EA041637B1 - ISOTRETINOIN CONJUGATE WITH PEPTIDE - Google Patents

ISOTRETINOIN CONJUGATE WITH PEPTIDE Download PDF

Info

Publication number
EA041637B1
EA041637B1 EA201992544 EA041637B1 EA 041637 B1 EA041637 B1 EA 041637B1 EA 201992544 EA201992544 EA 201992544 EA 041637 B1 EA041637 B1 EA 041637B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
present
compound
peptide
amino acids
Prior art date
Application number
EA201992544
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Йонг Джи Чунг
Эюн Ми Ким
Original Assignee
Кареджен Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кареджен Ко., Лтд. filed Critical Кареджен Ко., Лтд.
Publication of EA041637B1 publication Critical patent/EA041637B1/en

Links

Description

Область техникиTechnical field

Настоящее изобретение относится к соединению, имеющему структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, и к его применению.The present invention relates to a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond and to its use.

Уровень техникиState of the art

Изотретиноин (13-цис-ретиноевая кислота), который представляет собой пероральное лекарственное средство, главным образом, используемое для лечения акне, известен как одно из наиболее эффективных лекарственных средств против акне, особенно очень тяжелого узелково-кистозного акне, поскольку он подавляет все из салоотделения, комедонов, вызывающих акне бактерий Propionibacterium acnes и фолликулярного гиперкератоза и оказывает противовоспалительные эффекты (находящийся в открытом доступе патент Кореи № 2002-0033751). Кроме того, изотретиноин изредка используют для предотвращения или лечения определенных видов рака кожи, таких как плоскоклеточная карцинома, или других злокачественных опухолей, и его можно использовать для лечения арлекинового ихтиоза и ламеллярного ихтиоза, которые представляют собой одни из смертельных заболеваний кожи. Изотретиноин представляет собой ретиноид, ассоциированный с витамином А, который в природе обнаруживают в организме в небольших количествах, и его изомер третиноин также является лекарственным средством против акне.Isotretinoin (13-cis-retinoic acid), which is an oral drug mainly used to treat acne, is known as one of the most effective drugs for acne, especially very severe nodular cystic acne, because it suppresses all of sebum secretion. , comedones, acne-causing bacteria Propionibacterium acnes and follicular hyperkeratosis, and has anti-inflammatory effects (Korean Public Patent No. 2002-0033751). In addition, isotretinoin is occasionally used to prevent or treat certain types of skin cancer such as squamous cell carcinoma or other malignancies, and it can be used to treat harlequin ichthyosis and lamellar ichthyosis, which are some of the fatal skin diseases. Isotretinoin is a vitamin A-associated retinoid found naturally in the body in small amounts, and its isomer tretinoin is also an anti-acne drug.

Опубликовано также, что механизм действия изотретиноина осуществляет лечение симптомов акне посредством нормализации процесса кератинизации мелкофолликулярного эпителия, уменьшения количества себоцитов, с уменьшением в то же время синтеза кожного сала, и уменьшением количества Propionibacterium acnes, микроорганизма, вызывающего воспаление акне. Поскольку изотретиноин является жирорастворимым, его растворимость в воде является низкой, его абсорбция увеличивается при употреблении с пищей, и его биодоступность без пищи составляет приблизительно 20%. Опубликовано, что время до достижения наивысшей концентрации в крови при пероральном введении составляет приблизительно 2-4 ч, и через 6 ч после введения концентрация в крови активного метаболита 4-оксоизотретиноина выше, чем концентрация в крови изотретиноина (S.K. Yang et al., J. Kor. Pharm. Sci., Vol. 37, No. 4, 255-261, 2007).The mechanism of action of isotretinoin has also been reported to treat acne symptoms by normalizing the process of keratinization of the small follicular epithelium, reducing the number of sebocytes, while reducing the synthesis of sebum, and reducing the amount of Propionibacterium acnes, the microorganism that causes inflammation of acne. Because isotretinoin is fat soluble, its water solubility is low, its absorption is increased when taken with food, and its bioavailability without food is approximately 20%. The time to peak blood concentration following oral administration has been reported to be approximately 2-4 hours, and 6 hours after administration, the blood concentration of the active metabolite 4-oxoisotretinoin is higher than the blood concentration of isotretinoin (S.K. Yang et al., J. Kor. Pharm. Sci., Vol. 37, No. 4, 255-261, 2007).

Однако использование такого изотретиноина может вызывать побочные эффекты, такие как шелушение кожи, дерматит, сухость кожи, зуд и вялость кожи, которые могут вызывать значительный дискомфорт после нанесения на кожу, и, таким образом, пользователи с чувствительной кожей часто получают повреждения при использовании такого соединения. Кроме того, поскольку изотретиноин имеет низкую растворимость в воде, необходимо добавлять различные органические растворители для его солюбилизации, что может добавлять недостатки композиции, содержащей изотретиноин.However, the use of such isotretinoin can cause side effects such as skin flaking, dermatitis, dry skin, itching and skin laxity, which can cause significant discomfort after application to the skin, and thus users with sensitive skin are often injured when using such a compound. . In addition, since isotretinoin has low water solubility, it is necessary to add various organic solvents to solubilize it, which may add disadvantages to the composition containing isotretinoin.

Таким образом, существует необходимость в разработке новых соединений, которые могут уменьшать проблемы изотретиноина, как описано выше, в частности, низкую растворимость в воде, и которые могут дополнительно улучшать физиологическую эффективность изотретиноина.Thus, there is a need to develop new compounds that can reduce the problems of isotretinoin as described above, in particular the low water solubility, and that can further improve the physiological efficacy of isotretinoin.

Описание Техническая проблемаDescription Technical issue

Настоящее изобретение предназначено для уменьшения проблем общепринятого изотретиноина, как описано выше, и технической целью настоящего изобретения является предоставление вещества, проявляющего идентичную или превосходящую физиологическую активность по сравнению со случаем, когда природный изотретиноин присутствует отдельно, в то же время имеющего превосходные свойства, такие как растворимость в воде.The present invention is intended to reduce the problems of conventional isotretinoin as described above, and the technical purpose of the present invention is to provide a substance exhibiting identical or superior physiological activity compared to the case where natural isotretinoin is present alone, while having excellent properties such as solubility in water.

Техническое решениеTechnical solution

Для достижения вышеуказанной цели настоящее изобретение относится к соединению, имеющему структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи.To achieve the above object, the present invention relates to a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond.

В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения пептид может состоять из последовательности из 2-30, предпочтительно 5-20, более предпочтительно 8-15, более предпочтительно 10-12 аминокислот, но без ограничения этим.In accordance with an embodiment of the present invention, the peptide may consist of a sequence of 2-30, preferably 5-20, more preferably 8-15, more preferably 10-12 amino acids, but not limited to this.

В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения пептид представляет собой предпочтительно, но без ограничения, водорастворимый пептид. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является предпочтительным, чтобы доля аминокислот, имеющих гидрофильную боковую цепь, в водорастворимым пептиде являлась настолько высокой, как 50% или более, предпочтительно 60% или более, более предпочтительно 70% или более, более предпочтительно 80% или более, более предпочтительно 90% или более и наиболее предпочтительно 100%. В соответствии с другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения аминокислота, имеющая гидрофобную боковую цепь, в водорастворимом пептиде присутствует в количестве 5 или менее, предпочтительно 4 или менее, более предпочтительно 3 или менее, более предпочтительно 2 или менее, более предпочтительно 1 или менее и наиболее предпочтительно ни одной.In accordance with another embodiment of the present invention, the peptide is preferably, but not limited to, a water-soluble peptide. According to a preferred embodiment of the present invention, it is preferred that the proportion of amino acids having a hydrophilic side chain in the water-soluble peptide is as high as 50% or more, preferably 60% or more, more preferably 70% or more, more preferably 80% or more, more preferably 90% or more, and most preferably 100%. According to another preferred embodiment of the present invention, an amino acid having a hydrophobic side chain is present in the water-soluble peptide in an amount of 5 or less, preferably 4 or less, more preferably 3 or less, more preferably 2 or less, more preferably 1 or less, and most preferably none.

В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения пептид может представлять собой пептид, состоящий из аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 1, но без ограничения этим.In accordance with another embodiment of the present invention, the peptide may be a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, but without limitation.

Кроме того, настоящее изобретение относится к антибиотической, противовоспалительной или ан- 1 041637 тиоксидантной фармацевтической композиции, содержащей любое из соединений, как описано выше.In addition, the present invention relates to an antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant pharmaceutical composition containing any of the compounds as described above.

Кроме того, настоящее изобретение относится к антибиотической, противовоспалительной или антиоксидантной косметической композиции, содержащей любое из соединений, как описано выше.In addition, the present invention relates to an antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant cosmetic composition containing any of the compounds as described above.

В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения косметическая композиция может иметь такой состав, как средство для смягчения кожи, питательный лосьон, питательный крем, массажный крем, эссенция, крем для области вокруг глаз, очищающий крем, очищающая пена, очищающая жидкость, маска, спрей, порошок, тоник для волос, крем для волос, лосьон для волос, шампунь для волос, ополаскиватель для волос, кондиционер для волос, спрей для волос, аэрозоль для волос, помада, золь-гель, эмульсия, масло, воск и аэрозоль, но без ограничения этим.According to an embodiment of the present invention, the cosmetic composition may include a skin softener, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing liquid, a mask, a spray, powder, hair tonic, hair cream, hair lotion, hair shampoo, hair rinse, hair conditioner, hair spray, hair spray, pomade, sol-gel, emulsion, oil, wax and spray, but without restrictions on this.

Благоприятные эффектыBeneficial Effects

Соединение имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением имеет превосходную физиологическую активность, такую как антибиотическое, противовоспалительное или антиоксидантное действие, так же как имеет превосходные свойства, такие как растворимость в воде и т.п., и, таким образом, может быть использовано в различных областях, таких как медицина, косметика и т.п.The compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention has excellent physiological activity such as antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant action, as well as excellent properties such as water solubility, etc. .p., and thus can be used in various fields such as medicine, cosmetics, and the like.

Описание фигурDescription of figures

Фиг. 1 представляет собой фотографию, показывающую растворимость соединения по настоящему изобретению и изотретиноина в воде, фиг. 2А и 2В - фотографии после RT-ПЦР и вестерн-блоттинга, показывающие эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на экспрессию генов, ассоциированных с передачей сигналов образования кожного сала, экспрессированных в себоцитах, фиг. 3А и 3В - фотографии после RT-ПЦР и окрашивания масляным красным О, показывающие эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на экспрессию генов, ассоциированных с липогенезом, в преадипоцитах 3T3L1, фиг. 4 - фотографию после RT-ПЦР и электрофореза, показывающую эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на экспрессию генов, ассоциированных с воспалением, в кератиноцитах HaCaT, фиг. 5 - фотографию после электрофореза и график, показывающие эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на активность матриксной металлопротеиназы (MMP) в кератиноцитах HaCaT, фиг. 6 - график, показывающий эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на содержание внутриклеточных активных форм кислорода в себоцитах, фиг. 7 - график, показывающий эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на высвобождение свободного глицерина в преадипоцитах 3T3 L1, фиг. 8А и 8В - фотографии после RT-ПЦР и окрашивания масляным красным О, показывающие эффект соединений по настоящему изобретению и изотретиноина на экспрессию генов, ассоциированных с липолизом, в преадипоцитах 3T3 L1.Fig. 1 is a photograph showing the solubility of the compound of the present invention and isotretinoin in water, FIG. 2A and 2B are RT-PCR and Western blot photographs showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on the expression of genes associated with sebum signaling expressed in sebocytes, FIG. 3A and 3B are photographs after RT-PCR and oil red O staining showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on lipogenesis-associated gene expression in 3T3L1 preadipocytes, FIG. 4 is a photograph after RT-PCR and electrophoresis showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on the expression of inflammation-associated genes in HaCaT keratinocytes, FIG. 5 is a post-electrophoresis photograph and graph showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on matrix metalloproteinase (MMP) activity in HaCaT keratinocytes, FIG. 6 is a graph showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on the content of intracellular reactive oxygen species in sebocytes, FIG. 7 is a graph showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on free glycerol release in 3T3 L1 preadipocytes, FIG. 8A and 8B are photographs after RT-PCR and oil red O staining showing the effect of the compounds of the present invention and isotretinoin on lipolysis-associated gene expression in 3T3 L1 preadipocytes.

Наилучший способ осуществления изобретенияBest Mode for Carrying Out the Invention

Для достижения вышеуказанной цели, настоящее изобретение относится к соединению, имеющему структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи.To achieve the above object, the present invention relates to a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond.

Изотретиноин представляет собой 13-цис-ретиноевую кислоту, имеющую химическую структуру, представленную следующей химической формулой:Isotretinoin is a 13-cis-retinoic acid having a chemical structure represented by the following chemical formula:

В рамках изобретения термин пептид обозначает линейную молекулу, сформированную посредством соединения аминокислот друг с другом посредством пептидной связи. Пептиды можно получать в соответствии с общепринятыми способами биологического или химического синтеза, известными в данной области, в частности способами твердофазного синтеза (Merrifield, J. Amer. Chem. Soc, 85:214954(1963); Stewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., Pierce Chem. Co. Rockford, 111 (1984)).Within the scope of the invention, the term peptide denotes a linear molecule formed by connecting amino acids to each other via a peptide bond. Peptides can be prepared according to conventional biological or chemical synthesis methods known in the art, in particular solid phase synthesis methods (Merrifield, J. Amer. Chem. Soc, 85:214954(1963); Stewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis , 2nd ed., Pierce Chem. Co. Rockford, 111 (1984)).

Пептид предпочтительно предназначен для увеличения растворимости в воде изотретиноина, и в этом аспекте пептид представляет собой предпочтительно, но без ограничения, растворимый в воде пептид. В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения пептид может состоять из последовательности из 2-30, предпочтительно 5-20, более предпочтительно 8-15, более предпочтительно 10-12 аминокислот. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является предпочтительным, чтобы доля аминокислот, имеющих гидрофильную боковую цепь, в пептиде была настолько высокой, как 50% или более, предпочтительно 60% или более, более предпочтительно 70% или более, более предпочтительно 80% или более, более предпочтительно 90% или более и наиболее предпочтительно 100%. С другой стороны, является предпочтительным, чтобы доля аминокис- 2 041637 лот, имеющих гидрофобную боковую цепь, в пептиде была настолько низкой, как менее чем 50%, предпочтительно 40% или менее, более предпочтительно 30% или менее, более предпочтительно 20% или менее, более предпочтительно 10% или менее и наиболее предпочтительно 0%. В рамках изобретения термин аминокислоты, имеющие гидрофильную боковую цепь, представляет, но без ограничения, аргинин (Arg), гистидин (His), лизин (Lys), аспарагиновую кислоту (Asp), глутаминовую кислоту (Glu), серин (Ser), треонин (Thr), аспарагин (Asn), глутамин (Gln), цистеин (Cys), селеноцистеин (Sec), глицин (Gly) и пролин (Pro); термин аминокислоты, имеющие гидрофобную боковую цепь, представляет, но без ограничения, аланин (Ala), валин (Val), изолейцин (Ile), лейцин (Leu), метионин (Met), фенилаланин (Phe), тирозин (Tyr) и триптофан (Trp); и в дополнение к аминокислотам, присутствующим в природе, как описано выше, можно использовать их модификации, без ограничения. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения аминокислоты, имеющие гидрофобную боковую цепь, в пептиде присутствуют в количестве 5 или менее, предпочтительно 4 или менее, более предпочтительно 3 или менее, более предпочтительно 2 или менее, более предпочтительно 1 или менее и наиболее предпочтительно ни одной. В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения пептид представляет собой предпочтительно, но без ограничения, пептид, состоящий из аминокислотной последовательности из SEQ ID NO: 1-4.The peptide is preferably designed to increase the water solubility of isotretinoin, and in this aspect the peptide is preferably, but not limited to, a water soluble peptide. According to an embodiment of the present invention, a peptide may consist of a sequence of 2-30, preferably 5-20, more preferably 8-15, more preferably 10-12 amino acids. According to a preferred embodiment of the present invention, it is preferred that the proportion of amino acids having a hydrophilic side chain in the peptide is as high as 50% or more, preferably 60% or more, more preferably 70% or more, more preferably 80% or more, more preferably 90% or more, and most preferably 100%. On the other hand, it is preferred that the proportion of amino acids having a hydrophobic side chain in the peptide is as low as less than 50%, preferably 40% or less, more preferably 30% or less, more preferably 20% or less, more preferably 10% or less, and most preferably 0%. Within the scope of the invention, the term amino acids having a hydrophilic side chain represents, but is not limited to, arginine (Arg), histidine (His), lysine (Lys), aspartic acid (Asp), glutamic acid (Glu), serine (Ser), threonine (Thr), asparagine (Asn), glutamine (Gln), cysteine (Cys), selenocysteine (Sec), glycine (Gly), and proline (Pro); the term amino acids having a hydrophobic side chain includes, but is not limited to, alanine (Ala), valine (Val), isoleucine (Ile), leucine (Leu), methionine (Met), phenylalanine (Phe), tyrosine (Tyr), and tryptophan (trp); and in addition to the naturally occurring amino acids as described above, modifications thereof may be used without limitation. According to a preferred embodiment of the present invention, amino acids having a hydrophobic side chain are present in the peptide in an amount of 5 or less, preferably 4 or less, more preferably 3 or less, more preferably 2 or less, more preferably 1 or less, and most preferably none. one. According to an embodiment of the present invention, the peptide is preferably, but not limited to, a peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1-4.

В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения соединения по настоящему изобретению могут иметь превосходную растворимость в воде (см. фиг. 1), а также заметно уменьшать экспрессию передающих сигналы генов и белков, ассоциированных с образованием кожного сала (см. фиг. 2А и 2В). В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения соединения по настоящему изобретению могут заметно уменьшать экспрессию генов, ассоциированных с липогенезом, а также уменьшать накопление жира в клетках зависимым от концентрации образом (см. фиг. 3А и 3В). В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения соединения по настоящему изобретению могут заметно уменьшать экспрессию генов, ассоциированных с воспалением и формированием морщин на коже, и с образованием внутриклеточных активных форм кислорода (см. фиг. 46). В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения подтверждено, что в дополнение к эффектам лечения акне изотретиноином, как известно в данной области, соединения по настоящему изобретению могут не только заметно увеличивать высвобождение глицерина посредством липолиза и экспрессию генов, ассоциированных с липолизом, но также уменьшать накопление жира в клетках (фиг. 7, 8А, и 8В).According to an embodiment of the present invention, the compounds of the present invention can have excellent water solubility (see FIG. 1) as well as markedly reduce the expression of sebum-associated signaling genes and proteins (see FIGS. 2A and 2B) . In accordance with another embodiment of the present invention, the compounds of the present invention can markedly reduce the expression of genes associated with lipogenesis, as well as reduce the accumulation of fat in cells in a concentration-dependent manner (see Fig. 3A and 3B). In accordance with another embodiment of the present invention, the compounds of the present invention can markedly reduce the expression of genes associated with inflammation and wrinkling of the skin, and with the formation of intracellular reactive oxygen species (see Fig. 46). In accordance with another embodiment of the present invention, it has been confirmed that, in addition to the acne treatment effects of isotretinoin, as known in the art, the compounds of the present invention can not only markedly increase the release of glycerol by lipolysis and the expression of genes associated with lipolysis, but also reduce the accumulation fat in cells (FIGS. 7, 8A, and 8B).

Соединение по настоящему изобретению само по себе имеет превосходную стабильность, однако его стабильность можно дополнительно улучшать посредством модификации любой аминокислоты, составляющей пептид, конъюгированный с соединением. В соответствии с вариантом осуществления изобретения N-конец пептида можно объединять с защитной группой, выбранной из группы, состоящей из группы ацетила, группы флуоренилметоксикарбонила, группы формила, группы пальмитоила, группы миристила, группы стеарила и полиэтиленгликоля (PEG), для дополнительного улучшения стабильности. В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения пептид можно объединять с защитной группой, выбранной из группы, состоящей из группы ацетила, группы флуоренилметоксикарбонила, группы формила, группы пальмитоила, группы миристила, группы стеарила и полиэтиленгликоля (PEG), для дополнительного улучшения стабильности.The compound of the present invention itself has excellent stability, however, its stability can be further improved by modifying any amino acid constituting the peptide conjugated to the compound. According to an embodiment of the invention, the N-terminus of the peptide can be combined with a protecting group selected from the group consisting of an acetyl group, a fluorenylmethoxycarbonyl group, a formyl group, a palmitoyl group, a myristyl group, a stearyl group, and polyethylene glycol (PEG) to further improve stability. In accordance with another embodiment of the invention, the peptide can be combined with a protecting group selected from the group consisting of an acetyl group, a fluorenylmethoxycarbonyl group, a formyl group, a palmitoyl group, a myristyl group, a stearyl group, and polyethylene glycol (PEG) to further improve stability.

Модификации аминокислот, как описано выше, действуют с большим улучшением стабильности соединений по настоящему изобретению. В рамках изобретения термин стабильность используют в значении, включающем не только стабильность in vivo, но также стабильность in vitro, такую как стабильность при хранении (например, стабильность при хранении при комнатной температуре). Кроме того, вышеупомянутая защитная группа действует для защиты соединений по настоящему изобретению от атаки расщепляющего белок фермента in vivo и in vitro.Amino acid modifications as described above act to greatly improve the stability of the compounds of the present invention. Within the scope of the invention, the term stability is used with a meaning that includes not only in vivo stability, but also in vitro stability, such as storage stability (eg, storage stability at room temperature). In addition, the aforementioned protecting group acts to protect the compounds of the present invention from attack by a protein-cleaving enzyme in vivo and in vitro.

Кроме того, настоящее изобретение относится к антибиотической, противовоспалительной или антиоксидантной композиции, содержащей соединение в качестве активного ингредиента. В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к композиции для улучшения состояния кожи, содержащей соединение в качестве активного ингредиента. По настоящему изобретению композиция может находиться в форме фармацевтической композиции или косметической композиция, но без ограничения этим. Кроме того, в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения улучшение состояния кожи посредством соединений по настоящему изобретению может представлять собой улучшение состояния при акне, улучшение состояния при морщинах, улучшение эластичности кожи, предотвращение старения кожи, улучшение увлажнения кожи, удаление шрамов или регенерацию кожи, но без ограничения этим.In addition, the present invention relates to an antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant composition containing the compound as an active ingredient. In accordance with another embodiment of the present invention, the present invention relates to a composition for improving the condition of the skin containing the compound as an active ingredient. According to the present invention, the composition may be in the form of a pharmaceutical composition or a cosmetic composition, but without limitation. Furthermore, according to an embodiment of the present invention, the improvement of skin condition by the compounds of the present invention may be improvement of acne, improvement of wrinkles, improvement of skin elasticity, prevention of skin aging, improvement of skin hydration, removal of scars, or skin regeneration, but without limitation to this.

Поскольку композиция по настоящему изобретению содержит соединение по настоящему изобретению, как описано выше, в качестве активного ингредиента, общее между ними в описании опущено, чтобы избежать избыточной сложности настоящего описания.Since the composition of the present invention contains the compound of the present invention as described above as an active ingredient, the commonality between them is omitted from the description in order to avoid excessive complexity of the present description.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую: (а) фармацевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению, как описано выше;According to a preferred embodiment of the present invention, the composition of the present invention is a pharmaceutical composition comprising: (a) a pharmaceutically effective amount of a compound of the present invention as described above;

- 3 041637 и (b) фармацевтически приемлемый носитель.- 3 041637 and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.

В рамках изобретения термин фармацевтически эффективное количество означает количество, достаточное для достижения эффективности или активности соединения по изобретению, как описано выше.In the context of the invention, the term pharmaceutically effective amount means an amount sufficient to achieve the efficacy or activity of a compound of the invention as described above.

Фармацевтически приемлемые носители, содержащиеся в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, представляют собой носители, общеупотребительные для получения составов, и включают, но без ограничения, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, гуммиарабик, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать смазывающее средство, увлажняющее средство, подсластитель, придающее вкус средство, эмульгатор, суспендирующее средство, консервант и т.п., в дополнение к ингредиентам, как описано выше. Пригодные фармацевтически приемлемые носители и средства подробно описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).Pharmaceutically acceptable carriers contained in the pharmaceutical composition of the present invention are those commonly used in formulating formulations and include, but are not limited to, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, gum arabic, calcium phosphate, alginate, gelatin, silicate calcium, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methylcellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The pharmaceutical composition of the present invention may further contain a lubricant, a moisturizing agent, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, and the like, in addition to the ingredients as described above. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and agents are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences ( 19th ed., 1995).

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получать в форме единичной дозы посредством составления соединения по настоящему изобретению с фармацевтически приемлемым носителем и/или наполнителем, в соответствии со способами, которые может легко осуществлять специалист в данной области или можно получать посредством заключения ее в контейнер для множественного дозирования. В этом случае состав может находиться в форме раствора, суспензии или эмульсии в масляной или водной среде или в форме экстракта, порошка, гранулы, таблетки, капсулы или геля (например, гидрогеля) и может дополнительно содержать диспергирующее средство и/или стабилизатор.The pharmaceutical composition of the present invention can be obtained in unit dose form by formulating the compound of the present invention with a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient, in accordance with methods that can be easily carried out by a person skilled in the art or can be obtained by enclosing it in a container for multiple dosing . In this case, the composition may be in the form of a solution, suspension or emulsion in an oily or aqueous medium, or in the form of an extract, powder, granule, tablet, capsule or gel (eg hydrogel) and may additionally contain a dispersing agent and/or a stabilizer.

Фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим изобретением можно вводить перорально или парентерально при клиническом введении и можно использовать в общих формах фармацевтических составов. То есть фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить в различных пероральных и парентеральных составах в ходе фактического клинического введения, и их получают с использованием разбавителей или наполнителей, таких как наполнитель, расширитель, связующее, увлажняющее средство, дезинтегрирующее средство и поверхностно-активное вещество, которые обычно используют при получении составов. Твердые составы для перорального введения включают таблетки, пилюли, порошок, гранулы, капсулы и т.п., и такие твердые составы получают посредством смешивания по меньшей мере одного наполнителя, такого как крахмал, карбонат кальция, сахароза или лактоза и желатин, с растительным экстрактом или продуктом ферментации растений. В дополнение к простым наполнителям можно использовать также смазывающие средства, такие как стеарат магния и тальк. Жидкие составы для перорального введения включают суспензию, раствор для внутреннего применения, эмульсию и сироп, и т.п. и могут включать различные наполнители, такие как увлажняющее средство, подсластитель, придающее вкус средство, консервант, и т.п., в дополнение к общеупотребительным простым разбавителям, таким как вода и вазелиновое масло. Составы для парентерального введения включают стерильный водный раствор, неводный раствор, суспензию, эмульсию, лиофилизированный состав и суппозиторий. В качестве неводного растворителя и суспендирующего растворителя можно использовать пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, пригодные для инъекции сложные эфиры, такие как этилолеат, и т.п. В качестве основы для суппозитория можно использовать витепсол, макрогол, tween 61, масло какао, лаурин, глицерин, желатин и т.п.The pharmaceutical composition according to the present invention may be administered orally or parenterally in clinical administration and may be used in general pharmaceutical formulation forms. That is, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered in various oral and parenteral formulations during actual clinical administration, and they are prepared using diluents or excipients such as filler, extender, binder, wetting agent, disintegrant and surfactant, which usually used in the preparation of formulations. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powder, granules, capsules, and the like, and such solid formulations are prepared by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, and gelatin with a plant extract. or a product of plant fermentation. In addition to simple fillers, lubricants such as magnesium stearate and talc can also be used. Liquid formulations for oral administration include suspension, oral solution, emulsion and syrup, and the like. and may include various excipients such as a moisturizer, sweetener, flavoring agent, preservative, and the like, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. Formulations for parenteral administration include a sterile aqueous solution, a non-aqueous solution, a suspension, an emulsion, a lyophilized formulation, and a suppository. As the non-aqueous solvent and the suspending solvent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate, and the like can be used. Witepsol, macrogol, tween 61, cocoa butter, laurin, glycerin, gelatin, etc. can be used as the basis for the suppository.

Единичная дозированная форма может содержать, например, 1, 2, 3 или 4 индивидуальные дозы, или 1/2, 1/3 или 1/4 индивидуальной дозы. Индивидуальная доза содержит количество активного лекарственного средства, которое вводят за одно применение, и это обычно соответствует полной ежесуточной дозе, 1/2, 1/3 или 1/4 ежесуточной дозы.The unit dosage form may contain, for example, 1, 2, 3 or 4 individual doses, or 1/2, 1/3 or 1/4 individual doses. The individual dose contains the amount of active drug that is administered in one application, and this usually corresponds to the total daily dose, 1/2, 1/3 or 1/4 of the daily dose.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно получать в единичной дозированной форме посредством составления соединения по настоящему изобретению с фармацевтически приемлемым носителем и/или наполнителем, в соответствии со способами, которые может легко осуществлять специалист в данной области, или можно получать посредством заключения ее в контейнер для множественного дозирования. В этом случае состав может находиться в форме раствора, суспензии или эмульсии в масляной или водной среде, или в форме экстракта, порошка, гранулы, таблетки, капсулы или геля (например, гидрогеля) и может дополнительно содержать диспергирующее средство и/или стабилизатор.The pharmaceutical composition of the present invention may be prepared in unit dosage form by formulating a compound of the present invention with a pharmaceutically acceptable carrier and/or excipient, in accordance with methods that can be easily carried out by a person skilled in the art, or may be prepared by encapsulating it in a multiple container. dosing. In this case, the composition may be in the form of a solution, suspension or emulsion in an oily or aqueous medium, or in the form of an extract, powder, granule, tablet, capsule or gel (e.g. hydrogel) and may additionally contain a dispersing agent and/or a stabilizer.

В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения композиция по настоящему изобретению может представлять собой косметическую композицию, содержащую: (а) косметически эффективное количество соединения по настоящему изобретению, как описано выше; и (b) косметически приемлемый носитель.In accordance with a preferred embodiment of the present invention, the composition of the present invention may be a cosmetic composition containing: (a) a cosmetically effective amount of the compound of the present invention, as described above; and (b) a cosmetically acceptable carrier.

В рамках изобретения термин косметически эффективное количество означает количество, достаточное для достижения эффективности улучшения кожи, для композиции по настоящему изобретению, как описано выше.For the purposes of the invention, the term cosmetically effective amount means an amount sufficient to achieve skin improvement efficacy for a composition of the present invention as described above.

Косметическую композицию по настоящему изобретению можно также получать в любых составах, общепринятым образом получаемых в данной области, и можно составлять, например, в растворе, сус- 4 041637 пензии, эмульсии, пасте, геле, креме, лосьоне, порошке, мыле, содержащем поверхностно-активное вещество очищающем средстве, масле, порошкообразной основе, эмульсионной основе, восковой основе, спрее и т.п., но без ограничения этим. Более конкретно ее можно получать в различных формах, таких как средство для смягчения кожи, питательный лосьон, питательный крем, массажный крем, эссенция, крем для области вокруг глаз, очищающий крем, очищающая пена, очищающая жидкость, маска, спрей, порошок, тоник для волос, крем для волос, лосьон для волос, шампунь для волос, ополаскиватель для волос, кондиционер для волос, спрей для волос, аэрозоль для волос, помада, гель, золь-гель, эмульсия, масло, воск, аэрозоль и т.п., но без ограничения этим.The cosmetic composition of the present invention may also be prepared in any of the formulations conventionally prepared in the art and may be formulated, for example, in a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap containing surface -active agent in a cleanser, oil, powder base, emulsion base, wax base, spray, etc., but not limited to this. More specifically, it can be obtained in various forms such as skin softener, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing liquid, mask, spray, powder, tonic for hair, hair cream, hair lotion, hair shampoo, hair rinse, hair conditioner, hair spray, hair spray, pomade, gel, sol-gel, emulsion, oil, wax, aerosol, etc. , but not limited to this.

Когда состав по настоящему изобретению представляет собой пасту, крем или гель, масло животного происхождения, растительное масло, воск, парафин, крахмал, трагакант, производное целлюлозы, полиэтиленгликоль, силикон, бентонит, диоксид кремния, тальк или оксид цинка и т.п., можно использовать в качестве ингредиента-носителя.When the composition of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silicon dioxide, talc or zinc oxide, and the like, can be used as a carrier ingredient.

Когда состав по настоящему изобретению представляет собой порошок или спрей, лактозу, тальк, диоксид кремния, гидроксид алюминия, силикат кальция или порошок полиамида можно использовать в качестве ингредиента-носителя, и, в частности, в случае спрея, можно дополнительно включать пропеллент, такой как хлорфторуглеводород, пропан/бутан или диметиловый эфир, но без ограничения этим.When the composition of the present invention is a powder or spray, lactose, talc, silicon dioxide, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder can be used as a carrier ingredient, and in particular in the case of a spray, a propellant such as chlorofluorocarbon, propane/butane or dimethyl ether, but not limited to this.

Когда состав по настоящему изобретению представляет собой раствор или эмульсию, растворитель, солюбилизатор или эмульгатор используют в качестве ингредиента-носителя, и можно использовать, например, воду, этанол, изопропанол, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутилгликолевое масло, сложный эфир глицерина и алифатической кислоты, полиэтиленгликоль или сложный эфир сорбита и жирной кислоты, но без ограничения этим.When the composition of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier is used as the carrier ingredient, and water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3- butyl glycol oil, ester of glycerol and aliphatic acid, polyethylene glycol or ester of sorbitol and fatty acid, but without limitation.

Когда состав по настоящему изобретению представляет собой суспензию, жидкие разбавители, такие как вода, этанол или пропиленгликоль, суспендирующие средства, такие как этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтиленовый сложный эфир сорбита и полиоксиэтиленовый сложный эфир сорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар или трагакант и т.п., можно использовать в качестве ингредиента-носителя, но без ограничения этим.When the formulation of the present invention is a suspension, liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tragacanth and the like may be used as a carrier ingredient, but are not limited thereto.

Когда состав по настоящему изобретению представляет собой содержащее поверхностно-активное вещество, очищающее средство, сульфат алифатического спирта, сульфат эфира алифатического спирта, сложный моноэфир сульфоянтарной кислоты, изетионат, производное имидазолина, метилтаурат, саркозинат, сульфат эфира амида жирной кислоты, алкиламидобетаин, алифатический спирт, глицерид жирной кислоты, диэтаноламид жирной кислоты, растительное масло, производное ланолина или этоксилированный сложный эфир глицерина и жирной кислоты и т.п. можно использовать в качестве ингредиента-носителя, но без ограничения этим.When the composition of the present invention is a surfactant-containing, a cleanser, an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ester sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, an isethionate, an imidazoline derivative, a methyl taurate, a sarcosinate, a fatty acid amide ester sulfate, an alkylamidobetaine, an aliphatic alcohol, a fatty acid glyceride, a fatty acid diethanolamide, a vegetable oil, a lanolin derivative or an ethoxylated fatty acid ester of glycerol, and the like. may be used as a carrier ingredient, but is not limited thereto.

Когда состав по настоящему изобретению представляет собой шампунь для волос, соединения по настоящему изобретению смешивают с ингредиентами основы для составления шампуней, такими как загустители, поверхностно-активные вещества, модификаторы вязкости, увлажняющие средства, средства для доведения pH, консерванты, эфирные масла и т.п. CDE можно использовать в качестве загустителей; LES, анионное поверхностно-активное вещество, сособетаин, амфотерное поверхностно-активное вещество можно использовать в качестве поверхностно-активных веществ; поликватер можно использовать в качестве модификатора вязкости; глицерин можно использовать в качестве увлажняющего средства; лимонную кислоту и гидроксид натрия можно использовать в качестве средств для доведения pH; экстракт грейпфрута можно использовать в качестве консерванта; кроме того, можно добавлять эфирные масла, такие как масло кедра, масло перечной мяты, масло розмарина и т.п., аминокислоты шелка, пентаол, витамин Е. В соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению, как описано выше, можно смешивать с 5-10 мас.ч. CDE, 30-40 мас.ч. LES, 10-20 мас.ч. сособетаина, 0,1-0,2 мас.ч. поликватера, 5-10 мас.ч. глицерина, 0,1-1,01 мас.ч. экстракта грейпфрута, 0,5-1 мас.ч. аминокислот шелка, 0,5-1 мас.ч. пентаола, 0,5-2 мас.ч. витамина Е и 0,01-0,1 мас.ч. любого из масел кедра, перечной мяты и розмарина в качестве эфирных масел, на основании 100 мас.ч. соединения по настоящему изобретению, но без ограничения этим.When the composition of the present invention is a hair shampoo, the compounds of the present invention are mixed with shampoo base ingredients such as thickeners, surfactants, viscosity modifiers, moisturizers, pH adjusters, preservatives, essential oils, etc. P. CDEs can be used as thickeners; LES, anionic surfactant, sosobetaine, amphoteric surfactant can be used as surfactants; polyquater can be used as a viscosity modifier; glycerin can be used as a moisturizer; citric acid and sodium hydroxide can be used as pH adjusters; grapefruit extract can be used as a preservative; in addition, essential oils such as cedarwood oil, peppermint oil, rosemary oil and the like, silk amino acids, pentaol, vitamin E can be added. According to an embodiment of the present invention, the compound of the present invention as described above can be mix with 5-10 wt.h. CDE, 30-40 wt.h. LES, 10-20 parts by weight sosobetaine, 0.1-0.2 wt.h. polyquater, 5-10 wt.h. glycerin, 0.1-1.01 wt.h. grapefruit extract, 0.5-1 wt.h. silk amino acids, 0.5-1 wt.h. pentaol, 0.5-2 wt.h. vitamin E and 0.01-0.1 wt.h. any of the oils of cedar, peppermint and rosemary as essential oils, based on 100 wt.h. compounds of the present invention, but not limited to this.

Ингредиенты, включенные в косметическую композицию по настоящему изобретению, включают ингредиенты, общеупотребительные для косметических композиций, в дополнение к соединению по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента и ингредиентам-носителям и могут включать общепринятые адъюванты, например, такие как антиоксидант, стабилизатор, солюбилизатор, витамин, пигмент и ароматизатор, но без ограничения этим.Ingredients included in the cosmetic composition of the present invention include ingredients commonly used in cosmetic compositions, in addition to the compound of the present invention as an active ingredient and carrier ingredients, and may include conventional adjuvants such as, for example, an antioxidant, stabilizer, solubilizer, vitamin , pigment and flavor, but not limited to this.

ПримерыExamples

Далее в настоящем описании изобретение подробно объяснено посредством примеров.Further in the present description, the invention is explained in detail by way of examples.

Однако следующие примеры представлены только для иллюстрации настоящего изобретения, и содержание настоящего изобретения не ограничено следующими примерами.However, the following examples are provided only to illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples.

Пример 1. Синтез соединений по настоящему изобретению.Example 1 Synthesis of the compounds of the present invention.

1-1. Синтез пептидов из SEQ ID NO: 1.1-1. Synthesis of peptides from SEQ ID NO: 1.

700 мг хлоридной смолы (смола CTL; Nova biochem [0064], кат. No. 01-64-0021) помещали в реактор и затем добавляли 10 мл метиленхлорида (МС), и перемешивали в течение 3 мин. После удаления700 mg of chloride resin (CTL resin; Nova biochem [0064], cat. no. 01-64-0021) was placed in a reactor and then 10 ml of methylene chloride (MC) was added and stirred for 3 minutes. After removal

- 5 041637 раствора добавляли 10 мл диметилформамида (DMF) и перемешивали в течение 3 мин, затем растворитель удаляли снова. 10 мл раствора дихлорметана помещали в реактор и затем туда помещали 200 ммоль Fmoc-Met-OH (Bachem, Swiss) и 400 ммоль диизопропилэтиламина (DIEA), хорошо растворяли посредством перемешивания и затем реакцию проводили посредством перемешивания в течение 1 ч. После завершения реакции проводили промывку и метанол и DIEA (2:1) растворяли в дихлорметане (DCM), проводили реакцию в течение 10 мин, затем проводили промывку избытком DCM/DMF (1:1). Затем раствор удаляли, туда помещали 10 мл диметилформамида (DMF) и перемешивали в течение 3 мин, затем растворитель удаляли снова. 10 мл раствора для снятия защиты (20% пиперидин/DMF) помещали в реактор и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем раствор удаляли. Затем добавляли такое же количество раствора для снятия защиты для поддержания реакции в течение еще 10 мин, затем раствор удаляли и проводили промывку дважды с использованием DMF, один раз с использованием МС и один раз с использованием DMF в течение 3 мин, соответственно, с получением смолы Met-CTL.- 5 041637 solution was added 10 ml of dimethylformamide (DMF) and stirred for 3 min, then the solvent was removed again. 10 ml of dichloromethane solution was placed in a reactor, and then 200 mmol of Fmoc-Met-OH (Bachem, Swiss) and 400 mmol of diisopropylethylamine (DIEA) were placed therein, dissolved well by stirring, and then the reaction was carried out by stirring for 1 hour. washing and methanol and DIEA (2:1) were dissolved in dichloromethane (DCM), reacted for 10 min, then washed with excess DCM/DMF (1:1). Then the solution was removed, 10 ml of dimethylformamide (DMF) was placed there and stirred for 3 minutes, then the solvent was removed again. 10 ml of the deprotection solution (20% piperidine/DMF) was placed in the reactor and stirred at room temperature for 10 minutes, then the solution was removed. The same amount of deprotection solution was then added to maintain the reaction for another 10 minutes, then the solution was removed and washed twice with DMF, once with MS and once with DMF for 3 minutes, respectively, to obtain a resin Met CTL.

мл раствора DMF помещали в новый реактор и туда помещали 200 ммоль Fmoc-Val-OH (Bachem, Swiss), 200 ммоль HoBt и 200 ммоль Вор, затем хорошо растворяли посредством перемешивания. 400 ммоль DIEA помещали в реактор в двух фракциях и перемешивали в течение по меньшей мере 5 мин до растворения всех твердых веществ. Раствор смеси растворенных аминокислот помещали в реактор, содержащий смолу со снятой защитой, и проводили реакцию с перемешиванием при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционный раствор удаляли и перемешивали три раза по 5 мин каждый с раствором DMF и затем удаляли. Небольшое количество смолы после реакции отбирали и степень реакции проверяли с использованием теста Кайзера (нингидринового теста). Реакцию снятия защиты проводили дважды, как описано выше, с использованием раствора для снятия защиты, для получения смолы Val-Met-CTL. Затем смолу подвергали достаточной промывке с использованием DMF и МС и еще один раз подвергали тесту Кайзера для проведения эксперимента присоединения аминокислот ниже, таким же образом, как описано выше.ml of DMF solution was placed in a new reactor and 200 mmol Fmoc-Val-OH (Bachem, Swiss), 200 mmol HoBt and 200 mmol Bop were placed there, then dissolved well by stirring. 400 mmol DIEA was placed in a reactor in two fractions and stirred for at least 5 minutes until all solids were dissolved. The dissolved amino acid mixture solution was placed in a reactor containing the deprotected resin and reacted with stirring at room temperature for 1 hour. The reaction solution was removed and stirred three times for 5 minutes each with the DMF solution and then removed. A small amount of resin after the reaction was withdrawn and the degree of reaction was checked using the Kaiser test (ninhydrin test). The deprotection reaction was carried out twice as described above using the deprotection solution to obtain Val-Met-CTL resin. The resin was then subjected to a sufficient wash using DMF and MS and subjected to the Kaiser test once more to conduct the amino acid addition experiment below, in the same manner as described above.

На основании выбранных аминокислотных последовательностей проводили цепную реакцию в этом порядке: Fmoc-Leu, Fmoc-Phe, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Thr(tBu), FmocArg(Pbf), Fmoc-Asp(tBu), Fmoc-Ile, Fmoc-Leu, Fmoc-Arg(Pbf) и Fmoc-Arg(Pbf). Проводили реакцию Fmocзащитной группы с раствором для снятия защиты дважды в течение 10 мин, затем хорошо промывали и удаляли. Затем туда помещали уксусный ангидрид, DIEA и HoBt для проведения ацетилирования в течение 1 ч, полученную пептидильную смолу промывали три раза с использованием DMF, MC и метанола, соответственно, и высушивали посредством медленного пропускания газа азота, затем полностью высушивали в вакууме с пониженным давлением над Р2О5, туда помещали 30 мл уходящего раствора (95% трифторуксусной кислоты, 2,5% дистиллированной воды и 2,5% тиоанизола), реакцию поддерживали в течение 2 ч при комнатной температуре с периодическим встряхиванием. Смолу фильтровали посредством фильтрации и промывали небольшим количеством раствора TFA, затем фильтрат объединяли с исходным раствором. Дистилляцию проводили с использованием пониженного давления, таким образом, чтобы осталась половина общего объема, и к этому добавляли 50 мл холодного эфира для индукции преципитации, центрифугировали для сбора преципитата и промывали дважды холодным эфиром. После удаления исходного раствора и достаточного высушивания в атмосфере азота, было синтезировано 1,49 г предварительно очищенного пептида NRRLIDRTNANFLVM (SEQ ID NO: 1) (выход: 86,5%). Молекулярную массу 1719,1 (теоретическое значение: 1719,2) получали при измерении с использованием устройства для измерения молекулярной массы.Based on the selected amino acid sequences, a chain reaction was carried out in this order: Fmoc-Leu, Fmoc-Phe, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Ala, Fmoc-Asn(Trt), Fmoc-Thr(tBu), FmocArg(Pbf), Fmoc-Asp(tBu), Fmoc-Ile, Fmoc-Leu, Fmoc-Arg(Pbf) and Fmoc-Arg(Pbf). The Fmoc protecting group was reacted with the deprotection solution twice for 10 minutes, then washed well and removed. Then, acetic anhydride, DIEA, and HoBt were placed there to carry out acetylation for 1 hour, the resulting peptidyl resin was washed three times with DMF, MC, and methanol, respectively, and dried by slowly passing nitrogen gas, then dried completely under reduced pressure over R 2 O 5 , 30 ml of the outgoing solution (95% trifluoroacetic acid, 2.5% distilled water and 2.5% thioanisole) were placed there, the reaction was maintained for 2 h at room temperature with occasional shaking. The resin was filtered by filtration and washed with a small amount of TFA solution, then the filtrate was combined with the original solution. Distillation was carried out using reduced pressure so that half of the total volume remained, and to this was added 50 ml of cold ether to induce precipitation, centrifuged to collect the precipitate, and washed twice with cold ether. After removal of the stock solution and sufficient drying under nitrogen atmosphere, 1.49 g of pre-purified NRRLIDRTNANFLVM peptide (SEQ ID NO: 1) was synthesized (yield: 86.5%). A molecular weight of 1719.1 (theoretical value: 1719.2) was obtained by measurement using a molecular weight measuring device.

Таблица 1Table 1

SEQ ГО NO SEQ GO NO Аминокислотная последовательность Amino acid subsequence Аналитическое значение (массспектрометр) Analytical value (mass spectrometer) Аналитическое значение Analytical value Теоретическое значение theoretical meaning 1 1 RRLIDRTNANFLVM RRLIDRTNANFLVM 1719,1 1719.1 1719,2 1719.2

1-2. Синтез соединений по настоящему изобретению.1-2. Synthesis of the compounds of the present invention.

Пептид со снятой защитой (1 ммоль) и 10 мл диметилформамида (DMF) помещали в пептидный реактор, затем к этому добавляли 270 мг (2,0 экв.) 1-гидроксибензотриазола (HOBt), 1,04 г (2,0 экв.) гексафторфосфоната (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония (PyBOP) и 277 мг (2,0 экв.) изотретиноина и проводили реакцию в течение 30 мин. К этому добавляли 388 мг (3 экв.) N,Nдиизопропилэтиламина (DIEA) и проводили реакцию при комнатной температуре в течение 2-4 ч, затем проводили перекристаллизацию с использованием 10 мл (10 ммоль) диэтилового эфира и проводили фильтрацию для получения гибридного пептида.The deprotected peptide (1 mmol) and 10 ml of dimethylformamide (DMF) were placed in a peptide reactor, then 270 mg (2.0 eq.) of 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), 1.04 g (2.0 eq. ) (benzotriazol-1-yloxy)tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphonate (PyBOP) and 277 mg (2.0 eq.) of isotretinoin and reacted for 30 min. To this was added 388 mg (3 eq.) of N,N-diisopropylethylamine (DIEA) and reacted at room temperature for 2-4 hours, then recrystallized with 10 ml (10 mmol) of diethyl ether and filtered to obtain a hybrid peptide.

Экспериментальный пример 1. Тестирование растворимости соединений по настоящему изобретению.Experimental Example 1 Solubility testing of the compounds of the present invention.

Соединение изотретиноин-пептид, полученное в примере 1-2 выше, и изотретиноин растворяли вThe isotretinoin-peptide compound prepared in Example 1-2 above and isotretinoin were dissolved in

- 6 041637 дистиллированной воде в концентрации 10 мг/мл соответственно.- 6 041637 distilled water at a concentration of 10 mg/ml, respectively.

В результате подтвердили, что в отличие от собственно изотретиноина, который является плохо растворимым в воде, соединение изотретиноин-пептид по настоящему изобретению полностью растворялось в воде (фиг. 1).As a result, it was confirmed that, unlike isotretinoin itself, which is poorly soluble in water, the isotretinoin-peptide compound of the present invention was completely soluble in water (Fig. 1).

Экспериментальный пример 2. Ингибирующий эффект соединений по настоящему изобретению на экспрессию генов передачи сигналов образования кожного сала.Experimental Example 2 Inhibitory effect of the compounds of the present invention on the expression of sebum signaling genes.

Анализ RT-ГГЦР проводили для подтверждения эффекта соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на экспрессию генов передачи сигналов, ассоциированных с образованием кожного сала. Конкретно, себоциты стимулировали посредством обработки с использованием 100 мкМ арахидоновой кислоты в качестве стимулятора, затем обрабатывали с использованием 1 или 10 мкМ соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноина и культивировали в течение 24 ч, затем РНК выделяли из культивированных клеток способом, как описано ниже, и эффект соединений на экспрессию сигнальных молекул cEBPa, PPARy и SREBP1c, вовлеченных в образование кожного сала, подтверждали с использованием праймеров, описанных в табл. 2 ниже. Набор для выделения РНК (набор Qiagen RNeasy) использовали для выделения тотальной РНК из клеток и затем к этому добавляли 3 мкг РНК, 2 мкг случайных гексамеров и обработанную DEPC воду, проводили реакцию при 65°С в течение 5 мин для синтеза одноцепочечной ДНК из РНК. 5х буфер для синтеза первой цепи, 0,1М DTT, 10 мМ dNTP и обратную транскриптазу помещали туда для получения всего 20 мл и проводили реакцию при 42°С в течение 1 ч. После нагревания при 95°С снова в течение 5 мин к этому добавляли 20 мл дистиллированной воды для получения всего 40 мл кДНК. Полимеразную цепную реакцию (ПНР) проводили посредством смешивания 10 пмоль праймера, 10x буфера для Tag, 10 мМ dNTP и ДНК-полимеразы i-Tag, как показано в табл. 2 ниже, специфических для 3 мкл кДНК каждого из генов cEBPa, PPARy, SREBP1c и GAPDH. Условия реакции ПЦР представляли собой 30 с при 94°С, 30 с при 55-56°С и 30 с при 72°С. Количество циклов для генов анализировали в условиях, в которых результаты ПЦР могли амплифицироваться экспоненциально. 5 мл полученного продукта ПЦР разделяли электрофорезом в 1% агарозном геле и окрашивали с использованием бромида этидия для подтверждения уровней мРНК генов передачи сигналов для образования кожного сала cEBPa, PPARy и SREBP1c.An RT-HHCR assay was performed to confirm the effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on the expression of sebum-associated signaling genes. Specifically, sebocytes were stimulated by treatment with 100 μM arachidonic acid as a stimulant, then treated with 1 or 10 μM of the isotretinoin-peptide compound of the present invention or isotretinoin and cultured for 24 h, then RNA was isolated from the cultured cells by the method as described below, and the effect of compounds on the expression of cEBPa, PPARy, and SREBP1c signaling molecules involved in sebum production was confirmed using the primers described in Table 1. 2 below. An RNA isolation kit (Qiagen RNeasy kit) was used to isolate total RNA from cells, and then added 3 µg of RNA, 2 µg of random hexamers, and DEPC-treated water, reacted at 65°C for 5 min to synthesize single-stranded DNA from RNA . 5x first strand synthesis buffer, 0.1 M DTT, 10 mM dNTP and reverse transcriptase were placed there to make a total of 20 ml and reacted at 42°C for 1 h. After heating at 95°C again for 5 min to this 20 ml of distilled water was added to obtain a total of 40 ml of cDNA. Polymerase chain reaction (PCR) was performed by mixing 10 pmol primer, 10x Tag buffer, 10 mM dNTP and i-Tag DNA polymerase as shown in Table 1. 2 below, specific for 3 µl cDNA of each of the cEBPa, PPARy, SREBP1c, and GAPDH genes. PCR reaction conditions were 30 s at 94°C, 30 s at 55-56°C and 30 s at 72°C. The number of cycles for the genes was analyzed under conditions in which the PCR results could be amplified exponentially. 5 ml of the resulting PCR product was separated by 1% agarose gel electrophoresis and stained with ethidium bromide to confirm mRNA levels of the sebum signaling genes cEBPa, PPARy and SREBP1c.

Таблица 2table 2

Фактор Factor Последовательность праймера Primer sequence SEQ ГО NO SEQ GO NO сЕВР а sevr a Прямой Straight (5') TCGGTGGACAAGAACAGCAA (3') (5') TCGGTGGACAAGAACAGCAA (3') 2 2 Обратный Back (5') CCTTGACCAAGGAGCTCTCA (3') (5') CCTTGACCAAGGAGCTCTCA (3') 3 3 PPARy PPARy Прямой Straight (5') TTCGCTGATGCACTGCCTAT (3') (5') TTCGCTGATGCACTGCCTAT (3') 4 4 Обратный Back (5') ACAGACTCGGCACTCAATGG (3') (5') ACAGACTCGGCACTCAATGG (3') 5 5 SREBPlc SREBPlc Прямой Straight (5') GACCGACATCGAAGGTGAAG (3') (5') GACCGACATCGAAGGTGAAG (3') 6 6 Обратный Back (5') AAGAGAGGAGCTCAATGTGGC (3') (5') AAGAGAGGAGCTCAATGTGGC (3') 7 7 GAPDH GAPDH Прямой Straight (5') GGAGCCAAAAGGGTCATCAT (3') (5') GGAGCCAAAAGGGTCATCAT (3') 8 8 Обратный Back (5') GTGATGGCATGGACTGTGGT (3') (5') GTGATGGCATGGACTGTGGT (3') 9 9

Кроме того, себоциты стимулировали посредством обработки вызывающими акне бактериями Propionibacterium acnes (100 мкг/мл) в качестве стимулятора в течение 48 ч, затем обрабатывали с использованием 1 или 10 мкМ соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноина, экспрессию сигнальных белков СЕВРа и PPARy, ассоциированных с образованием кожного сала, подтверждали посредством анализа Вестерн-блоттинга. В результате, подтвердили, что соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи в соответствии с настоящим изобретением, может более заметно уменьшать экспрессию сигнальных генов и белков, ассоциированных с образованием кожного сала, даже при намного более низкой концентрации по сравнению с изотретиноином (фиг. 2А и 2В).In addition, sebocytes were stimulated by treatment with acne-causing bacteria Propionibacterium acnes (100 μg/ml) as a stimulant for 48 h, then treated with 1 or 10 μM of the isotretinoin-peptide compound of the present invention or isotretinoin, expression of CEBP and PPARy signaling proteins. associated with sebum production was confirmed by Western blot analysis. As a result, it was confirmed that a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention can more markedly reduce the expression of signaling genes and sebum-associated proteins, even at a much lower concentration compared to isotretinoin (FIGS. 2A and 2B).

Экспериментальный пример 3. Ингибирующий эффект соединений по настоящему изобретению на липогенез.Experimental Example 3 Inhibitory effect of the compounds of the present invention on lipogenesis.

Анализ RT-ГГЦР проводили для подтверждения эффекта соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на экспрессию генов, ассоциированных с липогенезом. Конкретно, преадипоциты 3T3 L1 инокулировали в 24-луночные планшеты при 2x104 клеток/лунку и культивировали, затем проводили замену на среду для дифференцировки, содержащую 0,5 мМ IBMX, 0,25 мкМ дексаметазон и 1 мкг/мл инсулина, клетки культивировали в течение 10 суток с 10 мкМ соединением изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноином и затем подтверждали эффекты соединений на экспрессию генов PPARy, ACC и aP2, вовлеченных в липогенез. С этой целью RT-ГГЦР проводили таким же способом, как в экспериментальном примере 2 выше, за ис- 7 041637 ключением того, что праймеры, как показано в табл. 3 ниже, использовали в качестве праймеров, специфических для PPARγ, АСС и аР2.An RT-HHCR assay was performed to confirm the effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on the expression of genes associated with lipogenesis. Specifically, 3T3 L1 preadipocytes were inoculated into 24-well plates at 2x104 cells/well and cultured, then changed to differentiation medium containing 0.5 mM IBMX, 0.25 μM dexamethasone and 1 μg/ml insulin, the cells were cultured for 10 days with 10 μM isotretinoin-peptide compound of the present invention or isotretinoin and then confirmed the effects of the compounds on the expression of PPARy, ACC and aP2 genes involved in lipogenesis. To this end, RT-HHCC was carried out in the same manner as in Experimental Example 2 above, except that the primers as shown in Table. 3 below were used as primers specific for PPARγ, ACC and aP2.

___________________________________________________________________ Таблица 3________________________________________________________________________ Table 3

Фактор Factor Последовательность праймера Primer sequence SEQ Ш NO SEQ W NO PPARy PPARy Прямой Straight (5') TTCGCTGATGCACTGCCTAT (3') (5') TTCGCTGATGCACTGCCTAT (3') 4 4 Обратный Back (5') ACAGACTCGGCACTCAATGG (3') (5') ACAGACTCGGCACTCAATGG (3') 5 5 АСС ACC Прямой Straight (5') GAATGTTTGGGGATATTTCAG (3') (5') GAATGTTTGGGGATATTTCAG (3') 10 10 Обратный Back (5') TTCTGCTATCAGTCTGTCCAG (3') (5') TTCTGCTATCAGTCTGTCCAG (3') 11 eleven аР2 aP2 Прямой Straight (5') CATCAGCGTAAATGGGGATT (3') (5') CATCAGCCGTAAATGGGGATT (3') 12 12 Обратный Back (5') ACACATTCCACCACCAGCTT (3') (5') ACACATTCCACCACCAGCTT (3') 13 13

Кроме того, для измерения эффекта ингибирования накопления жира посредством соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению клетки 3T3-L1 инокулировали в 24-луночные планшеты при 2x104 клеток/лунку и культивировали, затем проводили замену на среду для дифференцировки, содержащую 10 мкг/мл инсулина, 0,1 мкМ дексаметазон и 0,5 мкМ IB MX, клетки обрабатывали с использованием соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноина. Впоследствии замену на среду, содержащую 10 мкг/мл инсулина, проводили каждые 2 суток, и анализ окрашивания масляным красным О проводили на сутки 9 после индукции дифференцировки. С этой целью клетки промывали с использованием PBS и затем фиксировали посредством обработки 4% параформальдегидом в течение 10 мин, промывали дистиллированной водой и затем инкубировали с 60% изопропанолом в течение 5-10 мин. Фиксированные клетки окрашивали с использованием раствора масляного красного [1% масляный красный в изопропаноле разводили в dH2O в соотношении объемов 6:4] в течение 30 мин и затем снова промывали с использованием PBS. Окрашенные клетки наблюдали под оптическим микроскопом и затем промывали дистиллированной водой, смешивали с 1 мл 100% изопропанола при 4°С и затем оценивали количественно при длине волны 510 нм на следующие сутки. В результате подтвердили, что соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, заметно уменьшало экспрессию генов, ассоциированных с липогенезом (фиг. ЗА), по сравнению с изотретиноином, а также уменьшало степень внутриклеточного накопления жира в зависимости от соединения (фиг. ЗВ).In addition, in order to measure the effect of fat accumulation inhibition by the isotretinoin-peptide compound of the present invention, 3T3-L1 cells were inoculated into 24-well plates at 2x10 4 cells/well and cultured, then changed to a differentiation medium containing 10 μg/ml insulin , 0.1 μM dexamethasone, and 0.5 μM IB MX, cells were treated with an isotretinoin-peptide compound of the present invention or isotretinoin. Subsequently, a change to medium containing 10 μg/ml insulin was performed every 2 days, and an oil red O staining analysis was performed on day 9 after induction of differentiation. To this end, the cells were washed with PBS and then fixed by treatment with 4% paraformaldehyde for 10 min, washed with distilled water and then incubated with 60% isopropanol for 5-10 min. Fixed cells were stained with oil red [1% oil red in isopropanol diluted in dH 2 O 6:4 v/v] for 30 min and then washed again with PBS. Stained cells were observed under an optical microscope and then washed with distilled water, mixed with 1 ml of 100% isopropanol at 4°C and then quantified at a wavelength of 510 nm the next day. As a result, it was confirmed that a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention markedly reduced the expression of lipogenesis-associated genes (FIG. 3A) compared to isotretinoin, and also reduced the degree of intracellular fat accumulation in a compound dependent manner (FIG. 3B).

Экспериментальный пример 4. Ингибирующий эффект соединений по настоящему изобретению на воспаление.Experimental Example 4 Inhibitory effect of the compounds of the present invention on inflammation.

Анализ RT-ПЦР проводили для подтверждения эффекта соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на воспаление, индуцированное вызывающими акне бактериями. Конкретно, 300000 клеток кератиноцитов НаСаТ инокулировали в каждую лунку 6луночных планшетов и затем культивировали в культуральной среде DMEM (Gibco, USA), содержащей 10% FBS, в течение 24 ч при 37°С и 5% СО2. После проведения замены на свежую среду, клетки обрабатывали с использованием 50 мкг/мл вызывающих акне бактерий (Р. acnes), 50 мкМ салициловой кислоты и 10 мкМ или 50 мкМ CG-Dinfla, обработанные вызывающими акне бактериями обрабатывали соединением изотретиноин-пептид по настоящему изобретению и изотретиноином, используемым в качестве группы положительного контроля, в концентрации 1 или 10 мкМ, и затем культивировали в течение 24 ч в таких же условиях, как описано выше, затем подтверждали эффекты соединений на экспрессию генов IFN-γ, IL-β, IL-6, IL-17A и TNF-α, вовлеченных в образование воспаления. С этой целью RT-ПЦР проводили таким же способом, как в экспериментальном примере 2 выше, за исключением того, что праймеры, как показано в табл. 4 ниже, использовали в качестве праймеров, специфических для IFN-γ, IL-Ιβ, IL-6, IL-17A и TNF-a.An RT-PCR analysis was performed to confirm the effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on inflammation induced by acne-causing bacteria. Specifically, 300,000 HaCaT keratinocyte cells were inoculated into each well of 6-well plates and then cultured in DMEM culture medium (Gibco, USA) containing 10% FBS for 24 hours at 37°C and 5% CO 2 . After changing to fresh medium, cells were treated with 50 μg/ml acne-causing bacteria (P. acnes), 50 μM salicylic acid and 10 μM or 50 μM CG-Dinfla, treated with acne-causing bacteria were treated with an isotretinoin-peptide compound of the present invention and isotretinoin used as a positive control group at a concentration of 1 or 10 μM, and then cultured for 24 h under the same conditions as described above, then the effects of the compounds on the expression of IFN-γ, IL-β, IL- genes were confirmed. 6, IL-17A and TNF-α involved in inflammation. To this end, RT-PCR was carried out in the same manner as in Experimental Example 2 above, except that the primers as shown in Table. 4 below were used as primers specific for IFN-γ, IL-Ιβ, IL-6, IL-17A and TNF-a.

-8041637-8041637

Таблица 4Table 4

Фактор Factor Последовательность праймера Primer sequence SEQ ID NO SEQID NO IFN-γ IFN-γ Прямой Straight (5') GAGGTCAACAACCCACAGGT (3') (5') GAGGTCAACAACCCACAGGT (3') 14 14 Обратный Back (5') GGGACAATCTCTTCCCCACC (3') (5') GGGACAATCTCTTCCCCACC (3') 15 15 IL-Ιβ IL-Ιβ Прямой Straight (5') TTCGACACATGGGATAACGA (3') (5') TTCGACACATGGGATAACGA (3') 16 16 Обратный Back (5') TCTTTCAACACGCAGGACAG (3') (5') TCTTTCAACACGCAGGACAG (3') 17 17 IL-6 IL-6 Прямой Straight (5') AAAGAGGCACTGCCAGAAAA (3') (5') AAAGAGGCACTGCCAGAAAAA (3') 18 18 Обратный Back (5') ATCTGAGGTGCCCATGCTAC (3') (5') ATCTGAGGTGCCCATGCTAC (3') 19 19 IL-17A IL-17A Прямой Straight (5') GGTCAACCTCAAAGTCTTTAACTC (3') (5') GGTCAACCTCAAAGTCTTTAACTC (3') 20 20 Обратный Back (5') TTAAAAATGCAAGTAAGTTTGCTG (3') (5') TTAAAAATGCAAGTAAGTTTGCTG (3') 21 21 TNF-a TNF-a Прямой Straight (5') AACATCCAACCTTCCCAAACG (3') (5') AACATCCAACCTTCCCAAACG (3') 22 22 Обратный Back (5') GACCCTAAGCCCCCAATTCTC (3') (5') GACCCTAAGCCCCCAATTCTC (3') 23 23

В результате подтвердили, что соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, может более заметно уменьшать экспрессию генов, ассоциированных с образованием воспаления, даже при намного более низкой концентрации по сравнению с изотретиноином (фиг. 4).As a result, it was confirmed that a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention can more markedly reduce the expression of inflammation-associated genes even at a much lower concentration compared to isotretinoin (Fig. 4).

Экспериментальный пример 5. Ингибирующий эффект соединений по настоящему изобретению на активность MMP.Experimental Example 5 Inhibitory effect of the compounds of the present invention on MMP activity.

Подтвердили эффект соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на активность MMP, индуцированную вызывающими акне бактериями. Конкретно, кератиноциты HaCaT культивировали и затем клетки предварительно обрабатывали с использованием 1 или 10 мкМ соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноина, через 30 мин обрабатывали вызывающими акне бактериями (P. acnes) в качестве стимулятора. Культуральную среду собирали через 48 ч культивирования и проводили реакцию культуральной среды и буфера для зимографии (Sigma Aldrich) в соотношении 1:1, затем 20 мкл реакционного раствора разделяли посредством электрофореза в 8% натрий додецилсульфат-полиакриламидном геле (SDS-PAGE) (10% желатин). Затем гель промывали три раза по 10 мин в буфере 0,1% Triton X-100 (Sigma Aldrich), активировали в буфере TNCB (Sigma Aldrich) и окрашивали с использованием Кумасси синего, затем измеряли интенсивность полосы.The effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on MMP activity induced by acne-causing bacteria was confirmed. Specifically, HaCaT keratinocytes were cultured and then the cells were pre-treated with 1 or 10 μM of the isotretinoin-peptide compound of the present invention or isotretinoin, treated with acne-causing bacteria (P. acnes) as a stimulant 30 minutes later. The culture medium was collected after 48 hours of cultivation and the culture medium and zymography buffer (Sigma Aldrich) were reacted in a ratio of 1:1, then 20 μl of the reaction solution was separated by electrophoresis in 8% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) (10% gelatin). The gel was then washed three times for 10 min in 0.1% Triton X-100 buffer (Sigma Aldrich), activated in TNCB buffer (Sigma Aldrich) and stained with Coomassie blue, then the intensity of the band was measured.

В результате подтвердили, что соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, может более заметно уменьшать экспрессию гена MMP-9, ассоциированного с образованием морщин кожи, даже при намного более низкой концентрации по сравнению с изотретиноином (фиг. 5).As a result, it was confirmed that a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention can more markedly reduce the expression of the skin wrinkle-associated MMP-9 gene, even at a much lower concentration compared with isotretinoin (Fig. 5).

Экспериментальный пример 6. Ингибирующий эффект соединений по настоящему изобретению на внутриклеточные активные формы кислорода.Experimental Example 6 Inhibitory effect of the compounds of the present invention on intracellular reactive oxygen species.

Подтвердили эффект соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на образование внутриклеточных активных форм кислорода (ROS), индуцированное вызывающими акне бактериями. Конкретно, себоциты инокулировали в 6-луночные планшеты при 1 χ 106 клеток/лунку и культивировали в течение ночи. Клетки предварительно обрабатывали с использованием соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноина и через 30 мин, обрабатывали вызывающими акне бактериями (P. acnes) в качестве стимулятора в концентрации 100 мкг/мл и культивировали в течение 48 ч. Клетки обрабатывали с использованием DCF-DH и через 30 мин окислительную активность измеряли по степени флуоресценции с использованием FACS.The effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on the generation of intracellular reactive oxygen species (ROS) induced by acne-causing bacteria was confirmed. Specifically, sebocytes were inoculated into 6-well plates at 1 x 10 6 cells/well and cultured overnight. Cells were pre-treated with the compound isotretinoin-peptide of the present invention or isotretinoin and after 30 min, treated with acne-causing bacteria (P. acnes) as a stimulator at a concentration of 100 μg/ml and cultured for 48 h. Cells were treated with DCF- DH and after 30 min, oxidative activity was measured by the degree of fluorescence using FACS.

В результате подтвердили, что соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, может более заметно уменьшать образование внутриклеточных ROS, индуцированное вызывающими акне бактериями, по сравнению с изотретиноином (фиг. 6).As a result, it was confirmed that a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention can more markedly reduce the formation of intracellular ROS induced by acne-causing bacteria compared with isotretinoin (Fig. 6 ).

Экспериментальный пример 7. Эффект соединений по настоящему изобретению на липолиз (1).Experimental Example 7 Effect of the compounds of the present invention on lipolysis (1).

Адипоциты запасают дополнительную энергию в форме нейтральных жиров в липидных каплях, но когда энергия требуется, они распадаются на жирные кислоты и глицерин посредством ферментов, таких как адипозная триглицеридлипаза, HSL и моноглицеридлипаза, для получения энергии или для использования для передачи сигналов клетками или для синтеза жира. Таким образом, авторы настоящего изобретения проводили высвобождение свободного глицерина и анализ внутриклеточного содержания триглицерина, чтобы подтвердить эффект соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на липолиз. Конкретно, клетки 3T3-L1 инокулировали в 24-луночные планшеты при 2x104 клеток/лунку (DMEM, 10% BCS) и культивировали в течение 2 суток. Проводили замену на среду DMEM, содержащую 10% FBS, и затем клетки культивировали в течение 2 суток, доAdipocytes store additional energy in the form of neutral fats in lipid droplets, but when energy is required, they are broken down into fatty acids and glycerol via enzymes such as adipose triglyceride lipase, HSL, and monoglyceride lipase for energy or for use in cell signaling or for fat synthesis . Thus, the present inventors conducted free glycerol release and intracellular triglycerol analysis to confirm the effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on lipolysis. Specifically, 3T3-L1 cells were inoculated into 24-well plates at 2x104 cells/well (DMEM, 10% BCS) and cultured for 2 days. Changed to DMEM medium containing 10% FBS, and then the cells were cultured for 2 days until

- 9 041637 полнительно культивировали в течение 2 суток в DMEM (10% FBS), содержащей 0,5 мМ IBMX, 0,25 мкМ дексаметазон и 10 мкг/мл инсулина. Затем клетки культивировали в течение 2 суток в DMEM (10% FBS), содержащей 1 мкг/мл инсулина, и затем снова культивировали в течение 3 суток в DMEM (10% FBS), содержащей 1 мкг/мл инсулина. После проведения замены на среду с FBS клетки обрабатывали соединением изотретиноин-пептид по настоящему изобретению или изотретиноином и культуральную среду собирали на сутки 8 дифференцировки для проведения анализа глицерина с использованием набора для колориметрического анализа глицерина (Cayman).- 9 041637 additionally cultured for 2 days in DMEM (10% FBS) containing 0.5 mm IBMX, 0.25 μm dexamethasone and 10 μg/ml insulin. The cells were then cultured for 2 days in DMEM (10% FBS) containing 1 μg/ml insulin, and then cultured again for 3 days in DMEM (10% FBS) containing 1 μg/ml insulin. After changing to FBS medium, the cells were treated with the isotretinoin-peptide compound of the present invention or isotretinoin and the culture medium was harvested on differentiation day 8 for glycerol analysis using a glycerol colorimetric assay kit (Cayman).

В результате, соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, заметно увеличивало высвобождение глицерина посредством липолиза по сравнению с изотретиноином (фиг. 7).As a result, a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention markedly increased the release of glycerol by lipolysis compared to isotretinoin (Fig. 7).

Экспериментальный пример 8. Эффект соединений по настоящему изобретению на липолиз (2).Experimental Example 8 Effect of the compounds of the present invention on lipolysis (2).

Проводили анализ RT-ПЦР и окрашивание масляным красным О таким же способом, как описано в экспериментальном примере 3, для подтверждения эффекта соединения изотретиноин-пептид по настоящему изобретению, синтезированного в примере 1-2, на экспрессию генов, ассоциированных с липолизом. При этом гены CPTla, Acox, HSL и ATGL использовали в качестве генов, вовлеченных в липолиз, и праймеры, как показано в табл. 5 ниже, использовали в качестве праймеров, специфических для этих генов. В случае TNF-α, использованного в качестве контрольной группы, его липолитический эффект является общеизвестным, и он имеет такую функцию, как фосфорилирование липолитического фактора HSL и увеличение экспрессии ATGL, и таким образом, его использовали в качестве контрольной группы для сравнения с эффектами соединений по настоящему изобретению.RT-PCR analysis and Oil Red O staining were carried out in the same manner as described in Experimental Example 3 to confirm the effect of the isotretinoin-peptide compound of the present invention synthesized in Example 1-2 on the expression of lipolysis-associated genes. In this case, the CPTla, Acox, HSL and ATGL genes were used as genes involved in lipolysis, and primers, as shown in table. 5 below were used as primers specific for these genes. In the case of TNF-α used as a control group, its lipolytic effect is well-known, and it has the function of phosphorylation of lipolytic factor HSL and increase in expression of ATGL, and thus it was used as a control group to compare with the effects of compounds according to the present invention.

_____________________________________________________________________ Таблица 5___________________________________________________________ Table 5

Фактор Factor Последовательность праймера Primer sequence SEQ ГО NO SEQ GO NO CPTla CPTla Прямой Straight (5') CGTACCAAGTAGCCAAGGCA(3') (5') CGTACCAAGTAGCCAAGGCA(3') 24 24 Обратный Back (5') CAGGAACGCACAGTCTCAGT (3') (5') CAGGAACGCACAGTCTCAGT (3') 25 25 Acox Acox Прямой Straight (5') CCGCCGAGAGATCGAGAAC (3') (5') CCGCCGAGAGATCGAGAAC (3') 26 26 Обратный Back (5') CAGTTGCCTGGTGAAGCAAG (3') (5') CAGTTGCCTGGTGAAGCAAG (3') 27 27 HSL HSL Прямой Straight (5') GGACACACACACACCTG (3') (5') GGACACACACACACCTG (3') 28 28 Обратный Back (5') CCCTTTCGCAGCAACTTTAG (3') (5') CCCTTTCGCAGCAACTTTAG (3') 29 29 ATGL ATGL Прямой Straight (5') TCGTGGATGTTGGTGGAGCT (3') (5') TCGTGGATGTTGGTGGAGCT (3') 30 thirty Обратный Back (5') TGTGGCCTCATTCCTCCTA (3') (5') TGTGGCCTCATTCCTCCTA (3') 31 31

В результате, подтвердили, что соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, может заметно увеличивать экспрессию генов, ассоциированных с липолизом, по сравнению с изотретиноином (фиг. 8А), а также уменьшать внутриклеточное накопление жира (фиг. 8В).As a result, it was confirmed that a compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention can markedly increase the expression of lipolysis-associated genes compared with isotretinoin (Fig. 8A). and also reduce intracellular fat accumulation (FIG. 8B).

Пример получения состава 1. Средство для смягчения кожи.Formulation Example 1. Skin softener.

Средство для смягчения кожи, содержащее соединение по настоящему изобретению, полученное в примере 1-2 выше, и состоящее из композиции ниже, получали в соответствии с общим способом получения лосьонов.A skin softening agent containing the compound of the present invention obtained in Example 1-2 above and consisting of the composition below was prepared according to the general method for preparing lotions.

____________________________________________________________________ Таблица 6________________________________________________________________________ Table 6

Ингредиент Ingredient Содержание (% масс.) Content (% mass) Соединение по настоящему изобретению Compound of the present invention 2,5 2.5 1,3-бутиленгликоль 1,3-butylene glycol 6 6 Глицерин Glycerol 4 4 PEG 1500 PEG 1500 1 1 Гиалуронат натрия sodium hyaluronate 1 1 Полисорбат 20 Polysorbate 20 0,5 0.5 Этанол ethanol 8 8 Консервант, пигмент preservative, pigment соответствующее количество appropriate amount Бензофенон-9 Benzophenone-9 0,05 0.05 Ароматизатор flavoring очень малое количество very small amount Очищенная вода Purified water остальное количество the rest of the quantity Всего Total 100 100

- 10041637- 10041637

Пример получения состава 2. Питательный крем.Example of obtaining composition 2. Nourishing cream.

Питательный крем, содержащий соединение по настоящему изобретению, полученное в примере 1 2 выше, и состоящий из композиции ниже, получали в соответствии с общим способом получения питательных кремов.A nourishing cream containing the compound of the present invention obtained in Example 1-2 above and consisting of the composition below was prepared according to the general method for producing nourishing creams.

Таблица 7Table 7

Ингредиент Ingredient Содержание (% масс.) Content (% mass) Соединение по настоящему изобретению The compound of the present invention 2,5 2.5 Масло пенника лугового meadowfoam oil 3 3 Цетеариловый спирт Cetearyl alcohol 1,5 1.5 Стеариновая кислота Stearic acid 1,5 1.5 Глицерил стеарат Glyceryl stearate 1,5 1.5 Вазелиновое масло Vaseline oil 10 10 Пчелиный воск Beeswax 2 2 Полисорбат 60 Сорбитансесквиолеат Сквалан 1,3-бутиленгликоль Глицерин Триэтаноламин Ацетат токоферила Polysorbate 60 Sorbitansesquioleate Squalane 1,3-Butylene Glycol Glycerin Triethanolamine Tocopheryl Acetate 0,6 2,5 3 3 5 0,5 0,5 0.6 2.5 3 3 5 0.5 0.5 Консервант, пигмент preservative, pigment соответствующее количество appropriate amount Ароматизатор flavoring соответствующее количество appropriate amount Очищенная вода Purified water остальное количество the rest of the quantity Всего Total 100 100

Пример получения состава 3. Питательный лосьон.Formulation example 3. Nourishing lotion.

Питательный лосьон, содержащий соединение по настоящему изобретению, полученное в примере 1-2 выше, и состоящий из композиции ниже, получали в соответствии с общим способом получения лосьонов.A nourishing lotion containing the compound of the present invention obtained in Example 1-2 above and consisting of the composition below was prepared according to the general method for preparing lotions.

___________________________________________ Таблица 8___________________________________________ Table 8

Ингредиент Ingredient Содержание (% масс.) Content (% mass) Соединение по настоящему изобретению Compound of the present invention 2,5 2.5 1,3-бутиленгликоль 1,3-butylene glycol 4 4 Глицерин Glycerol 4 4 Цетеариловый спирт Cetearyl alcohol 0,8 0.8 Глицерил стеарат Glyceryl stearate 1 1 Триэтаноламин Triethanolamine 0,13 0.13 Ацетат токоферила tocopheryl acetate о,з oh, s Вазелиновое масло Vaseline oil 5 5 Сквалан Squalane 3 3 Масло ореха макадамия Macadamia nut oil 2 2 Полисорбат 60 Polysorbate 60 1,5 1.5 Сорбитансесквиолеат Sorbitansesquioleate 0,5 0.5 Карбоксивинилполимер Carboxyvinylpolymer 1 1 Консервант, пигмент preservative, pigment соответствующее количество appropriate amount Ароматизатор flavoring соответствующее количество appropriate amount Очищенная вода Purified water остальное количество the rest of the quantity Всего Total 100 100

- 11 041637- 11 041637

Пример получения состава 4. Эссенция.An example of obtaining the composition 4. Essence.

Эссенцию, содержащую соединение по настоящему изобретению, полученное в примере 1-2 выше, и состоящую из композиции ниже, получали в соответствии с общим способом получения эссенций.An essence containing the compound of the present invention obtained in Example 1-2 above and consisting of the composition below was obtained in accordance with the general method for producing essences.

Таблица 9Table 9

Ингредиент Ingredient Содержание (% масс.) Content (% mass) Соединение по настоящему изобретению The compound of the present invention 2,5 2.5 Глицерин Glycerol 10 10 1,3-бутиленгликоль 1,3-butylene glycol 5 5 PEG 1500 PEG 1500 2 2 Аллантоин Allantoin 0,1 0.1 DL-пантенол DL-panthenol 0,3 0.3 ЭДТА-2№ EDTA-2№ 0,02 0.02 Г идроксиэтилцеллюлоза Hydroxyethylcellulose 0,1 0.1 Гиалуронат натрия sodium hyaluronate 8 8 Карбоксивинилполимер Carboxyvinylpolymer 0,2 0.2 Триэтаноламин Triethanolamine 0,18 0.18 Октилд од ецет-16 Oktild od etset-16 0,4 0.4 Этанол ethanol 6 6 Ароматизатор, консервант, пигмент flavor, preservative, pigment соответствующее количество appropriate amount Очищенная вода Purified water остальное количество the rest of the quantity Всего Total 100 100

Промышленная применимостьIndustrial Applicability

Соединение имеющее структуру, в которой изотретиноин и пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи, в соответствии с настоящим изобретением, имеет превосходную физиологическую активность, такую как антибиотическое, противовоспалительное или антиоксидантное действие, а также имеет превосходные свойства, такие как растворимость в воде и т.п., и, таким образом, его можно использовать в различных областях промышленности, например, для лекарственных средств или косметических средств.The compound having a structure in which isotretinoin and a peptide are linked to each other through a covalent bond according to the present invention has excellent physiological activity such as antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant action, and also has excellent properties such as water solubility, etc. .p., and thus it can be used in various industries, such as medicines or cosmetics.

Список последовательностейSequence list

SEQ ID NO: 1: Arg Arg Leu He Asp Arg Thr Asn Ala Asn Phe Leu Vai MetSEQ ID NO: 1: Arg Arg Leu He Asp Arg Thr Asn Ala Asn Phe Leu Vai Met

SEQ ID NO: 2: tcggtggaca agaacagcaaSEQ ID NO: 2: tcggtggaca agaacagcaa

SEQ ID NO: 3: ccttgaccaa ggagctctcaSEQ ID NO: 3: ccttgaccaa ggagctctca

SEQ ID NO: 4: ttcgctgatg cactgcctatSEQ ID NO: 4: ttcgctgatg cactgcctat

SEQ ID NO: 5: acagactcgg cactcaatggSEQ ID NO: 5: acagactcgg cactcaatgg

--

Claims (10)

SEQ Ш NO 6: gaccgacatc gaaggtgaagSEQ W NO 6: gaccgacatc gaaggtgaag SEQ Ш NO 7: aagagaggag ctcaatgtgg сSEQ W NO 7: aagagaggag ctcaatgtgg c SEQ Ш NO 8: ggagccaaaa gggtcatcatSEQ W NO 8: ggagccaaaa gggtcatcat SEQ Ш NO 9: gtgatggcat ggactgtggtSEQ W NO 9: gtgatggcat ggactgtggt SEQ Ш NO 10: gaatgtttgg ggatatttca gSEQ W NO 10: gaatgtttgg ggatatttca g SEQ Ш NO 11: ttctgctatc agtctgtcca gSEQ W NO 11: ttctgctatc agtctgtcca g SEQ Ш NO 12: catcagcgta aatggggattSEQ W NO 12: catcagcgta aatggggatt SEQ Ш NO 13: acacattcca ccaccagcttSEQ W NO 13: acacattcca ccaccagctt SEQ Ш NO 14: gaggtcaaca acccacaggtSEQ W NO 14: gaggtcaaca acccacaggt SEQ Ш NO 15: gggacaatct cttccccaccSEQ W NO 15: gggacaatct cttccccacc SEQ Ш NO 16: ttcgacacat gggataacgaSEQ W NO 16: ttcgacacat gggataacga SEQ Ш NO 17: tctttcaaca cgcaggacagSEQ W NO 17: tctttcaaca cgcaggacag SEQ Ш NO 18: aaagaggcactgccagaaaaSEQ W NO 18: aaagaggcactgccagaaaa SEQ Ш NO 19: atctgaggtg cccatgctacSEQ W NO 19: atctgaggtg cccatgctac SEQ Ш NO 20: ggtcaacctc aaagtcttta actcSEQ W NO 20: ggtcaacctc aaagtcttta actc SEQ Ш NO 21: ttaaaaatgc aagtaagttt gctgSEQ W NO 21: ttaaaaatgc aagtaagttt gctg SEQ Ш NO 22: aacatccaac cttcccaaac gSEQ W NO 22: aacatccaac cttcccaaac g SEQ ГО NO 23: gaccctaagc ccccaattct cSEQ GO NO 23: gaccctaagc ccccaattct c SEQ ГО NO 24: cgtaccaagt agccaaggcaSEQ GO NO 24: cgtaccaagt agccaaggca SEQ ГО NO 25: caggaacgca cagtctcagtSEQ GO NO 25: caggaacgca cagtctcagt SEQ ГО NO 26: ccgccgagag atcgagaacSEQ GO NO 26: ccgccgagag atcgagaac SEQ ГО NO 27: cagttgcctg gtgaagcaagSEQ GO NO 27: cagttgcctg gtgaagcaag SEQ ГО NO 28: ggacacacac acacctgSEQ GO NO 28: ggacacacacacacctg SEQ ГО NO 29: ccctttcgca gcaactttagSEQ GO NO 29: ccctttcgca gcaactttag SEQ ГО NO 30: tcgtggatgt tggtggagctSEQ GO NO 30: tcgtggatgt tggtggagct SEQ ГО NO 31: tgtggcctca ttcctcctaSEQ GO NO 31: tgtggcctca ttcctccta ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM 1. Соединение, имеющее структуру, в которой изотретиноин и водорастворимый пептид связаны друг с другом посредством ковалентной связи;1. A compound having a structure in which isotretinoin and a water-soluble peptide are linked to each other via a covalent bond; в котором водорастворимый пептид состоит из 8-30 аминокислот;in which the water-soluble peptide consists of 8-30 amino acids; в котором доля аминокислот, имеющих гидрофильную боковую цепь, в водорастворимом пептиде составляет от 50 до 100%, где доля аминокислот, имеющих гидрофобную боковую цепь, в водорастворимом пептиде составляет от 0 до 50%;in which the proportion of amino acids having a hydrophilic side chain in the water-soluble peptide is from 50 to 100%, where the proportion of amino acids having a hydrophobic side chain in the water-soluble peptide is from 0 to 50%; в котором аминокислоты, имеющие гидрофильную боковую цепь, выбраны из группы, состоящей из аргинина (Arg), гистидина (His), лизина (Lys), аспарагиновой кислоты (Asp), глутаминовой кислоты (Glu), серина (Ser), треонина (Thr), аспарагина (Asn), глутамина (Gln), цистеина (Cys), селеноцистеина (Sec), глицина (Gly) и пролина (Pro);wherein the amino acids having a hydrophilic side chain are selected from the group consisting of arginine (Arg), histidine (His), lysine (Lys), aspartic acid (Asp), glutamic acid (Glu), serine (Ser), threonine (Thr ), asparagine (Asn), glutamine (Gln), cysteine (Cys), selenocysteine (Sec), glycine (Gly), and proline (Pro); в котором аминокислоты, имеющие гидрофобную боковую цепь, выбраны из группы, состоящей из аланина (Ala), валина (Val), изолейцина (Ile), лейцина (Leu), метионина (Met), фенилаланина (Phe), тирозина (Tyr) и триптофана (Trp).wherein the amino acids having a hydrophobic side chain are selected from the group consisting of alanine (Ala), valine (Val), isoleucine (Ile), leucine (Leu), methionine (Met), phenylalanine (Phe), tyrosine (Tyr), and tryptophan (Trp). 2. Соединение по п.1, в котором пептид состоит из последовательности из 8-15 аминокислот.2. The compound according to claim 1, wherein the peptide consists of a sequence of 8-15 amino acids. 3. Соединение по п.1, в котором доля аминокислот, имеющих гидрофильную боковую цепь, в водорастворимом пептиде составляет 70% или более.3. The compound according to claim 1, wherein the proportion of amino acids having a hydrophilic side chain in the water-soluble peptide is 70% or more. 4. Соединение по п.1, в котором доля аминокислот, имеющих гидрофильную боковую цепь, в водорастворимом пептиде составляет 90% или более.4. The compound of claim 1, wherein the proportion of amino acids having a hydrophilic side chain in the water-soluble peptide is 90% or more. 5. Соединение по п.1, в котором количество аминокислот, имеющих гидрофобную боковую цепь, в водорастворимом пептиде составляет 5 или менее.5. The compound of claim 1, wherein the amount of amino acids having a hydrophobic side chain in the water-soluble peptide is 5 or less. 6. Соединение по п.1, в котором количество аминокислот, имеющих гидрофобную боковую цепь, в водорастворимом пептиде составляет 3 или менее.6. The compound of claim 1, wherein the amount of amino acids having a hydrophobic side chain in the water-soluble peptide is 3 or less. 7. Соединение по п.1, в котором водорастворимый пептид представляет собой пептид, имеющий аминокислотную последовательность, состоящую из SEQ ID NO: 1.7. The compound of claim 1, wherein the water-soluble peptide is a peptide having an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 1. 8. Антибиотическая, противовоспалительная или антиоксидантная фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-7.8. An antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant pharmaceutical composition containing an effective amount of a compound according to any one of claims 1-7. 9. Антибиотическая, противовоспалительная или антиоксидантная косметическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-7.9. Antibiotic, anti-inflammatory or antioxidant cosmetic composition containing an effective amount of a compound according to any one of claims 1-7. 10. Косметическая композиция по п.9, имеющая состав, выбранный из группы, состоящей из средства для смягчения кожи, питательного лосьона, питательного крема, массажного крема, эссенции, крема10. Cosmetic composition according to claim 9, having a composition selected from the group consisting of skin softener, nourishing lotion, nourishing cream, massage cream, essence, cream --
EA201992544 2017-05-11 2018-05-11 ISOTRETINOIN CONJUGATE WITH PEPTIDE EA041637B1 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2017-0058866 2017-05-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EA041637B1 true EA041637B1 (en) 2022-11-16

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12005123B2 (en) Conjugate of isotretinoin and peptide
KR102160565B1 (en) Finasteride and peptide conjugate
US11617796B2 (en) Conjugate of minoxidil and peptide
KR102160566B1 (en) Conjugate of minoxidil and peptide
AU2017399481B2 (en) Conjugate of salicylic acid and peptide
EA041637B1 (en) ISOTRETINOIN CONJUGATE WITH PEPTIDE
OA19680A (en) Conjugate of Isotretinoin and Peptide.
KR20180125419A (en) Conjugate of isotretinoin and peptide
EA041180B1 (en) SALICYLIC ACID AND PEPTIDE CONJUGATE
OA19189A (en) Conjugate of Minoxidil and Peptide.
KR20180094693A (en) Conjugate of salicylic acid and peptide