EA041109B1

EA041109B1 - METHOD FOR ASSESSING GROWTH HORMONE DEFICIENCY IN HUMANS USING A COMPOSITION CONTAINING MACIMORELIN

Info

Publication number: EA041109B1
Application number: EA202091415
Authority: EA
Inventors: Никола Аммер; Гильберт МЮЛЛЕР; Рихард Заксе; Херберт Зиндерманн
Original assignee: Этерна Центарис ГмбХ
Priority date: 2017-12-19
Filing date: 2018-12-18
Publication date: 2022-09-14

Description

Родственные заявкиRelated Applications

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной патентной заявки США №The present application claims the priority of U.S. Provisional Application No.

62/607866, поданной 19 декабря 2017 г., и предварительной патентной заявки США № 62/609059, поданной 21 декабря 2017 г., содержание которых включено, таким образом, в качестве ссылки во всей полноте для всех целей.62/607866, filed December 19, 2017, and U.S. Provisional Application No. 62/609059, filed December 21, 2017, the contents of which are hereby incorporated by reference in their entirety for all purposes.

Предшествующий изобретению уровень техникиBACKGROUND OF THE INVENTION

Гормон роста (GH) представляет собой основной системный метаболический гормон организма, который регулирует белковый, липидный и углеводный гомеостаз, необходимый для роста, развития и поддержания организма и мышления. GH вырабатывается в передней доле гипофизарной железы при стимуляции гормоном, высвобождающим гормон роста (GHRH), из железы гипоталамуса. GH секретируется из гипофиза пульсирующим способом приблизительно из 6-10 случайных выбросов в течение 24часового периода.Growth Hormone (GH) is the body's main systemic metabolic hormone that regulates protein, lipid and carbohydrate homeostasis necessary for growth, development and maintenance of the body and mind. GH is produced in the anterior pituitary gland when stimulated by growth hormone releasing hormone (GHRH) from the hypothalamic gland. GH is secreted from the pituitary gland in a pulsatile manner in approximately 6-10 random bursts over a 24 hour period.

Дефицит гормона роста (GHD) можно разделить на четыре категории в зависимости от источника дефицита GH: 1) гипофизарный или классический GHD, 2) гипоталамический GHD, 3) функциональный GHD и 4) идиопатический GHD. GHD может стать клинически явным в детстве или у взрослых. Начало GHD у детей характеризуется низким ростом, микропенисом, повышенным содержанием жира, высоким голосом и склонностью к гипогликемии из-за относительно беспрепятственного действия инсулина. Последствия развития GHD у взрослых могут варьировать от неспособности молодых людей достичь максимальной плотности костей и негативного воздействия на мышечную массу тела до сердечнососудистых факторов риска в среднем возрасте и воздействия на качество жизни у пожилых людей. Установлено, что дефицит гормона роста у взрослых (AGHD) приводит к повышенной заболеваемости (метаболический синдром, остеопороз, нарушение мышечной деятельности, нарушение качества жизни) и увеличению частоты сердечно-сосудистых событий, основной причины повышенной смертности, наблюдаемой в этой популяции. Рекомбинантный человеческий гормон роста был одобрен в 1996 г. для лечения AGHD. По оценкам, в США заболеваемость GHD у детей составляет от 1 на 4000 до 1 на 10000 человек. Более 50000 взрослых в США имеют GHD, и каждый год регистрируется 6000 новых случаев, включая детей с GHD, которые переходят во взрослый возраст с GHD (фонд роста человека www. hgfound. org).Growth hormone deficiency (GHD) can be divided into four categories based on the source of the GH deficiency: 1) pituitary or classic GHD, 2) hypothalamic GHD, 3) functional GHD, and 4) idiopathic GHD. GHD may become clinically evident in childhood or in adults. The onset of GHD in children is characterized by short stature, micropenis, increased fat content, high pitched voice, and a tendency to hypoglycemia due to the relatively unimpeded action of insulin. The consequences of developing GHD in adults can range from failure of young people to achieve peak bone density and negative effects on lean body mass to cardiovascular risk factors in middle age and impact on quality of life in older people. Adult growth hormone deficiency (AGHD) has been shown to lead to increased morbidity (metabolic syndrome, osteoporosis, impaired muscle function, impaired quality of life) and an increased incidence of cardiovascular events, the main cause of the increased mortality observed in this population. Recombinant human growth hormone was approved in 1996 for the treatment of AGHD. In the United States, the incidence of GHD in children is estimated to be between 1 in 4,000 and 1 in 10,000. More than 50,000 adults in the US have GHD, and 6,000 new cases are reported each year, including children with GHD who transition into adulthood with GHD (Human Growth Foundation www.hgfound.org).

В соответствии с клиническим руководством Общества эндокринологов 2011 г. [Molitch 2011] и другой опубликованной литературой [Woodhouse 1999; Biller 2000; Attanasio 2002; Hoffman 2004; Bollerslev 2006], терапия гормоном роста для GHD обеспечивает преимущества для роста и развития у детей и для состава тела, физической нагрузки, эндотелиальной функции, воспалительных биомаркеров, минеральной плотности кости и показателей качества жизни. Таким образом, диагностика GHD имеет важное значение.According to the 2011 Society of Endocrinology clinical guidelines [Molitch 2011] and other published literature [Woodhouse 1999; Biller 2000; Attanasio 2002; Hoffman 2004; Bollerslev 2006], growth hormone therapy for GHD provides benefits for growth and development in children and for body composition, exercise, endothelial function, inflammatory biomarkers, bone mineral density, and quality of life measures. Thus, the diagnosis of GHD is essential.

Опубликованное руководство рекомендует оценивать AGHD в зависимости от клинических данных, истории болезни (анамнеза) и использования соответствующего теста стимуляции GH (GHST) для биохимического подтверждения [Yuen 2011; Yuen 2013]. Поскольку GH секретируется пульсирующим образом, случайные измерения уровней GH (т.е. концентрация GH в крови, выраженная, например, в нг/мл) не позволяют достоверно отличить GH-дефицитных индивидуумов от индивидуумов с нормой GH. Таким образом, диагностика AGHD часто зависит от GHST, использующих агенты, которые, как известно, провоцируют высвобождение эндогенного GH выше определенного уровня у здоровых индивидуумов, чтобы определить пиковый уровень GH у индивидуумов, у которых предполагают наличие нарушения. Такие провокационные агенты включают инсулин, используемый в тесте на толерантность к инсулину (ITT), аргинин+GH-высвобождающий гормон (GHRH), только аргинин, клонидин, леводопа и глюкагон в тесте на стимуляцию глюкагона (GST).Published guidelines recommend that AGHD be assessed based on clinical findings, medical history, and the use of an appropriate GH stimulation test (GHST) for biochemical confirmation [Yuen 2011; Yuen 2013]. Because GH is secreted in a pulsatile manner, random measurements of GH levels (ie, blood GH concentration expressed in, for example, ng/mL) do not reliably distinguish between GH-deficient and GH-normal individuals. Thus, the diagnosis of AGHD often depends on GHSTs using agents known to induce endogenous GH release above a certain level in healthy individuals to determine peak GH levels in individuals suspected of having a disorder. Such provocative agents include insulin used in the insulin tolerance test (ITT), arginine+GH-releasing hormone (GHRH), arginine alone, clonidine, levodopa and glucagon in the glucagon stimulation test (GST).

ITT считается золотым стандартом для оценки GHD. Внутривенное введение инсулина применяют для индукции гипогликемии, что в свою очередь приводит к высвобождению гормона роста. Однако этот тест является трудоемким, так как из-за потенциальных рисков, связанных с гипогликемией, требуется интенсивный медицинский мониторинг индивидуума. Часто сообщают об опасных побочных эффектах. Кроме того, ITT противопоказан индивидуумам пожилого возраста и индивидуумам с судорожными расстройствами и ишемической болезнью сердца [Yuen 2011; Yuen 2013]. GHRH плюс аргинин был альтернативой ITT в США до 2008 года, когда Гереф, единственная одобренная форма GHRH в США, была снята с рынка.ITT is considered the gold standard for estimating GHD. Intravenous insulin is used to induce hypoglycemia, which in turn leads to the release of growth hormone. However, this test is time consuming as the potential risks associated with hypoglycemia require intensive medical monitoring of the individual. Dangerous side effects are often reported. In addition, ITT is contraindicated in elderly individuals and individuals with convulsive disorders and coronary heart disease [Yuen 2011; Yuen 2013]. GHRH plus arginine was an alternative to ITT in the US until 2008 when Geref, the only approved form of GHRH in the US, was taken off the market.

GST является альтернативой, применение которой возросло [Molitch 2011; Yuen 2011; Yuen 2013]. Общие побочные эффекты GST включают тошноту, рвоту и головные боли. Кроме того, существуют ограничения по продолжительности теста (3-4 ч) и необходимости внутримышечного введения. Существует реальная неудовлетворенная медицинская потребность в альтернативных тестах, которые являются безопасными и надежными.GST is an alternative whose use has increased [Molitch 2011; Yuen 2011; Yuen 2013]. Common side effects of GST include nausea, vomiting, and headaches. In addition, there are restrictions on the duration of the test (3-4 hours) and the need for intramuscular injection. There is a real unmet medical need for alternative tests that are safe and reliable.

Тест для диагностики GHD на основе мациморелина, перорально-доступного пептидомиметического агониста рецептора грелина с активностью стимулятора секреции гормона роста (GHS), был описан Larsen в WO 2007/093820 А1.A test for diagnosing GHD based on macimorelin, an orally available peptidomimetic ghrelin receptor agonist with growth hormone secretagogue (GHS) activity, has been described by Larsen in WO 2007/093820 A1.

Грелин мощно стимулирует высвобождение GH [Кодзима 1999]. Считается, что GH- 1 041109 высвобождающие эффекты грелина опосредуются специфическими рецепторами, которые, в основном, присутствуют на уровне гипофиза и гипоталамуса [Nogueiras 2006]. В препаратах мембран, содержащих рецептор GHS, полученный из гипоталамуса и гипофиза человека, было продемонстрировано, что мациморелин обладает способностью связываться с рецептором GHS человека, сравнимой с таковой его природного лиганда, грелина [Broglio 2002]. Мациморелин легко всасывается из желудочно-кишечного тракта и, как предполагается, оказывает свое действие так же, как грелин.Ghrelin potently stimulates GH release [Kojima 1999]. The GH- 1 041109 releasing effects of ghrelin are thought to be mediated by specific receptors that are mainly present at the level of the pituitary and hypothalamus [Nogueiras 2006]. In membrane preparations containing the GHS receptor derived from the human hypothalamus and pituitary gland, macimorelin has been shown to have a binding ability to the human GHS receptor comparable to that of its natural ligand, ghrelin [Broglio 2002]. Macimorelin is readily absorbed from the gastrointestinal tract and is expected to act in a manner similar to that of ghrelin.

На основании способности мациморелина вызывать пульсирующее высвобождение GH вскоре после перорального введения у здоровых индивидуумов мациморелин был разработан как пероральное диагностическое средство для дефицита GH у взрослых.Based on the ability of macimorelin to induce a pulsatile release of GH shortly after oral administration in healthy individuals, macimorelin has been developed as an oral diagnostic agent for GH deficiency in adults.

Мациморелин в качестве соединения и его использование при лечении GHD были описаны Martinez et al. в WO 01/96300 A1.Macimorelin as a compound and its use in the treatment of GHD have been described by Martinez et al. in WO 01/96300 A1.

GHST с мациморелином описан Garcia et al. (J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9, в J Clin Endocrinol Metab. 2018, 3083-3093 и постер под названием Validation of Macimorelin As a Diagnostic Test for Adult Growth Hormone Deficiency (AGHD): A Phase 3 Study in Comparison with the Insulin Tolerance test (ITT), представленный на 99-м ежегодном собрании Общества эндокринологов в 2017 г.).GHST with macimorelin is described by Garcia et al. (J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9, in J Clin Endocrinol Metab. 2018, 3083-3093 and poster titled Validation of Macimorelin As a Diagnostic Test for Adult Growth Hormone Deficiency (AGHD): A Phase 3 Study in Comparison with the Insulin Tolerance test (ITT), presented at the 99th annual meeting of the Society of Endocrinologists in 2017).

Сущность изобретенияThe essence of the invention

Настоящее изобретение относится к следующему:The present invention relates to the following:

(1) Способ скрининга in vitro для диагностики GHD с использованием мациморелина, включающий:(1) An in vitro screening method for diagnosing GHD using macimorelin, comprising:

(a) предоставление от одного до трех образцов крови, взятых у индивидуума, в течение 25-95 мин после введения количества мациморелина, эффективного для индуцирования секреции гормона роста;(a) providing one to three blood samples taken from the individual within 25-95 minutes after administration of an amount of macimorelin effective to induce growth hormone secretion;

(b) измерение уровня GH каждого образца крови, предоставленного на этапе (а);(b) measuring the GH level of each blood sample provided in step (a);

(c) сравнение измеренного уровня GH, полученного на этапе (b), с одним пороговым значением;(c) comparing the measured GH level obtained in step (b) with one threshold value;

(d) определение индивидуума, у которого уровень GH ниже, чем указанное одно пороговое значение, в каждом из образцов крови, предоставленных на этапе (а), как имеющего GHD, или определение индивидуума, у которого уровень GH не ниже, чем указанное одно пороговое значение, по меньшей мере в одном из образцов крови, представленных на этапе (а), как не имеющего GHD.(d) identifying an individual whose GH level is lower than said one threshold in each of the blood samples provided in step (a) as having GHD, or determining an individual whose GH level is not lower than said one threshold value in at least one of the blood samples presented in step (a) as having no GHD.

(2) Способ в соответствии с (1), где на этапе (а) предоставляются два-три образца крови.(2) The method according to (1), wherein two to three blood samples are provided in step (a).

(3) Способ в соответствии с (1), где на этапе (а) предоставляются три образца крови.(3) The method according to (1), wherein three blood samples are provided in step (a).

(4) Способ по любому из (1)-(3), где одно пороговое значение составляет 2,8 нг/мл.(4) The method according to any one of (1) to (3), wherein one threshold value is 2.8 ng/ml.

(5) Способ по любому из (1)-(4), где на этапе (а) образцы крови представляют собой образцы сыворотки.(5) The method according to any one of (1) to (4), wherein in step (a), the blood samples are serum samples.

(6) Способ по любому из (1)-(4), где на этапе (а) образцы крови представляют собой образцы плазмы.(6) The method according to any one of (1) to (4), wherein in step (a), the blood samples are plasma samples.

(7) Способ по любому из (1)-(6), где на этапе (а) вводят приблизительно 0,5 мг мациморелина на кг массы тела индивидуума.(7) The method according to any one of (1) to (6), wherein in step (a), approximately 0.5 mg macimorelin per kg body weight of the subject is administered.

(8) Способ по любому из (1)-(7), где на этапе (а) введение мациморелина представляет собой пероральное введение.(8) The method according to any one of (1) to (7), wherein in step (a), the administration of macimorelin is oral administration.

(9) Способ по любому из (1), (4)-(8), где на этапе (а) предоставляется один образец крови, который взят у индивидуума через 60±5 мин после введения мациморелина.(9) The method according to any one of (1), (4) to (8), wherein in step (a) one blood sample is provided, which is taken from the subject 60 ± 5 minutes after administration of macimorelin.

(10) Способ по любому из (1), (2), (4)-(8), где на этапе (а) предоставляются два образца крови, которые взяты у индивидуума через 45±5 мин и через 60±5 мин после введения мациморелина.(10) The method according to any one of (1), (2), (4) to (8), wherein in step (a) two blood samples are provided, which are taken from an individual 45±5 minutes and 60±5 minutes after administration of macimorelin.

(11) Способ по любому из (1), (2), (4)-(8), где на этапе (а) предоставляются два образца крови, которые взяты у индивидуума через 60±5 мин и через 90±5 мин после введения мациморелина.(11) The method according to any one of (1), (2), (4) to (8), wherein in step (a) two blood samples are provided, which are taken from an individual 60±5 minutes and 90±5 minutes after administration of macimorelin.

(12) Способ по любому из (1), (3)-(8), где на этапе (а) предоставляются образцы крови, которые взяты у индивидуума через 45±5 мин, 60±5 мин и 90±5 мин после введения мациморелина.(12) The method according to any one of (1), (3) to (8), wherein in step (a) blood samples are provided that are taken from the subject 45±5 minutes, 60±5 minutes, and 90±5 minutes after administration macimorelin.

(13) Способ по любому из (1)-(12), где на этапе (а) мациморелин вводят в композиции, включающей сахарин.(13) The method according to any one of (1) to (12), wherein in step (a), macimorelin is administered in a composition comprising saccharin.

(14) Способ по любому из (1)-(13), где композиция содержит 3,5% мас./мас. мациморелина, рассчитанного как свободное основание, 93,1% мас./мас. высушенного распылением моногидрата лактозы, 2,0% мас./мас. кросповидона типа А, 0,1% мас./мас. коллоидного диоксида кремния, 1,0% мас./мас. стеарилфумарата натрия и 0,3% мас./мас. дигидрата натриевого сахарина.(14) The method according to any of (1)-(13), where the composition contains 3.5% wt./wt. macimorelin, calculated as a free base, 93.1% wt./wt. spray-dried lactose monohydrate, 2.0% wt./wt. crospovidone type A, 0.1% w/w colloidal silicon dioxide, 1.0% wt./wt. sodium stearyl fumarate and 0.3% wt./wt. sodium saccharin dihydrate.

(15) Способ по любому из (1)-(14), где индивидуумом является взрослый человек.(15) The method of any one of (1) to (14), wherein the subject is an adult.

(16) способ по любому из (1)-(14), где индивидуумом является человеческий ребенок.(16) the method of any one of (1) to (14), wherein the subject is a human child.

(17) Способ по любому из (1)-(14), где индивидуум является не относящимся к человеку млекопитающим.(17) The method of any one of (1) to (14), wherein the subject is a non-human mammal.

(18) Вещество мациморелин для применения в диагностике GHD in vitro, где:(18) The substance macimorelin for use in the in vitro diagnosis of GHD, where:

(а) предоставляют от одного до трех образцов крови, взятых у индивидуума в течение 25-95 мин после введения количества мациморелина, эффективного для индукции секреции гормона роста;(a) providing one to three blood samples taken from the subject within 25-95 minutes after administration of an amount of macimorelin effective to induce growth hormone secretion;

(b) измеряют уровень GH в каждом образце крови, предоставленном на этапе (а);(b) measure the level of GH in each blood sample provided in step (a);

(c) измеренный уровень GH, полученный на этапе (b), сравнивают с одним пороговым значением;(c) the measured GH level obtained in step (b) is compared to one threshold value;

(d) индивидуума, у которого уровень GH ниже, чем указанное одно пороговое значение, в каждом(d) an individual whose GH level is lower than the specified one threshold value in each

- 2 041109 из образцов крови, предоставленных на этапе (а), определяют как имеющего GHD, или индивидуума, уровень GH которого не ниже, чем указанное одно пороговое значение, по меньшей мере, в одном из образцов крови, предоставленных на этапе (а), определяют как не имеющего GHD.- 2 041109 from the blood samples provided in step (a) is determined to have GHD, or an individual whose GH level is not lower than the specified one threshold value in at least one of the blood samples provided in step (a) , defined as having no GHD.

(19) Вещество мациморелин для применения в соответствии с (18), где на этапе (а) предоставляют от двух до трех образцов крови.(19) The macimorelin substance for use according to (18), wherein two to three blood samples are provided in step (a).

(20) Вещество мациморелин для применения в соответствии с (18), где на этапе (а) предоставляют три образца крови.(20) The macimorelin substance for use according to (18), wherein three blood samples are provided in step (a).

(21) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(20), где одно пороговое значение составляет 2,8 нг/мл.(21) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (20), wherein one cut-off value is 2.8 ng/mL.

(22) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(21), где на этапе (а) образцы крови представляют собой образцы сыворотки.(22) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (21), wherein in step (a), the blood samples are serum samples.

(23) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(21), где на этапе (а) образцы крови представляют собой образцы плазмы.(23) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (21), wherein in step (a), the blood samples are plasma samples.

(24) Вещество мациморелин для применения по любому из пп.(18)-(23), где на этапе (а) вводят приблизительно 0,5 мг мациморелина на кг массы тела индивидуума.(24) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (23), wherein in step (a) about 0.5 mg of macimorelin per kg of body weight of the subject is administered.

(25) Вещество мациморелин для применения по любому из пп.(18)-(24), где на этапе (а) введение мациморелина представляет собой пероральное введение.(25) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (24), wherein in step (a), the administration of macimorelin is oral administration.

(26) Вещество мациморелин для применения по любому из пп.(18), (21)-(25), где на этапе (а) предоставляют один образец крови, который взят у индивидуума через 60±5 мин после введения мациморелина.(26) The macimorelin substance for use according to any one of (18), (21) to (25), wherein in step (a) one blood sample is provided, which is taken from the subject 60 ± 5 minutes after the administration of macimorelin.

(27) Вещество мациморелин для применения по любому из (18), (19), (21)-(25), где на этапе (а) предоставляют два образца крови, которые взяты у индивидуума через 45±5 мин и через 60±5 мин после введения мациморелина.(27) The macimorelin substance for use according to any one of (18), (19), (21) to (25), wherein in step (a) two blood samples are provided, which are taken from an individual after 45±5 minutes and after 60± 5 minutes after administration of macimorelin.

(28) Вещество мациморелин для применения по любому из (18), (19), (21)-(25), где на этапе (а) предоставляют два образца крови, которые взяты у индивидуума через 60±5 мин и через 90±5 мин после введения мациморелина.(28) The macimorelin substance for use according to any one of (18), (19), (21)-(25), wherein in step (a) two blood samples are provided, which are taken from an individual after 60 ± 5 minutes and after 90 ± 5 minutes after administration of macimorelin.

(29) Вещество мациморелин для применения по любому из (18), (20)-(25), где на этапе (а) предоставляют образцы крови, которые взяты у индивидуума через 45±5 мин, 60±5 мин и через 90±5 мин после введения мациморелина.(29) The macimorelin substance for use according to any one of (18), (20) to (25), wherein in step (a) blood samples are provided which are taken from an individual at 45±5 minutes, 60±5 minutes, and 90± 5 minutes after administration of macimorelin.

(30) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(29), где на этапе (а) мациморелин вводят в композиции, включающей сахарин.(30) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (29), wherein in step (a), macimorelin is incorporated into a composition comprising saccharin.

(31) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(30), где композиция содержит 3,5% мас./мас. мациморелина, рассчитанного как свободное основание, 93,1% мас./мас. высушенного распылением моногидрата лактозы, 2,0% мас./мас. кросповидона типа А, 0,1% мас./мас. коллоидного диоксида кремния, 1,0% мас./мас. стеарилфумарата натрия и 0,3% мас./мас. натриевого дигидрата сахарина.(31) Substance macimorelin for use according to any of (18)-(30), where the composition contains 3.5% wt./wt. macimorelin, calculated as a free base, 93.1% wt./wt. spray-dried lactose monohydrate, 2.0% wt./wt. crospovidone type A, 0.1% w/w colloidal silicon dioxide, 1.0% wt./wt. sodium stearyl fumarate and 0.3% wt./wt. sodium saccharin dihydrate.

(32) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(31), где индивидуумом является взрослый человек.(32) The substance macimorelin for use according to any one of (18) to (31), wherein the subject is an adult.

(33) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(31), где индивидуумом является человеческий ребенок.(33) The substance macimorelin for use according to any one of (18) to (31), wherein the subject is a human child.

(34) Вещество мациморелин для применения по любому из (18)-(31), где индивидуум является не относящимся к человеку млекопитающим.(34) The macimorelin agent for use according to any one of (18) to (31), wherein the subject is a non-human mammal.

Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретенияPreferred Embodiments of the Present Invention

В частности, настоящее изобретение относится к композиции, содержащей мациморелин и к способу диагностики GHD путем сбора одного, двух или трех образцов у индивидуума в диапазоне от 25 до 95 мин, предпочтительно в диапазоне от 40 до 95 мин, после перорального введения композиции, содержащей мациморелин, и сравнение уровней GH в одном-трех образцах после введения с одним пороговым значением (также известным как точка отсечки). Композиция содержит мациморелин, моногидрат лактозы, кросповидон, диоксид кремния, стеарилфумарат натрия и сахарин.In particular, the present invention relates to a composition containing macimorelin and to a method for diagnosing GHD by collecting one, two or three samples from an individual in the range of 25 to 95 minutes, preferably in the range of 40 to 95 minutes, after oral administration of the composition containing macimorelin , and comparing the levels of GH in one to three samples after injection with one cut-off value (also known as the cut-off point). The composition contains macimorelin, lactose monohydrate, crospovidone, silicon dioxide, sodium stearyl fumarate and saccharin.

В одном из аспектов настоящего изобретения предлагается новый способ определения GHD у индивидуума. Способ включает следующие этапы: (а) пероральное введение индивидууму количества мациморелина, эффективного для индукции секреции гормона роста; и (b) измерение уровня/уровней GH в (i) одном образце крови, взятом у индивидуума через 60±5 мин после этапа (а), или (ii) двух образцах крови, взятых у индивидуума через 45±5 мин после этапа (а) и через 60±5 мин после этапа (а), или (iii) двух образцах крови, взятых у индивидуума, через 60±5 мин после этапа (а) и через 90±5 мин после этапа (а), или (iv) трех образцах крови, взятых у индивидуума через 45±5 мин после этапа (а), через 60±5 мин после этапа (а) и через 90±5 мин после этапа (а). Как правило, способ не включает какие-либо дополнительные этапы, когда у индивидуума берут дополнительный образец крови. То есть по настоящему изобретению не берут, не измеряют и не используют для сравнения ни больше, чем заданное количество образцов после введения, т.е. один, два или три, ни образцы крови перед введением или одновременно с введением.In one aspect of the present invention, a new method for determining GHD in an individual is provided. The method includes the following steps: (a) administering orally to an individual an amount of macimorelin effective to induce growth hormone secretion; and (b) measuring the GH level(s) in (i) one blood sample taken from the individual 60±5 min after step (a), or (ii) two blood samples taken from the individual 45±5 min after step ( a) and 60 ± 5 minutes after step (a), or (iii) two blood samples taken from an individual, 60 ± 5 minutes after step (a) and 90 ± 5 minutes after step (a), or ( iv) three blood samples taken from an individual 45±5 minutes after step (a), 60±5 minutes after step (a), and 90±5 minutes after step (a). Typically, the method does not include any additional steps where an additional blood sample is taken from the individual. That is, according to the present invention, no more than a predetermined number of samples are taken, measured, or used for comparison after administration, i. e. one, two or three, nor blood samples before or simultaneously with administration.

- 3 041109- 3 041109

Способ дополнительно включает эти этапы: (с) уровни GH в одном, двух или трех образцах крови сравнивают с одним пороговым значением; и (d) индивидуума определяют как имеющего GHD (диагностируют GHD), когда все уровни GH в одном, двух или трех образцах крови ниже, чем указанное одно пороговое значение, и как не имеющего GHD, когда, по меньшей мере, один уровень GH в одном, двух или трех образцах крови не ниже указанного одного порогового значения.The method further includes these steps: (c) GH levels in one, two or three blood samples are compared to one threshold value; and (d) a subject is defined as having GHD (diagnosed with GHD) when all GH levels in one, two, or three blood samples are below said one cut-off value, and as not having GHD when at least one GH level in one, two or three blood samples not below the specified one threshold value.

В некоторых вариантах осуществления один, два или три образца крови представляют собой образцы сыворотки. В других вариантах осуществления один, два или три образца крови представляют собой образцы плазмы. Как правило, когда берут два или три образца крови, они относятся к одному типу: например, они представляют собой два образца сыворотки или два образца плазмы.In some embodiments, one, two, or three blood samples are serum samples. In other embodiments, one, two, or three blood samples are plasma samples. Typically, when two or three blood samples are taken, they are of the same type: for example, they are two serum samples or two plasma samples.

В некоторых вариантах осуществления на этапе (а) перерорально вводят приблизительно 0,5 мг мациморелина на кг массы тела.In some embodiments, in step (a), approximately 0.5 mg of macimorelin per kg of body weight is orally administered.

В некоторых вариантах осуществления берут один образец крови у индивидуума через 60±5 мин после этапа (а). В некоторых вариантах осуществления берут два образца урови у индивидуума через 45±5 мин после этапа (а) и через 60±5 мин после этапа (а); или берут у индивидуума два образца крови через 60±5 мин после этапа (а) и через 90±5 мин после этапа (а). В некоторых вариантах осуществления берут три образца крови у индивидуума через 45±5 мин после этапа (а), через 60±5 мин после этапа (а) и через 90±5 мин после этапа (а).In some embodiments, a single blood sample is taken from the individual 60±5 minutes after step (a). In some embodiments, two level samples are taken from the individual 45±5 minutes after step (a) and 60±5 minutes after step (a); or two blood samples are taken from the individual 60±5 minutes after step (a) and 90±5 minutes after step (a). In some embodiments, three blood samples are taken from the individual 45±5 minutes after step (a), 60±5 minutes after step (a), and 90±5 minutes after step (a).

В некоторых вариантах осуществления уровень GH, измеренный в одном образце крови на этапе (b), сравнивают с одним предопределенным пороговым значением, например предопределенное пороговое значение составляет 2,8 нг/мл.In some embodiments, the GH level measured in one blood sample in step (b) is compared to one predetermined threshold, eg, the predetermined threshold is 2.8 ng/mL.

Индивидуума определяют как имеющего GHD, когда уровень GH индивидуума в одном образце крови ниже, чем одно предопределенное пороговое значение, и как не имеющего GHD, когда уровень GH индивидуума в одном образце крови не ниже, чем одно предопределенное пороговое значение.An individual is defined as having GHD when the individual's GH level in one blood sample is lower than one predetermined cut-off value, and as not having GHD when the individual's GH level in one blood sample is not lower than one predetermined cut-off value.

В некоторых вариантах осуществления уровни GH, измеренные в двух образцах крови на этапе (b), сравнивают с одним предопределенным пороговым значением, например, предопределенное пороговое значение составляет 2,8 нг/мл. Индивидуума определяют как имеющего GHD, когда уровни GH индивидуума в обоих образцах крови ниже, чем одно предопределенное пороговое значение, и как не имеющего GHD, когда по меньшей мере один из уровней GH индивидуума в двух образцах крови не ниже, чем одно предопределенное пороговое значение.In some embodiments, the GH levels measured in the two blood samples in step (b) are compared to one predetermined threshold, eg, the predetermined threshold is 2.8 ng/mL. An individual is defined as having GHD when the individual's GH levels in both blood samples are lower than one predetermined threshold, and as not having GHD when at least one of the individual's GH levels in the two blood samples is not lower than one predetermined threshold.

Например, когда уровни GH, измеренные в двух образцах крови на этапе (b), равны 1,6 и 1,7 нг/мл, и эти уровни GH сравнивают с одним пороговым значением 2,8 нг/мл, тогда индивидуума определяют как имеющего GHD, потому что оба уровня GH, измеренные в двух образцах крови на этапе (b), ниже, чем 2,8 нг/мл.For example, when the GH levels measured in the two blood samples in step (b) are 1.6 and 1.7 ng/mL, and these GH levels are compared to a single threshold value of 2.8 ng/mL, then the individual is defined as having GHD because both GH levels measured in the two blood samples in step (b) are lower than 2.8 ng/mL.

В качестве другого примера, когда уровни GH, измеренные в двух образцах крови на этапе (b), равны 2,6 и 3,5 нг/мл, и эти уровни GH сравнивают с одним пороговым значением 2,8 нг/мл, тогда индивидуума определяют, как не имеющего GHD, потому что по меньшей мере один из уровней GH индивидуума (уровень 3,5 нг/мл) в двух образцах крови не ниже 2,8 нг/мл.As another example, when the GH levels measured in the two blood samples in step (b) are 2.6 and 3.5 ng/mL, and these GH levels are compared to a single threshold value of 2.8 ng/mL, then the subject defined as not having GHD because at least one of the individual's GH levels (3.5 ng/mL level) in two blood samples is at least 2.8 ng/mL.

В некоторых вариантах осуществления уровни GH, измеренные в трех образцах крови на этапе (b), сравнивают с одним предопределенным пороговым значением, например, предопределенное пороговое значение составляет 2,8 нг/мл. Индивидуума определяют как имеющего GHD, когда уровни GH индивидуума в трех образцах крови ниже, чем одно предопределенное пороговое значение, и как не имеющего GHD, когда по меньшей мере один из уровней GH индивидуума в трех образцах крови не ниже, чем одно предопределенное пороговое значение.In some embodiments, the GH levels measured in the three blood samples in step (b) are compared to one predetermined threshold, eg, the predetermined threshold is 2.8 ng/mL. An individual is defined as having GHD when the individual's GH levels in the three blood samples are lower than one predetermined threshold, and as not having GHD when at least one of the individual's GH levels in the three blood samples is not lower than one predetermined threshold.

Например, когда уровни GH, измеренные в трех образцах крови на этапе (b), равны 1,1, 1,3 и 1,5 нг/мл, и эти уровни GH сравнивают с одним пороговым значением 2,8 нг/мл, тогда индивидуума определяют как имеющего GHD, поскольку все уровни GH, измеренные в трех образцах крови на этапе (b), ниже чем 2,8 нг/мл.For example, when the GH levels measured in the three blood samples in step (b) are 1.1, 1.3, and 1.5 ng/mL, and these GH levels are compared to a single threshold value of 2.8 ng/mL, then an individual is defined as having GHD because all GH levels measured in the three blood samples in step (b) are lower than 2.8 ng/mL.

В качестве другого примера, когда уровни GH, измеренные в трех образцах крови на этапе (b), равны 2,4, 2,5 и 3,6 нг/мл, и эти уровни GH сравнивают с одним пороговым значением 2,8 нг/мл, тогда индивидуума определяют, как не имеющего GHD, потому что, по меньшей мере, один из уровней GH индивидуума (тот, что составляет 3,6 нг/мл) в трех образцах крови не ниже 2,8 нг/мл.As another example, when the GH levels measured in the three blood samples in step (b) are 2.4, 2.5, and 3.6 ng/mL, and these GH levels are compared to a single threshold value of 2.8 ng/mL ml, then the individual is defined as not having GHD because at least one of the individual's GH levels (that of 3.6 ng/mL) in the three blood samples is at least 2.8 ng/mL.

В некоторых вариантах осуществления на этапе (а) мациморелин вводят в композиции, содержащей сахарин. Например, композиция может содержать 3,5% мациморелина (рассчитывается как свободное основание), 93,1% высушенного распылением моногидрата лактозы, 2,0% кросповидона типа А, 0,1% коллоидного диоксида кремния, 1,0% стеарилфумарата натрия и 0,3% дигидрата натриевого сахарина.In some embodiments, in step (a), macimorelin is administered in a composition containing saccharin. For example, the composition may contain 3.5% macimorelin (calculated as the free base), 93.1% spray-dried lactose monohydrate, 2.0% crospovidone type A, 0.1% colloidal silicon dioxide, 1.0% sodium stearyl fumarate, and 0 3% sodium saccharin dihydrate.

В некоторых вариантах осуществления индивидуум, чей уровень GH тестируют, является взрослым человеком или ребенком. В других случаях индивидуум, чей уровень GH тестируют, является не относящимся к человеку млекопитающим.In some embodiments, the individual whose GH level is being tested is an adult or a child. In other cases, the individual whose GH level is being tested is a non-human mammal.

ОпределенияDefinitions

Как применяют в настоящем документе, индивидуум представляет собой человека или позвоночное животное, особенно животное вида млекопитающих, такое как свинья, собака, кошка, лошадь/осел,As used herein, an individual is a human or a vertebrate, especially a mammalian animal such as a pig, dog, cat, horse/donkey,

- 4 041109 бык/корова, коза/овца, грызун, кролик, лиса и т.д., а также не являющийся человеком примат, такой как шимпанзе, обезьяна и т.п. Индивидуум может быть любого пола (мужчина или женщина) или возраста (несовершеннолетний или взрослый).- 4 041109 bull/cow, goat/sheep, rodent, rabbit, fox, etc., as well as non-human primate such as chimpanzee, monkey, etc. An individual can be of any gender (male or female) or age (juvenile or adult).

Как применяют в настоящем документе, термин эффективное количество относится к количеству данного вещества, которое достаточно, чтобы произвести желаемый эффект. Например, эффективное количество мациморелина для индукции секреции GH у реципиента представляет собой количество соединения, способное достичь заметного увеличения секреции GH при его введении реципиенту. Любое указанное количество мациморелина можно определить путем стандартного тестирования, является ли оно эффективным количеством для стимуляции секреции гормона роста. Как правило, эффективное количество мациморелина находится в диапазоне приблизительно от 0,01, приблизительно 0,02, приблизительно 0,05, приблизительно от 0,10 до приблизительно 0,20 мг на кг массы тела реципиента по нижней границе и приблизительно от 1, приблизительно 2, приблизительно 5, приблизительно 10, приблизительно 20, приблизительно от 25 до приблизительно 50 мг/кг массы тела по верхней границе или в пределах диапазона, определенного любым одним из нижних значений и любым одним из верхних значений, например приблизительно от 0,20 до приблизительно 2 мг/кг массы тела или приблизительно 0,5 мг/кг массы тела.As used herein, the term effective amount refers to the amount of a given substance that is sufficient to produce the desired effect. For example, an effective amount of macimorelin to induce GH secretion in a recipient is the amount of the compound capable of achieving a marked increase in GH secretion when administered to the recipient. Any given amount of macimorelin can be determined by standard testing to see if it is an effective amount to stimulate growth hormone secretion. Typically, an effective amount of macimorelin is in the range of about 0.01, about 0.02, about 0.05, about 0.10 to about 0.20 mg per kg body weight of the recipient at the lower limit, and from about 1, about 2, about 5, about 10, about 20, about 25 to about 50 mg/kg of body weight at the upper limit or within the range defined by any one of the lower values and any one of the upper values, for example, from about 0.20 to approximately 2 mg/kg body weight or approximately 0.5 mg/kg body weight.

Как применяют в настоящем документе, мациморелин относится к пептидомиметическому соединению, действующему как агонист грелинового рецептора со стимуляцией секреции гормона роста (GHS). Его химическая структура и применение при лечении GHD описаны в патенте США № 6861409, WO 01/96300 и WO 2007/093820.As used herein, macimorelin refers to a peptidomimetic compound that acts as a ghrelin receptor agonist to stimulate growth hormone secretion (GHS). Its chemical structure and use in the treatment of GHD are described in US Pat. No. 6,861,409, WO 01/96300 and WO 2007/093820.

Как применяют в настоящем документе, термин образец крови охватывает образец цельной крови, а также фракцию образца цельной крови, такую как образец сыворотки или плазмы. Всякий раз, когда два или более образца крови применяют для тестирования по одной и той же схеме, эти образцы крови относятся к одному и тому же типу: например, если первым образцом является сыворотка, то второй и любые последующие образцы также являются сывороткой.As used herein, the term blood sample encompasses a whole blood sample as well as a fraction of a whole blood sample, such as a serum or plasma sample. Whenever two or more blood samples are used for testing in the same design, these blood samples are of the same type: for example, if the first sample is serum, then the second and any subsequent samples are also serum.

Как применяют в настоящем документе, термин приблизительно обозначает диапазон, охватывающий минус и плюс 10% от референсного значения. Например, приблизительно 10 описывает диапазон от 9 до 11.As used herein, the term approximates a range of minus and plus 10% of the reference value. For example, approximately 10 describes the range from 9 to 11.

Все патенты, патентные заявки и другие публикации, включая номера доступа GeneBank, цитируемые в данной заявке, включены в качестве ссылки в полном объеме для всех целей.All patents, patent applications, and other publications, including GeneBank accession numbers, cited in this application are incorporated by reference in their entirety for all purposes.

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

В основном, образцы собирают у индивидуума, подвергающегося GHST, для определения уровней GH после введения провоцирующего агента, индуцирующего секрецию GH. Количество собираемых образцов и продолжительность теста являются важными параметрами для описания нагрузки пациента во время теста, а также для описания усилий медицинского работника (МР), проводящего тест. Чем меньше количество образцов и/или чем короче продолжительность теста, тем вероятнее будет согласие на проведение такого теста для индивидуума и МР. Это, в частности, верно, когда индивидуумом является ребенок.Basically, samples are collected from an individual undergoing GHST to determine the levels of GH after administration of a provoking agent that induces GH secretion. The number of samples collected and the duration of the test are important parameters for describing the patient's workload during the test, as well as for describing the effort of the health worker (HCW) administering the test. The lower the number of samples and/or the shorter the duration of the test, the more likely the individual and the HR will agree to such a test. This is particularly true when the individual is a child.

Следующая табл. 1 суммирует общее количество собранных образцов крови во время GHST, вводимого путем инъекции, в соответствии с рекомендациями Общества эндокринологов и Американской ассоциации клинических эндокринологов (ААСЕ).Next table. 1 summarizes the total number of blood samples collected during GHST administered by injection, in accordance with the recommendations of the Society of Endocrinologists and the American Association of Clinical Endocrinologists (AACE).

Таблица 1. Общее число собранных образцов крови во время GHST, вводимого путем инъекцииTable 1. Total number of blood samples collected during GHST given by injection

Тест Test Путь введени я Entry way Кем рекомендо вано Recommended by Время для сбора образцов после введения Time to collect samples after administration Колич ество образц ОВ Number of RH samples Время теста Test time Инсулин (ITT) Insulin (ITT) в/в i/v Общество эндокринол огов Society of Endocrinologists -30, 0, 30, 60 и 120 минут^а) -30, 0, 30, 60 and 120 minutes ^a) 5 5 3 часа 3 hours ААСЕ AACE натощак, и через 20, 30, 40, и 60 минут после достижения гипогликемии.^Ь) on an empty stomach, and 20, 30, 40, and 60 minutes after achieving hypoglycemia. ^b) 5 5 3 часа 3 hours Глюкагон (GST) Glucagon (GST) в/м i/m Общество эндокринол огов Society of Endocrinologists 0, 30, 60, 90120150, 180, 210, и 240 мин^а) 0, 30, 60, 90120150, 180, 210, and 240 min ^a) 9 9 4 часа 4 hours ААСЕ AACE 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 и 240 минут^Ь) 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 and 240 minutes ^b) 9 9 4 часа 4 hours Аргинин Arginine в/в i/v Общество эндокринол огов Society of Endocrinologists - - ААСЕ AACE -30, 0, 30, 60, 90, 120, 150 минут^а) -30, 0, 30, 60, 90, 120, 150 minutes ^a) 7 7 3 часа 3 hours GHRH+Ar GHRH+Ar в/в i/v Общество Society 0, 30, 45, 60, 75, 90, 105, и 0, 30, 45, 60, 75, 90, 105, and 7 7 3 часа 3 hours

- 5 041109- 5 041109

g g эндокринол ОГОВ endocrinol OGOV 120 минут^Ь) 120 minutes ^b) AACE AACE -30, 0, 30, 60, 90, 120 и 150 минут^Ь) -30, 0, 30, 60, 90, 120 and 150 minutes ^b) 7 7 3 часа 3 hours а) М. Fleseriu, J Clin Endcrinol Met, 2016, 3888-3921 b) К. Yuen, Endocr Pract, 2016, 1235-1244 a) M. Fleseriu, J Clin Endcrinol Met, 2016, 3888-3921 b) K. Yuen, Endocr Pract, 2016, 1235-1244

Хорошо видно, что для всех GHST, вводимых посредством инъекции, собирают по меньшей мере 5 образцов в течение временного интервала, по меньшей мере 120 мин, включая по меньшей мере один образец до введения дозы, т.е. за 0 мин и/или ранее. Таким образом, можно сделать вывод, что полный профиль уровня GH, включая уровни до введения, является клиническим стандартом.It is clearly seen that for all GHSTs administered by injection, at least 5 samples are collected over a time interval of at least 120 minutes, including at least one pre-dose sample, i. 0 min and/or earlier. Thus, it can be concluded that a complete GH level profile, including pre-administration levels, is the clinical standard.

Этот стандарт действует в течение нескольких лет. В 1998 г. Davies описал ITT со сбором образца крови через 0, 30, 60, 90 и 120 мин. В 2002 г. Gomez описал GST со сбором образцов крови в исходной точке, через 90, 120, 150, 180, 210 и 240 мин. В исследовании, сравнивавшем 6 GHST в 2002 г., Biller собрал 6 образцов крови в течение от -30 до 150 мин (Biller, В. М. K. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87(5), p. 2067-2079).This standard has been in place for several years. In 1998, Davies described ITT with blood sampling at 0, 30, 60, 90, and 120 minutes. In 2002, Gomez described GST with blood sampling at baseline, 90, 120, 150, 180, 210, and 240 minutes. In a study comparing 6 GHSTs in 2002, Biller collected 6 blood samples within -30 to 150 minutes (Biller, B. M. K. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87 (5), pp. 2067-2079).

Следует отметить, что, несмотря на предложения использовать меньшее количество образцов крови (например, Jabbar et al., Scand. J. Clin. Lab. Invest, 2009, 359-64, или Aimaretti et al., Pituitary, 2001, 12934), две основные ассоциации клинических эндокринологов рекомендовали собирать полные профили GH еще в 2016 году (см. табл. 1). Это может быть связано с тяжестью GHST для индивидуума. Большое количество образцов крови предотвратит повторение GHST, в случае ошибки во время отбора проб крови или если определение GH делает недействительным использование образца крови.It should be noted that despite suggestions to use fewer blood samples (e.g., Jabbar et al., Scand. J. Clin. Lab. Invest, 2009, 359-64, or Aimaretti et al., Pituitary, 2001, 12934), two major associations of clinical endocrinologists recommended collecting complete GH profiles as early as 2016 (see Table 1). This may be related to the severity of GHST for the individual. A large number of blood samples will prevent a recurrence of the GHST if an error occurs during blood sampling or if the GH determination invalidates the use of the blood sample.

Тест на основе мациморелина, раскрытый Larsen в WO 2007/093820 А1 и Garcia et al. (J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9, в J Clin Endocrinol Metab. 2018, 3083-3093 и постер, представленный на 99-м ежегодном собрании Эндокринного общества в 2017 г.), пока единственный перорально вводимый GHST.The macimorelin test disclosed by Larsen in WO 2007/093820 A1 and Garcia et al. (J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9, in J Clin Endocrinol Metab. 2018, 3083-3093 and poster presented at the 99th Annual Meeting of the Endocrine Society in 2017) so far the only orally administered GHST.

Пункт формулы 1 в WO 2007/093820 А1 относится к:Claim 1 in WO 2007/093820 A1 refers to:

1. Способу оценки дефицита гормона роста у человека или животного, включающему пероральное введение индивидууму ЕР 1572 [т.е. мациморелина] или ЕР 1573, получение по меньшей мере одного образца после введения от индивидуума, определение уровня гормона роста в образце или образцах и оценка того, является ли уровень гормона роста в образце или образцах индикатором для дефицита гормона роста у индивидуума.1. A method for assessing growth hormone deficiency in a human or animal, comprising oral administration to an individual of EP 1572 [i.e. macimorelin] or EP 1573, obtaining at least one sample after administration from the individual, determining the level of growth hormone in the sample or samples, and assessing whether the level of growth hormone in the sample or samples is an indicator for growth hormone deficiency in the individual.

Далее раскрывается композиция для перорального введения, содержащая мациморелин, моногидрат лактозы, кросповидон, диоксид кремния и стеарилфумарат натрия.Further disclosed is a composition for oral administration containing macimorelin, lactose monohydrate, crospovidone, silicon dioxide and sodium stearyl fumarate.

Упоминается, что количество необходимых образцов составляет по меньшей мере, один образец после введения (п.1) или два, три, четыре или пять образцов (стр. 7, строка 25).It is mentioned that the number of samples required is at least one sample after administration (item 1) or two, three, four or five samples (p. 7, line 25).

Однако помимо таких довольно общих заявлений в WO 2007/093820 А1 ничего не говорится о конкретном количестве образцов или соответствующих моментах времени. Кроме того, нет причин, по которым меньшее количество образцов должно быть достаточным по сравнению с клиническим стандартом полного профиля уровня GH.However, apart from such rather general statements, WO 2007/093820 A1 does not say anything about the specific number of samples or the corresponding time points. In addition, there is no reason why fewer samples should be sufficient compared to the clinical standard for a complete GH level profile.

Одновременно с молчанием по поводу конкретного числа по меньшей мере одного образца после введения WO 2007/093820 А1 описывает выборку полных профилей уровня GH, представленных в примере 1, описывающем GHST на основе мациморелина с одним образцом перед дозой и 11 образцами после дозы в диапазоне от образца перед дозой до образца через 300 мин (с. 16, строка 8), примере 2, описывающем GHST на основе мациморелина с одним образцом перед дозой и 6 образцами после дозы в диапазоне от образца перед дозой до образца через 150 мин (с. 18, строки 5-6) и примере 3, описывающем GHST на основе мациморелина с одним образцом перед дозой и 5 образцами после дозы в диапазоне от образца перед дозой до образца через 120 мин (с. 18, строки 25-28). Пример 3 помечен как Стандартный протокол.While silent on the specific number of at least one sample after administration, WO 2007/093820 A1 describes a selection of the complete GH level profiles presented in Example 1 describing macimorelin-based GHST with one pre-dose sample and 11 post-dose samples ranging from sample pre-dose to 300 min sample (p. 16, line 8), Example 2 describing macimorelin-based GHST with one pre-dose sample and 6 post-dose samples ranging from pre-dose sample to 150 min sample (p. 18, lines 5-6) and Example 3 describing macimorelin-based GHST with one pre-dose sample and 5 post-dose samples ranging from pre-dose sample to 120 min later sample (p. 18, lines 25-28). Example 3 is labeled Standard Protocol.

Следовательно, специалист в данной области сделает вывод, что только полный профиль уровня GH, описанный Larsen, находится в соответствии с клиническим стандартом, известным из уровня техники. Нет никакого руководства и никаких указаний на то, можно ли пропускать образец до введения дозы или подходит ли какой-либо количество образцов меньше пяти, или какой момент времени следует выбрать для сбора по меньшей мере одного образца после введения.Therefore, one skilled in the art will conclude that only the overall GH level profile described by Larsen is in accordance with the clinical standard known in the art. There is no guidance and no indication as to whether a pre-dose sample can be skipped, or if any number of samples less than five is appropriate, or what point in time should be chosen to collect at least one post-dose sample.

В 2013 г. Garcia et al. (J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9) описал GHST на основе мациморелина, измеряющего уровни GH за 15-30 мин до дозирования, непосредственно перед дозированием и через 30, 45, 60, 75, 90, 120 и 150 мин после дозирования. Состав введенного теста не разглашается.In 2013, Garcia et al. (J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9) described macimorelin-based GHST measuring GH levels 15-30 minutes before dosing, immediately before dosing, and 30, 45, 60, 75, 90, 120 and 150 minutes after dosing . The composition of the introduced test was not disclosed.

Характеристики GHST на основе мациморелина, представленные Garcia в 2013, приведены в табл. 2.Characteristics of macimorelin-based GHST presented by Garcia in 2013 are shown in Table. 2.

- 6 041109- 6 041109

Т аблица 2. Проведение GHST с мациморелином, как описано у Garcia 2013Table 2. Administration of GHST with macimorelin as described in Garcia 2013

Чувствител ьность[%] Sensitivity[%] Специфич ность[%] Specificity [%] Примечания Notes #1: пиковый GH из пяти #1: Peak GH of Five Использование одной СР 2,7 Use of one SR 2.7 82 82 92 92 заборов крови blood sampling нг/мл ng/ml #2: пиковый GH из пяти #2: peak GH out of five Использование двух СР, а The use of two SRs, and 86 86 92 92 заборов крови blood sampling именно: СР 6,8 нг/мл для BMI namely: CP 6.8 ng/ml for BMI #3: 45 минут #3: 45 minutes 90 90 85 85 <30 и СР 2,7 нг/мл для BMI >30 <30 and CP 2.7 ng/mL for BMI >30 #4: пик 45 и 60 #4: peak 45 and 60 86 86 90 90 #5: пик 45 и 60 и 90 #5: peak 45 and 60 and 90 86 86 92 92

СР: точка отсечки (также обозначаемая как пороговое значение)CP: cutoff point (also referred to as threshold)

В настоящее время неожиданно было обнаружено, что связанный с гипофизом GHD диагностируется у человека или животного, когда после перорального введения указанному индивидууму композиции, содержащей мациморелин, собирают у указанного индивидуума один, два или три образца в диапазоне от 40 до 95 мин после введения проводятся, определяют уровень (уровни) GH в одном, двух или трех образцах и они оказывается ниже одной пороговой точки, напримерниже 2,8 нг/мл. Состав, содержащий мациморелин, содержит мациморелин, лактозу, кросповидон, диоксид кремния, стеарилфумарат и сахарин.It has now surprisingly been found that pituitary-associated GHD is diagnosed in a human or animal when, following oral administration to said individual of a composition containing macimorelin, one, two, or three samples are collected from said individual within a range of 40 to 95 minutes post-administration. determine the level (levels) of GH in one, two or three samples and they are below one cut-off point, for example below 2.8 ng/ml. The formulation containing macimorelin contains macimorelin, lactose, crospovidone, silicon dioxide, stearyl fumarate and saccharin.

Как правило, тест для диагностики GHD с использованием композиции, содержащей мациморелин (далее обозначаемый как тест с мациморелином), проводится медицинским работником (МР) в медицинских учреждениях, например, в медицинской практике, в клинике или больнице. МР прописывает тест с мациморелином после первоначальной оценки того, что индивидуум демонстрирует факторы риска для GHD, и, следовательно, требует GHST для подтверждения диагноза GHD. Неизвестны противопоказания, которые бы препятствовали применению композиции, содержащей мациморелин, у индивидуума.Typically, a test for diagnosing GHD using a composition containing macimorelin (hereinafter referred to as a test with macimorelin) is performed by a medical professional (HCW) in medical settings, for example, in a medical practice, clinic or hospital. The MR prescribes a macimorelin test after an initial assessment that the individual exhibits risk factors for GHD and therefore requires a GHST to confirm the diagnosis of GHD. There are no known contraindications that would preclude the use of a composition containing macimorelin in an individual.

МР должен убедиться, что индивидуум голодает в течение 6-8 ч до теста на мациморелин. Как правило, МР использует набор для теста с мациморелином, содержащий композицию, включающую мациморелин и представленную в одноразовом контейнере, и готовит раствор 0,5 мг на мл раствора мациморелина в соответствии с инструкциями, включенными в набор. Затем МР определяет индивидуальное количество раствора на основе массы индивидуума, и индивидуум выпивает индивидуальное количество.The MR should ensure that the individual fasts for 6-8 hours prior to testing for macimorelin. Typically, the MR uses a macimorelin test kit containing a composition comprising macimorelin presented in a disposable container and prepares a solution of 0.5 mg per ml of macimorelin solution according to the instructions included in the kit. The MP then determines the individual amount of the solution based on the individual's weight, and the individual drinks the individual amount.

После введения раствора мациморелина индивидуум ожидает от 40 до 95 мин и у индивидуума в течение этого временного интервала собирают один, два или три образца. До введения раствора мациморелина не берут ни одного образца (нет образца до введения дозы). Поскольку тест на мациморелин является безопасным и, в основном, очень хорошо переносится, не ожидается серьезных побочных реакций, исходя из профиля безопасности мациморелина, установленного в ходе клинических исследований. Постоянное медицинское наблюдение не требуется. Могут возникать небольшие или умеренные побочные реакции в виде дисгевзии (4,5%), головокружения, головной боли, усталости (каждая 3,9%), тошноты и голода (каждая 3,2%), диареи, инфекций верхних дыхательных путей (каждая 1,9%), чувства жара, гипергидроза, ринофарингита и синусовой брадикардии (каждая 1,3%).Following administration of the macimorelin solution, the individual waits 40 to 95 minutes and one, two or three samples are collected from the individual during this time interval. No sample is taken prior to administration of macimorelin solution (no pre-dose sample). Since the test for macimorelin is safe and generally very well tolerated, no serious adverse reactions are expected based on the safety profile of macimorelin established in clinical trials. Permanent medical supervision is not required. Mild to moderate adverse reactions may occur in the form of dysgeusia (4.5%), dizziness, headache, fatigue (each 3.9%), nausea and hunger (each 3.2%), diarrhea, upper respiratory infections (each 1.9%), feelings of heat, hyperhidrosis, nasopharyngitis and sinus bradycardia (each 1.3%).

Уровень GH в крови измеряют с помощью подходящего анализа GH, например, с помощью автоматизированного хемилюминесцентного иммунологического анализа.The level of GH in the blood is measured using a suitable GH assay, for example, using an automated chemiluminescent immunoassay.

Выявленный уровень GH, индуцированный мациморелином, оценивают, чтобы диагностировать GHD, сравнивая с одним пороговым значением, например пороговым значением 2,8 нг/мл. Выявленный уровень GH ниже порогового значения указывает на наличие GHD, в то время как уровень GH не ниже порогового значения указывает на отсутствие GHD.The detected GH level induced by macimorelin is assessed to diagnose GHD by comparison with one cut-off value, eg a cut-off value of 2.8 ng/mL. A detected GH level below the threshold indicates the presence of GHD, while a GH level not below the threshold indicates the absence of GHD.

В одном из аспектов изобретения у индивидуума берут один образец после введения, т.е. в течение 40-50 мин после введения, т.е. в течение промежутка времени в 5 мин до и после 45 мин после введения, или, другими словами, в течение 45±5 мин после введения.In one aspect of the invention, a single sample is taken from the subject after administration, i. within 40-50 minutes after administration, i.e. within a period of 5 minutes before and after 45 minutes after administration, or, in other words, within 45±5 minutes after administration.

В одном из аспектов изобретения у индивидуума берут один образец после введения, т.е. в течение 55-65 мин после введения, т.е. в течение промежутка времени в 5 мин до и после 60 мин после введения, или, другими словами, в течение 60±5 мин после введения.In one aspect of the invention, a single sample is taken from the subject after administration, i. within 55-65 minutes after injection, i.e. within a period of 5 minutes before and after 60 minutes after administration, or, in other words, within 60±5 minutes after administration.

В одном из аспектов изобретения у индивидуума берут один образец после введения в течение 8595 мин после введения, т.е. в течение промежутка времени в 5 мин до и после 90 мин после введения, или, другими словами, в течение 90±5 мин после введения.In one aspect of the invention, one sample is taken from the subject after administration within 8595 minutes after administration, i. within a period of 5 minutes before and after 90 minutes after administration, or, in other words, within 90±5 minutes after administration.

В другом аспекте у индивидуума берут два образца после введения в течение от 40 до 65 мин после введения. Предпочтительно первый из двух образцов после введения берут у индивидуума в течение от 40 до 50 мин и второй в течение от 55 до 65 мин после введения, т.е. первый образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 45 минут после введения, или другими словами, в течение 45±5 мин после введения, и второй образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 60 мин после введения, т.е. вIn another aspect, two samples are taken from the subject after administration within 40 to 65 minutes after administration. Preferably, the first of the two samples after administration is taken from the subject within 40 to 50 minutes and the second within 55 to 65 minutes after administration, i. the first sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 45 minutes after administration, or in other words, within 45 ± 5 minutes after administration, and the second sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 60 minutes after administration, i.e. e. V

- 7 041109 течение от 55 до 65 мин после введения, или, другими словами, в течение 60±5 мин после введения.- 7 041109 within 55 to 65 minutes after administration, or, in other words, within 60±5 minutes after administration.

В другом аспекте у индивидуума берут два образца после введения в течение от 55 до 95 мин после введения. Предпочтительно первый из двух образцов после введения берут у индивидуума в течение от 55 до 65 мин и второй в течение от 85 до 95 мин после введения, т.е. первый образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 60 мин после введения или, другими словами, через 60±5 мин после введения, и второй образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 90 мин после введения, т.е. в течение 85-95 мин после введения, или, другими словами, в течение 90±5 мин после введения.In another aspect, two samples are taken from the subject after administration within 55 to 95 minutes after administration. Preferably, the first of the two samples after administration is taken from the subject within 55 to 65 minutes and the second within 85 to 95 minutes after administration, i. the first sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 60 minutes after administration, or in other words, 60 ± 5 minutes after administration, and the second sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 90 minutes after administration, i.e. . within 85-95 minutes after administration, or, in other words, within 90±5 minutes after administration.

В другом аспекте у индивидуума берут три образца после введения в течение от 40 до 95 мин после введения. Предпочтительно первый из трех образцов после введения берут у индивидуума в течение от 40 до 50 мин, второй в течение от 55 до 65 мин и третий в течение от 85 до 95 мин после введения, т.е. первый образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 40 мин после введения, или, другими словами, в течение 40±5 мин после введения; второй образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 60 мин после введения, т.е. в течение 55-65 мин после введения, или, другими словами, в течение 60±5 мин после введения; третий образец берут в промежуток времени в 5 мин до и после 90 мин после введения, т.е. в течение 85-95 мин после введения, или другими словами, в течение 90± 5 мин после введения.In another aspect, three samples are taken from the subject after administration within 40 to 95 minutes after administration. Preferably, the first of the three samples after administration is taken from the subject within 40 to 50 minutes, the second within 55 to 65 minutes, and the third within 85 to 95 minutes after administration, i. the first sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 40 minutes after administration, or, in other words, within 40±5 minutes after administration; the second sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 60 minutes after administration, i.e. within 55-65 minutes after administration, or, in other words, within 60±5 minutes after administration; the third sample is taken at a time interval of 5 minutes before and after 90 minutes after administration, i. within 85-95 minutes after administration, or in other words, within 90 ± 5 minutes after administration.

В еще одном аспекте по изобретению указанный человек или животное, у которого можно диагностировать GHD, может быть либо ребенком, либо взрослым. Примеры для животного включают лошадь, корову, овцу, свинью, козу, кошку или собаку.In yet another aspect of the invention, said human or animal that can be diagnosed with GHD may be either a child or an adult. Examples for an animal include horse, cow, sheep, pig, goat, cat or dog.

В еще одном аспекте по изобретению один указанный образец после введения, который должен быть получен от индивидуума, представляет собой образец крови, образец сыворотки или образец плазмы. Указанные два образца после введения являются двумя образцами крови, например, два образца крови или два образца плазмы, по мере необходимости. Указанные три образца после введения являются тремя образцами крови, например, три образца крови или три образца плазмы, по мере необходимости.In yet another aspect of the invention, said one post-administration sample to be obtained from the subject is a blood sample, a serum sample, or a plasma sample. These two samples after administration are two blood samples, for example, two blood samples or two plasma samples, as needed. These three samples after administration are three blood samples, for example, three blood samples or three plasma samples, as needed.

ПримерыExamples

Пример 1. Композиция для диагностики GHD, содержащая мациморелинExample 1 Composition for diagnosing GHD containing macimorelin

Композиция, содержащая мациморелин, включает следующие ингредиенты, перечисленные в табл. 3.The composition containing macimorelin includes the following ingredients listed in table. 3.

Таблица 3. Композиция стандартной дозыTable 3. Standard dose composition

Композиция Composition Количество компонента Component Quantity Количество в процентах Quantity in percent Мациморелин (содержание=100%) Macimorelin (content=100%) 0,0350 г 0.0350 g 3,50% 3.50% Моногидрат лактозы, высушенный распылением Lactose monohydrate, dried spraying 0,9310 г 0.9310 g 93,10% 93.10% Кросповидон, типа А Crospovidone, type A 0,0200 г 0.0200 g 2,00% 2.00% Коллоидный диоксид кремния colloidal silicon dioxide 0,0010 г 0.0010 g 0,10% 0.10% Стеарилфумарат натрия Sodium fumarate 0,0100 г 0.0100 g 1,00% 1.00% Натриевый сахарин, дигидрат Sodium saccharin, dihydrate 0,0030 г 0.0030 g 0,30% 0.30% Всего Total 1,0000 г 1.0000 g 100,00% 100.00%

Одна стандартная доза состоит из 1000 г композиции, содержащей мациморелин, для приготовления перорального раствора в воде. Как правило, приготовленный раствор содержит 0,5 мг мациморелина на мл раствора.One unit dose consists of 1000 g of a formulation containing macimorelin for oral solution in water. As a rule, the prepared solution contains 0.5 mg of macimorelin per ml of solution.

Откорректированную по массе тела аликвоту восстановленного раствора вводят индивидууму, в результате чего доза составляет 0,5 мг на килограмм массы тела индивидуума.A weight-adjusted aliquot of the reconstituted solution is administered to the individual resulting in a dose of 0.5 mg per kilogram of the individual's body weight.

Указанную стандартную дозу определяют для мациморелина, рассчитанного как свободное основание с содержанием 100%. Массу свободного основания или его эквивалента в указанной стандартной дозе корректируют в зависимости от содержания.The indicated unit dose is based on macimorelin calculated as the free base at 100%. The weight of the free base or its equivalent in the specified unit dose is adjusted depending on the content.

Мациморелин можно включать в указанную стандартную дозу в виде подходящей фармацевтической соли. Примерами подходящих фармацевтических солей являются ацетатная соль и трифторацетатная соль.Macimorelin can be included in the specified unit dose as a suitable pharmaceutical salt. Examples of suitable pharmaceutical salts are the acetate salt and the trifluoroacetate salt.

Указанной стандартной дозой можно заполнять подходящий контейнер для удобства проведения теста GHD. Примерами подходящих контейнеров являются саше или мешочек или контейнеры подходящего размера, изготовленные из стекла или пластика.The indicated unit dose may be filled into a suitable container for the convenience of performing the GHD test. Examples of suitable containers are sachets or pouch, or suitably sized containers made of glass or plastic.

Исходя из стандартной дозы и рекомендуемой дозы 0,5 мг на килограмм массы тела индивидуума, в контейнере могут находиться несколько количеств композиции, содержащей мациморелин.Based on the standard dose and the recommended dose of 0.5 mg per kilogram of body weight of the individual, several amounts of the composition containing macimorelin may be in the container.

Для индивидуума весом до 120 кг контейнер с композицией, включающей мациморелин, может содержать 63,6 мг мациморелина, 1691,8 мг высушенного распылением моногидрата лактозы, 36,6 мг кросповидона типа А, 1,8 мг коллоидного диоксида кремния, 18,2 мг стеарилфумарата натрия, и 5,5 мг дигидрата натриевого сахарина. При растворении в 120 мл воды 1 мл дает 0,5 мг мациморелина.For an individual weighing up to 120 kg, a container with a composition comprising macimorelin may contain 63.6 mg macimorelin, 1691.8 mg spray-dried lactose monohydrate, 36.6 mg crospovidone type A, 1.8 mg colloidal silicon dioxide, 18.2 mg sodium stearyl fumarate, and 5.5 mg sodium saccharin dihydrate. When dissolved in 120 ml of water, 1 ml gives 0.5 mg of macimorelin.

При необходимости контейнер может быть заполнен небольшим количеством композиции, содержащей мациморелин, в дополнение к указанной стандартной дозе (переполнение). Такое переполнение гарантирует, что концентрация раствора мациморелина составляет 0,5 мг/мл, несмотря на небольшоеIf necessary, the container can be filled with a small amount of the composition containing macimorelin, in addition to the indicated standard dose (overflow). This overflow ensures that the concentration of the macimorelin solution is 0.5 mg/ml, despite the small

- 8 041109 количество композиции, остающейся в контейнере, например, из-за эффектов абсорбции. Количество переполнения зависит от типа контейнера и должно определяться опытным путем.- 8 041109 the amount of composition remaining in the container, for example due to absorption effects. The amount of overflow depends on the type of container and should be determined empirically.

Для саше из алюминиевой фольги, ламинированой полиэтиленом, предназначенного для индивидуумов весом до 120 кг, переполнение составляет 3,6 мг.For a polyethylene-laminated aluminum foil sachet intended for individuals weighing up to 120 kg, the overflow is 3.6 mg.

Пример 2. Использование сахарина в композиции, содержащей мациморелин, для маскировки плохого вкусаExample 2 Use of saccharin in a formulation containing macimorelin to mask bad taste

В многоцентровом рандомизированном двухстороннем перекрестном исследовании 100 пациентов с подтвержденным AGHD получили GHRH+L-Arg и мациморелин в качестве GHST для определения диагностической эффективности мациморелина для AGHD.In a multicenter, randomized, two-way crossover study, 100 patients with confirmed AGHD received GHRH+L-Arg and macimorelin as GHST to determine the diagnostic performance of macimorelin for AGHD.

Это исследование проводили в двух частях. В первой части использовали композицию, содержащую мациморелин и описанную в примере 1, но без сахарина, и 12 из 52 (21%) индивидуумов сообщили о легком или умеренно неприятном вкусе.This study was carried out in two parts. The first part used the formulation containing macimorelin as described in Example 1, but without saccharin, and 12 out of 52 (21%) individuals reported a mild to moderately unpleasant taste.

Во время остановки исследования было обнаружено, что сахарин является подходящим средством, маскирующим вкус, хотя горький вкус еще не был полностью замаскирован. Во второй части исследования использовали композицию, содержащую мациморелин и описанную в примере 1 (с сахарином), и только 1 из 48 (2%) испытуемых сообщили о слабоинтенсивном плохом вкусе.At the time the study was stopped, saccharin was found to be a suitable taste-masking agent, although the bitter taste had not yet been fully masked. In the second part of the study, the formulation containing macimorelin as described in Example 1 (with saccharin) was used and only 1 of 48 (2%) subjects reported mild bad taste.

Пример 3. Сравнение проведения диагностики с мациморелином и с ITT для диагностики AGHDExample 3 Comparison of macimorelin and ITT diagnostic performance for the diagnosis of AGHD

В многоцентровом, открытом, рандомизированном, двухстороннем перекрестном клиническом испытании 157 пациентов получили по меньшей мере одну дозу мациморелина (с использованием композиции, содержащей мациморелин, как описано в примере 1) или ITT и были включены в набор данных по безопасности. Из них 139 индивидуумов с валидированным тестом на мациморелин и валидированным ITT были включены в набор данных по эффективности, распределены по группам высокой (Группа А, N=38), средней (Группа В, N=37) и низкой (Группа С, N=39) вероятности AGHD и группе здоровых, подобранных контролей (группа D, N=25).In a multicenter, open, randomized, two-way crossover clinical trial, 157 patients received at least one dose of macimorelin (using a formulation containing macimorelin as described in Example 1) or ITT and were included in the safety data set. Of these, 139 individuals with validated macimorelin and validated ITT were included in the efficacy data set, classified into high (Group A, N=38), moderate (Group B, N=37), and low (Group C, N= 39) probabilities of AGHD and healthy, matched controls (Group D, N=25).

Сбор образцов кровиCollection of blood samples

Образцы крови собираю до введения и через 30, 45, 60 и 90 мин после введения мациморелина и до введения и через 15, 30, 45, 60, 90 и 120 мин после введения инсулина индивидуумам из набора данных по эффективности, и определяли уровни GH для всех образцов.Blood samples were collected before administration and 30, 45, 60 and 90 minutes after administration of macimorelin and before administration and 15, 30, 45, 60, 90 and 120 minutes after administration of insulin to individuals from the efficacy data set, and GH levels were determined for all samples.

Протокол исследования предусматривал интервал времени в 5 мин для каждого из перечисленных моментов времени, что означает, что образец крови, собранный, например, в течение 25-35 мин после введения агента, провоцирующего GH, был достоверно собран в момент времени 30 мин.The study protocol provided for a time interval of 5 min for each of the listed time points, which means that a blood sample collected, for example, within 25-35 min after administration of the GH provoking agent was reliably collected at the 30 min time point.

Распределение собранных образцов крови по моментам времени после введения мациморелина показано в табл. 4 и фиг. 1-4 ниже.The distribution of the collected blood samples by time points after the administration of macimorelin is shown in table. 4 and FIG. 1-4 below.

Таблица 4. Краткий обзор статистических данных распределения по времени после введения мациморелинаTable 4 Summary of time distribution statistics after macimorelin administration

Временная точка Time point N N Среднее Average Стандартное отклонение Standard deviation Медиана Median Минимум Minimum Максимум Maximum 30 минут 30 minutes 139 139 30,122 30.122 1,17 1.17 30 thirty 25 25 35 35 45 минут 45 minutes 139 139 45,122 45.122 1,113 1.113 45 45 40 40 50 50 60 минут 60 minutes 138 138 61,087 61.087 2,297 2.297 60 60 50 50 70 70 90 минут 90 minutes 138 138 90,978 90.978 6,644 6.644 90 90 85 85 165 165

Совпадение GHST с мациморелином с ITTMatching GHST with macimorelin with ITT

С использованием уровней отсечения GH 2,8 нг/мл для мациморелина и 5,1 нг/мл для ITT, были найдены процентные совпадения GHST с мациморелином и ITT, как указано в табл. 5. Уровень GH ниже 2,8 нг/мл для мациморелина и 5,1 нг/мл для ITT обозначен как положительный тест, предполагающийUsing GH cutoff levels of 2.8 ng/mL for macimorelin and 5.1 ng/mL for ITT, percent matches of GHST with macimorelin and ITT were found, as indicated in Table 1. 5. A GH level below 2.8 ng/mL for macimorelin and 5.1 ng/mL for ITT is designated as a positive test suggesting

AGHD.AGHD.

Таблица 5. Проведение GHST с мациморелином, как описано у Garcia 2013Table 5. Administration of GHST with macimorelin as described in Garcia 2013

Время забора кровиBlood sampling time

Анализ основного исследования Совпадение между МАС и INTT (mITT, N=139) точка отсечки GH для МАС: 2,8 нг/мл точка отсечки GH для ITT: 5,1 нг/мл Analysis of the main study Coincidence between MAC and INTT (mITT, N=139) GH cut-off point for MAC: 2.8 ng/ml GH cut-off point for ITT: 5.1 ng/ml Анализ ROC для МАС (Группы A+D; N=38+25) ROC analysis for MAC (Groups A+D; N=38+25) Совпадени е Coincidence Совпаден ие Coincidence Совпаден ие в Match in Чувствите льность Sensitivity Специфичн ость Specificity

- 9 041109- 9 041109

отрицатель ных результато в negative results in положите льных результат ОВ put flax result OV целом in general (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) 0, 30, 45, 60, 90 минут (пиковый уровень) 0, 30, 45, 60, 90 minutes (peak) 95,38 95.38 74,32 74.32 84,17 84.17 86,84 86.84 96,00 96.00 Перед дозированием (0 мин) Before dosing (0 min) 13,85 13.85 98,65 98.65 58,99 58.99 86,84 86.84 96,00 96.00 30 мин 30 min 73,85 73.85 82,43 82.43 78,42 78.42 92,11 92.11 80,00 80.00 45 мин 45 min 86,15 86.15 78,38 78.38 82,01 82.01 89,47 89.47 92,00 92.00 45 и 60 мин (пиковый уровень) 45 and 60 min (peak level) 95,38 95.38 75,68 75.68 84,89 84.89 86,84 86.84 96,00 96.00 60 мин 60 min 95,31 95.31 81,08 81.08 87,68 87.68 92,11 92.11 96,00 96.00 60 и 90 мин (пиковый уровень) 60 and 90 min (peak) 95,38 95.38 79,73 79.73 87,05 87.05 97,37 97.37 88,00 88.00 90 мин 90 min 84,62 84.62 87,84 87.84 86,33 86.33 97,37 97.37 88,00 88.00 45, 60 и 90 мин (пиковый уровень) 45, 60 and 90 min (peak) 95,38 95.38 74,32 74.32 84,17 84.17 86,84 86.84 96,00 96.00

При оценке образцов крови, взятых через 0, 30, 45, 60 и 90 мин после введения мациморелина, использовали самый высокий (пиковый) уровень GH, определенный в эти мациморелиновых образцах, и сравнивали с самым высоким уровнем GH, определенным для всех образцов ITT. Выявлено, что 95,38% отрицательных результатов теста с мациморелином соответствуют отрицательным результатам теста ITT. Аналогично, 74,32% положительных результатов теста с мациморелином совпали с положительными результатами теста ITT, в результате чего общее соответствие GHST с мациморелином и ITT составило 84,17% (см. строку 0, 30, 45, 60 и 90 мин (пиковый уровень)).When evaluating blood samples taken at 0, 30, 45, 60 and 90 min after macimorelin administration, the highest (peak) GH level determined in these macimorelin samples was used and compared with the highest GH level determined for all ITT samples. 95.38% of negative macimorelin test results were found to be consistent with negative ITT test results. Similarly, 74.32% of positive macimorelin test results matched positive ITT test results, resulting in an overall GHST compliance with macimorelin and ITT of 84.17% (see row 0, 30, 45, 60, and 90 min (peak level). )).

При взятии только уровня гормона роста для образца с мациморелином в 45 мин для сравнения с самым высоким уровнем гормона роста, определенным для всех образцов ITT, соответствие отрицательных результатов составляет 86,15%, соответствие положительных результатов составляет 78,38%, а общее соответствие составляет 82,01% между GHST с мациморелином и ITT (см. строку 45 мин).When taking only the growth hormone level for the macimorelin sample at 45 min for comparison with the highest growth hormone level determined for all ITT samples, the negative agreement is 86.15%, the positive agreement is 78.38%, and the overall agreement is 82.01% between GHST with macimorelin and ITT (see line 45 min).

При взятии самого высокого (пикового) уровня GH для мациморелина в промежуток времени 45 и 60 мин для сравнения с самым высоким уровнем GH, определенным для всех образцов ITT, соответствие отрицательных результатов составляет 95,38%, соответствие положительных результатов составляет 75,68%, а общее соответствие составляет 84,89% между GHST с мациморелином и ITT (см. строку 45 и 60 мин (пиковый уровень)).When taking the highest (peak) GH level for macimorelin between 45 and 60 minutes to compare with the highest GH level determined for all ITT samples, the negative agreement is 95.38%, the positive agreement is 75.68%, and the overall agreement is 84.89% between GHST with macimorelin and ITT (see row 45 and 60 min (peak level)).

При взятии наивысшего (пикового) уровня GH для мациморелина в промежуток времени 45, 60 и 90 мин для сравнения с самым высоким уровнем GH, определенным для всех образцов ITT, соответствие отрицательных результатов составляет 95,38%, соответствие положительных результатов составляет 74,32%, а общее соответствие составляет 84,17% между GHST с мациморелином и ITT (см. строку 45, 60 и 90 мин (пиковый уровень)).When taking the highest (peak) GH level for macimorelin at 45, 60 and 90 minutes to compare with the highest GH level determined for all ITT samples, the negative agreement is 95.38%, the positive agreement is 74.32% , and the overall agreement is 84.17% between GHST with macimorelin and ITT (see row 45, 60 and 90 min (peak level)).

Процент соотвествия отрицательных результатов (то есть, отрицательный диагноз GHD с мациморелином, соответствующий отрицательному диагнозу GHD с ITT) считается более важным по сравнению с процентом соответствия положительных результатов, потому что следует избегать длительного лечения гормоном роста на основе ложноположительного результата GHST у индивидуума, который не нуждается в таком лечении. Тем не менее, также ожидается высокий процент соответствия положительных результатов. Однако критерии для соответствия положительных результатов могут быть менее строгими, так как МР будет основывать диагноз на общей клинической картине, которая складывается из медицинского осмотра, истории болезни (анамнеза), клинических симптомов, сопутствующих факторов риска и лабораторных параметром пациента, а не только из GHST.The percentage of concordance of negative results (i.e., a negative GHD diagnosis with macimorelin corresponding to a negative diagnosis of GHD with ITT) is considered more important than the percentage of concordance of positive results, because long-term treatment with growth hormone based on a false positive GHST result in an individual who does not needs such treatment. However, a high compliance rate of positive results is also expected. However, the criteria for eligibility for positive results may be less stringent, as the MR will base the diagnosis on the overall clinical picture, which is made up of the physical examination, medical history (anamnesis), clinical symptoms, comorbid risk factors, and laboratory parameters of the patient, and not just the GHST. .

Пиковый ответ гормона роста в GHST с мациморелином и ITTPeak Growth Hormone Response in GHST with Macimorelin and ITT

Блочная диаграмма на фиг. 5 обобщает по группам вероятности AGHD пиковые концентрации гормона роста, достигнутые в GHST с мациморелином и с ITT. Очевидно, что более высокие пиковые уровни GH в GHST с мациморелином, по сравнению с ITT, последовательно наблюдаются во всех группах исследования. Кроме того, данные показывают, что пиковые уровни GH были обратно связаны с вероятностью наличия AGHD, т.е. у индивидуумов, которым назначена средняя вероятностью (группа В), были более низкие уровни GH, чем у индивидуумов с низкой вероятностью (группа С).The block diagram in FIG. Table 5 summarizes, by probability group, AGHD peak growth hormone concentrations achieved in GHST with macimorelin and with ITT. It appears that higher peak GH levels in GHST with macimorelin, compared to ITT, are consistently seen across all study arms. In addition, the data show that peak GH levels were inversely related to the likelihood of having AGHD, i.e. individuals assigned a medium probability (group B) had lower GH levels than those assigned a low probability (group C).

Воспроизводимость GHST с мациморелиномReproducibility of GHST with macimorelin

Для оценки воспроизводимости GHST с мациморелином, 33 индивидуумам с достоверным первым тестом с мациморелином (основное исследование) проводили второй тест с мациморелином (продление исследования на воспроизводимость). Результат второго теста с мациморелином соответствовал результату первого теста у 94%, т.е. у 31 из 33 индивидуумов результаты теста ниже или выше точки отсечки были воспроизводимы (фиг. 6).To assess the reproducibility of GHST with macimorelin, 33 individuals with a valid first macimorelin test (main study) underwent a second macimorelin test (an extension of the reproducibility study). The result of the second test with macimorelin matched the result of the first test in 94%, i.e. in 31 of 33 individuals, test results below or above the cutoff point were reproducible (FIG. 6).

Распространенные нежелательные реакции после введения мациморелинаCommon adverse reactions following macimorelin administration

Какие-либо нежелательные явления, возникающие при тесте (ТЕАЕ), были зарегистрированы у 39 (25,3%) из 154 индивидуумов из набора безопасности после GHST с мациморелином и у 151 (96,2%) изAny test-emergent adverse events (TEAE) were reported in 39 (25.3%) of the 154 individuals in the macimorelin GHST safety kit and in 151 (96.2%) of the

- 10 041109- 10 041109

157 индивидуумов после ITT, соответственно, всего 77 и 761 нежелательных явлений (табл. 6).157 individuals after ITT, respectively, a total of 77 and 761 adverse events (Table 6).

Таблица 6.Table 6

нежелательные после введенияunwanted after injection

ТЕАЕ TEAE GHST с мациморелином (N=154/33) GHST with macimorelin (N=154/33) ITT (N=157) ITT (N=157) Частота¹ *А/**ВFrequency ¹ *A/**B %² *А/**В% ² *A/**B N АЕ³ *А/**ВN AE ³ *A/**B Частота¹ Frequency ¹ %² % ² N АЕ³ N AE ³ Всего ТЕАЕ Total TEAE 39/6 39/6 25,3/17,6 25.3/17.6 77/9 77/9 151 151 96,2 96.2 761 761 Всего ТЕАЕ (вероятно или возможно связанных) Total TEAE (probably or possibly related) 22/4 22/4 14,3/11,8 14.3/11.8 37/5 37/5 149 149 94,9 94.9 710 710 Любое тяжелое АЕ, возникающее при тесте Any severe AE occurring during the test 1/0 1/0 0,6/0 0.6/0 1/0 1/0 11 eleven 7 7 25 25 количество индивидуумов с любым ТЕАЕ, каждый индивидуум был засчитан только один раз в каждой категории, : количество индивидуумов с любым АЕ/количество всех индивидуумов, ³: количество всех АЕ, *А: Все индивидуумы, по меньшей мере, с одним GHST с мациморелином; ** В: воспроизводимость GHST с мациморелиномnumber of individuals with any TEAE, each individual was counted only once in each category, : number of individuals with any AE/number of all individuals, ³ : number of all AEs, *A: All individuals with at least one GHST with macimorelin; ** B: GHST reproducibility with macimorelin

Тяжелые ТЕАЕ после ГГТ включены в порядке убывания частоты: 5 (3,2%) индивидуумов, каждый с сонливостью, гипергидрозом; 4 (2,5%) с астенией; 3 (1,9%) с голодом; 2 (1,3%) с нервозностью и 1 (0,6%) с тремором. ТЕАЕ после GHST с мациморелином имели легкую или умеренную интенсивность: дисгевзия (4,5%), головокружение, головная боль, усталость (каждый 3,9%), тошнота, голод (каждый 3,2%), диарея, инфекции верхних дыхательных путей (каждый 1,9%), чувство жара, гипергидроз, ринофарингит и синусовая брадикардия (каждый 1,3%).Severe TEAE after HHT are included in descending order of frequency: 5 (3.2%) individuals, each with drowsiness, hyperhidrosis; 4 (2.5%) with asthenia; 3 (1.9%) with hunger; 2 (1.3%) with nervousness and 1 (0.6%) with tremor. TEAE after GHST with macimorelin had mild to moderate intensity: dysgeusia (4.5%), dizziness, headache, fatigue (each 3.9%), nausea, hunger (each 3.2%), diarrhea, upper respiratory infections (each 1.9%), feeling hot, hyperhidrosis, nasopharyngitis and sinus bradycardia (each 1.3%).

Список ссылокLink List

Molitch 2011 Molitch 2011 Molitch ME, Clemmons DR, Malozowski S, Merriam GR, Vance ML. Evaluation and treatment of adult growth hormone deficiency: an Endocrine Society clinical practice guideline. J Clin Endocrinol Metab 2011;96(6): 1587-609 Molitch ME, Clemmons DR, Malozowski S, Merriam GR, Vance ML. Evaluation and treatment of adult growth hormone deficiency: an Endocrine Society clinical practice guideline. J Clin Endocrinol Metab 2011;96(6): 1587-609 Woodhouse 1999 Woodhouse 1999 Woodhouse LJ, Asa SL, Thomas SG, Ezzat S. Measures of submaximal aerobic performance evaluate and predict functional response to growth hormone (GH) treatment in GH-deficient adults. J Clin Endocrinol Metab 1999;84:4570-7 Woodhouse LJ, Asa SL, Thomas SG, Ezzat S. Measures of submaximal aerobic performance evaluate and predict functional response to growth hormone (GH) treatment in GH-deficient adults. J Clin Endocrinol Metab 1999;84:4570-7 Biller 2000 Biller 2000 Biller BM, Sesmilo G, Baum HB, Hayden D, Schoenfeld D, Klibanski A. Withdrawal of long-term physiological growth hormone (GH) Biller BM, Sesmilo G, Baum HB, Hayden D, Schoenfeld D, Klibanski A. Withdrawal of long-term physiological growth hormone (GH)

- 11 041109- 11 041109

administration: differential effects on bone density and body composition in men with adult-onset GH deficiency. J Clin Endocrinol Metab 2000;85:970-6 administration: differential effects on bone density and body composition in men with adult-onset GH deficiency. J Clin Endocrinol Metab 2000;85:970-6 Attanasio 2002 Attanasio 2002 Attanasio AF, Howell S, Bates PC, Frewer P, Chipman J, Blum WF, Shalet SM. Body composition, IGF-I and IGFBP-3 concentrations as outcome measures in severely GH-deficient (GHD) patients after childhood GH treatment: a comparison with adult onset GHD patients. J Clin Endocrinol Metab 2002;87:3368-72 Attanasio AF, Howell S, Bates PC, Frewer P, Chipman J, Blum WF, Shalet SM. Body composition, IGF-I and IGFBP-3 concentrations as outcome measures in severely GH-deficient (GHD) patients after childhood GH treatment: a comparison with adult onset GHD patients. J Clin Endocrinol Metab 2002;87:3368-72 Hoffman 2004 Hoffman 2004 Hoffman AR, Kuntze JE, Baptista J, Baum HB, Baumann GP, Biller BM, Clark RV, Cook D, Inzucchi SE, Kleinberg D, Klibanski A, Phillips LS, Ridgway EC, Robbins RJ, Schlechte J, Sharma M, Thorner MO, Vance ML. Growth hormone (GH) replacement therapy in adult-onset gh deficiency: effects on body composition in men and women in a doubleblind, randomized, placebo-controlled trial. J Clin Endocrinol Metab 2004;89:2048-56 Hoffman AR, Kuntze JE, Baptista J, Baum HB, Baumann GP, Biller BM, Clark RV, Cook D, Inzucchi SE, Kleinberg D, Klibanski A, Phillips LS, Ridgway EC, Robbins RJ, Schlechte J, Sharma M, Thorner MO , Vance M.L. Growth hormone (GH) replacement therapy in adult-onset gh deficiency: effects on body composition in men and women in a doubleblind, randomized, placebo-controlled trial. J Clin Endocrinol Metab 2004;89:2048-56 Bollerslev 2006 Bollerslev 2006 Bollerslev J, Ueland T, Jorgensen AP, Fougner KJ, Wergeland R, Schreiner T, Burman P. Positive effects of a physiological dose of GH on markers of atherogenesis: a placebo-controlled study in patients with adult-onset GH deficiency. Eur J Endocrinol 2006;154:537-43 Bollerslev J, Ueland T, Jorgensen AP, Fougner KJ, Wergeland R, Schreiner T, Burman P. Positive effects of a physiological dose of GH on markers of atherogenesis: a placebo-controlled study in patients with adult-onset GH deficiency. Eur J Endocrinol 2006;154:537-43 Yuen 2011 Yuen 2011 Yuen КС. Glucagon stimulation testing in assessing for adult growth hormone deficiency: current status and future perspectives. ISRN Endocrinol 2011; article ID 608056 Yuen ks. Glucagon stimulation testing in assessing for adult growth hormone deficiency: current status and future perspectives. ISRN Endocrinol 2011; article ID 608056 Yuen 2013 Yuen 2013 Yuen КС J, Chong LE, Rhoads SA. Evaluation of adult growth hormone deficiency: current and future perspectives. 2013 Feb 28. In: De Groot LJ, Chrousos G, Dungan K, Feingold KR, Grossman A, Hershman JM, Koch C, Korbonits M, McLachlan R, New M, Purnell J, Rebar R, Singer F, Vinik A, editors. Endotext [Internet]. South Dartmouth (MA): MDText.com, Inc.; 2000-. Available from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK278928/ Yuen KC J, Chong LE, Rhoads SA. Evaluation of adult growth hormone deficiency: current and future perspectives. 2013 Feb 28. In: De Groot LJ, Chrousos G, Dungan K, Feingold KR, Grossman A, Hershman JM, Koch C, Korbonits M, McLachlan R, New M, Purnell J, Rebar R, Singer F, Vinik A, editors . Endotext [Internet]. South Dartmouth (MA): MDText.com, Inc.; 2000-. available from http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK278928/ Kojima 1999 1999 Kojima M, Hosoda H, Date Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach. Nature 1999;402(6762):656-60 Kojima M, Hosoda H, Date Y, Nakazato M, Matsuo H, Kangawa K. Ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach. Nature 1999;402(6762):656-60 Nogueiras 2006 Nogueiras 2006 Nogueiras R, Perez-Tilve D, Wortley KE, Tschop M. Growth hormone secretagogue (ghrelin-) receptors-a complex drug target for the Nogueiras R, Perez-Tilve D, Wortley KE, Tschop M. Growth hormone secretagogue (ghrelin-) receptors-a complex drug target for the Broglio 2002 Broglio 2002 regulation of body weight. CNS Neurol Disord Drug Targets 2006;5(3):335-43 Broglio F, Boutignon F, Benso A, Gottero C, Prodam F, Arvat E, Ghe C, Catapano F, Torsello A, Locatelli V, Muccioli G, Boeglin D, Guerlavais V, Fehrentz JA, Martinez J, Ghigo E, Deghenghi R.EP1572: A novel peptido-mimetic GH secretagogue with potent and selective GH-releasing activity in man. J Endocrinol Invest. 2002 Sep;25(8):RC26-8. regulation of body weight. CNS Neurol Disord Drug Targets 2006;5(3):335-43 Broglio F, Boutignon F, Benso A, Gottero C, Prodam F, Arvat E, Ghe C, Catapano F, Torsello A, Locatelli V, Muccioli G, Boeglin D, Guerlavais V, Fehrentz JA, Martinez J, Ghigo E, Deghenghi R .EP1572: A novel peptido-mimetic GH secretagogue with potent and selective GH-releasing activity in man. J Endocrinol Invest. 2002 Sep;25(8):RC26-8. Martinez et al. Martinez et al. патент США № 6861409 US patent No. 6861409 Martinez et al. Martinez et al. WO 01/96300 Al WO 01/96300 Al Постер Garcia et al. Poster by Garcia et al. “Validation of Macimorelin As a Diagnostic Test for Adult Growth Hormone Deficiency (AGHD): A Phase 3 Study in Comparison with the Insulin Tolerance test (ITT)”, presented on the 99th Annual Meeting of the Endocrine Society in 2017 “Validation of Macimorelin As a Diagnostic Test for Adult Growth Hormone Deficiency (AGHD): A Phase 3 Study in Comparison with the Insulin Tolerance test (ITT)”, presented on the 99th Annual Meeting of the Endocrine Society in 2017 Garcia et al. 2013 Garcia et al. 2013 Garcia et al., J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9 Garcia et al., J Clin Endocrinol Metab. 2013, 2422-9 Garcia et al. 2018 Garcia et al. 2018 Garcia et al., J Clin Endocrinol Metab. 2018, 3083-3093 Garcia et al., J Clin Endocrinol Metab. 2018, 3083-3093 Fleseriu 2016 Fleseriu 2016 M. Fleseriu, J Clin Endcrinol Met, 2016, 3888-3921 M. Fleseriu, J Clin Endcrinol Met, 2016, 3888-3921 Yuen 2016 Yuen 2016 K. Yuen, Endocr Pract, 2016, 1235-1244 K. Yuen, Endocr Pract, 2016, 1235-1244 Davies 1998 Davies 1998 Clin Endocrinol (Oxf). 1998, 217-20. Clin Endocrinol (Oxf). 1998, 217-20. Gomez 2002 Gomez 2002 Clinical Endocrinology (2002), 56, 329-334 Clinical Endocrinology (2002), 56, 329-334 Biller 2002 Biller 2002 Biller, Β. Μ. K. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87(5), p 2067- 2079 Biller, B. M. K. et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87(5), p 2067- 2079 Jabbar 2009 Jabbar 2009 Jabbar et al., Scand. J. Clin. Lab. Invest, 2009, 359-64 Jabbar et al., Scand. J.Clin. Lab. Invest, 2009, 359-64 Aimaretti 2001 Aimaretti 2001 Aimaretti et al., Pituitary, 2001, 129-34 Aimaretti et al., Pituitary, 2001, 129-34 Larsen Larsen WO 2007/093820 Al WO 2007/093820 Al

--

Claims

CLAIM

1. An in vitro screening method for diagnosing growth hormone deficiency using macimorelin, comprising:

(a) providing one to three blood samples taken from the individual within 40-95 minutes after administration of an amount of macimorelin effective to induce growth hormone secretion;

(b) measuring the growth hormone level of each blood sample provided in step (a);

(c) comparing the measured level of growth hormone obtained in step (b) with one threshold value, which is 2.8 ng/ml;

(d) determining an individual whose growth hormone level is lower than said one threshold value in each of the blood samples provided in step (a) as having a deficiency of growth hormone, or determining an individual whose growth hormone level is not lower than the specified one, than the specified one threshold value in at least one of the blood samples provided in step (a), as not having growth hormone deficiency.

2. The method of claim 1 wherein in step (a) two to three blood samples are provided.

3. The method of claim 1 wherein in step (a) three blood samples are provided.

4. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein in step (a) the blood samples are serum samples.

5. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein in step (a) the blood samples are plasma samples.

6. The method according to any one of claims 1 to 5, wherein in step (a) approximately 0.5 mg of macimorelin per kg of body weight of the individual is administered.

7. The method according to any one of claims 1 to 6, wherein in step (a) the administration of macimorelin is oral administration.

8. The method according to any one of claims 1, 4-7, wherein in step (a) a single blood sample is provided, which is taken from the individual 60 ± 5 minutes after the administration of macimorelin.

9. The method according to any one of claims 1, 2, 4-7, wherein in step (a) two blood samples are provided, which are taken from the individual 45 ± 5 minutes and 60 ± 5 minutes after administration of macimorelin.

10. The method according to any one of claims 1, 2, 4-7, wherein in step (a) two blood samples are provided, which are taken from the individual 60 ± 5 minutes and 90 ± 5 minutes after administration of macimorelin.

11. The method according to any one of claims 1, 3-7, wherein in step (a) three blood samples are provided that are taken from the individual 45 ± 5 minutes, 60 ± 5 minutes and 90 ± 5 minutes after administration of macimorelin.

12. The method according to any one of claims 1 to 11, wherein in step (a) macimorelin is administered in a composition comprising saccharin.

13. The method according to any one of paragraphs.1-12, where the composition contains 3.5% wt./wt. macimorelin, calculated as a free base, 93.1% wt./wt. spray-dried lactose monohydrate, 2.0% wt./wt. crospovidone type A, 0.1% w/w colloidal silicon dioxide, 1.0% wt./wt. sodium stearyl fumarate and 0.3% wt./wt. sodium saccharin dihydrate.

14. The method according to any one of claims 1 to 13, wherein the subject is an adult.

15. The method according to any one of claims 1-13, wherein the subject is a human child.

16. The method of any one of claims 1-13, wherein the subject is a non-human mammal.

17. The use of the substance macimorelin for the diagnosis of growth hormone deficiency in vitro, where:

(a) providing one to three blood samples taken from the subject within 40-95 minutes after administration of an amount of macimorelin effective to induce growth hormone secretion;

(b) measure the level of growth hormone in each blood sample provided in step (a);

(c) the measured level of growth hormone obtained in step (b) is compared to one threshold value, which is 2.8 ng/ml;

(d) an individual whose growth hormone level is lower than the specified one threshold value in each of the blood samples provided in step (a) is determined to be growth hormone deficient, or an individual whose growth hormone level is not lower than the specified one threshold value in at least one of the blood samples provided in step (a) is determined to be non-growth hormone deficient.

18. Use of the macimorelin substance according to claim 17, wherein in step (a) two to three blood samples are provided.

19. Use of the macimorelin substance according to claim 17, wherein in step (a) three blood samples are provided.

20. Use of the macimorelin substance according to any one of claims 17 to 19, wherein in step (a) the blood samples are serum samples.

21. Use of the macimorelin substance according to any one of claims 17 to 19, wherein in step (a) the blood samples are plasma samples.

22. The use of a macimorelin substance according to any one of claims 17 to 21, wherein in step (a) about 0.5 mg of macimorelin per kg of the individual's body weight is administered.

-