EA041243B1

EA041243B1 - ANTIBODIES TO N3PGLU BETA-AMYLOID PEPTIDE AND THEIR USE

Info

Publication number: EA041243B1
Application number: EA201992163
Authority: EA
Inventors: Рональд Брэдли Дематтос; Цзижун Лу; Ин Тан
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2017-04-20
Filing date: 2018-04-16
Publication date: 2022-09-29

Description

Данное изобретение относится к антителам, которые связывают человеческий бета-амилоидный пептид N3pGlu, и их применению для лечения заболеваний, связанных с бета-амилоидным пептидом (в данном документе обозначается как Άβ или Абета).The present invention relates to antibodies that bind the human beta amyloid peptide N3pGlu and their use in the treatment of diseases associated with beta amyloid peptide (herein referred to as Άβ or Abeta).

Расщепление белка-предшественника амилоида приводит к Άβ пептидам размером от 38 до 43 аминокислот. Преобразование Άβ из растворимых в нерастворимые формы с высоким содержанием βскладок и отложение этих нерастворимых форм в виде невритных и цереброваскулярных бляшек в головном мозге было связано с рядом состояний и заболеваний, включая болезнь Альцгеймера (AD), синдром Дауна и церебральную амилоидную ангиопатию (САА).Cleavage of the amyloid precursor protein results in Άβ peptides ranging in size from 38 to 43 amino acids. The conversion of Άβ from soluble to insoluble, high β-sheet forms and the deposition of these insoluble forms as neuritic and cerebrovascular plaques in the brain has been associated with a number of conditions and diseases, including Alzheimer's disease (AD), Down's syndrome, and cerebral amyloid angiopathy (CAA).

Отложения, найденные в бляшках состоят из гетерогенной смеси Άβ пептидов. N3pGlu Αβ, также называемый N3pE, рЕ3-Х или Аβp₃._X, представляет собой N-концевую усеченную форму пептида Άβ и в основном обнаруживается в бляшках. N3pGlu Αβ лишен первых двух аминокислотных остатков на Nконце человеческого Άβ и имеет пироглутамат, который был получен из глутаминовой кислоты в третьем положении аминокислоты. Хотя N3pGlu Αβ пептид представляет собой минорный компонент осажденного Άβ в головном мозге, исследования показали, что N3pGlu Αβ пептид имеет агрессивные агрегационные свойства и накапливается в начале каскада отложения.The deposits found in the plaques are composed of a heterogeneous mixture of Άβ peptides. N3pGlu Αβ, also called N3pE, pE3-X or Aβp ₃ . _X , is the N-terminal truncated form of the Άβ peptide and is mainly found in plaques. N3pGlu Αβ lacks the first two amino acid residues at the N terminus of human Άβ and has pyroglutamate, which was derived from glutamic acid at the third amino acid position. Although the N3pGlu Αβ peptide is a minor component of deposited Άβ in the brain, studies have shown that the N3pGlu Αβ peptide has aggressive aggregation properties and accumulates early in the deposition cascade.

Антитела к N3pGlu Αβ известны в данной области. Например, патент США № 8679498 описывает человеческие N3pGlu Αβ антитела (например, B12L; также известное как LY3002813) и способы лечения заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, указанными антителами. Клиническое исследование продемонстрировало проблему присутствия антител (антитела к препарату/лекарственному средству) к анителу против N3pGlu Αβ (LY3002813). Антитела к препарату присутствовали в плазме почти всех, кто принимал участие в этом исследовании, и связанная с этим проблема с иммунной реакцией заключалась в сокращении периода полураспада LY3002813. Следовательно, все еще остается потребность в альтернативных анти-N3pGlu Аβ антителах.Anti-N3pGlu Αβ antibodies are known in the art. For example, US Pat. No. 8,679,498 describes human N3pGlu Αβ antibodies (eg, B12L; also known as LY3002813) and methods for treating diseases such as Alzheimer's disease with said antibodies. The clinical study demonstrated the problem of the presence of antibodies (drug/drug antibodies) to the anti-N3pGlu Αβ antibody (LY3002813). Antibodies to the drug were present in the plasma of almost everyone who took part in this study, and the associated problem with the immune response was to shorten the half-life of LY3002813. Therefore, there is still a need for alternative anti-N3pGlu Aβ antibodies.

Антитела по данному изобретению стремятся обеспечить анти-N3pGlu Аβ антитела, которые связывают N3pGlu Αβ, бляшки (Аβ₁.42) in vivo, но которые также демонстрируют пониженную иммуногенность. Такие анти-N3pGlu Аβ антитела также могут продемонстрировать уменьшенное неспецифическое связывание с белками плазмы. Кроме того, такие анти-N3pGlu Аβ антитела могут также обеспечивать уменьшенный предсказанный Т-зависимый ответ опосредованный Ат. Такие анти-N3pGlu Аβ антитела могут также обеспечивать увеличенный период полужизни антител и улучшенный профиль безопасности для потенциального лекарственного препарата человека с фармакокинетикой для лучшей схемы дозирования. Антитела в объеме данного изобретения стремятся обладать по меньшей мере одной из этих желательных характеристик.The antibodies of this invention seek to provide anti-N3pGlu Aβ antibodies that bind N3pGlu Αβ, plaques (Aβ ₁ .42) in vivo, but which also show reduced immunogenicity. Such anti-N3pGlu Aβ antibodies may also show reduced non-specific binding to plasma proteins. In addition, such anti-N3pGlu Aβ antibodies may also provide a reduced predicted T-dependent Ab-mediated response. Such anti-N3pGlu Aβ antibodies may also provide an extended antibody half-life and an improved safety profile for a potential human drug with pharmacokinetics for a better dosing regimen. Antibodies within the scope of this invention strive to have at least one of these desirable characteristics.

Данное изобретение относится к антителу, которое связывает человеческий N3pGlu Аβ, содержащему LCVR и HCVR, где указанный LCVR содержит LCDR1, LCDR2 и LCDR3 и где указанный hCvR содержит HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и где аминокислотные последовательности представляют собой SEQ ID NO: 4 или 5 для LCDR1, SEQ ID NO: 6 или 7 для LCDR2, SEQ ID NO: 8 для LCDR3, SEQ ID NO: 1 для HCDR1, SEQ ID NO: 2 для HCDR2 и SEQ ID NO: 3 для HCDR3. В конкретном варианте осуществления изобретения анти-N3pGlu Аβ антитело содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4 для LCDR1, SEQ ID NO: 6 для LCDR2, SEQ ID NO: 8 для LCDR3, SEQ ID NO: 1 для HCDR1, SEQ ID NO: 2 для HCDR2 и SEQ ID NO: 3 для HCDR3. В другом конкретном варианте осуществления изобретения, анти-N3pGlu Аβ антитело содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 5 для LCDR1, SEQ ID NO: 7 для LCDR2, SEQ ID NO: 8 для LCDR3, SEQ ID NO: 1 для HCDR1, SEQ ID NO: 2 для HCDR2 и SEQ ID NO: 3 для HCDR3.This invention relates to an antibody that binds human N3pGlu Aβ containing LCVR and HCVR, where said LCVR contains LCDR1, LCDR2 and LCDR3 and where said hCvR contains HCDR1, HCDR2 and HCDR3, and where the amino acid sequences are SEQ ID NO: 4 or 5 for LCDR1, SEQ ID NO: 6 or 7 for LCDR2, SEQ ID NO: 8 for LCDR3, SEQ ID NO: 1 for HCDR1, SEQ ID NO: 2 for HCDR2, and SEQ ID NO: 3 for HCDR3. In a specific embodiment, the anti-N3pGlu Aβ antibody comprises the amino acid sequences SEQ ID NO: 4 for LCDR1, SEQ ID NO: 6 for LCDR2, SEQ ID NO: 8 for LCDR3, SEQ ID NO: 1 for HCDR1, SEQ ID NO: 2 for HCDR2 and SEQ ID NO: 3 for HCDR3. In another specific embodiment, the anti-N3pGlu Aβ antibody comprises the amino acid sequences SEQ ID NO: 5 for LCDR1, SEQ ID NO: 7 for LCDR2, SEQ ID NO: 8 for LCDR3, SEQ ID NO: 1 for HCDR1, SEQ ID NO : 2 for HCDR2 and SEQ ID NO: 3 for HCDR3.

Данное изобретение также обеспечивает антитело, которое связывается с человеческим N3pGlu Аβ, причем указанное антитело содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 11, и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает антитело, которое связывается с человеческим N3pGlu Αβ, где указанное антитело содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9. В другом конкретном варианте осуществления изобретения данное изобретение обеспечивает антитело, которое связывается с человеческим N3pGlu Αβ, где указанное антитело содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.The invention also provides an antibody that binds to human N3pGlu Aβ, said antibody comprising a light chain variable region (LCVR) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 or SEQ ID NO: 11 and a heavy chain variable region (HCVR) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9. In a particular embodiment, the invention provides an antibody that binds to human N3pGlu Αβ, wherein said antibody comprises a light chain variable region (LCVR) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and the variable region heavy chain variable region (HCVR) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9. In another specific embodiment, the invention provides an antibody that binds to human N3pGlu Αβ, wherein said antibody comprises a light chain variable region (LCVR) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and variable heavy chain region (HCVR) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9.

В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает антитело, которое связывается с человеческим N3pGlu Αβ, содержащее легкую цепь (LC) и тяжелую цепь (НС), где аминокислотная последовательность LC представляет собой SEQ ID NO: 13 или 14, и аминокислотная последовательность НС представляет собой SEQ ID NO: 12. В более конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает антитело, которое связывается с человеческим N3pGlu Αβ,In one embodiment of the invention, this invention provides an antibody that binds to human N3pGlu Αβ containing a light chain (LC) and a heavy chain (HC), where the amino acid sequence of LC is SEQ ID NO: 13 or 14, and the amino acid sequence of HC is is SEQ ID NO: 12. In a more specific embodiment of the invention, this invention provides an antibody that binds to human N3pGlu Αβ,

- 1 041243 содержащее легкую цепь (LC) и тяжелую цепь (НС), где аминокислотная последовательность LC представляет собой SEQ ID NO: 13, и аминокислотная последовательность НС представляет собой SEQ ID NO: 12. В другом конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает антитело, которое связывается с человеческим N3pGlu Άβ, содержащее легкую цепь (LC) и тяжелую цепь (НС), где аминокислотная последовательность LC представляет собой SEQ ID NO: 14, и аминокислотная последовательность НС представляет собой SEQ ID NO: 12. В дополнительном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к антителу, содержащему две LC и две НС, где аминокислотная последовательность каждой LC представляет собой SEQ ID NO: 13 или 14, и аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой SEQ ID NO: 12. В более конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к антителу, содержащему две LC и две НС, где аминокислотная последовательность каждой LC представляет собой SEQ ID NO: 13, и аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой SEQ ID NO: 12. В более конкретном варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к антителу, содержащему две LC и две НС, где аминокислотная последовательность каждой LC представляет собой SEQ ID NO: 14, и аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой SEQ ID NO: 12.- 1 041243 containing a light chain (LC) and a heavy chain (HC), where the amino acid sequence of LC is SEQ ID NO: 13, and the amino acid sequence of HC is SEQ ID NO: 12. In another specific embodiment of the invention, this invention provides an antibody that binds to human N3pGlu Άβ comprising a light chain (LC) and a heavy chain (HC), wherein the amino acid sequence of LC is SEQ ID NO: 14 and the amino acid sequence of HC is SEQ ID NO: 12. In a further embodiment, of the invention, this invention relates to an antibody containing two LCs and two HCs, where the amino acid sequence of each LC is SEQ ID NO: 13 or 14, and the amino acid sequence of each HC is SEQ ID NO: 12. In a more specific embodiment of the invention, this invention relates to an antibody containing two LC and two HC, where the amino acid sequence each LC is SEQ ID NO: 13 and the amino acid sequence of each HC is SEQ ID NO: 12. In a more specific embodiment, the invention relates to an antibody comprising two LCs and two HCs, wherein the amino acid sequence of each LC is SEQ ID NO: 14 and the amino acid sequence of each HC is SEQ ID NO: 12.

Данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим антитело по данному изобретению и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей. Кроме того, данное изобретение относится к способу лечения заболевания, характеризующегося отложением Αβ, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу лечения заболевания, характеризующегося отложением Αβ, включающему введение эффективного количества антитела по данному изобретению. В частности, данное изобретение относится к способу лечения или профилактики состояния, выбранного из клинической или доклинической стадии болезни Альцгеймера, синдрома Дауна и клинической или доклинической стадии САА, включающему введение указанному пациенту эффективного количества антитела по данному изобретению. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу лечения или профилактики клинической или доклинической стадии болезни Альцгеймера, синдрома Дауна и клинической или доклинической стадии САА, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело данного изобретения. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу лечения или профилактики состояния, выбранного из продромальной AD (иногда также называемой умеренным когнитивным нарушением, связанным с Αβ, или MCI), легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD, включающей введение пациенту, нуждающемуся в этом, необходимого эффективного количества антитела по данному изобретению. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к способу лечения или профилактики состояния, выбранного из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD, включающего введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению.This invention also relates to pharmaceutical compositions containing an antibody of this invention and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients. In addition, the present invention relates to a method for treating a disease characterized by Αβ deposition, comprising administering to a patient in need thereof a pharmaceutical composition containing an antibody of the present invention. In another embodiment, the invention relates to a method for treating a disease characterized by Αβ deposition, comprising administering an effective amount of an antibody of the invention. In particular, this invention relates to a method of treating or preventing a condition selected from clinical or preclinical Alzheimer's disease, Down's syndrome and clinical or preclinical CAA, comprising administering to said patient an effective amount of an antibody of this invention. In another embodiment of the invention, this invention relates to a method of treating or preventing clinical or preclinical Alzheimer's disease, Down's syndrome and clinical or preclinical CAA, comprising administering to a patient in need thereof, an effective amount of a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention. In another embodiment, the invention relates to a method of treating or preventing a condition selected from prodromal AD (sometimes also referred to as mild Αβ-related cognitive impairment, or MCI), mild AD, moderate AD, and severe AD, comprising administering to a patient in need of in this, the required effective amount of the antibody of this invention. In another embodiment, the invention relates to a method for treating or preventing a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD, comprising administering to a patient in need thereof a pharmaceutical composition comprising an antibody of the invention.

В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к способу замедления когнитивных нарушений у пациента, у которого диагностированы доклиническая стадия болезнь Альцгеймера, клиническая стадия болезнь Альцгеймера, синдром Дауна или клиническая или доклиническая стадия церебральной амилоидной ангиопатии, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. Более конкретно, данное изобретение дополнительно обеспечивает способ замедления когнитивных нарушений у пациента, у которого диагностировано состояние, выбранное из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В другом таком варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу замедления когнитивных нарушений у пациента, у которого диагностированы доклиническая стадия болезни Альцгеймера, клиническая стадия болезни Альцгеймера, синдром Дауна или клиническая или доклиническая стадия церебральной амилоидной ангиопатии, включающий введение эффективного количества антитела по данному изобретению. Более конкретно, данное изобретение дополнительно обеспечивает способ замедления когнитивных нарушений у пациента, у которого диагностировано состояние, выбранное из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD, включающий введение эффективного количества антитела по данному изобретению.In another embodiment, the invention relates to a method for slowing down cognitive impairment in a patient diagnosed with preclinical Alzheimer's disease, clinical stage Alzheimer's disease, Down's syndrome, or clinical or preclinical cerebral amyloid angiopathy, comprising administering a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention . More specifically, the invention further provides a method for slowing cognitive impairment in a patient diagnosed with a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD, comprising administering a pharmaceutical composition comprising an antibody of the invention. In another such embodiment, the invention relates to a method for slowing down cognitive impairment in a patient diagnosed with preclinical Alzheimer's disease, clinical stage Alzheimer's disease, Down's syndrome, or clinical or preclinical cerebral amyloid angiopathy, comprising administering an effective amount of an antibody of the present invention. . More specifically, the invention further provides a method for slowing down cognitive impairment in a patient diagnosed with a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD, comprising administering an effective amount of an antibody of the invention.

В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение предлагает способ замедления функционального снижения у пациента, у которого диагностирована доклиническая стадия болезни Альцгеймера или клиническая стадия болезни Альцгеймера, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. Более конкретно, данное изобретение обеспечивает способ замедления функционального снижения у пациента, у которого диагностировано состояние, выбранное из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В другом таком варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу замедления функIn another embodiment, the present invention provides a method for slowing functional decline in a patient diagnosed with preclinical Alzheimer's disease or clinical Alzheimer's disease, comprising administering a pharmaceutical composition comprising an antibody of the present invention. More specifically, the present invention provides a method for slowing functional decline in a patient diagnosed with a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD, comprising administering a pharmaceutical composition comprising an antibody of the present invention. In another such embodiment of the invention, the present invention relates to a method for slowing down the function

- 2 041243 ционального снижения у пациента, у которого диагностирована доклиническая стадия болезни Альцгеймера или клиническая стадия болезни Альцгеймера, включающему введение эффективного количества антитела по данному изобретению. Более конкретно, данное изобретение обеспечивает способ замедления функционального снижения у пациента, у которого диагностировано состояние, выбранное из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD, включающий введение эффективного количества антитела по данному изобретению.- 2 041243 rational reduction in a patient diagnosed with preclinical Alzheimer's disease or clinical Alzheimer's disease, comprising the introduction of an effective amount of an antibody according to this invention. More specifically, the present invention provides a method for slowing functional decline in a patient diagnosed with a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD, comprising administering an effective amount of an antibody of the present invention.

В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к способу снижения нагрузки Ав амилоидной бляшки на головной мозг у пациента, у которого диагностирована доклиническая или клиническая стадия болезни Альцгеймера, включающему введение фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. Более конкретно данное изобретение относится к способу снижения нагрузки Ав амилоидной бляшки на головной мозг у пациента, у которого диагностировано состояние, выбранное из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD или тяжелой AD, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению.In another embodiment of the invention, the present invention relates to a method for reducing the AV load of amyloid plaque on the brain in a patient diagnosed with preclinical or clinical Alzheimer's disease, comprising administering a pharmaceutical composition containing an antibody of the present invention. More specifically, this invention relates to a method for reducing the AV burden of amyloid plaque on the brain in a patient diagnosed with a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, or severe AD, comprising administering a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention.

В другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу предотвращения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у бессимптомного пациента, включающему введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, пациент имеет низкие уровни Ав 1-42 в спинномозговой жидкости (СМЖ) или бляшек Ав в головном мозге.In another embodiment, this invention relates to a method for preventing memory loss or slowing cognitive impairment in an asymptomatic patient, comprising administering to the patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention. In a preferred embodiment of the invention, the patient has low levels of Av 1-42 in the cerebrospinal fluid (CSF) or plaques of Av in the brain.

В другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу лечения бессимптомных пациентов, о которых известно, что они имеют генетическую мутацию, вызывающую болезнь Альцгеймера, включающему введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу лечения бессимптомных пациентов, о которых известно, что у них имеется генетическая мутация, вызывающая болезнь Альцгеймера PSEN1 Е280А (мутация Пайса), включающему введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В другом конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает способ лечения бессимптомных пациентов с генетической мутацией, такой как мутация в гене АРР, PSEN1 или PSEN2, которая вызывает аутосомно-доминантную болезнь Альцгеймера, включающий введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению.In another embodiment, this invention relates to a method of treating asymptomatic patients known to have a genetic mutation causing Alzheimer's disease, comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention. In a specific embodiment of the invention, this invention relates to a method of treating asymptomatic patients known to have a genetic mutation that causes Alzheimer's disease PSEN1 E280A (Pice mutation), comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention. In another specific embodiment of the invention, this invention provides a method of treating asymptomatic patients with a genetic mutation, such as a mutation in the APP, PSEN1 or PSEN2 gene, which causes autosomal dominant Alzheimer's disease, comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention.

В другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу предотвращения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у бессимптомных пациентов, о которых известно, что они имеют генетическую мутацию, вызывающую болезнь Альцгеймера, включающему введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В конкретном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу предотвращения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у бессимптомных пациентов, о которых известно, что у них имеется генетическая мутация, вызывающая болезнь Альцгеймера PSEN1 Е280А (мутация Пайса), включающему введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В другом конкретном варианте изобретения данное изобретение обеспечивает способ предотвращения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у бессимптомных пациентов с генетической мутацией, которая вызывает аутосомно-доминантную болезнь Альцгеймера, включающий введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению.In another embodiment, this invention relates to a method for preventing memory loss or slowing cognitive impairment in asymptomatic patients known to have a genetic mutation causing Alzheimer's disease, comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention. In a specific embodiment of the invention, this invention relates to a method for preventing memory loss or slowing down cognitive impairment in asymptomatic patients, which are known to have a genetic mutation that causes Alzheimer's disease PSEN1 E280A (Pice mutation), comprising administering to said patient a pharmaceutical composition, containing an antibody of this invention. In another specific embodiment of the invention, the invention provides a method for preventing memory loss or slowing cognitive impairment in asymptomatic patients with a genetic mutation that causes autosomal dominant Alzheimer's disease, comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of the invention.

В другом варианте осуществления данное изобретение относится к способу замедления когнитивных нарушений у бессимптомного пациента, о котором известно, что он имеет генетическую мутацию, вызывающую болезнь Альцгеймера, включающему введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В конкретном варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к способу замедления когнитивных нарушений у бессимптомных пациентов, о которых известно, что у них имеется генетическая мутация, вызывающая болезнь Альцгеймера PSEN1 Е280А (мутация Пайса), включающему введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению. В другом конкретном варианте изобретения данное изобретение относится к способу замедления когнитивных нарушений у бессимптомных пациентов с генетической мутацией, которая вызывает аутосомно-доминантную болезнь Альцгеймера, включающий введение указанному пациенту фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению.In another embodiment, the invention relates to a method for retarding cognitive impairment in an asymptomatic patient known to have a genetic mutation causing Alzheimer's disease, comprising administering to said patient a pharmaceutical composition comprising an antibody of the invention. In a specific embodiment of the invention, this invention relates to a method for slowing down cognitive impairment in asymptomatic patients known to have a genetic mutation that causes Alzheimer's disease PSEN1 E280A (Pice mutation), comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention . In another specific embodiment of the invention, this invention relates to a method of slowing cognitive impairment in asymptomatic patients with a genetic mutation that causes autosomal dominant Alzheimer's disease, comprising administering to said patient a pharmaceutical composition containing an antibody of this invention.

В данном изобретении также предложено антитело по данному изобретению для применения в терапии. В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения при лечении заболевания, характеризующегося отложением Ав. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение обеспечивает антитело по данному изобретению для применения в лечении клинической или доклинической стадий болезни Альцгеймера, синдрома Дауна, или клинической или доклинической стадий церебральной амилоидной ангиопатии. ВThe invention also provides an antibody of the invention for use in therapy. In one embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in the treatment of a disease characterized by AV deposition. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in the treatment of clinical or preclinical Alzheimer's disease, Down syndrome, or clinical or preclinical cerebral amyloid angiopathy. IN

- 3 041243 другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения при лечении состояния, выбранного из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения для замедления когнитивных нарушений у пациента, у которого диагностирована клиническая или доклиническая стадия болезни Альцгеймера, синдром Дауна или клиническая или доклиническая стадия церебральной амилоидной ангиопатии. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения с целью замедления когнитивных нарушений у пациента, у которого диагностирована продромальная AD, легкая AD, умеренная AD или тяжелая AD.- 3 041243 another embodiment of the invention relates to an antibody of this invention for use in the treatment of a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD and severe AD. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in slowing cognitive impairment in a patient diagnosed with clinical or preclinical Alzheimer's disease, Down syndrome, or clinical or preclinical cerebral amyloid angiopathy. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in slowing down cognitive impairment in a patient diagnosed with prodromal AD, mild AD, moderate AD, or severe AD.

В данном изобретении также предложено антитело по данному изобретению для применения с целью снижении нагрузки Ав амилоидной бляшки на головной мозг. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения при лечении состояния, характеризующегося отложением Ав у пациента, имеющего генетическую мутацию PSEN1 Е280А. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения при лечении потери памяти или замедления когнитивных нарушений у пациента, имеющего генетическую мутацию PSEN1 Е280А. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения для предотвращения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у пациента, имеющего генетическую мутацию PSEN1 Е280А.The present invention also provides an antibody of the present invention for use in reducing the AV burden of amyloid plaque in the brain. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in the treatment of a condition characterized by AV deposition in a patient having the PSEN1 E280A genetic mutation. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in the treatment of memory loss or cognitive impairment in a patient having the PSEN1 E280A genetic mutation. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in preventing memory loss or slowing cognitive impairment in a patient having the PSEN1 E280A genetic mutation.

В данном изобретении также предложено антитело по данному изобретению для применения в профилактике состояния, выбранного из клинической или доклинической стадии AD, синдрома Дауна и клинической или доклинической стадии САА. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к антителу по данному изобретению для применения с целью профилактики состояния, выбранного из продромальной AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD.The invention also provides an antibody of the invention for use in the prevention of a condition selected from clinical or preclinical AD, Down's syndrome, and clinical or preclinical CAA. In another embodiment, the invention provides an antibody of the invention for use in the prevention of a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD.

Кроме того, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению, для применения в терапии. В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело, для применения при лечении заболевания, характеризующегося отложением Ав .In addition, this invention relates to a pharmaceutical composition containing an antibody according to this invention, for use in therapy. In one embodiment of the invention, this invention relates to a pharmaceutical composition containing an antibody for use in the treatment of a disease characterized by the deposition of Av .

Данное изобретение также относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения заболевания, характеризующегося отложением Ав. В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения клинической или доклинической стадии болезни Альцгеймера, синдрома Дауна и клинической или доклинической стадии церебральной амилоидной ангиопатии. В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению при изготовлении лекарственного средства для лечения продромальной AD, легкой AD, умеренной AD или тяжелой AD. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для замедления когнитивных нарушений у пациента с диагнозом состояния, выбранного из клинической или доклинической стадии болезни Альцгеймера, синдрома Дауна и клинической или доклинической стадии церебральной амилоидной ангиопатии. В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для замедления когнитивных нарушений у пациента с диагнозом состояния, выбранного из продромальный AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD.The present invention also relates to the use of an antibody of the present invention in the manufacture of a medicament for the treatment of a disease characterized by AV deposition. In one embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for the treatment of clinical or preclinical Alzheimer's disease, Down's syndrome, and clinical or preclinical cerebral amyloid angiopathy. In one embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for the treatment of prodromal AD, mild AD, moderate AD, or severe AD. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for slowing cognitive impairment in a patient diagnosed with a condition selected from clinical or preclinical Alzheimer's disease, Down's syndrome, and clinical or preclinical cerebral amyloid angiopathy. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for slowing cognitive impairment in a patient diagnosed with a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD.

Данное изобретение также относится к применению антитела по данному изобретению в производстве лекарственного средства для снижения нагрузки Ав амилоидной бляшки на головной мозг. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения состояния, характеризующегося отложением Ав у пациента, имеющего генетическую мутацию PSEN1 Е280А. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для лечения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у пациента с генетической мутацией PSEN1 Е280А. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для предовращения потери памяти или замедления когнитивных нарушений у пациента. В предпочтительном варианте осуществления изобретения пациент имеет генетическую мутацию PSEN1 Е280А. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для профилактики состояния, выбранного из клинической или доклинической стадии AD, синдрома Дауна и клинической или доклинической стадии САА. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к применению антитела по данному изобретению в изготовлении лекарственного средства для профилактики состояния, выбранного из продромальный AD, легкой AD, умеренной AD и тяжелой AD.The present invention also relates to the use of an antibody of the present invention in the manufacture of a medicament for reducing the AV burden of amyloid plaque in the brain. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for the treatment of a condition characterized by AV deposition in a patient having the PSEN1 E280A genetic mutation. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for the treatment of memory loss or cognitive impairment in a patient with a PSEN1 E280A genetic mutation. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for preventing memory loss or slowing down cognitive impairment in a patient. In a preferred embodiment of the invention, the patient has the PSEN1 E280A genetic mutation. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for the prevention of a condition selected from clinical or preclinical AD, Down's syndrome, and clinical or preclinical CAA. In another embodiment, the invention relates to the use of an antibody of the invention in the manufacture of a medicament for the prevention of a condition selected from prodromal AD, mild AD, moderate AD, and severe AD.

В одном варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к молекуле ДНК, соIn one embodiment of the invention, this invention relates to a DNA molecule, with

- 4 041243 держащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12. В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. В еще одном варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, представляет собой SEQ ID NO: 15, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, представляет собой SEQ ID NO: 16. В конкретном варианте осуществления изобретения полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, представляет собой SEQ ID NO: 15, полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, представляет собой SEQ ID NO: 17, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, представляет собой SEQ ID NO: 16.- 4 041243 containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12. In one embodiment of the invention, this invention relates to a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In one embodiment of the invention, this invention relates to a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. In another embodiment of the invention, this invention relates to a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In another embodiment of the invention, this invention relates to a mole DNA containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. In another embodiment of the invention, this invention relates to a DNA molecule containing a polynucleotide a sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 and a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In another embodiment of the invention, this invention relates to a DNA molecule containing a polynucleotide sequence, encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. Specifically In an embodiment of the invention, the polynucleotide sequence encoding the polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 is SEQ ID NO: 15, and the polynucleotide sequence encoding the polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 is SEQ ID NO: 16 In a particular embodiment, the polynucleotide sequence encoding the polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 is SEQ ID NO: 15, the polynucleotide sequence encoding the polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 is SEQ ID NO: 17 and the polynucleotide sequence encoding the polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 is SEQ ID NO: 16.

Кроме того, данное изобретение относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13 или 14. Предпочтительно клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В другом варианте осуществления изобретения клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14. В одном варианте осуществления изобретения клеточная линия млекопитающих представляет собой клеточную линию яичника китайского хомячка (СНО) или эмбриональной почки китайского хомячка (HEK).In addition, this invention relates to a mammalian cell containing a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or 14. Preferably, the mammalian cell contains a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In another embodiment of the invention, the mammalian cell contains a DNA molecule containing a polynucleotide a sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 and a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14. In one embodiment, the mammalian cell line is is a Chinese Hamster Ovary (CHO) or Chinese Hamster Embryonic Kidney (HEK) cell line.

Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и/или молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. Предпочтительно клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и/или молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее НС, имеющее аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и LC, имеющее аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. Предпочтительно клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В одном варианте осуществления изо- 5 041243 бретения, клеточная линия млекопитающих представляет собой клеточную линию СНО или HEK.This invention also relates to a mammalian cell containing a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and/or a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, wherein the cell is capable of expressing an antibody comprising an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 and an LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. Preferably, the mammalian cell contains a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: : 12, and a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. The present invention also relates to a mammalian cell containing a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having an amino acid sequence be SEQ ID NO: 12, and/or a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, wherein the cell is capable of expressing an antibody containing an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, and an LC, having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. Preferably, the mammalian cell contains a DNA molecule containing a polynucleotide sequence encoding a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12 and a polypeptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13. In one embodiment, iso- 5 041243, the mammalian cell line is a CHO or HEK cell line.

В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к способу получения антитела, содержащего LCVR, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и HCVR, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LCVR, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и/или ДНК, кодирующую HCVR, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше. Данное изобретение также относится к способу получения антитела, содержащего LCVR, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и HCVR, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LCVR, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и/или HCVR, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.In another embodiment, the invention relates to a method for producing an antibody comprising an LCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and an HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, the method comprising culturing a mammalian cell containing DNA encoding LCVR, having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and/or DNA encoding HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, under conditions under which the antibody is expressed and the expressed antibody is recovered. The invention includes an antibody obtainable by the method of the invention as described immediately above. The present invention also relates to a method for producing an antibody containing an LCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 and an HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, the method comprising culturing a mammalian cell containing DNA encoding an LCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, and/or HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9, under conditions under which the antibody is expressed and the expressed antibody is recovered. The invention includes an antibody obtainable by the method of the invention as described immediately above.

В другом варианте осуществления изобретения данное изобретение относится к способу получения антитела, содержащего LC, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, и НС, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, и/или НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше. Данное изобретение также относится к способу получения антитела, содержащего LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, и/или НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.In another embodiment, the invention relates to a method for producing an antibody comprising an LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 and an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, the method comprising culturing a mammalian cell containing DNA encoding LC, having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, and/or HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, under conditions under which the antibody is expressed and the expressed antibody is restored. The invention includes an antibody obtainable by the method of the invention as described immediately above. The present invention also relates to a method for producing an antibody containing an LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 and an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, the method comprising culturing a mammalian cell containing DNA encoding an LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14, and/or HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, under conditions under which the antibody is expressed and the expressed antibody is recovered. The invention includes an antibody obtainable by the method of the invention as described immediately above.

Данное изобретение включает способ получения антитела, причем это антитело содержит две НС и две LC, в которых аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 12, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 13, и этот процесс включает: а) культивирование клетки млекопитающего по изобретению, как описано выше, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и b) восстановление экспрессированного антитела. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше. Данное изобретение также включает способ получения антитела, причем это антитело содержит две НС и две LC, в которых аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 12, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 14, и этот процесс включает: а) культивирование клетки млекопитающего по изобретению, как описано выше, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и b) восстановление экспрессированного антитела. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.The present invention includes a method for producing an antibody, the antibody comprising two HCs and two LCs, wherein the amino acid sequence of each of the two HCs is SEQ ID NO: 12 and the amino acid sequence of each of the two LCs is SEQ ID NO: 13, and this the process includes: a) culturing a mammalian cell of the invention, as described above, under conditions under which the antibody is expressed, and b) recovering the expressed antibody. The invention includes an antibody obtainable by the method of the invention as described immediately above. The invention also includes a method for producing an antibody, the antibody comprising two HCs and two LCs, wherein the amino acid sequence of each of the two HCs is SEQ ID NO: 12 and the amino acid sequence of each of the two LCs is SEQ ID NO: 14, and this process includes: a) culturing the mammalian cell of the invention, as described above, under conditions under which the antibody is expressed, and b) recovering the expressed antibody. The invention includes an antibody obtainable by the method of the invention as described immediately above.

Антитела по данному изобретению связываются с N3pGlu Ae. Последовательность N3pGlu Ae представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, и варианты его карбоксильного конца. Примеры вариантов карбоксильного конца N3pGlu Ав включают Ав_р3_₄₀ и Ав_р3.₄₃.The antibodies of this invention bind to N3pGlu Ae. The N3pGlu Ae sequence is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22, and variants of its carboxyl terminus. Examples of N3pGlu Av carboxyl terminus _variants include Av _{p3_40} and Av _p3 . ₄₃ .

Используемый в данном документе термин антитело обозначает молекулу иммуноглобулина, содержащую две тяжелые цепи (НС) и две легкие цепи (LC), связанные дисульфидными связями. Аминоконцевая часть каждой LC и НС включает вариабельный участок, ответственный за распознавание антигена через определяющие комплементарность участки (CDR), содержащиеся в них. CDR перемежаются с участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными участками. Назначение аминокислот доменам CDR в участках LCVR и HCVR антител по данному изобретению основано на хорошо известном соглашении нумерации по Кабат (Kabat et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)), и Северной конвенции по нумерации (North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406: 228-256 (2011)).As used herein, the term antibody refers to an immunoglobulin molecule containing two heavy chains (HC) and two light chains (LC) linked by disulfide bonds. The amino terminal portion of each LC and HC includes a variable region responsible for antigen recognition through the complementarity determining regions (CDRs) contained therein. The CDRs are interspersed with regions that are more conserved, called framework regions. The assignment of amino acids to the CDR domains in the LCVR and HCVR regions of the antibodies of this invention is based on the well-known Kabat numbering convention (Kabat et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)), and North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406: 228-256 (2011)).

Антитела по данному изобретению включают каппа LC и НС IgG. В конкретном варианте осуществления изобретения, антитела по данному изобретению представляют собой IgG1.Antibodies of the invention include kappa LC and HC IgG. In a specific embodiment of the invention, the antibodies of this invention are IgG1.

Антитела по данному изобретению представляют собой моноклональные антитела (мАт). Моноклональные антитела могут быть получены, например, с помощью гибридомных технологий, рекомбинантных технологий, технологий фагового дисплея, синтетических технологий, например, CDRтрансплантации, или комбинаций таких или других технологий, известных в данной области. В другомThe antibodies of this invention are monoclonal antibodies (mAbs). Monoclonal antibodies can be obtained, for example, using hybridoma technologies, recombinant technologies, phage display technologies, synthetic technologies, such as CDR transplantation, or combinations of these or other technologies known in this field. In a different

- 6 041243 варианте осуществления данного изобретения антитело или кодирующая его нуклеиновая кислота предоставлены в изолированной форме. Используемый в данном документе термин выделенный относится к белку, пептиду или нуклеиновой кислоте, которые не обнаружены в природе и не содержат или практически не содержат другие макромолекулярные вещества, обнаруженные в клеточной среде. Термин по существу не содержат, как используется в данном документе, означает, что представляющие интерес белок, пептид или нуклеиновая кислота содержат более чем 80% (в мольном отношении) макромолекулярных компонентов, предпочтительно более чем 90% и более предпочтительно более чем 95%.- 6 041243 embodiment of the present invention, the antibody or nucleic acid encoding it is provided in isolated form. As used herein, the term isolated refers to a protein, peptide or nucleic acid that is not found in nature and does not contain or substantially does not contain other macromolecular substances found in the cellular environment. The term substantially free, as used herein, means that the protein, peptide, or nucleic acid of interest contains more than 80% (mole ratio) of the macromolecular components, preferably more than 90%, and more preferably more than 95%.

После экспрессии и секреции антитела, среду осветляют для удаления клеток, а осветленную среду очищают с использованием любого из многих обычно используемых методов. Очищенное антитело может быть составлено в фармацевтических композициях в соответствии с хорошо известными способами изготовления белков и антител для парентерального введения, особенно для подкожного, интратекального или внутривенного введения. Антитело может быть лиофилизировано вместе с подходящими фармацевтически приемлемыми наполнителями, а затем позднее восстановлено разбавителем на водной основе перед использованием. Альтернативно, антитело может быть приготовлено в водном растворе и храниться до 1 -3 лет до использования. В любом случае форма для хранения и форма для инъекции фармацевтических композиций антитела будут содержать фармацевтически приемлемый наполнитель или наполнители, которые представляют собой ингредиенты, отличные от антитела. Является ли ингредиент фармацевтически приемлемым, зависит от его влияния на безопасность и эффективность или на чистоту и эффективность фармацевтической композиции. Если считается, что ингредиент оказывает достаточно неблагоприятное влияние на безопасность или эффективность (или на чистоту или эффективность), чтобы гарантировать, что он не используется в композиции для введения людям, то он не является фармацевтически приемлемым для использования в фармацевтической композиции антитела.Following expression and secretion of the antibody, the medium is clarified to remove cells and the clarified medium is purified using any of the many commonly used methods. The purified antibody can be formulated into pharmaceutical compositions according to well known methods for preparing proteins and antibodies for parenteral administration, especially for subcutaneous, intrathecal or intravenous administration. The antibody may be lyophilized along with suitable pharmaceutically acceptable excipients and then reconstituted with an aqueous diluent at a later time prior to use. Alternatively, the antibody may be prepared in an aqueous solution and stored for up to 1-3 years prior to use. In any case, the storage form and the form for injection of pharmaceutical compositions of the antibody will contain a pharmaceutically acceptable excipient or excipients, which are ingredients other than the antibody. Whether an ingredient is pharmaceutically acceptable depends on its effect on the safety and efficacy or purity and efficacy of the pharmaceutical composition. If an ingredient is considered to have a sufficiently adverse effect on safety or efficacy (or purity or efficacy) to warrant that it is not used in a composition for administration to humans, then it is not pharmaceutically acceptable for use in a pharmaceutical formulation of an antibody.

Фармацевтическую композицию, содержащую антитело по данному изобретению, можно вводить пациенту с риском или проявлением заболеваний или расстройств, как описано в данном документе, первичными путями (например, подкожным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутримышечным). Подкожные и внутривенные пути являются предпочтительными. Фармацевтическая композиция по данному изобретению содержит эффективное количество антитела по данному изобретению. Эффективное количество относится к количеству, необходимому (в дозировках и в течение периодов времени и для средств введения) для достижения желаемого терапевтического результата. Эффективное количество антитела может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и масса индивида, а также от способности антитела вызывать необходимый ответ у индивида. Эффективное количество может быть легко определено лечащим диагностом или медицинским работником, таким как специалист в данной области, с использованием известных методик и наблюдением результатов. Частота дозирования зависит от фактической фармакокинетики и фармакодинамики у людей. Продолжительность лечения будет варьироваться в зависимости от многих факторов и будет определяться диагностом пациента или лечащим врачом на основании опыта и навыков в данной области. Частота и продолжительность лечения могут варьироваться в зависимости от показаний. Термины лечение, проведение лечение или лечить и тому подобное включают в себя сдерживание, замедление или остановку прогрессирования или тяжести существующего симптома, состояния, заболевания или расстройства у пациента. Термин пациент относится к человеку. Термины предотвращать и предотвращение означает профилактическое введение антитела по данному изобретению бессимптомному пациенту с тем, чтобы сдерживать у пациента имеющиеся симптомы или клинические признаки нейродегенеративных заболеваний, таких как AD.A pharmaceutical composition containing an antibody of this invention may be administered to a patient at risk for or exhibiting diseases or disorders as described herein by primary routes (eg, subcutaneous, intravenous, intraperitoneal, intramuscular). Subcutaneous and intravenous routes are preferred. The pharmaceutical composition of this invention contains an effective amount of an antibody of this invention. An effective amount refers to the amount necessary (in dosages and over periods of time and for means of administration) to achieve the desired therapeutic result. The effective amount of the antibody may vary depending on such factors as the disease state, age, sex and weight of the individual, as well as the ability of the antibody to elicit the desired response in the individual. An effective amount can be readily determined by the attending diagnostician or healthcare professional, such as one of skill in the art, using known techniques and observing the results. Dosing frequency depends on the actual pharmacokinetics and pharmacodynamics in humans. The duration of treatment will vary depending on many factors and will be determined by the patient's diagnostician or treating physician based on experience and skill in the field. The frequency and duration of treatment may vary depending on the indication. The terms treating, treating, or treating, and the like, include curbing, slowing, or stopping the progression or severity of an existing symptom, condition, disease, or disorder in a patient. The term patient refers to a person. The terms prevent and prevent means the prophylactic administration of an antibody of this invention to an asymptomatic patient in order to control the patient's symptoms or clinical signs of neurodegenerative diseases such as AD.

Термин состояние, характеризуемое отложением Ав, представляет собой заболевание, которое патологически характеризуется отложениями Ав в головном мозге или в сосудистой системе головного мозга. Это включает в себя такие заболевания, как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна и церебральная амилоидная ангиопатия. Клинический диагноз, стадия или прогрессирование болезни Альцгеймера может быть легко определен лечащим диагностом или медицинским работником, таким как специалист в данной области с использованием известных методов и путем наблюдения результатов. Это, как правило, включает в себя некоторую форму представления о бляшках головного мозга, оценку психического или когнитивного расстройства (например, рейтинг клинической деменции - сводные данные боксов (CDR-SB), мини-экзамен по психическому состоянию (MMSE) или когнитивная шкала оценки болезни Альцгеймера (ADAS)-Cog)) или функциональную оценку (например, кооперативное исследование болезни Альцгеймера- активность повседневной жизни (ADCS-ADL). Клиническая стадия болезни Альцгеймера, как используется в данном описании, представляет собой диагностированную стадию болезни Альцгеймера. Оно включает состояния, диагностированные как продромальная болезнь Альцгеймера, легкая болезнь Альцгеймера, умеренная болезнь Альцгеймера и тяжелая болезнь Альцгеймера. Термин доклиническая стадия болезни Альцгеймера представляет собой стадию, которая предшествует клинической стадии болезни Альцгеймера, где измеримые изменения в биомаркерах (таких как уровни Ав42 СМЖ или нагрузка отложений бляшки на головной мозг с помощью ПЭТ амилоида) указывают на самые ранние признаки у пациента с патологией Альцгеймера, прогрессирующей до клинической стадии бо- 7 041243 лезни Альцгеймера. Обычно это происходит до того, как становятся заметны такие симптомы, как потеря памяти и спутанность сознания.The term condition characterized by AV deposition is a disease that is pathologically characterized by AV deposits in the brain or cerebrovascular system. This includes diseases such as Alzheimer's disease, Down's syndrome, and cerebral amyloid angiopathy. The clinical diagnosis, stage, or progression of Alzheimer's disease can be easily determined by the attending diagnostician or medical professional, such as one skilled in the art, using known methods and by observing the results. This typically includes some form of presentation of brain plaques, an assessment of mental or cognitive impairment (e.g. Clinical Dementia Rating - Box Summary Data (CDR-SB), Mini Mental State Examination (MMSE), or a cognitive assessment scale). Alzheimer's Disease (ADAS-Cog)) or functional assessment (e.g., the Cooperative Alzheimer's Disease-Activity of Daily Life (ADCS-ADL) study). Clinical stage of Alzheimer's disease, as used herein, is the diagnosed stage of Alzheimer's disease. It includes conditions diagnosed as prodromal Alzheimer's disease, mild Alzheimer's disease, moderate Alzheimer's disease, and severe Alzheimer's disease.The term preclinical Alzheimer's disease stage is the stage that precedes the clinical stage of Alzheimer's disease, where measurable changes in biomarkers (such as CSF Av42 levels or plaque load per head brain using amyloid PET) indicate the earliest signs in a patient with Alzheimer's pathology progressing to the clinical stage of Alzheimer's disease. This usually happens before symptoms such as memory loss and confusion become noticeable.

Следующие примеры и анализы демонстрируют, что антитела по данному изобретению полезны для лечения заболевания, характеризующегося отложением Ав, такого как болезнь Альцгеймера, синдром Дауна и САА. Однако следует понимать, что следующие Примеры изложены в качестве иллюстрации, а не ограничения, и что специалистом в данной области техники могут быть сделаны различные модификации.The following examples and assays demonstrate that the antibodies of this invention are useful in the treatment of a disease characterized by AV deposition, such as Alzheimer's disease, Down's syndrome and CAA. However, it should be understood that the following Examples are set forth by way of illustration and not limitation, and that various modifications may be made by one skilled in the art.

ПримерыExamples

Экспрессия и очистка сконструированных антител N3pGlu ΑβExpression and purification of engineered N3pGlu Αβ antibodies

N3pGlu Ae антитела по данному изобретению, могут быть экспрессированны и очищены по существу, следующим образом. Вектор экспрессии глутаминсинтетазы (GS), содержащий последовательность ДНК, кодирующую аминокислотную последовательность LC SEQ ID NO: 13 или 14, и последовательность ДНК, кодирующую аминокислотную последовательность НС SEQ ID NO: 12, используется для трансфекции клеточной линии яичника китайского хомячка (СНО) методом электропорации. Вектор экспрессии кодирует промотор SV Early (Simian Virus 40E) и ген GS. После трансфекции клетки подвергают массовой селекции с 0-50 мкМ L-метионинсульфоксимина (MSX). Выбранные массы клеток или мастер-лунки затем масштабируются в бессывороточных суспензионных культурах, которые будут использоваться для производства.The N3pGlu Ae antibodies of this invention can be expressed and purified essentially as follows. A glutamine synthetase (GS) expression vector containing a DNA sequence encoding the amino acid sequence of LC SEQ ID NO: 13 or 14 and a DNA sequence encoding the amino acid sequence of HC SEQ ID NO: 12 is used to transfect a Chinese hamster ovary (CHO) cell line by electroporation . The expression vector encodes the SV Early promoter (Simian Virus 40E) and the GS gene. After transfection, cells are subjected to mass selection with 0-50 μm L-methionine sulfoximine (MSX). The selected cell masses or master wells are then scaled up in serum-free suspension cultures to be used for production.

Осветленную среду, в которую было секретировано антитело, наносят на аффинную колонку с Белком А, которая была уравновешена совместимым буфером, таким как забуференный фосфатно-солевой буфер (рН 7,4). Колонку промывают 1 М NaCl для удаления неспецифических связывающих компонентов. Связанное антитело N3pGlu Ae элюируют, например, цитратом натрия при рН (прибл.) 3,5 и фракции нейтрализуют 1 М трис-буфером. Фракции антитела N3pGlu Ав обнаруживают, например, с помощью SDS-PAGE или аналитического исключения по размеру, а затем объединяют. N3pGlu Ав антитело по данному изобретению, концентрируют в любом ФСБ буфере при рН 7,4 или 10 мМ Na-цитратного буфера, 150 мМ NaCl при рН около 6. Конечный материал может быть стерильно отфильтрован с использованием обычных методов. Чистота антитела N3pGlu Ав составляет более чем 95%. N3pGlu Άβ антитело по данному изобретению может быть немедленно заморожено при -70°С или сохранено при 4°С в течение нескольких месяцев. Аминокислотные SEQ ID NO для приведенных в качестве примеров антител по данному изобретению показаны ниже.The clarified medium into which the antibody has been secreted is applied to a Protein A affinity column that has been equilibrated with a compatible buffer such as PBS (pH 7.4). The column is washed with 1 M NaCl to remove non-specific binding components. The bound N3pGlu Ae antibody is eluted with eg sodium citrate at pH (approx.) 3.5 and the fractions are neutralized with 1 M Tris buffer. Fractions of the N3pGlu AB antibody are detected, for example, by SDS-PAGE or analytical size exclusion, and then pooled. The N3pGlu AB antibody of this invention is concentrated in either PBS buffer at pH 7.4 or 10 mM Na-citrate buffer, 150 mM NaCl at pH about 6. The final material can be sterile filtered using conventional methods. The purity of the N3pGlu Ab antibody is greater than 95%. The N3pGlu Άβ antibody of this invention can be frozen immediately at -70°C or stored at 4°C for several months. The amino acid SEQ ID NOs for the exemplary antibodies of this invention are shown below.

Таблица 1. Аминокислотные последовательности приведенных в качестве примеров антител N3pGlu АвTable 1. Amino acid sequences of exemplary N3pGlu Ab antibodies

SEQ ID NO антитела SEQ ID NO antibodies Антитело Antibody Легкая цепь light chain Тяжелая цепь heavy chain LCVR LCVR HCVR HCVR 201с 201s 13 13 12 12 10 10 9 9 201cYD 201cYD 14 14 12 12 и And 9 9 SEQ ID NO антитела SEQ ID NO antibodies Антитело Antibody LCDR1 LCDR1 LCDR2 LCDR2 LCDR3 LCDR3 201с 201s 4 4 6 6 8 8 201CYD 201CYD 5 5 7 7 8 8 SEQ ID NO антитела SEQ ID NO antibody Антитело Antibody HCDR1 HCDR1 HCDR2 HCDR2 HCDR3 HDDR3 201с и 201CYD 201c and 201CYD 1 1 2 2 3 3

Кинетика и авидность связыванияKinetics and avidity of binding

Кинетику и авидность связывания N3pGlu Ав антитела с пептидом рЕ3-42 Ав измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса с использованием Biacore® 3000 (GE Healthcare). Авидность связывания измеряют путем иммобилизации около 120 RU пептида рЕ3-42 Ав посредством аминного связывания на чипе Biacore® CM5 и протекания антитела N3pGlu Ав, начиная с 500 нМ в 2-кратном серийном разведении до 15,6 нмоль. Эксперименты проводят при 25°С в буфере HBS-EP (GE Healthcare BR100669; 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,05% поверхностно-активного вещества Р20, рН 7,4). Для каждого цикла, 250 мкл образца антитела пропускают через ячейку потока 1 и 2 при 50 мкл/мин, а затем диссоциируют в течение 10 мин. Поверхность чипа регенерируют с 5 мкл инъекции глицинового буфера при рН 1,5 при 10 мкл/мл потока. Данные соответствуют модели привязки Ленгмюра 1:1 для получения k_on, k_off и для вычисления K_D. Следуя процедурам, по существу, как описано выше, были соблюдены следующие параметры (показанные в табл. 2).The kinetics and avidity of binding of the N3pGlu AB antibody to the pE3-42 AB peptide was measured by surface plasmon resonance using a Biacore® 3000 (GE Healthcare). Binding avidity is measured by immobilizing about 120 RU of the pE3-42Ab peptide via amine coupling on a Biacore® CM5 chip and flowing the N3pGluAb antibody starting at 500nM in a 2-fold serial dilution to 15.6nmol. Experiments are performed at 25° C. in HBS-EP buffer (GE Healthcare BR100669; 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% P20 surfactant, pH 7.4). For each cycle, 250 µl of antibody sample is passed through flow cell 1 and 2 at 50 µl/min and then dissociated for 10 min. The chip surface is regenerated with 5 µl injection of glycine buffer at pH 1.5 at 10 µl/ml flow. The data follows a 1:1 Langmuir binding model for obtaining k _on , k _off and for calculating K _D . Following the procedures essentially as described above, the following parameters were met (shown in Table 2).

- 8 041243- 8 041243

Таблица 2. Кинетика и авидность связыванияTable 2. Binding kinetics and avidity

Антитело Antibody k_on (1/Мс)k _on (1/ms) k_off(l/c) _off (l/c) K_D(M)K _D (M) 201с 201s |Среднее |Average 1,64Е+03 1.64E+03 6,98Е-05 6.98E-05 4,57Е-08 4.57Е-08 S. D. S.D. 3,88Е+02 3.88E+02 1,36Е-05 1.36E-05 2,06Е-08 2.06Е-08 201 cYD 201 CYD |Среднее |Average 2,41Е+03 2.41E+03 6,39Е-05 6.39Е-05 2,67Е-08 2.67Е-08 |S. D. |S. D. 2,01Е+02 2.01E+02 2J5E-06 2J5E-06 2,61Е-09 2.61E-09

Эти данные демонстрируют, что антитела по данному изобретению связывают рЕ3-42 Ав.These data demonstrate that the antibodies of this invention bind pE3-42Ab.

Ex Vivo связывание с мишеньюEx Vivo target binding

Для определения связывания с мишенью ex vivo на срезах головного мозга из фиксированного PDAPP мозга проводят иммуногистохимический анализ с экзогенно добавленными антителами N3pGlu Ae по данному изобретению или антителом Н3В 201с. Антитело 201с Н3В отличается на одну аминокислоту от антитела 201с, и это различие находится в HCDR3 тяжелой цепи (Tyr в положении 10 в HCDR3 201с представляет собой Phe в 201с Н3В). Антитело 201с Н3В содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи, представленную SEQ ID NO: 20, и аминокислотную последовательность легкой цепи, представленную SEQ ID NO: 13.To determine ex vivo target binding on brain sections from PDAPP fixed brains, immunohistochemistry is performed with exogenously added N3pGlu Ae antibodies of the invention or H3B 201c antibody. The 201c H3B antibody differs by one amino acid from the 201c antibody, and this difference is found in the heavy chain HCDR3 (Tyr at position 10 in HCDR3 201c is Phe in 201c H3B). The 201c H3B antibody contains the heavy chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 20 and the light chain amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 13.

Серийные криостатные коронарные срезы старых PDAPP мышей (в возрасте 26 или 20 месяцев) инкубируют с 5 или 20 мкг/мл примера антитела N3pGlu Ав по данному изобретению (201с или 201cYD). Используют вторичные реагенты HRP, специфичные для человеческого IgG, и отложенные бляшки визуализируют с помощью DAB-Plus (DAKO). Биотинилированное мышиное антитело 3D6, за которым следует вторичный Step-HRP, используют в качестве положительного контроля.Serial cryostat coronal sections of old PDAPP mice (aged 26 or 20 months) are incubated with 5 or 20 μg/ml of an example N3pGlu AB antibody of the invention (201c or 201cYD). Human IgG specific HRP secondary reagents are used and deposited plaques are visualized with DAB-Plus (DAKO). Biotinylated mouse 3D6 antibody followed by secondary Step-HRP was used as a positive control.

Приведенные в качестве примера антитела N3pGlu Ав по данному изобретению помечены как отложенные Ав в этих срезах мозга. Однако наблюдалось более высокое фоновое окрашивание для антитела 201с Н3В при экзогенной концентрации 20 мкг/мл. Эти гистологические исследования продемонстрировали, что приведенные в качестве примера антитела PN3pGlu Ав по данному изобретению связывали отложенную Ав мишень ex vivo.The exemplary N3pGlu AB antibodies of this invention are labeled as deposited AB in these brain sections. However, higher background staining was observed for the 201c H3B antibody at an exogenous concentration of 20 μg/ml. These histological studies demonstrated that the exemplary PN3pGlu AB antibodies of the invention bound the delayed AB target ex vivo.

Фагоцитоз ex vivoPhagocytosis ex vivo

Анализ фагоцитоза ex vivo проводят с целью выяснения, могут ли антитела N3pGlu Ae по данному изобретению способствовать микроглиальному фагоцитозу бляшки. Замороженные срезы головного мозга человека с болезнью Альцгеймера (20 мкм) предварительно инкубируют с 10 мкг/мл приведенного в качестве примера антитела N3pGlu Ae по данному изобретению (201с или 201cYD), контролями или антителом 201с Н3В в течение 1 ч при 37°С в 24-луночных планшетах. На обработку приходится четыре лунки. Первичные мышиные клетки микроглии (8х10⁵; C57/BL6) затем добавляют и инкубируют в течение 24 ч. Ткань в каждой лунке гомогенизируют в 5,2 М гуанидиновом буфере и содержание Ae_1-42 оценивают по ИФА. Поскольку содержание Ав может варьироваться на протяжении нескольких срезов, для каждой тестовой лунки реализован контроль дочернего среза, а содержание тестовой лунки нормализовано по отношению к тому же срезу.An ex vivo phagocytosis assay is performed to determine whether the N3pGlu Ae antibodies of the invention can promote microglial plaque phagocytosis. Frozen sections of human brain with Alzheimer's disease (20 μm) are pre-incubated with 10 μg/ml of the exemplary N3pGlu Ae antibody of this invention (201c or 201cYD), controls, or 201c H3B antibody for 1 h at 37°C at 24 well plates. There are four holes for processing. Primary mouse microglial cells (8x10 ⁵ ; C57/BL6) are then added and incubated for 24 hours. The tissue in each well is homogenized in 5.2 M guanidine buffer and Ae _1-42 content is assessed by ELISA. Because the AB content may vary over several slices, a child slice control is implemented for each test well, and the test well content is normalized to the same slice.

По сравнению с образцами положительного контроля иллюстративные N3pGlu Ав антитела по данному изобретению (201С и 201cYD) и 201с Н3В имели значительно сниженный Aβ₁.₄₂. Образцы отрицательного контроля имели незначительный клиренс отложенного Aβ₁.₄₂. Следовательно, анализы фагоцитоза ex vivo показывают, что приведенные в качестве примера βN3pGlu Ав антитела по данному изобретению могут очищать бляшки ex vivo путем фагоцитоза.Compared to positive control samples, exemplary N3pGlu Av antibodies of this invention (201C and 201cYD) and 201c H3B had significantly reduced Aβ ₁ . ₄₂ . Negative control samples had negligible clearance of delayed Aβ ₁ . ₄₂ . Therefore, ex vivo phagocytosis assays indicate that the exemplified βN3pGlu AB antibodies of the present invention can clear plaques ex vivo by phagocytosis.

In Vivo связывание с мишеньюIn Vivo target binding

Измеряется способность N3pGlu Ав антител согласно данному изобретению пересекать гематоэнцефалический барьер и связываться с осажденной бляшкой in vivo. Старым трансгенным мышам PDAPP (18,5 до 32-месячного возраста) внутрибрюшинно вводили N3pGlu Ав антитела (201с) или IgG отрицательного контроля. Шесть мышей на группу получают одну инъекцию 40 мг/кг антитела в день 1 и в день 3. Связывание с мишенью in vivo определяют на 6-й день, когда мышей умерщвляют и собирают мозг для гистохимического анализа.The ability of the N3pGlu AB antibodies of the invention to cross the blood-brain barrier and bind to deposited plaque in vivo is measured. Old transgenic PDAPP mice (18.5 to 32 months of age) were intraperitoneally injected with N3pGlu AB antibody (201c) or negative control IgG. Six mice per group receive one injection of 40 mg/kg antibody on day 1 and day 3. In vivo target binding is determined on day 6 when mice are sacrificed and brains are harvested for histochemical analysis.

Степень связывания мишеней in vivo количественно определяют как относительную площадь, положительную для связывания N3pGlu Ав антител in vivo, нормированную по общей площади бляшек, как определено с помощью иммуноокрашивания экзогенного антитела 3D6 на сестринских срезах (соотношение ТЕ). Соотношение ТЕ генерируется путем измерения относительной площади связанного антителом, и нормализации значения по отношению к общей относительной площади возможной цели (общее отложение Ав визуализируется с помощью экзогенной иммуногистохимии с антителом положительного контроля (3D6) на сестринском срезе).The extent of target binding in vivo is quantified as the relative area positive for binding of N3pGlu AB antibodies in vivo, normalized to total plaque area, as determined by immunostaining of exogenous 3D6 antibody on sister sections (TE ratio). The TE ratio is generated by measuring the relative area bound by the antibody, and normalizing the value with respect to the total relative area of possible target (total AV deposition is visualized by exogenous immunohistochemistry with a positive control antibody (3D6) on a sister section).

Следуя процедурам, по существу, как описано выше, антитело 201с имело соотношение ТЕ 2,8%. Антитело 201с продемонстрировало in vivo связывание с мишенью в гиппокампе и в ограниченной степени в коре, тогда как у животных, которым вводили контрольный IgG, не было окрашивания, специфичного для бляшек.Following procedures essentially as described above, antibody 201c had a TE ratio of 2.8%. The 201c antibody showed in vivo binding to a target in the hippocampus and to a limited extent in the cortex, while control IgG-treated animals showed no plaque-specific staining.

- 9 041243- 9 041243

In Vivo очистка бляшекIn Vivo plaque clearance

Исследования проводят с химерными суррогатными антителами с LCVR и HCVR 201с или 201с Н3В, слитыми с константным участком каппа мыши и Fc IgG2a, для оценки in vivo очистки бляшек у старых мышей PDAPP. Старым мышам PDAPP (возраст 21 месяц, n = 23-25 в группе) подкожно вводят один раз в неделю в течение 7 недель 12,5 мг/кг химерного антитела 201с, химерного антитела 201с Н3В или контрольного IgG. Контрольных старых мышей PDAPP (умерщвленных в начале исследования) используют для оценки уровней существовавшего отложения перед терапевтическим лечением.Studies are performed with LCVR chimeric surrogates and HCVR 201c or 201c H3B fused to a mouse kappa constant region and IgG2a Fc to evaluate in vivo plaque clearance in aged PDAPP mice. Old PDAPP mice (age 21 months, n = 23-25 per group) are injected subcutaneously once a week for 7 weeks with 12.5 mg/kg of chimeric 201c antibody, chimeric 201c antibody H3B or control IgG. Control aged PDAPP mice (euthanized at the start of the study) were used to assess levels of pre-existing deposition prior to therapeutic treatment.

В конце исследования конечные уровни лекарственного средства измеряются в плазме, а мозг оценивается с помощью ИФА для уровней Ae1_₄₂. Старые мыши PDAPP находятся на пределе бляшек, о чем свидетельствует незначительное дальнейшее накопление Ae1_₄₂ в течение 7-недельного периода лечения контрольным IgG. Группа химерных антител 201с и группа химерных антител 201с Н3В демонстрируют значительное снижение Ap₁_₄₂ (26%, р < 0,0182 и 26%, р = 0,0121 соответственно) по сравнению с контролем. Уровень воздействия антител измеряли в конце 7-недельного периода дозирования, и химерное 201с имело уровень 91 мкг/мл, а 201с Н3В имело уровень 56 мкг/мл. Это исследование продемонстрировало, что представленное в качестве примера химерное N3pGlu Ae антитело 201с способно уменьшать бляшки (Ae1_₄₂) in vivo.At the end of the study, final drug levels are measured in plasma and the brain is assessed by ELISA for Ae1_ ₄₂ levels. Older PDAPP mice are at the plaque limit, as evidenced by little further accumulation of Ae1_ ₄₂ during the 7-week control IgG treatment period. The 201c chimeric antibody group and the 201c H3B chimeric antibody group show a significant decrease in Ap ₁ _ ₄₂ (26%, p < 0.0182 and 26%, p = 0.0121, respectively) compared to control. Antibody exposure was measured at the end of the 7 week dosing period and chimeric 201c had a level of 91 μg/ml and 201c H3B had a level of 56 μg/ml. This study demonstrated that the exemplary chimeric N3pGlu Ae antibody 201c was able to reduce plaques ( _{Ae1_42} ) in vivo.

Отсутствие связывания плазмы с низкой аффиностьюNo low affinity plasma binding

Исследования in vitro проводят для изучения потенциальных низкоаффинных взаимодействий антиN3PG антител по данному изобретению (201с и 201cYD) с белками плазмы. Антитело 201с, 201cYD или 201с Н3В ковалентно связывают с шариками сефарозы и инкубируют с 10 мл нормальной человеческой плазмы в течение 2 ч при 37°С перед проведением колоночной хроматографии. Смесь гранулы/плазма упаковывали в колонки и промывали. Селективно связанные белки элюируются глицином (рН 2,5) в разных фракциях. Затем каждую фракцию анализируют на додецилсульфат натрия (SDS)полиакриламидном геле с высоким разрешением (ПААГ) (от 4 до 16%). Серебряная окраска используется для визуализации белков и представляющие интерес полосы были вырезаны и проанализированы с помощью масс-спектрометрии. Параллельно анализируют множественные антитела контроля IgG1 человека.In vitro studies are conducted to investigate potential low affinity interactions of the anti-N3PG antibodies of this invention (201c and 201cYD) with plasma proteins. The 201c, 201cYD or 201c H3B antibody is covalently attached to Sepharose beads and incubated with 10 ml normal human plasma for 2 hours at 37° C. prior to column chromatography. The bead/plasma mixture was packed into columns and washed. Selectively bound proteins are eluted with glycine (pH 2.5) in different fractions. Each fraction is then analyzed on a sodium dodecyl sulfate (SDS) high resolution polyacrylamide gel (PAGE) (4 to 16%). Silver stain is used to visualize proteins and bands of interest were excised and analyzed by mass spectrometry. In parallel, multiple human IgG1 control antibodies are analyzed.

Следуя процедурам, в основном, как описано выше, визуализация окрашенных серебром гелей продемонстрировала присутствие богатого гистидином гликопротеина (полоса ~ 64 кДа), альфа-цепи фибриногена (полоса ~ 60 кДа) и бета-цепи фибриногена (полоса ~ 50 кДа) во фракции-5 из элюции антитела 201с Н3В по сравнению с антителами контрольного IgG1. Наоборот, антитела 201с и 201cYD не обладали заметной низкой аффинностью связывания с белками плазмы человека по сравнению с контрольным IgG и антителом 201с Н3В.Following the procedures essentially as described above, imaging of the silver-stained gels demonstrated the presence of histidine-rich glycoprotein (~64 kDa band), fibrinogen alpha chain (~60 kDa band), and fibrinogen beta chain (~50 kDa band) in the fraction- 5 from the elution of the 201c H3B antibody compared to control IgG1 antibodies. Conversely, the 201c and 201cYD antibodies did not have a markedly low binding affinity for human plasma proteins compared to control IgG and the 201c H3B antibody.

Ex Vivo EpiScreen анализ пролиферации Т-клеток Ex vivo EpiScreen® анализ Т-клеток человека используется для измерения активации (пролиферация, секреция цитокинов) человеческих CD4+ Т-клеток в ответ на приведенное в качестве примера N3pGlu Ae антитело по данному изобретению (201с) или антитело 201с Н3В. EpiScreen® использует образцы от 50 здоровых доноров, которые наилучшим образом представляют количество и частоту аллотипов HLA-DR и DQ, экспрессированных в популяциях Европы/Северной Америки и мира. В анализ включены два положительных контроля: гуманизированное А33, клиническое эталонное антитело, которое демонстрирует высокий уровень иммуногенности в клинике (73%) и обычно индуцирует 20-30% Т-клеточный ответ в анализе EpiScreen®, и KLH (гемоцианин лимфы улитки), митогеноподобный белок, содержащий неоантигены. Соответствующий буферный негативный контроль также включен в анализ.Ex Vivo EpiScreen T cell proliferation assay The ex vivo EpiScreen® human T cell assay is used to measure the activation (proliferation, cytokine secretion) of human CD4+ T cells in response to the exemplary N3pGlu Ae antibody of the invention (201c) or antibody 201c H3B. EpiScreen® uses samples from 50 healthy donors that best represent the number and frequency of HLA-DR and DQ allotypes expressed in European/North American and worldwide populations. Two positive controls are included in the assay: humanized A33, a clinical reference antibody that exhibits a high level of immunogenicity in the clinic (73%) and typically induces a 20-30% T cell response in the EpiScreen® assay, and KLH (keyhole limpet hemocyanin), a mitogen-like protein containing neoantigens. An appropriate buffered negative control is also included in the assay.

Процент пролиферации Т-клеток рассчитывают по среднему значению всех положительных донорских ответов, наблюдаемых в течение периода времени (дни 5-8). Процент пролиферации Т-клеток составлял 20 и 94% для положительных контролей А33 и KLH соответственно, и составлял 24% для 201с Н3В. Тем не менее, процент пролиферации Т-клеток составлял 10% для 201с. Эти данные демонстрируют, что антитело 201с имеет низкий уровень ответа Т-клеток по сравнению с положительными контролями и антителом 201с Н3В.The percentage of T cell proliferation is calculated from the average of all positive donor responses observed over a period of time (days 5-8). The percentage of T cell proliferation was 20% and 94% for positive controls A33 and KLH, respectively, and was 24% for 201c H3B. However, the percentage of T cell proliferation was 10% for 201c. These data demonstrate that the 201c antibody has a low T cell response compared to the positive controls and the 201c H3B antibody.

Анализ иммуногенности in silicoIn silico immunogenicity assay

EpiMatrix® анализ сканирует белковые последовательности для потенциальных эпитопов Т-клеток и использует алгоритм для прогнозирования иммуногенности. Он также учитывает содержание Tregitope и влияние на отрицательную регуляцию иммуногенного ответа. Аминокислотные последовательности антител 201с, 201cYD и B12L (антитело B12L содержит тяжелую цепь, которая обеспечивается по SEQ ID NO: 23 и легкую цепь, которая обеспечивается по SEQ ID NO: 24) были проанализированы с помощью EpiMatrix®. Прогнозируемые оценки EpiMatrix® приведены ниже в табл. 3.The EpiMatrix® assay scans protein sequences for potential T cell epitopes and uses an algorithm to predict immunogenicity. It also takes into account the content of Tregitope and the effect on the downregulation of the immunogenic response. The amino acid sequences of antibodies 201c, 201cYD and B12L (antibody B12L contains the heavy chain provided by SEQ ID NO: 23 and the light chain provided by SEQ ID NO: 24) were analyzed using EpiMatrix®. The predicted EpiMatrix® scores are shown in Table 1 below. 3.

- 10 041243- 10 041243

Таблица 3. EpiMatrix® оценкиTable 3. EpiMatrix® scores

Антитело Antibody EpiMatrix оценка белка EpiMatrix protein score Tregitopeскорректированная EpiMatrix оценка белка Tregitopeadjusted EpiMatrix protein score Прогнозируемый Т-зависимый ответ Ат Predicted T-dependent At response 201c 201c 39,14 39.14 -35,49 -35.49 0,28 % 0.28% 201cYD 201cYD 24,76 24.76 -49,87 -49.87 0,00 % 0.00% B12L B12L 0,44 0.44 -17,92 -17.92 4,03 % 4.03%

Эти данные свидетельствуют о том, что предсказанный Т-клеточный-зависимый ответ антител ниже для антител N3pGlu Ae по данному изобретению (201С и 201cYD) по сравнению с B12L антителом.These data indicate that the predicted T-cell dependent antibody response is lower for the N3pGlu Ae antibodies of the invention (201C and 201cYD) compared to the B12L antibody.

Отсутствие распознавания антител против лекарственного средства (ADA)Lack of Anti-Drug Antibody (ADA) Recognition

Для определения того, могут ли антитела против лекарственного средства, направленные против антитела LY3002813, связываться с 201с или 201cYD, проводится мостовой анализ с аффинным захватом элюции (АСЕ) с использованием биотина и рутения, меченных 201с, или биотина и рутения, меченных 201cYD.To determine whether anti-drug antibodies directed against LY3002813 can bind to 201c or 201cYD, an affinity capture elution (ACE) bridge assay is performed using 201c-labeled biotin and ruthenium, or 201cYD-labeled biotin and ruthenium.

В этом формате анализа ADA-мостик между двумя мечеными антителами (например, биотин и рутений, меченный 201с). Затем комплекс связывается с планшетом, покрытым стрептавидином (через антитело, меченное биотином), и для обнаружения используется рутений для генерации сигнала на платформе Mesoscale. Если ADA не распознает антитело 201с или 201cYD, сигнал не будет генерироваться. Кроличий античеловеческий IgG, скорее всего, связывается преимущественно cFc и используется в качестве положительного контроля, чтобы показать, что меченые 201с или 201 cYD могут связывать антитела.In this assay format, an ADA bridge between two labeled antibodies (eg, biotin and ruthenium labeled with 201c). The complex then binds to a streptavidin-coated plate (via a biotin-labeled antibody) and ruthenium is used to generate a signal on the Mesoscale platform for detection. If ADA does not recognize the 201c or 201cYD antibody, no signal will be generated. Rabbit anti-human IgG appears to bind preferentially to cFc and is used as a positive control to show that labeled 201c or 201 cYD can bind antibodies.

Антитела, направленные против LY3002813, включают аффинные антитела, очищенные из двух образцов пациентов из клинического испытания (15Т-МС-ААСС NCT01837641) после введения LY3002813. У этих пациентов развился ответ ADA на LY3002813 с течением времени, о чем свидетельствует положительный сигнал связывания в мостике АСЕ.Antibodies directed against LY3002813 include affinity antibodies purified from two patient samples from a clinical trial (15T-MS-AACC NCT01837641) following administration of LY3002813. These patients developed an ADA response to LY3002813 over time, as evidenced by a positive binding signal in the ACE bridge.

Следуя процедурам, по существу, как описано выше, при обнаружении связывания 201с или 201cYD с антителами против LY3002813 не наблюдалось никакого сигнала выше фонового. Эти данные демонстрируют, что ADA, направленная против LY3002813 у людей, не распознает 201с и 201cYD.Following the procedures essentially as described above, when detecting 201c or 201cYD binding to anti-LY3002813 antibodies, no signal above background was observed. These data demonstrate that ADA directed against LY3002813 in humans does not recognize 201c and 201cYD.

ПоследовательностиSequences

HCDR1 антитела 201с, антитела 201cYD и антитела 201с НЗВ (SEQ ID NO: 1)HCDR1 antibodies 201c, antibodies 201cYD and antibodies 201c HZV (SEQ ID NO: 1)

AASGFTFSSYPMSAASGFTFSSYPMS

HCDR2 антитела 201с, антитела 201cYD и антитела 201с НЗВ (SEQ ID NO: 2)HCDR2 antibodies 201c, antibodies 201cYD and antibodies 201c HZV (SEQ ID NO: 2)

AISGSGGSTYYADSVKGAISGSGGSTYYADSVKG

HCDR3 антитела 201с и антитела 201cYD (SEQ ID NO: 3)HCDR3 antibodies 201c and antibodies 201cYD (SEQ ID NO: 3)

AREGGSGSYYNGFDYAREGGSGSYYNGFDY

LCDR1 антитела 201c и антитела 201c НЗВ (SEQ ID NO: 4)LCDR1 antibody 201c and antibody 201c HZV (SEQ ID NO: 4)

RASQSLGNWLARASQSLGNWLA

LCDR1 антитела 201cYD (SEQ ID NO: 5)LCDR1 antibody 201cYD (SEQ ID NO: 5)

RASQSLGNYLARASQSLGNYLA

LCDR2 антитела 201c и антитела 201c НЗВ (SEQ ID NO: 6)LCDR2 antibody 201c and antibody 201c HZV (SEQ ID NO: 6)

YQASTLESYQASTLES

LCDR2 антитела 201cYD (SEQ ID NO: 7)LCDR2 antibody 201cYD (SEQ ID NO: 7)

YDASTLESYDASTLES

LCDR3 антитела 201c, антитела 201cYD и антитела 201c НЗВ (SEQ ID NO: 8)LCDR3 antibodies 201c, antibodies 201cYD and antibodies 201c HZV (SEQ ID NO: 8)

QHYKGSFWTQHYKGSFWT

HCVR антитела 201c и антитела 201cYD (SEQ ID NO: 9)HCVR antibodies 201c and antibodies 201cYD (SEQ ID NO: 9)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGS

GGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYYNGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYYN

GFD YWGQGTL VT VS SGFD YWGQGTL VT VS S

LCVR антитела 201c и антитела 201c НЗВ (SEQ ID NO: 10)LCVR antibody 201c and antibody 201c HZV (SEQ ID NO: 10)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASTLEDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASTLE

SGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIKSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIK

LCVR антитела 201cYD (SEQ ID NO: 11)LCVR antibody 201cYD (SEQ ID NO: 11)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNYLAWYQQKPGKAPKLLIYD ASTLEDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNYLAWYQQKPGKAPKLLIYD ASTLE

Тяжелая цепь антитела 201c и антитела 201cYD (SEQ ID NO: 12)Heavy chain of 201c antibody and 201cYD antibody (SEQ ID NO: 12)

GFD YWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSGFD YWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS

- 11 041243- 11 041243

WNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSD IAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPG

Легкая цепь антитела 201c и антитела 201с НЗВ (SEQ ID NO: 13)Antibody 201c light chain and antibody 201c HZV (SEQ ID NO: 13)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASTLE SGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNWLAWYQQKPGKAPKLLIYQASTLE SGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYQACEVEKTHNKVY

Легкая цепь антитела 201cYD (SEQ ID NO: 14)201cYD antibody light chain (SEQ ID NO: 14)

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNYLAWYQQKPGKAPKLLIYD ASTLE SGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSLGNYLAWYQQKPGKAPKLLIYD ASTLE SGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQHYKGSFWTFGQGTKVEIKRTVA APSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQ DECSKDSTYSLSSTLTLSKADYTKHKPVACE

Иллюстративная ДНК для экспрессии тяжелой цепи антитела с SEQ ID NO: 12 (SEQ ID NO: 15) gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacct ttagcagctatcctatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtag cacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacag cctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgagagaggggggctcagggagttattataacggctttgattattgggg ccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttcccgctagcaccctcctccaagagcacctc tgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctg accagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatc ttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaaccc aaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagtt caactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgt ggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccag cccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggacg agctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatИллюстративная ДНК для экспрессии тяжелой цепи антитела с SEQ ID NO: 12 (SEQ ID NO: 15) gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacct ttagcagctatcctatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtag cacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacag cctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgagagaggggggctcagggagttattataacggctttgattattgggg ccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttcccgctagcaccctcctccaagagcacctc tgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctg accagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagc agcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatc ttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaaccc aaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagtt caactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagta caacagcacgtaccgtgt ggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccag cccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggacg agctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat

- 12 041243 gggcagccggagaacaactacaagaccacgccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagag cctctccctgtctccgggt- 12 041243 gggcagccggagaacaactacaagaccacgccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagag cctctccctgtctccgggt

Иллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела с SEQ ID NO: 13 (SEQ ID NO: 16) gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagagtct tggtaactggttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatcaggcgtctactttagaatctgggg tcccatcaagattcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttatt actgccaacattataaaggttctttttggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtc ttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggcca aagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagca cctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgcИллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела с SEQ ID NO: 13 (SEQ ID NO: 16) gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagagtct tggtaactggttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatcaggcgtctactttagaatctgggg tcccatcaagattcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttatt actgccaacattataaaggttctttttggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtc ttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggcca aagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagca cctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatca gggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc

Иллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела с SEQ ID NO: 14 (SEQ ID NO: 17) gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagagtct tggtaactatttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatgatgcgtctactttagaatctggggt cccatcaagattcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttatta ctgccaacattataaaggttctttttggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtct tcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaa agtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcac ctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcag ggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgcИллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела с SEQ ID NO: 14 (SEQ ID NO: 17) gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagagtct tggtaactatttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctatgatgcgtctactttagaatctggggt cccatcaagattcagcggcagtggatctgggacagagttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttatta ctgccaacattataaaggttctttttggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtct tcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaa agtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcac ctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcag ggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc

HCDR3 антитела 201c H3B (SEQ ID NO: 18)HCDR3 antibody 201c H3B (SEQ ID NO: 18)

AREGGSGSYFNGFDYAREGGSGSYFNGFDY

HCVR антитела 201c H3B (SEQ ID NO: 19)HCVR antibody 201c H3B (SEQ ID NO: 19)

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGS GGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYFNG FDYWGQGTLVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGS GGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYFNG FDYWGQGTLVTVSS

Тяжелая цепь антитела 201c НЗВ (SEQ ID NO: 20)201c antibody heavy chain HZV (SEQ ID NO: 20)

--

Claims

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYPMSWVRQAPGKGLEWVSAISGS GGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGSGSYFNG FDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSW NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPG

Иллюстративная ДНК для экспрессии тяжелой цепи антитела с SEQ ID NO: 20 (SEQ ID NO: 21) gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacct ttagcagctatcctatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtag cacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacag cctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgagagaggggggctcagggagttattttaacggctttgattattggggc cagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttcccgctagcaccctcctccaagagcacctct gggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctga ccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagca gcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatct tgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaaccca aggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttc aactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagta caacagcacgtaccgtgtg gtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagc ccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggacga gctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatg ggcagccggagaacaactacaagaccacgccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtgg acaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagc ctctccctgtctccgggt

N3pGlu Αβ (SEQ ID NO: 22)

[pE]FRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA

B12L antibody heavy chain (SEQ ID NO: 23)

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYDFTRYYINWVRQAPGQGLEWMGWIN PGSGNTKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGITVYWG QGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPK SCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG

Antibody light chain B12L (SEQ ID NO: 24)

DIVMTQTPLSVTPGQPASISCKSSQSLLYSRGKTYLNWLLQKPGQSPQLLIYAV

CLAIM

1. An antibody that binds human N3pGlu Αβ (N3pGlu beta-amyloid) containing a light chain variable region (LCVR) and a heavy chain variable region (HCVR), in which the LCVR contains an LCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 or 5, LCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 or 7 and LCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and in which HCVR contains HCDR1 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, HCDR2 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 and HCDR3 having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3.

- 14 041243

2. An antibody according to claim 1, characterized in that LCDR1 has the amino acid sequence SEQ

ID NO: 4, and LCDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.

3. An antibody according to claim 1, characterized in that LCDR1 has the amino acid sequence SEQ

ID NO: 5, and LCDR2 has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7.

4. An antibody according to any one of claims 1 to 3, characterized in that LCVR has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 or 11, and HCVR has the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9.

5. An antibody according to claim 4, containing an LCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and an HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9.

6. An antibody according to claim 4, containing an LCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11 and an HCVR having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9.

7. An antibody according to any one of claims 1 to 6, comprising a light chain (LC) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or 14 and a heavy chain (HC) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

8. An antibody according to claim 7 containing an LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 and an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

9. An antibody according to claim 7, containing an LC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 and an HC having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

10. A pharmaceutical composition comprising an antibody according to any one of claims 1 to 9 and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients.

^gj) Eurasian Patent Organization, EAPO

Russia, 109012, Moscow, Maly Cherkassky per., 2