, 9, 1,0 Гц, 1Н) , 3,66-3,62 (м, 1Н) , 3, 61 (с, ЗН) .

- 49 041662

43	МС: 356, 6 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 8,27 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 8,17 (с, 1Н) , 6,96 (ддд, J=9,0, 3,1, 0,9 Гц, 1Н) , 6,88-6,81 (м, 1Н) , 6,77 (дд, J=9,0, 4,7 Гц, 1Н) , 6,41 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 5,71-5,63 (м, 1Н) , 4,43 (дт, J=10,0, 4,4 Гц, 1Н) , 4,09 (ддд, J=10,3, 8,4, 4,0 Гц, 1Н) , 3, 96-3, 92 (м, 1Н) , 3,87 (дд, J=15,0, 0,8 Гц, 1Н) , 3,77 (дд, J=15,0, 7,2 Гц, 1Н) , 3,55-3,51 (м, 2Н) , 1,33 (т, J=7,2 Гц, ЗН),
44	МС: 370, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,28 (дд, J=5,8, 4,0 Гц, 1Н) , 8,71 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 8,08 (с, 1Н) , 7,16 (дд, J=9,5, 3,0 Гц, 1Н) , 6, 98- 7,09 (м, 2Н) , 6,82 (д, J=8,0 Гц, 1Н) , 5,48 (д, J=15, 0 Гц, 1Н) , 4,424,51 (м, 1Н), 4,16-4,23 (м, 1Н), 4,04-4,14 (м, 2Н), 3,74-3,82 (м, 2Н), 3,39-3,46 (м, 1Н), 1,58-1,81 (м, 2Н), 0, 97 (т, J=7,3 Гц, ЗН) .
45	МС: 370, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 8, 87-8,98 (м, 1Н), 8,69-8,79 (м, 1Н), 8,04-8,12 (м, 1Н), 7,10-7,18 (м, 1Н) , 6, 92-7, 04 (м, ЗН) , 5,09-5,18 (м, 1Н) , 4,61-4,69 (м, 1Н), 4,50-4,56 (м, 1Н), 4,41-4,49 (м, 1Н), 4,16 (д, J=15,30 Гц, 1Н) , 3,57-3, 68 (м, 2Н) , 1,23-1,27 (м, 6Н) .
46	МС: 368,1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,35 (дд, J=7,0, 2,7 Гц, 1Н) , 8,81 (д,Я=7,8 Гц, 1Н) , 8,07-8,15 (м, 1Н) , 7,19 (дд, J=9,2, 2,3 Гц, 1Н) , 7,01-7,08 (м,2Н), 6,98 (д, J=7,8 Гц, 1Н) , 5,53 (дд,Н=15,1, 1,5 Гц, 1Н) , 4,47 (дт, J=10,22, 4,25 Гц, 1Н) , 4,34 (т, J=5, 08 Гц, 1Н) , 4,14 (д, J=15,30 Гц, 1Н) , 4,02-4,10 (м, 2Н) , 3,793,92 (м, 1Н), 1,12-1,16 (м, 1Н), 1,03-1,08 (м,2Н), 0,81 -0,86 (м, 1Н).

- 50 041662

47	МС: 372, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,25 (т, J=4,9 Гц, 1Н) , 8,71 (д,Я=7,9 Гц, 1Н) , 8,07 (с, 1Н) , 7,22 (дд, J=9,5, 3,0 Гц, 1Н) , 7,05 -7,11 (м, 1Н) , 6,96-7,04 (м, 1Н) , 6,83 (д, J=8,0 Гц, 1Н) , 5,51 (д, J=14,6 Гц, 1Н) , 4,96 (т, J=5,4 Гц, 1Н) , 4,42-4,51 (м, 1Н) , 4,24 (ддд, J=10,9, 6,8, 4,2 Гц, 1Н) , 4,09-4,20 (м, 2Н) , 3,91 (дт, J=15,2, 5,5 Гц, 1Н) , 3, 67-3, 82 (м, ЗН) , 3,39-3,51 (м, 1Н) .
48	МС: 356, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,70 (д, J=8,6 Гц, 1Н) , 8,76 (д, J=8,0 Гц, 1Н) , 8,09 (с, 1Н) , 7,25 (дд, J=9,5, 3,0 Гц, 1Н) , 7,01-7,11 (м, 1Н) , 6,947,00 (м, 1Н) , 6,71 (д, J=8,0 Гц, 1Н) , 5, 64-5, 73 (м, 1Н) , 4,34 (д, J=9,6 Гц, 1Н) , 4,28 (т, J=8,9 Гц, 1Н) , 4,10 (д, J=15,0 Гц, 1Н) , 3,94 (дд, J=9, 6, 3,6 Гц, 1Н) , 3,58 (с, ЗН), 1,36 (д, J=6,8 Гц, ЗН).
49	МС: 324, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,52 (д, J=4,5 Гц, 1Н) , 8,74 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 8,09 (с, 1Н) , 7,44 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 7,18-7,25 (м, 1Н) , 7,02 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 6,93 (т, J=7,4 Гц, 1Н) , 6,71 (д, J=7,9 Гц, 1Н) , 5,69 (д, J=14,8 Гц, 1Н) , 4,47 (дт, J=10,l, 4,1 Гц, 1Н), 4,01-4,13 (м, 2Н), 3,83-3,90 (м, 1Н), 3,54-3,61 (м, ЗН) , 3,38-3,46 (м, 1Н) .
50	МС: 328, 1 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,80 (д, J=7,82 Гц, 1Н) , 8,89 (т, J=6,00 Гц, 1Н) , 8,58 (д, J=7,62 Гц, 1Н) , 8,03-8, 08 (м, 1Н) , 7,12-7,18 (м, 1Н) , 6,99-7,05 (м,2Н), 6,39 (д, J=7,62 Гц, 1Н) , 5,13-5,21 (м, 1Н) , 4,46-4,53 (м, 1Н), 3,87-4,00 (м, 4Н).
51	МС: 342,3 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, хлороформ-d с CD₃OD) δ 8,14 (с, 1Н) , 7,81 - 7,72 (м, 1Н) , 7,10 (дд, J=9,0, 3,0 Гц, 1Н) , 6,88 (ддд, J=9,0, 7,6, 3,0 Гц, 1Н) , 6,80 (дд, J=9.2, 4,4 Гц, 1Н) , 6,20 (д, J=7,4 Гц, 1Н) , 5,75 (тд, J=7,2, 1,9 Гц, 1Н), 4,52-4,46 (м, 1Н), 4,09 (тдд, J=9,6, 6,4, 3,9 Гц, 2Н) , 3, 60-3,52 (м, 1Н) , 1,52 (д, J=7,0 Гц, ЗН) .

- 51 041662

51-1	МС: 342,2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,71 (уш.д, J=5,21 Гц, 1Н) , 8,77 (уш.д, J=6,86 Гц, 1Н) , 8,57 (д, J=7,41 Гц, 1Н) , 8,04 (с, 1Н) , 7,11-7,22 (м, 1Н) , 6, 96-7,04 (м, 2Н) , 6,36 (д, J=7,68 Гц, 1Н) , 5,63 (уш.дд, J=6, 86, 5,49 Гц, 1Н) , 4,50 (дт, J=10,15, 3,98 Гц, 1Н) , 4,01 (тд, J=9,61, 3,84 Гц, 1Н) , 3,87 (дт, J=10,09, 3,74 Гц, 1Н), 3,35-3,46 (м, 1Н), 1,45 (д, J=7,14 Гц, ЗН).
52	МС: 376, 5 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 9,92 (с, 1Н) , 8,29-8,18 (м, 2Н) , 7,01 (дд, J=9,2, 8,2 Гц, 1Н) , 6,77 (дд, J=9,2, 4,2 Гц, 1Н) , 6, 37- 6, 26 (м, 1Н) , 6,19 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 6,12 (с, 1Н) , 4,53-4,45 (м, 1Н) , 4,14 (д, J=6,3 Гц, 1Н) , 4, 04-3, 98 (м, 1Н) , 3,57 (с, 1Н) , 1,74 (д, J=7,3 Гц, ЗН).
55	МС: 385, 6 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (300 МГц, Meτaнoл-d₄) 8,35 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 8,24 (с, 1Н) , 7,24-6, 96 (м, 1Н) , 6,82 (м, 2Н) , 6,41 (дд, J=7,7, 4,8 Гц, 1Н) , 5,59 (м, 1Н) , 5,315,05 (м, 1Н), 4,39-4,21 (м, 1Н), 3,17-3,02 (м, 1Н), 1,58 (д, J=6,9 Гц, ЗН).
56	МС: 372,3 (М+Н)⁺; ²Н ЯМР (300 МГц, Meτaнoл-d₄) δ 8,35 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 8,18 (с, 1Н) , 7,05 (д, J=9,4 Гц, 1Н) , 6,82 (дд, J=6,5, 1,8 Гц, 1Н) , 6,39 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 5,60 (м, 1Н) , 4,92 (м, 2Н) , 4,08 (дд, J=13,l, 9,9 Гц, 1Н) , 3,91-3,81 (м, 2Н) , 3,73 (дд, J=12,6, 5,1 Гц, 1Н) , 1,58 (д, J=6,9 Гц, ЗН).
57	МС: 371,4 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (300 МГц, Meτaнoл-d₄) δ 8,46 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 8,41 (с, 1Н) , 7,00 (дд, J=9,l, 2,9 Гц, 1Н) , 6, 88-6, 78 (м, 2Н) , 6,58 (д, J=7,7 Гц, 1Н) , 5,20 (с, 1Н), 4,65 (с, 2Н), 3,49 (кв., J=7,3 Гц, 2Н),
58	МС: 358,5 (М+Н)⁺,)⁺, ²Н ЯМР (300 МГц, Хлороформ-d) δ 8,37 (с, 1Н) , 8,21 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 6,90 (д, J=7,5 Гц, ЗН) , 6,10 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 5,88 (с, 1Н) , 5,11-4,85 (м, ЗН) , 4,20 (дд, J=15,l, 5,7 Гц, 1Н), 4,05 (дд, J=14,0, 9,9 Гц, 1Н) , 3, 83-3, 68 (м, ЗН) , 3,44 (д, J=7,3 Гц, 1Н) .

- 52 041662

59	МС: 386, 1 (М+Н)⁺; И ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,97 (с, 1Н) , 8,57 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 8,40 (д, J=5,9 Гц, 1Н), 8,10 (с, 1Н) , 6,85 (дд, J=8,9, 4,8 Гц, 1Н) , 6,60 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 7,23 (дд, J=9,3, 3,2 Гц, 1Н) , 7,00 (тд, J=8,6, 3,2 Гц, 1Н) , 5,90 (д, J=6,4 Гц, 1Н) , 4,27-4,34 (м, 2Н) , 3,90 (т, J=9,33 Гц, 2Н) , 3,66 (с, ЗН) .
60	МС: 371,1 (М+Н)⁺; И ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) 9,98 (уш.с, 1Н) , 8,54 (д, J=7,6 Гц, 1Н) , 8,33 (д, J=6,24 Гц, 1Н) , 8,07 (с, 1Н) , 7,44 (уш.с, 1Н) , 7,28 (уш.с, 1Н) , 7,18 (дд, J=9, 6, 3,2 Гц, 1Н) , 6,94 (тд, J=8,5, 3,2 Гц, 1Н) , 6,83 (дд, J=8,9, 4,9 Гц, 1Н) , 6,66 (д, J=7,5 Гц, 1Н) , 5,86 (д, J=6,4 Гц, 1Н) , 4,22-4,36 (м, 2Н) , 3, 84-3,97 (м, 2Н) .
61	МС: 343,2 (М+Н)⁺, Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,22 (дд, J=6, 87, 2,86 Гц, 1Н) , 8,78 (д, J 7,45 Гц, 1Н) , 8,10 (с, 1Н), 8,06 (д, J=3,44 Гц, 1Н), 7,80 (дд, J=8,59, 2,86 Гц, 1Н) , 6,74 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,44 (дд, J=14,89, 1,72 Гц, 1Н) , 4,69 (ддд, J=10, 88, 8,59, 4,58 Гц, 1Н) , 4,32-4,39 (м, 1Н) , 4,21 (д, J=15,47 Гц, 1Н) , 3,80-3,88 (м, 1Н), 3,58 (с, ЗН), 3,41-3,49 (м, 1Н).
62	МС: 371,2 (М+Н)⁺, Щ ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,728,80 (м, 2Н) , 8,08 (с, 1Н) , 8,01 (д, J=2,74 Гц, 1Н) , 7,49 (дд, J=8,78, 2,74 Гц, 1Н), 7,00 (д, J=8,23 Гц, 1Н), 4,94-5, 06 (м, 2Н) , 4,57-4, 68 (м, 1Н) , 4,26-4,39 (м, 2Н) , 3, 66-3,77 (м, 1Н) , 3,49-3,55 (м, 1Н) , 1,56 (д, J=6,59 Гц, ЗН), 1,22 (д, J=6,60 Гц, ЗН).
66	МС: 368,2 (М+Н)⁺. И ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,56 (дд, J=6,87, 2,86 Гц, 1Н), 9,02 (д, J=6,87 Гц, 1Н), 8,58 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 8,03 (с, 1Н) , 7,18 (дд, J=9,74, 2,86 Гц, 1Н) , 6, 97-7, 08 (м, 2Н) , 6,41 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 4, 68-4, 80 (м, 1Н), 4,48 (дт, J=10,60, 4,15 Гц, 1Н) , 4,05 (ддд, J=10,45, 8,45, 4,01 Гц, 1Н) , 3,75-3, 84 (м, 1Н) , 3,36-3,43 (м, 1Н) , 1,26-1,38 (м, 1Н) , 0,63 (тт, J=8,74, 4,44 Гц, 1Н), 0,37-0,49 (м, 2Н), 0,28 (дкв., J=9,31,4,53 Гц, 1Н).

- 53 041662

67	МС: 370,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,75 (уш.д, J=6,30 Гц, 1Н) , 8,78 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,57 (д, J=8,02 Гц, 1Н) 8,04 (с, 1Н) , 7,06 (дт, J=9,16, 1,43 Гц, 1Н) , 6, 98-7,02 (м, 2Н) , 6,39 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5,13 (ддд, J=10, 02, 7,73, 1,72 Гц, 1Н) , 4,51 (дт, J=9,88, 3,65 Гц, 1Н) 3,94 (тд, J=9, 88, 3,72 Гц, 1Н) , 3,82-3,90 (м, 1Н) , 3,39-3,43 (м, 1Н) , 1,96-2,09 (м, 1Н) , 1,12 (д, J=6,30 Гц, ЗН) , 0,68 (д, J=6,30 Гц, ЗН) ,
75	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-^J6) δ ч/млн 8,73 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 8,25 (т, J=4,30 Гц, 1Н) , 8,10 (с, 1Н), 7,14-7,21 (м, 1Н), 7,00-7,04 (м, 2Н), 6,68 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,75 (уш.д, J=14,32 Гц, 1Н) , 4,33-4,43 (м, 1Н), 4,22 (уш.д, J=6,87 Гц, 1Н), 4,05 (уш.д, J=14,89 Гц, 1Н), 3,59-3,68 (м, 1Н), 3,59-3,68 (м, 1Н), 3,37-3,45 (м, 1Н), 1,98-2,17 (м, 2Н),
76-1	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,68 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,53 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,40 (с, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 7,11-7,18 (м, 1Н), 6,96-7,00 (м, 2Н), 6,32 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5, 65-5, 74 (м, 1Н) , 4,29-4,36 (м, 1Н), 4,20-4,26 (м, 1Н), 3,54-3,62 (м, 1Н), 3,39-3,47 (м, 1Н), 1,98-2,17 (м, 2Н), 1,41 (д, J=7,45 Гц, ЗН),
84	МС: 358,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,78 (д, J=6,79 Гц, 1Н) , 8,58 (д, J=7,62 Гц, 1Н) , 8,05 (с, 1Н), 7,36 (д, J=2,61 Гц, 1Н), 7,21 (дд, J=8,85, 2,68 Гц, 1Н) , 7,03 (д, J=8,85 Гц, 1Н) , 6,36 (д, J=7,68 Гц, 1Н) , 5,62 (кв., J=6,90 Гц, 1Н) , 4,52 (дт, J=10,15, 3,98 Гц, 1Н), 3,98-4,11 (м, 1Н), 3,80-3,92 (м, 1Н), 3,35-3,47 (м, 1Н), 1,45 (д, J=7,07 Гц, ЗН),

- 54 041662

85	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ^гН ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,73 (уш.д, J=5,49 Гц, 1Н) , 8,74 (д, J=7,14 Гц, 1Н) , 8,57 (д, J=7,68 Гц, 1Н) , 8,04 (с, 1Н) , 7,06-7,14 (м, 1Н) , 6, 977,03 (м, 2Н) , 6,37 (д, J=7,68 Гц, 1Н) , 5, 33-5, 45 (м, 1Н) , 4,51 (дт, J=10,15, 3,43 Гц, 1Н) , 3,98 (тд, J=9,88, 3,84 Гц, 1Н), 3,82-3,93 (м, 1Н), 3,39 (тд, J=9,61, 2,74 Гц, 1Н) , 1,85-1,99 (м, 1Н) , 1, 62-1,76 (м, 1Н) , 0,87 (т,J=7,14 Гц, ЗН),
86	МС: 382,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,74 (дд, J=7,16, 2,00 Гц, 1Н) , 8,64 (д, J=6,87 Гц, 1Н) , 8,57 (д, J=7,45 Гц, 1Н) 8,05 (с, 1Н) , 6, 95-7,06 (м, ЗН) , 6,38 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,47 (ддд, J=10,60, 7,16, 1,15 Гц, 1Н) , 4,54 (дт, J=10,17, 3,79 Гц, 1Н) , 4,01 (тд, J=9,59, 3,72 Гц, 1Н), 3,80-3,90 (м, 1Н), 3,39-3,48 (м, 1Н), 2, 66-2,77 (м, 1Н) , 2,12-2,23 (м, 1Н) , 1,83 (уш.д, J=2,29 Гц, ЗН), 1,55-1,73 (м, 2Н),
87	МС: 346, 2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,40 (с, 1Н) , 8,77 (д, J=8,23 Гц, 1Н) , 8,10 (с, 1Н) , 7, ΙΟΙ,26 (м, 1Н) , 7,01-7,08 (м, 2Н) , 6,72 (д, J=8,23 Гц, 1Н) , 5,64 (дд, J=15, 09, 1,37 Гц, 1Н) , 4,08 (д, J=14,82 Гц, 1Н), 3,58 (с, ЗН),
88	МС: 404,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,70 (дд, J=6,87, 2,86 Гц, 1Н), 9,26 (д, J=7,45 Гц, 1Н), 8,66 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,09 (с, 1Н) , 7,35-7,45 (м, 4Н) , 7,28-7,34 (м, 1Н), 7,15 (дд, J=9,16, 3,44 Гц, 1Н), 7,097,13 (м, 1Н) , 7, 04-7,09 (м, 1Н) , 6,92 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) , 6,52 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 4,56 (дт, J=10,31, 4,01 Гц, 1Н) , 4,08-4,14 (м, 1Н) , 3,87 (ддт, J=13,75, 7,59, 3,94, 3,94 Гц, 1Н), 3,44-3,49 (м, 1Н),

- 55 041662

89	МС: 382,2 (М+Н)⁺. ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,76 (дд, J=7,45, 2,29 Гц, 1Н) , 8,77 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,58 (д, J=8,02 Гц, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 7,09 (дт, J=9,74, 1,72 Гц, 1Н) , 7,00 (дд, J=6, 30, 1,72 Гц, 2Н) , 6,38 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5, 56-5, 63 (м, 1Н) , 4,51 (дт, J=10,17, 3,79 Гц, 1Н) , 3,99 (тд, J=9,59, 3,72 Гц, 1Н) , 3,86 (ддт, J=13,75, 7,45, 3,72, 3,72 Гц, 1Н) , 3,38-3,43 (м, 1Н) , 1,94 (ддд, J=13,89, 7,88, 6,30 Гц, 1Н) 1,44 (дт, J=14,03, 7,30 Гц, 1Н) , 0, 63-0,73 (м, 1Н) , 0,37-0,45 (м, 1Н) , 0,27-0,34 (м, 1Н), 0,18 (дкв., J=9,24, 4,75
	Гц, 1Н) , -0,12-0,04 (м, 1Н) ,
90	МС: 372,2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,68 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 8,52 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,36 (т, J=4,01 Гц, 1Н) , 8,04 (с, 1Н) , 7,16 (дд, J=9,45, 3,15 Гц, 1Н) , 7,06 (дд, J=9,17, 4,58 Гц, 1Н) , 6, 95-7,02 (м, 1Н) , 6,30 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5, 66-5, 75 (м, 1Н) , 5,45 (д, J=4,58 Гц, 1Н) , 4,12-4,25 (м, 2Н) , 4,05 (д, J=9,16 Гц, 1Н) , 3, 60-3, 67 (м, 1Н) , 3,28-3,31 (м, 1Н) , 1,42 (д,J=6,87 Гц, ЗН),
91	МС: 372,2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,70 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) , 8,53 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,47 (дд, J=8,31, 2,00 Гц, 1Н) , 8,03 (с, 1Н) , 7,07-7,13 (м, 1Н) , 6, 97-7,03 (м, 2Н) , 6,34 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5,60 (кв., J=7,02, 7,02, 7,02, 7,02, 1,72 Гц, 1Н) , 5,36 (д, J=4,01 Гц, 1Н) , 4,42 (уш.д, J=10,88 Гц, 1Н) , 4,01-4,14 (м, 2Н) , 3, 88-3, 97 (м, 1Н) , 3,10-3,17 (м, 1Н) , 1,41 (д, J=7,45 Гц, ЗН),

- 56 041662

92	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,41 (дд, J=6,01, 3,72 Гц, 1Н), 8,71 (д, J=7,45 Гц, 1Н), 8,58 (д, J=7,45 Гц, 1Н), 8,06 (с, 1Н), 7,14 (дд, J=9,74, 3,44 Гц, 1Н) , 7,07 (дд, J=9,17, 4,58 Гц, 1Н) , 6,96 (ддд, J=9, 17, 8,02, 3,44 Гц, 1Н) , 6,35 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5,63-5,74 (м, 1Н), 4,77-4,89 (м, 1Н), 3,73-3,85 (м, 1Н), 3,52-3,58 (м, 1Н) , 1,43 (д, J=6, 87 Гц, ЗН) , 1,19 (уш.д, J=6,30 Гц, ЗН),
93	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,82 (дд, J=8,02, 2,29 Гц, 1Н), 8,81 (д, J=6,87 Гц, 1Н), 8,58 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,04 (с, 1Н) , 7,12 (дд, J=9,45, 3,15 Гц, 1Н) , 6, 99-7,05 (м, 1Н) , 6, 94-6, 99 (м, 1Н) , 6,36 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5,53 (кв., J=6, 87, 6, 87, 6, 87, 6, 87, 1,15 Гц, 1Н) , 4,45-4,52 (м, 1Н) , 3,90 (ддд, J=13,46, 8,31, 4,01 Гц, 1Н) , 3,10-3,17 (м, 1Н) , 1,46 (д, J=6,30 Гц, ЗН), 1,44 (д, J=7,45 Гц, ЗН),
94	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,49 (дд, J=7,45, 2,86 Гц, 1Н), 8,77 (д, J=7,45 Гц, 1Н), 8,09 (с, 1Н) , 7,15 (дд, J=9,45, 3,15 Гц, 1Н) , 7, 04-7,09 (м, 1Н) , 6, 97-7,03 (м, 1Н) , 6,73 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,54 (дд, J=14,89, 1,72 Гц, 1Н) , 4,55 (ддд, J=7,59, 5, 87, 4,30 Гц, 1Н) , 4,08 (д, J=14,89 Гц, 1Н) , 3, 85-3, 92 (м, 1Н) , 3,59 (с, ЗН) , 3,16 (ддд, J=13, 60, 7, 88, 3, 15 Гц, 1Н), 1,45 (д, J=6,30 Гц, ЗН),
95	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ²Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-dg) δ ч/млн 9,71 (д, J=8,59 Гц, 1Н) 8,76 (д, J=8,02 Гц, 1Н) 8,09 (с, 1Н) 7,25 (дд, J=9,45, 3,15 Гц, 1Н) 7,02-7,09 (м, 1Н) 6,957,00 (м, 1Н) 6,71 (д, J=8,02 Гц, 1Н) 5,68 (дд, J=14,89, 1,15 Гц, 1Н) 4,34 (дд, J=9, 45, 1,43 Гц, 1Н) 4,24-4,30 (м, 1Н) 4,10 (д, J=14,89 Гц, 1Н) 3,94 (дд, J=9,74, 4,01 Гц, 1Н) 3,58 (с, ЗН) 1,36 (д, J=6,87 Гц, ЗН),

- 57 041662

96	МС: 372,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,64 (д, J=8,23 Гц, 1Н) 8,27 (уш.с, 1Н) 8,08 (с, 1Н) 7,15 (уш.д, J=6,59 Гц, 1Н) 7,04-7,10 (м, 1Н) 6,96-7,02 (м, 1Н) 6,66 (д, J=8,23 Гц, 1Н) 5,11 (уш.с, 1Н) 4,28 (уш.с, 2Н) 4,15 (уш.с, 1Н) 4,06 (уш.с, 1Н) 3,90 (уш.с, 2Н) 3,57 (с, ЗН) 3,29 (уш.с, 1Н),
97	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,49 (дд, J=7,45, 2,86 Гц, 1Н), 8,77 (д, J=8,02 Гц, 1Н), 8,09 (с, 1Н) , 7,15 (дд, J=9, 74, 2,86 Гц, 1Н) , 7,04-7,10 (м, 1Н) , 6, 97-7,03 (м, 1Н) , 6,73 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,54 (дд, J=14,89, 1,72 Гц, 1Н) , 4,50-4, 60 (м, 1Н) , 4,08 (д, J=15,47 Гц, 1Н) , 3, 84-3, 92 (м, 1Н) , 3,59 (с, ЗН) , 3,16 (ддд, J=13,46, 7,73, 2,86 Гц, 1Н) , 1,45 (д, J=6,30 Гц, ЗН) ,
98	МС: 358,2 (М+Н)⁺. ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,76 (дд, J=7,45, 2,29 Гц, 1Н) , 8,82 (д, J=6,87 Гц, 1Н) , 8,58 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,05 (с, 1Н) , 7,06-7,15 (м, 1Н) , 6, 99-7, 04 (м, 2Н) , 6,45 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,57-5,66 (м, 1Н) , 5,16-5,25 (м, 1Н) , 4,52 (дт, J=10,17, 3,79 Гц, 1Н), 3,99 (тд, J=9,74,
	4,01 Гц, 1Н) , 3,87 (ддт, J=13, 82, 7,52, 3, 94, 3, 94 Гц, 1Н) , 3,71 (ддд, J=ll,17, 8,31, 6,30 Гц, 1Н) , 3,59 (дт, J=ll,17, 5,01 Гц, 1Н), 3,36-3,45 (м, 1Н),
99	МС: 372,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,72 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 8,53 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 8,40 (т, J=4,01 Гц, 1Н), 8,04 (с, 1Н), 7,09 (дд, J=9,16, 2,86 Гц, 1Н) , 6, 95-7, 05 (м, 2Н) , 6,42 (д, J=7,45 Гц, 1Н) , 5,635,72 (м, 1Н) , 5,16 (т, J=5,44 Гц, 1Н) , 4,29-4,37 (м, 1Н) , 4,19-4,27 (м, 1Н) , 3,65 (ддд, J=11, 17 , 8,31,6,30 Гц, 1Н), 3,53-3,61 (м, 2Н), 3,41-3,48 (м, 1Н), 2,00-2,18 (м, 2Н) ,

- 58 041662

100	МС: 356, 2 (М+Н)⁺, F ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,46 (дд, J=7,16, 2,58 Гц, 1Н) , 8,77 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 8,11 (с, 1Н) , 7,22 (дд, J=9, 74, 2,29 Гц, 1Н) , 7,01-7,06 (м, 2Н) , 6,74 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 6, 20-6, 30 (м, 1Н) , 4,50 (дт, J=10,31, 4,01 Гц, 1Н) , 4,05 (ддд, J=10,31, 9,16, 4,01 Гц, 1Н) , 3,85 (ддт, J=13, 68, 7,52, 3,72, 3,72 Гц, 1Н), 3,38-3,49 (м, 4Н), 1,53 (д, J=7,45 Гц, ЗН),
101	МС: 400,2 (М+Н)⁺, F ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,58 (дд, J=7,45, 2,86 Гц, 1Н) , 8,50 (с, 1Н) , 8,01 (с, 1Н) , 7,36 (дд, J=9,16, 2,86 Гц, 1Н) , 7,00-7,14 (м, 2Н) , 5,61 (дд, J=14,61, 1,43 Гц, 1Н) , 4,44-4,52 (м, 1Н) , 4,14 (д, J=12,60 Гц, 1Н) , 4, 00-4, 09 (м, 2Н) , 3,81-3,92 (м, 2Н) , 3,39-3,47 (м, 1Н), 1,40 (с, ЗН), 1,38 (с, ЗН),
102	МС: 327,2 (М+Н)⁺, F ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,589,70 (м, 1Н) , 9,09 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) , 8,42 (с, 1Н) , 7,22 (дд, J=9,74, 2,86 Гц, 1Н), 7,11 (д, J=7,45 Гц, 1Н), 6, 84-6, 97 (м, 2Н) , 4,37-4,50 (м, 1Н) , 3, 90-4,06 (м, ЗН) , 3,42-3,64 (м, ЗН), 2,54-2,62 (м, 1Н),
103	МС: 341,2 (М+Н)⁺, F ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 9,04 (д, J=6,87 Гц, 1Н) , 8,56 (т, J=4,01 Гц, 1Н) , 8,40 (с, 1Н) , 7,19 (дд, J=9, 74, 2,86 Гц, 1Н) , 7,06 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) , 6,81-6,96 (м, 2Н) , 4,19-4,29 (м, 2Н) , 3,53-3, 63 (м, 4Н), 3,24-3,31 (м, 2Н), 2,09-2,21 (м, 2Н),
104	МС: 358,2 (М+Н)⁺, F ЯМР (500 МГц, flMCO-d₆) δ ч/млн 8,79 (д, J=8,02 Гц, 1Н), 8,70 (дд, J=7,45, 2,86 Гц, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 7,59 (дд, J=8,59, 5,73 Гц, 1Н), 7,10 (тд, J=8,59, 2,86 Гц, 1Н) , 7,04 (дд, J=10, 02, 2,58 Гц, 1Н) , 6,78 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,79 (дд, J=15, 75, 1,43 Гц, 1Н) , 4,17 (д, J=16,04 Гц, 1Н) , 3,73-3, 82 (м, 1Н) , 3,59 (с, ЗН), 3,52-3,58 (м, 1Н), 3,26-3,30 (м, 1Н), 3,18-3,23 (м, 1Н),
105	МС: 411,2 (М+Н)⁺,

- 59 041662

106	МС: 374,2 (М+Н)⁺, ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д₆) δ ч/млн 8,84 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 8,09-8,19 (м, 2Н) , 8,07 (с, 1Н) , 7,35 (тд, J=8,45, 2,58 Гц, 1Н) , 7,22 (дд, J=10,31, 2,29 Гц, 1Н) , 6,86 (д, J=8,02 Гц, 1Н) , 5,75 (д, J=16,61 Гц, 1Н) , 4,57 (д, J=16,61 Гц, 1Н) , 4,11-4,15 (м, 1Н) , 3,793,87 (м, 2Н) , 3,59 (с, ЗН), 3,48-3,57 (м, 1Н),
107	МС: 390,2 (М+Н)⁺, Щ ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д₆) δ ч/млн 8,83 (д, J=8,02 Гц, 1Н), 8,12 (дд, J=9,16, 5,73 Гц, 1Н), 8,07 (с, 1Н) , 7,82 (уш.т, J=5,16 Гц, 1Н) , 7,39 (тд, J=8,59, 2,86 Гц, 1Н) , 7,14-7,21 (м, 1Н) , 6,84 (д, J=7,45 Гц, 1Н), 5,37-5,54 (м, 1Н), 4,61-4,76 (м, 1Н), 3,83-3,93 (м, 1Н) , 3,57-3, 63 (м, 5Н) , 3,46-3,54 (м, 1Н) ,
108	МС: 371,2 (М+Н)⁺, Щ ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д₆) δ ч/млн 9,73 (уш.д, J=6, 87 Гц, 1Н) 9,09 (д, J=8,00 Гц, 1Н) 8,41 (с, 1Н) 7,20 (дд, J=9, 74, 2,86 Гц, 1Н) 7,11 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) 6,94 (дд, J=9,16, 4,58 Гц, 1Н) 6, 78-6, 88 (м, 1Н) 4,44 (ддд, J=8,88, 5,44, 4,01 Гц, 1Н) 3,99-4,06 (м, 1Н) 3, 88-3, 97 (м, 1Н) 3, 67-3,73 (м, 1Н) 3,47-3,53 (м, 1Н) 3,12-3,21 (м, 1Н) 2,54-2, 62 (м, 1Н) 1,43 (д,Я=6,30 Гц, ЗН) ,
109	МС: 371,2 (М+Н)⁺, Щ ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д₆) δ ч/млн 9,43 (д, J=2,29 Гц, 1Н) 8,73 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) 8,57 (д, J=7,50 Гц, 1Н) 8,01 (с, 1Н) 7,16 (дд, J=9,17, 2,86 Гц, 1Н) 7,00-7,11 (м, 2Н) 6,34 (д, J=7,45 Гц, 1Н) 5,61-5,73 (м, 1Н) 4,37 (дд, J=10,31, 4,01 Гц, 1Н) 4,00 (ддт, J=8,45, 4,30, 2,22, 2,22 Гц, 1Н) 3,88-3,96 (м, 1Н) 1,48 (д, J=6,87 Гц, ЗН) 1,42 (д, J=7,45 Гц, ЗН),
110	МС: 371,2 (М+Н)⁺, ^гН ЯМР (500 МГц, ДМСО-Д₆) δ ч/млн 9,95 (д, J=8,59 Гц, 1Н) 8,79 (д, J=6, 87 Гц, 1Н) 8,58 (д, J=7,45 Гц, 1Н) 8,04 (с, 1Н) 7,16 (дд, J=9,45, 3,15 Гц, 1Н) 6, 98-7,05 (м, 1Н) 6, 92-6, 97 (м, 1Н) 6,34 (д, J=8,02 Гц, 1Н) 5,67 (кв., J=7, 02, 7,02, 7,02, 7,02, 1,72 Гц, 1Н) 4,35 (дд, J=9, 45, 1,43 Гц, 1Н) 4,20-4,30 (м, 1Н) 3,93 (дд, J=9,74, 4,01 Гц, 1Н) 1,47 (д, J=7,45 Гц, ЗН) 1,37 (д, J=6,87 Гц, ЗН)
111	МС: 371,2 (М+Н)⁺.
112	МС: 345,2 (М+Н)⁺.

Биологический пример 1. Биохимические анализы киназ.

MET/ALK/AXL/TRK ферментное ингибирование может быть измерено при помощи Omnia (Invitrogen Inc.) непрерывного флуорометрического анализа. Реакции проводят в 50 мкл объемах в планшетах на 96 лунок при 30°С. Смеси содержат 1 нМ человеческий рекомбинантный киназный доменмишень, 2 мкМ фосфоакцепторный пептид, тестовое соединение (11-доза, 3-кратные серийные разведения, 2% ДМСО конечное) или ДМСО только, 0,2 мМ DTT и 10 мМ MgCl₂ в 20 мМ Hepes, pH 7,5, и реакции инициируют путем добавления АТР (100 мкМ конечная концентрация) с последующим 20 мин преинкубированием. Начальные скорости образования фосфопептидов измеряют в течение 20 мин при помощи Tecan Safire микропланшетного ридера с установками длин волн 360 нм для возбуждения и 485 нм для эмиссии. Значения Ki рассчитывают путем подгонки данных к уравнению конкурентного ингибирования при помощи нелинейного способа регрессии (GraphPad Prism, GraphPad Software, San Diego, CA).

Биологический пример 2. Клеточные анализы ELISA киназного фосфорилирования.

Эксперименты выполняют на основании процедур, описанных в публикации (Christensen, J. et al., Cytoreductive antitumor activity of PF-2341066, a novel inhibitor of anaplastic lymphoma kinase and c-Met, in experimental models of anaplastic large-cell lymphoma, Mol. Cancer Ther. 2007, 6(12):3314-3322.) Bce эксперименты выполняют при стандартных условиях (37°С и 5% CO₂). IC₅₀ значения вычисляются по кривой концентрация/ответ фитинга с использованием Microsoft Excel на основе метода четырех параметров. Клетки высевали в 96-луночные планшеты в среде, дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS) и переносили в бессывороточную среду [с 0,04% бычьего сывороточного альбумина (BSA)], через 24 ч. В экспериментах, расследующих лигандзависимое фосфорилирование RTK, соответствующие фак

- 60 041662 торы роста добавляют до 20 мин. После инкубации клеток с ингибитором в течение 1 ч и/или подходящих лигандов в назначенное время клетки промывали один раз с помощью HBSS с добавлением 1 ммоль/л Na₃VO4 и белковые лизаты получали из клеток. Впоследствии фосфорилирование выбранных протеинкиназ оценивают с помощью сэндвич-метода ИФА с использованием специфических антител захвата для нанесения покрытий на 96-луночные планшеты и детектирующего антитела, специфического для фосфорилированных остатков тирозина. Пластины, покрытые антителами (а), инкубируют в присутствии белковых лизатов при 4°С всю ночь, (b) промывают семь раз в 1% Tween 20 в PBS, (с) инкубируют в конъюгированном с пероксидазой хрена анти общим антифосфотирозиновым (PY-20) антителом (1:500) в течение 30 мин, (d) семь раз снова промывают, (е) инкубируют в 3,3,5,5тетраметилбензидиновом пероксидазном субстрате (Bio-rad), чтобы инициировать колориметрическую реакцию, которую останавливают добавлением 0,09н. H₂SO₄, и (f) измеряют поглощение при 450 нм с использованием спектрофотометра. Клеточные линии, которые используются для отдельных киназ, включают А549 для MET, Karpas 299 для ALK, 293-AXL для AXL, PAET RKA для TRKA и PAE-TRKB для TRKB.

Биологический пример 3. Анализы связывания киназ.

Анализы связывания киназ проводили на DiscoveRx с использованием общего KINOMEscan K_dProtocol (Fabian, M.A. et al., A small molecule-kinase interaction map for clinical kinase inhibitors, Nat. Biotechnol. 2005, 23(3):329-36). Для большинства анализов киназа-меченые штаммы фагов Т7 были приготовлены в Е. coli хозяина, полученного из штамма BL21.

E.coli были выращены в лог-фазе и инфицированы Т7 фагом и их инкубировали при встряхивании при 32°С до лизиса. Лизаты центрифугировали и фильтровали для удаления остатков клеток. Остальные киназы были генерированы в клетках HEK-293, а затем помечены ДНК для обнаружения кПЦР. Стрептавидин-покрытые магнитные гранулы обрабатывают биотинилированными небольшими молекулами лигандов в течение 30 мин при комнатной температуре, чтобы генерировать смолы сродства для анализов киназ. Эти лигандированные шарики были блокированы с избытком биотина, и их промывали блокирующим буфером (SeaBlock (Pierce), 1% бычьего сывороточного альбумина, 0,05% Tween 20, 1 мМ DTT) для удаления несвязанного лиганда и для уменьшения неспецифического связывания. Реакции связывания были собраны путем комбинирования киназ, лигандированных шариков и тестовых соединений в 1 х буфере для связывания (20% SeaBlock, 0,17х PBS, 0,05% Tween 20, 6 мМ DTT). Все реакции проводили в полистирольных 96-луночных планшетах в конечном объеме 0,135 мл. Аналитические планшеты инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 часа и шарики аффинности промывали промывочным буфером (1 х PBS, 0,05% Tween 20). Затем шарики вновь суспендировали в буфере для элюирования (1х PBS, 0,05% Tween 20, 0,5 мкМ небиотинилированный аффинный лиганд) и инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 30 мин. Концентрацию киназы в элюатах измеряли с помощью кПЦР. Результаты для соединений, протестированных в данном анализе, представлены в табл. 2. В этом способе пример 20 также имел сродство к связыванию с PLK4 киназой (K_d 2,9 нМ).

Таблица 2

Пр.	TRKA K_d (нМ)	TRKB K_d (нМ)	TRKC K_d (нМ)	JAK1 А_а(нМ)	JAK2 K_d (нМ)	JAK3 K_d (нМ)	ALK K_d (нМ)	ROS1 K_d (нМ)
11-1	1900						>30000	1900
20	0.031	0.18	0.30	>1000	4.8	120	80	21
39	0.23				27		180	4.7
40							600	410
41	6.00			280	2.6	33	200
42	0.088
43	0.086				3.7
45	0.082				7.8
49	0.14				24
50	0.20				0.57
51	0.065			65	0.15	4.3
51-1	0.051			37	0.048	1.8	6.8	0.73
52	6.5						270	62
75	0.015				6.5
92					0.12		8.2
93					0.082		5.7
98					0.74		14
103					1.9		28

- 61 041662

Биологический пример 4. Ba/F3 анализ клеточной пролиферации.

TRKA Ba/F3 анализы клеточной пролиферации проводили с помощью ACD (Advanced Cellular Dynamics). Линии Ba/F3 клеток поддерживали в RPMI-1640 культуральной среде, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки и антибиотики. Клетки в логарифмической фазе роста собирали и 5000 клеток были распределены в каждую лунку 384-луночного планшета в 50 мкл ростовой среды. 50 нл разведенного соединения добавляли в соответствующие лунки в двух экземплярах и клетки культивировали в течение 48 ч при 37°С в увлажненном инкубаторе с 5% СО2. Жизнеспособность определяли добавлением 15 мкл CellTiter-Glo и измеряли люминесценцию, которую сообщали в виде относительных световых единиц (RLU), измеренных в единицах в секунду. Данные (RLU) для каждого соединения были нормализованы к средней максимальной ответной реакции, полученной в присутствии основы (ДМСО) в одиночку. Эти данные были использованы для получения процента ингибирования (100% максимального ответа) и среднее значение двух точек данных/концентрация было использовано для расчета значений IC₅₀ (концентрация, вызывающая половину максимального ингибирования выживания клеток) с помощью нелинейного регрессионного анализа с помощью программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA). С помощью этого способа пример 20 ингибировал пролиферацию клеток TRKA Ba/F3 при IC₅₀ 3,0 нМ. Данные для соединений, протестированных в данном анализе, представлены в табл. 3.

Биологический пример 5. Создание стабильной клеточной линии ЕМЛ4-ALK Ba/F3 и анализ клеточной пролиферации.

Ген дикого типа ЕМЛ4-ALK (вариант 1) был синтезирован в GenScript и клонирован в PCDH-CMV-MCS-EFL-Puro плазмиды (System Biosciences, Inc). Ba/F3-ЕМЛ4-ALK линия клеток дикого типа была создана путем инфицирования Ba/F3 клеткок лентивирусом, содержащим ЕМЛ4-ALK дикого типа. Стабильные клеточные линии были выбраны путем пуромициновой обработки, с последующим IL-3 извлечением. 5000 клеток высевали в 384-луночный белый планшет в течение ночи перед обработкой соединением. Пролиферацию клеток измеряли с использованием анализа CellTiter-Glo люциферазы на основе обнаружения АТФ (Promega) в соответствии с протоколом изготовителя через 48 ч различной концентрации соединения инкубации. IC₅₀ определения были выполнены с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA). Данные для соединения, протестированного в данном анализе, представлены в табл. 3.

Биологический пример 6. Анализы клеточной пролиферации.

Колоректальные клеточные линии KM 12 (содержащие эндогенный ТРМ3-TrkA слитый ген) клетки культивировали в среде DMEM, с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки и 100 ед/мл пенициллин/стрептомицина. 5000 клеток засевали в 384-луночный белый планшет в течение 24 ч перед обработкой соединением. Пролиферацию клеток измеряли с помощью анализа CellTiter-Glo люциферазы на основе обнаружения АТФ (Promega) в соответствии с протоколом производителей через 72 ч инкубации. IC50 определения были выполнены с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA).

В качестве альтернативы: колоректальную линию клеток KM12 (содержащую эндогенный TPM3-TRKA слитый ген) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки и 100 ед/мл пенициллина/стрептомицина. Эссенциальные клетки клеточной линии тромбоцитемии SET-2 (содержащие эндогенный JAK2 V618F слитый ген) или клеточную линию Т-клеточной лимфомы Karpas-299 (содержащую эндогенный слитый ген NPM-ALK) культивировали в RPMI среде, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и 100 ед/мл пенициллина/стрептомицина. 5000 клеток засевали в 384-луночный белый планшет в течение 24 ч перед обработкой соединением. Пролиферацию клеток измеряли с помощью анализа CellTiter-Glo люциферазы на основе обнаружения АТФ (Promega) в соответствии с протоколом производителя через 72 ч инкубации. IC50 определения были выполнены с использованием программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA).

Данные для соединений, протестированных в этих анализах, представлены в табл. 3.

Таблица 3

Пр.	KM 12 клет. пролиф. IC₅₀(нМ)	SET2 клет. пролиф. 1С₅₀(нМ)	Karpas 299 клет. пролиф. 1С₅₀(нМ)	ЕМЛ4-АПК Ва/ЕЗ клет. пролиф. 1С₅₀(нМ)
11-1	>10000	>10000	>10000
20	0,86	2000	1000
39	3, 8	8800	3800
40	204	>10000	>10000
41	118	1500	3900

- 62 041662

42	4,0	2000	3400
43	2, 6	1700	2800
44	9, 9	2030	4100
45	0,35	8000	>10000
46	1,5	7000	7100
47	31	>10000	>10000
48	62	6000	6000
49	6, 7	7000	3900
50	74	6000	4100
51	3,2	425	832
51-1	1,3	234	289	248
52	52	3600	7800
59	>1000
60	>1000
61	0, 6	3747	3900
62	0, 9		4000
66	17,5	1543	1900
67	2,8	1231	1200
75	0, 6	4436	3900
76-1	5, 8	1003	3800
84	0, 8	3146	4200
85	0, 9	928	1080
86		1998	1000
87	0,3	2734	1591
88	50,4	1900	3129
89	0,2	859	1398
90	1, 8	5911	1653
91	1,8	1536	961
92	0,3	142	88,7	78, 6
93	0,5	242	23,7	21,1
94	0,2	>10000	>10000
95	0,4	2673	4107
96	0, 6	6000	5000
97	0,3	6500	1419
98	7,4	808	281
99	6, 3	6848	506
100	0, 6	5834	5364
101	>1000	6000	>10000
102	1,2	2450	2304
103	15	>10000	1956
104	0,3	2353	5747
105	500	>10000	>5000
106	176	>10000	>10000
107	75, 6	3000	>10000
108	3, 6	870	619
109	0,86	398	225
110	0,7	219	163
111	76	1996	329

Биологический пример 7. Клеточный механизм исследований действия-TRKA и анализы фосфорилирования нижних сигнальных мишеней.

Колоректальные клеточные линии KM 12 (содержащие эндогенный ТРМ3-TrkA слитый ген) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки и 100 ед/мл пенициллина/стрептомицина. 1 млн клеток высевали в 6-луночные планшеты в течение 24 ч перед обработкой

-

Claims

соединением. Клетки промывали с 1х PBS и собирали через 5 ч обработки и подвергали лизису в буфере RIPA (50 мМ Трис, рН 7,4, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 0,5% дезоксихолата, 0,1% SDS), дополненном 10 мМ EDTA, Halt протеазными и фосфатазными ингибиторами (Thermo Scientific). Белковые лизаты (20 мкм) были разрешены на 4-12% Bolt Bis-Tris предварительно отвержденные гели в MES-проточном буфере (Life Technologies), перенесены на нитроцеллюлозные мембраны с использованием трансферной системы Trans-Blot Turbo (Bio-rad) и детектированы антителами, фосфорилированными TRK A (Cell Signaling Technology, Y496, Y680, Y681, клон C50F3; разведение 1:1000), общая TRK A (Santa Cruz Biotechnology, SC-11, клон С-14, 1:2000 разведение), фосфорилированная AKT (Cell signaling, S473, D9E, # 9271; 1:5000 разведение), общая AKT (Cell Signaling Technology, 40D4; 1: 2000 разведение), фосфорилированнаяя ERK (Cell Signaling Technology, Thr 202/204, D13.14.4E, # 4370; 1: 2000 разведение), общая ERK (Cell Signaling Technology; разведение 1:1000) и тубулином (Sigma, T4026, разведение 1:5000). Антитела, как правило, инкубируют всю ночь при температуре 4°С при осторожном встряхивании, с последующей промывкой и инкубацией с соответствующими HRP-конъюгированными вторичными антителами. Мембраны подвергали воздействию хемилюминесцентного субстрата в течение 5 мин при комнатной температуре (SuperSignal West Femto, Thermo Scientific). Изображения были получены с помощью системы CDigit Imaging System (LI-COR Biosciences). Относительная плотность полос была получена непосредственно с помощью Image Studio Digits от Licor. Значения концентрации половины ингибирования (IC₅₀) были рассчитаны с использованием нелинейного анализа регрессии с помощью программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad, Inc., San Diego, CA). С помощью этого метода пример 20 ингибировал автофосфорилирование TPM3-TRKA с IC₅₀ 1,07 нМ и фосфорилирование его нижних сигнальных мишеней AKT и ERK с IC₅₀ 2,80 и 2,00 нМ соответственно в клетках KM12.

Биологический пример 8. Анализы каспазной активности.

KM12 клетки поддерживали в DMEM среде, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой и антибиотиками. 500000 клеток высевали в 12-луночный планшет и различные концентрации соединения были введены в течение 72 ч. Для обработки стауроспорином 500 нМ STS были добавлены во время 60 ч инкубации и 12 ч в качестве положительного контроля. Были собраны все клетки и промыты 1х PBS дважды и затем лизированы в буфере для лизиса (20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 10 мМ KCl, 5 мМ EDTA, 1% NP40), дополненном Halt протеазными и фосфатазными ингибиторами (Thermo Scientific). Для каспазных анализов приблизительно 20 мкл (20 мкг) лизата клеток инкубировали с 20 мкл caspase3 Glo реагента (Promega), измеряли ферментативную активность по высвобождению люминесценции после 20 мин инкубации при 37°С. Для вестерн-блоттинга клеточные лизаты кипятили и анализировали с помощью SDS-PAGE/иммуноблоттинга с помощью PARP или актиновых антител. С помощью этого способа пример 20 индуцировал апоптоз KM12 клеток.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ ингибирования в клетке протеин- или тирозинкиназы, выбранной из MET, ALK, ROS1, AXL, TRK и/или JAK, включающий приведение в контакт клетки с эффективным количеством соединения формулы

или его фармацевтически приемлемой соли, где приведение в контакт происходит in vitro, ex vivo или in vivo.
2. Способ по п.1, где протеин- или тирозинкиназа представляет собой киназу МЕТ.
3. Способ по п.1, где протеин- или тирозинкиназа представляет собой киназу ALK.
4. Способ по п.1, где протеин- или тирозинкиназа представляет собой киназу ROS1.
5. Способ по п.1, где протеин- или тирозинкиназа представляет собой киназу AXL.
6. Способ по п.1, где протеин- или тирозинкиназа представляет собой киназу TRK.
7. Способ по п.1, где протеин- или тирозинкиназа представляет собой киназу JAK.
8. Способ по п.1, где клетка представляет собой клетку рака.
9. Способ по п.8, где рак выбирают из группы, состоящей из рака легких, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, гепатоцеллюлярной карциномы, почечно-клеточного рака, рака желудка и пищеводно-желудочного рака, глиобластомы, рака головы и шеи и анапластической немелкоклеточной лимфомы.
10. Способ по п.9, где рак представляет собой немелкоклеточный рак легких.

-