EA041266B1

EA041266B1 - BISPECIFIC ANTIBODIES-CHECKPOINT INHIBITORS

Info

Publication number: EA041266B1
Application number: EA201992757
Authority: EA
Inventors: Майкл Дивейн Кейлос; Ивэнь Ли; Дейл Линкольн Людвиг; Грегори Д. Плоуман; Ян ШЭНЬ; Игор Эдмондо Паоло Д'АНДЖЕЛО
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани; Займворкс, Инк.
Priority date: 2017-07-10
Filing date: 2018-07-09
Publication date: 2022-09-30

Description

Данное изобретение относится к области медицины. В частности, данное изобретение относится к биспецифическим антителам, которые связывают человеческий белок 1 программируемой клеточной гибели (PD-1) и лиганд 1 человеческого PD-1 (PD-L1), и могут быть полезны для лечения солидных и гематологических опухолей отдельно и в комбинации с химиотерапией и другими противораковыми терапевтическими средствами.This invention relates to the field of medicine. In particular, this invention relates to bispecific antibodies that bind human programmed cell death protein 1 (PD-1) and human PD-1 ligand 1 (PD-L1), and may be useful for the treatment of solid and hematological tumors alone and in combination. with chemotherapy and other anti-cancer therapies.

Пути иммунных контрольных точек используются для поддержания аутотолерантности и контроля активации T-лимфоцитов, но раковые клетки могут использовать эти пути для подавления противоопухолевого ответа и предотвращения их уничтожения. Путь PD-1/PD-L1 является одной из таких иммунных контрольных точек. Человеческий PD-1 обнаруживается на T-лимфоцитах, а человеческий PD-L1 аберрантно экспрессируется различными типами опухолей; связывание PD-L1 с PD-1 ингибирует пролиферацию T-лимфоцитов и выработку цитокинов. Ось ингибирования PD-1/PD-L1 используется опухолями как часть естественного селективного процесса, который формирует эволюцию опухоли в контексте противоопухолевого иммунного ответа.Immune checkpoint pathways are used to maintain self-tolerance and control T-lymphocyte activation, but cancer cells can use these pathways to suppress the antitumor response and prevent them from being killed. The PD-1/PD-L1 pathway is one such immune checkpoint. Human PD-1 is found on T-lymphocytes, and human PD-L1 is aberrantly expressed by various types of tumors; binding of PD-L1 to PD-1 inhibits T-lymphocyte proliferation and cytokine production. The PD-1/PD-L1 inhibition axis is used by tumors as part of a natural selection process that shapes tumor evolution in the context of the antitumor immune response.

В то время как терапевтические средства, нацеленные на путь PD-1/PD-L1, прошли клиническую проверку и привели к значительным клиническим достижениям в лечении рака, только для части пациентов такое лечение является полезным(см., например, Sharma, P. and Allison, J.P., Immune checkpoint targeting in cancer therapy: toward combination strategies with curative potential. Cell. 2015; 161:2015-14). Например, только примерно 20% пациентов с немелкоклеточным раком легкого (НМРЛ) имели ответ на лечение антителом PD-1.While therapies targeting the PD-1/PD-L1 pathway have been clinically tested and have led to significant clinical advances in the treatment of cancer, only a subset of patients benefit from such treatment (see, e.g., Sharma, P. and Allison, J.P., Immune checkpoint targeting in cancer therapy: towards combination strategies with curative potential Cell 2015;161:2015-14. For example, only about 20% of patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) responded to PD-1 antibody treatment.

Хотя в настоящее время проводятся клинические испытания, включающие совместное введение антитела к PD-L1 и антитела к PD-1 (смотрите, например, EUROPEAN SOCIETY FOR MEDICAL ONCOLOGY (ESMO) Abstract #2130; Oct. 2016), эти схемы лечения включают в себя инфузии двух отдельных продуктов-антител в относительно высоких дозах для каждого антитела. Кроме того, пока неизвестно, обеспечат ли такие комбинированные терапии повышение эффективности, не ухудшая профиль побочных эффектов по сравнению с монотерапией.Although clinical trials are currently underway involving the co-administration of an anti-PD-L1 antibody and an anti-PD-1 antibody (see, for example, EUROPEAN SOCIETY FOR MEDICAL ONCOLOGY (ESMO) Abstract #2130; Oct. 2016), these regimens include infusions of two separate antibody products at relatively high doses for each antibody. In addition, it is not yet known whether such combination therapies will provide an increase in efficacy without worsening the side effect profile compared to monotherapy.

В WO 2017/087547, в частности, раскрыты анти-PD-L1 антитела и в целом раскрыты гетеродимерные молекулы (например, биспецифический агент), содержащие PD-L1-связывающий агент, описанный в данном документе, и второй иммунотерапевтический агент. В некоторых вариантах осуществления, второй иммунотерапевтический агент может включать в себя антитело, которое блокирует иммуносупрессивные функции, такое как анти-PD антитело. Однако в этой публикации не были раскрыты какие-либо специфические биспецифические агенты PD-L1/PD-1. Таким образом, биспецифическое антитело, которое связывает PD-L1 и PD-1 с высокой аффинностью, эффективно нейтрализует активацию PD-L1 и PD-1 всеми лигандами семейства PDx и/или обеспечивает лучшую активность по сравнению с известными терапевтическими средствами, нацеленными на путь PD-1/PD-L1, или даже их комбинациями, является необходимым в качестве более эффективного фармакологического вмешательства для некоторых видов рака. В частности, желательны такие биспецифические анти-PD-L1/PD-1 антитела, которые: i) могут более эффективно лечить раковые заболевания, характеризующиеся как имеющие умеренные или высокие уровни экспрессии PD-L1 или PD-1, и ii) демонстрируют стабильность in vivo, физическую и химическую стабильность, включая, но не ограничиваясь ими, термическую стабильность, растворимость, низкую само-агрегацию и фармакокинетические характеристики, которые являются приемлемыми для разработки и/или применения в лечении рака.WO 2017/087547 specifically discloses anti-PD-L1 antibodies and generally discloses heterodimeric molecules (eg, a bispecific agent) comprising a PD-L1 binding agent as described herein and a second immunotherapeutic agent. In some embodiments, the second immunotherapeutic agent may include an antibody that blocks immunosuppressive functions, such as an anti-PD antibody. However, this publication did not disclose any specific PD-L1/PD-1 bispecific agents. Thus, a bispecific antibody that binds PD-L1 and PD-1 with high affinity effectively neutralizes PD-L1 and PD-1 activation by all PDx family ligands and/or provides better activity than known therapeutic agents targeting the PD pathway. -1/PD-L1, or even combinations thereof, is needed as a more effective pharmacological intervention for some cancers. In particular, bispecific anti-PD-L1/PD-1 antibodies are desirable that: i) can more effectively treat cancers characterized as having moderate or high levels of PD-L1 or PD-1 expression, and ii) exhibit stability in vivo, physical and chemical stability, including, but not limited to, thermal stability, solubility, low self-aggregation, and pharmacokinetic characteristics that are acceptable for development and/or use in cancer treatment.

Соответственно согласно данному изобретению предложены новые гетеродимерные биспецифические антитела, которые могут быть одновременно нацелены на PD-L1 и PD-1, с помощью спаривания двух разных тяжелых цепей и двух разных легких цепей в одно IgG-подобное антитело. Кроме того, согласно данному изобретению предложены гетеродимерные биспецифические антитела против PD-L1 человека и против PD-1 человека, которые обладают одним или большим количеством следующих признаков: блокируют все три взаимодействия оси PD (связывание PD-L1 с PD-1, связывание PD-L2 с PD-1, и связывание PD-L1 с CD80), блокируют сверхэкспрессирующие PD-L1 и PD-1 клетки, увеличивают активацию T-лимфоцитов и уничтожение опухолевых клеток из-за близости связанных T-лимфоцитов и опухолевых клеток, демонстрируют значительную противоопухолевую активность при неожиданно низких дозах в опухолевых клетках со средним или высоким уровнем экспрессии лиганда PD, и демонстрирует неожиданную физическую и химическую стабильность, включая, но не ограничиваясь стабильностью in vivo, термическую стабильность, растворимость, низкое само-объединение и фармакокинетические характеристики.Accordingly, the present invention provides novel heterodimeric bispecific antibodies that can be simultaneously targeted to PD-L1 and PD-1 by pairing two different heavy chains and two different light chains into one IgG-like antibody. In addition, the invention provides heterodimeric anti-human PD-L1 and anti-human PD-1 bispecific antibodies that have one or more of the following features: block all three PD axis interactions (PD-L1 binding to PD-1, PD- L2 to PD-1, and binding of PD-L1 to CD80), block PD-L1 and PD-1 overexpressing cells, increase T-lymphocyte activation and tumor cell killing due to proximity of bound T-lymphocytes and tumor cells, demonstrate significant anti-tumor activity. activity at unexpectedly low doses in tumor cells with medium or high levels of PD ligand expression, and exhibits unexpected physical and chemical stability, including but not limited to in vivo stability, thermal stability, solubility, low self-association, and pharmacokinetic characteristics.

Соответственно в данном изобретении предложено антитело, которое связывает человеческий PDL1 (SEQ ID NO: 1) и человеческий PD-1 (SEQ ID NO: 2), содержащее:Accordingly, the present invention provides an antibody that binds human PDL1 (SEQ ID NO: 1) and human PD-1 (SEQ ID NO: 2), comprising:

a) первую тяжелую цепь (HC1), содержащую вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3;a) a first heavy chain (HC1) containing a heavy chain variable region (HCVR) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3;

b) первую легкую цепь (LC1), содержащую вариабельную область легкой цепи (LCVR), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4;b) a first light chain (LC1) containing a light chain variable region (LCVR) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4;

c) вторую тяжелую цепь (HC2), содержащую вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; иc) a second heavy chain (HC2) comprising a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5; And

- 1 041266- 1 041266

d) вторую легкую цепь (LC2), содержащую вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.d) a second light chain (LC2) containing a light chain variable region containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.

В данном изобретении предложено антитело, которое связывает человеческий PD-L1 (SEQ ID NO: 1) и человеческий PD-1 (SEQ ID NO: 2), содержащее HC1, LC1, HC2, LC2, причем:The present invention provides an antibody that binds human PD-L1 (SEQ ID NO: 1) and human PD-1 (SEQ ID NO: 2) containing HC1, LC1, HC2, LC2, wherein:

a) указанная HC1 содержит CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 в HCVR;a) said HC1 contains a CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16, a CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17, and a CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18 in HCVR;

b) указанная LC1 содержит CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21 в LCVR;b) said LC1 contains a CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, a CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20, and a CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 in LCVR;

c) указанная HC2 содержит CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23 или SEQ ID NO: 24, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 в HCVR;c) said HC2 contains a CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, a CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: 24, and a CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 in HCVR;

d) указанная LC2 содержит CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 в LCVR;d) said LC2 contains a CDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26, a CDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27, and a CDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 in LCVR;

e) домен CH1 HC1 содержит аминокислотную замену S183K;e) the CH1 domain of HC1 contains the amino acid substitution S183K;

f) константная область LC1 представляет собой лямбда-вариант человека, содержащий аминокислотные замены S176E и Y178E;f) the LC1 constant region is a human lambda variant containing the amino acid substitutions S176E and Y178E;

g) домен CH1 HC2 содержит аминокислотные замены L128E, K147T, и Q175E;g) the HC2 CH1 domain contains the amino acid substitutions L128E, K147T, and Q175E;

h) константная область LC2 представляет собой каппа-вариант человека, содержащий аминокислотные замены S131R, V133G, и S176R; иh) the LC2 constant region is a human kappa variant containing the amino acid substitutions S131R, V133G, and S176R; And

i) домен CH3 HC1 содержит аминокислотные замены T350V, L351Y, F405A и Y407V и домен CH3 HC2 содержит аминокислотные замены T350V, T366L, K392L, и T394W; или домен CH3 HC1 содержит аминокислотные замены T350V, T366L, K392L и T394W и домен CH3 HC2 содержит аминокислотные замены T350V, L351Y, F405A и Y407V; и,i) the HC1 CH3 domain contains the T350V, L351Y, F405A and Y407V amino acid substitutions and the HC2 CH3 domain contains the T350V, T366L, K392L, and T394W amino acid substitutions; or the HC1 CH3 domain contains the T350V, T366L, K392L and T394W amino acid substitutions and the HC2 CH3 domain contains the T350V, L351Y, F405A and Y407V amino acid substitutions; And,

j) причем HC1 и HC2 представляют собой нуль варианты Fc IgG1 человека с иммунной эффекторной функцией, при этом нумерация соответствует индексу EC. Предпочтительно HCI и HC2 содержат аминокислотные замены L234A, L235A и D265S.j) where HC1 and HC2 are null human IgG1 Fc variants with immune effector function, with the numbering corresponding to the EC index. Preferably HCI and HC2 contain the amino acid substitutions L234A, L235A and D265S.

В данном изобретении предложено антитело, которое связывает человеческий PD-L1 (SEQ ID NO: 1) и человеческий PD-1 (SEQ ID NO: 2), содержащее:The present invention provides an antibody that binds human PD-L1 (SEQ ID NO: 1) and human PD-1 (SEQ ID NO: 2), comprising:

a) HC1, содержащую, в порядке от N-конца к C-концу, HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 в домене СН1, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 в домене СН2, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12 в домене CH3;a) HC1 comprising, in N-terminal to C-terminal order, HCVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 in the CH1 domain, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 in the CH2 domain, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 12 in the CH3 domain;

b) LC1, содержащую, в порядке от N-конца к C-концу, LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 в константной области;b) LC1 containing, in order from N-terminus to C-terminus, LCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 in the constant region;

c) HC2, содержащую, в порядке от N-конца к С-концу, HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13 в домене СН1, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 в домене СН2 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 в домене CH3; иc) HC2 comprising, in N-terminal to C-terminal order, HCVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 in the CH1 domain, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 in the CH2 domain, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 in the CH3 domain; And

d) LC2, содержащую, в порядке от N-конца, LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 в константной области, при условии, что когда аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 11 присутствует в домене CH3 указанной HC1, аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 12 присутствует в домене CH3 указанной HC2; или когда аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 12 присутствует в домене CH3 указанной HC1, аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 11 присутствует в домене CH3 указанной HC2.d) an LC2 containing, in N-terminal order, an LCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 in the constant region, provided that when the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 is present in the domain CH3 of said HC1, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 is present in the CH3 domain of said HC2; or when the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 is present in the CH3 domain of said HC1, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 is present in the CH3 domain of said HC2.

Согласно данному изобретению дополнительно предложено антитело, содержащее HC1, LC1, HC2 и LC2, причем:The invention further provides an antibody comprising HC1, LC1, HC2 and LC2, wherein:

a) указанная HC1 содержит, в порядке от N-конца до C-конца, HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 в домене СН1, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 в домене СН2 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 в домене CH3;a) said HC1 contains, in N-terminal to C-terminal order, an HCVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 in the CH1 domain, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 in the CH2 domain, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 in the CH3 domain;

b) указанная LC1, содержит, в порядке от N-конца к C-концу, LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 в константной области; иb) said LC1 contains, in N-terminal to C-terminal order, an LCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 in the constant region; And

c) указанная HC2 содержит, в порядке от N-конца до C-конца, HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13 в домене СН1, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 в области домена СН2, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 в домене CH3; иc) said HC2 contains, in N-terminal to C-terminal order, an HCVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 in the CH1 domain, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 in the region of the CH2 domain , and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 in the CH3 domain; And

- 2 041266- 2 041266

d) указанная LC2 содержит, в порядке от N-конца, LCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 в константной области.d) said LC2 contains, in N-terminal order, an LCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 in the constant region.

a) HC1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49;a) HC1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 49;

b) LC1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;b) LC1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30;

c) HC2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31; иc) HC2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 31; And

d) LC2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34.d) LC2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34.

c) HC2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33; иc) HC2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 33; And

a) HC1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29;a) HC1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29;

Согласно данному изобретению предложена клетка млекопитающего, содержащая молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 34, при этом клетка способна экспрессировать антитело согласно данному изобретению.The present invention provides a mammalian cell comprising a DNA molecule comprising a polynucleotide sequence encoding polypeptides having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 34, wherein the cell is capable of expressing antibody according to this invention.

Согласно данному изобретению предложена клетка млекопитающего, содержащая молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34, при этом клетка способна экспрессировать антитело согласно данному изобретению.The present invention provides a mammalian cell comprising a DNA molecule comprising a polynucleotide sequence encoding polypeptides having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 34, wherein the cell is capable of expressing antibody according to this invention.

Согласно данному изобретению предложена клетка млекопитающего, содержащая молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептиды, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33 и SEQ ID NO: 34, при этом клетка способна экспрессировать антитело согласно данному изобретению.The present invention provides a mammalian cell comprising a DNA molecule comprising a polynucleotide sequence encoding polypeptides having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33, and SEQ ID NO: 34, wherein the cell is capable of expressing antibody according to this invention.

В данном изобретении предложен способ получения антитела согласно данному изобретению, включающий в себя культивирование клетки млекопитающего согласно данному изобретению в условиях, в которых экспрессируется антитело, и выделение экспрессированного антитела.The present invention provides a method for producing an antibody of the present invention, comprising culturing a mammalian cell of the present invention under conditions in which the antibody is expressed and isolating the expressed antibody.

В данном изобретении предложено антитело, полученное способом согласно данному изобретению.The present invention provides an antibody produced by the method of the present invention.

В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая антитело согласно данному изобретению и приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.The present invention provides a pharmaceutical composition comprising an antibody of the present invention and an acceptable carrier, diluent or excipient.

В данном изобретении предложен способ лечения рака, включающий в себя введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, причем указанный способ включает в себя введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества антитела согласно данному изобретению, при этом указанный рак представляет собой Ходжкинскую или не-Ходжкинскую лимфомы, меланому, почечно-клеточный рак, рак почки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак желудка и пищевода, колоректальный рак, рак печени, гепатоцеллюлярный рак, холангиокарциному, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, трижды отрицательный рак молочной железы, рак яичников, рак эндометрия, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легкого (МКРЛ), немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), мезотелиому, плоскоклеточный рак головы и шеи (ПКРГШ), саркому мягких тканей или мультиформную глиобластому.The present invention provides a method of treating cancer comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention further provides a method of treating cancer, said method comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of an antibody of the present invention, said cancer being Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer, gastric and esophageal cancer, colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell lung cancer (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma (SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme.

В данном изобретении предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой меланому. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак легкого. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак легкого представляет собой НМКРЛ (плоскоклеточный или неплоскоклеточный), мелкоклеточный рак легкого или мезотелиому. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак головы и шеи. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак печени. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой колоректальный рак. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак поджелудочной железы. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак желудка. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак почки. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака,The present invention provides a method for treating cancer, wherein the cancer is melanoma. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is lung cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the lung cancer is NSCLC (squamous or non-squamous), small cell lung cancer, or mesothelioma. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is head and neck cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is liver cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is colorectal cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is pancreatic cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is gastric cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is kidney cancer. The present invention further provides a method for treating cancer,

- 3 041266 при этом рак представляет собой рак мочевого пузыря. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак предстательной железы. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак молочной железы. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак яичника. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак эндометрия. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой рак пищевода. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой саркому мягких тканей. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой холангиокарциному. В данном изобретении дополнительно предложен способ лечения рака, при этом рак представляет собой гепатоцеллюлярную карциному.- 3 041266 wherein the cancer is bladder cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is prostate cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is breast cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is ovarian cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is endometrial cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is esophageal cancer. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is a soft tissue sarcoma. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is cholangiocarcinoma. The present invention further provides a method for treating cancer, wherein the cancer is hepatocellular carcinoma.

В данном изобретении дополнительно предложены способы, включающие в себя введение эффективного количества антитела согласно данному изобретению одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с одним или большим количеством антиопухолевых агентов, выбранных из группы, состоящей из цисплатина, карбоплатина, дакарбазина, липосомального доксорубицина, доцетаксела, циклофосфамида и доксорубицина, навелбина, эрибулина, паклитаксела, связанных с белками частиц паклитаксела для инъекционной суспензии, иксабепилона, капецитабина, FOLFOX (лейковорин, фторурацил и оксалиплатин), FOLFIRI (лейковорин, фторурацил и иринотекан), гемцитабина, топотекана, липосомального иринотекана, пеметрекседа, цетуксимаба, ниволумаба, ипилимумаба, пидилизумаба, пембролизумаба, тремелимумаба, урелимумаба, лирилумаба, атезолизумаба, епикедостата и дурвалумаба.The invention further provides methods comprising administering an effective amount of an antibody of the invention simultaneously, separately or sequentially in combination with one or more anticancer agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbine, eribulin, paclitaxel, protein-bound paclitaxel particles for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), gemcitabine, topotecan, liposomal irinotecan, pemetrexed, cetuximab , nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, urelimumab, lirilumab, atezolizumab, epicedostat, and durvalumab.

В данном изобретении дополнительно предложены способы, включающие в себя введение эффективного количества антитела согласно данному изобретению одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с ионизирующим излучением.The invention further provides methods comprising administering an effective amount of an antibody of the invention simultaneously, separately, or sequentially in combination with ionizing radiation.

В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в терапии. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака, при этом указанный рак представляет собой Ходжкинскую или не-Ходжкинскую лимфомы, меланому, почечно-клеточный рак, рак почки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак желудка и пищевода, колоректальный рак, рак печени, гепатоцеллюлярный рак, холангиокарциному, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, трижды отрицательный рак молочной железы, рак яичников, рак эндометрия, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легкого (МКРЛ), немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), мезотелиому, плоскоклеточный рак головы и шеи (ПКРГШ), саркому мягких тканей или мультиформную глиобластому.The present invention provides an antibody of the present invention for use in therapy. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of cancer, said cancer being Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer, gastric and esophageal cancer, colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell lung cancer (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma (SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme.

В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении меланомы. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака легкого. В данном изобретении дополнительно предложено антитело согласно данному изобретению, при этом рак легкого представляет собой НМКРЛ (плоскоклеточный или неплоскоклеточный), мелкоклеточный рак легкого или мезотелиому. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака головы и шеи. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака печени. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении колоректального рака. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака поджелудочной железы. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака желудка. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака почки. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака мочевого пузыря. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака предстательной железы. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака молочной железы. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака яичника. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака эндометрия. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении рака пищевода. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении саркомы мягких тканей. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении холангиокарциномы. В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения в лечении гепатоцеллюлярной карциномы.The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of melanoma. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of lung cancer. The present invention further provides an antibody of the present invention wherein the lung cancer is NSCLC (squamous or non-squamous), small cell lung cancer, or mesothelioma. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of head and neck cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of liver cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of colorectal cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of pancreatic cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of gastric cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of kidney cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of bladder cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of prostate cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of breast cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of ovarian cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of endometrial cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of esophageal cancer. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of soft tissue sarcoma. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of cholangiocarcinoma. The present invention provides an antibody of the present invention for use in the treatment of hepatocellular carcinoma.

В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с одним или большим количеством антиопухолевых агентов, выбранных из группы, состоящей из цисплатина, карбоплатина, дакарбазина, липосомального доксорубицина, доцетаксела, циклофосфамида и доксорубицина, навелбина, эрибулина, паклитаксела, связанных с белками частиц паклитаксела для инъекционной суспензии, иксабепилона, капецитабина, FOLFOX (лейковорин, фторурацил и оксалиплатин), FOLFIRI (лейковорин, фторурацил иThe present invention provides an antibody of the present invention for use simultaneously, separately or sequentially in combination with one or more anticancer agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbine, eribulin, paclitaxel, paclitaxel protein-bound particles for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and

- 4 041266 иринотекан), гемцитабина, топотекана, липосомального иринотекана, пеметрекседа цетуксимаба, ниволумаба, ипилимумаба, пидилизумаба, пембролизумаба, тремелимумаба, урелимумаба, лирилумаба, атезолизумаба, епикедостата и дурвалумаба, в лечении рака.- 4 041266 irinotecan), gemcitabine, topotecan, liposomal irinotecan, pemetrexed cetuximab, nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, urelimumab, lirilumab, atezolizumab, epicedostat and durvalumab, in the treatment of cancer.

В данном изобретении предложено антитело согласно данному изобретению для применения одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с ионизирующим излучением в лечении рака.The present invention provides an antibody of the present invention for use simultaneously, separately or sequentially in combination with ionizing radiation in the treatment of cancer.

В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению, при этом указанный рак представляет собой Ходжкинскую или не-Ходжкинскую лимфомы, меланому, почечно-клеточный рак, рак почки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак желудка и пищевода, колоректальный рак, рак печени, гепатоцеллюлярный рак, холангиокарциному, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, трижды отрицательный рак молочной железы, рак яичников, рак эндометрия, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легкого (МКРЛ), немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), мезотелиому, плоскоклеточный рак головы и шеи (ПКРГШ), саркому мягких тканей или мультиформную глиобластому. В данном изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению, при этом рак легкого представляет собой НМРЛ (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), мелкоклеточный рак легкого или мезотелиому.The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention further provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention, said cancer being Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer , gastric and esophageal cancer, colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular carcinoma, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell cancer lung (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma (SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme. The present invention further provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention, wherein the lung cancer is NSCLC (squamous and non-squamous), small cell lung cancer, or mesothelioma.

В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении меланомы, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака легкого, включая, но не ограничиваясь НМРЛ (плоскоклеточный и неплоскоклеточный), мелкоклеточным раком легкого или мезотелиомой, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака головы и шеи, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака печени, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении колоректального рака, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака поджелудочной железы, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака желудка, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака почки, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака мочевого пузыря, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака предстательной железы, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака молочной железы, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака яичника, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака эндометрия, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака пищевода, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении саркомы мягких тканей, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении холангиокарциномы, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению. В данном изобретении предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении гепатоцеллюлярной карциномы, содержащая эффективное количество антитела согласно данному изобретению.The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of melanoma, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of lung cancer, including but not limited to NSCLC (squamous and non-squamous), small cell lung cancer, or mesothelioma, comprising an effective amount of an antibody of the invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of head and neck cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. This invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of liver cancer, containing an effective amount of an antibody according to this invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of colorectal cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of pancreatic cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of gastric cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. This invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of kidney cancer, containing an effective amount of an antibody according to this invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of bladder cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of prostate cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of breast cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of ovarian cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of endometrial cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of esophageal cancer, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of soft tissue sarcoma, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of cholangiocarcinoma, comprising an effective amount of an antibody of the present invention. The present invention provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of hepatocellular carcinoma, comprising an effective amount of an antibody of the present invention.

В данном изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака, причем указанную фармацевтическую композицию вводят одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с одним или большим количеством антиопухолевых агентов, выбранных из группы, состоящей из цисплатина, карбоплатина, дакарбазина, липосомального доксорубицина, доцетаксела, циклофосфамида и доксорубицина, навелбина, эрибулина, паклитаксела, связанных с белками частиц паклитаксела для инъекционной суспензии, иксабепилона, капецитабина, FOLFOX (лейковорин, фторурацил и оксалиплатин), FOLFIRI (лейковорин, фторурацил и иринотекан), гемцитабина, топотекана, липосомального иринотекана, пеметрекседа, цетуксимаба, ниволумаба, ипилимумаба, пидилизумаба, пембролизумаба, тремелимумаба, урелимумаба, лирилумаба, атезолизумаба, епикедостата и дурвалумаба.The present invention further provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, said pharmaceutical composition being administered simultaneously, separately or sequentially in combination with one or more antitumor agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbine, eribulin, paclitaxel, paclitaxel protein-bound particles for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), gemcitabine, topotecan, liposomal irinotecan, pemetrexeda, cetuximab, nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, urelimumab, lirilumab, atezolizumab, epicedostat, and durvalumab.

- 5 041266- 5 041266

В данном изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция для применения в лечении рака, при этом указанную фармацевтическую композицию вводят одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с ионизирующим излучением.The present invention further provides a pharmaceutical composition for use in the treatment of cancer, wherein said pharmaceutical composition is administered simultaneously, separately or sequentially in combination with ionizing radiation.

В данном изобретении предложено применение антитела согласно данному изобретению для производства лекарственного средства для лечения рака. В данном изобретении дополнительно предложено антитело согласно данному изобретению для производства лекарственного средства для лечения рака, причем указанный рак представляет собой Ходжкинскую или не-Ходжкинскую лимфомы, меланому, почечно-клеточный рак, рак почки, рак легкого, рак мочевого пузыря, рак желудка и пищевода, колоректальный рак, рак печени, гепатоцеллюлярный рак, холангиокарциному, рак поджелудочной железы, рак молочной железы, трижды отрицательный рак молочной железы, рак яичников, рак эндометрия, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легкого (МКРЛ), немелкоклеточный рак легкого (НМКРЛ), мезотелиому, плоскоклеточный рак головы и шеи (ПКРГШ), саркому мягких тканей или мультиформную глиобластому. В данном изобретении дополнительно предложено применение антитела согласно данному изобретению для производства лекарственного средства для лечения рака, при этом рак легкого представляет собой НМРЛ (плоскоклеточный и не плоскоклеточный), мелкоклеточный рак легкого или мезотелиому.The present invention provides the use of an antibody of the present invention for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer. The present invention further provides an antibody of the present invention for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer, said cancer being Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer, gastric and esophageal cancer , colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell lung cancer (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma (SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme. The present invention further provides the use of an antibody of the present invention for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer, wherein the lung cancer is NSCLC (squamous and non-squamous), small cell lung cancer, or mesothelioma.

В данном изобретении дополнительно предложено применение антитела согласно данному изобретению в производстве лекарственного средства для лечения рака, при этом указанное лекарственное средство следует вводить одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с одним или большим количеством антиопухолевых агентов, выбранных из группы, состоящей из цисплатина, карбоплатина, дакарбазина, липосомального доксорубицина, доцетаксела, циклофосфамида и доксорубицина, навелбина, эрибулина, паклитаксела, связанных с белками частиц паклитаксела для инъекционной суспензии, иксабепилона, капецитабина, FOLFOX (лейковорин, фторурацил и оксалиплатин), FOLFIRI (лейковорин, фторурацил и иринотекан), гемцитабина, топотекана, липосомального иринотекана, пеметрекседа, цетуксимаба, ниволумаба, ипилимумаба, пидилизумаба, пембролизумаба, тремелимумаба, урелимумаба, лирилумаба, атезолизумаба, епикедостата и дурвалумаба.The present invention further provides the use of an antibody of the present invention in the manufacture of a medicament for the treatment of cancer, said medicament being administered simultaneously, separately or sequentially in combination with one or more antitumor agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbine, eribulin, paclitaxel, paclitaxel protein-bound particles for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), gemcitabine, gemcitabine topotecan, liposomal irinotecan, pemetrexed, cetuximab, nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, urelimumab, lirilumab, atezolizumab, epicedostat, and durvalumab.

В данном изобретении предложено применение антитела согласно данному изобретению в производстве лекарственного средства для лечения рака, при этом указанное лекарственное средство следует вводить одновременно, раздельно или последовательно в комбинации с ионизирующим излучением.The present invention provides the use of an antibody of the present invention in the manufacture of a medicament for the treatment of cancer, said medicament being administered simultaneously, separately or sequentially in combination with ionizing radiation.

Антитело согласно данному изобретению представляет собой сконструированный, не встречающийся в природе полипептидный комплекс. Молекула ДНК согласно данному изобретению представляет собой не встречающуюся в природе молекулу ДНК, которая содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность одного из полипептидов в антителе согласно данному изобретению.An antibody of the present invention is an engineered, non-naturally occurring polypeptide complex. The DNA molecule of the invention is a non-naturally occurring DNA molecule that contains a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of one of the polypeptides in the antibody of the invention.

Антитело согласно данному изобретению представляет собой антитело типа IgG и имеет тяжелые цепи и легкие цепи, которые перекрестно сшиты внутри- и межцепочечными дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из N-концевой HCVR и константной области тяжелой цепи (HCCR). Каждая легкая цепь состоит из N-концевой LCVR и константной области легкой цепи (LCCR). Каждая легкая цепь образует дисульфидные связи с тяжелой цепью, а две тяжелые цепи образуют две дисульфидные связи между собой.The antibody of this invention is an IgG type antibody and has heavy chains and light chains that are cross-linked by intra- and inter-chain disulfide bonds. Each heavy chain is composed of an N-terminal HCVR and a heavy chain constant region (HCCR). Each light chain consists of an N-terminal LCVR and a light chain constant region (LCCR). Each light chain forms disulfide bonds with the heavy chain, and the two heavy chains form two disulfide bonds with each other.

Константная область тяжелых цепей содержит домены CH1, CH2 и CH3. СН1 идет после HCVR; CH1 и HCVR образуют часть тяжелой цепи Fab. CH2 идет после шарнирной области и перед CH3 . CH3 идет после СН2 и находится в карбоксиконце тяжелой цепи.The heavy chain constant region contains the CH1, CH2 and CH3 domains. CH1 comes after HCVR; CH1 and HCVR form part of the Fab heavy chain. CH2 comes after the hinge region and before CH3. CH3 comes after CH2 and is at the carboxy-terminus of the heavy chain.

Константная область легких цепей содержит один домен, CL. CL идет после LCVR; CL и LCVR образуют часть легкой цепи Fab.The light chain constant region contains one domain, CL. CL comes after LCVR; CL and LCVR form part of the Fab light chain.

Антитела согласно данному изобретению являются гетеродимерными в том смысле, что каждое плечо антитела проявляет селективное моновалентное связывание со своим распознаваемым антигеном благодаря наличию двух разных тяжелых цепей и двух разных легких цепей, образующих антитело. В данном изобретении одно плечо антитела связывает человеческий PD-L1 (SEQ ID NO: 1), a другое плечо связывает человеческий PD-1 (SEQ ID NO: 2). Домены СН2 и/или CH3 таких полипептидных цепей не обязательно должны быть идентичными по последовательности, и преимущественно их модифицируют, чтобы способствовать комплексообразованию между двумя полипептидными цепями. Например, в домен СН2 или CH3 может быть внесена аминокислотная замена (предпочтительно аминокислотная замена, содержащей объемную боковую группу, образующую выступ, например, триптофан), таким образом что стерическая помеха будет предотвращать взаимодействие с аналогично мутированным доменом и будет вынуждать мутированный домен спариваться с доменом, в который была внесена комплементарная или вмещающая мутация, то есть отверстие (например, замена на глицин). Такие наборы мутаций могут быть внесены в любую пару полипептидов, содержащих домены СН2-СНЗ , которые образуют область Fc. Способы белковой инженерии, способствующие гетеродимеризации по сравнению с гомодимеризацией, хорошо известны в данной области техники, в частности, в отношении конструирования иммуноглобулиноподобных молекул (см., например, WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545,The antibodies of this invention are heterodimeric in the sense that each antibody arm exhibits selective monovalent binding to its recognized antigen due to the presence of two different heavy chains and two different light chains that form the antibody. In the present invention, one arm of the antibody binds human PD-L1 (SEQ ID NO: 1) and the other arm binds human PD-1 (SEQ ID NO: 2). The CH2 and/or CH3 domains of such polypeptide chains need not be identical in sequence, and are advantageously modified to promote complexation between the two polypeptide chains. For example, an amino acid substitution (preferably an amino acid substitution containing a bulky ledge-forming side group, such as tryptophan) can be introduced into the CH2 or CH3 domain such that steric interference will prevent interaction with a similarly mutated domain and will force the mutated domain to pair with the domain , in which a complementary or host mutation has been introduced, that is, a hole (for example, a replacement with glycine). Such sets of mutations can be introduced into any pair of polypeptides containing CH2-CH3 domains that form an Fc region. Protein engineering techniques that promote heterodimerization over homodimerization are well known in the art, in particular with regard to the construction of immunoglobulin-like molecules (see, for example, WO 96/27011, WO 98/050431, EP 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545,

- 6 041266- 6 041266

WO 2012/058768, WO 2013/157954, WO 2013/096291, EP 1870459A1, а также Ridgway et al. (1996) Knobs-Into-Holes' Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization, Protein Engr. 9:617-621, Atwell et al. (1997) Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library, J. Mol. Biol. 270: 26-35, и Xie et al. (2005) A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis, J. Immunol. Methods 296:95-101). Как правило, в подходах, известных в данной области техники, домен CH3 первой тяжелой цепи и домен CH3 второй тяжелой цепи оба конструируют взаимодополняющим образом, так что тяжелая цепь, содержащая один сконструированный домен CH3, больше не может гомодимеризоваться с другой тяжелой цепью той же структуры (например, CH3-сконструированная первая тяжелая цепь, не может больше гомодимеризоваться с другой CH3-сконструированной первой тяжелой цепью; и CH3сконструированная вторая тяжелая цепь, не может больше гомодимеризоваться с другой CH3сконструированной второй тяжелой цепью). Таким образом, тяжелая цепь, содержащая один сконструированный домен CH3, вынуждена гетеродимеризоваться с другой тяжелой цепью, содержащей домен CH3, который сконструирован быть комплементарным. Для этого варианта осуществления изобретения домен CH3 первой тяжелой цепи и домен CH3 второй тяжелой цепи конструируют с целью быть комплементарными, посредством аминокислотных замен, так что первая тяжелая цепь и вторая тяжелая цепь вынуждены гетеродимеризоваться, и в тоже время первая тяжелая цепь и вторая тяжелая цепь больше не могут гомодимеризоваться (например, по стерическим причинам).WO 2012/058768, WO 2013/157954, WO 2013/096291, EP 1870459A1, and Ridgway et al. (1996) Knobs-Into-Holes' Engineering Of Antibody CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization, Protein Engr. 9:617-621, Atwell et al. (1997) Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of A Homodimer Using A Phage Display Library, J. Mol. Biol. 270:26-35, and Xie et al. (2005) A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodimerization, Expression And Tumor Cell Lysis, J. Immunol. Methods 296:95-101). Typically, in approaches known in the art, the CH3 domain of the first heavy chain and the CH3 domain of the second heavy chain are both designed in a complementary manner such that a heavy chain containing one engineered CH3 domain can no longer homodimerize with another heavy chain of the same structure. (eg, a CH3 engineered first heavy chain can no longer homodimerize with another CH3 engineered first heavy chain; and a CH3 engineered second heavy chain can no longer homodimerize with another CH3 engineered second heavy chain). Thus, a heavy chain containing one engineered CH3 domain is forced to heterodimerize with another heavy chain containing a CH3 domain that is designed to be complementary. For this embodiment, the CH3 domain of the first heavy chain and the CH3 domain of the second heavy chain are designed to be complementary, through amino acid substitutions, such that the first heavy chain and the second heavy chain are forced to heterodimerize, and at the same time, the first heavy chain and the second heavy chain are larger. cannot homodimerize (for example, for steric reasons).

Различные подходы к обеспечению гетеродимеризации тяжелых цепей, известные в данной области техники, рассматриваются как различные альтернативы, используемые в биспецифическом антителе согласно изобретению. В некоторых вариантах осуществления данного изобретения, в последовательность тяжелых цепей в пределах областей СН1 и CH3 и в последовательность легких цепей в пределах константной области легкой цепи вносят мутации. Мутации СН1 и LC вносят для того, чтобы стимулировать нативное спаривание соответствующих пар легких цепей и тяжелых цепей, и препятствовать ошибочному спариванию легких цепей. Мутации CH3 вносят для того, чтобы стимулировать гетеродимерное спаривание двух различных тяжелых цепей и препятствовать формированию гомодимеров.Various approaches to achieve heavy chain heterodimerization known in the art are contemplated as various alternatives for use in a bispecific antibody of the invention. In some embodiments of the invention, the heavy chain sequence within the CH1 and CH3 regions and the light chain sequence within the light chain constant region are mutated. The CH1 and LC mutations are introduced to promote native pairing of the respective light chain/heavy chain pairs and to prevent light chain mismatch. CH3 mutations are introduced to promote heterodimeric pairing of two different heavy chains and prevent the formation of homodimers.

Предпочтительно, когда мутации в области CH3 части анти-PD-L1 антитела включают в себя позиции 350, 351, 405 и 407 по нумерации EC, мутации в области CH3 части анти-PD-1 антитела включают в себя позиции 350, 366, 392 и 394 по нумерации EC; когда мутации в области CH3 части анти-PD-L1 антитела включают в себя позиции 350, 366, 392 и 394 по нумерации EU, мутации в области CH3 части анти-PD-I антитела включают в себя позиции 350, 351, 356, 405 и 407 по нумерации EC (как показано в выравнивании последовательностей, приведенном непосредственно ниже).Preferably, when mutations in the CH3 region of the anti-PD-L1 portion of the antibody include positions 350, 351, 405 and 407 of the EC numbering, mutations in the CH3 region of the anti-PD-1 portion of the antibody include positions 350, 366, 392 and 394 according to EC numbering; when mutations in the CH3 region of the anti-PD-L1 portion of the antibody include EU positions 350, 366, 392 and 394, mutations in the CH3 region of the anti-PD-I antibody include positions 350, 351, 356, 405 and 407 by EC numbering (as shown in the sequence alignment given immediately below).

Выравнивание аминокислотных последовательностей человеческого IgG1 дикого типа и константных областей тяжелой цепи антител v3.2 и v13884 (предпочтительные модификации подчеркнуты):Alignment of amino acid sequences of human IgG1 wild type and heavy chain constant regions of antibodies v3.2 and v13884 (preferred modifications are underlined):

IgGl-дт ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 3 2PD-L1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 844PD-1 ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 3 2PD-1 ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 844PD-L1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVIgGl-дт ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 3 2PD-L1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 844PD-1 ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 3 2PD-1 ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV 844PD-L1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV

IgGl-дт HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP 3 2PD-L1 HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP 844PD-1 HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP 3 2PD-1 HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP 844PD-L1 HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQIYICNVNHKPSNTKVDKRVEPIgGl-дт HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP 3 2PD-L1 HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP 844PD-1 HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP 3 2PD-1 HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP 844PD-L1 HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQIYICNVNHKPSNTKVDKRVEP

IgG 1 -дт KSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC WVDVS 3 2PD-L1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS 844PD-1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS 3 2PD-1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS 844PD-L1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSIgG 1 -дт KSCDKTHTCPPCPAPELLGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC WVDVS 3 2PD-L1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS 844PD-1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS 3 2PD-1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS 844PD-L1 KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS

IgGl-дт HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSIYRVVSVLTVLHQDWLNGK 3 2PD-L1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK 844PD-1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK 3 2PD-1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK 844PD-L1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVS VLTVLHQDWLNGKIgGl-дт HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSIYRVVSVLTVLHQDWLNGK 3 2PD-L1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK 844PD-1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK 3 2PD-1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK 844PD-L1 HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVS VLTVLHQDWLNGK

IgGl-дт EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTC 3 2PD-L1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC 844PD-1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC 3 2PD-1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYyLPPSRDELTKNQVSLLC 844PD-L1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCIgGl-дт EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTC 3 2PD-L1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC 844PD-1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC 3 2PD-1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYyLPPSRDELTKNQVSLLC 844PD-L1 EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLC

IgGl-дт LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW 3 2PD-L1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW 844PD-1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW 3 2PD-1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWIgGl-дт LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW 3 2PD-L1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW 844PD-1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW 3 2PD-1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW

- 7 041266- 7 041266

844PD-L1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW844PD-L1 LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW

IgGl-дт QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 40) 3.2PD-L1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 41) 844PD-1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 42) 3.2PD-1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 43) 844PD-L1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 44)IgGl-дт QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 40) 3.2PD-L1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 41) 844PD-1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 42) 3.2PD-1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 43) 844PD-L1 QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 44)

Предпочтительно, как показано подчеркиванием в приведенном выше выравнивании, мутации в области СН1 части анти-PD-L1 антитела предпочтительно включают в себя позицию 183 по нумерации EC, тогда как мутации в области СН1 части анти-PD-1 антитела предпочтительно включает в себя позиции 128, 147 и 175 по нумерации EC.Preferably, as indicated by underlining in the above alignment, mutations in the CH1 region of the anti-PD-L1 portion of the antibody preferably include position 183 of the EC numbering, while mutations in the CH1 region of the anti-PD-1 antibody preferably include positions 128 , 147 and 175 by EC numbering.

Область CL части анти-PD-L1 антитела предпочтительно представляет собой подтип лямбда человека. Более предпочтительно, область CL части анти-PD-L1 антитела представляет собой лямбда вариант человека, содержащий аминокислотные замены в позициях 176 и 178 по нумерации EC (см. выравнивания ниже).The CL region of the anti-PD-L1 portion of the antibody is preferably the human lambda subtype. More preferably, the CL region of the anti-PD-L1 portion of the antibody is a human lambda variant containing amino acid substitutions at positions 176 and 178 of EC numbering (see alignments below).

Выравнивание аминокислотной последовательности человеческой лямбда дикого типа с константной областью легкой цепи PD-L1 антител v3.2, v3.0 и v13844 или PD-1 (предпочтительные модификации подчеркнуты).Amino acid sequence alignment of wild-type human lambda with the PD-L1 light chain constant region of antibodies v3.2, v3.0 and v13844 or PD-1 (preferred modifications underlined).

Лямбда-дт QPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKLambda-dt QPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVK

PD-L1 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKPD-L1 QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVK

Лямбда-дт AGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV PD-L1 AGVETTTPSKQSNNKYAAESELSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVLambda-dt AGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV PD-L1 AGVETTTPSKQSNNKYAAESELSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV

Лямбда APTECS (SEQ ID NO: 45)Lambda APTECS (SEQ ID NO: 45)

PD-L1 APAECS (SEQ ID NO: 46)PD-L1 APAECS (SEQ ID NO: 46)

Область CL части анти-PD-L1 антитела предпочтительно представляет собой подтип каппа человека. Область CL части анти-PD-1 антител, согласно данному изобретению, представляет собой каппа вариант человека, содержащий аминокислотные замены в позициях 131, 133 и 176 по нумерации EC.The CL region of the anti-PD-L1 portion of the antibody is preferably the human kappa subtype. The CL region of the anti-PD-1 antibody portion of the present invention is a human kappa variant containing amino acid substitutions at positions 131, 133 and 176 of the EC numbering.

Выравнивание аминокислотных последовательностей человеческого каппа дикого типа и константных областей легкой цепи антител к PD-1 (предпочтительные модификации подчеркнуты).Alignment of the amino acid sequences of wild-type human kappa and anti-PD-1 antibody light chain constant regions (preferred modifications are underlined).

Каппа-дт RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGKappa-dt RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG

PD-1 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTARVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGPD-1 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTARVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSG

Каппа-дт NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK PD-1 NSQESVTEQDSKDSTYSLRSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKKappa-dt NSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK PD-1 NSQESVTEQDSKDSTYSLRSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK

Каппа-дт SFNRGEC (SEQ ID NO: 47) PD-1 SFNRGEC (SEQ ID NO: 48)Kappa-dt SFNRGEC (SEQ ID NO: 47) PD-1 SFNRGEC (SEQ ID NO: 48)

В некоторых антителах, согласно данному изобретению, мутации гетеродимерного спаривания тяжелых цепей дают термостабильность CH3 более 78°C.In some antibodies of the invention, heavy chain heterodimer pairing mutations give CH3 thermal stability greater than 78°C.

При экспрессии в определенных биологических системах антитела, имеющие Fcпоследовательности, гликозилированы в Fc-области. Как правило, гликозилирование происходит в Fcобласти антитела в высококонсервативном сайте N-гликозилирования. N-гликаны, как правило, присоединяются к аспарагину. Антитела могут быть гликозилированы и в других позициях.When expressed in certain biological systems, antibodies having Fc sequences are glycosylated in the Fc region. Typically, glycosylation occurs in the Fco region of an antibody at a highly conserved N-glycosylation site. N-glycans tend to attach to asparagine. Antibodies can be glycosylated in other positions as well.

Предпочтительно антитела согласно данному изобретению содержат вариант Fc-части, который получен из IgG1 человека. Хорошо известно, что IgG1 связывается с семейством рецепторов Fc-гамма (FcyR), также как и с C1q. Взаимодействие с этими рецепторами может индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ) и комплементзависимую цитотоксичность (КЗЦ). Следовательно, вносят определенные аминокислотные замены в человеческую область Fc IgG1 антител согласно данному изобретению для устранения иммунной эффекторной функции. Мутации в области СН2 тяжелых цепей антитела могут включать в себя позиции 234, 235 и 265 в нумерации EC для снижения или устранения иммунных эффекторных функций, как показано на фиг. 1.Preferably, the antibodies of the invention comprise a variant Fc portion that is derived from human IgG1. It is well known that IgG1 binds to the Fc-gamma receptor (FcyR) family as well as to C1q. Interaction with these receptors can induce antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) and complement-dependent cytotoxicity (CCC). Therefore, certain amino acid substitutions are made in the human Fc region of the IgG1 antibodies of this invention to abolish immune effector function. Mutations in the CH2 region of antibody heavy chains can include positions 234, 235, and 265 in the EC numbering to reduce or eliminate immune effector functions, as shown in FIG. 1.

Выделенную ДНК, кодирующую область HCVR, можно преобразовать в полноразмерный ген тяжелой цепи путем функционального связывания кодирующей HCVR ДНК с другой молекулой ДНК, кодирующей константную область тяжелой цепи или ее вариант. Последовательности генов константной области тяжелой цепи человека, а также других млекопитающих, известны в данной области техники. Фрагменты ДНК, охватывающие эти области, можно получать, например, с помощью стандартной ПЦРамплификации. Предпочтительно для антител согласно данному изобретению константные области тяжелой цепи тяжелых цепей представляют собой варианты IgG1 человека.An isolated DNA encoding an HCVR region can be converted into a full length heavy chain gene by operably linking the HCVR encoding DNA to another DNA molecule encoding a heavy chain constant region or a variant thereof. The human, as well as other mammalian, heavy chain constant region gene sequences are known in the art. DNA fragments covering these regions can be obtained, for example, using standard PCR amplification. Preferably for the antibodies of this invention, the heavy chain heavy chain constant regions are human IgG1 variants.

Выделенную ДНК, кодирующую область LCVR, можно преобразовать в полноразмерный ген легкой цепи путем функционального связывания кодирующей LCVR ДНК с другой молекулой ДНК, кодирующей константную область легкой цепи или ее вариант. Последовательности генов константной области легкой цепи человека, а также других млекопитающих, известны в данной области техники. Фрагменты ДНК, охватывающие эти области, можно получать с помощью стандартной ПЦР-амплификации. Константная область легкой цепи может представлять собой константную область каппа или лямбда. Предпочтительно в случае антител согласно данному изобретению константная область легкой цепи анти-PD-LI части антитела представляет собой вариант лямбда легкой цепи, а константная область легкойAn isolated DNA encoding an LCVR region can be converted into a full length light chain gene by operably linking the LCVR encoding DNA to another DNA molecule encoding a light chain constant region or a variant thereof. The human light chain constant region gene sequences, as well as those of other mammals, are known in the art. DNA fragments covering these regions can be obtained using standard PCR amplification. The light chain constant region may be a kappa or lambda constant region. Preferably, in the case of antibodies of the present invention, the light chain constant region of the anti-PD-LI portion of the antibody is a lambda light chain variant, and the light chain constant region

- 8 041266 цепи анти-PD-l части антитела представляет собой вариант каппа легкой цепи.- 8 041266 chain of the anti-PD-l portion of the antibody is a variant of the kappa light chain.

Полинуклеотиды согласно данному изобретению могут быть экспрессированны в клетке-хозяине после функционального связывания последовательностей с последовательностью контроля экспрессии. Векторы экспрессии обычно являются реплицируемыми в организме хозяина, либо как эписомы, либо как неотъемлемая часть хромосомной ДНК хозяина. Обычно векторы экспрессии содержат селективные маркеры, например тетрациклина, неомицина, глютамин синтетазы и дигидрофолатредуктазы, чтобы обеспечить возможность обнаружения тех клеток, которые трансформированы необходимыми последовательностями ДНК.The polynucleotides of this invention can be expressed in a host cell after the sequences are operably linked to an expression control sequence. Expression vectors are typically replicable within the host, either as episomes or as an integral part of the host's chromosomal DNA. Typically, expression vectors contain selectable markers, such as tetracycline, neomycin, glutamine synthetase, and dihydrofolate reductase, to allow detection of those cells that have been transformed with the desired DNA sequences.

Антитело согласно данному изобретению легко можно получать в клетках млекопитающих, таких как клетки CHO, NSO, HEK293 или COS. Клетки-хозяев культивируют, используя методики, хорошо известные в данной области техники.The antibody of the present invention can easily be produced in mammalian cells such as CHO, NSO, HEK293 or COS cells. Host cells are cultured using techniques well known in the art.

Векторы, содержащие представляющие интерес полинуклеотидные последовательности (например, полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антитела, и последовательности контроля экспрессии), могут быть перенесены в клетку-хозяина хорошо известными способами, которые изменяются в зависимости от типа клетки-хозяина.Vectors containing polynucleotide sequences of interest (eg, polynucleotides encoding antibody polypeptides and expression control sequences) can be transferred into a host cell by well-known methods, which vary depending on the type of host cell.

Можно применять различные способы очистки белка, которые известны в данной области техники и описаны, например, в Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990) и Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3rd Edition, Springer, NY (1994).Various protein purification methods can be used that are known in the art and are described, for example, in Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990) and Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3rd Edition, Springer, NY (1994 ).

В другом варианте реализации данного изобретения антитело или кодирующие его нуклеиновые кислоты предоставлены в выделенной форме. В контексте данного документа термин выделенный относится к белку, пептиду или нуклеиновой кислоте, которые не содержат или по существу не содержат любые другие макромолекулярные компоненты, обнаруживаемые в клеточной среде. В контексте данного документа термин по существу не содержат означает, что представляющие интерес белок, пептид или нуклеиновая кислота содержат более 80% (в мольном отношении) макромолекулярных компонентов, предпочтительно более 90% и более предпочтительно более 95%.In another embodiment of the invention, the antibody or nucleic acids encoding it are provided in isolated form. In the context of this document, the term isolated refers to a protein, peptide or nucleic acid that does not contain or essentially does not contain any other macromolecular components found in the cellular environment. In the context of this document, the term essentially does not mean that the protein, peptide or nucleic acid of interest contains more than 80% (in molar terms) of macromolecular components, preferably more than 90% and more preferably more than 95%.

Антитело согласно данному изобретению или содержащие его фармацевтические композиции, можно вводить парентеральными путями (например, подкожным и внутривенным). Антитело согласно данному изобретению можно вводить пациенту отдельно с фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или наполнителями в однократной или многократных дозах. Фармацевтические композиции согласно данному изобретению можно получать способами, хорошо известными в данной области техники (например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd ed. (2012), A. Loyd et al., Pharmaceutical Press), и они содержат антитело, описанное в данном документе, и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.The antibody of this invention, or pharmaceutical compositions containing it, can be administered by parenteral routes (eg, subcutaneous and intravenous). An antibody of this invention may be administered to a patient alone with pharmaceutically acceptable carriers, diluents, or excipients in single or multiple doses. Pharmaceutical compositions of this invention can be prepared by methods well known in the art (e.g., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, ^22nd ed. (2012), A. Loyd et al., Pharmaceutical Press) and contain the antibody described herein, and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.

Термин лечение (или лечить, или процесс лечения) относится к замедлению, прерыванию, приостановке, облегчению, прекращению, уменьшению или обращению вспять прогрессирования или тяжести существующего симптома, нарушения, патологического состояния или заболевания.The term treatment (or treat, or process of treatment) refers to slowing, interrupting, stopping, alleviating, halting, reducing, or reversing the progression or severity of an existing symptom, disorder, condition, or disease.

Как применяется в данном документе, термин связывать в отношении аффинности антитела к PDL1 человека (SEQ ID NO: 1), PD-1 человека (SEQ ID NO: 2) или к ним обоим обозначает, если не указано иное, КД меньше чем около 1 х 10^-6 М, предпочтительно, меньше чем около 1 х 10^-9 М, согласно определению обычными способами, известными в данной области техники, включая применение биосенсора для поверхностного плазмонного резонанса (ППР) при 37°C в целом, как описано в данном документе.As used herein, the term bind in relation to the affinity of an antibody for human PDL1 (SEQ ID NO: 1), human PD-1 (SEQ ID NO: 2), or both means, unless otherwise indicated, a CD of less than about 1 x 10 ^-6 M, preferably less than about 1 x 10 ^-9 M, as determined by conventional methods known in the art, including the use of a biosensor for surface plasmon resonance (SPR) at 37°C in general, as described in this document.

Эффективное количество означает количество антитела согласно данному изобретению или фармацевтической композиции, содержащей антитело согласно данному изобретению, которое вызывает биологический или клинический ответ или необходимый терапевтический эффект в ткани, системе, организме животного, млекопитающего или человека, который предполагается исследователем, врачом или другим медицинским работником. Эффективное количество антитела может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и масса индивида, а также от способности антитела вызывать необходимый ответ у индивида. Эффективное количество также является таким, при котором любой токсический или вредный эффект антитела перевешивается терапевтически благоприятными эффектами.An effective amount means the amount of an antibody of this invention or a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention that elicits a biological or clinical response or desired therapeutic effect in a tissue, system, animal, mammalian or human body as envisaged by the researcher, physician or other healthcare professional. The effective amount of the antibody may vary depending on such factors as the disease state, age, sex and weight of the individual, as well as the ability of the antibody to elicit the desired response in the individual. An effective amount is also one in which any toxic or deleterious effect of the antibody is outweighed by the therapeutically beneficial effects.

Данное изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими неограничивающими Примерами.The present invention is further illustrated by the following non-limiting Examples.

Пример 1. Экспрессия и очистка антителExample 1 Expression and Purification of Antibodies

Полипептиды вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи, полные аминокислотные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи Антител v3.2, v3.0 и v13844, и кодирующие их нуклеотидные последовательности, перечислены ниже в разделе, озаглавленном Аминокислотные и нуклеотидные последовательности. Кроме того, SEQ ID NO аминокислотных последовательностей легкой цепи, тяжелой цепи, вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи Антител v3.2, v3.0 и v13844 приведены в табл. 1(a) ниже. Кроме того, SEQ ID NO для аминокислотных последовательностей CDR связывающих PD-L1 и PD-1 вариабельных областей антител v3.2, v3.0 и v13844 приведены в табл. 1(b) и в табл. 1(c) соответственно.The heavy chain and light chain variable region polypeptides, the complete heavy chain and light chain amino acid sequences of Antibodies v3.2, v3.0 and v13844, and the nucleotide sequences encoding them, are listed below in the section entitled Amino Acid and Nucleotide Sequences. In addition, the SEQ ID NOs of the light chain, heavy chain, light chain variable region, and heavy chain variable region amino acid sequences of Antibodies v3.2, v3.0, and v13844 are shown in Table 1. 1(a) below. In addition, SEQ ID NOs for the amino acid sequences of the CDRs of the PD-L1 and PD-1 binding variable regions of antibodies v3.2, v3.0, and v13844 are shown in Table 1. 1(b) and in table. 1(c), respectively.

Антитела согласно данному изобретению, включая, но не ограничиваясь антителами v3.2, v3.0 иAntibodies of this invention, including but not limited to antibodies v3.2, v3.0 and

- 9 041266 v13844, могут быть получены и очищены в целом следующим образом. Соответствующая клетка-хозяин, такая как CHO, может быть либо временно, либо стабильно трансфицирована системой экспрессии для секретирования антител с использованием четверного вектора (то есть одного вектора, кодирующего последовательность для экспрессии двух легких цепей и двух тяжелых цепей), двойных векторов (т. е. двух векторов, которые вместе кодируют две разные легкие цепи и две разные тяжелые цепи), или четырех отдельных векторов (два из которых кодируют различную легкую цепь и два из которых кодируют различную тяжелую цепь). Среда, в которую секретировалось антитело, может быть очищена с использованием любой из многих обычно применяемых методик. Например, в случае фрагмента Fab среда может быть нанесена на колонку MabSelect (GE Healthcare) или колонку KappaSelect (GE Healthcare), уравновешенную совместимым буфером, таким как фосфатно-солевой буфер (pH 7,4). Колонка может быть промыта для удаления неспецифических связывающих компонентов. Связанное антитело может быть элюировано, например, градиентом pH (например, 20 мМ Трис-буфера, от pH 7, 10 мМ цитратного натриевого буфера, до pH 3,0, или фосфатно-солевым буфером, от pH 7,4, 100 мМ глицинового буфера, до pH 3,0). Обнаружение фракций антител можно проводить, например, с помощью ДСН-ПААГ электрофореза, а затем проводить их объединение. Растворимые агрегаты и мультимеры могут быть эффективно удалены обычными способами, включая эксклюзионную, с гидрофобным взаимодействием, ионообменную, мультимодальную или гидроксиапатитную хроматографию. Антитело можеть быть сконцентрировано и/или стерильно отфильтровано, используя обычные методики. Продукт может быть незамедлительно заморожен при -70°C или может быть лиофилизирован.- 9 041266 v13844 can be obtained and purified in general as follows. An appropriate host cell, such as a CHO, can be either transiently or stably transfected with an expression system to secrete antibodies using a quadruple vector (i.e., one vector encoding a sequence for expressing two light chains and two heavy chains), dual vectors (i.e., e. two vectors that together encode two different light chains and two different heavy chains), or four separate vectors (two of which encode a different light chain and two of which encode a different heavy chain). The medium into which the antibody has been secreted can be purified using any of the many commonly used techniques. For example, in the case of a Fab fragment, the medium can be applied to a MabSelect column (GE Healthcare) or a KappaSelect column (GE Healthcare) equilibrated with a compatible buffer such as phosphate buffered saline (pH 7.4). The column may be washed to remove non-specific binders. The bound antibody can be eluted, for example, with a pH gradient (e.g., 20 mM Tris buffer, from pH 7, 10 mM sodium citrate buffer, to pH 3.0, or phosphate buffered saline, from pH 7.4, 100 mM glycine buffer, up to pH 3.0). Detection of antibody fractions can be carried out, for example, using SDS-PAGE electrophoresis, and then they are combined. Soluble aggregates and multimers can be effectively removed by conventional techniques, including size exclusion, hydrophobic interaction, ion exchange, multimodal, or hydroxyapatite chromatography. The antibody may be concentrated and/or sterile filtered using conventional techniques. The product can be immediately frozen at -70°C or can be lyophilized.

Таблицы 1(a)-(c). SEQ ID NO для последовательностей биспецифического антитела (BsAb)Tables 1(a)-(c). SEQ ID NO for bispecific antibody (BsAb) sequences

ингибитора контрольной точки 1 (a) checkpoint inhibitor 1 (a) Антитело v3.2 Antibody v3.2 Антитело v3.0 Antibody v3.0 Антитело V13844 Antibody V13844 HCVR - анти-PD-Ll HCVR - anti-PD-Ll 3 3 3 3 3 3 HCVR - анти-PD-l HCVR - anti-PD-l 6 6 7 7 7 7 LCVR - анти-PD-Ll LCVR - anti-PD-Ll 4 4 4 4 4 4 LCVR - анти-PD-l LCVR - anti-PD-l 8 8 8 8 8 8 Тяжелая цепь 1 - анти-PD-Ll Heavy chain 1 - anti-PD-Ll 49 49 49 49 29 29 Тяжелая цепь 2 - анти-PD-l Heavy chain 2 - anti-PD-l 31 31 32 32 33 33 Легкая цепь 1 - анти-PD-Ll Light chain 1 - anti-PD-Ll 30 thirty 30 thirty 30 thirty Легкая цепь 2 - анти-PD-1 Light chain 2 - anti-PD-1 34 34 34 34 34 34

1(b)1(b)

АнтиPD-Ll AntiPD-Ll CDR1 CDR1 CDR2 CDR2 CDR3 CDR3 НС NS KASGGTFSSYAIS (SEQIDNO: 16) KASGGTFSSYAIS (SEQIDNO: 16) GIIPIFGTANYAQKFQG (SEQIDNO: 17) GIIPIFGTANYAQKFQG (SEQIDNO: 17) ARSPDYSPYYYYGMDV (SEQ ID NO: 18) ARSPDYSPYYYYGMDV (SEQ ID NO: 18) LC LC SGSSSNIGSNTVN (SEQIDNO: 19) SGSSSNIGSNTVN (SEQIDNO: 19) YGNSNRPS (SEQIDNO: 20) YGNSNRPS (SEQIDNO: 20) QSYDSSLSGSV (SEQIDNO: 21) QSYDSSLGSV (SEQIDNO: 21)

1(c)1(c)

Анти-PD 1 Anti-PD 1 CDR1 CDR1 CDR2 CDR2 CDR3 CDR3 HC HC KASGGTFSSYAIS (SEQIDNO: 22) KASGGTFSSYAIS (SEQIDNO: 22) LIIPSFDTAGYAQKFQG (SEQ ID NO: 23) or LIIPMFDTAGYAQKFQG (SEQ ID NO: 24) LIIPSFDTAGYAQKFQG (SEQ ID NO: 23) or LIIPMFDTAGYAQKFQG (SEQ ID NO: 24) ARAEHSSTGTFDY (SEQ ID NO: 25) ARAEHSSTGTFDY (SEQ ID NO: 25) LC LC RASQGISSWLA (SEQIDNO: 26) RASQGISSWLA (SEQIDNO: 26) SAASSLQS (SEQ ID NO: 27) SAASSLQS (SEQ ID NO: 27) QQANHLPFT (SEQ ID NO: 28) QQANHLPFT (SEQ ID NO: 28)

Пример 2. Связывание с обеими PD-L1 и PD-1 человека, измеренное с помощью ИФА.Example 2 Binding to both human PD-L1 and PD-1 measured by ELISA.

Способность антител согласно данному изобретению связывать оба PD-L1 и PD-1 может быть определена в анализом сэндвич-ИФА. Для анализа связывания PD-1, 96-луночная плашка (Nunc) может быть покрыта PD-1-Fc человека (R&D Systems, кат. № 1086-PD) в течение ночи при 4°C. Лунки могут быть заблокированы в течение 2 часов с помощью блокирующего буфера (ФСБ, содержащий 5% обезжиренного сухого молока). Лунки могут быть трижды промыть ФСБ, содержащим 0,1% Твин-20. Затем может быть добавлено анти-PD-1 антитело или контрольный IgG (100 мкл), и затем планшет можно инкубировать при комнатной температуре в течение 1 ч. После промывки плашку можно инкубировать с 100 мкл конъюгата козьего анти-человеческий IgG F(ab')2-HRP (Jackson Immuno Resaerch, кат. № 109035-097) при комнатной температуре в течение 1 ч. Плашка может быть промыта и затем инкубирована с 100 мкл 3,3’,5,5'-тетра-метилбензидина. Поглощение при 450 нм может быть считано на считывающем устройстве для микроплашек. Полумаксимальная эффективная концентрация (EC50) может быть рассчитана с использованием программного обеспечения GraphPad prism 6.The ability of the antibodies of this invention to bind both PD-L1 and PD-1 can be determined in a sandwich ELISA assay. For the PD-1 binding assay, a 96-well plate (Nunc) can be coated with human PD-1-Fc (R&D Systems, cat. no. 1086-PD) overnight at 4°C. Wells can be blocked for 2 hours with blocking buffer (PBS containing 5% skimmed milk powder). Wells can be washed three times with PBS containing 0.1% Tween-20. Anti-PD-1 antibody or control IgG (100 µl) can then be added and the plate can then be incubated at room temperature for 1 hour. After washing, the plate can be incubated with 100 µl goat anti-human IgG F(ab') conjugate 2-HRP (Jackson Immuno Resaerch, cat. no. 109035-097) at room temperature for 1 hour. The plate can be washed and then incubated with 100 µl of 3,3',5,5'-tetra-methylbenzidine. The absorbance at 450 nm can be read on a microplate reader. The half maximum effective concentration (EC50) can be calculated using the GraphPad prism 6 software.

Для анализа связывания PD-L1 может быть применена аналогичная процедура, за исключением того, что 96-луночная плашка (Nunc) может быть покрыта PD-L1-Fc человека (R&D Systems, кат. № 156- 10 041266For PD-L1 binding assay, a similar procedure can be applied, except that a 96-well plate (Nunc) can be coated with human PD-L1-Fc (R&D Systems cat. no. 156-10 041266

B7) в течение ночи при 4°C.B7) overnight at 4°C.

В экспериментах проводимых, по существу, как описано выше в этом Примере 2, антитело v3.2 связывается с PD-1 человека с EC50 0,0802 нМ. Для сравнения, аффинность связывания исходного антитела PD-1 (в виде гомодимера IgG4-PAA) составляет 0,1318 нМ. Антитело v3.2 связывается с PD-L1 человека с EC50 0,4554 нМ. Для сравнения, аффинность связывания исходного антитела PD-L1 (в виде гомодимера IgG1-EN) составляет 0,4702 нМ.In experiments conducted essentially as described above in this Example 2, the v3.2 antibody binds to human PD-1 with an EC50 of 0.0802 nM. In comparison, the binding affinity of the parent PD-1 antibody (as IgG4-PAA homodimer) is 0.1318 nM. Antibody v3.2 binds to human PD-L1 with an EC50 of 0.4554 nM. In comparison, the binding affinity of the parent PD-L1 antibody (as IgG1-EN homodimer) is 0.4702 nM.

Пример 3: Связывание вместе клеток, экспрессирующих PD-1, с клетками, экспрессирующими PDL1Example 3 Coupling of PD-1 Expressing Cells with PDL1 Expressing Cells

Способность антител согласно изобретению связывать вместе экспрессирующие PD-1 и PD-L1 клетки определяли с помощью проточной цитометрии с использованием трансфицированных клеток CHO, экспрессирующих либо PD-1, либо PD-L1. Вкратце, клетки с сверхэкспрессией CHO-PD1 и CHOK1-PDL1 могут быть дифференциально помечены CFSE (сукцинимидиловый сложный эфир диацетата карбоксифлуоресцеина) (BD Horizon) или Cell Tracker Deep Red (CTDR/Thermo). Клетки CHO-PD1 и CHOK1-PDL1 раздельно инкубируют в течение 2 ч с исследуемым антителом, таким как антитело v3.2 (на льду в ФСБ + 1% БСА + 0,09% азида натрия). Несвязанные антитела могут быть удалены путем промывания (2 раза, используя 200 мкл ФСБ + 1% БСА + 0,09% азида натрия). Клетки CHOK1-PDL1 инкубируют в течение 2 ч с 45 мкг/мл исходного антитела к PD-L1 или контрольным hIgG1 на льду в ФСБ + 1% БСА + 0,09% азида натрия. Клетки CHO-PD1 инкубируют в течение 2 ч с 45 мкг/мл исходного антитела PD-1 или huIgG4-PAA на льду в ФСБ + 1% БСА + 0,09% азида натрия. Клетки CHO-PD1/антитело v3.2 смешивают с CHOK1-PDL1+ исходное антитело PD-L1 или hIgG1 в конечной концентрации 22,5 мкг/мл. Клетки CHOK1-PDL1/антитело v3.2 могут быть смешаны с CHO-PD1 + исходное антитело PD-1 или huIgG4-PAA в конечной концентрации 22,5 мкг/мл. После примерно 72-часовой инкубации клеток (при 4°C) проводят измерение на Fortessa X20 (с пробоотборником HTS) в каналах, подходящих для CFSE и CTDR. Используя программное обеспечение FLOWJO® (FlowJo, LLC, Ashland, OR), может быть проведен гейтинг дважды положительных событий (CFSE+/CTDR+) и рассчитан и сообщен % от общего числа событий (для 2 лунок в повторе). Аппроксимацию и статистику получают с помощью Graphpad Prism, используя нелинейную регрессию (переменный угловой коэффициент, 4 параметра).The ability of the antibodies of the invention to bind together PD-1 and PD-L1 expressing cells was determined by flow cytometry using transfected CHO cells expressing either PD-1 or PD-L1. Briefly, cells overexpressing CHO-PD1 and CHOK1-PDL1 can be differentially labeled with CFSE (carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester) (BD Horizon) or Cell Tracker Deep Red (CTDR/Thermo). CHO-PD1 and CHOK1-PDL1 cells are separately incubated for 2 hours with an antibody of interest, such as v3.2 antibody (on ice in PBS + 1% BSA + 0.09% sodium azide). Unbound antibodies can be removed by washing (2 times using 200 µl of PBS + 1% BSA + 0.09% sodium azide). CHOK1-PDL1 cells are incubated for 2 hours with 45 μg/ml of the original anti-PD-L1 antibody or control hIgG1 on ice in PBS + 1% BSA + 0.09% sodium azide. CHO-PD1 cells are incubated for 2 hours with 45 μg/ml of the original PD-1 antibody or huIgG4-PAA on ice in PBS + 1% BSA + 0.09% sodium azide. CHO-PD1 cells/v3.2 antibody are mixed with CHOK1-PDL1+ parental PD-L1 or hIgG1 antibody at a final concentration of 22.5 μg/ml. CHOK1-PDL1 cells/v3.2 antibody can be mixed with CHO-PD1 + parental PD-1 antibody or huIgG4-PAA at a final concentration of 22.5 µg/ml. After approximately 72 hours of cell incubation (at 4° C.), a measurement is made on a Fortessa X20 (with HTS sampler) in channels suitable for CFSE and CTDR. Using FLOWJO® software (FlowJo, LLC, Ashland, OR), double positive events (CFSE+/CTDR+) can be gated and % of total events calculated and reported (for 2 wells in a repeat). Approximation and statistics are obtained with Graphpad Prism using non-linear regression (variable slope, 4 parameters).

В экспериментах, проводимых в целом, как описано выше в этом примере 3, PD-1/PD-L1 биспецифические антитела опосредуют соединение вместе клеток, которое может быть детектировано проточной цитометрией как дважды положительные события. Связывание антитела v3.2 с клетками CHO-PD1 или CHOK1-PDL1 (с последующим удалением несвязанных) и последующее смешивание с клетками CHOK1-PDL1 или CHO-PD1, соответственно, вызывало дозозависимое повышение количества дважды положительных событий по сравнению с фоном (вплоть до 4-кратного повышения по сравнению с только буфером). Это повышение количества дважды положительных событий блокировалось добавлением избытка конкурирующих mAт к PD-L1 и/или PD-1 в высокой концентрации, но не соответствующим неспецифическим контрольным IgG, демонстрируя специфичность и зависимость от экспрессии антигена-мишени.In experiments generally performed as described above in this Example 3, PD-1/PD-L1 bispecific antibodies mediate cell aggregation, which can be detected by flow cytometry as double positive events. Binding of the v3.2 antibody to CHO-PD1 or CHOK1-PDL1 cells (followed by removal of unbound) and then mixing with CHOK1-PDL1 or CHO-PD1 cells, respectively, caused a dose-dependent increase in the number of double positive events compared to background (up to 4 -fold increase compared to buffer alone). This increase in the number of double positive events was blocked by the addition of an excess of competing mAbs to PD-L1 and/or PD-1 at a high concentration, but not corresponding to non-specific control IgG, showing specificity and dependence on the expression of the target antigen.

Пример 4. Блокирование взаимодействий PD-L1 с PD-L2, PD-L1 с CD80 и PD-L2 с PD-1Example 4 Blocking PD-L1 to PD-L2, PD-L1 to CD80, and PD-L2 to PD-1 Interactions

А анализ блокирования PD-L1/PD-1 может быть выполнен путем смешивания различных количеств анти-PD-1 антитела или контрольного IgG с фиксированным количеством биотинилированного гибридного белка PD-1-Fc (100 нг/мл), и инкубирования при комнатной температуре в течение около 1 часа. После этого смесь может быть перенесена в 96-луночные плашки, предварительно-покрытые PD-L1-Fc (100 нг/лунка) или PD-L2-Fc (100 нг/лунка) и затем проинкубирована при комнатной температуре еще около 1 часа. После промывки может быть добавлен конъюгат стрептавидина HRP, и может быть измерено поглощение при 450 нм. IC50 представляет концентрацию антитела, необходимую для 50% ингибирования связывания PD-1 с PD-L1 или связывания с PD-L2.And a PD-L1/PD-1 blocking assay can be performed by mixing different amounts of anti-PD-1 antibody or control IgG with a fixed amount of biotinylated PD-1-Fc fusion protein (100 ng/mL), and incubating at room temperature in for about 1 hour. The mixture can then be transferred to 96-well plates pre-coated with PD-L1-Fc (100 ng/well) or PD-L2-Fc (100 ng/well) and then incubated at room temperature for about 1 hour more. After washing, the streptavidin HRP conjugate can be added and the absorbance at 450 nm can be measured. IC50 represents the concentration of antibody required for 50% inhibition of PD-1 binding to PD-L1 or binding to PD-L2.

Аналогичным образом, анализ блокирования PD-L1/B7-1 может быть выполнен с использованием плашек, покрытых 1 мкг/мл B7-1-Fc (R&D Systems, кат. № 140-B1-100). Концентрацию антитела, необходимую для 50% ингибирования связывание PD-L1 с B7-1 (IC50) рассчитывают с использованием программного обеспечения GraphPad prism 6.Similarly, a PD-L1/B7-1 blocking assay can be performed using plates coated with 1 μg/ml B7-1-Fc (R&D Systems cat. no. 140-B1-100). The antibody concentration required for 50% inhibition of PD-L1 binding to B7-1 (IC50) was calculated using GraphPad prism 6 software.

В экспериментах, проводимых в основном так, как описано выше в этом примере 4, антитело v3.2, по-видимому, блокирует взаимодействие между рецептором PD-1 и лигандом PD-L1 в промежуточной и более высокой концентрации и, по-видимому, связывает вместе рецептор и лиганд с двойным связыванием при более низкой и промежуточной концентрации, с более сильными аффиностями, чем естественное взаимодействие лиганд-рецептор. Кроме того, антитело v3.2, по-видимому, блокирует взаимодействие PD-L1 с B7-1 с IC50 0,75 нМ и взаимодействие PD-L2 с PD-1 с IC50 2,27 нМ.In experiments conducted essentially as described above in this example 4, the v3.2 antibody appears to block the interaction between the PD-1 receptor and the PD-L1 ligand at intermediate and higher concentrations and appears to bind together receptor and double-binding ligand at a lower and intermediate concentration, with stronger affinities than the natural ligand-receptor interaction. In addition, the v3.2 antibody appears to block the interaction of PD-L1 with B7-1 with an IC50 of 0.75 nM and the interaction of PD-L2 with PD-1 with an IC50 of 2.27 nM.

Пример 5. Функциональный анализ in vitro антител в смешанной лейкоцитарной реакции (MLR)Example 5 In Vitro Functional Assay of Antibodies in Mixed Leukocyte Reaction (MLR)

Моноциты CD14+ могут быть выделены из замороженных МКПК человека, полученных от здорового донора (AllCells кат. № PB005F) с помощью гранул MACS (Miltenyi, кат. № 130-091-153). Незрелые дендритные клетки (ДК) могут быть получены путем культивирования этих моноцитов в 12 мл полной среды RPMI-1640 в присутствии 1000 МЕ/мл hGM-CSF и 500 МЕ/мл hIL-4 в течение 4 дней. CD4+ Tлимфоциты могут быть очищены из свежих МКПК человека от другого здорового донора (AllCells кат.CD14+ monocytes can be isolated from frozen human PBMCs obtained from a healthy donor (AllCells cat. no. PB005F) using MACS pellets (Miltenyi, cat. no. 130-091-153). Immature dendritic cells (DCs) can be obtained by culturing these monocytes in 12 ml of complete RPMI-1640 medium in the presence of 1000 IU/ml hGM-CSF and 500 IU/ml hIL-4 for 4 days. CD4+ T lymphocytes can be purified from fresh human PBMCs from another healthy donor (AllCells cat.

- 11 041266 № PB002) с помощью отрицательного отбора (Miltenyi 130-096-533). Затем два типа клеток могут быть смешаны в отдельных лунках 96-луночной плашки с 100 мкл полной среды AIM-V, содержащей 5 х 10⁴CD4+ T-лимфоцитов и 4 х 103 незрелых ДК в лунке (E:T = 12,5:1). Может быть добавлено 100 мкл полной среды AIM-V, содержащей IgG1-EN человека, исходное анти-PD-1 антитело, исходное анти-PD-1 антитело, комбинации исходных антител, или антитело v3.2 в 8 повторностях (серийно разбавляется 3:1 начиная с 32 нМ соответственно). После инкубации в течение 72 ч при 37°C и 5% CO₂ супернатанты могут быть собраны и затем могут быть измерены ИФН-γ и ИЛ-2 человека с помощью наборов ИФА (R&D кат. № SIF50) и (R&D кат. № S2050).- 11 041266 No. PB002) using negative screening (Miltenyi 130-096-533). The two cell types can then be mixed in separate wells of a 96-well plate with 100 µl of complete AIM-V medium containing 5 x 10 ⁴ CD4+ T lymphocytes and 4 x 10 3 immature DC per well (E:T = 12.5:1 ). 100 µl of complete AIM-V medium containing human IgG1-EN, parent anti-PD-1 antibody, parent anti-PD-1 antibody, parent antibody combinations, or v3.2 antibody in 8 replicates can be added (serially diluted 3: 1 starting from 32 nM, respectively). After incubation for 72 hours at 37°C and 5% CO ₂ supernatants can be collected and then human IFN-γ and IL-2 can be measured using ELISA kits (R&D Cat. No. SIF50) and (R&D Cat. No. S2050 ).

В экспериментах, проводимых в основном так, как описано выше в этом примере 5, добавление антител v3.2 к кокультурам аллогенных CD4+ T-лимфоцитов и ДК приводило к увеличению продуцирования ИФН-γ соответствующими CD4 T-лимфоцитами с ЕС50 0,005 нМ, по сравнению с 0,026 нМ, 0,029 нМ и 0,115 нМ для исходного PD-L1 Ат, исходного PD-1 Ат и их комбинации, соответственно. Точно так же, антитело v3.2 также увеличивало продуцирование ИЛ-2 в ко-культуре с ЕС50 0,011 нМ, по сравнению с PD-L1 Ат, PD-1 Ат и комбинацией PD-L1 Ат + PD-1 Ат (0,034 нМ, 0,023 нМ и 0,046 нМ, соответственно). Результаты показывают, что антитело v3.2 превосходит по своей способности усиливать активацию T-лимфоцитов in vitro исходное PD-L1 Ат в отдельности, исходное PD-1 Ат в отдельности, или их комбинацию.In experiments conducted essentially as described above in this Example 5, the addition of v3.2 antibodies to cocultures of allogeneic CD4+ T-lymphocytes and DC resulted in an increase in IFN-γ production by the corresponding CD4 T-lymphocytes with an EC50 of 0.005 nM, compared with 0.026 nM, 0.029 nM, and 0.115 nM for the original PD-L1 Ab, the original PD-1 Ab, and combinations thereof, respectively. Similarly, v3.2 antibody also increased IL-2 production in co-culture with an EC50 of 0.011 nM, compared to PD-L1 Ab, PD-1 Ab, and the combination of PD-L1 Ab + PD-1 Ab (0.034 nM, 0.023 nM and 0.046 nM, respectively). The results show that the v3.2 antibody is superior in its ability to enhance T-lymphocyte activation in vitro to the original PD-L1 Ab alone, the original PD-1 Ab alone, or a combination of both.

Пример 6. Восстановление T-лимфоцитовExample 6 Recovery of T-lymphocytes

PD-L1 положительные человеческие T-активирующие клетки CHOK1 (Promega part кат. № CS187108), и PD-L1 негативные человеческие T-активирующие клетки CHOK1 (Promega part кат. № CS187110) могут быть получены в Promega. PD-L1/PD-L2, дважды положительные человеческие Tактивирующие клетки CHOK1 могут быть созданы путем трансфекции PD-L1 положительных человеческих T-активирующих клеток CHOK1 вектором, кодирующим полноразмерный PD-L2. Эти клетки могут быть помещены в 96-луночную белую непрозрачную плашку для культивирования тканей из расчета 40000 клеток/лунка в 100 мкл среды (10% ФБС F-12, 0,2 мг/мл гигромицина-B и 0,2 мг/мл G418) и проинкубированы в течение ночи при 37°C с 5% CO2 Среда может быть удалена из аналитических плашек на следующий день и серийно разведенные тестируемые и контрольные антитела в буфере для анализа (2% ФБС RPMI) могут быть добавлены в количестве 40 мкл/лунка. Клетки GloResponse NFAT-luc2/PD1 Jurkat (Promega part кат. № CS187102) могут быть повторно ресуспендированы в буфере для анализа в концентрации 1,25 х 10⁶/мл и добавлены в плашку в количестве 40 мкл/лунка. После 6 ч индукции аналитические плашки можно извлечь из инкубатора и уравновесить при комнатной температуре в течение 5-10 мин. Реагент Био-Glo™ (Promega G7941) может быть приготовлен в соответствии с инструкциями изготовителя и добавлен в количестве 80 мкл/лунка. Затем плашки могут быть проинкубированы от 5 до 10 мин при комнатной температуре. Люминесценция может быть измерена в считывающем устройстве для плашек, а данные могут быть проанализированы с помощью GraphPad Prism 7.PD-L1 positive human CHOK1 T-activating cells (Promega part cat. no. CS187108), and PD-L1 negative human CHOK1 T-activating cells (Promega part cat. no. CS187110) can be obtained from Promega. PD-L1/PD-L2 double positive human CHOK1 T-activating cells can be generated by transfection of PD-L1 positive human CHOK1 T-activating cells with a vector encoding full-length PD-L2. These cells can be plated in a 96-well white opaque tissue culture plate at 40,000 cells/well in 100 µl of medium (10% PBS F-12, 0.2 mg/ml hygromycin-B and 0.2 mg/ml G418 ) and incubated overnight at 37°C with 5% CO2 Media can be removed from the assay plates the next day and serially diluted test and control antibodies in assay buffer (2% PBS RPMI) can be added at 40 µl/well . GloResponse NFAT-luc2/PD1 Jurkat cells (Promega part cat. no. CS187102) can be resuspended in assay buffer at 1.25 x 10 ⁶ /ml and added to the plate at 40 µl/well. After 6 hours of induction, the assay plates can be removed from the incubator and equilibrated at room temperature for 5-10 minutes. Bio-Glo™ Reagent (Promega G7941) can be prepared according to manufacturer's instructions and added at 80 µl/well. The plates can then be incubated for 5 to 10 minutes at room temperature. Luminescence can be measured in a plate reader and data can be analyzed using GraphPad Prism 7.

В анализе PD-1/репортер NFAT Jurkat T-лимфоцитов, проводимом, по существу, как описано выше в этом примере 6, наблюдали, что PD-L1-положительные, активирующие T-лимфоциты, клетки CHO человека подавляют активацию T-лимфоцитов. PD-1 Ат или PD-L1 Ат реактивировали T-лимфоциты путем отмены подавления, опосредованного PD-L1 - PD-1. Однако антитело v3.2 оказалось лучше (ЕС50 0,12 нМ) по сравнению либо с исходным PD-L1 Ат отдельно (1,92 нМ), либо с исходным PD-1 Ат отдельно (1,01 нМ), либо с комбинацией исходного PD-1 Ат и исходного PD-L1 Ат (0,796 нМ), в его способности восстанавливать T-лимфоциты. Когда в этой системе применяли PD-L1/PD-L2 дважды положительные, активирующие T-лимфоциты, клетки CHO, также подавлялась активация PD-1-положительных репортерных T-лимфоцитов. Исходное PD-1 Ат, но не исходное PD-L1 Ат, было способно реактивировать T-лимфоциты. Однако антитело v3.2 лучше чем (ЕС50 0,181 нМ) исходное PD-1 Ат отдельно (0,946 нМ), или чем комбинация исходного PD-1 Ат и исходного PD-L1 Ат (1,251 нМ), в своей способность восстанавливать T-лимфоци.тыIn the PD-1/NFAT Jurkat T-lymphocyte reporter assay, performed essentially as described above in this Example 6, PD-L1-positive, T-lymphocyte-activating human CHO cells were observed to suppress T-lymphocyte activation. PD-1 Ab or PD-L1 Ab reactivated T-lymphocytes by reversing the suppression mediated by PD-L1 - PD-1. However, the v3.2 antibody was better (EC50 0.12 nM) than either the original PD-L1 Ab alone (1.92 nM), or the original PD-1 Ab alone (1.01 nM), or a combination of the original PD-1 Ab and the original PD-L1 Ab (0.796 nM), in its ability to restore T-lymphocytes. When PD-L1/PD-L2 doubly positive, activating T lymphocytes, CHO cells were used in this system, the activation of PD-1 positive reporter T lymphocytes was also suppressed. The original PD-1 Ab, but not the original PD-L1 Ab, was able to reactivate T-lymphocytes. However, the v3.2 antibody is better than (EC50 0.181 nM) the original PD-1 Ab alone (0.946 nM), or than the combination of the original PD-1 Ab and the original PD-L1 Ab (1.251 nM) in its ability to regenerate T-lymphocytes. You

Пример 7. Анализ эффективности in vivoExample 7 In Vivo Efficacy Assay

Эффективность антител согласно данному изобретению может быть испытана в моделях ксенотрансплантата в иммунодефицитных мышах, которым вводили иммунные клетки человека, для оценки способности ограничивать или разрушать развившиеся опухоли в модели, посредством усиления Tклеточного ответа на алло-антигены. Все животные в исследованиях одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных, и использовались в соответствии с действующими нормами и стандартами Министерства сельского хозяйства США и Национального института здравоохранения.The efficacy of the antibodies of this invention can be tested in xenograft models in immunodeficient mice injected with human immune cells to evaluate the ability to limit or destroy established tumors in the model by enhancing the T cell response to allo antigens. All study animals are approved by the Institutional Animal Care and Use Committee and used in accordance with applicable USDA and NIH codes and standards.

Часть А: Модель ксенотрансплантата NCI-H292 НМКРЛ человекаPart A: NCI-H292 Xenograft Model of Human NSCLC

Мышам NOD scid gamma (NSG) из Jackson Laboratories (возраст - 7 недель, самки, в группах по 7-8 мышей) подкожно имплантируют в бок либо 2 х 106 клеток NCI-H292, либо смесь 2 х 106 клеток NCIH292 и 1 х 106 свежевыделенных МКПК человека в HBSS (общий объем 0,2 мл). Начиная с Дня 1, мышей обрабатывают внутрибрюшинной инъекцией либо IgG1-EN человека (контроль), исходного антитела-PD-L1 антитела (0,25 мг/кг), либо исходного анти-PD-1 антитела (0,25 мг/кг), либо комбинацией исNOD scid gamma (NSG) mice from Jackson Laboratories (7 weeks old, female, in groups of 7-8 mice) are subcutaneously implanted in the flank with either 2 x 106 NCI-H292 cells or a mixture of 2 x 106 NCIH292 cells and 1 x 106 freshly isolated human PBMCs in HBSS (total volume 0.2 ml). Starting on Day 1, mice are treated with an intraperitoneal injection of either human IgG1-EN (control), parent antibody-PD-L1 antibody (0.25 mg/kg), or parent anti-PD-1 antibody (0.25 mg/kg) , or a combination of

- 12 041266 ходных антител (0,25 мг/кг каждое), либо антителом v3.0, v3.2 или v13844 (0,5 мг/кг) один раз в неделю в трех дозах. Состояние и поведение животных, включая уход за собой и способность к передвижению, отслеживали, по меньшей мере, два раза в неделю. Массу тела и объем опухоли измеряли два раза в неделю.- 12 041266 stock antibodies (0.25 mg/kg each) or antibody v3.0, v3.2 or v13844 (0.5 mg/kg) once a week in three doses. The condition and behavior of the animals, including grooming and mobility, were monitored at least twice a week. Body weight and tumor volume were measured twice a week.

В экспериментах, проводимых, по существу, как описано выше в части A примера 7, антитела v3.0, v3.2 и v13844, вводимые в дозе 10 мг/кг, хорошо переносились и были безопасными, что контролировали по массе тела и клиническим наблюдениям. Мышей, которым имплантировали смесь опухолевых клеток NCI-H292 и МКПК, обрабатывали αнти-PD-L1 или анти-PD-1 антителом, или комбинацией анти-PD-L1 и aнти-PD-1 антител в дозе 10 мг/кг каждое, все задерживали рост опухоли по сравнению с лечением контрольной молекулой -IgG1-EN человека. Для мышей, которым имплантировали смесь опухолевых клеток NCI-H292 и МКПК, обработка биспецифичным Ат PD-1/PD-L1 (v13844, v3.0 или v3.2) в количестве 10 мг/кг раз в неделю была для всех более эффективной с полной регрессией (ПР) с 7/8, 5/8 и 5/8 соответственно, чем комбинированная терапия (исходное антитело к PD-L1 + исходное антитело к PD-1) (ПР в 2/8).In experiments conducted essentially as described in Example 7, Part A above, antibodies v3.0, v3.2, and v13844 administered at 10 mg/kg were well tolerated and safe as controlled by body weight and clinical observations. . Mice implanted with a mixture of NCI-H292 tumor cells and PBMC were treated with αanti-PD-L1 or anti-PD-1 antibody, or a combination of anti-PD-L1 and anti-PD-1 antibodies at a dose of 10 mg/kg each, all delayed tumor growth compared to treatment with the control molecule -IgG1-EN human. For mice implanted with a mixture of NCI-H292 tumor cells and PBMCs, treatment with bispecific PD-1/PD-L1 Ab (v13844, v3.0 or v3.2) at 10 mg/kg once a week was overall more effective with complete regression (CR) with 7/8, 5/8 and 5/8, respectively, than combination therapy (original anti-PD-L1 antibody + original anti-PD-1 antibody) (PR in 2/8).

Часть Б: модель ксенотрансплантата HSC827 НМРЛ человекаPart B: HSC827 xenograft model of human NSCLC

Мышам NSG из Jackson Laboratories (возраст - 7 недель, самки, в группах по 8 мышей) подкожно имплантировали в бок 10 х 10⁶ клеток HCC827 в HBSS (общий объем 0,2 мл). Все T-лимфоциты человека, выделенные из цельной крови (New York Blood Center), размножали, используя Human T-Activator CD3/CD28 Dynabeads® в течение 10 суток и проводили криоконсервацию. T-лимфоциты размораживали, промывали, подсчитывали и внутривенно инфузировали (3,5 х 10⁶ T-лимфоцитов в 0,2 мл ФСБ/мышь) мышам, несущим опухоль HCC827, на спустя 44 дня после имплантации. Начиная с следующего дня мышей обрабатывают внутрибрюшинной инъекцией IgG1-EN человека (контроль), исходным анти-PDL1 антителом, исходным анти-PD-1 антителом, или комбинацией исходного анти-PD-L1 антитела и исходного анти-PD-1 антитела, в дозе 2 мг/кг каждое, или антителом v3.2 с тремя уровнями дозы (0,02, 0,2 или 2 мг/кг), один раз в неделю в течение 4 недель. Мышам дают вторую инфузию размноженных Tлимфоцитов (2,5 х 10⁶ T-лимфоцитов в 0,2 мл ФСБ/мышь) в День 56. Состояние и поведение животных, включая уход за собой и способность к передвижению, отслеживали, по меньшей мере, два раза в неделю. Массу тела и объем опухоли измеряли два раза в неделю. Объемы опухолей измеряют один раз в неделю с использованием электронных штангенциркулей, как описано в типовой инструкции под названием Измерение роста опухоли IM. Объем опухоли рассчитывают по формуле: объем опухоли (мм³) = π/6 * длина * ширина².NSG mice from Jackson Laboratories (7 weeks old, female, in groups of 8 mice) were subcutaneously implanted in the flank with 10 x 10 ⁶ HCC827 cells in HBSS (total volume 0.2 ml). All human T-lymphocytes isolated from whole blood (New York Blood Center) were expanded using Human T-Activator CD3/CD28 Dynabeads® for 10 days and cryopreserved. T-lymphocytes were thawed, washed, counted and intravenously infused (3.5 x 10 ⁶ T-lymphocytes in 0.2 ml PBS/mouse) to mice bearing the HCC827 tumor at 44 days after implantation. Starting the following day, mice are treated with an intraperitoneal injection of human IgG1-EN (control), parent anti-PDL1 antibody, parent anti-PD-1 antibody, or a combination of parent anti-PD-L1 antibody and parent anti-PD-1 antibody, at a dose of 2 mg/kg each, or v3.2 antibody at three dose levels (0.02, 0.2 or 2 mg/kg), once a week for 4 weeks. Mice are given a second infusion of expanded T lymphocytes (2.5 x 10 ⁶ T lymphocytes in 0.2 ml PBS/mouse) on Day 56. The condition and behavior of the animals, including grooming and ambulation, were monitored by at least two once a week. Body weight and tumor volume were measured twice a week. Tumor volumes are measured once a week using electronic calipers as described in the sample instruction titled IM Tumor Growth Measurement. Tumor volume is calculated by the formula: tumor volume (mm ³ ) = π/6 * length * width ² .

В экспериментах, выполненных, по существу, как описано выше в части B примера 7, антитело v3.2 при всех трех уровнях дозы (0,02, 0,2 или 2 мг/кг) показывало похожий противоопухолевый ответ в модели сформированной опухоли HCC827 в присутствии размноженных T-лимфоцитов. Кроме того, антитело v3.2 при 0,02 мг/кг задерживало рост опухоли более значительно, чем αнти-PD-L1 антитело (2 мг/кг, p=0,05), анти-PD-1 антитело (2 мг/кг, p<0,001) и комбинация обоих агентов (2 мг/кг каждый, p<0,001) в День 69 после имплантации опухолевых клеток (см. табл. 2).In experiments performed essentially as described in Example 7, part B above, the v3.2 antibody at all three dose levels (0.02, 0.2, or 2 mg/kg) showed a similar antitumor response in the HCC827 established tumor model in the presence of multiplied T-lymphocytes. In addition, v3.2 antibody at 0.02 mg/kg retarded tumor growth more significantly than αanti-PD-L1 antibody (2 mg/kg, p=0.05), anti-PD-1 antibody (2 mg/kg). kg, p<0.001) and a combination of both agents (2 mg/kg each, p<0.001) on Day 69 after tumor cell implantation (see Table 2).

Таблица 2. Ингибирование опухоли на День 69 в модели опухоли HCC827 НМКРЛ человекаTable 2 Tumor Inhibition at Day 69 in Human NSCLC HCC827 Tumor Model

Группа обработки Processing group Объем опухоли (в мм ³) на День 69 (Среднее ± СОС)Tumor volume (in mm ³ ) on Day 69 (Mean ± SOS) значение р (в сравнение с 0,02 мг/кг BsAb v3.2/Tлимфоцитов) p-value (versus 0.02 mg/kg BsAb v3.2/T lymphocytes) 2 мг/кг IgGl-EN человека 2 мг/кг IgGl-EN человека/Тлимфоциты 2 мг/кг анти-PD-Ll тАт/Тлимфоциты 2 мг/кг анти-PD-1 тАт/Т- 2 mg/kg human IgGl-EN 2 mg/kg human IgGl-EN/T lymphocytes 2 mg/kg anti-PD-Ll tAbs/Tlymphocytes 2 mg/kg anti-PD-1 tAb/T- 1572,4 ± 87,8 1062,2 ± 81,7 968,7 ±58,7 1572.4 ± 87.8 1062.2 ± 81.7 968.7±58.7 <0,001 <0,001 0,005 <0.001 <0.001 0.005 1275,0 ± 67,2 1275.0 ± 67.2 <0,001 <0.001 лимфоциты 2 мг/кг анти-PD-Ll тАт + lymphocytes 2 mg/kg anti-PD-Ll tAb + 2 мг/кг анти-PD-1 тАт/Тлимфоциты 2 mg/kg anti-PD-1 tAbs/Tlymphocytes 1021,0 ± 58,9 1021.0±58.9 <0,001 <0.001 0,02 мг/кг антитела v3.2/Tлимфоциты 0.02 mg/kg antibodies v3.2/T lymphocytes 761,8 ±33,3 761.8±33.3 НД ND 0,2 мг/кг антитела v3.2/Tлимфоциты 0.2 mg/kg antibodies v3.2/T lymphocytes 759,8 ±43,3 759.8±43.3 0,975 0.975 2 мг/кг антитела v3.2/Tлимфоциты 2 mg/kg antibodies v3.2/T lymphocytes 721,3 ±49,2 721.3±49.2 0,516 0.516

СОС: стандартная ошибка среднегоSOS: standard error of the mean

Аминокислотные и нуклеотидные последовательностиAmino acid and nucleotide sequences

SEQ Ш NO: 1 (PD-L1 человека)SEQ W NO: 1 (human PD-L1)

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIV YWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDA GVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKA EVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEEN HTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQ DTNSKKQSDTHLEETMRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIV YWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDA GVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKA EVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEEN HTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQ DTNSKKQSDTHLEET

- 13 041266- 13 041266

SEQ ГО NO: 2 (PD-1 человека)SEQ GO NO: 2 (PD-1 human)

MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFT CSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFH MSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRP AGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAV PVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGP RS AQPLRPEDGHC S WPLMQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFT CSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFH MSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRP AGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAV PVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGP RS AQPLRPEDGHC S WPL

SEQ ID NO: 3 (HCVR PD-L1 At)SEQ ID NO: 3 (HCVR PD-L1 At)

Q VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQ APGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYG MD VWGQGTT VT VS SQ VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQ APGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYG MD VWGQGTT VT VS S

SEQ ID NO: 4 (LC VR PD-L1 At)SEQ ID NO: 4 (LC VR PD-L1 At)

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRP SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLGQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRP SGVPDRFSSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLG

SEQ ID NO: 5 (HCVR PD-1 Ат-Хаа)SEQ ID NO: 5 (HCVR PD-1 At-Haa)

Q VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQ APGQGLEWMGLIIPX aaFDTAGYAQKFQGRVAITVDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEHSSTGTF DYWGQGTLVTVSSQ VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQ APGQGLEWMGLIIPX aaFDTAGYAQKFQGRVAITVDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEHSSTGTF DYWGQGTLVTVSS

Xaa: M или S.Xaa: M or S.

SEQ ID NO: 6 (HCVR PD-1 Xaa-S)SEQ ID NO: 6 (HCVR PD-1 Xaa-S)

QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPSFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSSQVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPSFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSTGTFDYW GQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 7 (HCVR PD-1 Xaa-M)SEQ ID NO: 7 (HCVR PD-1 Xaa-M)

QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPMFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSSQVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPMFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSTGTFDYW GQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 8 (LCVR PD-1 At)SEQ ID NO: 8 (LCVR PD-1 At)

DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLISAASSLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANHLPFTFGGGTKVEIKDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLISAASSLQS GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANHLPFTFGGGTKVEIK

SEQ ID NO: 9 (область из домена CHI PD-L1 Ат v3.2 и vl3844 HC) SLKSVSEQ ID NO: 9 (region from CHI domain of PD-L1 Ab v3.2 and vl3844 HC) SLKSV

SEQ ID NO: 10 (область из домена CH2 PD-L1 Ат НС)SEQ ID NO: 10 (region from CH2 domain of PD-L1 Ab HC)

AAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVS

SEQ ID NO: 11 (область из домена СНЗ НС для PD-1 V13844 и PD-L1 v3.2)SEQ ID NO: 11 (region from CH3 HC domain for PD-1 V13844 and PD-L1 v3.2)

- 14 041266- 14 041266

VYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF

ALVALV

SEQ ID NO: 12 (область СНЗ домена НС PD-1 v3.2 и PD-L1 V13844)SEQ ID NO: 12 (CH3 domain HC domain of PD-1 v3.2 and PD-L1 V13844)

REPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVL DSDGSFREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVL DSDGSF

SEQIDNO: 13 (область из домена CHI PD-1 Ат v3.2 и PD-1 V13844 НС)SEQIDNO: 13 (region from CHI domain of PD-1 Ab v3.2 and PD-1 V13844 HC)

EAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLESSGLYSL WSVVTVPSEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLESSGLYSL WSVVTVPS

SEQ ID NO: 14 AAESELS (область из константной области LC PD-L1 Ат v3.2 и V13844)SEQ ID NO: 14 AAESELS (Region from LC PD-L1 At v3.2 and V13844 constant region)

SEQIDNO: 15 (область из константной области LC PD-1 Ат v3.2 и V13844)SEQIDNO: 15 (region from LC PD-1 At v3.2 and V13844 constant region)

RVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLRRVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLR

SEQ ID NO: 16 (HCDR1 PD-L1 At) KASGGTFSSYAISSEQ ID NO: 16 (HCDR1 PD-L1 At) KASGGTFSSYAIS

SEQIDNO: 17SEQID NO: 17

GIIPIFGTANYAQKFQG (HCDR2 PD-L1 Ат)GIIPIFGTANYAQKFQG (HCDR2 PD-L1 Am)

SEQIDNO: 18SEQID NO: 18

ARSPDYSPYYYYGMDV (HCDR3 PD-L1 Ат)ARSPDYSPYYYYGMDV (HCDR3 PD-L1 Am)

SEQIDNO: 19SEQID NO: 19

SGSSSNIGSNTVN (LCDR1 PD-L1 At)SGSSSNIGSNTVN (LCDR1 PD-L1 At)

SEQ ID NO: 20SEQ ID NO: 20

YGNSNRPS (LCDR2 PD-L1 At)YGNSNRPS (LCDR2PD-L1At)

SEQIDNO: 21SEQID NO: 21

QSYDSSLSGSV (LCDR3 PD-L1 At)QSYDSSLGSV (LCDR3 PD-L1At)

SEQ ID NO: 22SEQ ID NO: 22

KASGGTFSSYAIS (HCDR1 PD-1 At)KASGGTFSSYAIS (HCDR1PD-1At)

SEQ ID NO: 23SEQ ID NO: 23

LIIPSFDTAGYAQKFQG (HCDR2 PD-1 At; v3.2)LIIPSFDTAGYAQKFQG (HCDR2 PD-1 At; v3.2)

SEQ ID NO: 24SEQ ID NO: 24

LIIPMFDTAGYAQKFQG (HCDR2 PD-1 At; v3.0)LIIPMFDTAGYAQKFQG (HCDR2 PD-1 At; v3.0)

SEQ ID NO: 25 (HCDR3 PD-1 At) ARAEHSSTGTFDYSEQ ID NO: 25 (HCDR3 PD-1 At) ARAEHSSTGTFDY

SEQ ID NO: 26 (LCDR1 PD-1 At)SEQ ID NO: 26 (LCDR1 PD-1 At)

- 15 041266- 15 041266

RASQGISSWLARASQGISSWLA

SEQ ID NO: 27 (LCDR2 PD-1 At)SEQ ID NO: 27 (LCDR2 PD-1 At)

SAASSLQSSAASSLQS

SEQ Ш NO: 28 (LCDR3 PD-1 At) QQANHLPFTSEQ W NO: 28 (LCDR3 PD-1 At) QQANHLPFT

SEQ ID NO: 29 (HC PD-L1 At v 13 844)SEQ ID NO: 29 (HC PD-L1 At v 13 844)

Q VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYG MDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGKQ VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYG MDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 30 (LC PD-L1 At v3.2, v3.0 и vl3844)SEQ ID NO: 30 (LC PD-L1 At v3.2, v3.0 and vl3844)

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRP SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLGQ PKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTT PSKQSNNKYAAESELSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECSQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRP SGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLGQ PKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTT PSKQSNNKYAAESELSLTPEQWKSHRSYAPSCQVTHE

SEQ ID NO: 31 (HC PD-1 At v3.2)SEQ ID NO: 31 (HC PD-1 At v3.2)

QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPSFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP EAPSSKSTSG GTAALGCLVT DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLESS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVSVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYVLPPSRDE LTKNQVSLLC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYLTWPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGKQVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPSFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP EAPSSKSTSG GTAALGCLVT DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLESS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVSVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYVLPPSRDE LTKNQVSLLC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYLTWPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 32 (HCPD-lv3.0)SEQ ID NO: 32 (HCPD-lv3.0)

QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPMFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP EAPSSKSTSG GTAALGCLVT DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLESS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVSVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYVLPPSRDE LTKNQVSLLC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYLTWPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGKQVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPMFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP EAPSSKSTSG GTAALGCLVT DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLESS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVSVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYVLPPSRDE LTKNQVSLLC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYLTWPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK

- 16 041266- 16 041266

SEQ Ш NO: 33 (НС PD-1 At vl3844)SEQ W NO: 33 (NS PD-1 At vl3844)

QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPMFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP EAPSSKSTSG GTAALGCLVT DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLESS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVSVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYVYPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFALV SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGKQVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGGTFS SYAISWVRQA PGQGLEWMGL IIPMFDTAGY AQKFQGRVAI TVDESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARAE HSSTGTFDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP EAPSSKSTSG GTAALGCLVT DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLESS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKRVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVSVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYVYPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFALV SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 34 (LC PD-1 At v3.2, v3.0 и v13844)SEQ ID NO: 34 (LC PD-1 At v3.2, v3.0 and v13844)

DIQMTQSPSS VSASVGDRVT ITCRASQGIS SWLAWYQQKP GKAPKLLISA ASSLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ ANHLPFTFGG GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA RVGCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLRSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGECDIQMTQSPSS VSASVGDRVT ITCRASQGIS SWLAWYQQKP GKAPKLLISA ASSLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ ANHLPFTFGG GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA RVGCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYECLRSTLT VSKADYVACEG

SEQ ID NO: 35 Последовательность ДНК LC PD-L1SEQ ID NO: 35 DNA sequence of LC PD-L1

CAGTCCGTCC TGACTCAGCC ACCTTCCGCT AGCGGTACCC CCGGCCAGAG AGTGACAATC TCATGCTCCG GTTCCAGCTC TAACATTGGC TCTAACACTG TCAATTGGTA CCAGCAGCTG CCAGGAACCG CACCAAAGCT GCTGATCTAT GGAAACTCAA ATAGGCCTAG CGGGGTGCCA GACCGGTTTA GCGGATCTAA AAGTGGGACT TCAGCTTCCC TGGCAATTTC TGGACTGCAG AGTGAGGACG AAGCTGATTA CTATTGCCAG TCCTACGATA GTTCACTGAG CGGTTCCGTG TTCGGCGGAG GGATCAAGCT GACAGTCCTG GGCCAGCCCA AGGTGAGTTC TAGAGGATCC ATCTGGGATA AGCATGCTGT TTTCTGTCTG TCCCTAACAT GCCCTGTGAT TATCCGCAAA CAACACACCC AAGGGCAGAA CTTTGTTACT TAAACACCAT CCTGTTTGCT TCTTTCCTCA GGCCGCTCCT TCCGTGACTC TGTTTCCCCC TTCCAGCGAG GAACTGCAGG CCAATAAGGC CACCCTGGTG TGCCTGATTA GCGACTTCTA TCCTGGAGCT GTGACAGTCG CATGGAAGGC CGATTCTAGT CCAGTGAAAG CAGGGGTCGA GACCACAACT CCCTCCAAGC AGAGCAACAA CAAGTACGCA GCCGAGTCTG AACTGAGTCT GACCCCAGAA CAGTGGAAGT CCCACAGGAG TTATTCATGC CAGGTGACCC ATGAGGGCTC CACAGTGGAG AAGACCGTGG CCCCTGCTGA GTGTAGCCAGTCCGTCC TGACTCAGCC ACCTTCCGCT AGCGGTACCC CCGGCCAGAG AGTGACAATC TCATGCTCCG GTTCCAGCTC TAACATTGGC TCTAACACTG TCAATTGGTA CCAGCAGCTG CCAGGAACCG CACCAAAGCT GCTGATCTAT GGAAACTCAA ATAGGCCTAG CGGGGTGCCA GACCGGTTTA GCGGATCTAA AAGTGGGACT TCAGCTTCCC TGGCAATTTC TGGACTGCAG AGTGAGGACG AAGCTGATTA CTATTGCCAG TCCTACGATA GTTCACTGAG CGGTTCCGTG TTCGGCGGAG GGATCAAGCT GACAGTCCTG GGCCAGCCCA AGGTGAGTTC TAGAGGATCC ATCTGGGATA AGCATGCTGT TTTCTGTCTG TCCCTAACAT GCCCTGTGAT TATCCGCAAA CAACACACCC AAGGGCAGAA CTTTGTTACT TAAACACCAT CCTGTTTGCT TCTTTCCTCA GGCCGCTCCT TCCGTGACTC TGTTTCCCCC TTCCAGCGAG GAACTGCAGG CCAATAAGGC CACCCTGGTG TGCCTGATTA GCGACTTCTA TCCTGGAGCT GTGACAGTCG CATGGAAGGC CGATTCTAGT CCAGTGAAAG CAGGGGTCGA GACCACAACT CCCTCCAAGC AGAGCAACAA CAAGTACGCA GCCGAGTCTG AACTGAGTCT GACCCCAGAA CAGTGGAAGT CCCACAGGAG TTATTCATGC CAGGTGACCC ATGAGGGCTC CACAGTGGAG AAGACCGTGG CCCCTGCTGA GTGTAGC

SEQ ID NO: 36 Последовательность ДНК PD-1 LCSEQ ID NO: 36 PD-1 LC DNA sequence

GACATTCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCGTGAGCGCCAGCGTCGGGGA CCGAGTGACCATCACATGCAGGGCCAGCCAGGGTATTTCTAGTTGGCTGG CTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAAGCACCCAAGCTGCTGATCTCCGCC GCTTCAAGCCTGCAGTCCGGAGTGCCCTCTCGATTCTCTGGTAGTGGCTC AGGAACAGACTTTACTCTGACCATTTCCTCTCTGCAGCCTGAGGATTTCG CTACTTACTATTGCCAGCAGGCAAACCACCTGCCATTCACCTTTGGCGGA GGGACAAAAGTGGAGATCAAGAGAACCGTCGCGGCGCCCAGTGTCTTCAT TTTTCCCCCTAGCGACGAACAGCTGAAGTCTGGGACAGCCAGAGTGGGCT GTCTGCTGAACAACTTCTACCCTAGAGAGGCTAAAGTGCAGTGGAAGGTC GATAACGCACTGCAGTCCGGAAATTCTCAGGAGAGTGTGACTGAACAGGA CTCAAAAGATAGCACCTATTCCCTGAGAAGCACACTGACTCTGAGCAAGG CCGACTACGAGAAGCATAAAGTGTATGCTTGTGAAGTCACCCACCAGGGGGACATTCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCGTGAGCGCCAGCGTCGGGGA CCGAGTGACCATCACATGCAGGGCCAGCCAGGGTATTTCTAGTTGGCTGG CTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAAGCACCCAAGCTGCTGATCTCCGCC GCTTCAAGCCTGCAGTCCGGAGTGCCCTCTCGATTCTCTGGTAGTGGCTC AGGAACAGACTTTACTCTGACCATTTCCTCTCTGCAGCCTGAGGATTTCG CTACTTACTATTGCCAGCAGGCAAACCACCTGCCATTCACCTTTGGCGGA GGGACAAAAGTGGAGATCAAGAGAACCGTCGCGGCGCCCAGTGTCTTCAT TTTTCCCCCTAGCGACGAACAGCTGAAGTCTGGGACAGCCAGAGTGGGCT GTCTGCTGAACAACTTCTACCCTAGAGAGGCTAAAGTGCAGTGGAAGGTC GATAACGCACTGCAGTCCGGAAATTCTCAGGAGAGTGTGACTGAACAGGA CTCAAAAGATAGCACCTATTCCCTGAGAAGCACACTGACTCTGAGCAAGG CCGACTACGAGAAGCATAAAGTGTATGCTTGTGAAGTCACCCACCAGGGG

- 17 041266- 17 041266

CTGAGTTCACCAGTCACAAAATCATTCAACAGAGGGGAGTGCCTGAGTTCACCAGTCACAAAAATCATTCAACAGAGGGGAGTGC

SEQ ID NO: 37 Последовательность ДНК НС PD-L1SEQ ID NO: 37 DNA sequence of HC PD-L1

CAGGTCCAGC TGGTGCAGAG CGGAGCCGAA GTGAAGAAAC CCGGTAGCAG CGTCAAAGTG TCATGTAAAG CCTCAGGGGG AACATTCTCC AGCTACGCCA TCTCCTGGGT GAGACAGGCT CCAGGACAGG GACTGGAGTG GATGGGAGGA ATCATCCCTA TCTTCGGCAC CGCCAACTAC GCTCAGAAGT TTCAGGGCCG CGTGACCATC ACAGCCGACA AGAGCACCTC TACAGCTTAT ATGGAGCTGT CTTCCCTGAG AAGCGAGGAT ACAGCCGTGT ACTATTGCGC TCGCTCCCCC GACTACAGCC CTTACTATTA CTATGGCATG GACGTGTGGG GCCAGGGCAC CACAGTGACC GTGAGCTCTG CTAGCACAAA GGGCCCATCC GTGTTCCCAC TGGCTCCATC CAGCAAGTCC ACCAGCGGAG GAACAGCCGC TCTGGGCTGT CTGGTGAAGG ACTATTTCCC AGAGCCAGTG ACCGTGTCCT GGAACAGCGG CGCCCTGACC TCTGGAGTGC ACACATTTCC CGCTGTGCTG CAGTCTTCCG GCCTGTACTC TCTGAAGTCC GTGGTGACCG TGCCTAGCTC TTCCCTGGGC ACCCAGACAT ATATCTGCAA CGTGAATCAC AAGCCTTCCA ATACAAAGGT GGACAAGAGG GTGGAGCCAA AGAGCTGTGA TAAGACCCAT ACATGCCCCC CTTGTCCTGC TCCAGAGGCT GCTGGAGGAC CAAGCGTGTT CCTGTTTCCA CCCAAGCCCA AGGACACCCT GATGATCTCT AGGACCCCTG AGGTGACATG CGTGGTGGTG TCCGTGTCCC ACGAGGACCC AGAGGTGAAG TTTAACTGGT ACGTGGATGG CGTGGAGGTG CATAATGCTA AGACCAAGCC TAGGGAGGAG CAGTACAACA GCACCTATCG GGTGGTGTCT GTGCTGACAG TGCTGCATCA GGATTGGCTG AACGGCAAGG AGTATAAGTG CAAGGTGTCT AATAAGGCCC TGCCCGCTCC TATCGAGAAG ACCATCTCCA AGGCCAAGGG CCAGCCTAGG GAGCCACAGG TGTACGTGCT GCCTCCAAGC CGGGACGAGC TGACAAAGAA CCAGGTGTCT CTGCTGTGCC TGGTGAAGGG CTTCTATCCA TCTGATATCG CTGTGGAGTG GGAGTCCAAT GGCCAGCCCG AGAACAATTA CCTGACCTGG CCCCCTGTGC TGGACAGCGA TGGCTCTTTC TTTCTGTATT CCAAGCTGAC AGTGGATAAG AGCCGGTGGC AGCAGGGCAA CGTGTTCTCC TGTTCTGTGA TGCACGAGGC ACTGCACAAT CATTACACCC AGAAATCCCT GTCACTGAGC CCCGGCAAGCAGGTCCAGC TGGTGCAGAG CGGAGCCGAA GTGAAGAAAC CCGGTAGCAG CGTCAAAGTG TCATGTAAAG CCTCAGGGGG AACATTCTCC AGCTACGCCA TCTCCTGGGT GAGACAGGCT CCAGGACAGG GACTGGAGTG GATGGGAGGA ATCATCCCTA TCTTCGGCAC CGCCAACTAC GCTCAGAAGT TTCAGGGCCG CGTGACCATC ACAGCCGACA AGAGCACCTC TACAGCTTAT ATGGAGCTGT CTTCCCTGAG AAGCGAGGAT ACAGCCGTGT ACTATTGCGC TCGCTCCCCC GACTACAGCC CTTACTATTA CTATGGCATG GACGTGTGGG GCCAGGGCAC CACAGTGACC GTGAGCTCTG CTAGCACAAA GGGCCCATCC GTGTTCCCAC TGGCTCCATC CAGCAAGTCC ACCAGCGGAG GAACAGCCGC TCTGGGCTGT CTGGTGAAGG ACTATTTCCC AGAGCCAGTG ACCGTGTCCT GGAACAGCGG CGCCCTGACC TCTGGAGTGC ACACATTTCC CGCTGTGCTG CAGTCTTCCG GCCTGTACTC TCTGAAGTCC GTGGTGACCG TGCCTAGCTC TTCCCTGGGC ACCCAGACAT ATATCTGCAA CGTGAATCAC AAGCCTTCCA ATACAAAGGT GGACAAGAGG GTGGAGCCAA AGAGCTGTGA TAAGACCCAT ACATGCCCCC CTTGTCCTGC TCCAGAGGCT GCTGGAGGAC CAAGCGTGTT CCTGTTTCCA CCCAAGCCCA AGGACACCCT GATGATCTCT AGGACCCCTG AGGTGACATG CGTGGTGGTG TCCGTGTCCC ACGAGGACCC AGAGGTGAAG TTTAACTGGT ACGTGGATGG CGTGGAGGTG CATAATGCTA AGACCAAGCC TAGGGAGGAG CAGTACAACA GCACCTATCG GGTGGTGTCT GTGCTGACAG TGCTGCATCA GGATTGGCTG AACGGCAAGG AGTATAAGTG CAAGGTGTCT AATAAGGCCC TGCCCGCTCC TATCGAGAAG ACCATCTCCA AGGCCAAGGG CCAGCCTAGG GAGCCACAGG TGTACGTGCT GCCTCCAAGC CGGGACGAGC TGACAAAGAA CCAGGTGTCT CTGCTGTGCC TGGTGAAGGG CTTCTATCCA TCTGATATCG CTGTGGAGTG GGAGTCCAAT GGCCAGCCCG AGAACAATTA CCTGACCTGG CCCCCTGTGC TGGACAGCGA TGGCTCTTTC TTTCTGTATT CCAAGCTGAC AGTGGATAAG AGCCGGTGGC AGCAGGGCAA CGTGTTCTCC TGTTCTGTGA TGCACGAGGC ACTGCACAAT CATTACACCC AGAAATCCCT GTCACTGAGC CCCGGCAAG

SEQ ID NO: 38 Последовательность ДНК PD-1 НС (v3.2)SEQ ID NO: 38 DNA sequence of PD-1 HC (v3.2)

CAGGTCCAGCTGGTGCAGAGCGGGGCAGAGGTCAAGAAACCCGGTAGCTC CGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCTTCCGGCGGAACCTTCTCTAGTTACGCCA TCAGCTGGGTGAGACAGGCTCCTGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCCTG ATCATTCCATCTTTTGATACCGCTGGCTACGCACAGAAGTTTCAGGGACG GGTGGCAATTACAGTCGATGAGTCAACCAGCACAGCCTATATGGAGCTGT CAAGCCTGCGGTCCGAAGACACTGCCGTGTACTATTGCGCAAGGGCCGAA CACTCCTCTACTGGAACCTTCGATTACTGGGGGCAGGGTACCCTGGTGAC AGTCAGTTCAGCCAGCACTAAGGGACCCAGCGTGTTTCCAGAGGCCCCCT CTAGTAAATCCACTTCTGGAGGCACCGCTGCACTGGGCTGTCTGGTGACC GATTACTTCCCAGAGCCCGTCACAGTGAGCTGGAACTCCGGGGCCCTGAC CAGCGGAGTCCATACATTTCCTGCTGTGCTGGAGTCAAGCGGGCTGTACT CCCTGTCCTCTGTGGTCACCGTGCCAAGTTCAAGCCTGGGAACTCAGACC TATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCTTCAAATACAAAAGTTGACAAACG TGTGGAACCCAAGAGTTGTGATAAAACCCATACATGCCCCCCTTGTCCGG CGCCAGAGGCTGCAGGAGGACCAAGCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCT AAAGACACACTGATGATTTCCCGAACCCCCGAAGTCACATGCGTGGTCGTCAGGTCCAGCTGGTGCAGAGCGGGGCAGAGGTCAAGAAACCCGGTAGCTC CGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCTTCCGGCGGAACCTTCTCTAGTTACGCCA TCAGCTGGGTGAGACAGGCTCCTGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCCTG ATCATTCCATCTTTTGATACCGCTGGCTACGCACAGAAGTTTCAGGGACG GGTGGCAATTACAGTCGATGAGTCAACCAGCACAGCCTATATGGAGCTGT CAAGCCTGCGGTCCGAAGACACTGCCGTGTACTATTGCGCAAGGGCCGAA CACTCCTCTACTGGAACCTTCGATTACTGGGGGCAGGGTACCCTGGTGAC AGTCAGTTCAGCCAGCACTAAGGGACCCAGCGTGTTTCCAGAGGCCCCCT CTAGTAAATCCACTTCTGGAGGCACCGCTGCACTGGGCTGTCTGGTGACC GATTACTTCCCAGAGCCCGTCACAGTGAGCTGGAACTCCGGGGCCCTGAC CAGCGGAGTCCATACATTTCCTGCTGTGCTGGAGTCAAGCGGGCTGTACT CCCTGTCCTCTGTGGTCACCGTGCCAAGTTCAAGCCTGGGAACTCAGACC TATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCTTCAAATACAAAAGTTGACAAACG TGTGGAACCCAAGAGTTGTGATAAAACCCATACATGCCCCCCTTGTCCGG CGCCAGAGGCTGCAGGAGGACCAAGCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCT AAAGACACACTGATGATTTCCCGAACCCCCGAAGTCACATGCGTGGTCGT

- 18 041266- 18 041266

GTCTGTGAGTCACGAGGACCCTGAAGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATG GCGTCGAGGTGCATAATGCCAAGACTAAACCTAGGGAGGAACAGTACAAC TCAACCTATCGCGTCGTGAGCGTCCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCT GAACGGCAAAGAATATAAGTGCAAAGTGAGCAATAAGGCCCTGCCCGCTC CTATCGAGAAAACCATTTCCAAGGCTAAAGGGCAGCCTCGCGAACCACAG GTCTACGTGCTGCCTCCATCCCGGGACGAGCTGACAAAGAACCAGGTCTC TCTGCTGTGCCTGGTGAAAGGCTTCTATCCATCAGATATTGCTGTGGAGT GGGAAAGCAATGGGCAGCCCGAGAACAATTACCTGACTTGGCCCCCTGTG CTGGACTCTGATGGGAGTTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGATAA AAGTAGGTGGCAGCAGGGAAATGTCTTTAGTTGTTCAGTGATGCATGAAG CCCTGCATAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGTCCCTGTCCCCCGGAGTCTGTGAGTCACGAGGACCCTGAAGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATG GCGTCGAGGTGCATAATGCCAAGACTAAACCTAGGGAGGAACAGTACAAC TCAACCTATCGCGTCGTGAGCGTCCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCT GAACGGCAAAGAATATAAGTGCAAAGTGAGCAATAAGGCCCTGCCCGCTC CTATCGAGAAAACCATTTCCAAGGCTAAAGGGCAGCCTCGCGAACCACAG GTCTACGTGCTGCCTCCATCCCGGGACGAGCTGACAAAGAACCAGGTCTC TCTGCTGTGCCTGGTGAAAGGCTTCTATCCATCAGATATTGCTGTGGAGT GGGAAAGCAATGGGCAGCCCGAGAACAATTACCTGACTTGGCCCCCTGTG CTGGACTCTGATGGGAGTTTCTTTCTGTATTCTAAGCTGACCGTGGATAA AAGTAGGTGGCAGCAGGGAAATGTCTTTAGTTGTTCAGTGATGCATGAAG CCCTGCATAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGTCCCTGTCCCCCGGA

SEQ ID NO: 39 Последовательность ДНК PD-1 НС (v 13844)SEQ ID NO: 39 DNA sequence of PD-1 HC (v 13844)

CAGGTCCAGCTGGTGCAGAGCGGGGCAGAGGTCAAGAAACCCGGTAGCTC CGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCTTCCGGCGGAACCTTCTCTAGTTACGCCA TCAGCTGGGTGAGACAGGCTCCTGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCCTG ATCATTCCAATGTTCGACACCGCTGGCTACGCACAGAAGTTTCAGGGACG GGTGGCAATTACAGTCGATGAGTCAACCAGCACAGCCTATATGGAGCTGT CAAGCCTGCGGTCCGAAGACACTGCCGTGTACTATTGCGCAAGGGCCGAA CACTCCTCTACTGGAACCTTCGATTACTGGGGGCAGGGTACCCTGGTGAC AGTCAGTTCAGCCAGCACTAAGGGACCCAGCGTGTTTCCAGAGGCCCCCT CTAGTAAATCCACTTCTGGAGGCACCGCTGCACTGGGCTGTCTGGTGACC GATTACTTCCCAGAGCCCGTCACAGTGAGCTGGAACTCCGGGGCCCTGAC CAGCGGAGTCCATACATTTCCTGCTGTGCTGGAGTCAAGCGGGCTGTACT CCCTGTCCTCTGTGGTCACCGTGCCAAGTTCAAGCCTGGGAACTCAGACC TATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCTTCAAATACAAAAGTTGACAAACG TGTGGAACCCAAGAGTTGTGATAAAACCCATACATGCCCCCCTTGTCCGG CGCCAGAGGCTGCAGGAGGACCAAGCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCT AAAGACACACTGATGATTTCCCGAACCCCCGAAGTCACATGCGTGGTCGT GTCTGTGAGTCACGAGGACCCTGAAGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATG GCGTCGAGGTGCATAATGCCAAGACTAAACCTAGGGAGGAACAGTACAAC TCAACCTATCGCGTCGTGAGCGTCCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCT GAACGGCAAAGAATATAAGTGCAAAGTGAGCAATAAGGCCCTGCCCGCTC CTATCGAGAAAACCATTTCCAAGGCTAAAGGGCAGCCTCGCGAACCACAG GTCTACGTGTATCCTCCAAGCCGGGACGAGCTGACAAAGAACCAGGTCTC CCTGACTTGTCTGGTGAAAGGGTTTTACCCTAGTGATATCGCTGTGGAGT GGGAATCAAATGGACAGCCAGAGAACAATTATAAGACTACCCCCCCTGTG CTGGACAGTGATGGGTCATTCGCACTGGTCTCCAAGCTGACAGTGGACAA ATCTCGGTGGCAGCAGGGAAATGTCTTTTCATGTAGCGTGATGCATGAAG CACTGCACAACCATTACACCCAGAAGTCACTGTCACTGTCACCAGGAAAACAGGTCCAGCTGGTGCAGAGCGGGGCAGAGGTCAAGAAACCCGGTAGCTC CGTGAAGGTCAGCTGCAAGGCTTCCGGCGGAACCTTCTCTAGTTACGCCA TCAGCTGGGTGAGACAGGCTCCTGGCCAGGGACTGGAATGGATGGGCCTG ATCATTCCAATGTTCGACACCGCTGGCTACGCACAGAAGTTTCAGGGACG GGTGGCAATTACAGTCGATGAGTCAACCAGCACAGCCTATATGGAGCTGT CAAGCCTGCGGTCCGAAGACACTGCCGTGTACTATTGCGCAAGGGCCGAA CACTCCTCTACTGGAACCTTCGATTACTGGGGGCAGGGTACCCTGGTGAC AGTCAGTTCAGCCAGCACTAAGGGACCCAGCGTGTTTCCAGAGGCCCCCT CTAGTAAATCCACTTCTGGAGGCACCGCTGCACTGGGCTGTCTGGTGACC GATTACTTCCCAGAGCCCGTCACAGTGAGCTGGAACTCCGGGGCCCTGAC CAGCGGAGTCCATACATTTCCTGCTGTGCTGGAGTCAAGCGGGCTGTACT CCCTGTCCTCTGTGGTCACCGTGCCAAGTTCAAGCCTGGGAACTCAGACC TATATCTGCAACGTGAATCACAAGCCTTCAAATACAAAAGTTGACAAACG TGTGGAACCCAAGAGTTGTGATAAAACCCATACATGCCCCCCTTGTCCGG CGCCAGAGGCTGCAGGAGGACCAAGCGTGTTCCTGTTTCCACCCAAGCCT AAAGACACACTGATGATTTCCCGAACCCCCGAAGTCACATGCGTGGTCGT GTCTGTGAGTCACGAGGACCCTGAAGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATG GCGTCGAGGTGCATAATGCCAAGACTAAACCTAGGGAGGAACAGTACAAC TCAACCTATCGCGTCGTGAGCGTCCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCT GAACGGCAAAGAATATAAGTGCAAAGTGAGC AATAAGGCCCTGCCCGCTC CTATCGAGAAAACCATTTCCAAGGCTAAAGGGCAGCCTCGCGAACCACAG GTCTACGTGTATCCTCCAAGCCGGGACGAGCTGACAAAGAACCAGGTCTC CCTGACTTGTCTGGTGAAAGGGTTTTACCCTAGTGATATCGCTGTGGAGT GGGAATCAAATGGACAGCCAGAGAACAATTATAAGACTACCCCCCCTGTG CTGGACAGTGATGGGTCATTCGCACTGGTCTCCAAGCTGACAGTGGACAA ATCTCGGTGGCAGCAGGGAAATGTCTTTTCATGTAGCGTGATGCATGAAG CACTGCACAACCATTACACCCAGAAGTCACTGTCACTGTCACCAGGAAAA

SEQ ID NO: 40 IgGl CH дтSEQ ID NO: 40 IgGl CH dt

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP KSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSIYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEP KSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSIYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 41 v3.2PD-L1CHSEQ ID NO: 41v3.2PD-L1CH

- 19 041266- 19 041266

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 42 V13844PD-1CHSEQ ID NO: 42 V13844PD-1CH

ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 43 v3.2PD-lCHSEQ ID NO: 43v3.2PD-lCH

ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLESSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 44 vl3844 PD-L1 CHSEQ ID NO: 44 vl3844 PD-L1 CH

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEP KSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLC LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 45 CL лямбда дикого типаSEQ ID NO: 45 CL wild-type lambda

QPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQ SNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQ SNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS

SEQ ID NO: 46 CLPD-L1SEQ ID NO: 46 CLPD-L1

QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQ SNNKYAAESELSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECSQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQ SNNKYAAESELSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS

SEQ ID NO: 47 CL каппа дикого типаSEQ ID NO: 47 CL wild-type kappa

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 48 CL каппа-PD-lSEQ ID NO: 48 CL kappa-PD-l

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTARVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLRSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTARVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLRSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

SEQ ID NO: 49 (HC PD-L1 At v3.2)SEQ ID NO: 49 (HC PD-L1 At v3.2)

Q VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYG MDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGKQ VQLVQSGAEVKKPGS S VKVSCKASGGTF S S YAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIF GTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYG MDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 50 Последовательность ДНК PD-L1 LC (кодоновый вариант 1) CAGTCTGTGC TGACTCAGCC ACCTTCCGCC TCTGGAACCC CAGGACAGAG GGTCACAATC AGTTGCTCAG GGAGCTCCTC TAACATTGGA AGCAACACTG TGAATTGGTA CCAGCAGCTG CCTGGGACCG CTCCAAAGCT GCTGATCTAT GGCAACTCCA ATCGACCATC TGGAGTGCCT GACCGGTTCA GCGGCTCCAA ATCTGGCACC AGTGCTTCAC TGGCAATTAG TGGCCTGCAG TCCGAGGACG AAGCCGATTA CTATTGCCAG AGCTACGATA GTTCACTGAG CGGCTCCGTG TTCGGCGGGG GAATCAAGCT GACAGTCCTG GGACAGCCAA AAGCGGCGCC CAGCGTGACT CTGTTTCCAC CCAGCTCCGA GGAACTGCAG GCCAATAAGG CTACCCTGGT CTGTCTGATT TCCGACTTCT ACCCCGGGGC TGTGACAGTC GCATGGAAGG CCGATTCTAG TCCTGTGAAA GCAGGAGTCG AGACCACAAC TCCATCAAAG CAGAGCAACA ACAAGTACGC AGCCGAGAGC GAGCTGTCTC TGACACCTGA ACAGTGGAAA AGCCACCGGT CTTATAGTTG TCAGGTGACT CACGAGGGCT CAACAGTGGA AAAGACAGTC GCACCCGCAG AATGCTCASEQ ID NO: 50 Последовательность ДНК PD-L1 LC (кодоновый вариант 1) CAGTCTGTGC TGACTCAGCC ACCTTCCGCC TCTGGAACCC CAGGACAGAG GGTCACAATC AGTTGCTCAG GGAGCTCCTC TAACATTGGA AGCAACACTG TGAATTGGTA CCAGCAGCTG CCTGGGACCG CTCCAAAGCT GCTGATCTAT GGCAACTCCA ATCGACCATC TGGAGTGCCT GACCGGTTCA GCGGCTCCAA ATCTGGCACC AGTGCTTCAC TGGCAATTAG TGGCCTGCAG TCCGAGGACG AAGCCGATTA CTATTGCCAG AGCTACGATA GTTCACTGAG CGGCTCCGTG TTCGGCGGGG GAATCAAGCT GACAGTCCTG GGACAGCCAA AAGCGGCGCC CAGCGTGACT CTGTTTCCAC CCAGCTCCGA GGAACTGCAG GCCAATAAGG CTACCCTGGT CTGTCTGATT TCCGACTTCT ACCCCGGGGC TGTGACAGTC GCATGGAAGG CCGATTCTAG TCCTGTGAAA GCAGGAGTCG AGACCACAAC TCCATCAAAG CAGAGCAACA ACAAGTACGC AGCCGAGAGC GAGCTGTCTC TGACACCTGA ACAGTGGAAA AGCCACCGGT CTTATAGTTG TCAGGTGACT CACGAGGGCT CAACAGTGGA AAAGACAGTC GCACCCGCAG AATGCTCA

SEQ ID NO: 51 Последовательность ДНК PD-L1 НС (кодоновый вариант 1) CAGGTCCAGC TGGTGCAGAG CGGAGCCGAA GTGAAGAAAC CAGGCAGCTC CGTCAAGGTG TCATGCAAAG CCAGCGGCGG GACTTTCTCT AGTTACGCTA TCTCCTGGGT GAGACAGGCA CCAGGACAGG GACTGGAGTG GATGGGAGGA ATCATTCCTA TCTTCGGGAC AGCTAACTAC GCACAGAAGT TTCAGGGAAG GGTGACTATT ACCGCCGACA AATCTACAAG TACTGCTTAT ATGGAGCTGT CAAGCCTGAG GAGCGAAGAT ACCGCAGTGT ACTATTGCGC CCGCTCCCCC GACTACTCTC CTTACTATTA CTATGGCATG GACGTGTGGG GGCAGGGAAC CACAGTCACA GTGTCCTCTG CCAGCACTAA GGGGCCTTCA GTGTTTCCAC TGGCACCCAG TTCAAAATCA ACAAGCGGAG GAACTGCCGC TCTGGGATGT CTGGTGAAGG ACTATTTCCC AGAGCCAGTC ACCGTGAGCT GGAACTCCGG CGCACTGACT TCCGGAGTCC ACACCTTTCC AGCCGTGCTG CAGAGCTCCG GACTGTACTC TCTGAAGAGT GTGGTCACAG TGCCTTCAAG CTCCCTGGGC ACCCAGACAT ATATCTGCAA CGTGAATCAC AAGCCTAGTA ATACTAAGGT TGACAAACGT GTGGAACCAA AGAGCTGTGA TAAAACTCAT ACCTGCCCCC CTTGTCCGGC GCCAGAGGCA GCAGGAGGAC CAAGCGTGTT CCTGTTTCCA CCCAAGCCCA AAGACACCCT GATGATTAGC CGAACCCCTG AAGTCACATG CGTGGTCGTG TCCGTGTCTC ACGAGGACCC AGAAGTCAAG TTCAACTGGT ACGTGGATGG CGTCGAGGTG CATAATGCCA AGACAAAACC CCGGGAGGAA CAGTACAACA GCACCTATAG AGTCGTGTCC GTCCTGACAG TGCTGCACCA GGATTGGCTG AACGGCAAGG AATATAAGTG CAAAGTGTCC AATAAGGCCC TGCCCGCTCC TATCGAGAAA ACCATTTCTA AGGCAAAAGG CCAGCCTCGC GAACCACAGG TCTACGTGTA TCCTCCAAGC CGGGACGAGC TGACAAAGAA CCAGGTCTCC CTGACTTGTC TGGTGAAAGG GTTTTACCCT AGTGATATCG CTGTGGAGTG GGAATCAAAT GGACAGCCAG AGAACAATTA TAAGACTACC CCCCCTGTGC TGGACAGTGA TGGGTCATTC GCACTGGTCT CCAAGCTGAC AGTGGACAAA TCTCGGTGGC AGCAGGGAAA TGTCTTTTCA TGTAGCGTGA TGCATGAAGC ACTGCACAAC CATTACACCC AGAAGTCACT GTCACTGTCA CCAGGAAAASEQ ID NO: 51 Последовательность ДНК PD-L1 НС (кодоновый вариант 1) CAGGTCCAGC TGGTGCAGAG CGGAGCCGAA GTGAAGAAAC CAGGCAGCTC CGTCAAGGTG TCATGCAAAG CCAGCGGCGG GACTTTCTCT AGTTACGCTA TCTCCTGGGT GAGACAGGCA CCAGGACAGG GACTGGAGTG GATGGGAGGA ATCATTCCTA TCTTCGGGAC AGCTAACTAC GCACAGAAGT TTCAGGGAAG GGTGACTATT ACCGCCGACA AATCTACAAG TACTGCTTAT ATGGAGCTGT CAAGCCTGAG GAGCGAAGAT ACCGCAGTGT ACTATTGCGC CCGCTCCCCC GACTACTCTC CTTACTATTA CTATGGCATG GACGTGTGGG GGCAGGGAAC CACAGTCACA GTGTCCTCTG CCAGCACTAA GGGGCCTTCA GTGTTTCCAC TGGCACCCAG TTCAAAATCA ACAAGCGGAG GAACTGCCGC TCTGGGATGT CTGGTGAAGG ACTATTTCCC AGAGCCAGTC ACCGTGAGCT GGAACTCCGG CGCACTGACT TCCGGAGTCC ACACCTTTCC AGCCGTGCTG CAGAGCTCCG GACTGTACTC TCTGAAGAGT GTGGTCACAG TGCCTTCAAG CTCCCTGGGC ACCCAGACAT ATATCTGCAA CGTGAATCAC AAGCCTAGTA ATACTAAGGT TGACAAACGT GTGGAACCAA AGAGCTGTGA TAAAACTCAT ACCTGCCCCC CTTGTCCGGC GCCAGAGGCA GCAGGAGGAC CAAGCGTGTT CCTGTTTCCA CCCAAGCCCA AAGACACCCT GATGATTAGC CGAACCCCTG AAGTCACATG CGTGGTCGTG TCCGTGTCTC ACGAGGACCC AGAAGTCAAG TTCAACTG GT ACGTGGATGG CGTCGAGGTG CATAATGCCA AGACAAAACC CCGGGAGGAA CAGTACAACA GCACCTATAG AGTCGTGTCC GTCCTGACAG TGCTGCACCA GGATTGGCTG AACGGCAAGG AATATAAGTG CAAAGTGTCC AATAAGGCCC TGCCCGCTCC TATCGAGAAA ACCATTTCTA AGGCAAAAGG CCAGCCTCGC GAACCACAGG TCTACGTGTA TCCTCCAAGC CGGGACGAGC TGACAAAGAA CCAGGTCTCC CTGACTTGTC TGGTGAAAGG GTTTTACCCT AGTGATATCG CTGTGGAGTG GGAATCAAAT GGACAGCCAG AGAACAATTA TAAGACTACC CCCCCTGTGC TGGACAGTGA TGGGTCATTC GCACTGGTCT CCAAGCTGAC AGTGGACAAA TCTCGGTGGC AGCAGGGAAA TGTCTTTTCA TGTAGCGTGA TGCATGAAGC ACTGCACAAC CATTACACCC AGAAGTCACT GTCACTGTCA CCAGGAAAAA

--

Claims

CLAIM

1. An antibody that binds human PD-L1 (SEQ ID NO: 1) and human PD-1 (SEQ ID NO: 2), containing:

a) a first heavy chain (HC1) containing a heavy chain variable region (HCVR) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3;

b) a first light chain (LC1) containing a light chain variable region (LCVR) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4;

c) a second heavy chain (HC2) comprising a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5; And

d) a second light chain (LC2) containing a light chain variable region containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.

2. An antibody according to claim 1, containing:

a) HC1 comprising, in N-terminal to C-terminal order, HCVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 in the CH1 domain, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 in the CH2 domain, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 or SEQ ID NO: 12 in the CH3 domain;

b) LC1 containing, in order from N-terminus to C-terminus, LCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 in the constant region;

c) HC2 comprising, in N-terminal to C-terminal order, HCVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 in the CH1 domain, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 in the CH2 domain, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 or the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 in the CH3 domain; And

d) an LC2 containing, in N-terminal order, an LCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 in the constant region, provided that when the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 is present in the domain CH3 of said HC1, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 is present in the CH3 domain of said HC2, or when the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 is present in the CH3 domain of said HC1, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 is present in the CH3 domain of said HC2.

3. An antibody according to claim 2, characterized in that said HC1 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 in the CH3 domain, and wherein said HC2 contains an HCVR containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, and said HC2 contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 in the CH3 domain.

4. An antibody according to claim 3, characterized in that said HC1, LC1, HC2 and LC2 contain the amino acid sequences of SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 34, respectively.

5. An antibody according to claim 3, characterized in that said HC1, LC1, HC2 and LC2 contain the amino acid sequences of SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 34, respectively.

6. A mammalian cell for expressing an antibody according to claim 4, comprising a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding polypeptides having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 34.

7. A mammalian cell for expressing an antibody according to claim 5, comprising a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding polypeptides having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 34.

8. A method for producing an antibody, comprising culturing a mammalian cell according to claim 6 or 7 under conditions under which the antibody is expressed, and isolating the expressed antibody.

9. A pharmaceutical composition containing an antibody according to any one of claims 1 to 5 and an acceptable carrier, diluent or excipient.

10. A method of treating cancer, comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of an antibody according to any one of claims 1-5.

11. The method according to claim 10, characterized in that said cancer is Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer, gastric and esophageal cancer, colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell lung cancer (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma ( SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme.

12. The method according to claim 11, characterized in that the lung cancer is NSCLC, small cell

- 21 041266 lung cancer or mesothelioma.

13. The method according to any one of paragraphs. 10-12, further comprising simultaneous or separate administration of one or more anticancer agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbin, eribulin, paclitaxel, paclitaxel protein-bound particles for injectable suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), gemcitabine, topotecan, irinotecan liposomal, pemetrexed, cetuximab, nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, lilimumab, urelimumab , atezolizumab, epicedostat, and durvalumab.

14. The method of claim 13, wherein said administration is carried out sequentially.

15. The use of an antibody according to any one of claims 1 to 5 for the treatment of cancer.

16. Use according to claim 15, characterized in that said cancer is Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer, gastric and esophageal cancer, colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell lung cancer (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma ( SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme.

17. Use according to claim 16, wherein the cancer is non-small cell lung cancer, small cell lung cancer or mesothelioma.

18. Use of an antibody according to any one of claims 1 to 5 in simultaneous or separate combination with one or more antitumor agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbine, eribulin, paclitaxel protein-bound paclitaxel particles for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), gemcitabine, topotecan, liposomal irinotecan, pemetrexed, cetuximab, nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab , tremelimumab, urelimumab, lirilumab, atezolizumab, epicedostat, and durvalumab, for the treatment of cancer.

19. Use according to claim 18, wherein the antibody is used in sequential combination with said one or more antitumor agents.

20. The use of a pharmaceutical composition for the treatment of cancer, containing an effective amount of an antibody according to any one of claims 1 to 5.

21. Use according to claim 20, characterized in that said cancer is Hodgkin's or non-Hodgkin's lymphoma, melanoma, renal cell carcinoma, kidney cancer, lung cancer, bladder cancer, gastric and esophageal cancer, colorectal cancer, liver cancer, hepatocellular cancer, cholangiocarcinoma, pancreatic cancer, breast cancer, triple negative breast cancer, ovarian cancer, endometrial cancer, prostate cancer, small cell lung cancer (SCLC), non-small cell lung cancer (NSCLC), mesothelioma, head and neck squamous cell carcinoma ( SCCHN), soft tissue sarcoma, or glioblastoma multiforme.

22. Use according to claim 21, wherein the lung cancer is NSCLC, small cell lung cancer or mesothelioma.

23. Use according to any one of claims 20-22, wherein the composition is used simultaneously or separately in combination with one or more antitumor agents selected from the group consisting of cisplatin, carboplatin, dacarbazine, liposomal doxorubicin, docetaxel, cyclophosphamide and doxorubicin, navelbine, eribulin, paclitaxel, protein-bound paclitaxel particles for injection suspension, ixabepilone, capecitabine, FOLFOX (leucovorin, fluorouracil and oxaliplatin), FOLFIRI (leucovorin, fluorouracil and irinotecan), gemcitabine, topotecan, liposomal irinotecan, pemetrexed, cetuximab, nivolumab, ipilimumab, pidilizumab, pembrolizumab, tremelimumab, urelimumab, lirilumab, atezolizumab, epicedostat and durvalumab, in the treatment of cancer.

24. Use according to claim 23, wherein the composition is used in sequential combination with said one or more anticancer agents.

About the Eurasian Patent Organization, EAPO

Russia, 109012, Moscow, Maly Cherkassky per., 2