EA040749B1 - PYRROLOBENZODIAZEPINE-ANTIBODY CONJUGATES - Google Patents
PYRROLOBENZODIAZEPINE-ANTIBODY CONJUGATES Download PDFInfo
- Publication number
- EA040749B1 EA040749B1 EA202091705 EA040749B1 EA 040749 B1 EA040749 B1 EA 040749B1 EA 202091705 EA202091705 EA 202091705 EA 040749 B1 EA040749 B1 EA 040749B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- ser
- vai
- group
- thr
- leu
- Prior art date
Links
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявкиCross-reference to related applications
Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно GB 1702031.4, поданному 8 февраля 2017 г., GB 1719391.3, поданной 22 ноября 2017 г., GB 1719398.8, поданной 22 ноября 2017 г., и gB 1719393.9, поданной 22 ноября 2017 г.This application claims priority under GB 1702031.4 filed on February 8, 2017, GB 1719391.3 filed on November 22, 2017, GB 1719398.8 filed on November 22, 2017, and gB 1719393.9 filed on November 22, 2017.
Область техникиTechnical field
Настоящее изобретение относится к пирролобензодиазепинам (PBD), содержащим лабильную защитную группу в форме линкера к антителу.The present invention relates to pyrrolobenzodiazepines (PBD) containing a labile protecting group in the form of an antibody linker.
Уровень техникиState of the art
ПирролобензодиазепиныPyrrolobenzodiazepines
Некоторые пирролобензодиазепины (ПБД) обладают способностью распознавать и связываться с конкретными последовательностями ДНК; предпочтительная последовательность представляет собой PuGPu. Первый противоопухолевый антибиотик на основе ПБД, антрамицин, был открыт в 1965 г. (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). Затем сообщалось о ряде природных ПБД и было разработано более 10 путей синтеза различных аналогов (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E., Chem. Rev. 2011 111 (4), 2815-2864). Члены семейства включают аббеймицин (Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), чикамицин (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (патент Японии 58180 487; Thurston, et al., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), мазетрамицин (Kuminoto, et al., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), неотрамицины А и В (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), поротрамицин (Tsunakawa, et al., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), протракарцин (Shimizu, et al., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 9197 (1987)), сибаномицин (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), сибиромицин (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc, 110, 2992-2993 (1988)) и томамицин (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). ПБД имеют общую структуру:Some pyrrolobenzodiazepines (PBBs) have the ability to recognize and bind to specific DNA sequences; the preferred sequence is PuGPu. The first PBB-based antitumor antibiotic, anthramycin, was discovered in 1965 (Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, et al., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). Since then, a number of naturally occurring PBBs have been reported and more than 10 synthetic routes have been developed for various analogs (Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. and Thurston, D.E., Chem. Rev. 2011 111 (4), 2815-2864). Family members include abbeimycin (Hochlowski, et al., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), chicamycin (Konishi, et al., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (Japanese patent 58180 487; Thurston, et al., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, et al., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazethramycin (Kuminoto, et al. ., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neotramycins A and B (Takeuchi, et al., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramycin (Tsunakawa, et al., J . Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcinol (Shimizu, et al., J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 9197 (1987 )), sibanomycin (DC-102) (Hara, et al., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, et al., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromycin (Leber, et al., J. Am. Chem. Soc, 110, 2992-2993 (1988)) and tomycin (Arima, et al., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). PBDs have a common structure:
Они различаются по числу, типу и положению заместителей в обоих своих ароматических кольцах А и пирролокольцах С, а также по степени насыщения кольца С. В кольце В присутствует либо имин (N=C), либо карбиноламин (NH-CH(OH)), либо простой метиловый эфир карбиноламина (NH-CH(OMe)) в положении N10-C11, которое является электрофильным центром, ответственным за алкилирование ДНК. Все из известных природных продуктов имеют ^-конфигурацию в хиральном положении C11a, что обуславливает правостороннюю твист-конформацию при рассмотрении от кольца С к кольцу А. Это придает им подходящую трехмерную форму для изоспиральности с малой бороздкой В-формы ДНК, что приводит к плотному прилеганию в сайте связывания (Kohn, в Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Их способность образовывать аддукт в малой бороздке позволяет им препятствовать процессингу ДНК, поэтому их применяют в качестве противоопухолевых агентов.They differ in the number, type, and position of substituents on both their aromatic A rings and pyrrole C rings, as well as in the degree of saturation of the C ring. Ring B contains either an imine (N=C) or carbinolamine (NH-CH(OH)), or a carbinolamine methyl ether (NH-CH(OMe)) at the N10-C11 position, which is the electrophilic center responsible for DNA alkylation. All of the known natural products have the ^-configuration at the chiral position C11a, which results in a right-handed twist conformation when viewed from the C ring to the A ring. This gives them a suitable three-dimensional shape for the B-form DNA minor groove isospiral, resulting in a snug fit. at the binding site (Kohn, in Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Their ability to form an adduct in the minor groove allows them to interfere with DNA processing, so they are used as antitumor agents.
Одно соединение пирролобензодиазепина описано в работе Gregson et al. (Chem. Commun. 1999, 797-798) как соединение 1 и Gregson et al. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174) как соединение 4а. Это соединение, также известное как SG2000, показано ниже:One Pyrrolobenzodiazepine compound is described by Gregson et al. (Chem. Commun. 1999, 797-798) as Compound 1 and Gregson et al. (J. Med. Chem. 2001, 44, 1161-1174) as Compound 4a. This connection, also known as SG2000, is shown below:
SG2000SG2000
В WO 2007/085930 описано получение димерных соединений ПБД, содержащих линкерные группы для соединения с агентом, связывающим клетки, таким как антитело. Линкер присутствует в мостике, соединяющем мономерные блоки ПБД димера.WO 2007/085930 describes the preparation of dimeric PBB compounds containing linker groups for association with a cell-binding agent such as an antibody. The linker is present in the bridge connecting the monomer blocks of the PBD dimer.
Димерные соединения ПБД, содержащие линкерные группы для соединения с агентом, связывающим клетки, таким как антитело, были описаны в WO 2011/130613 и WO 2011/130616. Линкер в этих соединениях присоединен к центральной части ПБД в положении С2 и обычно расщепляется при действии фермента на линкерную группу. В WO 2011/130598 линкер в этих соединениях присоединен к одному из доступных положений N10 на центральной части ПБД и обычно расщепляется при действии фермента на линкерную группу.Dimeric PBB compounds containing linker groups for connection to a cell-binding agent such as an antibody have been described in WO 2011/130613 and WO 2011/130616. The linker in these compounds is attached to the central part of the PBB at the C2 position and is usually cleaved by the action of the enzyme on the linker group. In WO 2011/130598 the linker in these compounds is attached to one of the available N10 positions on the central part of the PBB and is usually cleaved by the action of the enzyme on the linker group.
- 1 040749- 1 040749
Конъюгаты антитело-лекарственное средствоAntibody drug conjugates
Терапия антителами была разработана для нацеленного (таргетного) лечения пациентов с раком, иммунологическими и ангиогенными нарушениями (Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343357). Применение конъюгатов антитело-лекарственное средство (ADC), т.е. иммуноконъюгатов, для локальной доставки цитотоксических или цитостатических агентов, т.е. лекарственных средств для уничтожения или ингибирования опухолевых клеток в лечении рака, нацеливает доставку фрагмента лекарственного средства к опухолям и внутриклеточное накопление в них, в то время как системное введение этих лекарственных средств неконъюгированной форме может привести к неприемлемым уровням токсичности для нормальных клеток (Xie et al (2006) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun et al (2006) Cancer Res. 66(6):3214-3121; Law et al (2006) Cancer Res. 66(4):2328-2337; Wu et al (2005) Nature Biotech. 23(9): 1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther. Patents 15(9):1087-1103; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Trail et al (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52:328-337; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614).Antibody therapy has been developed for the targeted treatment of patients with cancer, immunological and angiogenic disorders (Carter, P. (2006) Nature Reviews Immunology 6:343357). The use of antibody-drug conjugates (ADCs), i.e. immunoconjugates, for local delivery of cytotoxic or cytostatic agents, i.e. drugs to kill or inhibit tumor cells in cancer treatment, targets delivery of the drug moiety to and intracellular accumulation in tumors, while systemic administration of these drugs in the unconjugated form can lead to unacceptable levels of toxicity to normal cells (Xie et al ( 2006) Expert Opin Biol Ther 6(3):281-291 Kovtun et al (2006) Cancer Res 66(6):3214-3121 Law et al (2006) Cancer Res 66(4) :2328-2337; Wu et al (2005) Nature Biotech 23(9): 1137-1145; Lambert J. (2005) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (2005) Expert Opin. Ther Patents 15(9):1087-1103 Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212 Trail et al (2003) Cancer Immunol Immunother 52:328-337 Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614).
Таким образом, требуется максимальная эффективность при минимальной токсичности. Усилия по разработке и улучшению ADC были сосредоточены на селективности моноклональных антител (МАТ), а также на механизме действия лекарственного средства, присоединении лекарственного средства, соотношении лекарственное средство/антитело (нагрузка) и свойствах высвобождения лекарственного средства (Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-307; Doronina et al (2006) Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson et al (2006) Cancer Res. 66(8):1-8; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852; Jeffrey et al (2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070). Фрагменты лекарственного средства могут оказывать свои цитотоксические и цитостатические эффекты посредством механизмов, включающих связывание тубулина, связывание ДНК, ингибирование протеасомы и/или топоизомеразы. Некоторые цитотоксические лекарственные средства, как правило, неактивны или менее активны, когда они конъюгированы с крупными антителами или белковыми лигандами рецепторов.Thus, maximum efficiency with minimum toxicity is required. Efforts to develop and improve ADCs have focused on monoclonal antibody (MAB) selectivity as well as drug mechanism of action, drug attachment, drug/antibody ratio (load), and drug release properties (Junutula, et al., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249; McDonagh (2006) Protein Eng. Design & Sel. 19 (7): 299-307 Doronina et al (2006) Bioconj Chem 17:114-124 Erickson et al (2006) Cancer Res 66(8):1-8 Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852; Jeffrey et al (2005) J. Med. Chem. 48:1344-1358; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070). Drug moieties may exert their cytotoxic and cytostatic effects through mechanisms including tubulin binding, DNA binding, proteasome and/or topoisomerase inhibition. Some cytotoxic drugs are generally inactive or less active when conjugated to large antibodies or receptor protein ligands.
Авторы настоящего изобретения разработали конкретные конъюгаты димерного ПБД и антитела.The authors of the present invention have developed specific conjugates of dimeric PBB and antibodies.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Согласно первому аспекту настоящего изобретения предложен конъюгат формулы (I):According to a first aspect of the present invention, a conjugate of formula (I) is provided:
Ab-(DL)P (I) в которойAb-(DL) P (I) in which
Ab представляет собой антитело, которое связывается с DLK1;Ab is an antibody that binds to DLK1;
DL представляет собойDL represents
гдеWhere
X выбран из группы, включающей одинарную связь, -CH2- и -С2Н4-;X is selected from the group consisting of a single bond, -CH2- and -C2H4-;
n составляет от 1 до 8;n is from 1 to 8;
m равно 0 или 1;m is 0 or 1;
R7 представляет собой метил или фенил;R 7 is methyl or phenyl;
если между С2 и C3 присутствует двойная связь, R2 выбран группы, состоящей из:if there is a double bond between C2 and C3, R 2 is selected from the group consisting of:
(ia) C5-10 арильной группы, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей: галоген, нитро, циано, простой эфир, карбокси, сложный эфир, C1-7алкил, C3-7гетероциклил и бис-окси-C1-3алкилен;(ia) a C5-10 aryl group optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of: halogen, nitro, cyano, ether, carboxy, ester, C 1-7 alkyl, C 3-7 heterocyclyl, and bis- hydroxy-C 1-3 alkylene;
(ib) C1.5 насыщенного алифатического алкила;(ib) C1. 5 saturated aliphatic alkyl;
- 2 040749 (ic) C3-6 насыщенного циклоалкила;- 2 040749 (ic) C 3-6 saturated cycloalkyl;
(id) , где каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, C1-3 насыщенного алкила,(id) where each of R 21 , R 22 and R 23 is independently selected from H, C 1-3 saturated alkyl,
C2-3αлкенила, C2-3αлкинила и циклопропила, при этом общее число атомов углерода в группе R12 составляет не более 5;C 2-3 α-alkenyl, C 2-3 α-kynyl and cyclopropyl, wherein the total number of carbon atoms in the R 12 group is not more than 5;
(ie) где один из R25a и R25b представляет собой Н, а другой выбран из: фенила, при чем указанный фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила; и ( ie) wherein one of R 25a and R 25b is H and the other is selected from: phenyl, wherein said phenyl is optionally substituted with a group selected from halo, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl; And
(if) , где R24 выбран из: Н; C1-3 насыщенного алкила; С2-3алкенила; С2-3алкинила; цик лопропила; фенила, причем указанный фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила;(if) where R 24 is selected from: H; C 1-3 saturated alkyl; C 2-3 alkenyls; C 2-3 alkynyl; cyclopropyl; phenyl, said phenyl being optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl;
^R2Sa если между С2 и C3 присутствует одинарная связь, R2 представляет собой R26b , где R26a и R26b независимо выбраны из Н, F, C1-4 насыщенного алкила, С2-3алкенила, при этом алкильная и алке нильная группы необязательно замещены группой, выбранной из C1-4 алкиламидо и C1-4 алкилового сложного эфира; или, если один из R26a и R26b представляет собой Н, другой выбран из нитрила и C1-4 алкилового сложного эфира;^ R2Sa if there is a single bond between C2 and C3, R 2 is R 26b where R 26a and R 26b are independently selected from H, F, C 1-4 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, alkyl and alkenyl the groups are optionally substituted with a group selected from C 1-4 alkylamido and C 1-4 alkyl ester; or if one of R 26a and R 26b is H, the other is selected from nitrile and C 1-4 alkyl ester;
если между С2' и C3' присутствует двойная связь, R12 выбран из группы, состоящей из:if there is a double bond between C2' and C3', R 12 is selected from the group consisting of:
(ia) C5-10 арильной группы, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей: галоген, нитро, циано, простой эфир, карбокси, сложный эфир, C1-7алкил, C3-7гетероциклил и бис-окси-C1-3алкилен;(ia) a C 5-10 aryl group optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of: halogen, nitro, cyano, ether, carboxy, ester, C 1-7 alkyl, C 3-7 heterocyclyl, and bis -oxy-C 1-3 alkylene;
(ib) C1-5 насыщенного алифатического алкила;(ib) C 1-5 saturated aliphatic alkyl;
(ic) C3-6 насыщенного циклоалкила;(ic) C 3-6 saturated cycloalkyl;
R33 (id) R , где каждый из R31, R32 и R33 независимо выбран из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3алкенила, C2-3αлкинила и циклопропила, при этом общее число атомов углерода в группе R12 состав-R 33 (id) R , where each of R 31 , R 32 and R 33 is independently selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, C 2-3 αkynyl and cyclopropyl, with the total number of carbon atoms in group R 12 composition-
ляет не более 5;lays no more than 5;
(ie) где один из R35a и R35b представляет собой Н, а другой выбран из: фенила, при чем указанный фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила; и (if) R34, где R24 выбран из: Н; C1-3 насыщенного алкила; С2-3 алкенила; C2-3αлкинила; циклопропила; фенила, причем указанный фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила;(ie) wherein one of R 35a and R 35b is H and the other is selected from: phenyl, wherein said phenyl is optionally substituted with a group selected from halo, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl; and (if) R 34 where R 24 is selected from: H; C 1-3 saturated alkyl; C 2-3 alkenyls; C 2-3 αkynyl; cyclopropyl; phenyl, said phenyl being optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl;
Лур36Э если между С2' и C3' присутствует одинарная связь, R12 представляет собой R36b , где R36a и R36b независимо выбраны из Н, F, C1-4 насыщенного алкила, C2-3алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены группой, выбранной из C1-4 алкиламидо и C1-4 алкилового сложного эфира; или, если один из R36a и R36b представляет собой Н, другой выбран из нитрила и сложного C1-4 алкилового эфира;Lu p36E if a single bond is present between C2' and C3', R 12 is R 36b where R 36a and R 36b are independently selected from H, F, C1-4 saturated alkyl, C2-3 alkenyl, with the alkyl and alkenyl groups optionally substituted a group selected from C1-4 alkylamido and C1-4 alkyl ester; or if one of R 36a and R 36b is H, the other is selected from nitrile and C1-4 alkyl ester;
и р составляет от 1 до 8.and p is from 1 to 8.
Было установлено, что эти конъюгаты проявляют хорошую активность и неожиданную переносимость по сравнению с аналогичными конъюгатами, не содержащими сульфонамидную группу.These conjugates were found to exhibit good activity and surprising tolerance compared to similar conjugates without a sulfonamide group.
Краткое описание чертежейBrief description of the drawings
На фиг. 1 показана цитотоксичность конъюгата в соответствии с первым аспектом настоящего изоIn FIG. 1 shows the cytotoxicity of a conjugate according to the first aspect of this ISO.
- 3 040749 бретения in vitro.- 3 040749 shaving in vitro.
На фиг. 2 показана эффективность конъюгата в соответствии с первым аспектом настоящего изобретения in vivo.In FIG. 2 shows the in vivo performance of the conjugate according to the first aspect of the present invention.
На фиг. 3 показана цитотоксичность конъюгата в соответствии с первым аспектом настоящего изобретения в клетках А204 и Нер3В в двухмерной и трехмерной клеточных культурах in vitro.In FIG. 3 shows the cytotoxicity of a conjugate according to the first aspect of the present invention in A204 and Hep3B cells in 2D and 3D in vitro cell cultures.
На фиг. 4 показана цитотоксичность конъюгата в соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения in vitro.In FIG. 4 shows the in vitro cytotoxicity of the conjugate according to the second aspect of the present invention.
На фиг. 5 показана эффективность конъюгата в соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения in vivo.In FIG. 5 shows the in vivo performance of the conjugate according to the second aspect of the present invention.
На фиг. 6 показана противоопухолевая активность конъюгата в соответствии со вторым аспектом настоящего изобретения в ксенотрансплантатной модели SN12C in vivo.In FIG. 6 shows the antitumor activity of a conjugate according to the second aspect of the present invention in an in vivo SN12C xenograft model.
Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention
Согласно настоящему изобретению предложен димер ПБД с линкером, присоединенным по положению N10 на одном из фрагментов ПБД, конъюгированных с антителом, как определено ниже.The present invention provides a PBB dimer with a linker attached at the N10 position on one of the antibody-conjugated PBB fragments as defined below.
Настоящее изобретение подходит для применения при обеспечении соединения ПБД в предпочтительный сайт в организме субъекта. Конъюгат позволяет высвобождать активное соединение ПБД, которое не сохраняет никакой части линкера. Отсутствует выступ, который может повлиять на реакционную способность соединения ПБД. Таким образом, конъюгат формулы (I) будет высвобождать соединение RelA:The present invention is suitable for use in providing a PBB compound to a preferred site in a subject's body. The conjugate allows the release of the active PBB compound which does not retain any portion of the linker. There is no overhang that could affect the reactivity of the PBB compound. Thus, the conjugate of formula (I) will release the RelA compound:
Указанная связь между димером ПБД и антителом в настоящем изобретении предпочтительно является стабильным вне клеток. Перед транспортировкой или доставкой в клетку конъюгат антителолекарственное средство (ADC) предпочтительно является стабильным и остается интактным, т.е. антитело остается присоединенным к фрагменту лекарственного средства. Линкеры стабильны вне клеткимишени и могут расщепляться с некоторой степенью эффективности внутри клетки. Эффективный линкер будет: (i) поддерживать свойства специфичного связывания антитела; (ii) обеспечивать внутриклеточную доставку конъюгата или фрагмента лекарственного средства; (iii) оставаться стабильными и интактным, т.е. нерасщепленным, до тех пор, пока конъюгат не будет доставлен или транспортирован в свой целевой сайт; и (iv) поддерживать цитотоксический, цитолитический эффект или цитостатический эффект фрагмента лекарственного средства ПБД. Стабильность ADC может быть измерена с помощью стандартных аналитических методик, таких как масс-спектроскопия, ВЭЖХ и методика разделения/анализа ЖХ/МС.Said bond between the PBB dimer and the antibody of the present invention is preferably stable outside of cells. Prior to transport or delivery to a cell, the antibody drug conjugate (ADC) is preferably stable and remains intact, i. the antibody remains attached to the drug moiety. Linkers are stable outside the target cell and can be cleaved with some degree of efficiency inside the cell. An effective linker will: (i) maintain the specific binding properties of the antibody; (ii) provide intracellular delivery of the conjugate or drug moiety; (iii) remain stable and intact, i.e. uncleaved, until the conjugate is delivered or transported to its target site; and (iv) maintain the cytotoxic, cytolytic effect, or cytostatic effect of the PBB drug moiety. The stability of the ADC can be measured using standard analytical techniques such as mass spectroscopy, HPLC, and LC/MS separation/analysis techniques.
Доставка соединений формул RelA достигается в целевом сайте активации конъюгата формулы (I) в результате воздействия фермента, такого как катепсин, на соединяющую группу и, в частности, на дипептидный фрагмент валин-аланин.Delivery of compounds of formulas RelA is achieved at the target site of activation of the conjugate of formula (I) by the action of an enzyme, such as cathepsin, on the connecting group and, in particular, on the valine-alanine dipeptide fragment.
ОпределениеDefinition
Заместители.Deputies.
В настоящем документе выражение необязательно замещенный относится к исходной группе, которая может быть незамещенной или которая может быть замещенной.As used herein, the expression optionally substituted refers to a parent group which may be unsubstituted or which may be substituted.
Если не указано иное, в настоящем документе термин замещенный относится к исходной группе, которая несет один или более заместителей. Термин заместитель используется в настоящем документе в общепринятом смысле и относится к химическому фрагменту, который ковалентно присоединен или, если необходимо, конденсирован с исходной группой. Широкий круг заместителей хорошо известен, и способы их образования и введения в различные исходные группы также хорошо известны.Unless otherwise indicated, as used herein, the term substituted refers to a parent group that carries one or more substituents. The term substituent is used herein in its conventional sense and refers to a chemical moiety that is covalently attached or, if necessary, fused to the parent group. A wide range of substituents is well known, and the methods for their formation and introduction into various starting groups are also well known.
Примеры заместителей более подробно описаны ниже.Substituent examples are described in more detail below.
C1-12 алкил: в настоящем документе термин C1-12 алкил относится к одновалентному фрагменту, полученному удалением атома водорода от атома углерода углеводородного соединения, содержащего от 1 до 12 атомов углерода, которое может быть алифатическим или алициклическим и которое может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). В настоящем документе термин C1-4 алкил относится к одновалентному фрагменту, полученному удалением атома водорода от атома углерода углеводородного соединения, содержащего от 1 до 4 атомов углерода, которое может быть алифатическим или алициклическим и которое может быть насыщенным или ненасыщенным (например, частично ненасыщенным, полностью ненасыщенным). Таким образом, термин алкил включает подклассы алкенил, алкинил, циклоалкил и т.д., обсуждаемые ниже.C 1-12 alkyl: As used herein, the term C 1-12 alkyl refers to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from a carbon atom of a hydrocarbon compound containing from 1 to 12 carbon atoms, which may be aliphatic or alicyclic and which may be saturated or unsaturated (eg, partially unsaturated, completely unsaturated). As used herein, the term C 1-4 alkyl refers to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from a carbon atom of a hydrocarbon compound containing 1 to 4 carbon atoms, which may be aliphatic or alicyclic, and which may be saturated or unsaturated (e.g., partially unsaturated , completely unsaturated). Thus, the term alkyl includes the subclasses alkenyl, alkynyl, cycloalkyl, etc. discussed below.
Примеры насыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метил (C1), этил (C2), пропил (C3), бутил (C4), пентил (C5), гексил (C6) и гептил (С7).Examples of saturated alkyl groups include, but are not limited to, methyl (C 1 ), ethyl (C2), propyl (C 3 ), butyl (C4), pentyl (C5), hexyl (C6) and heptyl (C 7 ).
Примеры насыщенных линейных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, метилExamples of saturated linear alkyl groups include, but are not limited to, methyl
- 4 040749 (C1), этил (C2), н-пропил (C3), н-бутил (C4), н-пентил(амил) (C5), н-гексил (C6) и н-гептил (С7).- 4 040749 (C1), ethyl (C2), n-propyl (C 3 ), n-butyl (C 4 ), n-pentyl(amyl) (C 5 ), n-hexyl (C 6 ) and n-heptyl (C 7 ).
Примеры насыщенных разветвленных алкильных групп включают изопропил (C3), изобутил (С4), втор-бутил (С4), трет-бутил (С4), изопентил (C5) и неопентил (C5).Examples of saturated branched alkyl groups include isopropyl (C3), isobutyl (C 4 ), sec-butyl (C 4 ), tert-butyl (C 4 ), isopentyl (C 5 ) and neopentyl (C 5 ).
С2.12 алкенил: в настоящем документе термин С2.12 алкенил относится к алкильной группе, содержащей одну или более двойных связей углерод-углерод.C2.12 alkenyl: As used herein, the term C2.12 alkenyl refers to an alkyl group containing one or more carbon-carbon double bonds.
Примеры ненасыщенных алкенильных групп включают, но не ограничиваются ими, этенил (винил, -СН=СН2), 1-пропенил (-СН=СН-СН3), 2-пропенил (аллил, -СН-СН=СН2), изопропенил (1-метилвинил, С(СН3)=СН2), бутенил (С4), пентенил (C5) и гексенил (C6).Examples of unsaturated alkenyl groups include, but are not limited to, ethenyl (vinyl, —CH=CH2), 1-propenyl (—CH=CH— CH3 ), 2-propenyl (allyl, —CH—CH= CH2 ), isopropenyl (1-methylvinyl, C(CH 3 )=CH 2 ), butenyl (C 4 ), pentenyl (C 5 ) and hexenyl (C 6 ).
С2_12 алкинил: в настоящем документе термин С2-12 алкинил относится к алкильной группе, содержащей одну или более тройных связей углерод-углерод.C 2 _ 12 alkynyl: As used herein, the term C 2 - 12 alkynyl refers to an alkyl group containing one or more carbon-carbon triple bonds.
Примеры ненасыщенных алкинильных групп включают, но не ограничиваются ими, этинил (С^СН) и 2-пропинил (пропаргил, -СН2-С=СН).Examples of unsaturated alkynyl groups include, but are not limited to, ethynyl (C^CH) and 2-propynyl (propargyl, —CH 2 —C=CH).
C3-12 циклоалкил: в настоящем документе термин C3_12 циклоалкил относится к алкильной группе, которая также представляет собой циклильную группу; т.е. одновалентный фрагмент, полученный удалением атома водорода от атома алициклического кольца циклического углеводородного (карбоциклического) соединения, причем фрагмент содержит от 3 до 7 атомов углерода, включая от 3 до 7 кольцевых атомов.C 3 - 12 cycloalkyl: As used herein, the term C 3 _ 12 cycloalkyl refers to an alkyl group which is also a cyclyl group; those. a monovalent fragment obtained by removing a hydrogen atom from an alicyclic ring atom of a cyclic hydrocarbon (carbocyclic) compound, the fragment having 3 to 7 carbon atoms including 3 to 7 ring atoms.
Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, происходящие из: насыщенных моноциклических углеводородных соединений:Examples of cycloalkyl groups include, but are not limited to, groups derived from: saturated monocyclic hydrocarbon compounds:
циклопропана (C3), циклобутана (С4), циклопентана (C5), циклогексана (C6), циклогептана (С7), метилциклопропана (С4), диметилциклопропана (C5), метилциклобутана (C5), диметилциклобутана (C6), метилциклопентана (C6), диметилциклопентана (С7) и метилциклогексана (С7);cyclopropane (C 3 ), cyclobutane (C 4 ), cyclopentane (C 5 ), cyclohexane (C 6 ), cycloheptane (C 7 ), methylcyclopropane (C 4 ), dimethylcyclopropane (C 5 ), methylcyclobutane (C 5 ), dimethylcyclobutane ( C6), methylcyclopentane (C6), dimethylcyclopentane (C7) and methylcyclohexane (C7);
ненасыщенных моноциклических углеводородных соединений:unsaturated monocyclic hydrocarbon compounds:
циклопропена (C3), циклобутена (С4), циклопентена (C5), циклогексена (C6), метилциклопропена (С4), диметилциклопропена (C5), метилциклобутена (C5), диметилциклобутена (C6), метилциклопентена (C6), диметилциклопентена (С7) и диметилциклогексена (С7);cyclopropene (C3), cyclobutene (C 4 ), cyclopentene (C 5 ), cyclohexene (C6), methylcyclopropene (C 4 ), dimethylcyclopropene (C 5 ), methylcyclobutene (C 5 ), dimethylcyclobutene (C 6 ), methylcyclopentene (C6) , dimethylcyclopentene (C7) and dimethylcyclohexene (C7);
насыщенных полициклических углеводородных соединений:saturated polycyclic hydrocarbon compounds:
норкарана (С7), норпинана (С7), норборнана (С7).norcaran (C 7 ), norpinan (C 7 ), norbornane (C 7 ).
C3_20 гетероциклил: в настоящем документе термин C3_20 гетероциклил относится к одновалентному фрагменту, полученному удалением атома водорода от кольцевого атома гетероциклического соединения, причем фрагмент содержит от 3 до 20 кольцевых атомов, из которых от 1 до 10 представляют собой кольцевые гетероатомы. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 3 до 7 кольцевых атомов, из которых от 1 до 4 представляют собой кольцевые гетероатомы.C 3 _ 20 heterocyclyl: As used herein, the term C 3 _ 20 heterocyclyl refers to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from a ring atom of a heterocyclic compound, the moiety having 3 to 20 ring atoms, of which 1 to 10 are ring heteroatoms . Preferably, each ring contains 3 to 7 ring atoms, of which 1 to 4 are ring heteroatoms.
В этом случае префиксы (например, C3-20, C3-7, C5-6 и т.д.) обозначают количество кольцевых атомов или диапазон количества кольцевых атомов, будь то атомы углерода или гетероатомы. Например, в настоящем документе термин C5-6 гетероциклил относится к гетероциклильной группе, содержащей 5 или 6 кольцевых атомов.In this case, the prefixes (eg, C 3-20 , C 3 - 7 , C5-6 , etc.) indicate the number of ring atoms or the range of the number of ring atoms, whether carbon atoms or heteroatoms. For example, as used herein, the term C 5 - 6 heterocyclyl refers to a heterocyclyl group containing 5 or 6 ring atoms.
Примеры моноциклических гетероциклильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, происходящие из:Examples of monocyclic heterocyclyl groups include, but are not limited to, groups derived from:
N1: азиридина (C3), азетидина (С4), пирролидина (тетрагидропиррола) (C5), пирролина (например, 3пирролина, 2,5-дигидропиррола) (C5), 2Н-пиррола или 3H-пиррола (изопиррола, изоазола) (C5), пиперидина (C6), дигидропиридина (C6), тетрагидропиридина (C6), азепина (С7);N1: aziridine (C 3 ), azetidine (C 4 ), pyrrolidine (tetrahydropyrrole) (C 5 ), pyrroline (e.g. 3pyrroline, 2,5-dihydropyrrole) (C 5 ), 2H-pyrrole or 3H-pyrrole (isopyrrole, isoazole) (C 5 ), piperidine (C 6 ), dihydropyridine (C 6 ), tetrahydropyridine (C 6 ), azepine (C 7 );
О1: оксирана (C3), оксетана (С4), оксолана (тетрагидрофурана) (C5), оксола (дигидрофурана) (C5), оксана (тетрагидропирана) (C6), дигидропирана (C6), пирана (C6), оксепина (С7);O1: oxirane (C3), oxetane (C 4 ), oxolane (tetrahydrofuran) (C 5 ), oxol (dihydrofuran) (C 5 ), oxan (tetrahydropyran) (C6), dihydropyran (C6), pyran (C6), oxepin (C7);
S1: тиирана (C3), тиетана (С4), тиолана (тетрагидротиофена) (C5), тиана (тетрагидротиопирана) (C6), тиепана (С7);S1: thiirane (C3), thietane (C 4 ), thiolane (tetrahydrothiophene) (C 5 ), thiana (tetrahydrothiopyran) (C 6 ), thiepane (C7);
О2: диоксолана (C5), диоксана (C6) и диоксепана (С7);O2: dioxolane (C5), dioxane (C6) and dioxepane (C7);
O3: триоксана (C6);O 3 : trioxane (C 6 );
N2: имидазолидина (C5), пиразолидина (диазолидина) (C5), имидазолина (C5), пиразолина (дигидропиразола) (C5), пиперазина (C6);N2: imidazolidine (C5), pyrazolidine (diazolidine) (C5), imidazoline (C5), pyrazoline (dihydropyrazole) (C 5 ), piperazine (C 6 );
N1O1: тетрагидрооксазола (C5), дигидрооксазола (C5), тетрагидроизоксазола (C5), дигидроизоксазола (C5), морфолина (C6), тетрагидрооксазина (C6), дигидрооксазина (C6), оксазина (C6);N1O1: tetrahydrooxazole (C 5 ), dihydrooxazole (C 5 ), tetrahydroisoxazole (C 5 ), dihydroisoxazole (C 5 ), morpholine (C 6 ), tetrahydrooxazine (C 6 ), dihydrooxazine (C 6 ), oxazine (C 6 );
N1S1: тиазолина (C5), тиазолидина (C5), тиоморфолина (C6);N1S1: thiazoline (C 5 ), thiazolidine (C 5 ), thiomorpholine (C 6 );
N2O1: оксадиазина (C6);N2O1: oxadiazine (C 6 );
O1S1: оксатиола (C5) и оксатиана (тиоксана) (C6);O1S1: oxathiol (C 5 ) and oxatian (thioxane) (C 6 );
N1O1S1: оксатиазина (C6).N1O1S1: oxathiazine (C 6 ).
Примеры замещенных моноциклических гетероциклильных групп включают группы, происходящие из сахаридов, в циклической форме, например, фураноз (C5), такие как арабинофураноза, ликсофураноза, рибофураноза и ксилофураноза, и пираноз (C6), такие как аллопираноза, альтропираноза, глюкопираноза, маннопираноза, гулопираноза, идопираноза, галактопираноза и талопираноза.Examples of substituted monocyclic heterocyclyl groups include those derived from saccharides in cyclic form, e.g., furanose (C5) such as arabinofuranose, lyxofuranose, ribofuranose and xylofuranose, and pyranose (C6) such as allopyranose, altropyranose, glucopyranose, mannopyranose, gulpyranose , idopyranose, galactopyranose and talopyranose.
С5_20 арил: в настоящем документе термин С5_20 арил относится к одновалентному фрагменту, поC 5 _ 20 aryl: in this document, the term C 5 _ 20 aryl refers to a monovalent fragment, according to
- 5 040749 лученному путем удаления атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, причем указанный фрагмент содержит от 3 до 20 кольцевых атомов. В настоящем документе термин С5-7 арил относится к одновалентному фрагменту, полученному удалением атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, причем указанный фрагмент содержит от 5 до 7 кольцевых атомов, и в настоящем документе термин C5-10арил относится к одновалентному фрагменту, полученному удалением атома водорода от атома ароматического кольца ароматического соединения, причем указанный фрагмент содержит от 5 до 10 кольцевых атомов. Предпочтительно каждое кольцо содержит от 5 до 7 кольцевых атомов.- 5 040749 radiated by removing a hydrogen atom from an atom of the aromatic ring of an aromatic compound, and the specified fragment contains from 3 to 20 ring atoms. As used herein, the term C 5-7 aryl refers to a monovalent moiety obtained by removing a hydrogen atom from an aromatic ring atom of an aromatic compound, said moiety having 5 to 7 ring atoms, and as used herein, the term C 5-10 aryl refers to a monovalent moiety , obtained by removing a hydrogen atom from an atom of the aromatic ring of an aromatic compound, and the specified fragment contains from 5 to 10 ring atoms. Preferably, each ring contains 5 to 7 ring atoms.
В этом случае префиксы (например, С3-20, C5-7, C5-6, C5-10 и т.д.) обозначают количество кольцевых атомов или диапазон количества кольцевых атомов, будь то атомы углерода или гетероатомы. Например, в настоящем документе термин C5-6 арил относится к арильной группе, содержащей 5 или 6 кольцевых атомов.In this case, the prefixes (eg, C 3-20 , C 5-7 , C 5 -6 , C 5-10 , etc.) indicate the number of ring atoms or the range of the number of ring atoms, whether carbon atoms or heteroatoms. For example, as used herein, the term C 5-6 aryl refers to an aryl group containing 5 or 6 ring atoms.
Все кольцевые атомы могут представлять собой атомы углерода, как в карбоарильных группах.All ring atoms may be carbon atoms, as in carboaryl groups.
Примеры карбоарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, происходящие из бензола (т.е. фенила) (C6), нафталина (C10), азулена (C10), антрацена (C14), фенантрена (C14), нафтацена (C18) и пирена (C16).Examples of carboaryl groups include, but are not limited to, groups derived from benzene (i.e. phenyl) (C 6 ), naphthalene (C 10 ), azulene (C 10 ), anthracene (C 14 ), phenanthrene (C 14 ) , naphthacene (C18) and pyrene (C16).
Примеры арильных групп, которые содержат конденсированные кольца, по меньшей мере одно из которых представляет собой ароматическое кольцо, включают, но не ограничиваются ими, группы, происходящие из индана (например, 2,3-дигидро-1Н-индена) (C9), индена (C9), изоиндена (C9), тетралина (1,2,3,4-тетрагидронафталина (C10), аценафтена (C12), флуорена (C13), феналена (C13), ацефенантрена (C15) и ацеантрена (C16).Examples of aryl groups that contain fused rings, at least one of which is an aromatic ring, include, but are not limited to, groups derived from indan (e.g., 2,3-dihydro-1H-indene) (C 9 ), indene (C 9 ), isoindene (C 9 ), tetralin (1,2,3,4-tetrahydronaphthalene (C 10 ), acenaphthene (C 12 ), fluorene (C 13 ), phenalene (C 13 ), acephenanthrene (C 15 ) and aceanthrene (C 16 ).
Согласно другому варианту кольцевые атомы могут включать один или более гетероатомов, как в гетероарильных группах. Примеры моноциклических гетероарильных групп включают, но не ограничиваются ими, группы, происходящие из:Alternatively, the ring atoms may include one or more heteroatoms, as in heteroaryl groups. Examples of monocyclic heteroaryl groups include, but are not limited to, groups derived from:
Np пиррола (азола) (C5), пиридина (азина) (C6);Np pyrrole (azole) (C 5 ), pyridine (azine) (C 6 );
О1: фурана (оксола) (C5);O 1 : furan (oxol) (C 5 );
S1: тиофена (тиола) (C5);S1: thiophene (thiol) (C 5 );
N1O1: оксазола (C5), изоксазола (C5), изоксазина (C6);N 1 O 1 : oxazole (C 5 ), isoxazole (C 5 ), isoxazine (C 6 );
N2Of оксадиазола (фуразана) (C5);N 2 Of oxadiazole (furazan) (C 5 );
N3O1: оксатриазола (C5);N 3 O1: oxatriazole (C 5 );
N1S1: тиазола (C5), изотиазола (C5);N 1 S 1 : thiazole (C 5 ), isothiazole (C 5 );
N2: имидазола (1,3-диазола) (C5), пиразола (1,2-диазола) (C5), пиридазина (1,2-диазина) (C6), пиримидина (1,3-диазина) (C6) (например, цитозина, тимина, урацила), пиразина (1,4-диазина) (C6);N2: imidazole (1,3-diazole) (C 5 ), pyrazole (1,2-diazole) (C 5 ), pyridazine (1,2-diazine) (C 6 ), pyrimidine (1,3-diazine) ( C 6 ) (eg, cytosine, thymine, uracil), pyrazine (1,4-diazine) (C 6 );
N3: триазола (C5), триазина (C6);N3: triazole (C5), triazine (C6);
N4: тетразола (C5).N4: tetrazole (C5).
Примеры гетероарила, который содержит конденсированные кольца, включают, но не ограничиваются ими:Examples of a heteroaryl that contains fused rings include, but are not limited to:
C9 (с 2 конденсированными кольцами), происходящий из бензофурана (O1), изобензофурана (O1), индола (N1), изоиндола (N1), индолизина (N1), индолина (N1), изоиндолина (N1), пурина (N4) (например, аденина, гуанина), бензимидазола (N2), индазола (N2), бензоксазола (N1O1), бензизоксазола (N1O1), бензодиоксола (O2), бензофуразана (N2O1), бензотриазола (N3), бензотиофурана (S1), бензотиазола (N1S1), бензотиадиазола (N2S);C 9 (with 2 fused rings) derived from benzofuran (O 1 ), isobenzofuran (O 1 ), indole (N 1 ), isoindole (N 1 ), indolizine (N 1 ), indoline (N 1 ), isoindoline (N 1 ), purine (N 4 ) (e.g. adenine, guanine), benzimidazole (N2), indazole (N2), benzoxazole (N 1 O 1 ), benzisoxazole (N 1 O 1 ), benzodioxol (O2), benzofurazan (N 2 O 1 ), benzotriazole (N 3 ), benzothiofuran (S 1 ), benzothiazole (N 1 S 1 ), benzothiadiazole (N 2 S);
C10 (с 2 конденсированными кольцами), происходящий из хромена (O1), изохромена (O1), хромана (O1), изохромана (O1), бензодиоксана (O2), хинолина (N1), изохинолина (N1), хинолизина (N1), бензоксазина (N1O1), бензодиазина (N2), пиридопиридина (N2), хиноксалина (N2), хиназолина (N2), циннолина (N2), фталазина (N2), нафтиридина (N2), птеридина (N4);C 10 (with 2 fused rings) derived from chromene (O 1 ), isochromene (O 1 ), chromane (O 1 ), isochromane (O 1 ), benzodioxane (O 2 ), quinoline (N 1 ), isoquinoline (N 1 ), quinolysine (N 1 ), benzoxazine (N 1 O 1 ), benzodiazine (N2), pyridopyridine (N2), quinoxaline (N2), quinazoline (N2), cinnoline (N2), phthalazine (N2), naphthyridine (N2 ), pteridine (N4);
C11 (с 2 конденсированными кольцами), происходящий из бензодиазепина (N2);C11 (with 2 fused rings) derived from benzodiazepine (N2);
С13 (с 3 конденсированными кольцами), происходящий из карбазола (N1), дибензофурана (O1), дибензотиофена (S1), карболина (N2), перимидина (N2), пиридоиндола (N2);C 13 (with 3 fused rings) derived from carbazole (N 1 ), dibenzofuran (O 1 ), dibenzothiophene (S 1 ), carboline (N2), perimidine (N2), pyridoindole (N2);
С14 (с 3 конденсированными кольцами), происходящий из акридина (N1), ксантена (O1), тиоксантена (S1), оксантрена (O2), феноксатиина (O1S1), феназина (N2), феноксазина (N1O1), фенотиазина (N1S1), тиантрена (S2), фенантридина (N1), фенантролина (N2), феназина (N2).C 14 (with 3 fused rings), derived from acridine (N 1 ), xanthene (O 1 ), thioxanthene (S 1 ), oxantrene (O 2 ), phenoxathiine (O 1 S 1 ), phenazine (N2), phenoxazine ( N 1 O 1 ), phenothiazine (N 1 S 1 ), thiantrene (S 2 ), phenanthridine (N 1 ), phenanthroline (N2), phenazine (N2).
Вышеуказанные группы, независимо от того, являются ли они отдельными или частью другого заместителя, сами по себе необязательно могут быть замещены одной или более группами, выбранными из них самих и дополнительных заместителей, перечисленных ниже.The above groups, whether alone or part of another substituent, may themselves optionally be substituted with one or more groups selected from themselves and the additional substituents listed below.
Галоген: -F, -Cl, -Br и -I.Halogen: -F, -Cl, -Br and -I.
Гидрокси: -ОН.Hydroxy: -OH.
Простой эфир: -OR, где R представляет собой простой эфирный заместитель, например, C1-7 алкильную группу (также называемую C1-7 алкоксигруппой, которая обсуждается ниже), C3-20 гетероциклильную группу (также называемую C3-20 гетероциклилоксигруппой) или С5-20 арильную группу (также называемую С5-20арилоксигруппой), предпочтительно C1-7 алкильную группу.Ether: -OR where R is an ether substituent, e.g. C 1-7 alkyl group (also called C 1-7 alkoxy group, which is discussed below), C 3-20 heterocyclyl group (also called C 3-20 heterocyclyloxy group) or a C5-20 aryl group (also referred to as a C5-20 aryloxy group), preferably a C1-7 alkyl group.
Алкокси: -OR, где R представляет собой алкильную группу, например, C1-7 алкильную группу.Alkoxy: -OR where R is an alkyl group, for example a C 1-7 alkyl group.
- 6 040749- 6 040749
Примеры C1-7 алкоксигрупп включают, но не ограничиваются ими, -ОМе (метокси), -OEt (этокси), O(nPr) (н-пропокси), -O(iPr) (изопропокси), -O(nBu) (н-бутокси), -O(sBu) (втор-бутокси), -O(iBu) (изобутокси) и -O(tBu) (трет-бутокси).Examples of C 1 - 7 alkoxy groups include, but are not limited to, -OMe (methoxy), -OEt (ethoxy), O(nPr) (n-propoxy), -O(iPr) (isopropoxy), -O(nBu) ( n-butoxy), -O(sBu) (sec-butoxy), -O(iBu) (isobutoxy) and -O(tBu) (tert-butoxy).
Карбокси (карбоновая кислота): -С(=О)ОН.Carboxy (carboxylic acid): -C(=O)OH.
Сложный эфир (карбоксилат, сложный эфир карбоновой кислоты, оксикарбонил): -C(=O)OR, где R представляет собой сложноэфирный заместитель, например, C1-7 алкильную группу, C3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно C1-7 алкильную группу. Примеры сложноэфирных групп включают, но не ограничиваются ими, -С(=О)ОСН3, -С(=О)ОСН2СН3, -С(=О)ОС(СН3)3 и -C(=O)OPh.Ester (carboxylate, carboxylic acid ester, oxycarbonyl): -C(=O)OR where R is an ester substituent, e.g. a C 1 -7 alkyl group, a C 3-20 heterocyclyl group, or a C 5-20 aryl group , preferably a C 1 - 7 alkyl group. Examples of ester groups include, but are not limited to, -C(=O)OCH 3 , -C(=O)OCH 2 CH 3 , -C(=O)OC(CH 3 ) 3 and -C(=O)OPh .
Амино: -NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой амино заместители, например, водород, C1-7 алкильную группу (также называемую C1-7 алкиламино или ди-C1.7αлкилαмино), C3-20 гетероциклильную группу или С5-20 арильную группу, предпочтительно Н или C1-7 алкильную группу, или, в случае циклической аминогруппы, R1 и R2, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо, содержащее от 4 до 8 кольцевых атомов. Аминогруппы могут быть первичными (-NH2), вторичными (-NHR1) или третичными (-NHR1R2), а в катионной форме могут быть четвертичными (-+NR1R2R3). Примеры аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2 и -NHPh.Amino: -NR 1 R 2 where R 1 and R 2 independently represent amino substituents, for example, hydrogen, C 1 - 7 alkyl group (also called C 1 - 7 alkylamino or di-C 1 .7 αkylαmino), C 3 -20 heterocyclyl group or C 5 - 20 aryl group, preferably H or C 1 - 7 alkyl group, or, in the case of a cyclic amino group, R 1 and R 2 , together with the nitrogen atom to which they are attached, form a heterocyclic ring containing 4 to 8 ring atoms. Amino groups may be primary (-NH2), secondary (-NHR 1 ) or tertiary (-NHR 1 R 2 ), and in cationic form may be quaternary (-+NR 1 R2R 3 ). Examples of amino groups include, but are not limited to, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2 and -NHPh.
Примеры циклических аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, азиридино, азетидино, пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино и тиоморфолино.Examples of cyclic amino groups include, but are not limited to, aziridino, azetidino, pyrrolidino, piperidino, piperazino, morpholino, and thiomorpholino.
Амидо (карбамоил, карбамил, аминокарбонил, карбоксамид): -C(=O)NR1R2, где R1 и R2 независимо представляют собой амино заместители, определенные для аминогрупп. Примеры амидогрупп включают, но не ограничиваются ими, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3 и -C(=O)N(CH2CH3)2, а также амидогруппы, в которых R1 и R2, вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическую структуру, например, как в пиперидинокарбониле, морфолинокарбониле, тиоморфолинокарбониле и пиперазинокарбониле.Amido (carbamoyl, carbamyl, aminocarbonyl, carboxamide): -C(=O)NR 1 R 2 where R 1 and R 2 are independently amino substituents as defined for amino groups. Examples of amido groups include, but are not limited to, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH 3 , -C(=O)N(CH 3 ) 2 , -C(=O)NHCH2CH 3 and -C (=O)N(CH2CH3)2, as well as amido groups in which R 1 and R 2 , together with the nitrogen atom to which they are attached, form a heterocyclic structure, for example, as in piperidinocarbonyl, morpholinocarbonyl, thiomorpholinocarbonyl and piperazinocarbonyl.
Нитро: -NO2.Nitro: -NO 2 .
Азидо: -N3.Azido: -N 3 .
Циано (нитрил, карбонитрил): -CN.Cyano (nitrile, carbonitrile): -CN.
Антитело.Antibody.
Антитело к DLK1.Antibody to DLK1.
Согласно одному аспекту антитело представляет собой антитело, которое связывается с DLK1.In one aspect, the antibody is an antibody that binds to DLK1.
Гомологичный лиганду дельта белок 1 (DLK-1) представляет собой EGF-подобный мембраносвязанный белок, состоящий из шести тандемных EGF-подобных повторов, околомембранной области с сайтом расщепления, опосредуемого ТАСЕ (ADAM17), трансмембранного домена и короткого внутриклеточного хвоста. DLK-1 активно экспрессируется во время развития плода, но его экспрессия снижена и сильно ограничена у взрослых. Напротив, DLK-1 повторно экспрессируется в нескольких опухолях, таких как нейробластома, гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК), рабдомиосаркома, мелкоклеточный рак легких, миелодиспластический синдром и острый миелолейкоз. Интересно отметить, что при ГЦК DLK1, как было показано, является маркером стволовых раковых клеток, субпопуляции клеток, ответственных за инициацию, рост, метастазирование и рецидивирование опухоли.Ligand-homologous delta protein 1 (DLK-1) is an EGF-like membrane-bound protein consisting of six tandem EGF-like repeats, a peri-membrane region with a TACE-mediated cleavage site (ADAM17), a transmembrane domain, and a short intracellular tail. DLK-1 is highly expressed during fetal development, but its expression is reduced and severely restricted in adults. In contrast, DLK-1 is re-expressed in several tumors such as neuroblastoma, hepatocellular carcinoma (HCC), rhabdomyosarcoma, small cell lung cancer, myelodysplastic syndrome, and acute myeloid leukemia. Interestingly, in HCC, DLK1 has been shown to be a marker of cancer stem cells, a subset of cells responsible for tumor initiation, growth, metastasis, and recurrence.
В целом, DLK-1 представляет собой перспективную мишень для подхода на основе конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC), вследствие его селективной экспрессии в широком диапазоне злокачественных новообразований и ограниченной экспрессии в здоровых органах, а также его экспрессии на стволовых раковых клетках ГЦК.Overall, DLK-1 is a promising target for an antibody-drug conjugate (ADC) approach due to its selective expression in a wide range of malignancies and limited expression in healthy organs, as well as its expression on HCC cancer stem cells.
HuBa-1-3d.HuBa-1-3d.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит домен VH, содержащий CDR3 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 7. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен VH дополнительно содержит CDR2 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 6 и/или CDR1 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 5. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит домен VH, содержащий CDR1 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 5, CDR2 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 6 и CDR3 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 7. Согласно предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит домен VH, содержащий последовательность в соответствии с SEQ ID NO. 1.In some embodiments, the antibody comprises a VH domain comprising a VH CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 7. According to some embodiments of the present invention, the VH domain further comprises a VH CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 6 and/or CDR1 VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 5. In some embodiments, the antibody comprises a VH domain comprising a VH CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 5, CDR2 VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 6 and CDR3 VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 7. According to preferred embodiments of the present invention, the antibody comprises a VH domain containing the sequence according to SEQ ID NO. 1.
Антитело может также содержать домен VL. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит домен VL, содержащий CDR3 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 10. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения домен VL дополнительно содержит CDR2 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 9 и/или CDR1 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 8. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит домен VL, содержащий CDR1 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 8, CDR2 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 9 и CDR3 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 10. Согласно предпочтительным вариантам реаThe antibody may also contain a VL domain. In some embodiments, the antibody comprises a VL domain comprising a VL CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 10. According to some embodiments of the present invention, the VL domain further comprises a VL CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 9 and/or CDR1 VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 8. According to some embodiments of the present invention, the antibody comprises a VL domain containing a VL CDR1 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 8, CDR2 VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 9 and CDR3 VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 10. According to the preferred variants of real
- 7 040749 лизации настоящего изобретения антитело содержит домен VL, содержащий последовательность в соответствии с SEQ ID NO. 2.- 7 040749 lysis of the present invention, the antibody contains a VL domain containing a sequence in accordance with SEQ ID NO. 2.
Согласно предпочтительным вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит домен VH и домен VL. Предпочтительно VH содержит последовательность SEQ ID NO. 1 и домен VL содержит последовательность SEQ ID NO. 2.According to preferred embodiments of the present invention, the antibody comprises a VH domain and a VL domain. Preferably the VH contains the sequence of SEQ ID NO. 1 and the VL domain contains the sequence SEQ ID NO. 2.
Домен(ы) VH и VL может (могут) спариваться с образованием антигенсвязывающего сайта антитела, который связывает DLK1.The VH and VL domain(s) can pair to form an antibody antigen-binding site that binds DLK1.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой интактное антитело, содержащее домен VH, спаренный с доменом VL, при этом домены VH и VL содержат последовательности SEQ ID NO. 1, спаренную с SEQ ID NO. 2.According to some variants of implementation of the present invention, the antibody is an intact antibody containing a VH domain paired with a VL domain, while the VH and VL domains contain the sequences of SEQ ID NO. 1 paired with SEQ ID NO. 2.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO. 3, спаренную с легкой цепью, содержащей последовательность SEQ ID NO. 4. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой интактное антитело, содержащее две тяжелые цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO. 3, каждая из которых спарена с легкой цепью, содержащей последовательность SEQ ID NO. 4.According to some variants of implementation of the present invention, the antibody contains a heavy chain containing the sequence of SEQ ID NO. 3 paired with a light chain containing the sequence of SEQ ID NO. 4. According to some embodiments of the present invention, the antibody is an intact antibody containing two heavy chains containing the sequence of SEQ ID NO. 3, each of which is paired with a light chain containing the sequence of SEQ ID NO. 4.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO. 11, спаренную с легкой цепью, содержащей последовательность SEQ ID NO. 4. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой интактное антитело, содержащее две тяжелые цепи, содержащие последовательность SEQ ID NO. 11, каждая из которых спарена с легкой цепью, содержащей последовательность SEQ ID NO. 4.According to some variants of implementation of the present invention, the antibody contains a heavy chain containing the sequence of SEQ ID NO. 11 paired with a light chain containing the sequence of SEQ ID NO. 4. According to some embodiments of the present invention, the antibody is an intact antibody containing two heavy chains containing the sequence of SEQ ID NO. 11, each of which is paired with a light chain containing the sequence of SEQ ID NO. 4.
Согласно одному аспекту антитело представляет собой антитело, описанное в настоящем документе, которое было модифицировано (или дополнительно модифицировано), как описано ниже. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело представляет собой гуманизированный вариант, деиммунизированный вариант или вариант с измененной поверхностью антитела, раскрытого в настоящем документе.In one aspect, an antibody is an antibody described herein that has been modified (or further modified) as described below. In some embodiments, the antibody is a humanized variant, a deimmunized variant, or a resurfaced variant of the antibody disclosed herein.
Терминология.Terminology.
В настоящем документе термин антитело используется в самом широком смысле и включает, в частности, моноклональные антитела, поликлональные антитела, димеры, мультимеры, полиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), интактные антитела и фрагменты антител, при условии, что они проявляют целевую биологическую активность, например, способность связывать DLK1. Антитела могут быть мышиными, человеческими, гуманизированными, химерными или происходящими из других видов. Антитело представляет собой белок, вырабатываемый иммунной системой, который способен распознавать и связываться с конкретным антигеном. (Janeway, С., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5 изд., Garland Publishing, New York). Антиген-мишень обычно имеет множество сайтов связывания, также называемых эпитопами, распознаваемых CDR на множестве антител. Каждое антитело, которое специфично связывается с отличающимся эпитопом, имеет отличающуюся структуру. Таким образом, один антиген может иметь более одного соответствующего антитела. Антитело включает полноразмерную молекулу иммуноглобулина или иммунологически активную часть полноразмерной молекулы иммуноглобулина, т.е. молекулу, которая содержит антигенсвязывающий сайт, который иммуноспецифически связывает антиген мишени, представляющей интерес, или его часть, причем такие мишени включают, но не ограничиваются ими, раковую клетку или клетки, которые вырабатывают аутоиммунные антитела, ассоциированные с аутоиммунным заболеванием. Иммуноглобулин может быть любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD и IgA), класса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подкласса или аллотипа (например, G1m1, G1m2, G1m3, не-G1m1 человека (т.е. любой аллотип, кроме G1m1], G1m17, G2m23, G3m21, G3m28, G3m11, G3m5, G3m13, G3m14, G3m10, G3m15, G3m16, G3m6, G3m24, G3m26, G3m27, A2m1, A2m2, Km1, Km2 и Km3) молекулы иммуноглобулина. Иммуноглобулины могут происходить из любых видов, включая человека, мышь или кролика.As used herein, the term antibody is used in its broadest sense and includes, in particular, monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, dimers, multimers, polyspecific antibodies (e.g., bispecific antibodies), intact antibodies, and antibody fragments, provided they exhibit the intended biological activity. , for example, the ability to bind DLK1. Antibodies can be murine, human, humanized, chimeric, or derived from other species. An antibody is a protein produced by the immune system that is able to recognize and bind to a specific antigen. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th ed., Garland Publishing, New York). The target antigen typically has a plurality of binding sites, also referred to as epitopes, recognized by CDRs on a plurality of antibodies. Each antibody that specifically binds to a different epitope has a different structure. Thus, one antigen may have more than one corresponding antibody. An antibody comprises a full length immunoglobulin molecule or an immunologically active portion of a full length immunoglobulin molecule, i. a molecule that contains an antigen-binding site that immunospecifically binds an antigen of a target of interest, or a portion thereof, such targets include, but are not limited to, a cancer cell or cells that produce autoimmune antibodies associated with an autoimmune disease. An immunoglobulin may be of any type (eg, IgG, IgE, IgM, IgD, and IgA), class (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, and IgA2), or subclass or allotype (eg, G1m1, G1m2, G1m3, non- Human G1m1 (i.e. any allotype other than G1m1], G1m17, G2m23, G3m21, G3m28, G3m11, G3m5, G3m13, G3m14, G3m10, G3m15, G3m16, G3m6, G3m24, G3m26, G3m27, A2m1, A2m2, Km1, Km2 and Km3) immunoglobulin molecules Immunoglobulins can be derived from any species including human, mouse or rabbit.
В настоящем документе термин связывает DLK1 означает, что антитело связывает DLK1 с более высокой аффинностью, чем неспецифический партнер, такой как бычий сывороточный альбумин (БСА, номер доступа в Genbank CAA76847, вариант № САА76847.1 GI:3336842, дата обновления записи: 7 января 2011, 14 ч 30 мин). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело связывает DLK1 с константой ассоциации (Ка), которая по меньшей мере в 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 104, 105 или 106 раз выше, чем константа ассоциации антитела для БСА, при измерении в физиологических условиях. Антитела согласно настоящему изобретению могут связывать DLK1 с высокой аффинностью. Например, согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения антитело может связывать DLK1 с KD, которая равна или меньше примерно 10’6 М, такой как 1x10’6, 10’7, 10’8, 10’9, 10’10, 10’11, 10’12, 10’13 или 10’14.As used herein, the term binds DLK1 means that an antibody binds DLK1 with a higher affinity than a non-specific partner such as bovine serum albumin (BSA, Genbank accession number CAA76847, variant no. CAA76847.1 GI:3336842, record update date: January 7 2011, 14:30). In some embodiments of the present invention, an antibody binds DLK1 with an association constant (Ka) that is at least 2, 3, 4, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1000, 2000, 5000, 10 4 . 105 or 106 times higher than the association constant of the antibody for BSA, when measured under physiological conditions. The antibodies of the present invention can bind DLK1 with high affinity. For example, in some embodiments of the present invention , an antibody may bind DLK1 to a KD that is equal to or less than about 10'6 M, such as 1x10'6, 10'7 , 10'8, 10'9 , 10'10 , 10'11 , 10' 12 , 10' 13 or 10' 14 .
DLK1 является членом EGF-подобного семейства гомеозисных белков. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения полипептид DLK1 соответствует номеру доступа в Genbank CAA78163, вариант № САА78163.1, дата обновления записи: 2 февраля 2011 г., 10 ч 34 мин (SEQ ID NO. 12). Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения нуклеиновая кислота, кодирующаяDLK1 is a member of the EGF-like family of homeotic proteins. In some embodiments of the present invention, the DLK1 polypeptide corresponds to Genbank Accession Number CAA78163, Variant No. CAA78163.1, Record Update Date: February 2, 2011, 10:34 AM (SEQ ID NO. 12). According to one embodiment of the present invention, a nucleic acid encoding
- 8 040749 полипептид DLK1, соответствует номеру доступа в Genbank Z12172, вариант № Z12172.1, дата обновления записи: 2 февраля 2011 г., 10 ч 34 мин. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения DLK1 содержит последовательность SEQ ID NO. 13.- 8 040749 DLK1 polypeptide, corresponding to Genbank accession number Z12172, version no. Z12172.1, entry date updated: February 2, 2011, 10:34 am. According to some embodiments of the present invention, DLK1 contains the sequence of SEQ ID NO. 13.
Фрагменты антитела содержат часть полноразмерного антитела, обычно его антигенсвязывающую или вариабельную область. Примеры фрагментов антитела включают фрагменты Fab, Fab', F(ab')2 и scFv; диатела; линейные антитела; фрагменты, вырабатываемые библиотекой экспрессии Fab, антиидиотипические (анти-Id) антитела, CDR (область, определяющая комплементарность) и эпитопсвязывающие фрагменты любого из вышеуказанных, которые иммуноспецифически связываются с антигенами раковых клеток, вирусными антигенами или микробными антигенами, одноцепочечные молекулы антител; и полиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.Antibody fragments contain a portion of a full-length antibody, usually its antigen-binding or variable region. Examples of antibody fragments include Fab, Fab', F(ab') 2 and scFv fragments; diabody; linear antibodies; fragments produced by the Fab expression library, anti-idiotypic (anti-Id) antibodies, CDR (complementarity determining region) and epitope-binding fragments of any of the above, which immunospecifically bind to cancer cell antigens, viral antigens or microbial antigens, single-chain antibody molecules; and polyspecific antibodies formed from antibody fragments.
В настоящем документе термин моноклональное антитело относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. В дополнение к их специфичности преимущество моноклональных антител заключается в том, что их можно синтезировать без загрязнения другими антителами. Обстоятельство моноклональный указывает на характеристику антитела, как полученного из по существу гомогенной популяции антител, и оно не должно быть истолковано как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для применения в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены методом гибридомы, впервые описанным Kohler et al (1975) Nature 256:495, или могут быть получены методами рекомбинантной ДНК (см. US 4816567). Моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек антител с применением методик, описанных в Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597, или из трансгенных мышей, несущих полностью человеческую иммуноглобулиновую систему (Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459).As used herein, the term monoclonal antibody refers to an antibody derived from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e. the individual antibodies that make up the population are identical except for possible natural mutations, which may be present in small amounts. Monoclonal antibodies are highly specific and directed against a single antigenic site. In addition, unlike polyclonal antibody preparations, which include different antibodies directed against different determinants (epitopes), each monoclonal antibody is directed against a single determinant on the antigen. In addition to their specificity, the advantage of monoclonal antibodies is that they can be synthesized without contamination by other antibodies. The circumstance monoclonal indicates the characterization of an antibody as derived from a substantially homogeneous population of antibodies and should not be construed as requiring the production of the antibody by any particular method. For example, monoclonal antibodies for use in accordance with the present invention can be obtained by the hybridoma method, first described by Kohler et al (1975) Nature 256:495, or can be obtained by recombinant DNA methods (see US 4816567). Monoclonal antibodies can also be isolated from antibody phage libraries using the techniques described in Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597, or from transgenic mice carrying a fully human immunoglobulin system (Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459).
Моноклональные антитела в настоящем документе, в частности, включают химерные антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепей идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, происходящих из конкретного вида или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, тогда как остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, происходящих из другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют целевую биологическую активность (US 4816567; и Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:68516855). Химерные антитела включают приматизированные антитела, содержащие антигенсвязывающие последовательности вариабельного домена, происходящие из примата, отличного от человека (например, обезьяны Старого света или человекообразной обезьяны), и последовательности константных областей человека.Monoclonal antibodies as used herein specifically include chimeric antibodies in which a portion of the heavy and/or light chains are identical or homologous to corresponding sequences in antibodies derived from a particular species or belonging to a particular class or subclass of antibodies, while the remainder of the chain(s) ) is identical or homologous to the corresponding sequences in antibodies derived from another species or belonging to another class or subclass of antibodies, as well as fragments of such antibodies, provided that they exhibit the desired biological activity (US 4816567; and Morrison et al (1984) Proc. Natl Acad Sci USA 81:68516855). Chimeric antibodies include primatized antibodies containing antigen-binding variable domain sequences derived from a non-human primate (eg, Old World monkey or great ape) and human constant region sequences.
В настоящем документе интактное антитело представляет собой антитело, содержащее домены VL и VH, а также константный домен легкой цепи (CL) и константные домены тяжелой цепи, CH1, CH2 и CH3. Константные домены могут представлять собой константные домены с нативной последовательностью (например, константные домены человека с нативной последовательностью) или с вариантом их аминокислотной последовательности. Интактное антитело может иметь одну или более эффекторных функций, которые относятся к тем видам биологической активности, которые связаны с областью Fc (областью Fc с нативной последовательностью или областью Fc с вариантом аминокислотной последовательности) антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают связывание C1q; комплементзависимую цитотоксичность; связывание с рецептором Fc; антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ); фагоцитоз; и подавление рецепторов клеточной поверхности, таких как В-клеточный рецептор и BCR.As used herein, an intact antibody is an antibody containing the VL and VH domains, as well as the light chain constant domain (CL) and the heavy chain constant domains, CH1, CH2 and CH3. The constant domains can be native sequence constant domains (eg, human native sequence constant domains) or an amino acid sequence variant thereof. An intact antibody may have one or more effector functions that relate to those biological activities associated with the Fc region (native sequence Fc region or amino acid sequence variant Fc region) of the antibody. Examples of antibody effector functions include C1q binding; complement dependent cytotoxicity; binding to the Fc receptor; antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC); phagocytosis; and downregulation of cell surface receptors such as the B cell receptor and BCR.
В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена их тяжелых цепей интактные антитела можно отнести к различным классам. Существует пять основных классов интактных антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть далее разделены на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам антител, называются α, δ, ε, γ и μ, соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны.Depending on the amino acid sequence of the constant domain of their heavy chains, intact antibodies can be assigned to different classes. There are five main classes of intact antibodies: IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM, and some of these can be further divided into subclasses (isotypes), such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, and IgA2. The heavy chain constant domains that correspond to different classes of antibodies are called α, δ, ε, γ, and μ, respectively. The subunit structures and three-dimensional configurations of the various classes of immunoglobulins are well known.
Модификация антителAntibody modification
Антитела, раскрытые в настоящем документе, могут быть модифицированы. Например, для того чтобы сделать их менее иммуногенными для субъекта-человека. Это можно осуществить с применением любой из ряда методик, известных специалисту в данной области техники. Некоторые из этих методик более подробно описаны ниже.The antibodies disclosed herein may be modified. For example, in order to make them less immunogenic in a human subject. This can be done using any of a number of techniques known to those skilled in the art. Some of these techniques are described in more detail below.
ГуманизацияHumanization
Методики снижения иммуногенности не относящегося к человеку антитела или фрагмента антителаTechniques for reducing the immunogenicity of a non-human antibody or antibody fragment
- 9 040749 in vivo включают методики, названные гуманизация.- 9 040749 in vivo include techniques called humanization.
Гуманизированное антитело относится к полипептиду, содержащему по меньшей мере часть модифицированной вариабельной области антитела человека, причем часть вариабельной области, предпочтительно часть по существу меньшая, чем интактный вариабельный домен человека, была заменена соответствующей последовательностью из вида, отличного от человека, и при этом модифицированная вариабельная область соединена с по меньшей мере другой частью другого белка, предпочтительно с константной областью антитела человека. Выражение гуманизированные антитела включает антитела человека, в которых один или более остатков аминокислот области, определяющей комплементарность (CDR), и/или один или более остатков аминокислот каркасного участка (FW или FR) заменены остатками аминокислот из аналогичных сайтов в антителах грызунов или других видов, отличных от человека. Выражение гуманизированное антитело также включает вариант аминокислотной последовательности иммуноглобулина или ее фрагмент, который содержит FR, содержащий по существу аминокислотную последовательность иммуноглобулина человека, и CDR, содержащий по существу аминокислотную последовательность иммуноглобулина, не относящегося к человеку.A humanized antibody refers to a polypeptide comprising at least a portion of a modified variable region of a human antibody, wherein a portion of the variable region, preferably a portion substantially smaller than an intact human variable domain, has been replaced with a corresponding sequence from a non-human species, wherein the modified variable region the region is fused to at least another portion of another protein, preferably a constant region of a human antibody. The expression humanized antibodies includes human antibodies in which one or more amino acid residues of the complementarity determining region (CDR) and/or one or more amino acid residues of the framework region (FW or FR) are replaced by amino acid residues from analogous sites in antibodies of rodents or other species, different from human. The expression humanized antibody also includes a variant of the amino acid sequence of an immunoglobulin, or a fragment thereof, which contains an FR containing essentially the amino acid sequence of a human immunoglobulin and a CDR containing essentially the amino acid sequence of a non-human immunoglobulin.
Гуманизированные формы антител, не относящихся к человеку (например, мышиных), представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, происходящую из иммуноглобулина, не относящегося к человеку. Или, с другой стороны, гуманизированное антитело представляет собой антитело человека, которое также содержит выборочные последовательности антител, не относящихся к человеку (например, мышиных), вместо последовательностей человека. Гуманизированное антитело может включать консервативные замены аминокислот или неприродные остатки из одного и того же или разных видов, которые существенно не изменяют его связывающую и/или биологическую активность. Такие антитела представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, происходящую из иммуноглобулинов, не относящихся к человеку.Humanized forms of non-human (eg, murine) antibodies are chimeric antibodies that contain a minimal sequence derived from a non-human immunoglobulin. Or, alternatively, a humanized antibody is a human antibody that also contains selective non-human (eg, murine) antibody sequences instead of human sequences. A humanized antibody may include conservative amino acid substitutions or non-natural residues from the same or different species that do not significantly alter its binding and/or biological activity. Such antibodies are chimeric antibodies that contain a minimal sequence derived from non-human immunoglobulins.
Существует ряд методик гуманизации, включая прививку CDR, направляемый отбор, деиммунизацию, изменение поверхности (также известное как рекомбинация поверхностных остатков), составные антитела, оптимизацию содержания участков последовательности человека и перестановку каркасных участков.There are a number of humanization techniques, including CDR grafting, guided selection, deimmunization, resurfacing (also known as surface residue recombination), compound antibodies, optimization of the content of human sequence regions, and framework shuffling.
Прививка CDR.CDR graft.
В этой методике гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (реципиентное антитело), в которых остатки из области, определяющей комплементарность (CDR), реципиентного антитела заменены остатками CDR из вида, отличного от человека (донорное антитело), такого как мышь, крыса, верблюд, крупный рогатый скот, коза или кролик, обладающего целевыми свойствами (по сути CDR, не относящиеся к человеку, прививают на каркас человека). В некоторых случаях остатки каркасного участка (FR) иммуноглобулина человека заменяют соответствующими остатками, не относящимися к человеку (это может происходить, например, если конкретный остаток FR оказывает значительное влияние на связывание антигена).In this technique, humanized antibodies are human immunoglobulins (recipient antibody) in which residues from the complementarity determining region (CDR) of the recipient antibody are replaced with CDR residues from a non-human species (donor antibody) such as mouse, rat, camel, bovine, goat, or rabbit having targeted properties (essentially, non-human CDRs are grafted onto a human frame). In some cases, framework region (FR) residues of a human immunoglobulin are replaced with corresponding non-human residues (this may be the case, for example, if a particular FR residue has a significant effect on antigen binding).
Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях. Эти модификации вносят для дальнейшего улучшения и максимального повышения эффективности антител. Таким образом, в целом гуманизированное антитело будет содержать все из по меньшей мере одного и в одном аспекте двух вариабельных доменов, в которых все или все из гипервариабельных петель соответствуют таковым в иммуноглобулине, не относящемся к человеку, и все или по существу все из участков FR представляют собой последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc) или таковую из иммуноглобулина человека.In addition, humanized antibodies may contain residues that are not found in either the recipient antibody or the imported CDR or framework sequences. These modifications are made to further improve and maximize antibody performance. Thus, in general, a humanized antibody will contain all of at least one, and in one aspect two, variable domains, wherein all or all of the hypervariable loops correspond to those in a non-human immunoglobulin, and all or substantially all of the FR regions. are human immunoglobulin sequences. The humanized antibody will optionally also contain at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc) or that of a human immunoglobulin.
Направляемый отбор.Guided selection.
Способ заключается в комбинировании домена VH или VL конкретного антитела, не относящегося к человеку, специфичного для конкретного эпитопа, с библиотекой VH или VL человека, и конкретные Vдомены человека отбирают против антигена, представляющего интерес. Отобранный VH человека затем комбинируют с библиотекой VL для создания полностью человеческой комбинации VHxVL. Способ описан в Nature Biotechnology (N.Y.) 12, (1994) 899-903.The method consists in combining the VH or V L domain of a particular non-human antibody specific for a particular epitope with a human VH or V L library, and the particular human V domains are selected against the antigen of interest. The selected human VH is then combined with the VL library to create a fully human VHxVL combination. The method is described in Nature Biotechnology (NY) 12, (1994) 899-903.
Составные антитела.Compound antibodies.
В этом способе два или более сегментов аминокислотной последовательности из антитела человека комбинируют внутри готовой молекулы антитела. Их конструируют путем комбинирования нескольких сегментов последовательностей VH и VL человека в комбинациях, которые ограничивают или позволяют избежать Т-клеточных эпитопов человека в V-областях готового составного антитела. При необходимости Т-клеточные эпитопы ограничивают или их устраняют путем замены сегментов V-области, вносящих вклад или кодирующих Т-клеточный эпитоп, альтернативными сегментами, которые позволяют избежать Т-клеточных эпитопов. Этот способ описан в US 2008/0206239 А1.In this method, two or more amino acid sequence segments from a human antibody are combined within the finished antibody molecule. They are constructed by combining multiple segments of human VH and VL sequences in combinations that limit or avoid human T cell epitopes in the V regions of the final composite antibody. Where necessary, T cell epitopes are limited or eliminated by replacing segments of the V region contributing to or encoding the T cell epitope with alternative segments that avoid T cell epitopes. This method is described in US 2008/0206239 A1.
Деиммунизация.Deimmunization.
Этот способ включает удаление Т-клеточных эпитопов человека (или другого второго вида) из Vобластей терапевтического антитела (или другой молекулы). Последовательность V-области терапевтиThe method involves removing human (or other second species) T-cell epitopes from the V regions of the therapeutic antibody (or other molecule). Sequence V-region therapy
- 10 040749 ческих антител анализируют на присутствие мотивов, связывающих ГКГС класса II, например, путем сравнения с базами данных мотивов, связывающих ГКГС (такими как база данных мотивов, размещенная на сайте www.wehi.edu.au). Согласно другому варианту мотивы, связывающие ГКГС класса II, могут быть идентифицированы с применением вычислительных способов протягивания, таких как способы, разработанные Altuvia et al. (J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995)); в этих способах последовательные перекрывающиеся пептиды из последовательностей V-области тестируют для определения их энергии связывания с белками ГКГС класса II. Эти данные затем могут быть объединены с информацией о других признаках последовательности, которые относятся к успешно презентированным пептидам, таких как амфипатичность, мотивы Ротбарда и сайты расщепления для катепсина В и других ферментов процессинга.- 10 040749 cal antibodies are analyzed for the presence of MHC class II binding motifs, for example by comparison with MHC binding motif databases (such as the motif database hosted at www.wehi.edu.au). In another embodiment, class II MHC-binding motifs can be identified using computational pull methods, such as those developed by Altuvia et al. (J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995)); in these methods, successive overlapping peptides from V-region sequences are tested to determine their binding energy to MHC class II proteins. This data can then be combined with information about other sequence features that are relevant to successfully presented peptides, such as amphipathicity, Rothbard motifs, and cleavage sites for cathepsin B and other processing enzymes.
После выявления потенциальных Т-клеточных эпитопов второго вида (например, человека) их устраняют путем изменения одной или более аминокислот. Модифицированные аминокислоты обычно находятся внутри самого Т-клеточного эпитопа, но также могут быть смежными с эпитопом с точки зрения первичной или вторичной структуры белка (и, следовательно, могут не быть смежными в первичной структуре). Чаще всего изменение происходит путем замены, но в некоторых случаях более подходящим будет добавление или удаление аминокислоты.Once potential T-cell epitopes of a second species (eg, human) have been identified, they are eliminated by altering one or more amino acids. The modified amino acids are usually found within the T cell epitope itself, but may also be adjacent to the epitope in terms of the primary or secondary structure of the protein (and therefore may not be adjacent in the primary structure). Most often, the change occurs by substitution, but in some cases, the addition or removal of an amino acid may be more appropriate.
Все изменения можно осуществлять с помощью технологии рекомбинантных ДНК так, что готовая молекула может быть получена путем экспрессии в рекомбинантном хозяине с применением хорошо известных способов, таких как сайт-направленный мутагенез. Однако также возможно применение белковой химии или любых других средств молекулярного изменения.All changes can be made using recombinant DNA technology so that the finished molecule can be obtained by expression in a recombinant host using well-known methods such as site-directed mutagenesis. However, it is also possible to use protein chemistry or any other means of molecular modification.
Изменение поверхности.Surface change.
Этот способ включает:This method includes:
(a) определение конформационной структуры вариабельной области антитела (или его фрагмента), не относящегося к человеку (например, грызуна), путем построения трехмерной модели вариабельной области антитела, не относящегося к человеку;(a) determining the conformational structure of the non-human (eg, rodent) variable region of the antibody (or fragment thereof) by constructing a three-dimensional model of the non-human antibody variable region;
(b) получение выравниваний последовательностей с применением распределений относительной доступности из рентгеновских кристаллографических структур достаточного количества вариабельных областей тяжелой и легкой цепей антитела, не относящегося к человеку, и антитела человека, чтобы получить группу положений каркаса тяжелой и легкой цепей, где положения выравнивания идентичны в 98% от достаточного количества тяжелых и легких цепей антитела, не относящегося к человеку;(b) obtaining sequence alignments using relative availability distributions from X-ray crystallographic structures of a sufficient number of heavy and light chain variable regions of a non-human antibody and a human antibody to obtain a group of heavy and light chain backbone positions where the positions of the alignment are identical at 98 % sufficient non-human antibody heavy and light chains;
(c) определение для антитела, не относящегося к человеку, подлежащего гуманизации, группы аминокислотных остатков, экспонированных на поверхности тяжелой и легкой цепей, с применением группы положений каркаса, полученной на этапе (b);(c) determining, for the non-human antibody to be humanized, the group of amino acid residues exposed on the surface of the heavy and light chains using the group of framework positions obtained in step (b);
(d) выявление в аминокислотных последовательностях антитела человека группы аминокислотных остатков, экспонированных на поверхности тяжелой и легкой цепей, которая наиболее идентична группе аминокислотных остатков, экспонированных на поверхности, определенной на этапе (с), при этом тяжелая и легкая цепи из антитела человека спарены или не спарены естественным образом;(d) identifying in the amino acid sequences of the human antibody a group of amino acid residues exposed on the surface of the heavy and light chains that is most identical to the group of amino acid residues exposed on the surface determined in step (c), wherein the heavy and light chains from the human antibody are paired, or not mated naturally;
(e) замену группы аминокислотных остатков, экспонированных на поверхности тяжелой и легкой цепей, определенной на этапе (с), в аминокислотной последовательности антитела, не относящегося к человеку, подлежащего гуманизации, группой аминокислотных остатков, экспонированных на поверхности тяжелой и легкой цепей, выявленной на этапе (d);(e) replacing the group of amino acid residues exposed on the surface of the heavy and light chains determined in step (c) in the amino acid sequence of the non-human antibody to be humanized with the group of amino acid residues exposed on the surface of the heavy and light chains identified on step (d);
(f) построение трехмерной модели вариабельной области антитела, не относящегося к человеку, полученной в результате замены, указанной на этапе (е);(f) building a three-dimensional model of the variable region of the non-human antibody resulting from the substitution indicated in step (e);
(g) выявление путем сравнения трехмерных моделей, построенных на этапах (а) и (f), любых аминокислотных остатков из групп, выявленных на этапах (с) или (d), которые находятся в пределах 5 Ангстрем от любого атома любого остатка из областей, определяющих комплементарность, антитела, не относящегося к человеку, которое должно быть гуманизировано;(g) identifying, by comparing the 3D models built in steps (a) and (f), any amino acid residues from the groups identified in steps (c) or (d) that are within 5 Angstroms of any atom of any residue from the regions the complementarity-determining non-human antibody to be humanized;
(h) замену любых остатков человека, выявленных на этапе (g), исходным аминокислотным остатком, не относящимся к человеку, чтобы определить гуманизирующую группу аминокислотных остатков, экспонированных на поверхности, антитела, не относящегося к человеку; при условии, что этап (а) не обязательно должен проводиться первым, а должен быть проведен перед этапом (g).(h) replacing any human residues identified in step (g) with the original non-human amino acid residue to determine the humanizing group of surface-exposed amino acid residues of the non-human antibody; provided that step (a) need not be carried out first, but must be carried out before step (g).
Супергуманизация.Superhumanization.
Способ позволяет сравнивать последовательность, не относящуюся к человеку, с функциональным репертуаром генов зародышевой линии человека. Отбирают гены человека, кодирующие канонические структуры, идентичные или тесно связанные с последовательностями, не относящимися к человеку. Отобранные гены человека с самой высокой гомологией в пределах CDR выбирают в качестве доноров FR. Наконец, CDR, не относящиеся к человеку, прививают на эти FR человека. Этот способ описан в патенте WO 2005/079479 А2.The method allows comparison of a non-human sequence with a functional repertoire of human germline genes. Human genes are selected that encode canonical structures that are identical or closely related to non-human sequences. Selected human genes with the highest homology within the CDR are selected as FR donors. Finally, non-human CDRs are grafted onto these human FRs. This method is described in WO 2005/079479 A2.
Оптимизация состава участков последовательности человека.Optimization of the composition of sections of the human sequence.
Этот способ позволяет сравнить последовательность, не являющуюся человеческой (например, мышиную), с репертуаром генов зародышевых линий человека, и различия оценивают как содержание участков последовательности человека (HSC), которое количественно определяет последовательность на уровне потенциальных ГКГС/Т-клеточных эпитопов. Последовательность-мишень затем гуманизируютThis method allows a non-human (eg, murine) sequence to be compared to the human germline gene repertoire, and differences are evaluated as human sequence region content (HSC), which quantifies the sequence at the level of potential MHC/T cell epitopes. The target sequence is then humanized
- 11 040749 путем максимального увеличения ее HSC вместо применения меры общей идентичности для получения множества разнообразных гуманизированных вариантов (описано в Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998).- 11 040749 by maximizing its HSC instead of applying a common identity measure to produce a wide variety of humanized variants (described in Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998).
Перестановка каркасных участков.Rearrangement of frame sections.
CDR антитела, не относящегося к человеку, гибридизуют в пределах рамки считывания с пулами кДНК, охватывающими все известные гены каркасных участков тяжелой и легкой цепей зародышевой линии человека. Затем гуманизированные антитела отбирают, например, путем пэннинга библиотеки фагового дисплея антител. Это описано в Methods 36, 43-60 (2005).The CDRs of the non-human antibody are hybridized in-frame to cDNA pools spanning all known human germline heavy and light chain framework genes. The humanized antibodies are then selected, for example by panning an antibody phage display library. This is described in Methods 36, 43-60 (2005).
Модификация антитела с применением азида.Modification of an antibody using an azide.
Антитело может быть получено для конъюгации с линкером лекарственного средства с помощью трехэтапного способа.An antibody can be prepared for conjugation to a drug linker using a three-step process.
(1) Экспрессия антитела (Ab), несущего центральный N-гликан, в подходящей системе экспрессии (например, клеточной линии СНО). Центральный N-гликан, как правило, конъюгирован с Asn297 тяжелой цепи в соответствии с системой нумерации Kabat.(1) Expression of an antibody (Ab) bearing a central N-glycan in a suitable expression system (eg, CHO cell line). The central N-glycan is typically conjugated to the heavy chain Asn297 according to the Kabat numbering system.
(2) Обрезка всех гликановых изоформ (сложного, гибридного, с высоким содержанием маннозы) эндогликозидазой для высвобождения центрального GlcNAc.(2) Pruning of all glycan isoforms (complex, hybrid, high mannose) with endoglycosidase to release the central GlcNAc.
(3) Ферментативный перенос к центральному GlcNAc остатка N-ацетилгалактозы, несущего азид ную группу, для конъюгации с линкером лекарственного средства.(3) Enzymatic transfer to the central GlcNAc of an N-acetylgalactose residue bearing an azide group for conjugation with a drug linker.
Обзор вышеупомянутого способа изложен в van Geel, R., et al., Bioconjugate Chemistry, 2015, 26, 2233-2242; DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.5b00224. В качестве альтернативы можно использовать однореакторный способ - см. примеры.For an overview of the above method, see van Geel, R., et al., Bioconjugate Chemistry, 2015, 26, 2233-2242; DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.5b00224. Alternatively, the one-pot method can be used - see examples.
Варианты реализацииImplementation Options
X.x.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения X представляет собой одинарную связь.In some embodiments of the present invention, X is a single bond.
Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения X представляет собой -СН2-.In other embodiments of the present invention, X is -CH 2 -.
Согласно дополнительным вариантам реализации настоящего изобретения X представляет собой -С2Н4-.According to additional embodiments of the present invention, X is -C 2 H 4 -.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения n составляет от 1 до 4.According to some embodiments of the present invention, n is from 1 to 4.
Согласно некоторым из этих вариантов реализации настоящего изобретения n равно 1.According to some of these embodiments of the present invention, n is 1.
Согласно другим из этих вариантов реализации настоящего изобретения n равно 2.According to other of these embodiments of the present invention, n is 2.
Согласно другим из этих вариантов реализации настоящего изобретения n равно 4.According to other of these embodiments of the present invention, n is 4.
R7. R7 .
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения R7 представляет собой метил.According to one embodiment of the present invention, R 7 is methyl.
Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения R7 представляет собой фенил.According to another embodiment of the present invention, R 7 is phenyl.
R2. R2 .
Если между С2 и C3 присутствует двойная связь, R2 выбран из:If there is a double bond between C2 and C3, R 2 is selected from:
(a) С5-10 арильной группы, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей галоген, нитро, циано, простой эфир, C1-7 алкил, C3_7 гетероциклил и бис-оксиC1-3 алкилен; (a) a C5-10 aryl group optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of halo, nitro, cyano, ether, C 1-7 alkyl, C 3 _ 7 heterocyclyl, and bis-oxyC1-3 alkylene;
(b) C1-5 насыщенного алифатического алкила;(b) C 1-5 saturated aliphatic alkyl;
(c) C3-6 насыщенного циклоалкила;(c) C3-6 saturated cycloalkyl;
R22 /^i^R23 (d) R21 , где каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, C1-3 насыщенного алкила,R 22 /^i^R 23 (d) R 21 where each of R 21 , R 22 and R 23 is independently selected from H, C1-3 saturated alkyl,
С2_3 алкенила, С2_3 алкинила и циклопропила, причем общее число атомов углерода в группе R2 составляет не более 5;C 2 _ 3 alkenyl, C 2 _ 3 alkynyl and cyclopropyl, the total number of carbon atoms in the R 2 group being not more than 5;
R25b (е) , где один из R25a и R25b представляет собой Н, а другой выбран из: фенила, при- чем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила;R 25b (e) where one of R 25a and R 25b is H and the other is selected from: phenyl, the phenyl being optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl;
(f) R , где R24 выбран из Н; C1-3 насыщенного алкила; С2-3 алкенила; С2-3 алкинила; цик- лопропила; фенила, причем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила.(f) R where R 24 is selected from H; C1-3 saturated alkyl; C2-3 alkenyl; C2-3 alkynyl; cyclopropyl; phenyl, wherein the phenyl is optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl.
Если R2 представляет собой C5-10 арильную группу, она может представлять собой С5-7 арильную группу. С5-7 арильная группа может представлять собой фенильную группу или С5-7 гетероарильнуюIf R 2 is a C 5 - 10 aryl group, it may be a C 5 - 7 aryl group. The C 5-7 aryl group may be a phenyl group or a C 5-7 heteroaryl group.
- 12 040749 группу, например, фуранил, тиофенил и пиридил. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R2 предпочтительно представляет собой фенил. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения R12 предпочтительно представляет собой тиофенил, например, тиофен-2-ил и тиофен-3-ил.- 12 040749 group, for example, furanyl, thiophenyl and pyridyl. According to some variants of implementation of the present invention, R 2 preferably represents phenyl. According to other variants of implementation of the present invention, R 12 preferably represents thiophenyl, for example, thiophen-2-yl and thiophen-3-yl.
Если R2 представляет собой C5-10 арильную группу, она может представлять собой C8-10 арил, например, хинолинильную или изохинолинильную группу. Хинолинильная или изохинолинильная группа может быть связана с центральной частью ПБД за счет любого доступного положения кольца. Например, хинолинил может представлять собой хинолин-2-ил, хинолин-3-ил, хинолин-4-ил, хинолин-5-ил, хинолин-6-ил, хинолин-7-ил и хинолин-8-ил. Из них предпочтительными могут быть хинолин-3-ил и хинолин-6-ил. Изохинолинил может представлять собой изохинолин-1-ил, изохинолин-3-ил, изохинолин-4ил, изохинолин-5-ил, изохинолин-6-ил, изохинолин-7-ил и изохинолин-8-ил. Из них предпочтительными могут быть изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил.If R 2 is a C 5-10 aryl group, it may be a C 8-10 aryl group, such as a quinolinyl or isoquinolinyl group. The quinolinyl or isoquinolinyl group may be linked to the PBB core at any available ring position. For example, quinolinyl may be quinolin-2-yl, quinolin-3-yl, quinolin-4-yl, quinolin-5-yl, quinolin-6-yl, quinolin-7-yl, and quinolin-8-yl. Of these, quinolin-3-yl and quinolin-6-yl may be preferred. Isoquinolinyl may be isoquinolin-1-yl, isoquinolin-3-yl, isoquinolin-4yl, isoquinolin-5-yl, isoquinolin-6-yl, isoquinolin-7-yl and isoquinolin-8-yl. Of these, isoquinolin-3-yl and isoquinolin-6-yl may be preferred.
Если R2 представляет собой C5-10 арильную группу, она может нести любое количество группзаместителей. Она предпочтительно несет от 1 до 3 групп-заместителей, причем 1 и 2 являются более предпочтительными, а наиболее предпочтительными являются однократно замещенные группы. Заместители могут находиться в любом положении.If R 2 is a C 5 - 10 aryl group, it may carry any number of substituent groups. It preferably bears from 1 to 3 substituent groups, with 1 and 2 being more preferred and singly substituted groups being most preferred. The substituents may be in any position.
Если R2 представляет собой С5-7 арильную группу, одиночный заместитель предпочтительно находится на кольцевом атоме, который не является смежным со связью с остальной частью соединения, т.е. предпочтительно это β или γ по отношению к остальной части соединения. Следовательно, если С5-7 арильная группа представляет собой фенил, заместитель предпочтительно находится в мета- или параположениях и более предпочтительно находится в пара-положении.When R 2 is a C 5-7 aryl group, the single substituent is preferably on a ring atom that is not bond-adjacent to the rest of the compound, i.e. preferably it is β or γ relative to the rest of the compound. Therefore, when the C 5-7 aryl group is phenyl, the substituent is preferably in the meta or para positions, and more preferably is in the para position.
Если R2 представляет собой C8-10 арильную группу, например, хинолинил или изохинолинил, она может нести любое количество заместителей в любом положении хинолинового или изохинолинового колец. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения она несет один, два или три заместителя, и они могут находиться либо на проксимальном и дистальном кольцах, либо на обоих (если присутствует более одного заместителя).When R 2 is a C 8-10 aryl group, such as quinolinyl or isoquinolinyl, it may carry any number of substituents at any position on the quinoline or isoquinoline rings. In some embodiments of the present invention, it bears one, two, or three substituents, and these may be on either the proximal and distal rings, or both (if more than one substituent is present).
Заместители R2, если R2 представляет собой C5-10 арильную группу.Substituents R 2 if R 2 is a C 5-10 aryl group.
Если заместитель на R2, когда R2 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой галоген, это предпочтительно F или Cl, более предпочтительно Cl.If the substituent on R 2 when R 2 is a C 5-10 aryl group is halogen, it is preferably F or Cl, more preferably Cl.
Если заместитель на R2, когда R2 представляет собой C5.10 арильную группу, представляет собой простой эфир, он может, согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения, представлять собой алкоксигруппу, например, C1.7алкоксигруппу (например, метокси, этокси), или он может, согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения, представлять собой С57арилоксигруппу (например, фенокси, пиридилокси, фуранилокси). Сама алкоксигруппа может быть дополнительно замещена, например, аминогруппой (например, диметиламино).If the substituent is on R 2 when R 2 is C 5 . 10 aryl group is an ether, it may, according to some variants of implementation of the present invention, be an alkoxy group, for example, C 1 . 7 alkoxy (eg, methoxy, ethoxy), or it may, according to some embodiments of the present invention, be a C 5 7 aryloxy group (eg, phenoxy, pyridyloxy, furanyloxy). The alkoxy group itself may be further substituted, for example, with an amino group (eg, dimethylamino).
Если заместитель на R2, когда R2 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой C1-7 алкил, он предпочтительно может представлять собой C1-4 алкильную группу (например, метил, этил, пропил, бутил).If a substituent on R 2 when R 2 is a C 5-10 aryl group is C 1-7 alkyl, it may preferably be a C 1-4 alkyl group (eg methyl, ethyl, propyl, butyl).
Если заместитель на R2, когда R2 представляет собой C5.10 арильную группу, представляет собой C3_7 гетероциклил, он может, согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения, представлять собой C6 азотсодержащую гетероциклильную группу, например, морфолино, тиоморфолино, пиперидинил, пиперазинил. Эти группы могут быть связаны с остальной частью фрагмента ПБД за счет атома азота. Эти группы могут быть дополнительно замещены, например, C1-4 алкильными группами. Если C6 азотсодержащая гетероциклильная группа представляет собой пиперазинил, указанный дополнительный заместитель может находиться на втором кольцевом атоме азота.If the substituent is on R 2 when R 2 is C 5 . 10 aryl group is C 3 _ 7 heterocyclyl, it may, according to some embodiments of the present invention, be a C6 nitrogen-containing heterocyclyl group, for example, morpholino, thiomorpholino, piperidinyl, piperazinyl. These groups can be linked to the rest of the PBB moiety via a nitrogen atom. These groups may be further substituted with, for example, C 1-4 alkyl groups. If the C6 nitrogen-containing heterocyclyl group is piperazinyl, said additional substituent may be on the second ring nitrogen atom.
Если заместитель на R2, когда R2 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой бис-окси-C1_3 алкилен, это предпочтительно бис-оксиметилен или бис-оксиэтилен.If the substituent on R 2 when R 2 is a C 5-10 aryl group is bis-oxy-C 1 _ 3 alkylene, it is preferably bis-oxymethylene or bis-oxyethylene.
Если заместитель на R2, когда R2 представляет собой C5-10 арильную группу, представляет собой сложный эфир, это предпочтительно сложный метиловый эфир или сложный этиловый эфир.If the substituent on R 2 when R 2 is a C 5-10 aryl group is an ester, it is preferably a methyl ester or an ethyl ester.
Особенно предпочтительные заместители, когда R2 представляет собой C5-10 арильную группу, включают метокси, этокси, фтор, хлор, циано, бис-оксиметилен, метилпиперазинил, морфолино и метилтиофенил. Другими особенно предпочтительными заместителями для R2 являются диметиламинопропилокси и карбокси.Particularly preferred substituents when R 2 is a C 5-10 aryl group include methoxy, ethoxy, fluorine, chlorine, cyano, bisoxymethylene, methylpiperazinyl, morpholino and methylthiophenyl. Other particularly preferred substituents for R 2 are dimethylaminopropyloxy and carboxy.
Особенно предпочтительные замещенные группы R2, когда R2 представляет собой C5-10 арильную группу, включают, но не ограничиваются ими, 4-метоксифенил, 3-метоксифенил, 4-этоксифенил, 3этоксифенил, 4-фторфенил, 4-хлорфенил, 3,4-бисоксиметиленфенил, 4-метилтиофенил, 4-цианофенил, 4феноксифенил, хинолин-3-ил и хинолин-6-ил, изохинолин-3-ил и изохинолин-6-ил, 2-тиенил, 2-фуранил, метоксинафтил и нафтил. Другой возможной замещенной группой R2 является 4-нитрофенил. Группы R2, представляющие особый интерес, включают 4-(4-метилпиперазин-1-ил)фенил и 3,4бисоксиметиленфенил.Particularly preferred substituted R 2 groups when R 2 is a C 5-10 aryl group include, but are not limited to, 4-methoxyphenyl, 3-methoxyphenyl, 4-ethoxyphenyl, 3ethoxyphenyl, 4-fluorophenyl, 4-chlorophenyl, 3, 4-bisoxymethylenephenyl, 4-methylthiophenyl, 4-cyanophenyl, 4phenoxyphenyl, quinolin-3-yl and quinolin-6-yl, isoquinolin-3-yl and isoquinolin-6-yl, 2-thienyl, 2-furanyl, methoxynaphthyl and naphthyl. Another possible substituted R 2 group is 4-nitrophenyl. R 2 groups of particular interest include 4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenyl and 3,4bisoxymethylenephenyl.
Если R2 представляет собой C1-5 насыщенный алифатический алкил, он может представлять собой метил, этил, пропил, бутил или пентил. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобреWhen R 2 is C 1-5 saturated aliphatic alkyl, it can be methyl, ethyl, propyl, butyl or pentyl. According to some embodiments of the present invention
- 13 040749 тения он может представлять собой метил, этил или пропил (н-пентил или изопропил). Согласно некоторым из этих вариантов реализации он может представлять собой метил. Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения он может представлять собой бутил или пентил, который может быть линейным или разветвленным.- 13 040749 tenia it can be methyl, ethyl or propyl (n-pentyl or isopropyl). In some of these embodiments, it may be methyl. According to other embodiments of the present invention, it may be butyl or pentyl, which may be linear or branched.
Если R2 представляет собой C3-6 насыщенный циклоалкил, он может представлять собой циклопро пил, циклобутил, циклопентил или циклогексил. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения он может представлять собой циклопропил.When R 2 is C 3 - 6 saturated cycloalkyl, it may be cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl or cyclohexyl. In some embodiments of the present invention, it may be cyclopropyl.
Если R2 представляет собой , каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, Ci-з на сыщенного алкила, С2-3алкенила, С2-3алкинила и циклопропила, причем общее число атомов углерода в группе R2 составляет не более 5. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения общее число атомов углерода в группе R2 составляет не более 4 или не более 3.When R 2 is , each of R 21 , R 22 and R 23 is independently selected from H, Ci-3 on saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, C 2 - 3 alkynyl and cyclopropyl, with the total number of carbon atoms in the group R 2 is no more than 5. According to some embodiments of the present invention, the total number of carbon atoms in the R 2 group is no more than 4 or no more than 3.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения один из R21, R22 и R23 пред ставляет собой Н, при этом две другие группы выбраны из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила.According to some embodiments of the present invention, one of R 21 , R 22 and R 23 is H, while the other two groups are selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, C 2-3 alkynyl and cyclopropyl .
Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения два из R21, R22 и R23 представляют собой Н, при этом другая группа выбрана из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3алкенила, С2-3алкинила и циклопропила.According to other embodiments of the present invention, two of R 21 , R 22 and R 23 are H, with the other group selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2 - 3 alkenyl, C 2 - 3 alkynyl and cyclopropyl.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения группы, которые не являются Н, выбраны из метила и этила. В некоторых из этих вариантов реализации группы, которые не являются Н, представляют собой метил.In some embodiments of the present invention, the groups other than H are selected from methyl and ethyl. In some of these embodiments, groups that are not H are methyl.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R21 представляет собой Н.According to some embodiments of the present invention, R 21 is H.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R22 представляет собой Н.According to some embodiments of the present invention, R 22 is H.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R23 представляет собой Н.According to some embodiments of the present invention, R 23 is H.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R21 и R22 представляют собой Н.According to some embodiments of the present invention, R 21 and R 22 are H.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R21 и R23 представляют собой Н.According to some embodiments of the present invention, R 21 and R 23 are H.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R22 и R23 представляют собой Н.According to some embodiments of the present invention, R 22 and R 23 are H.
Группа R2, представляющая особый интерес, представляет собой: ·The R 2 group of particular interest is: ·
R2Sb R2Sb
Если R2 представляет собой , один из R25a и R25b представляет собой Н, а другой выбран из: фенила, причем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения группа, которая не является Н, представляет собой необязательно замещенный фенил. Если необязательный заместитель фенила представляет собой галоген, он предпочтительно представляет собой фтор. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения фенильная группа является незамещенной.When R 2 is , one of R 25a and R 25b is H and the other is selected from: phenyl, phenyl being optionally substituted with a group selected from halo, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl. In some embodiments of the present invention, the group that is not H is an optionally substituted phenyl. If the optional phenyl substituent is halogen, it is preferably fluorine. In some embodiments of the present invention, the phenyl group is unsubstituted.
Если R2 представляет собой R24 выбран из: Н; C1-3 насыщенного алкила; С2-3 алкенила;If R 2 is R 24 is selected from: H; C 1-3 saturated alkyl; C 2-3 alkenyls;
С2-3 алкинила; циклопропила; фенила, причем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила. Если необязательный заместитель фенила представляет собой галоген, он предпочтительно представляет собой фтор. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения фенильная группа является незамещенной.C 2-3 alkynyl; cyclopropyl; phenyl, wherein the phenyl is optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl. If the optional phenyl substituent is halogen, it is preferably fluorine. In some embodiments of the present invention, the phenyl group is unsubstituted.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения R24 выбран из Н, метила, этила, этенила и этинила. Согласно некоторым из этих вариантов реализации R24 выбран из Н и метила.In some embodiments of the present invention, R 24 is selected from H, methyl, ethyl, ethenyl, and ethynyl. In some of these embodiments, R 24 is selected from H and methyl.
X^R26a X^R 26a
Если между С2 и C3 присутствует одинарная связь, R2 представляет собой R26b , где R26a и R26b независимо выбраны из Н, F, C1-4 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены группой, выбранной из C1-4 алкиламидо и C1-4 алкилового сложного эфира; или, если один из R26a и R26b представляет собой Н, другой выбран из нитрила и C1-4 алкилового сложного эфира.If a single bond is present between C2 and C3, R 2 is R 26b where R 26a and R 26b are independently selected from H, F, C1-4 saturated alkyl, C2-3 alkenyl, with the alkyl and alkenyl groups optionally substituted with a group chosen from from C1-4 alkylamido and C1-4 alkyl ester; or if one of R 26a and R 26b is H, the other is selected from nitrile and C1-4 alkyl ester.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения предпочтительно R26a и R26b оба представляют собой Н.According to some embodiments of the present invention, preferably R 26a and R 26b are both H.
Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения предпочтительно R26a и R26b оба представляют собой метил.According to other embodiments of the present invention, preferably R 26a and R 26b are both methyl.
Согласно другим вариантам реализации настоящего изобретения предпочтительно один из R26a иAccording to other embodiments of the present invention, preferably one of R 26a and
- 14 040749- 14 040749
R26b представляет собой Н, а другой выбран из C1-4 насыщенного алкила, C2-3 алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены. В этих дополнительных вариантах реализации еще более предпочтительно группа, которая не является Н, выбрана из метила и этила.R 26b is H and the other is selected from C 1-4 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, with the alkyl and alkenyl groups optionally substituted. In these additional embodiments, even more preferably the group that is not H is selected from methyl and ethyl.
R12. R12 .
Вышеуказанные предпочтения для R2 в равной степени применимы к R12. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения DL представляет собойThe above preferences for R 2 apply equally to R 12 . According to one embodiment of the present invention, DL is
Нагрузка лекарственным средствомDrug loading
Нагрузка лекарственным средством представляет собой среднее количество лекарственных средств ПБД на антитело, например, антитело.The drug load is the average number of PBB drugs per antibody, eg antibody.
Среднее количество лекарственных средств на антитело в препаратах ADC из реакций конъюгации может быть охарактеризовано обычными средствами, такими как УФ, ВЭЖХ с обращенной фазой, HIC, масс-спектроскопия, ИФА и электрофорез. Также может быть определено количественное распределение ADC в отношении р. С помощью ИФА можно определить усредненное значение р в конкретном препарате ADC (Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). Однако распределение значений р (лекарственное средство) не различимо на основании связывания антитело-антиген и из-за ограничения обнаружения ИФА. Кроме того, анализ методом ИФА для обнаружения конъюгатов антитело-лекарственное средство не позволяет определить, где фрагменты лекарственного средства присоединены к антителу, например, фрагменты тяжелой цепи или легкой цепи, или конкретные аминокислотные остатки. В некоторых случаях разделение, очистку и характеристику гомогенного ADC, где р представляет собой некоторое значение из ADC с другими показателями нагрузки лекарственным средством, можно осуществлять с помощью таких средств, как ВЭЖХ с обращенной фазой или электрофорез. Такие методики также применимы к другим типам конъюгатов.The average number of drugs per antibody in ADC preparations from conjugation reactions can be characterized by conventional means such as UV, reverse phase HPLC, HIC, mass spectroscopy, ELISA, and electrophoresis. The quantitative distribution of the ADC with respect to p can also be determined. ELISA can determine the average p value in a particular ADC preparation (Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson et al (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). However, the distribution of p (drug) values is not distinguishable based on antibody-antigen binding and due to limitation of ELISA detection. In addition, ELISA analysis for the detection of antibody-drug conjugates does not determine where drug fragments are attached to the antibody, such as heavy chain or light chain fragments, or specific amino acid residues. In some instances, separation, purification, and characterization of a homogeneous ADC, where p is some of the ADCs with other drug loading measures, can be accomplished by means such as reverse phase HPLC or electrophoresis. Such techniques are also applicable to other types of conjugates.
Для конъюгатов антитело-лекарственное средство согласно настоящему изобретению р ограничено количеством сайтов присоединения на антителе, т.е. количеством азидных групп. Например, антитело может иметь только одну или две азидные группы, к которым может быть присоединен линкер лекарственного средства.For antibody-drug conjugates of the present invention, p is limited by the number of attachment sites on the antibody, i. the number of azide groups. For example, an antibody may have only one or two azide groups to which a drug linker may be attached.
Как правило, во время реакции конъюгации с антителом конъюгируется меньшее, чем теоретический максимум, количество фрагментов лекарственного средства. Нагрузку (соотношение лекарственное средство/антитело) ADC можно контролировать несколькими различными способами, включая: (i) ограничение молярного избытка интермедиата лекарственное средство-линкер (D-L) или линкерного реагента по отношению к антителу, и (ii) ограничение времени реакции конъюгации или температуры.Typically, fewer than the theoretical maximum number of drug fragments are conjugated to an antibody during a conjugation reaction. The loading (drug/antibody ratio) of the ADC can be controlled in several different ways, including: (i) limiting the molar excess of the drug-linker intermediate (D-L) or linker reagent relative to the antibody, and (ii) limiting the conjugation reaction time or temperature.
Если интермедиатом лекарственное средство-линкер или линкерным реагентом, а затем фрагментом лекарственного средства, реагирует более чем одна нуклеофильная или электрофильная группа антитела, то полученный продукт представляет собой смесь конъюгатов антитело-лекарственное средство с распределением фрагментов лекарственного средства, присоединенных к антителу, например, 1, 2, 3 и т.д. Методы жидкостной хроматографии, такие как полимерная обращенная фаза (PLRP) и гидрофобное взаимодействие (HIC), могут позволить разделить соединения в смеси по величине нагрузки лекарственным средством. Могут быть выделены препараты ADC с одним значением нагрузки лекарственным средством (р), однако эти ADC с одним значением нагрузки все еще могут представлять собой гетерогенные смеси, поскольку фрагменты лекарственного средства могут быть присоединены за счет линкера в разных местах антитела.If more than one nucleophilic or electrophilic group of an antibody reacts with a drug-linker intermediate or linker reagent followed by a drug fragment, then the resulting product is a mixture of antibody-drug conjugates with a distribution of drug fragments attached to the antibody, e.g., 1 , 2, 3, etc. Liquid chromatography techniques such as reverse phase polymer (PLRP) and hydrophobic interaction (HIC) can separate compounds in a mixture based on drug loading. ADCs with a single drug loading (p) can be isolated, however, these ADCs with a single load can still be heterogeneous mixtures because the drug moieties can be linked by a linker at different sites on the antibody.
Таким образом, композиции конъюгата антитело-лекарственное средство согласно настоящему изобретению включают смеси конъюгатов антитело-лекарственное средство, в которых антитело содержит один или более фрагментов лекарственного средства ПБД и в которых фрагменты лекарственногоThus, the antibody-drug conjugate compositions of the present invention comprise mixtures of antibody-drug conjugates in which the antibody contains one or more PBB drug moieties and in which the drug moieties
- 15 040749 средства могут быть присоединены к антителу у различных аминокислотных остатков.- 15 040749 means can be attached to the antibody at various amino acid residues.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения среднее количество димерных пирролобензодиазепиновых групп на антитело находится в диапазоне от 1 до 8.According to one embodiment of the present invention, the average number of dimeric pyrrolobenzodiazepine groups per antibody ranges from 1 to 8.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения диапазон выбран из 1-4, 1-4, 24 и 1-3.According to some embodiments of the present invention, the range is selected from 1-4, 1-4, 24, and 1-3.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения на антитело приходится одна или две димерные пирролобензодиазепиновые группы.In some embodiments, the antibody has one or two dimeric pyrrolobenzodiazepine groups.
Включение других формIncluding other forms
Если не указано иное, в вышеупомянутое включены хорошо известные ионные, солевые, сольватные и защищенные формы этих заместителей. Например, ссылка на карбоновую кислоту (СООН) также включает анионную (карбоксилатную) форму (-СОО-), ее соль или сольват, а также стандартные защищенные формы. Аналогичным образом, ссылка на аминогруппу включает протонированную форму (-N+HR1R2), соль или сольват аминогруппы, например, гидрохлоридную соль, а также обычные защищенные формы аминогруппы. Аналогичным образом, ссылка на гидроксильную группу также включает анионную форму (-О-), ее соль или сольват, а также обычные защищенные формы.Unless otherwise indicated, the above includes well-known ionic, salt, solvate and protected forms of these substituents. For example, reference to a carboxylic acid (COOH) also includes the anionic (carboxylate) form (-COO-), its salt or solvate, as well as standard protected forms. Similarly, reference to an amino group includes the protonated form (-N+HR1R 2 ), a salt or solvate of the amino group, eg the hydrochloride salt, as well as conventional protected forms of the amino group. Similarly, reference to a hydroxyl group also includes the anionic form (-O-), its salt or solvate, as well as conventional protected forms.
Солиsalt
Удобным или желательным может быть получение, очистка и/или обработка соответствующей соли активного соединения, например, фармацевтически приемлемой соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей обсуждаются в Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19(1977).It may be convenient or desirable to prepare, purify and/or process an appropriate salt of the active compound, for example a pharmaceutically acceptable salt. Examples of pharmaceutically acceptable salts are discussed in Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
Например, если соединение является анионным или содержит функциональную группу, которая может быть анионной (например, -СООН может представлять собой -СОО-), тогда соль может быть образована с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают, но не ограничиваются ими, ионы щелочных металлов, такие как Na+ и K+, катионы щелочноземельных металлов, такие как Са2+ и Mg2+, и другие катионы, такие как Al3+. Примеры подходящих органических катионов включают, но не ограничиваются ими, ион аммония (т.е. NH4+) и замещенные ионы аммония (например, NH3R+, NH2R2 +, NHR3+, NR4+). Примеры некоторых подходящих замещенных ионов аммония включают те, которые получены из: этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислот, таких как лизин и аргинин. Пример обычного иона четвертичного аммония представляет собой N(CH3)4 +.For example, if the compound is anionic or contains a functional group that may be anionic (eg, -COOH may be -COO-), then a salt may be formed with a suitable cation. Examples of suitable inorganic cations include, but are not limited to, alkali metal ions such as Na + and K + , alkaline earth metal cations such as Ca 2+ and Mg 2+ , and other cations such as Al 3+ . Examples of suitable organic cations include, but are not limited to, ammonium ion (ie NH4 + ) and substituted ammonium ions (eg NH3R + , NH2R 2 + , NHR3 + , NR4 + ). Examples of some suitable substituted ammonium ions include those derived from: ethylamine, diethylamine, dicyclohexylamine, triethylamine, butylamine, ethylenediamine, ethanolamine, diethanolamine, piperazine, benzylamine, phenylbenzylamine, choline, meglumine, and tromethamine, as well as amino acids such as lysine and arginine . An example of a common quaternary ammonium ion is N(CH 3 ) 4 + .
Если соединение является катионным или содержит функциональную группу, которая может быть катионной (например, -NH2 может представлять собой -NH3 +), тогда соль может быть образована с подходящим анионом. Примеры подходящих неорганических анионов включают, но не ограничиваются ими, те, которые получены из следующих неорганических кислот: хлористоводородной, бромистоводородной, йодистоводородной, серной, сернистой, азотной, азотистой, фосфорной и фосфористой.If the compound is cationic or contains a functional group which may be cationic (eg, -NH2 may be -NH 3 + ), then a salt may be formed with a suitable anion. Examples of suitable inorganic anions include, but are not limited to, those derived from the following inorganic acids: hydrochloric, hydrobromic, hydroiodic, sulfuric, sulfurous, nitric, nitrous, phosphoric, and phosphorous.
Примеры подходящих органических анионов включают, но не ограничиваются ими, те, которые получены из следующих органических кислот: 2-ацетоксибензойной, уксусной, аскорбиновой, аспарагиновой, бензойной, камфорсульфоновой, коричной, лимонной, эдетической, этандисульфоновой, этансульфоновой, фумаровой, глюкогептоновой, глюконовой, глутаминовой, гликолевой, гидроксималеиновой, гидроксинафталинкарбоновой, изетионовой, молочной, лактобионовой, лауриновой, малеиновой, яблочной, метансульфоновой, муциновой, олеиновой, щавелевой, пальмитиновой, памоевой, пантотеновой, фенилуксусной, фенилсульфоновой, пропионовой, пировиноградной, салициловой, стеариновой, янтарной, сульфаниловой, винной, толуолсульфоновой, трифторуксусной кислоты и валериановой кислоты. Примеры подходящих полимерных органических анионов включают, но не ограничиваются ими, те, которые получены из следующих полимерных кислот: дубильной кислоты, карбоксиметилцеллюлозы.Examples of suitable organic anions include, but are not limited to, those derived from the following organic acids: 2-acetoxybenzoic, acetic, ascorbic, aspartic, benzoic, camphorsulfonic, cinnamic, citric, edetic, ethanedisulfonic, ethanesulfonic, fumaric, glucoheptonic, gluconic, glutamic, glycolic, hydroxymaleic, hydroxynaphthalenecarboxylic, isethionic, lactic, lactobionic, lauric, maleic, malic, methanesulfonic, mucinic, oleic, oxalic, palmitic, pamoic, pantothenic, phenylacetic, phenylsulfonic, propionic, pyruvic, salicylic, stearic, stearic, sulfonic tartaric, toluenesulfonic, trifluoroacetic acid and valeric acid. Examples of suitable polymeric organic anions include, but are not limited to, those derived from the following polymeric acids: tannic acid, carboxymethyl cellulose.
Сольватыsolvates
Удобным или желательным может быть получение, очистка и/или обработка соответствующего сольвата активного соединения. В настоящем документе термин сольват используется в общепринятом смысле для обозначения комплекса растворенного вещества (например, активного соединения, соли активного соединения) и растворителя. Если растворитель представляет собой воду, сольват удобно называть гидратом, например, моногидратом, дигидратом, тригидратом и т.д.It may be convenient or desirable to prepare, purify and/or process the appropriate solvate of the active compound. In this document, the term solvate is used in the conventional sense to mean a complex of a solute (eg, active compound, salt of the active compound) and a solvent. When the solvent is water, the solvate is conveniently referred to as a hydrate, such as monohydrate, dihydrate, trihydrate, etc.
Настоящее изобретение включает соединения, в которых растворитель присоединен за счет иминной связи фрагмента ПБД, как проиллюстрировано ниже, где растворитель представляет собой воду или спирт (RAOH, где RA представляет собой C1-4 алкил):The present invention includes compounds in which the solvent is attached via an imine bond of the PBB moiety, as illustrated below, where the solvent is water or alcohol (RAOH, where R A is C 1-4 alkyl):
Эти формы могут называться карбиноламинной формой и формой простого карбиноламинного эфира ПБД (как описано в разделе, касающемся R10 выше). Баланс этих равновесий зависит от условий, вThese forms may be referred to as the carbinolamine form and the carbinolamine ether form of PBB (as described in the R 10 section above). The balance of these equilibria depends on the conditions in which
- 16 040749 которых находятся соединения, а также от структуры самого фрагмента.- 16 040749 of which the compounds are located, as well as from the structure of the fragment itself.
Эти конкретные соединения могут быть выделены в твердой форме, например, с помощью лиофилизации.These particular compounds may be isolated in solid form, for example by lyophilization.
ИзомерыIsomers
Некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в одной или более конкретных геометрических, оптических, энантиомерных, диастериомерных, эпимерных, атропических, стереоизомерных, таутомерных, конформационных или аномерных формах, включая, но не ограничиваясь ими, цис- и транс-формы; Е- и Z-формы; с-, t- и r- формы; эндо- и экзоформы; R-, S- и мезоформы; Dи L-формы; d- и l-формы; (+) и (-) формы; кето, енол- и енолят-формы; син- и анти-формы; синклинальные и антиклинальные формы; α- и β-формы; аксиальные и экваториальные формы; формы ванны, кресла, твист, конверта и полу-кресла; и их комбинации, далее в совокупности называемые изомерами (или изомерными формами).Some compounds of the present invention may exist in one or more particular geometric, optical, enantiomeric, diasteriomeric, epimeric, atropic, stereoisomeric, tautomeric, conformational, or anomeric forms, including, but not limited to, cis and trans forms; E- and Z-forms; c-, t- and r-forms; endo- and exoforms; R-, S- and mesoforms; D and L-shapes; d- and l-forms; (+) and (-) shapes; keto, enol and enolate forms; syn- and anti-forms; synclinal and anticlinal forms; α- and β-forms; axial and equatorial forms; bath, armchair, twist, envelope and semi-armchair forms; and combinations thereof, hereinafter collectively referred to as isomers (or isomeric forms).
Термин хиральный относится к молекулам, зеркальные отражения которых не способны накладываться друг на друга, в то время как термин ахиральный относится к молекулам, зеркальные отражения которых накладываются друг на друга.The term chiral refers to molecules whose mirror images are not able to overlap each other, while the term achiral refers to molecules whose mirror images overlap.
Термин стереоизомеры относится к соединениям, которые имеют идентичное химическое строение, но различаются в отношении расположения атомов или групп в пространстве.The term stereoisomers refers to compounds that have an identical chemical structure but differ in the arrangement of atoms or groups in space.
Диастереомер относится к стереоизомеру с двумя или более центрами хиральности, молекулы которого не являются зеркальным отражением друг друга. Диастереомеры имеют различные физические свойства, например, точки плавления, точки кипения, спектральные свойства и реакционную способность. Смеси диастереомеров могут разделяться при аналитических процедурах высокого разрешения, таких как электрофорез и хроматография.A diastereomer refers to a stereoisomer with two or more centers of chirality whose molecules are not mirror images of each other. Diastereomers have different physical properties, such as melting points, boiling points, spectral properties, and reactivity. Mixtures of diastereomers can be separated by high resolution analytical procedures such as electrophoresis and chromatography.
Энантиомеры относятся к двум стереоизомерам соединения, которые не являются наложенными друг на друга зеркальными отражениями.Enantiomers refer to two stereoisomers of a compound that are not superimposed mirror images of each other.
В настоящем документе стереохимические определения и правила, как правило, соответствуют S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; и Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Соединения согласно настоящему изобретению могут содержать асимметричные или хиральные центры и, следовательно, существовать в различных стереоизомерных формах. Предусмотрено, что все стереоизомерные формы соединений согласно настоящему изобретению, включая, но не ограничиваясь ими, диастереомеры, энантиомеры и атропоизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, составляют часть настоящего изобретения. Многие органические соединения существуют в оптически активных формах, т.е. они обладают способностью вращать плоскость плоскополяризованного света. При описании оптически активного соединения префиксы D и L или R и S используются для обозначения абсолютной конфигурации молекулы относительно ее хирального(ых) центра(ов). Префиксы d и l или (+) и (-) используются для обозначения знака вращения соединением плоскополяризованного света, при этом (-) или l означают, что соединение является левовращающим. Соединение с префиксом (+) или d является правовращающим. Для конкретной химической структуры эти стереоизомеры идентичны, за исключением того, что они являются зеркальным отражением друг друга. Конкретный стереоизомер также может называться энантиомером, и смесь таких изомеров часто называют энантиомерной смесью. Смесь энантиомеров в соотношении 50:50 называется рацемической смесью или рацематом, что может иметь место в тех случаях, когда в химической реакции или процессе отсутствовал стереоотбор или стереоспецифичность. Термины рацемическая смесь и рацемат относятся к эквимолярной смеси двух энантиомерных молекул, лишенной оптической активности.In this document, stereochemical definitions and rules generally follow S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Compounds of the present invention may contain asymmetric or chiral centers and therefore exist in various stereoisomeric forms. It is intended that all stereoisomeric forms of the compounds of the present invention, including but not limited to diastereomers, enantiomers and atropisomers, as well as mixtures thereof, such as racemic mixtures, form part of the present invention. Many organic compounds exist in optically active forms, i.e. they have the ability to rotate the plane of plane polarized light. When describing an optically active compound, the prefixes D and L or R and S are used to indicate the absolute configuration of the molecule about its chiral center(s). The prefixes d and l or (+) and (-) are used to indicate the sign of rotation of a plane-polarized light connection, with (-) or l indicating that the connection is left-handed. A connection with a (+) or d prefix is dextrorotatory. For a particular chemical structure, these stereoisomers are identical, except that they are mirror images of each other. A particular stereoisomer may also be referred to as an enantiomer, and a mixture of such isomers is often referred to as an enantiomeric mixture. A mixture of enantiomers in a ratio of 50:50 is called a racemic mixture or racemate, which can occur when there was no stereoselection or stereospecificity in a chemical reaction or process. The terms racemic mixture and racemate refer to an equimolar mixture of two enantiomeric molecules devoid of optical activity.
Следует отметить, что за исключением того, что обсуждается ниже для таутомерных форм, намеренно исключенных из термина изомеры, используемого в настоящем документе, это структурные (или относящиеся к строению) изомеры (т.е. изомеры, которые различаются по связям между атомами, а не просто по положению атомов в пространстве). Например, ссылка на метоксигруппу, -OCH3, не должна рассматриваться как ссылка на ее структурный изомер, гидроксиметильную группу, -CH2OH. Аналогичным образом, ссылка на орто-хлорфенил не должна рассматриваться как ссылка на его структурный изомер, мета-хлорфенил. Однако ссылка на класс структур вполне может включать структурно изомерные формы, попадающие в этот класс (например, C1.7алкил включает н-пропил и изопропил; бутил включает н-, изо-, втор- и трет-бутил; метоксифенил включает орто-, мета- и пара-метоксифенил).It should be noted that, except as discussed below for tautomeric forms, intentionally excluded from the term isomers as used herein, these are structural (or structural) isomers (i.e., isomers that differ in the bonds between atoms, and not just by the position of atoms in space). For example, a reference to a methoxy group, -OCH 3 , should not be taken as a reference to its structural isomer, a hydroxymethyl group, -CH2OH. Likewise, a reference to ortho-chlorophenyl should not be taken as a reference to its structural isomer, meta-chlorophenyl. However, reference to a class of structures may well include structural isomeric forms that fall within that class (for example, C 1 .7 alkyl includes n-propyl and isopropyl; butyl includes n-, iso-, sec-, and tert-butyl; methoxyphenyl includes ortho- , meta- and para-methoxyphenyl).
Вышеупомянутое исключение не относится к таутомерным формам, например, кето-, енол- и енолят-формам, например, как в следующих таутомерных парах: кето/енол (проиллюстрирована ниже), имин/енамин, амид/иминоспирт, амидин/амидин, нитрозо/оксим, тиокетон/енетиол, Nнитрозо/гидроксиазо и нитро/аци-нитро.The above exception does not apply to tautomeric forms, e.g. keto, enol and enolate forms, for example, as in the following tautomeric pairs: keto/enol (illustrated below), imine/enamine, amide/iminoalcohol, amidine/amidine, nitroso/ oxime, thioketone/enethiol, N-nitroso/hydroxyazo and nitro/acine-nitro.
- 17 040749 ? ,О ч он Н+ ч О' —c-cz — с=с' — c=cz - 17 040749 ? ,O h he H + h O' -cc z - c=c' - c=c z
I 4 z 4 H+ / \ кето енол енолатI 4 z 4 H + / \ keto enol enolate
Термин таутомер или таутомерная форма относится к структурным изомерам с различными энергиями, которые способны к взаимопревращениям через низкоэнергетический барьер. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимопревращения за счет миграции протона, такие как изомеризация кето-енол и имин-енамин. Валентные таутомеры включают взаимопревращения путем перегруппировки некоторых связывающих электронов.The term tautomer or tautomeric form refers to structural isomers with different energies that are capable of interconversion across a low energy barrier. For example, proton tautomers (also known as prototropic tautomers) include proton migration interconversions such as keto-enol and imine-enamine isomerization. Valence tautomers involve interconversions by rearranging some of the bonding electrons.
Следует отметить, что в термин изомер включены конкретно соединения с одним или более изотопными замещениями. Например, Н может быть в любой изотопной форме, включая Н1, Н2 (D) и Н3 (Т); С может быть в любой изотопной форме, включая С12, С13 и С14; О может быть в любой изотопной форме, включая О16 и О18; и тому подобное.It should be noted that the term isomer specifically includes compounds with one or more isotopic substitutions. For example, H may be in any isotopic form, including H 1 , H 2 (D) and H 3 (T); C may be in any isotopic form, including C 12 , C 13 and C 14 ; The O may be in any isotopic form, including O 16 and O 18 ; etc.
Примеры изотопов, которые могут быть встроены в соединения согласно настоящему изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, такие как, но не ограничиваясь ими, Н2 (дейтерий, D), Н3 (тритий), С11, С13, С14, N15, F18, Р31, Р32, S35, Cl36 и I125. Включены различные меченые изотопами соединения согласно настоящему изобретению, например, те, в которые встроены радиоактивные изотопы, такие как Н3, С13 и С14. Такие меченые изотопами соединения можно применять в метаболических исследованиях, исследованиях кинетики реакций, методиках обнаружения или визуализации, таких как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) или однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ), включая анализы распределения лекарственного средства или субстрата в ткани, или при радиоактивном лечении пациентов. Меченые или замещенные дейтерием терапевтические соединения согласно настоящему изобретению могут иметь улучшенные свойства DMPK (метаболизм и фармакокинетика лекарственного средства), связанные с распределением, метаболизмом и выделением (ADME). Замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, может обеспечить определенные терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например, увеличением периода полувыведения in vivo или снижением потребностей в дозировке. F18меченое соединение можно применять для исследований ПЭТ или ОФЭКТ. Меченые изотопами соединения согласно настоящему изобретению и их пролекарства обычно можно получить путем выполнения процедур, раскрытых в схемах или в примерах и препаратах, описанных ниже, заменив немеченый изотопом реагент легкодоступным меченым изотопом реагентом. Кроме того, замещение более тяжелыми изотопами, в частности, дейтерием (т.е. Н2 или D), может обеспечить определенные терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например, увеличенным периодом полувыведения in vivo или сниженными потребностями в дозировке или улучшением терапевтического индекса. Следует понимать, что в данном случае дейтерий рассматривается как заместитель. Концентрация такого более тяжелого изотопа, в частности, дейтерия, может определяться коэффициентом изотопного обогащения. В соединениях согласно настоящему изобретению любой атом, намерено не обозначенный как конкретный изотоп, предназначен для представления любого стабильного изотопа этого атома.Examples of isotopes that can be incorporated into compounds of the present invention include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, fluorine, and chlorine, such as, but not limited to, H 2 (deuterium, D), H 3 (tritium) , C 11 , C 13 , C 14 , N 15 , F 18 , R 31 , R 32 , S 35 , Cl 36 and I 125 . Various isotopically labeled compounds of the present invention are included, for example those incorporating radioactive isotopes such as H 3 , C 13 and C 14 . Such isotopically labeled compounds can be used in metabolic studies, reaction kinetics studies, detection or imaging techniques such as positron emission tomography (PET) or single photon emission computed tomography (SPECT), including analyzes of drug or substrate distribution in tissue, or in radioactive treatment of patients. The deuterium-labeled or substituted therapeutic compounds of the present invention may have improved DMPK (metabolism and drug pharmacokinetics) associated distribution, metabolism and excretion (ADME) properties. Substitution with heavier isotopes, such as deuterium, may provide certain therapeutic benefits due to greater metabolic stability, such as increased in vivo half-life or reduced dosage requirements. F 18 labeled compound can be used for PET or SPECT studies. The isotopically labeled compounds of the present invention and their prodrugs can generally be prepared by following the procedures disclosed in the Schemes or in the Examples and Preparations described below, replacing the non-isotopically labeled reagent with a readily available isotopically labeled reagent. In addition, substitution with heavier isotopes, in particular deuterium (i.e., H 2 or D), may provide certain therapeutic advantages due to greater metabolic stability, such as increased in vivo half-life or reduced dosage requirements or improved therapeutic index. . It should be understood that in this case, deuterium is considered as a substituent. The concentration of such a heavier isotope, in particular deuterium, can be determined by the isotopic enrichment factor. In the compounds of the present invention, any atom not intentionally designated as a particular isotope is intended to represent any stable isotope of that atom.
Если не указано иное, ссылка на конкретное соединение включает все такие изомерные формы, включая (полностью или частично) рацемические и другие их смеси. Способы получения (например, асимметричного синтеза) и разделения (например, фракционной кристаллизации и хроматографические средства) таких изомерных форм либо известны в данной области техники, либо могут быть легко получены известным образом путем адаптации способов, изложенных в настоящем документе, или известных способов.Unless otherwise indicated, reference to a specific compound includes all such isomeric forms, including (in whole or in part) racemic and other mixtures thereof. Methods for obtaining (eg, asymmetric synthesis) and separation (eg, fractional crystallization and chromatographic means) of such isomeric forms are either known in the art, or can be easily obtained in a known manner by adapting the methods described herein or known methods.
Биологическая активностьBiological activity
Анализы пролиферации клеток in vitro.In vitro cell proliferation assays.
Обычно цитотоксическую или цитостатическую активность конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) измеряют путем: воздействия на клетки млекопитающих, имеющие рецепторные белки, антитела из ADC в среде для культивирования клеток; культивирования клеток в течение периода от примерно 6 ч до примерно 5 дней; и измерения жизнеспособности клеток. Клеточные анализы in vitro применяют для измерения жизнеспособности (пролиферации), цитотоксичности и индукции апоптоза (активации каспазы) ADC согласно настоящему изобретению.Typically, the cytotoxic or cytostatic activity of an antibody-drug conjugate (ADC) is measured by: exposing mammalian cells having receptor proteins to antibodies from the ADC in a cell culture medium; culturing the cells for a period of about 6 hours to about 5 days; and cell viability measurements. In vitro cell assays are used to measure the viability (proliferation), cytotoxicity, and apoptosis (caspase activation) induction of ADCs of the present invention.
Эффективность конъюгатов антитело-лекарственное средство in vitro можно измерить с помощью анализа пролиферации клеток. Люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® представляет собой коммерчески доступный (Promega Corp., Мэдисон, Висконсин, США) способ гомогенного анализа, основанный на рекомбинантной экспрессии люциферазы Coleoptera (патенты США № 5583024; 5674713 и 5700670). Этот анализ пролиферации клеток позволяет определить количество жизнеспособных клеток в культуре на основании количественного определения присутствующего АТФ, индикатора метаболически активных клеток (Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). АнализThe in vitro potency of antibody-drug conjugates can be measured by cell proliferation assay. The CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay is a commercially available (Promega Corp., Madison, WI, USA) homogeneous assay method based on recombinant expression of Coleoptera luciferase (US Pat. Nos. 5,583,024; 5,674,713 and 5,700,670). This cell proliferation assay determines the number of viable cells in culture based on the quantification of ATP present, an indicator of metabolically active cells (Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88; US 6602677). Analysis
- 18 040749- 18 040749
CellTiter-Glo® проводят в 96-луночном формате, что делает его пригодным для автоматического высокопроизводительного скрининга (HTS) (Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). Процедура гомогенного анализа включает добавление одного реагента (реагент CellTiter-Glo®) непосредственно к клеткам, культивируемым в среде, дополненной сывороткой. Промывка клеток, удаление среды и несколько этапов пипетирования не требуются. Система позволяет обнаруживать только 15 клеток на лунку в 384луночном формате через 10 мин после добавления реагента и перемешивания. Клетки можно обрабатывать непрерывно с применением ADC, или их можно обрабатывать и отделять от ADC. Обычно клетки, обработанные кратковременно, т.е. 3 ч, проявляли эффективность, аналогичную таковой клеток, которые обрабатывали непрерывно.CellTiter-Glo® is run in a 96-well format making it suitable for automated high throughput screening (HTS) (Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404). The homogeneous assay procedure involves adding one reagent (CellTiter-Glo® Reagent) directly to cells cultured in serum-supplemented medium. Cell washing, media removal, and multiple pipetting steps are not required. The system only detects 15 cells per well in a 384-well format 10 minutes after reagent addition and mixing. Cells can be processed continuously using the ADC, or they can be processed and separated from the ADC. Typically, cells treated briefly, ie. 3 h showed efficiency similar to that of cells that were treated continuously.
Гомогенный формат добавить-смешать-измерить приводит к лизису клеток и возникновению люминесцентного сигнала, пропорционального количеству присутствующего АТФ. Количество АТФ прямо пропорционально количеству клеток, присутствующих в культуре. В анализе CellTiter-Glo® генерируется люминесцентный сигнал типа свечения, возникающий в результате реакции люциферазы, период полужизни которого обычно превышает пять часов, в зависимости от типа клеток и используемой среды. Жизнеспособные клетки отражают в относительных единицах свечения (RLU). Субстрат, люциферин жука, окислительно декарбоксилируется рекомбинантной люциферазой светлячка с сопутствующим превращением АТФ в АМФ и испусканием фотонов.The homogeneous add-mix-measure format results in cell lysis and a luminescent signal proportional to the amount of ATP present. The amount of ATP is directly proportional to the number of cells present in the culture. The CellTiter-Glo® assay generates a luciferase-type luminescent signal that typically has a half-life of more than five hours, depending on the cell type and media used. Viable cells reflect in relative luminous units (RLU). The substrate, beetle luciferin, is oxidatively decarboxylated by recombinant firefly luciferase with concomitant conversion of ATP to AMP and emission of photons.
Эффективность конъюгатов антитело-лекарственное средство in vitro также может быть измерена с помощью анализа цитотоксичности. Культивируемые прикрепленные клетки промывают ФСБ, отделяют с применением трипсина, разбавляют в полной среде, содержащей 10% ФСТ, центрифугируют, повторно суспендируют в свежей среде и подсчитывают с помощью гемоцитометра. Суспензионные культуры подсчитывают непосредственно. Подходящие для подсчета монодисперсные клеточные суспензии могут потребовать перемешивания суспензии путем повторной аспирации для разрушения скоплений клеток.The in vitro efficacy of antibody-drug conjugates can also be measured by cytotoxicity assay. Cultured adherent cells are washed with PBS, separated using trypsin, diluted in complete medium containing 10% FST, centrifuged, resuspended in fresh medium and counted with a hemocytometer. Suspension cultures are counted directly. Monodisperse cell suspensions suitable for enumeration may require agitation of the suspension by repeated aspiration to break up cell clumps.
Суспензию клеток разбавляют до целевой плотности посева и распределяют (по 100 мкл на лунку) в черные 96-луночные планшеты. Планшеты с прикрепленными клеточными линиями инкубируют в течение ночи, чтобы обеспечить прикрепление. Суспензию клеточных культур можно использовать в день посева.The cell suspension is diluted to the target seeding density and dispensed (100 µl per well) into black 96-well plates. Plates with attached cell lines are incubated overnight to allow attachment. The cell culture suspension can be used on the day of seeding.
Исходный раствор (1 мл) ADC (20 мкг/мл) получают в соответствующей среде для культивирования клеток. Последовательные 10-кратные разведения маточного ADC получают в центрифужных пробирках объемом 15 мл путем последовательного переноса 100 мкл в 900 мкл среды для культивирования клеток.A stock solution (1 ml) of ADC (20 μg/ml) was prepared in an appropriate cell culture medium. Serial 10-fold dilutions of stock ADC are prepared in 15 ml centrifuge tubes by sequentially transferring 100 µl to 900 µl of cell culture medium.
Лунки с четырьмя повторами каждого разведения ADC (100 мкл) распределяют в 96-луночных черных планшетах, в которые предварительно высеяна суспензия клеток (100 мкл) с получением конечного объема 200 мкл. В контрольные лунки вносят среду для культивирования клеток (100 мкл).Wells with four replicates of each dilution of ADC (100 µl) were dispensed into 96-well black plates pre-seeded with cell suspension (100 µl) to give a final volume of 200 µl. Control wells are filled with cell culture medium (100 µl).
Если время удвоения клеточной линии превышает 30 ч, инкубация ADC длится 5 дней, в ином случае проводят четырехдневную инкубацию.If the doubling time of the cell line exceeds 30 hours, the ADC incubation lasts 5 days, otherwise spend a four-day incubation.
В конце инкубационного периода жизнеспособность клеток оценивают с помощью анализа Alamar blue. AlamarBlue (Invitrogen) распределяют по всему планшету (по 20 мкл на лунку) и инкубируют в течение 4 ч. Флуоресценцию Alamar blue измеряют при возбуждении 570 нм и испускании 585 нм на считывающем устройстве для планшетов Varioskan Flash. Процент выживания клеток рассчитывают на основании средней интенсивности флуоресценции в обработанных ADC лунках по сравнению со средней интенсивностью флуоресценции в контрольных лунках.At the end of the incubation period, cell viability is assessed using the Alamar blue assay. AlamarBlue (Invitrogen) is dispensed throughout the plate (20 µl per well) and incubated for 4 hours. Alamar blue fluorescence is measured at 570 nm excitation and 585 nm emission on a Varioskan Flash plate reader. Percent cell survival is calculated based on the average fluorescence intensity in the ADC-treated wells compared to the average fluorescence intensity in the control wells.
ПрименениеApplication
Конъюгаты согласно настоящему изобретению можно применять, чтобы обеспечить соединение ПБД в целевом местоположении.The conjugates of the present invention can be used to provide PBB connection at the target location.
Целевое местоположение предпочтительно представляет собой популяцию пролиферативных клеток. Антитело представляет собой антитело к антигену, присутствующему в популяции пролиферативных клеток.The target location is preferably a population of proliferative cells. An antibody is an antibody against an antigen present in a population of proliferative cells.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения антиген отсутствует или присутствует на сниженном уровне в популяции непролиферативных клеток по сравнению с количеством антигена, присутствующего в популяции пролиферативных клеток, например, популяции опухолевых клеток.In one embodiment of the present invention, the antigen is absent or present at a reduced level in a population of non-proliferative cells compared to the amount of antigen present in a population of proliferative cells, such as a population of tumor cells.
В целевом местоположении линкер может быть расщеплен для высвобождения соединения RelA. Таким образом, конъюгат можно применять для селективного обеспечения соединения RelA в целевом местоположении.At the target location, the linker can be cleaved to release the RelA compound. Thus, the conjugate can be used to selectively provide a RelA compound at a target location.
Линкер может быть расщеплен ферментом, присутствующим в целевом местоположении.The linker can be cleaved with an enzyme present at the target location.
Целевое местоположение может быть in vitro, in vivo или ex vivo.The target location may be in vitro, in vivo or ex vivo.
Соединения конъюгата антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению включают соединения, которые можно применять для противораковой активности. В частности, соединения (конъюгаты) включают антитело, конъюгированное, т.е. ковалентно присоединенное с помощью линкера, с фрагментом лекарственного средства ПБД, т.е. токсином. Если лекарственное средство не конъюгировано с антителом, лекарственное средство ПБД оказывает цитотоксическое действие. ТакимThe antibody-drug conjugate (ADC) compounds of the present invention include compounds that can be used for anticancer activity. In particular, the compounds (conjugates) include an antibody conjugated, i. covalently attached via a linker to the PBB drug moiety, i. e. toxin. If the drug is not conjugated to an antibody, the PBB drug has a cytotoxic effect. So
- 19 040749 образом, биологическую активность фрагмента лекарственного средства ПБД модулируют путем конъюгации с антителом. Конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению селективно доставляют эффективную дозу цитотоксического агента в опухолевую ткань, в результате чего может быть достигнута более высокая селективность, т.е. более низкая эффективная доза.- 19 040749 Thus, the biological activity of a PBB drug fragment is modulated by conjugation with an antibody. The antibody-drug conjugates (ADCs) of the present invention selectively deliver an effective dose of a cytotoxic agent to tumor tissue, whereby higher selectivity can be achieved, i.e. lower effective dose.
Таким образом, в одном аспекте, согласно настоящему изобретению предложено соединениеконъюгат, описанное в настоящем документе, для применения в терапии.Thus, in one aspect, the present invention provides a conjugate compound described herein for use in therapy.
В дополнительном аспекте также предложено соединение-конъюгат, описанное в настоящем документе, для применения в лечении пролиферативного заболевания. Согласно второму аспекту настоящего изобретения предложено применение соединения конъюгата при изготовлении лекарственного средства для лечения пролиферативного заболевания.In a further aspect, there is also provided a conjugate compound described herein for use in the treatment of a proliferative disease. According to a second aspect of the present invention, the use of a conjugate compound in the manufacture of a medicament for the treatment of a proliferative disease is provided.
Специалист в данной области техники может легко определить, обладает ли конъюгат-кандидат лечебным действием в отношении пролиферативного состояния для любого конкретного типа клеток. Например, анализы, которые можно удобно применять для оценки активности, обеспеченной конкретным соединением, описаны в примерах ниже.One skilled in the art can easily determine if a candidate conjugate has a curative effect on a proliferative condition for any particular cell type. For example, assays that can be conveniently used to evaluate the activity provided by a particular compound are described in the examples below.
Термин пролиферативное заболевание относится к неблагоприятной или неконтролируемой клеточной пролиферации избыточных или патологических клеток, которая является нежелательной, такой как неопластическое или гиперпластическое размножение, будь то in vitro или in vivo.The term proliferative disease refers to unfavorable or uncontrolled cellular proliferation of excess or pathological cells that is undesirable, such as neoplastic or hyperplastic proliferation, whether in vitro or in vivo.
Конъюгаты, направленные против DLK-1.Conjugates directed against DLK-1.
Примеры пролиферативных состояний включают, но не ограничиваются ими, доброкачественную, предзлокачественную и злокачественную клеточную пролиферацию, включая, но не ограничиваясь ими, новообразования и опухоли (например, гистиоцитому, глиому, астроцитому, остеому), разные виды рака (например, рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак желудочно-кишечного тракта, рак кишечника, рак толстой кишки, карциному молочной железы, карциному яичников, рак простаты, рак яичка, рак печени, рак почек, рак мочевого пузыря, рак поджелудочной железы, рак мозга, саркому, остеосаркому, саркому Капоши, меланому), лимфомы, лейкозы, псориаз, заболевания костей, фибропролиферативные нарушения (например, соединительных тканей) и атеросклероз. Разные виды рака, представляющие особый интерес, включают, но не ограничиваются ими, лейкозы и разные виды рака яичников.Examples of proliferative conditions include, but are not limited to, benign, premalignant, and malignant cell proliferation, including, but not limited to, neoplasms and tumors (eg, histiocytoma, glioma, astrocytoma, osteoma), various cancers (eg, lung cancer, small cell lung cancer, gastrointestinal cancer, colon cancer, colon cancer, breast carcinoma, ovarian carcinoma, prostate cancer, testicular cancer, liver cancer, kidney cancer, bladder cancer, pancreatic cancer, brain cancer, sarcoma, osteosarcoma, Kaposi's sarcoma, melanoma), lymphomas, leukemias, psoriasis, bone disease, fibroproliferative disorders (eg, connective tissue), and atherosclerosis. Various cancers of particular interest include, but are not limited to, leukemias and various ovarian cancers.
Лечить можно любой тип клеток, включая, но не ограничиваясь ими, легких, желудочно-кишечного тракта (включая, например, кишечник, толстую кишку), груди (молочной железы), яичника, простаты, печени (печеночный), почки (почечный), мочевого пузыря, поджелудочной железы, мозга и кожи.Any cell type can be treated, including, but not limited to, lung, gastrointestinal tract (including, for example, intestines, colon), breast (breast), ovary, prostate, liver (hepatic), kidney (renal), bladder, pancreas, brain and skin.
Нарушения, представляющие особый интерес, включают, но не ограничиваются ими, разные виды рака, включая разные виды метастатического рака и метастатические раковые клетки, такие как циркулирующие опухолевые клетки, которые могут обнаруживаться циркулирующими в жидкостях организма, таких как кровь или лимфа. Разные виды рака, представляющие особый интерес, включают: гепатоцеллюлярную карциному, гепатобластому, немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак желудка, рак поджелудочной железы, нейробластому, рак надпочечников, феохромоцитому, параганглиому, медуллярную карциному щитовидной железы, рак скелетных мышц, липосаркому, глиому, опухоль Вильмса, нейроэндокринные опухоли, острый миелолейкоз и миелодиспластический синдром.Disorders of particular interest include, but are not limited to, various types of cancer, including various types of metastatic cancer and metastatic cancer cells such as circulating tumor cells that can be found circulating in body fluids such as blood or lymph. Cancers of particular interest include: hepatocellular carcinoma, hepatoblastoma, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, colon cancer, breast cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, neuroblastoma, adrenal cancer, pheochromocytoma, paraganglioma, medullary thyroid carcinoma glands, skeletal muscle cancer, liposarcoma, glioma, Wilms tumor, neuroendocrine tumors, acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome.
Другие нарушения, представляющие интерес, включают любое состояние, при котором DLK1 сверхэкспрессируется или при котором антагонизм DLK1 обеспечит клиническую пользу. Они включают иммунные нарушения, сердечно-сосудистые нарушения, тромбоз, диабет, нарушения контрольной точки иммунного ответа, фиброзные нарушения (фиброз) или пролиферативные заболевания, такие как рак, в частности, метастатический рак.Other disorders of interest include any condition in which DLK1 is overexpressed or in which DLK1 antagonism would provide clinical benefit. These include immune disorders, cardiovascular disorders, thrombosis, diabetes, immune response checkpoint disorders, fibrotic disorders (fibrosis), or proliferative diseases such as cancer, in particular metastatic cancer.
Лечить можно любой тип клеток, включая, но не ограничиваясь ими, легких, желудочно-кишечного тракта (включая, например, кишечник, толстую кишку), груди (молочной железы), яичника, простаты, печени (печеночный), почек (почечный), мочевого пузыря, поджелудочной железы, мозга и кожи.Any cell type can be treated, including, but not limited to, lung, gastrointestinal tract (including, for example, intestines, colon), breast (breast), ovary, prostate, liver (hepatic), kidney (renal), bladder, pancreas, brain and skin.
Нарушения, представляющие особый интерес, включают, но не ограничиваются ими, разные виды рака, включая разные виды метастатического рака и метастатические раковые клетки, такие как циркулирующие опухолевые клетки, которые могут обнаруживаться циркулирующими в жидкостях организма, таких как кровь или лимфа. Разные виды рака, представляющие особый интерес, включают мезотелиому, рак легких, рак яичников и рак поджелудочной железы.Disorders of particular interest include, but are not limited to, various types of cancer, including various types of metastatic cancer and metastatic cancer cells such as circulating tumor cells that can be found circulating in body fluids such as blood or lymph. Cancers of particular interest include mesothelioma, lung cancer, ovarian cancer and pancreatic cancer.
Другие нарушения, представляющие интерес, включают любое состояние, при котором мезотелин сверхэкспрессируется или при котором антагонизм мезотелина обеспечит клиническую пользу. Они включают иммунные нарушения, сердечнососудистые нарушения, тромбоз, диабет, нарушения контрольной точки иммунного ответа, фиброзные нарушения (фиброз) или пролиферативные заболевания, такие как рак, в частности, метастатический рак.Other disorders of interest include any condition in which mesothelin is overexpressed or in which mesothelin antagonism would provide clinical benefit. These include immune disorders, cardiovascular disorders, thrombosis, diabetes, immune response checkpoint disorders, fibrotic disorders (fibrosis) or proliferative diseases such as cancer, in particular metastatic cancer.
Предусмотрено, что конъюгаты антитело-лекарственное средство (ADC) согласно настоящему изобретению можно применять для лечения различных заболеваний или нарушений, например, характеризующихся сверхэкспрессией опухолевого антигена. Примерные состояния или гиперпролиферативные нарушения включают доброкачественные или злокачественные опухоли; лейкоз, гематологические и лимфоидные злокачественные новообразования. Другие примеры включают нейрональные, глиальные,It is contemplated that the antibody-drug conjugates (ADCs) of the present invention may be used to treat various diseases or disorders, for example those characterized by overexpression of a tumor antigen. Exemplary conditions or hyperproliferative disorders include benign or malignant tumors; leukemia, hematological and lymphoid malignancies. Other examples include neuronal, glial,
- 20 040749 астроцитарные, гипоталамические, железистые, макрофагальные, эпителиальные, стромальные, бластоцельные, воспалительные, ангиогенные и иммунологические, включая аутоиммунные, нарушения.- 20 040749 astrocytic, hypothalamic, glandular, macrophage, epithelial, stromal, blastocele, inflammatory, angiogenic and immunological, including autoimmune, disorders.
Обычно заболевание или нарушение, подлежащее лечению, представляет собой гиперпролиферативное заболевание, такое как рак. Примеры рака, подлежащего лечению, включают, но не ограничиваются ими, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфоидные злокачественные новообразования. Более конкретные примеры таких видов рака включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, аденокарциному легких и плоскоклеточную карциному легких, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, рак ЖКТ или рак желудка, включая рак желудочно-кишечного тракта, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или карциному матки, карциному слюнных желез, рак почек или почечный рак, рак простаты, рак влагалища, рак щитовидной железы, карциному печени, карциному анального канала, карциному полового члена, а также рак головы и шеи.Typically, the disease or disorder being treated is a hyperproliferative disease such as cancer. Examples of cancers to be treated include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma, and leukemia or lymphoid malignancies. More specific examples of such cancers include squamous cell carcinoma (eg, epithelial squamous cell carcinoma), lung cancer, including small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, adenocarcinoma of the lung and squamous cell carcinoma of the lung, peritoneal cancer, hepatocellular carcinoma, gastrointestinal cancer, or gastric cancer, including cancer. gastrointestinal tract, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, hepatoma, breast cancer, colon cancer, rectal cancer, colorectal cancer, endometrial or uterine carcinoma, salivary carcinoma gland cancer, kidney or kidney cancer, prostate cancer, vaginal cancer, thyroid cancer, liver carcinoma, anal carcinoma, penile carcinoma, and head and neck cancer.
Аутоиммунные заболевания, для лечения которых можно применять соединения ADC, включают ревматологические нарушения (такие как, например, ревматоидный артрит, синдром Шегрена, склеродермию, волчанку, такую как СКВ и волчаночный нефрит, полимиозит/дерматомиозит, криоглобулинемию, синдром антител к фосфолипидам и псориатический артрит), остеоартрит, аутоиммунные нарушения желудочно-кишечного тракта и печени (такие как, например, воспалительные заболевания кишечника (например, язвенный колит и болезнь Крона), аутоиммунный гастрит и пернициозная анемия, аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз печени, первичный склерозирующий холангит и целиакия), васкулит (такой как, например, ANCA-ассоциированный васкулит, включая васкулит ЧаргаСтросса, гранулематоз Вегенера и полиартериит), аутоиммунные неврологические нарушения (такие как, например, рассеянный склероз, опсо-миоклональный синдром, миастения гравис, нейромиелит зрительного нерва, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера и аутоиммунные полинейропатии), почечные нарушения (такие как, например, гломерулонефрит, синдром Гудпасчера и болезнь Бергера), аутоиммунные дерматологические нарушения (такие как, например, псориаз, крапивница, аллергическая сыпь, обыкновенная пузырчатка, буллезный пемфигоид и кожная красная волчанка), гематологические нарушения (такие как, например, тромбоцитопеническая пурпура, тромботическая тромбоцитопеническая пурпура, посттрансфузионная пурпура и аутоиммунная гемолитическая анемия), атеросклероз, увеит, аутоиммунные заболевания слуха (такие как, например, болезнь внутреннего уха и потеря слуха), болезнь Бехчета, синдром Рейно, трансплантацию органа и аутоиммунные эндокринные нарушения (такие как, например, связанные с диабетом аутоиммунные заболевания, такие как инсулинозависимый сахарный диабет (IDDM), болезнь Аддисона и аутоиммунное заболевание щитовидной железы (например, болезнь Грейвса и тиреоидит). Более предпочтительно такие заболевания включают, например, ревматоидный артрит, язвенный колит, ANCA-ассоциированный васкулит, волчанку, рассеянный склероз, синдром Шегрена, болезнь Грейвса, IDDM, пернициозную анемию, тиреоидит и гломерулонефрит.Autoimmune diseases for which ADC compounds may be used include rheumatological disorders (such as, for example, rheumatoid arthritis, Sjogren's syndrome, scleroderma, lupus such as SLE and lupus nephritis, polymyositis/dermatomyositis, cryoglobulinemia, phospholipid antibody syndrome, and psoriatic arthritis ), osteoarthritis, autoimmune disorders of the gastrointestinal tract and liver (such as, for example, inflammatory bowel disease (eg, ulcerative colitis and Crohn's disease), autoimmune gastritis and pernicious anemia, autoimmune hepatitis, primary biliary cirrhosis, primary sclerosing cholangitis, and celiac disease ), vasculitis (such as, for example, ANCA-associated vasculitis, including Churg-Strauss vasculitis, Wegener's granulomatosis, and polyarteritis), autoimmune neurological disorders (such as, for example, multiple sclerosis, opso-myoclonal syndrome, myasthenia gravis, optic neuromyelitis, Parkinson's disease , Alzheimer's disease and autoimmune polyneuropathies), renal disorders (such as, for example, glomerulonephritis, Goodpasture's syndrome, and Berger's disease), autoimmune dermatological disorders (such as, for example, psoriasis, urticaria, allergic rash, pemphigus vulgaris, bullous pemphigoid, and cutaneous lupus erythematosus), hematological disorders (such as, for example, thrombocytopenic purpura, thrombotic thrombocytopenic purpura, posttransfusion purpura, and autoimmune hemolytic anemia), atherosclerosis, uveitis, autoimmune hearing disorders (such as, for example, inner ear disease and hearing loss), Behçet's disease, Raynaud's syndrome, organ transplantation and autoimmune endocrine disorders (such as, for example, diabetes-related autoimmune diseases such as insulin dependent diabetes mellitus (IDDM), Addison's disease, and autoimmune thyroid disease (eg, Graves' disease and thyroiditis). More preferably, such diseases include, for example, rheumatoid arthritis, ulcerative colitis, ANCA-associated vasculitis, lupus, multiple sclerosis, Sjögren's syndrome, Graves' disease, IDDM, pernicious anemia, thyroiditis, and glomerulonephritis.
Способы леченияMethods of treatment
Конъюгаты согласно настоящему изобретению можно применять в способе терапии. Также предложен способ лечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в лечении, терапевтически эффективного количества соединения-конъюгата согласно настоящему изобретению. Термин терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для того чтобы продемонстрировать пользу для пациента. Такая польза может представлять собой по меньшей мере улучшение по меньшей мере одного симптома. Фактическое введенное количество, а также скорость и временная динамика введения будут зависеть от характера и степени тяжести того, что лечат. Назначение лечения, например, принятие решения о дозировке, находится в пределах ответственности врачей общей практики и других врачей.The conjugates of the present invention can be used in a therapy. Also provided is a method of treatment comprising administering to a subject in need of treatment a therapeutically effective amount of a conjugate compound of the present invention. The term therapeutically effective amount is an amount sufficient to demonstrate benefit to the patient. Such a benefit may be at least an improvement in at least one symptom. The actual amount administered, as well as the rate and timing of administration, will depend on the nature and severity of what is being treated. Prescribing treatment, such as deciding on dosage, is the responsibility of general practitioners and other physicians.
Соединение согласно настоящему изобретению можно вводить по отдельности или в комбинации с другими способами лечения, либо одновременно, либо последовательно, в зависимости от состояния, подлежащего лечению. Примеры способов лечения и способов терапии включают, но не ограничиваются ими, химиотерапию (введение активных агентов, включая, например, лекарственные средства, такие как химиотерапевтические средства); хирургическое вмешательство; и лучевую терапию.The compound of the present invention may be administered alone or in combination with other treatments, either simultaneously or sequentially, depending on the condition being treated. Examples of treatments and methods of therapy include, but are not limited to, chemotherapy (administration of active agents, including, for example, drugs such as chemotherapeutic agents); surgical intervention; and radiation therapy.
Химиотерапевтический агент представляет собой химическое соединение, которое можно применять для лечения рака, независимо от механизма действия. Классы химиотерапевтических агентов включают, но не ограничиваются ими: алкилирующие агенты, антиметаболиты, растительные алкалоиды, блокирующие митотическое веретено, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, антитела, фотосенсибилизаторы и ингибиторы киназы. Химиотерапевтические агенты включают соединения, используемые в нацеленной терапии и обычной химиотерапии.A chemotherapeutic agent is a chemical compound that can be used to treat cancer, regardless of the mechanism of action. Classes of chemotherapeutic agents include, but are not limited to: alkylating agents, antimetabolites, plant alkaloids that block the mitotic spindle, cytotoxic/antineoplastic antibiotics, topoisomerase inhibitors, antibodies, photosensitizers, and kinase inhibitors. Chemotherapeutic agents include compounds used in targeted therapy and conventional chemotherapy.
Примеры химиотерапевтических агентов включают: эрлотиниб (тарцева®, Genentech/OSI Pharm.), доцетаксел (таксотер®, Sanofi-Aventis), 5-ФУ (фторурацил, 5-фторурацил, CAS № 51-21-8), гемцитабин (гемзар®, Lilly), PD-0325901 (CAS № 391210-10-9, Pfizer), цисплатин (цис-диамин, дихлорплатину(П),Examples of chemotherapeutic agents include: erlotinib (Tartceva®, Genentech/OSI Pharm.), docetaxel (Taxotere®, Sanofi-Aventis), 5-FU (fluorouracil, 5-fluorouracil, CAS No. 51-21-8), gemcitabine (Gemzar® , Lilly), PD-0325901 (CAS No. 391210-10-9, Pfizer), cisplatin (cis-diamine, dichloroplatinum(P),
- 21 040749- 21 040749
CAS № 15663-27-1), карбоплатин (CAS № 41575-94-4), паклитаксел (таксол®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси, США), трастузумаб (герцептин®, Genentech), темозоломид (4-метил-5оксо-2,3,4,6,8-пентазабицикло-[4.3.0]-нона-2,7,9-триен-9-карбоксамид, CAS № 85622-93-1, темодар®, темодал®, Schering Plough), тамоксифен ((Z)-2-[4-(1,2-дuфенилбут-1-енuл)феноксu]-N,Nдиметилэтанамин, нолвадекс®, истубал®, валодекс®) и доксорубицин (адриамицин®), Akti-1/2, HPPD и рапамицин.CAS No. 15663-27-1), Carboplatin (CAS No. 41575-94-4), Paclitaxel (Taxol®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ, USA), Trastuzumab (Herceptin®, Genentech), Temozolomide ( 4-methyl-5oxo-2,3,4,6,8-pentazabicyclo-[4.3.0]-nona-2,7,9-triene-9-carboxamide, CAS No. 85622-93-1, temodar®, temodal ®, Schering Plough), tamoxifen ((Z)-2-[4-(1,2-diphenylbut-1-enyl)phenoxu]-N,Ndimethylethanamine, Nolvadex®, Itubal®, Valodex®) and doxorubicin (Adriamycin®) , Akti-1/2, HPPD and rapamycin.
Другие примеры химиотерапевтических агентов включают: оксалиплатин (элоксатин®, Sanofi), бортезомиб (велкейд®, Millennium Pharm.), сутент (сунитиниб®, SU11248, Pfizer), летрозол (фемара®, Novartis), иматиниб мезилат (гливек®, Novartis), XL-518 (ингибитор Mek, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (ингибитор Mek, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (ингибитор PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (ингибитор PI3K, Novartis), XL-147 (ингибитор PI3K, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), фулвестрант (фазлодекс®, AstraZeneca), лейковорин (фолиновая кислота), рапамицин (сиролимус, рапамун®, Wyeth), лапатиниб (тайкерб® GSK572016, Glaxo Smith Kline), лонафарниб (сарасар™, SCH 66336, Schering Plough), сорафениб (нексавар®, BAY43-9006, Bayer Labs), гефитиниб (иресса®, AstraZeneca), иринотекан (камптосар®, СРТ-11 Pfizer), типифарниб (зарнестра™, Johnson&Johnson), абраксан™ (без кремофора), составы альбумин-модифицированных наночастиц паклитаксела (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), вандетаниб (rINN, ZD6474, зактима®, AstraZeneca), хлоранмбуцил, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), темсиролимус (торизел®, Wyeth), пазопаниб (GlaxoSmithKline), канфосфамид (телцита®, Telik), тиотепа и циклосфосфамид (цитоксан®, неосар®); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфамид, триэтилентиофосфамид и триметиломеламин; ацетогенины (в частности, буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адозелезин, карзелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и СВ1-ТМ1); элейтеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотные иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид оксида мехлорэтамина, мелфалан, новэмбихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, калихеамицин гамма-И, калихеамицин-омега-И (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); динемицин, динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также хромофорную часть неокарциностатина и родственные хромофоры хромопротеиновых энедииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, морфолинодоксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролинодоксорубицин и дезоксидоксорубицин), эпирубицин, эсорубицин, идарубицин, неморубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; средства, угнетающие функцию надпочечников, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; восполнитель фолиевой кислоты, такой как фролиновая кислота; ацеглатон; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; ацетат эллиптиния; эпотилон; этоглуцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидайнин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраерин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лосоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK® (JHS Natural Products, Юджин, Орегон, США); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трихотецены (в частности, токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Ара-С); циклофосфамид; тиотепа; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин (навельбин®); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; капецитабин (кселода®, Roche); ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из вышеупомянутых.Other examples of chemotherapy agents include: oxaliplatin (Eloxatin®, Sanofi), bortezomib (Velcade®, Millennium Pharm.), sutent (Sunitinib®, SU11248, Pfizer), letrozole (Femara®, Novartis), imatinib mesylate (Gleevec®, Novartis) , XL-518 (Mek inhibitor, Exelixis, WO 2007/044515), ARRY-886 (Mek inhibitor, AZD6244, Array BioPharma, Astra Zeneca), SF-1126 (PI3K inhibitor, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (PI3K inhibitor, Novartis), XL-147 (PI3K inhibitor, Exelixis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), fulvestrant (Faslodex®, AstraZeneca), leucovorin (folinic acid), rapamycin (sirolimus, rapamune®, Wyeth), lapatinib (Tykerb® GSK572016 , Glaxo Smith Kline), lonafarnib (Sarasar™, SCH 66336, Schering Plough), sorafenib (Nexavar®, BAY43-9006, Bayer Labs), gefitinib (Iressa®, AstraZeneca), irinotecan (Camptosar®, CPT-11 Pfizer), tipifarnib (Zarnestra™, Johnson&Johnson), abraxane™ (no cremophor), paclitaxel albumin-modified nanoparticle formulations (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, II), vandetanib (rINN, ZD6474, Zaktima®, AstraZeneca), chloranmbucil, AG1478, AG1571 (SU 5271; Sugen), temsirolimus (Torisel®, Wyeth), pazopanib (GlaxoSmithKline), canfosfamide (Telkita®, Telik), thiotepa, and cyclosphosphamide (Cytoxan®, Neosar®); alkylsulfonates such as busulfan, improsulfan and piposulfan; aziridines such as benzodopa, carbokwon, meturedopa and uredopa; ethyleneimines and methylamelamines, including altretamine, triethylenemelamine, triethylenephosphamide, triethylenethiophosphamide, and trimethylomelamin; acetogenins (particularly bullatacin and bullatacinone); camptothecin (including the synthetic analog of topotecan); bryostatin; callistatin; CC-1065 (including its synthetic analogues adozelesin, carzelesin and bizelesin); cryptophycins (in particular, cryptophycin 1 and cryptophycin 8); dolastatin; duocarmycin (including synthetic analogues of KW-2189 and CB1-TM1); eleuterobine; pancratistatin; sarcodictin; spongistatin; nitrogen mustards such as chlorambucil, chlornaphasine, chlorphosphamide, estramustine, ifosfamide, mechlorethamine, mechlorethamine oxide hydrochloride, melphalan, novembihin, phenesterin, prednimustine, trofosfamide, uramustine; nitrosoureas such as carmustine, chlorozotocin, fotemustine, lomustine, nimustine and ranimnustine; antibiotics such as enediine antibiotics (e.g. calicheamycin, calicheamycin gamma-I, calicheamycin omega-I (Angew Chem. Intl. Ed. Engl. (1994) 33:183-186); dynemycin, dynemycin A; bisphosphonates such as clodronate; esperamycin; as well as the chromophore part of neocarzinostatin and related chromophores of chromoprotein enediin antibiotics), aclacinomysins, actinomycin, autramycin, azaserine, bleomycins, cactinomycin, carabicin, carminomycin, carzinophilin, chromomycins, dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-oxo-diazo-5-oxo-diazo- -L-norleucine, morpholinodoxorubicin, cyanomorpholino-doxorubicin, 2-pyrrolinodoxorubicin and deoxydoxorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, nemorubicin, marcellomycin, mitomycins such as mitomycin C, mycophenolic acid, nogalamycin, olivomycins, peplomycin, porphyromycin, kelamycin, rhodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimex, zinostatin, zorubicin; antimetabolites such as methotrexate and 5-fluorouracil (5-FU); folic acid analogs such as denopterin, methotrexate, pteropterin, trimetrexate; purine analogs such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiamiprin, thioguanine; pyrimidine analogs such as ancitabine, azacitidine, 6azauridine, carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxyfluridine, enocytabine, floxuridine; androgens such as calusterone, dromostanolone propionate, epitiostanol, mepitiostane, testolactone; adrenal depressants such as aminoglutethimide, mitotane, trilostane; a folic acid supplement such as frolinic acid; aceglatone; aldofosfamide glycoside; aminolevulinic acid; eniluracil; amsacrine; bestrabucil; bisantrene; edatraksat; defofamine; demecolcin; diaziquon; elfornitin; elliptinium acetate; epothilone; etoglucid; gallium nitrate; hydroxyurea; lentinan; lonidanin; maytansinoids such as maytansine and ansamitocins; mitoguazone; mitoxantrone; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; phenamet; pyrarubicin; loxantrone; podophyllic acid; 2-ethylhydrazide; procarbazine; polysaccharide complex PSK® (JHS Natural Products, Eugene, OR, USA); razoxane; rhizoxin; sisofiran; spirogermanium; tenuazonic acid; triaziquone; 2,2',2''-trichlorotriethylamine; trichothecenes (particularly T-2 toxin, verracurin A, roridin A and anhidine); urethane; vindesine; dacarbazine; mannomustine; mitobronitol; mitolactol; pipobroman; hacytosine; arabinoside (Ara-C); cyclophosphamide; thiotepa; 6-thioguanine; mercaptopurine; methotrexate; platinum analogues such as cisplatin and carboplatin; vinblastine; etoposide (VP-16); ifosfamide; mitoxantrone; vincristine; vinorelbine (navelbin®); novantron; teniposide; edatrexate; daunomycin; aminopterin; capecitabine (Xeloda®, Roche); ibandronate; SRT-11; topoisomerase inhibitor RFS 2000; difluoromethylornithine (DMFO); retinoids such as retinoic acid; and pharmaceutically acceptable salts, acids and derivatives of any of the foregoing.
- 22 040749- 22 040749
В определение химиотерапевтический агент также включены: (i) противогормональные агенты, функция которых заключается в регуляции или ингибировании действия гормона на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогена (SERM), включая, например, тамоксифен (включая нолвадекс®; цитрат тамоксифена), ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и фарестон® (цитрат торемифина); (ii) ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, которая регулирует выработку эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, мегасе® (ацетат мегестрола), аромазин® (экземестан; Pfizer), форместание, фадрозол, ривисор® (ворозол), фемара® (летрозол; Novartis) и аримидекс® (анастрозол; AstraZeneca); (iii) антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолан-нуклеозидный аналог цитозина); (iv) ингибиторы протеинкиназы, такие как ингибиторы MEK (WO 2007/044515); (v) ингибиторы липидкиназы; (vi) антисмысловые олигонуклеотиды, в частности, те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, участвующих в аберрантной пролиферации клеток, например, РКС-альфа, Raf и Н-Ras, такие как облимерсен (генасенс®, Genta Inc.); (vii) рибозимы, такие как ингибиторы экспрессии VEGF (например, ангиозим®) и ингибиторы экспрессии HER2; (viii) вакцины, такие как вакцины для генной терапии, например, алловектин®, лейвектин® и ваксид®; пролейкин® rIL-2; ингибиторы топоизомеразы 1, такие как люртотекан®; абареликс® rmRH; (ix) антиангиогенные агенты, такие как бевацизумаб (авастин®, Genentech); и фармацевтически приемлемые соли, кислоты и производные любого из вышеупомянутых.Also included within the definition of a chemotherapeutic agent are: (i) antihormonal agents whose function is to regulate or inhibit the action of a hormone on tumors, such as antiestrogen and selective estrogen receptor modulators (SERMs), including, for example, tamoxifen (including Nolvadex®; tamoxifen citrate) , raloxifene, droloxifene, 4-hydroxy tamoxifen, trioxifene, keoxifene, LY117018, onapristone and fareston® (toremifin citrate); (ii) aromatase inhibitors, which inhibit the enzyme aromatase, which regulates estrogen production in the adrenal glands, such as, for example, 4(5)-imidazoles, aminoglutethimide, Megace® (megestrol acetate), Aromasin® (exemestane; Pfizer), formestanium, fadrozole , Rivisor® (Vorozol), Femara® (Letrozole; Novartis), and Arimidex® (Anastrozole; AstraZeneca); (iii) antiandrogens such as flutamide, nilutamide, bicalutamide, leuprolide and goserelin; as well as troxocitabine (1,3-dioxolane-nucleoside analogue of cytosine); (iv) protein kinase inhibitors such as MEK inhibitors (WO 2007/044515); (v) lipid kinase inhibitors; (vi) antisense oligonucleotides, in particular those that inhibit the expression of genes in signaling pathways involved in aberrant cell proliferation, eg PKC-alpha, Raf and H-Ras, such as oblimersen (genasens®, Genta Inc.); (vii) ribozymes such as inhibitors of VEGF expression (eg Angiozyme®) and inhibitors of HER2 expression; (viii) vaccines, such as gene therapy vaccines, eg allovectin®, leuvectin® and vaxid®; proleukin® rIL-2; topoisomerase 1 inhibitors such as lurtotecan®; abarelix® rmRH; (ix) anti-angiogenic agents such as bevacizumab (Avastin®, Genentech); and pharmaceutically acceptable salts, acids and derivatives of any of the foregoing.
В определение химиотерапевтический агент также включены терапевтические антитела, такие как алемтузумаб (кампат), бевацизумаб (авастин®, Genentech); цетуксимаб (эрбитукс®, Imclone); панитумумаб (вектибикс®, Amgen), ритуксимаб (ритуксан®, Genentech/Biogen Idec), офатумумаб (арзерра®, GSK), пертузумаб (перджета™, омнитарг™, 2С4, Genentech), трастузумаб (герцептин®, Genentech), тозитумомаб (бексар, Corixia) и конъюгат антитело-лекарственное средство, гемтузумаб озогамицин (милотарг®, Wyeth).The definition of a chemotherapeutic agent also includes therapeutic antibodies such as alemtuzumab (Campat), bevacizumab (Avastin®, Genentech); cetuximab (Erbitux®, Imclone); panitumumab (Vectibix®, Amgen), rituximab (Rituxan®, Genentech/Biogen Idec), ofatumumab (Arzerra®, GSK), pertuzumab (Purgeta™, Omnitarg™, 2C4, Genentech), trastuzumab (Herceptin®, Genentech), tositumumab ( Bexar, Corixia) and an antibody-drug conjugate, gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg®, Wyeth).
Гуманизированные моноклональные антитела с терапевтическим потенциалом в качестве химиотерапевтических агентов в комбинации с конъюгатами согласно настоящему изобретению включают: алемтузумаб, аполизумаб, азелизумаб, атлизумаб, бапинейзумаб, бевацизумаб, биватузумаб мертанзин, кантузумаб мертанзин, цеделизумаб, цертолизумаб пегол, цидфузитузумаб, цидтузумаб, даклизумаб, экулизумаб, эфализумаб, эпратузумаб, эрлизумаб, фелвизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб, пасколизумаб, пекфуситузумаб, пектузумаб, пертузумаб, пекселизумаб, раливизумаб, ранибизумаб, ресливизумаб, реслизумаб, ресивизумаб, ровелизумаб, руплизумаб, сибротузумаб, сиплизумаб, сонтузумаб, такатузумаб тетраксетан, тадоцизумаб, тализумаб, тефибазумаб, тоцилизумаб, торализумаб, трастузумаб, тукотузумаб целмолейкин, тукузитузумаб, умавизумаб, уртоксазумаб и визилизумаб.Humanized monoclonal antibodies with therapeutic potential as chemotherapeutic agents in combination with the conjugates of the present invention include: alemtuzumab, apolizumab, azelizumab, atlizumab, bapineuzumab, bevacizumab, bivatuzumab mertansine, cantuzumab mertansine, cedelizumab, certolizumab pegol, cidfusizumab, cidakulizumab, cidulizumab эфализумаб, эпратузумаб, эрлизумаб, фелвизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, инотузумаб озогамицин, ипилимумаб, лабетузумаб, линтузумаб, матузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, мотовизумаб, натализумаб, нимотузумаб, ноловизумаб, нумавизумаб, окрелизумаб, омализумаб, паливизумаб, пасколизумаб, пекфуситузумаб, пектузумаб, pertuzumab, pexelizumab, ralivizumab, ranibizumab, reslivisumab, reslizumab, recivisumab, rovelizumab, ruplizumab, sibrotuzumab, ciplizumab, sontuzumab, takatuzumab tetraxetane, tadocizumab, talizumab, tefibazumab, tocilizumab, tocilizumab, toralizumab, trastuzumab, tumoluzumab, tumolizumab zumab, umavizumab, urtoxazumab and visilizumab.
Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением и для применения в соответствии с настоящим изобретением могут содержать, помимо активного ингредиента, т.е. соединения-конъюгата, фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель, буфер, стабилизатор или другие материалы, хорошо известные специалистам в данной области техники. Такие материалы должны быть нетоксичными и не должны создавать помехи для эффективности активного ингредиента. Точный характер носителя или другого материала будет зависеть от пути введения, который может быть пероральным или с помощью инъекции, например, кожной, подкожной или внутривенной.Pharmaceutical compositions in accordance with the present invention and for use in accordance with the present invention may contain, in addition to the active ingredient, i. conjugate compound, pharmaceutically acceptable excipient, carrier, buffer, stabilizer, or other materials well known to those skilled in the art. Such materials must be non-toxic and must not interfere with the effectiveness of the active ingredient. The exact nature of the carrier or other material will depend on the route of administration, which may be oral or by injection, such as dermal, subcutaneous or intravenous.
Фармацевтические композиции для перорального введения могут быть в форме таблетки, капсулы, порошка или жидкости. Таблетка может содержать твердый носитель или адъювант. Жидкие фармацевтические композиции обычно содержат жидкий носитель, такой как вода, нефтяные, животные или растительные масла, минеральное масло или синтетическое масло. Может быть включен физиологический солевой раствор, раствор декстрозы или другого сахарида или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль. Капсула может содержать твердый носитель, такой как желатин.Pharmaceutical compositions for oral administration may be in the form of a tablet, capsule, powder or liquid. The tablet may contain a solid carrier or an adjuvant. Liquid pharmaceutical compositions typically contain a liquid carrier such as water, petroleum, animal or vegetable oils, mineral oil or synthetic oil. Physiological saline, dextrose or other saccharide solution, or glycols such as ethylene glycol, propylene glycol or polyethylene glycol may be included. The capsule may contain a solid carrier such as gelatin.
Для внутривенной, кожной или подкожной инъекции или инъекции в место поражения активный ингредиент будет в форме парентерально приемлемого водного раствора, который не содержит пирогены и имеет подходящий рН, изотоничность и стабильность. Специалисты с соответствующими навыками в данной области техники способны приготовить подходящие растворы, применяя, например, изотонические носители, такие как инъекция хлорида натрия, инъекция раствора Рингера, инъекция раствора Рингера с лактозой. При необходимости могут быть включены консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки.For intravenous, dermal or subcutaneous or lesion injection, the active ingredient will be in the form of a parenterally acceptable aqueous solution that is free of pyrogens and has suitable pH, isotonicity and stability. Those skilled in the art are able to prepare suitable solutions using, for example, isotonic vehicles such as sodium chloride injection, Ringer's solution injection, lactose Ringer's solution injection. If necessary, preservatives, stabilizers, buffers, antioxidants and/or other additives may be included.
СоставыLineups
Несмотря на то, что соединение-конъюгат можно применять (например, вводить) по отдельности, часто предпочтительно представить его в виде композиции или состава.While the conjugate compound may be used (eg, administered) alone, it is often preferred to present it as a composition or formulation.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиция представляет собой фармацевтическую композицию (например, состав, препарат, лекарственное средство), содержащую соединение-конъюгат, описанное в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, разAccording to one implementation variant of the present invention, the composition is a pharmaceutical composition (for example, composition, preparation, drug) containing the conjugate compound described herein, and a pharmaceutically acceptable carrier, times
- 23 040749 бавитель или вспомогательное вещество.- 23 040749 additive or excipient.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение-конъюгат, описанное в настоящем документе, вместе с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, включая, но не ограничиваясь ими, фармацевтически приемлемые носители, разбавители, вспомогательные вещества, адъюванты, наполнители, буферы, консерванты, антиоксиданты, смазывающие агенты, стабилизаторы, солюбилизаторы, сурфактанты (например, смачивающие агенты), маскирующие агенты, окрашивающие агенты, ароматизирующие агенты и подслащающие агенты.In one embodiment of the present invention, the composition is a pharmaceutical composition comprising at least one conjugate compound described herein, together with one or more other pharmaceutically acceptable ingredients well known to those skilled in the art, including but not limited to , pharmaceutically acceptable carriers, diluents, excipients, adjuvants, fillers, buffers, preservatives, antioxidants, lubricants, stabilizers, solubilizers, surfactants (eg, wetting agents), masking agents, coloring agents, flavoring agents, and sweetening agents.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения композиция дополнительно содержит другие активные агенты, например, другие терапевтические или профилактические агенты.According to one implementation variant of the present invention, the composition additionally contains other active agents, for example, other therapeutic or prophylactic agents.
Подходящие носители, разбавители, вспомогательные вещества и т.д. можно найти в стандартных фармацевтических руководствах. См., например, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2 изд. (ред. М. Ash и I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20 изд., pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; и Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2 изд., 1994.Suitable carriers, diluents, excipients, etc. can be found in standard pharmaceutical guidelines. See, for example, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd ed. (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; and Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способам получения фармацевтической композиции, включающим смешивание по меньшей мере одного [С11]-радиомеченого конъюгата или соединения, подобного конъюгату, определенных в настоящем документе, с одним или более другими фармацевтически приемлемыми ингредиентами, хорошо известными специалистам в данной области техники, например, носителями, разбавителями, вспомогательными веществами и т.д. При изготовлении в виде дискретных единиц (например, таблеток и т.д.) каждая единица содержит заранее определенное количество (дозировку) активного соединения.Another aspect of the present invention relates to methods for preparing a pharmaceutical composition comprising mixing at least one [C11]-radio-labeled conjugate or conjugate-like compound as defined herein with one or more other pharmaceutically acceptable ingredients well known to those skilled in the art. e.g. carriers, diluents, excipients, etc. When manufactured as discrete units (eg tablets, etc.), each unit contains a predetermined amount (dosage) of the active compound.
В настоящем документе термин фармацевтически приемлемый относится к соединениям, ингредиентам, материалам, композициям, лекарственным формам и т.д., которые, в рамках здравого медицинского заключения, подходят для применения при контакте с тканями рассматриваемого субъекта (например, человека) без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергического ответа или другой проблемы или осложнения, соразмерно с разумным соотношением польза/риск. Каждый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество и т.д. также должен быть приемлемым в отношении совместимости с другими ингредиентами состава.As used herein, the term "pharmaceutically acceptable" refers to compounds, ingredients, materials, compositions, dosage forms, etc., which, under sound medical judgment, are suitable for use in contact with tissues of the subject (e.g., human) in question, without undue toxicity, irritation, allergic response, or other problem or complication, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio. Each carrier, diluent, excipient, etc. must also be acceptable in terms of compatibility with the other ingredients of the formulation.
Составы могут быть получены с помощью любых способов, хорошо известных в области фармацевтики. Такие способы включают этап объединения активного соединения с носителем, который составляет один или более дополнительных ингредиентов. Обычно составы получают путем равномерного и тесного объединения активного соединения с носителями (например, жидкими носителями, мелкодисперсным твердым носителем и т.д.), а затем формовки продукта, если необходимо.The compositions can be obtained using any of the methods well known in the pharmaceutical field. Such methods include the step of bringing into association the active compound with the carrier which constitutes one or more accessory ingredients. Typically, formulations are prepared by bringing the active compound into uniform and intimate association with carriers (eg, liquid carriers, finely dispersed solid carriers, etc.) and then shaping the product, if necessary.
Состав может быть получен для обеспечения быстрого или медленного высвобождения; немедленного, отсроченного, контролируемого по времени или пролонгированного высвобождения; или их комбинации.The formulation can be formulated to provide fast or slow release; immediate, delayed, time-controlled or extended release; or their combinations.
Составы, подходящие для парентерального введения (например, путем инъекции), включают водные или неводные, изотонические, апирогенные, стерильные жидкости (например, растворы, суспензии), в которых активный ингредиент растворен, суспендирован или обеспечен иным образом (например, в липосоме или другой микрочастице). Такие жидкости могут дополнительно содержать другие фармацевтически приемлемые ингредиенты, такие как антиоксиданты, буферы, консерванты, стабилизаторы, бактериостатические агенты, суспендирующие агенты, загущающие агенты и растворенные вещества, которые делают состав изотоническим с кровью (или другой соответствующей жидкостью организма) предполагаемого реципиента. Примеры вспомогательных веществ включают, например, воду, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и тому подобное. Примеры изотонических носителей, подходящих для применения в таких составах, включают инъекцию хлорида натрия, раствор Рингера или инъекцию раствора Рингера с лактатом. Как правило, концентрация активного ингредиента в жидкости составляет от примерно 1 нг/мл до примерно 10 мкг/мл, например, от примерно 10 нг/мл до примерно 1 мкг/мл. Составы могут быть представлены в герметичных контейнерах, содержащих одну дозу или несколько доз, например, в ампулах и флаконах, и могут храниться в сублимированном (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии для немедленного введения могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.Formulations suitable for parenteral administration (eg, by injection) include aqueous or non-aqueous, isotonic, non-pyrogenic, sterile liquids (eg, solutions, suspensions) in which the active ingredient is dissolved, suspended, or otherwise provided (eg, in a liposome or other microparticle). Such liquids may additionally contain other pharmaceutically acceptable ingredients such as antioxidants, buffers, preservatives, stabilizers, bacteriostatic agents, suspending agents, thickening agents, and solutes that render the formulation isotonic with the blood (or other appropriate body fluid) of the intended recipient. Examples of excipients include, for example, water, alcohols, polyols, glycerin, vegetable oils, and the like. Examples of isotonic vehicles suitable for use in such formulations include sodium chloride injection, Ringer's solution, or lactated Ringer's solution injection. Typically, the concentration of the active ingredient in the liquid is from about 1 ng/mL to about 10 µg/mL, for example, from about 10 ng/mL to about 1 µg/mL. Formulations may be presented in sealed single-dose or multi-dose containers, such as ampoules and vials, and may be stored in a freeze-dried (lyophilized) state requiring only the addition of a sterile liquid carrier, such as water for injection, immediately prior to use. Injectable solutions and suspensions for immediate administration may be prepared from sterile powders, granules and tablets.
ДозировкаDosage
Специалист в данной области техники поймет, что подходящие дозировки соединения-конъюгата и композиций, содержащих соединение-конъюгат, могут варьироваться у разных пациентов. Определение оптимальной дозировки обычно будет включать компенсацию уровня терапевтической пользы с любым риском или вредными побочными эффектами. Выбранный уровень дозировки будет зависеть от множества факторов, включая, но не ограничиваясь ими, активность конкретного соединения, путь введения, время введения, скорость выведения соединения, продолжительность лечения, другие лекарственныеOne skilled in the art will appreciate that suitable dosages of the conjugate compound and compositions containing the conjugate compound may vary from patient to patient. Determining the optimal dosage will usually involve compensating for the level of therapeutic benefit with any risk or deleterious side effects. The selected dosage level will depend on a variety of factors, including, but not limited to, the activity of the particular compound, route of administration, time of administration, rate of elimination of the compound, duration of treatment, other drug
- 24 040749 средства, соединения и/или материалы, применяемые в комбинации, степень тяжести состояния, а также вид, пол, возраст, массу, состояние, общее состояние здоровья и анамнез пациента. Количество соединения и путь его введения будут, в конечном счете, оставлены на усмотрение врача, ветеринара или клинициста, несмотря на то, что обычно дозировка будет выбрана для достижения локальных концентраций в месте действия, которые позволяют достичь целевого эффекта, не вызывая существенных опасных или вредных побочных эффектов.- 24 040749 means, compounds and / or materials used in combination, the severity of the condition, as well as the type, sex, age, weight, condition, general health and history of the patient. The amount of the compound and its route of administration will ultimately be left to the discretion of the physician, veterinarian or clinician, although typically the dosage will be chosen to achieve local concentrations at the site of action that achieve the desired effect without causing significant hazardous or harmful effects. side effects.
Введение можно осуществлять в одной дозе, непрерывно или периодически (например, в виде разделенных доз с соответствующими интервалами) в течение курса лечения. Способы определения наиболее эффективных средств и дозировки для введения хорошо известны специалистам в данной области техники и будут варьироваться в зависимости от состава, применяемого для терапии, цели терапии, клетки (клеток)-мишени(ей), которую(ых) лечат, и субъекта, которого лечат. Однократное или многократное введение может быть выполнено с применением уровня дозы и схемы, выбранной лечащим врачом, ветеринаром или клиницистом.The introduction can be carried out in a single dose, continuously or intermittently (for example, in divided doses at appropriate intervals) during the course of treatment. Methods for determining the most effective agents and dosage for administration are well known to those skilled in the art and will vary depending on the formulation used for therapy, the goal of therapy, the target cell(s) being(s) being treated, and the subject who is being treated. Single or multiple administration may be performed using the dose level and regimen selected by the attending physician, veterinarian or clinician.
Обычно подходящая доза активного соединения находится в пределах диапазона от примерно 100 нг до примерно 25 мг (более типично от примерно 1 мкг до примерно 10 мг) на килограмм массы тела субъекта в сутки. Если активное соединение представляет собой соль, сложный эфир, амид, пролекарство или тому подобное, вводимое количество рассчитывают на основании исходного соединения, и, таким образом, фактическая масса, которая должна быть применена, пропорционально увеличивается.Typically, a suitable dose of the active compound is in the range of about 100 ng to about 25 mg (more typically about 1 μg to about 10 mg) per kilogram of subject body weight per day. If the active compound is a salt, an ester, an amide, a prodrug or the like, the amount to be administered is calculated based on the parent compound, and thus the actual weight to be applied is proportionally increased.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения активное соединение вводят пациенту-человеку в соответствии со следующей схемой дозирования: примерно 100 мг, 3 раза в сутки.According to one embodiment of the present invention, the active compound is administered to a human patient according to the following dosing schedule: about 100 mg, 3 times a day.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения активное соединение вводят пациенту-человеку в соответствии со следующей схемой дозирования: примерно 150 мг, 2 раза в сутки.According to one embodiment of the present invention, the active compound is administered to a human patient according to the following dosing schedule: about 150 mg, 2 times a day.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения активное соединение вводят пациенту-человеку в соответствии со следующей схемой дозирования: примерно 200 мг, 2 раза в сутки.According to one embodiment of the present invention, the active compound is administered to a human patient according to the following dosing schedule: about 200 mg, 2 times a day.
Однако согласно одному варианту реализации настоящего изобретения соединение-конъюгат вводят пациенту-человеку в соответствии со следующей схемой дозирования: примерно 50 или примерно 75 мг, 3 или 4 раза в сутки.However, in one embodiment of the present invention, the conjugate compound is administered to a human patient according to the following dosing schedule: about 50 or about 75 mg, 3 or 4 times a day.
Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения соединение-конъюгат вводят пациенту-человеку в соответствии со следующей схемой дозирования: примерно 100 или примерно 125 мг, 2 раза в сутки.According to one embodiment of the present invention, the conjugate compound is administered to a human patient according to the following dosing schedule: about 100 or about 125 mg, 2 times a day.
Дозировки, описанные выше, можно применять к конъюгату (включая фрагмент ПБД и линкер к антителу) или к эффективному количеству обеспеченного соединения ПБД, например, количеству соединения, которое может быть высвобождено после расщепления линкера.The dosages described above may be applied to the conjugate (including the PBB moiety and the linker to the antibody) or to an effective amount of the PBB compound provided, eg, the amount of the compound that can be released upon cleavage of the linker.
Для предотвращения или лечения заболевания соответствующая дозировка ADC согласно настоящему изобретению будет зависеть от типа заболевания, которое подлежит лечению, определенного выше, степени тяжести и течения заболевания, от того, вводится ли молекула в профилактических или терапевтических целях, предшествующей терапии, клинического анамнеза пациента и ответа на антитело, а также от усмотрения лечащего врача. Молекулу вводят подходящим способом пациенту за один раз или в течение нескольких обработок. В зависимости от типа и степени тяжести заболевания примерно от 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, 0,1-20 мг/кг) молекулы составляют начальную предполагаемую дозировку для введения пациенту, например, будь то с помощью одного или нескольких отдельных введений или путем непрерывной инфузии. Типичная суточная дозировка может варьироваться от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более, в зависимости от факторов, упомянутых выше. Примерная дозировка ADC для введения пациенту находится в пределах диапазона от примерно 0,1 до примерно 10 мг/кг массы пациента. Для повторных введений в течение нескольких дней или дольше, в зависимости от состояния, лечение продолжают до тех пор, пока не произойдет целевое подавление симптомов заболевания. Примерная схема дозирования включает курс введения начальной нагрузочной дозы примерно 4 мг/кг с последующим введением дополнительных доз ADC каждую неделю, каждые две недели или каждые три недели. Можно применять другие схемы дозирования. Прогресс этой терапии легко контролировать с помощью обычных методик и анализов.For the prevention or treatment of a disease, the appropriate dosage of the ADC of the present invention will depend on the type of disease being treated as defined above, the severity and course of the disease, whether the molecule is being administered prophylactically or therapeutically, prior therapy, the patient's clinical history and response. on the antibody, as well as at the discretion of the attending physician. The molecule is administered in a suitable manner to the patient at one time or over several treatments. Depending on the type and severity of the disease, from about 1 μg/kg to 15 mg/kg (e.g., 0.1-20 mg/kg) molecules constitute the initial intended dosage for administration to the patient, for example, whether by one or more separate injections or by continuous infusion. A typical daily dosage may vary from about 1 μg/kg to 100 mg/kg or more, depending on the factors mentioned above. An exemplary dosage of ADC for administration to a patient is within the range of about 0.1 to about 10 mg/kg of patient weight. For repeated administrations over several days or longer, depending on the condition, treatment is continued until targeted suppression of disease symptoms occurs. An exemplary dosing regimen includes a course of administration of an initial loading dose of about 4 mg/kg followed by the administration of additional doses of ADC every week, every two weeks, or every three weeks. Other dosing regimens may be used. The progress of this therapy is easily monitored using conventional techniques and assays.
ЛечениеTreatment
В настоящем документе термин лечение, применительно к лечению состояния, обычно относится к лечению и терапии, будь то человека или животного (например, в вариантах применения в ветеринарии), при которых достигается некоторый целевой терапевтический эффект, например, ингибирование прогрессирования состояния, и включает снижение скорости прогрессирования, задержку скорости прогрессирования, регресс состояния, улучшение состояния и излечение состояния. Также включено лечение как профилактическая мера (т.е. профилактика, предотвращение).As used herein, the term treatment, when referring to the treatment of a condition, generally refers to treatment and therapy, whether human or animal (e.g., in veterinary applications), that achieves some intended therapeutic effect, such as inhibiting the progression of the condition, and includes reducing progression rate, progression rate delay, condition regression, condition improvement, and condition cure. Also included is treatment as a prophylactic measure (i.e. prophylaxis, prevention).
В настоящем документе термин терапевтически эффективное количество относится к такому количеству активного соединения или материала, композиции или лекарственной формы, содержащей активное соединение, которое является эффективным для осуществления некоторого целевого терапевтического действия, соразмерно с разумным соотношением польза/риск, при введении в соответствии с целевой схемой лечения.As used herein, the term "therapeutically effective amount" refers to that amount of an active compound or material, composition or dosage form containing the active compound that is effective to achieve some desired therapeutic effect, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio, when administered in accordance with the intended regimen. treatment.
- 25 040749- 25 040749
Аналогичным образом, в настоящем документе термин профилактически эффективное количество относится к такому количеству активного соединения или материала, композиции или лекарственной формы, содержащей активное соединение, которое является эффективным для достижения некоторого желательного профилактического эффекта, соразмерно с разумным соотношением польза/риск, при введении в соответствии с целевой схемой лечения.Similarly, as used herein, the term prophylactically effective amount refers to that amount of an active compound or material, composition or dosage form containing the active compound that is effective to achieve some desired prophylactic effect, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio, when administered according to with targeted treatment.
Получение конъюгатов лекарственного средстваPreparation of drug conjugates
Конъюгаты антитело-лекарственное средство согласно настоящему изобретению могут быть получены путем конъюгирования следующего линкера лекарственного средства:The antibody-drug conjugates of the present invention can be prepared by conjugating the following drug linker:
с азидсодержащим антителом с помощью способов, описанных, например, в van Geel, R., et al., Bioconjugate Chemistry, 2015, 26, 2233-2242; DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.5b00224. Подходящие способы включают, но не ограничиваются этим, конъюгацию без меди, например, в водных условиях с необязательным сорастворителем, выбранным из ДМФА, ДМСО и ДМАА.with an azide-containing antibody using the methods described, for example, in van Geel, R., et al., Bioconjugate Chemistry, 2015, 26, 2233-2242; DOI: 10.1021/acs.bioconjchem.5b00224. Suitable methods include, but are not limited to, conjugation without copper, for example under aqueous conditions, with an optional co-solvent selected from DMF, DMSO and DMAA.
Линкер лекарственного средства может быть синтезирован в соответствии с примерами, с соответствующими модификациями, например, со ссылкой на WO 2016/053107 для синтеза линкера, и на следующие документы для димера ПБД, например: WO 2011/130598, WO 2013/055987, WO 2014/057074.The drug linker can be synthesized according to the examples, with appropriate modifications, for example, with reference to WO 2016/053107 for the synthesis of the linker, and to the following documents for the PBB dimer, for example: WO 2011/130598, WO 2013/055987, WO 2014 /057074.
Субъект/пациентSubject/Patient
Субъект/пациент может представлять собой животное, млекопитающее, плацентарное млекопитающее, сумчатого (например, кенгуру, вомбата), однопроходное животное (например, утконоса), грызуна (например, морскую свинку, хомяка, крысу, мышь), представителя мышиных (например, мышь), зайцеобразного (например, кролика), пернатого (например, птицу), представителя собачьих (например, собаку), представителя кошачьих (например, кошку), представителя лошадиных (например, лошадь), свинообразного (например, свинью), представителя овечьих (например, овцу), представителя бычьих (например, корову), примата, обезьянообразного (например, обезьяну или человекообразную обезьяну), обезьяну (например, мартышку, павиана), человекообразную обезьяну (например, гориллу, шимпанзе, орангутана, гиббона) или человека.The subject/patient can be an animal, mammal, placental mammal, marsupial (e.g., kangaroo, wombat), monotreme (e.g., platypus), rodent (e.g., guinea pig, hamster, rat, mouse), murine (e.g., mouse ), lagomorph (eg, rabbit), feathered (eg, bird), canine (eg, dog), feline (eg, cat), equine (eg, horse), porcine (eg, pig), ovine ( e.g., sheep), bovine (e.g., cow), primate, simian (e.g., ape or ape), ape (e.g., marmoset, baboon), great ape (e.g., gorilla, chimpanzee, orangutan, gibbon), or human.
Кроме того, субъект/пациент может иметь любую из его форм развития, например, плод. Согласно одному предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения субъект/пациент представляет собой человека.In addition, the subject/patient may have any of its developmental forms, such as a fetus. According to one preferred embodiment of the present invention, the subject/patient is a human.
Изложение сущности изобретенияStatement of the Invention
Следующие пронумерованные варианты осуществления описывают некоторые конкретно предусмотренные комбинации настоящего изобретения. Конъюгаты, направленные против DLK1 1. Конъюгат формулы (I):The following numbered embodiments describe some specific contemplated combinations of the present invention. Conjugates directed against DLK1 1. Conjugate of formula (I):
Ab-(DL)P (I) в которойAb-(DL) P (I) in which
Ab представляет собой антитело, которое связывается с DLK1;Ab is an antibody that binds to DLK1;
DL представляет собойDL represents
- 26 040749- 26 040749
гдеWhere
X выбран из группы, включающей: одинарную связь, -CH2- и -С2Н4-; n составляет от 1 до 8;X is selected from the group consisting of: single bond, -CH2- and -C2H 4 -; n is from 1 to 8;
m равно 0 или 1;m is 0 or 1;
R7 представляет собой метил или фенил;R 7 is methyl or phenyl;
если между С2 и C3 присутствует двойная связь, R2 выбран из группы, состоящей из:if there is a double bond between C2 and C3, R 2 is selected from the group consisting of:
(ia) C 5-10 арильной группы, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей: галоген, нитро, циано, простой эфир, карбокси, сложный эфир, C1-7 алкил, C3-7 гетероциклил и 6ис-окси-С1-3 алкилен;(ia) a C 5-10 aryl group optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of: halogen, nitro, cyano, ether, carboxy, ester, C 1-7 alkyl, C 3-7 heterocyclyl and 6is -oxy-C 1-3 alkylene;
(ib) С1-5 насыщенного алифатического алкила;(ib) C 1-5 saturated aliphatic alkyl;
(ic) C3-6 насыщенного циклоалкила;(ic) C 3-6 saturated cycloalkyl;
(id) , где каждый из R21, R22 и R23 независимо выбран из Н, C1-3 насыщенного алкила,(id) where each of R 21 , R 22 and R 23 is independently selected from H, C 1-3 saturated alkyl,
C2-3алкенила, C2-3алкинила и циклопропила, причем указанное общее число атомов углерода в группе R2 составляет не более 5:C 2-3 alkenyl, C 2-3 alkynyl and cyclopropyl, with said total number of carbon atoms in the R 2 group not exceeding 5:
R25b (ie) , где один из R25a и R25b представляет собой Н, а другой выбран из: R2 5 b (ie) where one of R 25a and R 25b is H and the other is selected from:
фенила, причем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила; и (if) , где R24 выбран из: Н; C1-3 насыщенного алкила; C2-3алкенила; C2-3алкинила; циклопропила; фенила, причем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила;phenyl, wherein the phenyl is optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl; and (if) where R 24 is selected from: H; C 1-3 saturated alkyl; C 2-3 alkenyls; C 2-3 alkynyl; cyclopropyl; phenyl, wherein the phenyl is optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl;
Д^26а если между С2 и С3 присутствует одинарная связь, R2 представляет собой R26b , где R26a и R26b независимо выбраны из Н, F, C1-4 насыщенного алкила, C1-3 алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены группой, выбранной из C1-4 алкиламидо и C1-4 алкилового сложного эфира; или, если один из R26a и R26b представляет собой Н, другой выбран из нитрила и C1-4 алкилового сложного эфира; если между С2' и С3' присутствует двойная связь, R12 выбран из группы, состоящей из:D^ 26a if a single bond is present between C2 and C3, R 2 is R 26b where R 26a and R 26b are independently selected from H, F, C1-4 saturated alkyl, C1-3 alkenyl, with the alkyl and alkenyl groups optionally substituted a group selected from C1-4 alkylamido and C1-4 alkyl ester; or if one of R 26a and R 26b is H, the other is selected from nitrile and C1-4 alkyl ester; if there is a double bond between C2' and C3', R 12 is selected from the group consisting of:
(iia) C5-10 арильной группы, необязательно замещенной одним или более заместителями, выбранными из группы, включающей: галоген, нитро, циано, простой эфир, карбокси, сложный эфир, C1-7 алкил, С3-7 гетероциклил и 6ис-окси-С1-3 алкилен;(iia) a C 5-10 aryl group optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of: halogen, nitro, cyano, ether, carboxy, ester, C 1-7 alkyl, C 3-7 heterocyclyl, and 6is -oxy-C 1-3 alkylene;
(iib) C1-5 насыщенного алифатического алкила;(iib) C 1-5 saturated aliphatic alkyl;
(iic) C3-6 насыщенного циклоалкила;(iic) C 3-6 saturated cycloalkyl;
- 27 040749 (iid) R31 , где каждый из R31, R32 и R33 независимо выбран из Н, C1-3 насыщенного алкила,- 27 040749 (iid) R 31 , where each of R 31 , R 32 and R 33 is independently selected from H, C 1-3 saturated alkyl,
C2-3 алкенила, C2-3 алкинила и циклопропила, причем указанное общее число атомов углерода в группе R12 составляет не более 5;C 2-3 alkenyl, C 2-3 alkynyl and cyclopropyl, said total number of carbon atoms in the R 12 group being not more than 5;
(iie) , где один из R35a и R35b представляет собой Н, а другой выбран из: фенила, при чем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила; и (iif) R , где R24 выбран из: Н; C1-3 насыщенного алкила; C2-3 алкенила; C2-3 алкинила; цик лопропила; фенила, причем фенил необязательно замещен группой, выбранной из галогена, метила, метокси; пиридила; и тиофенила;(iie) wherein one of R 35a and R 35b is H and the other is selected from: phenyl, wherein phenyl is optionally substituted with a group selected from halo, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl; and (iif) R where R 24 is selected from: H; C 1-3 saturated alkyl; C 2-3 alkenyls; C 2-3 alkynyl; cyclopropyl; phenyl, wherein the phenyl is optionally substituted with a group selected from halogen, methyl, methoxy; pyridyl; and thiophenyl;
,R36a если между С2' и C3' присутствует одинарная связь, R12 представляет собой R36b , где R36a и R36b независимо выбраны из Н, F, C1-4 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены группой, выбранной из C1-4 алкиламидо и C1-4 алкилового сложного эфира; или, если один из R36a и R36b представляет собой Н, другой выбран из нитрила и C1-4 алкилового сложного эфира; и р составляет от 1 до 8.,R 36a if a single bond is present between C2' and C3', R 12 is R 36b where R 36a and R 36b are independently selected from H, F, C1-4 saturated alkyl, C2-3 alkenyl, with alkyl and alkenyl groups optionally substituted with a group selected from C1-4 alkylamido and C1-4 alkyl ester; or if one of R 36a and R 36b is H, the other is selected from nitrile and C1-4 alkyl ester; and p is from 1 to 8.
2. Конъюгат по утверждению 1, в котором X представляет собой одинарную связь.2. The conjugate of claim 1 wherein X is a single bond.
3. Конъюгат по утверждению 1, в котором X представляет собой -CH2-.3. The conjugate of claim 1 wherein X is -CH 2 -.
4. Конъюгат по утверждению 1, в котором X представляет собой -С2Н4-.4. The conjugate of claim 1 wherein X is -C 2 H 4 -.
5. Конъюгат по любому из пп.1-4, в котором n составляет 1-4.5. A conjugate according to any one of claims 1-4, wherein n is 1-4.
6. Конъюгат по утверждению 5, в котором n равно 1.6. Conjugate according to statement 5, in which n is equal to 1.
7. Конъюгат по утверждению 5, в котором n равно 2.7. Conjugate according to statement 5, in which n is equal to 2.
8. Конъюгат по утверждению 5, в котором n равно 4.8. Conjugate according to statement 5, in which n is 4.
9. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь, и R2 представляет собой С5-7 арильную группу.9. A compound according to any one of claims 1-8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R 2 is a C 5-7 aryl group.
10. Соединение по утверждению 9, в котором R2 представляет собой фенил.10. The compound of claim 9 wherein R 2 is phenyl.
11. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь и R2 представляет собой C8-10 арильную группу.11. A compound according to any one of claims 1-8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R 2 is a C 8-10 aryl group.
12. Соединение по любому из пп.9-11, в котором R2 несет от одной до трех групп-заместителей.12. A compound according to any one of claims 9-11, wherein R 2 carries one to three substituent groups.
13. Соединение по любому из пп.9-12, в котором указанные заместители выбраны из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила, морфолино и метилтиофенила.13. A compound according to any one of claims 9 to 12, wherein said substituents are selected from methoxy, ethoxy, fluorine, chlorine, cyano, bisoxymethylene, methylpiperazinyl, morpholino and methylthiophenyl.
14. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь и R2 представляет собой C1-5 насыщенную алифатическую алкильную группу.14. A compound according to any one of claims 1-8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R2 is a C1-5 saturated aliphatic alkyl group.
15. Соединение по утверждению 14, в котором R2 представляет собой метил, этил или пропил.15. The compound of claim 14 wherein R 2 is methyl, ethyl or propyl.
16. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь, и R2 представляет собой C3-6 насыщенную циклоалкильную группу.16. A compound according to any one of claims 1-8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R2 is a C3-6 saturated cycloalkyl group.
17. Соединение по утверждению 16, в котором R2 представляет собой циклопропил.17. The compound of claim 16 wherein R 2 is cyclopropyl.
18. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь и R2 представляет собой группу формулы:18. A compound according to any one of claims 1 to 8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R 2 is a group of the formula:
19. Соединение по утверждению 18, в котором указанное общее число атомов углерода в группе R2 составляет не более 4.19. The compound according to claim 18, in which the specified total number of carbon atoms in the group R 2 is not more than 4.
20. Соединение по утверждению 19, в котором указанное общее число атомов углерода в группе R2 составляет не более 3.20. The compound according to claim 19, in which the specified total number of carbon atoms in the group R 2 is not more than 3.
21. Соединение по любому из пп.18-20, в котором один из R21, R22 и R23 представляет собой Н, при этом две другие группы выбраны из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила.21. The compound according to any one of claims 18-20, in which one of R 21 , R 22 and R 23 is H, while the other two groups are selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, C 2-3 alkynyl and cyclopropyl.
22. Соединение по любому из пп.18-20, в котором два из R21, R22 и R23 представляют собой Н, при этом другая группа выбрана из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила.22. The compound according to any one of claims 18-20, wherein two of R 21 , R 22 and R 23 are H, while the other group is selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, C 2-3 alkynyl and cyclopropyl.
- 28 040749- 28 040749
23. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь и R2 23. A compound according to any one of claims 1 to 8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R 2
25. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует двойная связь и R2 представляет собой группу формулы:25. A compound according to any one of claims 1 to 8, wherein a double bond is present between C2 and C3 and R 2 is a group of the formula:
R24 R24
26. Соединение по утверждению 25, в котором R24 выбран из Н, метила, этила, этенила и этинила.26. The compound of claim 25 wherein R 24 is selected from H, methyl, ethyl, ethenyl and ethynyl.
27. Соединение по утверждению 26, в котором R24 выбран из Н и метила.27. The compound of claim 26 wherein R 24 is selected from H and methyl.
28. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует одинарная связь,28. The compound according to any one of claims 1 to 8, in which a single bond is present between C2 and C3,
R2 представляет собойR 2 is
, a R26a и R26b оба представляют собой Н., and R 26a and R 26b are both H.
29. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует одинарная связь,29. The compound according to any one of claims 1 to 8, in which a single bond is present between C2 and C3,
R2 представляет собойR 2 is
, a R26a и R26b оба представляют собой метил., and R 26a and R 26b are both methyl.
30. Соединение по любому из пп.1-8, в котором между С2 и C3 присутствует одинарная связь,30. A compound according to any one of claims 1 to 8, wherein a single bond is present between C2 and C3,
R2 представляет собойR 2 is
, один из R26a и R26b представляет собой Н, а другой выбран из C1-4 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены., one of R 26a and R 26b is H and the other is selected from C 1-4 saturated alkyl, C 2 - 3 alkenyl, the alkyl and alkenyl groups being optionally substituted.
31. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь и R1 представляет собой С5-7 арильную группу.31. A compound according to any one of claims 1-30, wherein a double bond is present between C2' and C3' and R 1 is a C 5-7 aryl group.
32. Соединение по утверждению 31, в котором R12 представляет собой фенил.32. The compound of claim 31 wherein R 12 is phenyl.
33. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь и R1 представляет собой C8-10 арильную группу.33. A compound according to any one of claims 1-30, wherein a double bond is present between C2' and C3' and R 1 is a C 8-10 aryl group.
34. Соединение по любому из пп.31-33, в котором R12 несет от одной до трех групп-заместителей.34. A compound according to any one of claims 31-33, wherein R 12 carries one to three substituent groups.
35. Соединение по любому из пп.31-34, в котором указанные заместители выбраны из метокси, этокси, фтора, хлора, циано, бис-оксиметилена, метилпиперазинила, морфолино и метилтиофенила.35. A compound according to any one of claims 31-34, wherein said substituents are selected from methoxy, ethoxy, fluorine, chlorine, cyano, bisoxymethylene, methylpiperazinyl, morpholino and methylthiophenyl.
36. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь и представляет собой C1-5 насыщенную алифатическую алкильную группу.36. A compound according to any one of claims 1-30, wherein a double bond is present between C2' and C3' and is a C 1-5 saturated aliphatic alkyl group.
37. Соединение по утверждению 36, в котором R12 представляет собой метил, этил или пропил.37. The compound of claim 36 wherein R 12 is methyl, ethyl or propyl.
38. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь, и представляет собой C3-6 насыщенную циклоалкильную группу.38. The compound according to any one of claims 1-30, wherein a double bond is present between C2' and C3' and is a C3-6 saturated cycloalkyl group.
39. Соединение по утверждению 38, в котором R12 представляет собой циклопропил.39. The compound of claim 38 wherein R 12 is cyclopropyl.
40. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь и представляет собой группу формулы:40. The compound according to any one of claims 1 to 30, in which a double bond is present between C2' and C3' and is a group of the formula:
R12 R12 R 12 R 12
R12 R12
41. Соединение по утверждению 40, в котором указанное общее число атомов углерода в группе R составляет не более 4.41. The compound according to claim 40, in which the specified total number of carbon atoms in the group R is not more than 4.
42. Соединение по утверждению 41, в котором указанное общее число атомов углерода в группе R составляет не более 3.42. The compound according to claim 41, in which the specified total number of carbon atoms in the group R is not more than 3.
43. Соединение по любому из пп.40-42, в котором один из R31, R32 и R33 представляет собой Н, при этом две другие группы выбраны из Н, C1-3 насыщенного алкила, C2-3 алкенила, C2-3 алкинила и циклопропила.43. The compound according to any one of claims 40-42, in which one of R 31 , R 32 and R 33 is H, while the other two groups are selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2 - 3 alkenyl, C 2 - 3 alkynyl and cyclopropyl.
44. Соединение по любому из пп.40-42, в котором два из R31, R32 и R33 представляют собой Н, при44. The compound according to any one of claims 40-42, in which two of R 31 , R 32 and R 33 are H, when
- 29 040749 этом другая группа выбрана из Н, C1-3 насыщенного алкила, С2-3 алкенила, С2-3 алкинила и циклопропила.- 29 040749 this other group is selected from H, C 1-3 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, C 2-3 alkynyl and cyclopropyl.
45. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь и R12 представляет собой группу формулы:45. A compound according to any one of claims 1 to 30, wherein a double bond is present between C2' and C3' and R 12 is a group of the formula:
46. Соединение по утверждению 45, в котором R12 представляет собой группу:46. Connection according to the statement 45, in which R 12 represents a group:
47. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует двойная связь и R12 представляет собой группу формулы:47. A compound according to any one of claims 1 to 30, wherein a double bond is present between C2' and C3' and R 12 is a group of the formula:
48. Соединение по утверждению 47, в котором R34 выбран из Н, метила, этила, этенила и этинила.48. The compound of claim 47 wherein R 34 is selected from H, methyl, ethyl, ethenyl and ethynyl.
49. Соединение по утверждению 48, в котором R34 выбран из Н и метила.49. The compound of claim 48 wherein R 34 is selected from H and methyl.
50. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует одинарная связь, R12 представляет собой R36b , a R36a и R36b оба представляют собой Н.50. A compound according to any one of claims 1 to 30, wherein a single bond is present between C2' and C3', R 12 is R36b and R 36a and R 36b are both H.
51. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует одинарная связь, R12 представляет собой R36b , a R36a и R36b оба представляют собой метил.51. A compound according to any one of claims 1 to 30, wherein a single bond is present between C2' and C3', R 12 is R36b and R 36a and R 36b are both methyl.
52. Соединение по любому из пп.1-30, в котором между С2' и C3' присутствует одинарная связь, R12 52. The compound according to any one of claims 1-30, in which a single bond is present between C2' and C3', R 12
А^р36а представляет собой R36b , один из R36a и R36b представляет собой Н, а другой выбран из C1-4 насы щенного алкила, C2-3 алкенила, причем алкильная и алкенильная группы необязательно замещены.Al p36a is R36b , one of R36a and R36b is H and the other is selected from C 1-4 saturated alkyl, C 2-3 alkenyl, the alkyl and alkenyl groups being optionally substituted.
53. Конъюгат по утверждению 1, в котором DL представляет собой:53. The conjugate according to claim 1, in which DL is:
54. Конъюгат по любому из пп.1-53, в котором указанное антитело содержит домен VH, содержащий CDR3 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 7.54. A conjugate according to any one of claims 1 to 53, wherein said antibody contains a VH domain containing a VH CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 7.
55. Конъюгат по любому из пп.1-54, в котором указанное антитело содержит домен VH, содержащий CDR2 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 6 и/или CDR1 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 5.55. A conjugate according to any one of claims 1 to 54, wherein said antibody contains a VH domain containing a VH CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 6 and/or CDR1 VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 5.
56. Конъюгат по любому из пп.1-55, в котором указанное антитело содержит домен VH, содержащий CDR3 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 7, CDR2 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 6 и CDR1 VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 5.56. A conjugate according to any one of claims 1 to 55, wherein said antibody contains a VH domain containing a VH CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 7, CDR2 VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 6 and CDR1 VH with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 5.
57. Конъюгат по любому из пп.1-56, в котором указанное антитело содержит домен VH, содержа57. The conjugate according to any one of claims 1-56, in which the specified antibody contains a VH domain, containing
- 30 040749 щий последовательность SEQ ID NO. 1.- 30 040749 the general sequence of SEQ ID NO. 1.
58. Конъюгат по любому из пп.1-57, в котором указанное антитело содержит домен VL, содержащий CDR3 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 10.58. A conjugate according to any one of claims 1 to 57, wherein said antibody contains a VL domain containing a VL CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 10.
59. Конъюгат по любому из пп.1-58, в котором указанное антитело содержит домен VL, содержащий CDR2 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 9 и/или CDR1 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 8.59. A conjugate according to any one of claims 1 to 58, wherein said antibody contains a VL domain containing a VL CDR2 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 9 and/or CDR1 VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 8.
60. Конъюгат по любому из пп.1-59, в котором указанное антитело содержит домен VL, содержащий CDR3 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 10, CDR2 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 9 и CDR1 VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO. 8.60. A conjugate according to any one of claims 1 to 59, wherein said antibody contains a VL domain containing a VL CDR3 with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 10, CDR2 VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 9 and CDR1 VL with the amino acid sequence of SEQ ID NO. 8.
61. Конъюгат по любому из пп.1-60, в котором указанное антитело содержит домен VL, содержащий последовательность SEQ ID NO. 2.61. A conjugate according to any one of claims 1-60, wherein said antibody contains a VL domain containing the sequence of SEQ ID NO. 2.
62. Конъюгат по любому из пп.1-61, в котором указанное антитело представляет собой интактное антитело.62. A conjugate according to any one of claims 1-61, wherein said antibody is an intact antibody.
63. Конъюгат по любому из пп.1-62, в котором указанное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO. 3, или тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO. 11.63. A conjugate according to any one of claims 1-62, wherein said antibody contains a heavy chain containing the sequence of SEQ ID NO. 3, or a heavy chain containing the sequence of SEQ ID NO. eleven.
64. Конъюгат по любому из пп.1-63, в котором указанное антитело содержит легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO. 4.64. A conjugate according to any one of claims 1-63, wherein said antibody contains a light chain containing the sequence of SEQ ID NO. 4.
65. Конъюгат по любому из пп.1-64, в котором указанное антитело является гуманизированным, деиммунизированным или антителом с измененной поверхностью.65. The conjugate of any one of claims 1-64, wherein said antibody is a humanized, deimmunized, or surface-altered antibody.
66. Конъюгат по любому из пп.1-65, в котором на указанном антителе отсутствуют неконъюгированные азидные группы.66. A conjugate according to any one of claims 1 to 65, wherein said antibody lacks unconjugated azide groups.
67. Конъюгат по любому из пп.1-66, в котором р равно 1, 2, 3 или 4.67. A conjugate according to any one of claims 1-66, wherein p is 1, 2, 3, or 4.
68. Композиция, содержащая смесь конъюгатов антитело-лекарственное средство по любому из пп.1-67, причем указанная средняя нагрузка лекарственным средством на антитело в указанной смеси конъюгатов антитело-лекарственное средство составляет от примерно 1 до примерно 4.68. A composition comprising a mixture of antibody-drug conjugates according to any one of claims 1-67, wherein said average drug load per antibody in said mixture of antibody-drug conjugates is from about 1 to about 4.
69. Конъюгат по любому из пп.1-67 для применения в терапии.69. A conjugate according to any one of claims 1-67 for use in therapy.
70. Конъюгат по любому из пп.1-67 для применения в лечении пролиферативного заболевания у субъекта.70. A conjugate according to any one of claims 1-67 for use in the treatment of a proliferative disease in a subject.
71. Конъюгат по утверждению 70, в котором указанное заболевание представляет собой рак.71. A conjugate of claim 70 wherein said disease is cancer.
72. Конъюгат по утверждению 71, в котором указанный рак представляет собой рак, выбранный из группы, включающей: гепатоцеллюлярную карциному, гепатобластому, немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак желудка, рак поджелудочной железы, нейробластому, рак надпочечников, феохромоцитому, параганглиому, медуллярную карциному щитовидной железы, рак скелетных мышц, липосаркому, глиому, опухоль Вильмса, нейроэндокринные опухоли, острый миелолейкоз и миелодиспластический синдром.72. The conjugate of claim 71, wherein said cancer is a cancer selected from the group consisting of: hepatocellular carcinoma, hepatoblastoma, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, colon cancer, breast cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, neuroblastoma , adrenal cancer, pheochromocytoma, paraganglioma, medullary thyroid carcinoma, skeletal muscle cancer, liposarcoma, glioma, Wilms tumor, neuroendocrine tumors, acute myeloid leukemia, and myelodysplastic syndrome.
73. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по любому из пп.1-67 и фармацевтически приемлемый разбавитель, носитель или вспомогательное вещество.73. A pharmaceutical composition containing a conjugate according to any one of claims 1 to 67 and a pharmaceutically acceptable diluent, carrier or excipient.
74. Фармацевтическая композиция по утверждению 73, дополнительно содержащая терапевтически эффективное количество химиотерапевтического агента.74. The pharmaceutical composition of claim 73, further comprising a therapeutically effective amount of a chemotherapeutic agent.
75. Применение конъюгата по любому из пп.1-67 в получении лекарственного средства для применения в лечении пролиферативного заболевания у субъекта.75. The use of a conjugate according to any one of claims 1 to 67 in the preparation of a medicament for use in the treatment of a proliferative disease in a subject.
76. Способ лечения рака, включающий введение пациенту фармацевтической композиции по утверждению 74.76. A method of treating cancer, comprising administering to a patient a pharmaceutical composition according to claim 74.
77. Способ по утверждению 76, в котором указанному пациенту вводят химиотерапевтический агент в комбинации с указанным конъюгатом.77. The method of claim 76 wherein said patient is administered a chemotherapeutic agent in combination with said conjugate.
ПримерыExamples
Обзор.Review.
ADC, раскрытые в настоящем документе, синтезируют с помощью двухэтапного способа. Первый этап представляет собой ремоделирование гликана, на котором происходит обрезка нативного Nсоединенного гликана до центрального GlcNAc, а затем добавление азидо-модифицированного GalNAc с образованием промежуточного соединения антитело-GalNAc-N3. Это соединение очищают с помощью хроматографии на белке А и затем конъюгируют с линкером лекарственного средства на втором этапе. Эти этапы описаны ниже в следующем описании синтеза лекарственное средство-линкер.The ADCs disclosed herein are synthesized in a two-step process. The first step is glycan remodeling, in which the native N-linked glycan is trimmed to a central GlcNAc and then azido-modified GalNAc is added to form an antibody-GalNAc-N 3 intermediate. This compound is purified by protein A chromatography and then conjugated to a drug linker in a second step. These steps are described below in the following description of the drug-linker synthesis.
- 31 040749- 31 040749
Синтез промежуточного соединения 3.Synthesis of intermediate compound 3.
Раствор BCN-спирта (0,384 г, 2,55 ммоль) в MeCN (25 мл) в атмосфере N2 охлаждали до 0°C и по каплям добавляли хлорсульфонилизоцианат (CSI) (0,255 мл, 415 мг, 2,93 ммоль, 1,15 экв.). После перемешивания в течение 15 мин по каплям добавляли Et3N (1,42 мл, 1,03 г, 10,2 ммоль, 4 экв.) и перемешивание продолжали в течение еще 10 мин. Затем добавляли раствор 2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)уксусной кислоты (1,0 г, 6,1 ммоль, 2,4 экв.) в H2O (5 мл) и реакционную смесь перемешивали до комнатной температуры в течение 2 ч. По истечении этого времени добавляли CHCl3 (50 мл) и H2O (100 мл) и разделяли слои. К водному слою в делительной воронке добавляли CH2Cl2 (100 мл) и рН доводили до 4 с помощью 1н HCl перед разделением слоев. Водный слой дважды экстрагировали с применением CH2Cl2 (2x100 мл), органические слои объединяли, высушивали (Na2SO4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии в резервуарной колонке на силикагеле, элюировали с применением CH2Cl2 до 20% МеОН в CH2Cl2. Выход составил 0,42 г (1,0 ммоль, 39%) 3 в виде бесцветного липкого воска.A solution of BCN alcohol (0.384 g, 2.55 mmol) in MeCN (25 ml) under N2 was cooled to 0°C and chlorosulfonyl isocyanate (CSI) (0.255 ml, 415 mg, 2.93 mmol, 1.15 equiv.). After stirring for 15 minutes, Et 3 N (1.42 ml, 1.03 g, 10.2 mmol, 4 eq.) was added dropwise and stirring was continued for another 10 minutes. A solution of 2-(2-(2-aminoethoxy)ethoxy)acetic acid (1.0 g, 6.1 mmol, 2.4 eq.) in H2O (5 ml) was then added and the reaction mixture was stirred to room temperature for 2 h. After this time, CHCl 3 (50 ml) and H2O (100 ml) were added and the layers were separated. CH 2 Cl 2 (100 ml) was added to the aqueous layer in a separating funnel and the pH was adjusted to 4 with 1N HCl before separating the layers. The aqueous layer was extracted twice using CH 2 Cl 2 (2x100 ml), the organic layers were combined, dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated. The residue was purified by silica gel reservoir column chromatography, eluting with CH 2 Cl 2 to 20% MeOH in CH 2 Cl 2 . The yield was 0.42 g (1.0 mmol, 39%) 3 as a colorless sticky wax.
- 32 040749- 32 040749
Синтез линкера лекарственного средства.Synthesis of a drug linker.
о оoh oh
- 33 040749- 33 040749
ОABOUT
Соединение 1 может быть синтезировано, как описано в WO 2014/057074 - см. соединение 22.Compound 1 can be synthesized as described in WO 2014/057074 - see compound 22.
(а) Тетракистрифенилфосфин палладия (Pd(PPh3)4, 4,8 мг, 4,15 мкмоль) взвешивают и помещают в инертную атмосферу. Раствор пирролидина (5,0 мкл, 4,3 мг, 60 мкмоль) в ДХМ (1 мл) дегазируют путем барботирования N2 через раствор. Раствор 1 (27 мг, 24 мкмоль) в ДХМ (6 мл) дегазируют путем барботирования N2 через раствор. Во время барботирования раствора с применением N2 добавляют дегазированный раствор пирролидина. Взвешенный Pd(PPh3)4 растворяют в ДХМ (1 мл) и добавляют 0,9 мл этого раствора. Через 50 мин барботирования с применением N2 добавляют ДХМ (25 мл) и смесь промывают водным насыщенным NH4Cl (25 мл). После разделения водный слой экстрагируют с применением ДХМ (2x25 мл). Объединенные органические слои высушивают (Na2SO4) и концентрируют. Остаток очищают методом ОФ-ВЭЖХ (30-90% MeCN (0,1% муравьиной кислоты) в H2O (0,1% муравьиной кислоты)). Объединенные фракции пропускают через колонки SPE (HCO3-) и концентрируют. После добавления MeCN (50 мл) смесь снова концентрируют. Полученный остаток 2 используют на следующем этапе.(a) Palladium tetrakistriphenylphosphine (Pd(PPh 3 ) 4 , 4.8 mg, 4.15 µmol) is weighed and placed under an inert atmosphere. A solution of pyrrolidine (5.0 μl, 4.3 mg, 60 μmol) in DCM (1 ml) was degassed by bubbling N2 through the solution. A solution of 1 (27 mg, 24 μmol) in DCM (6 ml) was degassed by bubbling N2 through the solution. While the solution is being sparged with N2, a degassed pyrrolidine solution is added. Weighed Pd(PPh 3 ) 4 is dissolved in DCM (1 ml) and 0.9 ml of this solution is added. After 50 min sparging with N2, DCM (25 ml) was added and the mixture was washed with aqueous saturated NH4Cl (25 ml). After separation, the aqueous layer was extracted with DCM (2x25 ml). The combined organic layers are dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by RP-HPLC (30-90% MeCN (0.1% formic acid) in H2O (0.1% formic acid)). The combined fractions are passed through SPE columns (HCO3 - ) and concentrated. After MeCN (50 ml) was added, the mixture was concentrated again. The resulting residue 2 is used in the next step.
Превращение реакции можно контролировать с помощью анализа методом ЖХ/МС. Колонка: колонка XBridge ВЕН С18 Intelligent Speed (IS), 130 Λ, 3,5 мкм (4,6x20 мм).The conversion of the reaction can be monitored by LC/MS analysis. Column: XBridge BEN C18 Intelligent Speed (IS), 130 Λ, 3.5 µm (4.6x20 mm) column.
Подвижная фаза А: вода (0,1% муравьиной кислоты), подвижная фаза В (0,1% муравьиной кислоты). Обнаружение с применением PDA и ESI+. Образцы могут быть получены путем разбавления реакционной смеси MeCN.Mobile phase A: water (0.1% formic acid), mobile phase B (0.1% formic acid). Detection using PDA and ESI+. Samples can be obtained by diluting the reaction mixture with MeCN.
(b) К раствору вышеуказанного остатка 2 в CHC13 (5 мл) добавляют раствор 3 (15 мг, 36 мкмоль, мол. масса 418 г/моль) в CHCl3 (0,8 мл). Полученную смесь добавляют к твердому веществу EDC.HC1 (4,7 мг, 25 мкмоль), добавляли CHCl3 (5 мл) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляют ДХМ (30 мл) и полученную смесь промывают водой (30 мл). После разделения водную фазу экстрагируют с применением ДХМ (30 мл). Объединенные органические слои высушивают (Na2SO4) и концентрируют. Остаток очищают с помощью ОФ-ВЭЖХ (30-90% MeCN (без кислоты) в Н2О (0,01% муравьиной кислоты)). Перед сбором пробирки для элюции после ВЭЖХ заполняют 5% водным (NH4)HCO3. Объединенные фракции ВЭЖХ экстрагируют с применением ДХМ (3x20 мл). Объединенные органические слои высушивают (Na2SO4) и концентрируют. Продукт 4 получают в виде светло-желтого/белого масла (21 мг, 16 мкмоль, мол. масса 1323 г/моль, 67% после двух этапов).(b) To a solution of the above residue 2 in CHCl3 (5 ml) was added a solution of 3 (15 mg, 36 μmol, mol. wt. 418 g/mol) in CHCl 3 (0.8 ml). The resulting mixture was added to the solid EDC.HC1 (4.7 mg, 25 µmol), CHCl 3 (5 ml) was added and the mixture was stirred for 30 minutes. DCM (30 ml) was added and the resulting mixture was washed with water (30 ml). After separation, the aqueous phase is extracted with DCM (30 ml). The combined organic layers are dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. The residue was purified by RP-HPLC (30-90% MeCN (no acid) in H 2 O (0.01% formic acid)). Before collection, the HPLC elution tubes are filled with 5% aqueous (NH4)HCO 3 . The combined HPLC fractions were extracted using DCM (3x20 ml). The combined organic layers are dried (Na 2 SO 4 ) and concentrated. Product 4 is obtained as a light yellow/white oil (21 mg, 16 μmol, mol. wt. 1323 g/mol, 67% after two steps).
Превращение реакции можно контролировать с помощью анализа методом ЖХ/МС. Колонка: колонка XBridge ВЕН С18 Intelligent Speed (IS), 130 Λ, 3,5 мкм (4,6x20 мм). Подвижная фаза А: вода (0,1% муравьиной кислоты), подвижная фаза В (0,1% муравьиной кислоты). Обнаружение с применением PDA и ESI+.The conversion of the reaction can be monitored by LC/MS analysis. Column: XBridge BEN C18 Intelligent Speed (IS), 130 Λ, 3.5 µm (4.6x20 mm) column. Mobile phase A: water (0.1% formic acid), mobile phase B (0.1% formic acid). Detection using PDA and ESI+.
Ремоделирование гликана (ADC, направленный против DLK1, ConjA1)Glycan remodeling (ADC directed against DLK1, ConjA1)
Получение антитела.Obtaining an antibody.
Буфер в приблизительно 60 мг антитела к DLK1 заменяли 25 мМ трис/Cl, 150 мМ NaCl, pH=8,0 с помощью колонки для обессоливания G25; 4x2,5 мл при 6 мг/мл, загруженных на 4x колонки для обесBuffer of approximately 60 mg of anti-DLK1 antibody was replaced with 25 mM Tris/Cl, 150 mM NaCl, pH=8.0 using a G25 desalting column; 4x2.5ml at 6mg/ml loaded onto 4x obes columns
- 34 040749 соливания PD10 (GE 17085101). Затем антитело с замененным буфером концентрировали до по меньшей мере 25 мг/мл с использованием центробежного концентратора Vivaspin 20 (Sigma Z614637). С помощью УФ-анализа при А280-320 нм, используя коэффициент экстинкции 1,5, было подтверждено, что концентрация белка составляет 28,4 мг/мл.- 34 040749 salting PD10 (GE 17085101). The buffer exchanged antibody was then concentrated to at least 25 mg/mL using a Vivaspin 20 centrifugal concentrator (Sigma Z614637). By UV analysis at A280-320 nm, using an extinction coefficient of 1.5, the protein concentration was confirmed to be 28.4 mg/mL.
Реакция ремоделирования.remodeling reaction.
Ремоделирование гликана выполняли в однореакторной реакции в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Следующую реакционную смесь получали с добавлением растворов/реагентов в порядке, подробно представленном ниже.Glycan remodeling was performed in a one pot reaction overnight (16 h) at room temperature. The following reaction mixture was prepared with the addition of solutions/reagents in the order detailed below.
Процедура очистки на белке А.Purification procedure on protein A.
Связывание с белком А и элюирование выполняли на колонке HiTrap MabSelect Sure 5 мл (GE 110034-94). Все хроматографические этапы выполняли при скорости потока 240 см/ч, используя систему AKTA Prime plus. Колонку подготавливали и использовали следующим образом.Protein A binding and elution was performed on a HiTrap MabSelect Sure 5 ml column (GE 110034-94). All chromatographic steps were performed at a flow rate of 240 cm/h using the AKTA Prime plus system. The column was prepared and used as follows.
После аффинной очистки на белке А небольшой образец продукта может быть восстановлен с применением DTT и впоследствии подвергнут анализу методом МС. Типичный масс-спектр успешной реакции переноса показывает образование одного основного продукта (90% от общей тяжелой цепи), возникающего в результате переноса модифицированной галактозы к антителу с замещенным центральным GlcNAc(Fuc), и минорного продукта (±10% от общей тяжелой цепи), полученного в результате переноса модифицированной галактозы к антителу с замещенным центральным GlcNAc (без фукозы).After protein A affinity purification, a small sample of the product can be recovered using DTT and subsequently subjected to MS analysis. A typical mass spectrum of a successful transfer reaction shows the formation of one major product (90% of the total heavy chain) resulting from the transfer of a modified galactose to an antibody with a substituted central GlcNAc(Fuc), and a minor product (±10% of the total heavy chain), resulting from the transfer of a modified galactose to an antibody with a substituted central GlcNAc (no fucose).
- 35 040749- 35 040749
Замена буфера после очистки на белке А.Buffer replacement after purification on protein A.
Далее, буфер в ремоделированном и очищенном GalNAc-N3-антителе к DLK1 заменяли фосфатносолевым буфером (ФСБ) и концентрировали до приблизительно 16,6 мг/мл с использованием центробежного концентратора Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Элюат после очистки на белке А разбавляли ФСБ в соотношении 1:1, затем повторно концентрировали до первоначального объема и повторяли это 6 раз. Наконец, объем уменьшали до целевого значения 16-17 мг/мл, и образец извлекали из устройства. С помощью УФ-анализа при А280-320 нм, используя коэффициент экстинкции 1,5, было подтверждено, что концентрация белка составляет 16,4 мг/мл, и всего было выделено 2,7 мл.Next, the buffer in the remodeled and purified GalNAc-N 3 anti-DLK1 antibody was replaced with phosphate buffered saline (PBS) and concentrated to approximately 16.6 mg/ml using a Vivaspin 20 centrifugal concentrator (Sigma Z614637). The eluate after purification on protein A was diluted with PBS in a ratio of 1:1, then re-concentrated to the original volume and repeated 6 times. Finally, the volume was reduced to the target value of 16-17 mg/ml and the sample was removed from the device. By UV analysis at A280-320 nm, using an extinction coefficient of 1.5, the protein concentration was confirmed to be 16.4 mg/ml, and a total of 2.7 ml was isolated.
Конъюгация 4 с модифицированным антителом для получения ConjA1Conjugation 4 with modified antibody to generate ConjA1
Условия реакции.reaction conditions.
2,7 мл 16,4 мг/мл азидо-модифицированного антитела к DLK1 (в этом примере HuBa-1-3d, описанное в настоящем документе) 0,3 мл 10 мМ 4 в диметилацетамиде.2.7 ml 16.4 mg/ml azido-modified anti-DLK1 antibody (in this example HuBa-1-3d described herein) 0.3 ml 10 mM 4 in dimethylacetamide.
Реакционную смесь тщательно перемешивали и оставляли для протекания конъюгации в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Конъюгационную смесь фильтровали через PVDF-фильтр с размером пор 0,2 мкм (Millipore SLGV033RS) перед окончательной очисткой и изготовлением состава.The reaction mixture was thoroughly stirred and allowed to conjugate overnight (16 h) at room temperature. The conjugation mixture was filtered through a 0.2 μm PVDF filter (Millipore SLGV033RS) prior to final purification and formulation.
Очистка ConjA1.Purification of ConjA1.
Профильтрованную конъюгационную смесь очищали с использованием центробежного концентратора Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Конъюгационную смесь разбавляли 30 мМ гистидина HCl, 200 мМ сорбита, рН=6,0 в соотношении 1:1 и повторно концентрировали до первоначального объема. Это повторяли 12 раз перед извлечением очищенной массы ADC из центрифужного устройства.The filtered conjugation mixture was purified using a Vivaspin 20 centrifugal concentrator (Sigma Z614637). The conjugation mixture was diluted with 30 mm histidine HCl, 200 mm sorbitol, pH=6.0 in a ratio of 1:1 and re-concentrated to the original volume. This was repeated 12 times before removing the purified ADC mass from the centrifuge.
Концентрацию белка определяли с помощью количественного анализа методом гель-проникающей хроматографии (SEC), используя калибровочную кривую антитела и конъюгат, разбавленный до приблизительно 5 мг/мл дополнительными 30 мМ гистидина HCl, 200 мМ сорбита, рН=6,0. Твин 20 добавляли до 0,02% мас./об. из 1% маточного раствора в 30 мМ гистидина HCl, 200 мМ сорбита, рН=6,0, и концентрацию повторно тестировали с помощью количественного анализа методом SEC. Отбирали образец для тестирования, а остаток разделяли на аликвоты по 1 мл и замораживали при -80°C.Protein concentration was determined by quantitative analysis by gel permeation chromatography (SEC) using an antibody calibration curve and conjugate diluted to approximately 5 mg/ml with additional 30 mM histidine HCl, 200 mM sorbitol, pH=6.0. Tween 20 was added to 0.02% w/v. from a 1% stock solution in 30 mM histidine HCl, 200 mM sorbitol, pH=6.0, and the concentration was retested by SEC quantitation. A sample was taken for testing, and the residue was divided into 1 ml aliquots and frozen at -80°C.
Анализ продукта показал следующие свойства:Product analysis showed the following properties:
прозрачный, бесцветный, без частицtransparent, colorless, without particles
5,17 [белок] по данным SEC средний DAR 1,87 (по данным хроматографии с обращенной фазой)5.17 [protein] SEC mean DAR 1.87 (reverse phase chromatography)
0,09 ЕЭ/мг эндотоксина <4,5% свободного соединения лекарственное средство-линкер рН=6,060.09 EU/mg endotoxin <4.5% free drug-linker pH=6.06
Ремоделирование гликана (ADC, направленный против KAAG1, ConjA2)Glycan remodeling (ADC directed against KAAG1, ConjA2)
Получение антитела.Obtaining an antibody.
Буфер в приблизительно 150 мг антитела к KAAG1 (приблизительно 25 мл при 6,13 мг/мл в ФСБ, рН=7,4) заменяли 25 мМ трис/Cl, 150 мМ NaCl, pH=8,0 и концентрировали до >25 мг/мл с использованием центробежных концентраторов Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Сначала антитело концентрировали до 12 мл, после этого разбавляли 25 мМ трис/Cl, 150 мМ NaCl, pH=8,0 в соотношении 1:1, затем повторно концентрировали до 12 мл, и этот способ повторяли 6 раз. Наконец, маточный раствор с замененным буфером дополнительно концентрировали до 6 мл. Концентрацию белка определяли с помощью УФанализа при А280-320 нм, используя коэффициент экстинкции 1,5, а затем разбавляли до 25 мг/мл с применением 25 мМ трис/Cl, 150 мМ NaCl, pH=8,0.Buffer of approximately 150 mg of anti-KAAG1 antibody (approximately 25 ml at 6.13 mg/ml in PBS, pH=7.4) was replaced with 25 mM Tris/Cl, 150 mM NaCl, pH=8.0 and concentrated to >25 mg /ml using Vivaspin 20 centrifugal concentrators (Sigma Z614637). The antibody was first concentrated to 12 ml, then diluted with 25 mM Tris/Cl, 150 mM NaCl, pH 8.0 in a ratio of 1:1, then re-concentrated to 12 ml, and this method was repeated 6 times. Finally, the buffer exchanged stock solution was further concentrated to 6 ml. Protein concentration was determined by UV analysis at A280-320 nm using an extinction coefficient of 1.5 and then diluted to 25 mg/ml using 25 mM Tris/Cl, 150 mM NaCl, pH=8.0.
Реакция ремоделирования.remodeling reaction.
Ремоделирование гликана выполняли в однореакторной реакции в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Следующую реакционную смесь получали, добавляя растворы/реагенты в порядке, подробно представленном ниже.Glycan remodeling was performed in a one pot reaction overnight (16 h) at room temperature. The following reaction mixture was prepared by adding solutions/reagents in the order detailed below.
- 36 040749- 36 040749
Процедура очистки на белке А.Purification procedure on protein A.
Связывание с белком А и элюирование выполняли на колонке HiScreen MabSelect Sure 4,7 мл (GE 28-9269-77). Все хроматографические этапы выполняли при скорости потока 240 см/ч, используя систему AKTA Prime plus. Колонку подготавливали и использовали следующим образом.Protein A binding and elution was performed on a HiScreen MabSelect Sure 4.7 ml column (GE 28-9269-77). All chromatographic steps were performed at a flow rate of 240 cm/h using the AKTA Prime plus system. The column was prepared and used as follows.
После аффинной очистки на белке А небольшой образец продукта может быть восстановлен с применением DTT и впоследствии подвергнут анализу методом МС. Типичный масс-спектр успешной реакции переноса показывает образование одного основного продукта (90% от общей тяжелой цепи), полученного в результате переноса модифицированной галактозы к антителу с замещенным центральным GlcNAc(Fuc), и минорного продукта (±10% от общей тяжелой цепи), полученного в результате переноса модифицированной галактозы к антителу с замещенным центральным GlcNAc (без фукозы).After protein A affinity purification, a small sample of the product can be recovered using DTT and subsequently subjected to MS analysis. A typical mass spectrum of a successful transfer reaction shows the formation of one major product (90% of the total heavy chain) resulting from the transfer of a modified galactose to an antibody with a substituted central GlcNAc(Fuc) and a minor product (±10% of the total heavy chain), resulting from the transfer of a modified galactose to an antibody with a substituted central GlcNAc (no fucose).
Замена буфера после очистки на белке А.Buffer replacement after purification on protein A.
рН элюата с белка А, содержащего ремоделированное/очищенное Ab-GalNAc-N3, корректировали путем добавления 1,5 М трис-основания при 3,2% об./об., затем буфер заменяли ФСБ и концентрировали до »17 мг/мл, используя центробежные концентраторы Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Сначала объединенный продукт со скорректированным рН разбавляли ФСБ в соотношении 1:1, затем повторно концентрировали до первоначального объема и этот способ повторяли 6 раз. Наконец, маточный раствор с замененным буфером дополнительно концентрировали до целевого значения »17 мг/мл. С помощью УФанализа при А280-320 нм, используя коэффициент экстинкции 1,5, было подтверждено, что концентрация белка составляет 16,5 мг/мл; всего было выделено 7,9 мл с выходом 88%.The protein A eluate containing remodeled/purified Ab-GalNAc-N 3 was pH adjusted by adding 1.5 M Tris base at 3.2% v/v, then the buffer was replaced with PBS and concentrated to ≈17 mg/mL using centrifugal concentrators Vivaspin 20 (Sigma Z614637). The combined pH-adjusted product was first diluted 1:1 with PBS, then re-concentrated to the original volume and this process was repeated 6 times. Finally, the buffer exchanged stock solution was further concentrated to a target value of ≈17 mg/mL. By UV analysis at A280-320 nm, using an extinction coefficient of 1.5, the protein concentration was confirmed to be 16.5 mg/mL; a total of 7.9 ml was isolated with a yield of 88%.
Конъюгация 4 с модифицированным антителом с получением ConjA2Conjugation 4 with modified antibody to produce ConjA2
К 7,9 мл 16,5 мг/мл Ab-GalNAc-N3 (Ab=3A4, описанное в настоящем документе) добавляли 0,788 мл 10 мМ PL1601 в ДМФА (10% конечный об./об. ДМФА). Реакционную смесь тщательно перемешивали и оставляли для протекания конъюгации в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Конъюгационную смесь фильтровали через PES-фильтр с размером пор 0,22 мкм (Millipore SLGV033RS) перед окончательной очисткой и изготовлением состава.To 7.9 ml of 16.5 mg/ml Ab-GalNAc-N 3 (Ab=3A4 described herein) was added 0.788 ml of 10 mM PL1601 in DMF (10% final v/v DMF). The reaction mixture was thoroughly stirred and allowed to conjugate overnight (16 h) at room temperature. The conjugation mixture was filtered through a 0.22 µm PES filter (Millipore SLGV033RS) prior to final purification and formulation.
Очистка ConjA2.Purification of ConjA2.
Профильтрованную конъюгационную смесь очищали путем диафильтрации в постоянном объеме с использованием мембраны Pellicon 3 30 кДа при площади мембраны »50 г/м2, поперечном потоке 5,0±0,25 л/мин/м2, ТМР 1,0±0,2 бар и в общей сложности 12 диаобъемах обмена буфера на ФСБ с рН=7,4. Диафильтрованный объединенный продукт извлекали из UFDF и фильтровали через мембранный PESфильтр с размером пор 0,22 мкм (Millipore SLGV033RS) в стерильные пробирки, производстваThe filtered conjugation mixture was purified by constant volume diafiltration using a Pellicon 3 30 kDa membrane with membrane area ≥50 g/m 2 , cross flow 5.0 ± 0.25 L/min/m 2 , TMP 1.0 ± 0.2 bar and a total of 12 diavolumes of exchange buffer for PBS pH=7.4. The diafiltered pooled product was recovered from the UFDF and filtered through a 0.22 µm PES membrane filter (Millipore SLGV033RS) into sterile tubes manufactured
- 37 040749- 37 040749
Eppendorf. Концентрацию белка определяли с помощью УФ-анализа при А280-320 нм с использованием коэффициента экстинкции 1,5, она составила 4,9 мг/мл. Отбирали образец для тестирования, а остаток хранили при 4°C.Eppendorf. The protein concentration was determined by UV analysis at A280-320 nm using an extinction coefficient of 1.5 and was 4.9 mg/mL. A sample was taken for testing and the residue was stored at 4°C.
Анализ продукта показал следующие свойства:Product analysis showed the following properties:
прозрачный, бесцветный, без частицtransparent, colorless, without particles
4,9 мг/мл [белок] по данным спектроскопии при А280/330 нм средний DAR 1,9 (по данным хроматографии с обращенной фазой)4.9 mg/mL [protein] spectroscopy at A280/330 nm average DAR 1.9 (reverse phase chromatography)
0,07 ЕЭ/мг эндотоксина0.07 EU/mg endotoxin
3% свободного соединения лекарственное средство-линкер3% free drug-linker compound
98,3% мономера по данным гель-проникающей хроматографии98.3% monomer by gel permeation chromatography
Ремоделирование гликана (ADC, направленный против мезотелина, ConjA3)Glycan remodeling (ADC directed against mesothelin, ConjA3)
Получение антитела.Obtaining an antibody.
Буфер в приблизительно 60 мг антитела к мезотелину заменяют 25 мМ трис/Cl, 150 мМ NaCl, pH=8,0 с помощью колонки для обессоливания G25; 4x2,5 мл при 6 мг/мл, загруженных на 4х колонки для обессоливания PD10 (GE 17085101). Затем антитело с замененным буфером концентрируют до по меньшей мере 25 мг/мл с использованием центробежного концентратора Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Концентрацию белка подтверждают с помощью УФ-анализа при А280-320 нм с использованием коэффициента экстинкции 1,5.Buffer of approximately 60 mg of anti-mesothelin antibody is replaced with 25 mM Tris/Cl, 150 mM NaCl, pH=8.0 using a G25 desalting column; 4x2.5ml at 6mg/ml loaded onto 4x PD10 desalting columns (GE 17085101). The buffer exchanged antibody is then concentrated to at least 25 mg/ml using a Vivaspin 20 centrifugal concentrator (Sigma Z614637). The protein concentration is confirmed by UV analysis at A280-320 nm using an extinction coefficient of 1.5.
Реакция ремоделирования.remodeling reaction.
Ремоделирование гликана выполняют в однореакторной реакции в течение ночи (16 ч) при комнатной температуре. Следующую реакционную смесь получают, добавляя растворы/реагенты в порядке, подробно представленном ниже.Glycan remodeling is performed in a one-pot reaction overnight (16 hours) at room temperature. The following reaction mixture is prepared by adding solutions/reagents in the order detailed below.
Процедура очистки на белке А.Purification procedure on protein A.
Связывание с белком А и элюирование выполняют на колонке HiTrap MabSelect Sure объемом 5 мл (GE 11-0034-94). Все хроматографические этапы выполняют при скорости потока 240 см/ч с использованием системы AKTA Prime plus. Колонку подготавливают и используют следующим образом.Protein A binding and elution was performed on a 5 ml HiTrap MabSelect Sure column (GE 11-0034-94). All chromatographic steps are performed at a flow rate of 240 cm/h using the AKTA Prime plus system. The column is prepared and used as follows.
- 38 040749- 38 040749
После аффинной очистки на белке А небольшой образец продукта может быть восстановлен с применением DTT и впоследствии подвергнут анализу методом МС. Типичный масс-спектр успешной реакции переноса показывает образование одного основного продукта (90% от общей тяжелой цепи), полученного в результате переноса модифицированной галактозы к антителу с замещенным центральным GlcNAc(Fuc), и минорного продукта (±10% от общей тяжелой цепи), полученного в результате переноса модифицированной галактозы к антителу с замещенным центральным GlcNAc (без фукозы).After protein A affinity purification, a small sample of the product can be recovered using DTT and subsequently subjected to MS analysis. A typical mass spectrum of a successful transfer reaction shows the formation of one major product (90% of the total heavy chain) resulting from the transfer of a modified galactose to an antibody with a substituted central GlcNAc(Fuc) and a minor product (±10% of the total heavy chain), resulting from the transfer of a modified galactose to an antibody with a substituted central GlcNAc (no fucose).
Замена буфера после очистки на белке А.Buffer replacement after purification on protein A.
Далее, буфер в ремоделированном и очищенном GalNAc-Nз-антителе к мезотелину заменяют фосфатно-солевым буфером (ФСБ) и концентрируют до приблизительно 16,6 мг/мл с использованием центробежного концентратора Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Элюат с белка А разбавляют ФСБ в соотношении 1:1, затем повторно концентрируют до первоначального объема и это повторяют 6 раз. Наконец, объем уменьшают до целевого значения 16-17 мг/мл, и образец извлекают из устройства. Концентрацию белка подтверждают с помощью УФ-анализа при А280-320 нм с использованием коэффициента экстинкции 1,5.Next, the buffer in the remodeled and purified GalNAc-N3 mesothelin antibody was replaced with phosphate buffered saline (PBS) and concentrated to approximately 16.6 mg/mL using a Vivaspin 20 centrifugal concentrator (Sigma Z614637). The protein A eluate is diluted 1:1 with PBS, then re-concentrated to the original volume and this is repeated 6 times. Finally, the volume is reduced to the target value of 16-17 mg/ml and the sample is removed from the device. The protein concentration is confirmed by UV analysis at A280-320 nm using an extinction coefficient of 1.5.
Конъюгация 4 с модифицированным антителом для получения ConjA3Conjugation 4 with modified antibody to produce ConjA3
Условия реакции.reaction conditions.
2,7 мл ~15 мг/мл азидо-модифицированного антитела к мезотелину.2.7 ml ~15 mg/ml azido-modified mesothelin antibody.
0,3 мл 10 мМ 4 в диметилацетамиде.0.3 ml 10 mM 4 in dimethylacetamide.
Реакционную смесь тщательно перемешивают и оставляют для протекания конъюгации в течение ночи (16 часов) при комнатной температуре. Конъюгационную смесь фильтруют через PVDF-фильтр с размером пор 0,2 мкм (Millipore SLGV033RS) перед окончательной очисткой и изготовлением состава.The reaction mixture is thoroughly stirred and allowed to conjugate overnight (16 hours) at room temperature. The conjugation mixture is filtered through a 0.2 μm PVDF filter (Millipore SLGV033RS) prior to final purification and formulation.
Очистка ConjA3.Purification of ConjA3.
Профильтрованную конъюгационную смесь очищают с использованием центробежного концентратора Vivaspin 20 (Sigma Z614637). Конъюгационную смесь разбавляют 30 мМ гистидина HCl, 200 мМ сорбита, рН=6,0 в соотношении 1:1, а затем повторно концентрируют до первоначального объема. Это повторяют 12 раз перед извлечением очищенной массы ADC из центрифужного устройства.The filtered conjugation mixture is purified using a Vivaspin 20 centrifugal concentrator (Sigma Z614637). The conjugation mixture is diluted with 30 mm histidine HCl, 200 mm sorbitol, pH=6.0 in a ratio of 1:1, and then re-concentrate to the original volume. This is repeated 12 times before removing the cleaned mass of ADC from the centrifuge device.
Концентрацию белка определяют с помощью количественного анализа методом SEC с использованием калибровочной кривой антитела и конъюгата, разбавленного до приблизительно 5 мг/мл дополнительными 30 мМ гистидина HCl, 200 мМ сорбита, рН=6,0. Твин 20 добавляют до 0,02% мас./об. из 1% маточного раствора в 30 мМ гистидина HCl, 200 мМ сорбита, рН=6,0, и концентрацию повторно тестируют с помощью количественного анализа методом SEC. Отбирают образец для тестирования, а оставшуюся часть распределяют на аликвоты по 1 мл и замораживают при -80°C.Protein concentration is determined by SEC quantitation using a standard curve of antibody and conjugate diluted to approximately 5 mg/mL with additional 30 mM histidine HCl, 200 mM sorbitol, pH=6.0. Tween 20 is added to 0.02% w/v. from a 1% stock solution in 30 mM histidine HCl, 200 mM sorbitol, pH=6.0, and the concentration is retested by quantitative SEC analysis. A sample is taken for testing and the remainder is aliquoted into 1 ml aliquots and frozen at -80°C.
Цитотоксичность ConjA1 in vitro.Cytotoxicity of ConjA1 in vitro.
Колбы с клетками Lu135 или клетками SK-N-FI обрабатывали трипсином, и высвобожденные клетки промывали и ресуспендировали в свежей среде. Плотность клеток определяли путем смешивания с трипановым синим (0,4% (мас./об.) Sigma ТВ154) в соотношении 1:1 и подсчета прозрачных/синих (живых/мертвых) клеток с помощью автоматического счетчика клеток Luna II (Logos Biosystems). Суспензию клеток разбавляли до требуемой плотности посева (20х104/мл), распределяли в белые 96-луночные микропланшеты с плоским дном (50 мкл/лунку) и инкубировали в течение ночи.Flasks with Lu135 cells or SK-N-FI cells were trypsinized and the released cells were washed and resuspended in fresh medium. Cell density was determined by mixing with trypan blue (0.4% (w/v) Sigma TB154) at a ratio of 1:1 and counting clear/blue (live/dead) cells using a Luna II automatic cell counter (Logos Biosystems) . The cell suspension was diluted to the desired seeding density (20 x 104/ml), dispensed into white flat-bottomed 96-well microplates (50 µl/well) and incubated overnight.
Маточный раствор (1 мл) ConjA1 (20 мкг/мл) получали путем разбавления ConjA1, стерилизованноA stock solution (1 ml) of ConjA1 (20 µg/ml) was prepared by diluting ConjA1, sterilized
- 39 040749 го путем фильтрации, в той же среде для культивирования клеток. Набор из 8х 10-кратных разведений маточного раствора ConjA1 получали в стерильном 24-луночном планшете путем последовательного переноса 100 мкл в 900 мкл среды для культивирования клеток. Каждое разведение ConjA1 распределяли, 50 мкл/лунку, в лунки с 4 повторами 96-луночного планшета, содержащего суспензию клеток. В контрольные лунки вносили аналогичный объем только культуральной среды.- 39 040749 by filtration, in the same cell culture medium. A set of 8 x 10-fold dilutions of ConjA1 stock solution was prepared in a sterile 24-well plate by sequentially transferring 100 μl to 900 μl of cell culture medium. Each dilution of ConjA1 was dispensed, 50 μl/well, into 4-replicate wells of a 96-well cell suspension plate. Control wells were filled with the same volume of culture medium only.
После периода воздействия ConjA1 жизнеспособность клеток измеряли с помощью Promega CellTiter-Glo, добавляя 100 мкл/лунку, перемешивая в течение 2 мин и считывая сигнал на Envision с использованием протокола люминесценции. Данные анализировали с использованием программного обеспечения Graphpad Prism.After a period of exposure to ConjA1, cell viability was measured with Promega CellTiter-Glo by adding 100 µl/well, mixing for 2 min and reading the signal on Envision using the luminescence protocol. Data was analyzed using Graphpad Prism software.
Было установлено, что ЭК50 ConjA1 против клеток Lu-135 составляет 0,01765 мкг/мл. ЭК50 контроля ADC составляла 0,5326 мкг/мл (см. фиг. 1А*).The EC 50 of ConjA1 against Lu-135 cells was found to be 0.01765 μg/ml. The EC 50 of the ADC control was 0.5326 μg/ml (see FIG. 1A*).
Было установлено, что ЭК50 ConjA1 против клеток SK-N-FI составляет 0,1565 мкг/мл. ЭК50 контроля ADC составляла 5x105 мкг/мл (см. фиг. 1В*).ConjA1 EC 50 against SK-N-FI cells was found to be 0.1565 µg/ml. The EC 50 of the ADC control was 5x105 μg/ml (see FIG. 1B*).
* На обеих фиг. 1А * 1B ▼ представляет собой ConjA1 и • представляет собой контроль ADC, идентичный в других отношениях, содержащий антитело В12, неспецифичное в отношении DLK1.* In both Figs. 1A * 1B ▼ is ConjA1 and • is an otherwise identical ADC control containing B12 antibody non-specific for DLK1.
Исследования эффективности in vivo с применением ConjA1.In vivo efficacy studies using ConjA1.
Противоопухолевая активность в ксенотрансплантатной модели LI1097, происходящей от пациента с раком печени (PDX), in vivo.Antitumor activity in the LI1097 xenograft model derived from a liver cancer patient (PDX) in vivo.
Затравочные опухоли LI1097 приживляли подкожно у мышей NOD/SCID и поддерживали подкожно у голых мышей BALB/c перед имплантацией. Когда объемы опухолей достигали 700-1500 мм3, опухоли собирали и разрезали на кусочки диаметром примерно 2-3 мм3. Опухоли или кусочки опухоли промывали ледяными средами RPMI1640 (без сыворотки) и затем помещали в ледяные среды для использования.LI1097 seed tumors were engrafted subcutaneously in NOD/SCID mice and maintained subcutaneously in BALB/c nude mice prior to implantation. When tumor volumes reached 700-1500 mm 3 , the tumors were harvested and cut into pieces with a diameter of approximately 2-3 mm 3 . Tumors or tumor pieces were washed with ice-cold RPMI1640 media (no serum) and then placed in ice-cold media for use.
Перед имплантацией опухоли кожу самок голых мышей BALB/c в возрасте от пяти до шести недель дезинфицировали йодофором на правом боку. Каждой мыши инокулировали без анестезии, подкожно, в верхнюю часть правого бока один фрагмент первичной опухоли печени человека LI1097 для развития опухоли.Prior to tumor implantation, the skin of five to six week old female BALB/c nude mice was disinfected with iodophor on the right flank. Each mouse was inoculated without anesthesia, subcutaneously, in the upper part of the right flank with one fragment of a primary human liver tumor LI1097 for tumor development.
После инокуляции опухоли ежедневно проверяли заболеваемость и смертность животных. Размер опухоли измеряли штангенциркулем два раза в неделю в двух измерениях. Объем опухоли выражали в мм3 с использованием формулы: TV=0,5axb2, где а и b представляют собой длинный и короткий диаметры опухоли, соответственно.After tumor inoculation, the morbidity and mortality of the animals were monitored daily. Tumor size was measured with a caliper twice a week in two dimensions. Tumor volume was expressed in mm 3 using the formula: TV=0.5axb2 where a and b are the long and short tumor diameters, respectively.
На 12 день исследования мышей рандомизировали на 5 групп по 8 мышей в каждой; средний объем опухоли составлял ~170 мм3 в когорте. Мышам вводили дозы тестируемых агентов на 13 день исследования (1 день, указанный вертикальной пунктирной линией на графике). Тестируемые мыши в этом исследовании получали в 1 день однократную дозу назначенного им тестируемого изделия и уровня дозы, после чего рост опухоли контролировали до 51 дня.On study day 12, mice were randomized into 5 groups of 8 mice each; the mean tumor volume was ~170 mm 3 in the cohort. Mice were dosed with test agents on study day 13 (day 1, indicated by the vertical dotted line in the graph). Test mice in this study received a single dose of their assigned test article and dose level on day 1, after which tumor growth was monitored until day 51.
Результаты показаны на фиг. 2А, на которой:The results are shown in FIG. 2A, on which:
о=носитель, qdx1 ◊ = контроль ADC с использованием антитела В12, неспецифичного в отношении DLK1, 1 мг/кг, qdx1 □ = ConjA1, 0,1 мг/кг, qdx1o=vehicle, qdx1 ◊ = ADC control using B12 antibody, non-specific for DLK1, 1 mg/kg, qdx1 □ = ConjA1, 0.1 mg/kg, qdx1
Δ = ConjA1, 0,3 мг/кг, qdx1 ▼ = ConjA1, 1,0 мг/кг, qdx1Δ = ConjA1, 0.3 mg/kg, qdx1 ▼ = ConjA1, 1.0 mg/kg, qdx1
Как следует из фиг. 2А, ConjA1 при 1,0 мг/кг привел к наибольшему замедлению роста опухоли, за ним следовал ConjA1 при 0,3 мг/кг. Кроме того, при самой высокой протестированной дозе ConjA1 привел к 3/8 частичным ответам (PR) и 2/8 полным ответам (CR), тогда как ни одна из мышей, получавших носитель или ADC для контроля изотипа (1 мг/кг, однократная доза), не имела PR, CR или не выжила без опухоли (TFS).As follows from FIG. 2A, ConjA1 at 1.0 mg/kg resulted in the greatest reduction in tumor growth, followed by ConjA1 at 0.3 mg/kg. In addition, at the highest dose tested, ConjA1 resulted in 3/8 partial responses (PR) and 2/8 complete responses (CR), while none of the mice treated with vehicle or ADC for isotype control (1 mg/kg, single dose) dose), had no PR, CR, or did not survive tumor free (TFS).
Противоопухолевая активность в ксенотрансплантатной модели нейробластомы SK-N-FI in vivoAntitumor Activity in the SK-N-FI Neuroblastoma Xenograft Model in Vivo
Самки мышей NOD-SCID были в возрасте шести недель в день имплантации. Клетки SK-N-FI собирали во время логарифмической фазы размножения и ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере с 50% матригеля. По 100 мкл (3x106 клеток) смеси клеточной суспензии вводили подкожно с помощью шприца калибром 26 G в правый бок каждой мыши. Животных обследовали два раза в неделю для оценки массы тела и размера опухоли. Размер опухоли измеряли с использованием цифровых штангенциркулей и рассчитывали в соответствии со следующим выражением:Female NOD-SCID mice were six weeks old on the day of implantation. SK-N-FI cells were harvested during the log expansion phase and resuspended in PBS with 50% Matrigel. 100 μl (3x106 cells) of the cell suspension mixture was injected subcutaneously with a 26 G syringe into the right flank of each mouse. Animals were examined twice a week to assess body weight and tumor size. Tumor size was measured using digital calipers and calculated according to the following expression:
Объем опухоли (мм3) = (малая ось)2* (большая ось)* π/6Tumor volume (mm 3 ) = (minor axis)2* (major axis)* π/6
Через восемнадцать дней после трансплантации раковых клеток 50 мышей, у которых объем опухоли составил от 99,0 мм3 до 155,2 мм3 (в среднем 116,2 мм3), распределяли на 5 групп (N=10 в каждой группе). В день дозирования испытываемым субъектам осуществляли введение путем внутривенной инъекции в хвостовую вену. Конечная точка исследования была установлена как достижение каждой опухолью конечной точки объема 1000 мм3 или конец исследования (через 60 дней после введения доEighteen days after transplantation of cancer cells, 50 mice, whose tumor volume ranged from 99.0 mm 3 to 155.2 mm 3 (average 116.2 mm 3 ), were divided into 5 groups (N=10 in each group). On the day of dosing, the test subjects were administered by intravenous injection into the tail vein. The endpoint of the study was set as each tumor reaching the 1000 mm
- 40 040749 зы), в зависимости от того, что наступило раньше.- 40 040749 PS), whichever comes first.
Результаты показаны на фиг. 2В, на которой:The results are shown in FIG. 2B, on which:
◊ = носитель, qdxl о = контроль ADC с использованием антитела В12, неспецифичного в отношении DLK1, 0,5 мг/кг, qdxl □ = контроль ADC с использованием антитела В12, неспецифичного в отношении DLK1, 1 мг/кг, qdx1◊ = vehicle, qdxl o = ADC control with B12 antibody, non-specific for DLK1, 0.5 mg/kg, qdxl □ = ADC control with B12 antibody, non-specific for DLK1, 1 mg/kg, qdx1
Δ = ConjAl, 0,5 мг/кг, qdxl ▼ = ConjAll, 1,0 мг/кг, qdxlΔ = ConjAl, 0.5 mg/kg, qdxl ▼ = ConjAll, 1.0 mg/kg, qdxl
Как следует из фиг. 2В, ConjAl при 1,0 мг/кг привел к наибольшему замедлению роста опухоли, за ним следовал ConjAl при 0,5 мг/кг.As follows from FIG. 2B, ConjAl at 1.0 mg/kg resulted in the greatest tumor growth retardation, followed by ConjAl at 0.5 mg/kg.
В ксенотрансплантатной модели SK-N-FI, происходящей из нейробластомы человека, однократная доза ConjAl при 0,5 или l мг/кг показала дозозависимую противоопухолевую активность по сравнению с мышами, обработанными носителем и ADC для контроля изотипа.In a xenograft model of SK-N-FI derived from human neuroblastoma, a single dose of ConjAl at 0.5 or 1 mg/kg showed dose-dependent antitumor activity compared to mice treated with vehicle and ADC for isotype control.
В самой высокой протестированной дозе ConjAl привел к 1/9 животному с частичным ответом (PR) и 4/9 животным с полным ответом (CR), одно из которых выжило без опухоли (TFS) в конце исследования на 60 день (одно животное из l0 первоначальных животных в этой группе было исключено из окончательных фигур по причинам, не связанным с лечением).At the highest dose tested, ConjAl resulted in 1/9 partial response (PR) and 4/9 complete response (CR) animals, one of which survived tumor free (TFS) at the end of the study at day 60 (one animal from l0 the original animals in this group were excluded from the final figures for reasons unrelated to treatment).
Токсикологическое исследование у крысToxicological study in rats
Токсикологическое исследование у крыс (оценка нецелевой токсичности, протестированный ADC не связывает Dlk-l крысы).Toxicology study in rats (off-target toxicity assessment, ADC tested does not bind rat Dlk-l).
Метод.Method.
ConjAl оценивали в исследовании переносимости однократной внутривенной дозы у крыс. Самцам крыс Sprague-Dawley (и=3/группу) вводили дозу 5 мг/кг в l день и проводили вскрытие на 2l день после введения дозы. Массу тела и потребление пищи часто контролировали с помощью отбора образцов в течение жизни для определения клинической патологии (кровь на 8 и 2l дни) и повторного отбора образцов для определения фармакокинетики. При вскрытии проводили макроскопические наблюдения, при этом выборочные органы взвешивали и сохраняли для возможного гистопатологического исследования.ConjAl was evaluated in a single intravenous dose tolerability study in rats. Male Sprague-Dawley rats (u=3/group) were dosed at 5 mg/kg on day 1 and necropsied 21 days post-dose. Body weight and food intake were often monitored with lifetime sampling for clinical pathology (blood at days 8 and 21) and repeated sampling for pharmacokinetics. Gross observations were made at autopsy, with selected organs weighed and stored for possible histopathological examination.
Результаты.Results.
ConjAl клинически хорошо переносился при 5 мг/кг без каких-либо выраженных нежелательных клинических признаков. Прибавка массы тела была снижена, при этом животные были примерно на 15% легче, чем контрольная группа в конце исследования. Количество лейкоцитов снизилось на 8 день (количество нейтрофилов снизилось на примерно 95% по сравнению с одновременным контролем), при этом имелись признаки восстановления к 22 дню.ConjAl was clinically well tolerated at 5 mg/kg without any significant adverse clinical signs. Body weight gain was reduced, with the animals being about 15% lighter than the control group at the end of the study. The white blood cell count decreased by day 8 (neutrophil count decreased by about 95% compared to the simultaneous control), while there were signs of recovery by day 22.
Общий вывод.General conclusion.
ConjAl обладал хорошей стабильностью, хорошо переносился и показал благоприятный фармакокинетический профиль у крыс с периодом полужизни 9 дней при 5 мг/кг. Это свидетельствует о том, что МПД у крыс составляет по меньшей мере 5 мг/кг или выше.ConjAl had good stability, was well tolerated and showed a favorable pharmacokinetic profile in rats with a half-life of 9 days at 5 mg/kg. This indicates that the MTD in rats is at least 5 mg/kg or higher.
Цитотоксичность в клетках А204 и НерЗВ в 2D- и 3D-культурах клеток in vitroCytotoxicity in A204 and Hep3B cells in 2D and 3D cell cultures in vitro
Материалы и методы.Materials and methods.
Клетки высевали в онко-среды (RPMI, 5% ФБС, 2 мМ L-аланил-L-глутамин, l мМ пирувата натрия и 1% пенициллина/стрептомицина) в 384-луночные планшеты Elplasia, предварительно покрытые рНЕМА.Cells were seeded in onco media (RPMI, 5% FBS, 2 mM L-alanyl-L-glutamine, l mM sodium pyruvate, and 1% penicillin/streptomycin) in 384-well Elplasia plates pre-coated with pHEMA.
Соединения ADC, ConjAl, и В12-1601 добавляли через 24 ч после посева клеток, с начальной концентрацией l0 мг/мл, 10-кратное последовательное разведение для 9 концентраций с четырьмя повторами. Периоды инкубации с соединениями ADC составили 5 дней в 2D- и 7 дней в 3D-культурах, при этом среды заменяли каждые 3 дня в общей сложности в течение l4 дней.Compounds ADC, ConjAl, and B12-1601 were added 24 hours after cell seeding, at an initial concentration of 10 mg/ml, 10-fold serial dilution for 9 concentrations with four replicates. Incubation periods with ADC compounds were 5 days in 2D and 7 days in 3D cultures, with media changed every 3 days for a total of l4 days.
В конце периода инкубации клетки лизировали и анализировали для определения жизнеспособности клеток. Конечную точку пролиферации клеток анализировали как процент от контроля (РОС), используя следующую формулу:At the end of the incubation period, cells were lysed and analyzed to determine cell viability. Cell proliferation endpoint was analyzed as percentage of control (ROS) using the following formula:
РОС=относителъное количество клеток (лунки с соединением)/относителъное количество клеток (контрольные лунки с носителем)х!00%ROS=relative cell count (compound wells)/relative cell count (vehicle control wells) x!00%
Данные анализировали с использованием программного обеспечения Graphpad Prism.Data was analyzed using Graphpad Prism software.
Результаты.Results.
На фиг. 3 представлены данные о цитотоксичности в клетках А204 и НерЗВ в 3D-культуре клеток in vitro.In FIG. 3 shows cytotoxicity data in A204 and Hep3B cells in 3D in vitro cell culture.
На фиг. 3A показаны данные для клеток А204 [ИК50 3D ADC=0,001460 мкг/мл, ИК50 3D В12PL1601=0,7662 мкг/мл, ИК50 2D ADC=0,006399 мкг/мл, ИК50 3D В12-PL1601=0,4059 мкг/м];In FIG. 3A shows data for A204 cells [IC 50 3D ADC=0.001460 μg/ml, IC 50 3D B12PL1601=0.7662 μg/ml, IC 50 2D ADC=0.006399 μg/ml, IC 50 3D B12-PL1601= 0.4059 µg/m];
На фиг. 3В показаны данные для клеток Нер3В [ИК50 3D ADC=0,2271 мкг/мл, ИК50 3D В12PL1601=~432,6 мкг/мл, ИК50 2D ADC=~59,29 мкг/мл, ИК50 2D В12-PL1601=~3,957 мкг/мл].In FIG. 3B shows data for Hep3B cells [IC 50 3D ADC=0.2271 μg/ml, IC 50 3D B12PL1601=~432.6 μg/ml, IC 50 2D ADC=~59.29 μg/ml, IC 50 2D B12- PL1601=~3.957 µg/mL].
- 4l 040749- 4l 040749
Цитотоксичность ConjA2 in vitroCytotoxicity of ConjA2 in vitro
Колбы с клетками SN12C или клетками MDA-MB-231FI обрабатывали трипсином, и высвобожденные клетки промывали и ресуспендировали в свежей среде. Плотность клеток определяли путем смешивания с трипановым синим (0,4% (мас./об.) Sigma ТВ154) в соотношении 1:1 и подсчета прозрачных/синих (живых/мертвых) клеток с помощью автоматического счетчика клеток Luna II (Logos Biosystems). Суспензию клеток разбавляли до требуемой плотности посева (20х104/мл), распределяли в белые 96-луночные микропланшеты с плоским дном (50 мкл/лунку) и инкубировали в течение ночи.Flasks with SN12C cells or MDA-MB-231FI cells were trypsinized and the released cells were washed and resuspended in fresh medium. Cell density was determined by mixing with trypan blue (0.4% (w/v) Sigma TB154) at a ratio of 1:1 and counting clear/blue (live/dead) cells using a Luna II automatic cell counter (Logos Biosystems) . The cell suspension was diluted to the desired seeding density (20x10 4 /ml), dispensed into white 96-well flat bottom microplates (50 μl/well) and incubated overnight.
Маточный раствор (1 мл) ConjA2 (20 мкг/мл) получали путем разведения ConjA2, стерилизованного путем фильтрации, в той же среде для культивирования клеток. Набор из 8х 10-кратных разведений маточного раствора ConjA2 получали в стерильном 24-луночном планшете путем последовательного переноса 100 мкл в 900 мкл среды для культивирования клеток. Каждое разведение ConjA2 распределяли, 50 мкл/лунку, в лунки с 4 повторами 96-луночного планшета, содержащего суспензию клеток. В контрольные лунки вносили аналогичный объем только культуральной среды.A stock solution (1 ml) of ConjA2 (20 μg/ml) was prepared by diluting filter-sterilized ConjA2 in the same cell culture medium. A set of 8 x 10-fold dilutions of ConjA2 stock solution was prepared in a sterile 24-well plate by sequentially transferring 100 μl to 900 μl of cell culture medium. Each dilution of ConjA2 was dispensed, 50 μl/well, into 4-replicate wells of a 96-well cell suspension plate. Control wells were filled with the same volume of culture medium only.
После периода воздействия ConjA2 жизнеспособность клеток измеряли с помощью Promega CellTiter-Glo, добавляя 100 мкл/лунку, перемешивая в течение 2 мин и считывая сигнал на Envision с использованием протокола люминесценции. Данные анализировали с использованием программного обеспечения Graphpad Prism.After a period of exposure to ConjA2, cell viability was measured with Promega CellTiter-Glo by adding 100 μl/well, mixing for 2 min and reading the signal on Envision using the luminescence protocol. Data was analyzed using Graphpad Prism software.
Было установлено, что ЭК50 ConjA2 против клеток SN12C составляет 0,0663 мкг/мл. ЭК50 контроля ADC не поддавалась обнаружению (см. фиг. 4А*).ConjA2 EC 50 against SN12C cells was found to be 0.0663 µg/ml. The ADC control EC 50 was undetectable (see FIG. 4A*).
Было установлено, что ЭК50 ConjA2 против клеток MDA-MB-231 составляет 0,226 мкг/мл. ЭК50 контроля ADC не поддавалась обнаружению (см. фиг. 4В*).ConjA2 EC 50 against MDA-MB-231 cells was found to be 0.226 μg/ml. The ADC control EC 50 was undetectable (see FIG. 4B*).
* На обеих фигурах 4А и 4В ♦ представляет собой ConjA2 и • представляет собой контроль ADC, идентичный в других отношениях, содержащий антитело В12, неспецифичное в отношении KAAG1.* In both Figures 4A and 4B, ♦ is ConjA2 and • is an otherwise identical ADC control containing B12 antibody non-specific for KAAG1.
Исследование эффективности ConjA2 in vivoConjA2 efficacy study in vivo
Самки голых бестимусных мышей (Crl:NU(Ncr)-Foxnlnu, Charles River) были в возрасте восьми недель с диапазоном массы тела (BW) от 20,7 до 31,2 г в 1 день исследования.Female nude mice (Crl:NU(Ncr)-Foxnlnu, Charles River) were eight weeks old with a body weight (BW) range of 20.7 to 31.2 g on day 1 of the study.
В день имплантации опухолевые клетки MDA-MB-231, используемые для имплантации, собирали в логарифмической фазе размножения и ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) при 5х107 клеток/мл. Каждой мыши вводили путем подкожной (п/к) инъекции в правый бок 5х106 клеток (0,1 мл клеточной суспензии), и опухоли контролировали, когда их объемы приближались к целевому диапазону от 100 до 150 мм3. Опухоли измеряли с помощью штангенциркулей в двух измерениях, и объем рассчитывали с использованием формулы:On the day of implantation, MDA-MB-231 tumor cells used for implantation were harvested in logarithmic expansion phase and resuspended in phosphate buffered saline (PBS) at 5 x 10 7 cells/ml. Each mouse was injected subcutaneously (sc) in the right flank with 5×10 6 cells (0.1 ml of cell suspension) and tumors were controlled when their volumes approached the target range of 100 to 150 mm 3 . Tumors were measured with calipers in two dimensions and the volume was calculated using the formula:
Объем опухоли (мм3) = w2xl/2 где w=ширина и l=длина в мм опухоли. Массу опухоли можно оценить с допущением, что 1 мг эквивалентен 1 мм3 объема опухоли.Tumor volume (mm 3 ) = w 2 xl/2 where w=width and l=length in mm of the tumor. The mass of the tumor can be estimated with the assumption that 1 mg is equivalent to 1 mm 3 tumor volume.
Через шестнадцать дней после имплантации опухоли, обозначено как 1 день исследования, животных сортировали по группам, каждая из которых состояла из 8 мышей с индивидуальными объемами опухолей от 108 до 144 мм3 и групповыми средними объемами опухолей 112,5-123,8 мм3. В 1 день исследования все средства лечения вводили внутривенно (в/в) в виде однократной инъекции (qdx1) путем инъекции в хвостовую вену в объеме дозирования 0,2 мл на 20 г массы тела (10 мл/кг), пересчитанном в соответствии с массой тела каждого отдельного животного. Опухоли измеряли с помощью штангенциркулей два раза в неделю, и каждое животное подвергали эвтаназии, когда объем опухоли у него достигал конечной точки 1500 мм3 или в конце исследования, в зависимости от того, что наступило раньше. Исследование закончилось на 59 день.Sixteen days after tumor implantation, referred to as study day 1, animals were sorted into groups, each consisting of 8 mice with individual tumor volumes from 108 to 144 mm 3 and group mean tumor volumes of 112.5-123.8 mm 3 . On Study Day 1, all treatments were administered intravenously (IV) as a single injection (qdx1) by injection into the tail vein at a dosing volume of 0.2 ml per 20 g of body weight (10 ml/kg), recalculated according to weight body of each individual animal. Tumors were measured with calipers twice a week and each animal was euthanized when its tumor volume reached the end point of 1500 mm 3 or at the end of the study, whichever came first. The study ended on day 59.
Результаты показаны на фиг. 5, на которой:The results are shown in FIG. 5, on which:
о = носитель, qdx 1 (верхняя линия) □ = контроль ADC с использованием антитела В12, неспецифичного в отношении KAAG1, 0,6 мг/кг, qdx1 о = ConjA2, 0,6 мг/кг, qdx1 (нижняя линия)o = vehicle, qdx 1 (top line) □ = ADC control using B12 antibody, non-specific for KAAG1, 0.6 mg/kg, qdx1 o = ConjA2, 0.6 mg/kg, qdx1 (bottom line)
Как следует из фиг. 5, ConjA2 при 0,6 мг/кг привел к значительному замедлению роста опухоли.As follows from FIG. 5, ConjA2 at 0.6 mg/kg resulted in a significant slowdown in tumor growth.
Противоопухолевая активность ConjA2 в ксенотрансплантатной модели SN12C in vivoAntitumor activity of ConjA2 in SN12C xenograft model in vivo
Самки мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (Fox Chase SCID®, CB17/IcrPrkdcscid/IcrlcoCrl, Charles River) были в возрасте девяти недель с диапазоном массы тела (BW) от 15,4 до 22,2 г в 1 день исследования.Female severe combined immunodeficiency mice (Fox Chase SCID®, CB17/IcrPrkdcscid/IcrlcoCrl, Charles River) were nine weeks old with a body weight (BW) range of 15.4 to 22.2 g on day 1 of the study.
В день имплантации опухоли каждая тестируемая мышь получала 5x106 клеток SN12C (0,1 мл суспензии клеток в 50% матриксе Матригель® (Corning®) в фосфатно-солевом буфере), имплантированных подкожно в правый бок. Рост опухоли контролировали, когда средний размер приближался к целевому диапазону от 100 до 150 мм3.On the day of tumor implantation, each test mouse received 5x10 6 SN12C cells (0.1 ml cell suspension in 50% Matrigel® (Corning®) matrix in phosphate buffered saline) implanted subcutaneously in the right flank. Tumor growth was controlled when the mean size approached the target range of 100 to 150 mm 3 .
Опухоли измеряли с помощью штангенциркулей в двух измерениях, и объем рассчитывали с использованием формулы:Tumors were measured with calipers in two dimensions and the volume was calculated using the formula:
- 42 040749- 42 040749
Объем опухоли (мм3) = w2xl/2 где w = ширина и l = длина в мм опухоли. Массу опухоли можно оценить с допущением, что 1 мг эквивалентен 1 мм3 объема опухоли.Tumor volume (mm 3 ) = w 2 xl/2 where w = width and l = length in mm of the tumor. The mass of the tumor can be estimated with the assumption that 1 mg is equivalent to 1 mm 3 tumor volume.
Через двадцать три дня после имплантации опухоли, обозначено как 1 день исследования, животных сортировали по девяти группам (n=8) с индивидуальными объемами опухолей от 108 до 172 мм3 и групповыми средними объемами опухолей 129 мм3.Twenty-three days after tumor implantation, referred to as study day 1, animals were sorted into nine groups (n=8) with individual tumor volumes ranging from 108 to 172 mm 3 and group mean tumor volumes of 129 mm 3 .
В 1 день исследования все средства лечения вводили внутривенно (в/в) в виде однократной инъекции (qdx 1) путем инъекции в хвостовую вену в объеме дозирования 0,2 мл на 20 г массы тела (10 мл/кг), пересчитанном в соответствии с массой тела каждого отдельного животного. Опухоли измеряли с помощью штангенциркулей два раза в неделю, и каждое животное подвергали эвтаназии, когда объем опухоли у него достигал конечной точки 1000 мм3 или в конце исследования, в зависимости от того, что наступило раньше. Исследование закончилось на 60 день.On study day 1, all treatments were administered intravenously (IV) as a single injection (qdx 1) by injection into the tail vein at a dosing volume of 0.2 ml per 20 g body weight (10 ml/kg), recalculated according to body weight of each individual animal. Tumors were measured with calipers twice a week, and each animal was euthanized when its tumor volume reached the end point of 1000 mm 3 or at the end of the study, whichever came first. The study ended on day 60.
Данные показаны на фиг. 6, на которой можно видеть, что введение ADC (ConjA2) уменьшало рост опухоли дозозависимым образом.The data is shown in FIG. 6, which shows that administration of ADC (ConjA2) reduced tumor growth in a dose dependent manner.
Цитотоксичность in vitroCytotoxicity in vitro
Колбы с клетками OVCAR3, CAPAN-2 или HPAC обрабатывают трипсином, и высвобожденные клетки промывают и ресуспендируют в свежей среде. Плотность клеток определяют путем смешивания с трипановым синим (0,4% (мас./об.) Sigma ТВ154) в соотношении 1:1 и подсчета прозрачных/синих (живых/мертвых) клеток с помощью автоматического счетчика клеток Luna II (Logos Biosystems). Суспензию клеток разбавляют до требуемой плотности посева (20х104/мл), распределяют в белые 96-луночные микропланшеты с плоским дном (50 мкл/лунку) и инкубируют в течение ночи.Flasks with OVCAR3, CAPAN-2 or HPAC cells are trypsinized and the released cells are washed and resuspended in fresh medium. Cell density is determined by mixing with trypan blue (0.4% (w/v) Sigma TB154) at a ratio of 1:1 and counting clear/blue (live/dead) cells using a Luna II automatic cell counter (Logos Biosystems) . The cell suspension is diluted to the desired seeding density (20x104/ml), dispensed into flat-bottom white 96-well microplates (50 µl/well) and incubated overnight.
Маточный раствор (1 мл) ConjA3 (20 мкг/мл) получают путем разведения ConjA3, стерилизованного путем фильтрации, в той же среде для культивирования клеток. Набор из 8х 10-кратных разведений маточного раствора ConjA3 получают в стерильном 24-луночном планшете путем последовательного переноса 100 мкл в 900 мкл среды для культивирования клеток. Каждое разведение ConjA3 распределяют, 50 мкл/лунку, в лунки с 4 повторами 96-луночного планшета, содержащего суспензию клеток. В контрольные лунки вносят аналогичный объем только культуральной среды.A stock solution (1 ml) of ConjA3 (20 μg/ml) was prepared by diluting filter-sterilized ConjA3 in the same cell culture medium. A set of 8 x 10-fold dilutions of ConjA3 stock solution is prepared in a sterile 24-well plate by sequentially transferring 100 μl to 900 μl of cell culture medium. Each dilution of ConjA3 was dispensed, 50 μl/well, into 4-replicate wells of a 96-well cell suspension plate. Control wells are filled with the same volume of culture medium only.
После периода воздействия ConjA3 жизнеспособность клеток измеряют с помощью Promega CellTiter-Glo, добавляя 100 мкл/лунку, перемешивая в течение 2 мин и считывая сигнал на Envision с использованием протокола люминесценции. Данные анализируют с использованием программного обеспечения Graphpad Prism.After a period of exposure to ConjA3, cell viability is measured with a Promega CellTiter-Glo by adding 100 µl/well, mixing for 2 minutes, and reading the signal on Envision using a luminescence protocol. Data is analyzed using Graphpad Prism software.
Исследование эффективности ConjA3 in vivoConjA3 efficacy study in vivo
Противоопухолевая активность в модели OVCAR3 in vivo.Antitumor activity in the OVCAR3 in vivo model.
Затравочные опухоли приживляют подкожно у мышей NOD/SCID и поддерживают подкожно у голых мышей BALB/c перед имплантацией. Когда объемы опухолей достигли 700-1500 мм3, опухоли собирают и разрезают на кусочки диаметром примерно 2-3 мм3.Seed tumors are engrafted subcutaneously in NOD/SCID mice and maintained subcutaneously in BALB/c nude mice prior to implantation. When tumor volumes have reached 700-1500 mm 3 , the tumors are harvested and cut into pieces with a diameter of approximately 2-3 mm 3 .
Опухоли или кусочки опухоли промывают ледяными средами RPMI1640 (без сыворотки) и затем помещают в ледяные среды для использования.Tumors or tumor pieces are washed with ice-cold RPMI1640 media (no serum) and then placed in ice-cold media for use.
Перед имплантацией опухоли кожу самок голых мышей BALB/c в возрасте от пяти до шести недель дезинфицируют йодофором на правом боку. Каждой мыши инокулируют без анестезии, подкожно, в верхнюю часть правого бока один фрагмент опухоли для развития опухоли.Prior to tumor implantation, the skin of five to six week old female BALB/c nude mice is disinfected with iodophor on the right flank. Each mouse is inoculated without anesthesia, subcutaneously, in the upper part of the right flank with one tumor fragment for tumor development.
После инокуляции опухоли ежедневно проверяют заболеваемость и смертность животных. Размер опухоли измеряют штангенциркулем два раза в неделю в двух измерениях. Объем опухоли выражают в мм3 с использованием формулы: TV=0,5axb2, где а и b представляют собой длинный и короткий диаметры опухоли, соответственно.After inoculation of the tumor daily check the morbidity and mortality of animals. Tumor size is measured with a caliper twice a week in two dimensions. Tumor volume is expressed in mm 3 using the formula: TV=0.5axb2 where a and b are the long and short tumor diameters, respectively.
На 12 день исследования мышей рандомизируют на 5 групп по 8 мышей в каждой; средний объем опухоли составляет ~170 мм3 в когорте. Мышам вводят дозы тестируемых агентов на 13 день исследования. Тестируемые мыши в этом исследовании получают в 1 день однократную дозу назначенного им тестируемого изделия и уровня дозы, после чего рост опухоли контролируют до 51 дня.On study day 12, mice are randomized into 5 groups of 8 mice each; the mean tumor volume is ~170 mm 3 in the cohort. Mice are dosed with test agents on day 13 of the study. Test mice in this study receive a single dose of their assigned test article and dose level on day 1, after which tumor growth is monitored for up to day 51.
- 43 040749- 43 040749
Последовательности.Sequences.
SEQ ID NO. 1 ГУН HuBa-l-3d, CDR подчеркнут]SEQID NO. 1 VCO HuBa-l-3d, CDR underlined]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWIGVISTYYGN TNYNQKFKGKATMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGLREYYYAMDYWGQ GTMVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWIGVISTYYGN TNYNQKFKGKATMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGLREYYYAMDYWGQ GTMVTVSS
SEQ ID NO. 2 [VL HuBa-l-3d, CDR подчеркнут]SEQID NO. 2 [VL HuBa-l-3d, CDR underlined]
DIVMTPSPDSLAVSLGERATINCKSSPSLLNSSNPKNYLAWYPPKPGPPPKLLVYFAST RESGVPDRF SGSGSGTDFTLTIS SLOAEDVAVYYCOQHYSTPPTFGOGTKLEIKDIVMTPSPDSLAVSLGERATINCKSSPSLLNSSNPKNYLAWYPPKPGPPPKLLVYFAST RESGVPDRF SGSGSGTDFTLTIS SLOAEDVAVYYCOQHYSTPPTFGOGTKLEIK
SEQ ID NO. 3 [тяжелая цепь HuBa-l-3d]SEQID NO. 3 [heavy chain HuBa-l-3d]
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWIGVISTYYGN TNYNQKFKGKATMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGLREYYYAMDYWGQ GTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWIGVISTYYGN TNYNQKFKGKATMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGLREYYYAMDYWGQ GTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 4 [легкая цепь HuBa-l-3d]SEQID NO. 4 [light chain HuBa-l-3d]
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLVYFAST RESGVPDRF SGSGSGTDFTLTIS SLQAEDVAVYYCQQHYSTPPTFGQGTKLEIKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SP VTKSFNRGECDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLVYFAST RESGVPDRF SGSGSGTDFTLTIS SLQAEDVAVYYCQQHYSTPPTFGQGTKLEIKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKTHSPEKVTKVTKVGLNKTHSPACEVACE
SEQ ID NO. 5 [CDR1 VHHuBa-l-3d]SEQID NO. 5 [CDR1 VHHuBa-l-3d]
DYAMHDYAMH
SEQ ID NO. 6 [CDR2 VH HuBa-l-3d]SEQID NO. 6 [CDR2 VH HuBa-l-3d]
VISTYYGNTNYNPKFKGVISTYYGNTNYNPKFKG
SEQ ID NO. 7 [CDR3 VH HuBa-l-3d]SEQID NO. 7 [CDR3 VH HuBa-l-3d]
GGLREYYYAMDYGGLREYYYAMDY
SEQ ID NO. 8 [CDR1 VL HuBa-l-3d]SEQID NO. 8 [CDR1 VL HuBa-l-3d]
KSSPSLLNSSNPKNYLAKSSPSLLNSSNPKNYLA
SEQ ID NO. 9 [CDR2 VL HuBa-l-3d]SEQID NO. 9 [CDR2 VL HuBa-l-3d]
FASTRESFASTRES
SEP ID NP. 10 [CDR3 VLHuBa-l-3d]SEPID NP. 10 [CDR3 VLHuBa-l-3d]
PPHYSTPPTPPHYSTPPPT
- 44 040749- 44 040749
SEQ ID NO. 11 [тяжелая цепь HuBa-l-3d, концевой K1SEQID NO. 11 [heavy chain HuBa-l-3d, terminal K1
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWIGVISTYYGN TNYNQKFKGKATMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGLREYYYAMDYWGQ GTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKGSGYTFTDYAMHWVRQAPGQGLEWIGVISTYYGN TNYNQKFKGKATMTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGLREYYYAMDYWGQ GTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPP CPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 12 [DLK1 человека, вариант 11SEQID NO. 12 [DLK1 human, variant 11
MTATEALLRVLLLLLAFGHSTYGAECFPACNPQNGFCEDDNVCRCHVGWQGPLCDQC VTSPGCLHGLCGEPGQCICTDGWDGELCDRDVRACSSAPCANNGTCVSLDGGLYECSC APGYSGKDCQKKDGPCVINGSPCQHGGTCVDDEGRASHASCLCPPGFSGNFCEIVANSC TPNPCENDGVCTDIGGDFRCRCP AGFIDKTC SRP VTNC AS SPCQNGGTCLQHTQ VS YECL CKPEFTGLTCVKKRALSPQQVTRLPSGYGLAYRLTPGVHELPVQQPEHRILKVSMKELN KKTPLLTEGQAICFTILGVLTSLVVLGTVGIVFLNKCETWVSNLRYNHMLRKKKNLLLQ YNSGEDLAVNIIFPEKIDMTTFSKEAGDEEIMTATEALLRVLLLLLAFGHSTYGAECFPACNPQNGFCEDDNVCRCHVGWQGPLCDQC VTSPGCLHGLCGEPGQCICTDGWDGELCDRDVRACSSAPCANNGTCVSLDGGLYECSC APGYSGKDCQKKDGPCVINGSPCQHGGTCVDDEGRASHASCLCPPGFSGNFCEIVANSC TPNPCENDGVCTDIGGDFRCRCP AGFIDKTC SRP VTNC AS SPCQNGGTCLQHTQ VS YECL CKPEFTGLTCVKKRALSPQQVTRLPSGYGLAYRLTPGVHELPVQQPEHRILKVSMKELN KKTPLLTEGQAICFTILGVLTSLVVLGTVGIVFLNKCETWVSNLRYNHMLRKKKNLLLQ YNSGEDLAVNIIFPEKIDMTTFSKEAGDEEI
SEQ ID NO. 13 [DLK1 человека, вариант 21SEQID NO. 13 [DLK1 human, variant 21
MTATEALLRVLLLLLAFGHSTYGAECFPACNPQNGFCEDDNVCRCQPGWQGPLCDQCV TSPGCLHGLCGEPGQCICTDGWDGELCDRDVRACSSAPCANNRTCVSLDDGLYECSCA PGYSGKDCQKKDGPCVINGSPCQHGGTCVDDEGRASHASCLCPPGFSGNFCEIVANSCT PNPCENDGVCTDIGGDFRCRCPAGFIDKTCSRPVTNCASSPCQNGGTCLQHTQVSYECL CKPEFTGLTCVKKRALSPQQVTRLPSGYGLAYRLTPGVHELPVQQPEHRILKVSMKELN KKTPLLTEGQAICFTILGVLTSLVVLGTVGIVFLNKCETWVSNLRYNHMLRKKKNLLLQ YNSGEDLAVNIIFPEKIDMTTFSKEAGDEEIMTATEALLRVLLLLLAFGHSTYGAECFPACNPQNGFCEDDNVCRCQPGWQGPLCDQCV TSPGCLHGLCGEPGQCICTDGWDGELCDRDVRACSSAPCANNRTCVSLDDGLYECSCA PGYSGKDCQKKDGPCVINGSPCQHGGTCVDDEGRASHASCLCPPGFSGNFCEIVANSCT PNPCENDGVCTDIGGDFRCRCPAGFIDKTCSRPVTNCASSPCQNGGTCLQHTQVSYECL CKPEFTGLTCVKKRALSPQQVTRLPSGYGLAYRLTPGVHELPVQQPEHRILKVSMKELN KKTPLLTEGQAICFTILGVLTSLVVLGTVGIVFLNKCETWVSNLRYNHMLRKKKNLLLQ YNSGEDLAVNIIFPEKIDMTTFSKEAGDEEI
SEQ ID NO. 101 [VH 3 A4, CDR подчеркнут!SEQID NO. 101 [VH 3 A4, CDR underlined!
OIOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGOGLEWIGDINPYNGD TNYNOKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGOGTLVTV ssOIOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGOGLEWIGDINPYNGD TNYNOKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGOGTLVTV ss
SEO ID NO. 102 [VL 3A4, CDR подчеркнут!SEO ID NO. 102 [VL 3A4, CDR underlined!
DIVMTOTPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHSNGNTYLEWYLQKPGOSPOLLIYTVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGOGTKLEIKDIVMTOTPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHSNGNTYLEWYLQKPGOSPOLLIYTVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGOGTKLEIK
SEQ Ш NO. 103 [тяжелая цепь 3A41SEQ W NO. 103 [heavy chain 3A41
- 45 040749- 45 040749
QIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGQGLEWIGDINPYNGD TNYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYN*STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGQIQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKQAPGQGLEWIGDINPYNGD TNYNQKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGQGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYN*STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 104 [легкая цепь 3A41SEQID NO. 104 [light chain 3A41
DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYTVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSL SSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPQLLIYTVSNRFS GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVF IFPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSGSTYSLVEKHK
SEQ ID NO. 105 [CDR1 VH3A41SEQID NO. 105 [CDR1 VH3A41
GYTFTDDYMSGYTFTDDYMS
SEQ ID NO. 106 [CDR2 VH3A41SEQID NO. 106[CDR2 VH3A41
DINPYNGDTNDINPYNGDTN
SEQ ID NO. 107 [CDR3 VH3A41SEQID NO. 107 [CDR3 VH3A41
DPGAMDYDPGAMDY
SEQ ID NO. 108 [CDR1 VL3A41SEQID NO. 108 [CDR1 VL3A41
RSSPSLLHSNGNTYLERSSPSLLHSNGNTYLE
SEQ ID NO. 109 [CDR2 VL3A41SEQID NO. 109[CDR2 VL3A41
TVSNRFSTVSNRFS
SEQ ID NO. 110 [CDR3 VL3 A41SEQID NO. 110 [CDR3 VL3 A41
FPGSHVPLTFPGSHVPLT
SEQ ID NO. Ill [тяжелая цепь 3 A4, концевой K1SEQID NO. Ill [heavy chain 3 A4, terminal K1
PIPLVPSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKPAPGPGLEWIGDINPYNGD TNYNPKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGPGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLP SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTPTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYN*STYRVVSVLTVLHPDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGPPREPPVYTLP PSRDELTKNPVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGPPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWPPGNVFSCSVMHEALHNHYTPKSLSLSPGKPIPLVPSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDDYMSWVKPAPGPGLEWIGDINPYNGD TNYNPKFKGKATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDPGAMDYWGPGTLVTV SSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLP SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTPTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYN*STYRVVSVLTVLHPDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGPPREPPVYTLP PSRDELTKNPVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGPPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWPPGNVFSCSVMHEALHNHYTPKSLSLSPGK
- 46 040749- 46 040749
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEP ID NO. 112 [KAAG1 человека!SEP ID NO. 112 [KAAG1 human!
MDDDAAPRVEGVPVAVHKHALHDGLRQVAGPGAAAAHLPRWPPPQLAASRREAPPLS QRPHRTQGAGSPPETNEKLTNPQVKEKMDDDAAPRVEGVPVAVHKHALHDGLRQVAGPGAAAAHLPRWPPPQLAASRREAPPLS QRPHRTQGAGSPPETNEKLTNPQVKEK
SEP ID NO. 113 [VL 3A4-L2, CDR подчеркнут!SEP ID NO. 113 [VL 3A4-L2, CDR underlined!
DVVMTOTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLOKPGOSPKLLIYTVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGOGTKLEIKDVVMTOTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLOKPGOSPKLLIYTVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGOGTKLEIK
SEQ ID NO. 114 [легкая цепь 3 A4-L21SEQID NO. 114 [light chain 3 A4-L21
DVVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYTVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSV FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDVVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYTVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSV FIFPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSPVKHSFK
SEQ ID NO. 115 [VL 3A4-K4, CDR подчеркнут!SEQID NO. 115 [VL 3A4-K4, CDR underlined!
DIVMTOSPDSLAVSLGERATINCRSSOSLLHSNGNTYLEWYOQKPGOPPKLLIYTVSNRF SGVPDRF SGSGSGTDFTLTIS SLOAEDVAVYYCFQGSHVPLTFGOGTKVEIKDIVMTOSPDSLAVSLGERATINCRSSOSLLHSNGNTYLEWYOQKPGOPPKLLIYTVSNRF SGVPDRF SGSGSGTDFTLTIS SLOAEDVAVYYCFQGSHVPLTFGOGTKVEIK
SEQ ID NO. 116 [легкая цепь 3A4-K41SEQID NO. 116 [light chain 3A4-K41
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSLLHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYTVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCFQGSHVPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSV FIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRSSQSLLHSNGNTYLEWYQQKPGQPPKLLIYTVSNRF SGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCFQGSHVPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSV FIFPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSKDSTYSFPVTLVTEQDSKDSKADYEKHKHK
SEQ ID NO. 201 [УН XA4, CDR подчеркнут!SEQID NO. 201 [UN XA4, CDR underlined!
OVHLVESGGGVVOPGRSLRLSCVASGITFRIYGMHWVRQAPGKGLEWVAVLWYDGSH EYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAIYYCARDGDYYDSGSPLDYWGOG TLVTVSSOVHLVESGGGVVOPGRSLRLSCVASGITFRIYGMHWVRQAPGKGLEWVAVLWYDGSH EYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLOMNSLRAEDTAIYYCARDGDYYDSGSPLDYWGOG TLVTVSS
SEQ ID NO. 202 [VL XA4, CDR подчеркнут!SEQID NO. 202 [VL XA4, CDR underlined!
EIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASOSVSSYLAWYOOKPGOAPRLLIYDASNRATGIPA RF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKEIVLTOSPATLSLSPGERATLSCRASOSVSSYLAWYOOKPGOAPRLLIYDASNRATGIPA RF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO. 203 [тяжелая цепь XA41SEQID NO. 203 [heavy chain XA41
QVHLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGITFRIYGMHWVRQAPGKGLEWVAVLWYDGSH EYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARDGDYYDSGSPLDYWGQG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQ SSGLYSLS S VVTVPS S SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT I<PREEQYN2STYRVVSVLTVLHQDWLNGI<EYI<CI<VSNI<ALPAPIEI<TISI<AI<GQPREPQQVHLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGITFRIYGMHWVRQAPGKGLEWVAVLWYDGSH EYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARDGDYYDSGSPLDYWGQG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQ SSGLYSLS S VVTVPS S SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT I<PREEQYN2STYRVVSVLTVLHQDWLNGI<EYI<CI<VSNI<ALPAPIEI<TISI<AI<GQPREPQ
- 47 040749- 47 040749
VYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 204 [легкая цепь XA41SEQID NO. 204 [light chain XA41
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA RF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDF AVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKRT VAAPS VFIFPP S DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEIVLTQSPATLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPA RF SGSGSGTDFTLTIS SLEPEDF AVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIKRT VAAPS VFIFPP S DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYRGSLSSTL TLSKADYTKGLQPVYACE
SEQ ID NO. 205 [CDR1 VH XA41SEQID NO. 205 [CDR1 VH XA41
IYGMHIYGMH
SEQ ID NO. 206 [CDR2 VH XA41SEQID NO. 206 [CDR2 VH XA41
VLWYDGSHEYYADSVKGVLWYDGSHEYYADSVKG
SEQ ID NO. 207 [CDR3 VH XA41SEQID NO. 207 [CDR3 VH XA41
DGDYYDSGSPLDYDGDYYDSGSPLDY
SEQ ID NO. 208 [CDR1 VL XA41SEQID NO. 208 [CDR1 VL XA41
RASPSVSSYLARASPSVSSYLA
SEQ ID NO. 209 [CDR2 VL XA41SEQID NO. 209 [CDR2 VL XA41
DASNRATDASNRAT
SEQ ID NO. 210 [CDR3 VL XA41SEQID NO. 210 [CDR3 VL XA41
PPRSNWPLTPPRSNWPLT
SEQ ID NO. 211 [тяжелая цепь XA4, концевой K1SEQID NO. 211 [heavy chain XA4, terminal K1
PVHLVESGGGVVPPGRSLRLSCVASGITFRIYGMHWVRPAPGKGLEWVAVLWYDGSH EYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLPMNSLRAEDTAIYYCARDGDYYDSGSPLDYWGPG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLP SSGLYSLS S VVTVPS S SLGTpTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEPYN^STYRVVSVLTVLHPDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGPPREPP VYTLPPSREEMTKNPVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGPPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWPPGNVFSCSVMHEALHNHYTPKSLSLSPGKPVHLVESGGGVVPPGRSLRLSCVASGITFRIYGMHWVRPAPGKGLEWVAVLWYDGSH EYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLPMNSLRAEDTAIYYCARDGDYYDSGSPLDYWGPG TLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLP SSGLYSLS S VVTVPS S SLGTpTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCP APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEPYN^STYRVVSVLTVLHPDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGPPREPP VYTLPPSREEMTKNPVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGPPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWPPGNVFSCSVMHEALHNHYTPKSLSLSPGK
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 212 [VH XFT, CDR подчеркнут!SEQID NO. 212 [VH XFT, CDR underlined!
OVELVQSGAVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVROAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRY SPSFOGOVTISADKSISTAYLOWSSLKASDTAMYYCARGQLYGGTYMDGWGOGTLVT vssOVELVQSGAVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVROAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRY SPSFOGOVTISADKSISTAYLOWSSLKASDTAMYYCARGQLYGGTYMDGWGOGTLVT vss
SEO ID NO. 213 [VL XFT, CDR подчеркнут!SEO ID NO. 213 [VL XFT, CDR underlined!
- 48 040749- 48 040749
DIALTOPASVSGSPGOSITISCTGTSSDIGGYNSVSWYOQHPGKAPKLMIYGVNNRPSGV SNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDIESATPVFGGGTKLEIKDIALTOPASVSGSPGOSITISCTGTSSDIGGYNSVSWYOQHPGKAPKLMIYGVNNRPSGV SNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDIESATPVFGGGTKLEIK
SEQ Ш NO. 214 [тяжелая цепь XFT1SEQ W NO. 214 [XFT1 heavy chain
QVELVQSGAVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRY SPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGQLYGGTYMDGWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGQVELVQSGAVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRY SPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGQLYGGTYMDGWGQGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEP ID NO. 215 [легкая цепь XFT1SEP ID NO. 215 [XFT1 light chain
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDIGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYGVNNRPSGV SNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDIESATPVFGGGTKLEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLS STLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDIESATPVFGGGTKLEIKRTVAAPSVFI
SEQ ID NO. 216 [XFT CDR1 VH1SEQID NO. 216 [XFT CDR1 VH1
GYSFTSYWIGGYSFTSYWIG
SEQ ID NO. 217 [CDR2 VH XFT1 WMGIIDPGDSRTRYSPSFQG SEQ ID NO. 218 [CDR3 VH XFT1 GQLYGGTYMDGSEQID NO. 217 [CDR2 VH XFT1 WMGIIDPGDSRTRYSPSFQG SEQ ID NO. 218 [CDR3 VH XFT1 GQLYGGTYMDG
SEQ ID NO. 219 [CDR1 VL XFT1SEQID NO. 219 [CDR1 VL XFT1
TGTSSDIGGYNSVSTGTSSDIGGYNSVS
SEQ ID NO. 220 [CDR2 VL XFT1SEQID NO. 220 [CDR2 VL XFT1
LMIYGVNNRPSLMIYGVNNRPS
SEQ ID NO. 221 [CDR3 VL XFT1SEQID NO. 221 [CDR3 VL XFT1
SSYDIESATPSSYDIESATP
SEQ Ш NO. 222 [тяжелая цепь XFT, концевой K1SEQ W NO. 222 [XFT heavy chain, terminal K1
PVELVPSGAVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRPAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRY SPSFPGPVTISADKSISTAYLPWSSLKASDTAMYYCARGPLYGGTYMDGWGPGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL PSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTPTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREPVELVPSGAVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRPAPGKGLEWMGIIDPGDSRTRY SPSFPGPVTISADKSISTAYLPWSSLKASDTAMYYCARGPLYGGTYMDGWGPGTLVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL PSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTPTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE
- 49 040749- 49 040749
EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKEQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEP ID NO. 223 ГУН X09, CDR подчеркнут]SEP ID NO. 223 VCO X09, CDR underlined]
OVOLOQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKOSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNOKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT vssOVOLOQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKOSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNOKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT vss
SEO ID NO. 224 [VL X09, CDR подчеркнут]SEO ID NO. 224 [VL X09, CDR underlined]
DIELTOSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYOOKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCOQWSKHPLTFGSGTKVEIKDIELTOSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYOOKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCOQWSKHPLTFGSGTKVEIK
SEO ID NO. 225 [тяжелая цепь X091SEO ID NO. 225 [heavy chain X091
QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGQVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 226 [легкая цепь X09]SEQID NO. 226 [light chain X09]
DIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTKTL TLSKADYEKHKSSYTKTL TLSKADYEKHKSSYTKNSVTHQNSYACEVQ
SEQ ID NO. 227 CDR1 VH[X09]SEQID NO. 227 CDR1 VH[X09]
GYSFTGYSFT
SEQ ID NO. 228 [CDR2 УН X09]SEQID NO. 228 [CDR2 UN X09]
LITPYNGAS S YNQKFRGLITPYNGAS S YNQKFRG
SEQ ID NO. 229 [CDR3 УН X09]SEQID NO. 229 [CDR3 UN X09]
GGYDGRGFDYGGYDGRGFDY
SEQ ID NO. 230 [CDR1 VL X09]SEQID NO. 230 [CDR1 VL X09]
SASSSVSYMHSASSSVSYMH
SEQ ID NO. 231 [CDR2 VL X09]SEQID NO. 231 [CDR2 VL X09]
- 50 040749- 50 040749
DTSKLASDTSKLAS
SEQ ID NO. 232 [CDR3 VL X091SEQID NO. 232 [CDR3 VL X091
QQWSKHPLTQQWSKHPLT
SEQ ID NO. 233 [тяжелая цепь X09, концевой K1SEQID NO. 233 [heavy chain X09, terminal K1
QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN*STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKQVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN*STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 234 ГУН X09.2, CDR подчеркнут!SEQID NO. 234 VCO X09.2, CDR underlined!
OVOLOQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKOSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNOKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGOGTTVT vssOVOLOQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKOSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNOKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGOGTTVT vss
SEO ID NO. 235 [VL X09.2, CDR подчеркнут!SEO ID NO. 235 [VL X09.2, CDR underlined!
DIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYOOKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RF SGSGSGNS YSLTIS SVEAEDDATYYCOQWSGYPLTFGAGTKLEIKDIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYOOKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RF SGSGSGNS YSLTIS SVEAEDDATYYCOQWSGYPLTFGAGTKLEIK
SEQ ID NO. 236 [тяжелая цепь X09.21SEQID NO. 236 [heavy chain X09.21
QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGQVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 237 [легкая цепь X09.21SEQID NO. 237 [light chain X09.21
DIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDIELTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMHWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPG RFSGSGSGNSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSKHPLTFGSGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPS DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTKTL TLSKADYEKHKSSYTKTL TLSKADYEKHKSSYTKNSVTHQNSYACEVQ
- 51 040749- 51 040749
SEO ID NO. 238 [CDR1 УН X09.21SEO ID NO. 238 [CDR1 UN X09.21
GYTMNGYTMN
SEP ID NO. 239 [CDR2 УН X09 21SEP ID NO. 239 [CDR2 CR X09 21
LITPYNGAS S YNQKFRGLITPYNGAS S YNQKFRG
SEP ID NO. 240 [CDR3 УН X09 21SEP ID NO. 240 [CDR3 UN X09 21
GGYDGRGFDYGGYDGRGFDY
SEP ID NO. 241 [CDR1 VL X09.21SEP ID NO. 241 [CDR1 VL X09.21
SASSSVSYMHSASSSVSYMH
SEP ID NO. 242 [CDR2 VL X09.21SEP ID NO. 242 [CDR2 VL X09.21
DTSKLASDTSKLAS
SEP ID NO. 243 [CDR3 VL X09.21SEP ID NO. 243 [CDR3 VL X09.21
QQWSGYPLTQQWSGYPLT
SEQ ID NO. 244 [тяжелая цепь X09.2, концевой K1SEQID NO. 244 [heavy chain X09.2, terminal K1
QVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKQVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKSLEWIGLITPYNGASS YNQKFRGKATLTVDKSSSTAYMDLLSLTSEDSAVYFCARGGYDGRGFDYWGSGTPVT VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEL LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYN^STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTL PPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
N* обозначает Asn297N* stands for Asn297
SEQ ID NO. 245 [мезотелии человека, вариант 11SEQID NO. 245 [human mesothelium, variant 11
MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISS LSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPL DLLLFLNPD AF SGPQ ACTRFF SRITKANVDLLPRGAPERQRLLP AALACWGVRGSLLSEA DVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPST WSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKT ACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDEL YPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQAPRRPLPQ VATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDP RQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRT DAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGY LVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLAMALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISS LSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPL DLLLFLNPD AF SGPQ ACTRFF SRITKANVDLLPRGAPERQRLLP AALACWGVRGSLLSEA DVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPST WSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKT ACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDEL YPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQAPRRPLPQ VATLIDRFVKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDP RQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRT DAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGY LVLDLSMQEALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA
SEQ ID NO. 246 [мезотелии человека, вариант 21SEQID NO. 246 [human mesothelium, variant 21
- 52 040749- 52 040749
MALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISS LSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPL DLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEA DVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPST WSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKT ACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDEL YPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRF VKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYP KARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTV AEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQ EALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLAMALPTARPLLGSCGTPALGSLLFLLFSLGWVQPSRTLAGETGQEAAPLDGVLANPPNISS LSPRQLLGFPCAEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSTEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPL DLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRITKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEA DVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCPGPLDQDQQEAARAALQGGGPPYGPPST WSVSTMDALRGLLPVLGQPIIRSIPQGIVAAWRQRSSRDPSWRQPERTILRPRFRREVEKT ACPSGKKAREIDESLIFYKKWELEACVDAALLATQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDEL YPQGYPESVIQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRF VKGRGQLDKDTLDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIWAVRPQDLDTCDPRQLDVLYP KARLAFQNMNGSEYFVKIQSFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTV AEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSMQ EALSGTPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA
- 53 040749- 53 040749
Перечень последовательностей.Sequence listing.
<110> ADC Therapeutics SA Medlmmune Limited <120> КОНЪЮГАТЫ ПИРРОЛОБЕНЗОДИАЗЕПИН-АНТИТЕЛО <130> RKA/LP338742 <150> GB 1719391.3 <151> 2017-11-22 <150> GB 1719398.8 <151> 2017-11-22 <150> GB 1719393.9 <151> 2017-11-22 <150> GB 1702031.4 <151> 2017-02-08 <160> 246 < 170> Patentin, версия 3.5 <210> 1 <211> 121 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220><110> ADC Therapeutics SA Medlmmune Limited <120> PYRROLOBENZODIAZEPINE-ANTIBODY CONJUGATES <130> RKA/LP338742 <150> GB 1719391.3 <151> 2017-11-22 <150> GB 1719398.8 <151> 2017 <-11-22 GB 1719393.9 <151> 2017-11-22 <150> GB 1702031.4 <151> 2017-02-08 <160> 246 <170> Patentin version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> VH HuBa-l-3d <400>1< 223> VH HuBa-l-3d <400>1
Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 1015Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 1015
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Ala Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 4045Ala Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Vai lie Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560Gly Vai lie Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp GlyAla Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105110100 105110
Gin Gly Thr Met Vai Thr Vai Ser SerGin Gly Thr Met Vai Thr Vai Ser Ser
- 54 040749- 54 040749
115 120 <210> 2 <211> 113 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>115 120 <210> 2 <211> 113 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> VL HuBa-l-3d < 400> 2< 223> VL HuBa-l-3d < 400> 2
Asp lie Vai Met Thr Gin Ser Pro 1 5Asp lie Vai Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Ser Leu Ala Vai Ser Leu GlyAsp Ser Leu Ala Vai Ser Leu Gly
1515
Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Lys 20Glu Arg Ala Thr lie Asn Cys Lys 20
Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn SerSer Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser
30thirty
Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu AlaSer Asn Gin Lys Asn Tyr Leu Ala
4040
Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 45Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 45
Pro Pro Lys Leu Leu Vai Tyr Phe 50 55Pro Pro Lys Leu Leu Vai Tyr Phe 50 55
Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 60Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 65 70Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly 65 70
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu ThrSer Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
80 lie Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp 8580 lie Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp 85
Vai Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin GinVai Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin
9595
His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr PheHis Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe
100100
Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lieGly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie
105 110105 110
Lys <210> 3 <211> 450 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Lys <210> 3 <211> 450 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь HuBa-l-3d <220><223> Heavy Chain HuBa-l-3d <220>
< 221> MOD_RES < 222> (301) . . (301) < 223> Хаа представляет собой Asn297 <400> 3< 221> MOD_RES < 222> (301) . . (301) <223> Xaa is Asn297 <400> 3
Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly AlaGin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala
10 1510 15
- 55 040749- 55 040749
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 2530
Ala Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 4045Ala Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
Gly Vai lie Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560Gly Vai lie Ser Thr Tyr Tyr Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580Lys Gly Lys Ala Thr Met Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105110Ala Arg Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105110
Gin Gly Thr Met Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro SerGin Gly Thr Met Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120125115 120125
Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135140Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135140
Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr VaiAla Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai
145 150 155160145 150 155160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro AlaSer Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala
165 170175165 170175
Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185190Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai 180 185190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Vai Asn HisPro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Vai Asn His
195 200205195 200205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser CysLys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys
210 215220210 215220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235240Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235240
Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu MetGly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250255 lie Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His 260 265270245 250255 lie Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His 260 265270
- 56 040749- 56 040749
- 57 040749- 57 040749
25302530
Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 4045Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 4045
Pro Pro Lys Leu Leu Vai Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 50 5560Pro Pro Lys Leu Leu Vai Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 50 5560
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 7580 lie Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin 85 9095Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 7580 lie Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin 85 9095
His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He 100 105110His Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He 100 105110
Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser AspLys Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser Asp
115 120125115 120125
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn AsnGlu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn
130 135140130 135140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala LeuPhe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu
145 150 155160145 150 155160
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys AspGin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp
165 170175165 170175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185190
Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser 195 200205Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser 195 200205
Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu CysSer Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215220 <210> 5 <2H> 5 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>210 215220 <210> 5 <2H> 5 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR1 VH HuBa-l-3d < 400> 5< 223> CDR1 VH HuBa-l-3d < 400> 5
Asp Tyr Ala Met HisAsp Tyr Ala Met His
55
- 58 040749 <210> 6 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>- 58 040749 <210> 6 <211> 17 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR2 VH HuBa-l-3d <400>6<223> CDR2 VH HuBa-l-3d <400>6
Vai lie Ser Thr Туг Туг Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe LysVai lie Ser Thr Tug Tug Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe Lys
10151015
Gly <210> 7 <211>12 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>Gly <210> 7 <211>12 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR3 VH HuBa-l-3d <400> 7<223> CDR3 VH HuBa-l-3d <400> 7
Gly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp TyrGly Gly Leu Arg Glu Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1510 <210>8 <211>17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>1510 <210>8 <211>17 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR1 VL HuBa-l-3d <400>8<223> CDR1 VL HuBa-l-3d <400>8
Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser Ser Asn Gin Lys Asn Tyr LeuLys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Asn Ser Ser Asn Gin Lys Asn Tyr Leu
10151015
Ala <210>9 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Ala <210>9 <211> 7 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR2 VL HuBa-l-3d <400> 9< 223> CDR2 VL HuBa-l-3d <400> 9
Phe Ala Ser Thr Arg Glu SerPhe Ala Ser Thr Arg Glu Ser
55
- 59 040749- 59 040749
<210> 11 <211> 451 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220><210> 11 <211> 451 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь HuBa-l-3d, концевой К <220><223> Heavy chain HuBa-l-3d, terminal K <220>
< 221> MOD_RES < 222> (301) . . (301) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 11< 221> MOD_RES < 222> (301) . . (301) <223> Xaa is Asn297 <400> 11
- 60 040749- 60 040749
130 135140130 135140
Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr VaiAla Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai
145 150 155160145 150 155160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro AlaSer Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala
165 170175165 170175
Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr VaiVai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai
180 185190180 185190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn HisPro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His
195 200205195 200205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser CysLys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys
210 215220210 215220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235240Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235240
Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu MetGly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250255245 250255
He Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser HisHe Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His
260 265270260 265270
Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu VaiGlu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai
275 280285275 280285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr TyrHis Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr
290 295300290 295300
Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn GlyArg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315320305 310 315320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro HeLys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He
325 330335325 330335
Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin VaiGlu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai
340 345350340 345350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser 355 360365Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser 355 360365
Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai GluLeu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu
370 375380370 375380
Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro ProTrp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
- 61 040749- 61 040749
385 390 395400385 390 395400
Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr VaiVai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai
405 410415405 410415
Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai MetAsp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met
420 425430420 425430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu SerHis Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440445435 440445
Pro Gly Lys 450 <210>12 <211> 383 < 212> БЕЛОК < 213> Homo sapiens <400>12Pro Gly Lys 450 <210>12 <211> 383 <212> PROTEIN <213> Homo sapiens <400>12
Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Vai Leu Leu Leu Leu Leu AlaMet Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Vai Leu Leu Leu Leu Leu Ala
10151015
Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro 20 2530Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro 20 2530
Gin Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Vai Cys Arg Cys His Vai Gly 35 4045Gin Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Vai Cys Arg Cys His Vai Gly 35 4045
Trp Gin Gly Pro Leu Cys Asp Gin Cys Vai Thr Ser Pro Gly Cys Leu 50 5560Trp Gin Gly Pro Leu Cys Asp Gin Cys Vai Thr Ser Pro Gly Cys Leu 50 5560
His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gin Cys lie Cys Thr Asp Gly Trp 65 70 7580His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gin Cys lie Cys Thr Asp Gly Trp 65 70 7580
Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Vai Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro 85 9095Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Vai Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro 85 9095
Cys Ala Asn Asn Gly Thr Cys Vai Ser Leu Asp Gly Gly Leu Tyr GluCys Ala Asn Asn Gly Thr Cys Vai Ser Leu Asp Gly Gly Leu Tyr Glu
100 105110100 105110
Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gin Lys Lys AspCys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gin Lys Lys Asp
115 120125115 120125
Gly Pro Cys Vai lie Asn Gly Ser Pro Cys Gin His Gly Gly Thr Cys 130 135140Gly Pro Cys Vai lie Asn Gly Ser Pro Cys Gin His Gly Gly Thr Cys 130 135140
Vai Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro ProVai Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro
145 150 155160145 150 155160
- 62 040749- 62 040749
Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu 165Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu 165
He Vai Ala Asn Ser Cys Thr ProHe Vai Ala Asn Ser Cys Thr Pro
170 175170 175
Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Vai 180Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Vai 180
Cys Thr Asp He Gly Gly Asp Phe 185 190Cys Thr Asp He Gly Gly Asp Phe 185 190
Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly PheArg Cys Arg Cys Pro Ala Gly Phe
195 200195 200
He Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro 205He Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro 205
Vai Thr Asn Cys Ala Ser Ser ProVai Thr Asn Cys Ala Ser Ser Pro
210 215210 215
Cys Gin Asn Gly Gly Thr Cys LeuCys Gin Asn Gly Gly Thr Cys Leu
220220
Gin His Thr Gin Vai Ser Tyr Glu 225 230Gin His Thr Gin Vai Ser Tyr Glu 225 230
Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe ThrCys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr
235 240235 240
Gly Leu Thr Cys Vai Lys Lys Arg 245Gly Leu Thr Cys Vai Lys Lys Arg 245
Ala Leu Ser Pro Gin Gin Vai ThrAla Leu Ser Pro Gin Gin Vai Thr
250 255250 255
Arg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly LeuArg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly Leu
260260
Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly VaiAla Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Vai
265 270265 270
His Glu Leu Pro Vai Gin Gin ProHis Glu Leu Pro Vai Gin Gin Pro
275 280275 280
Glu His Arg He Leu Lys Vai Ser 285Glu His Arg He Leu Lys Vai Ser 285
Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys ThrMet Lys Glu Leu Asn Lys Lys Thr
290 295290 295
Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gin Ala 300Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gin Ala 300
He Cys Phe Thr He Leu Gly Vai 305 310He Cys Phe Thr He Leu Gly Vai 305 310
Leu Thr Ser Leu Vai Vai Leu GlyLeu Thr Ser Leu Vai Vai Leu Gly
315 320315 320
Thr Vai Gly He Vai Phe Leu Asn 325Thr Vai Gly He Vai Phe Leu Asn 325
Lys Cys Glu Thr Trp Vai Ser AsnLys Cys Glu Thr Trp Vai Ser Asn
330 335330 335
Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg 340Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg 340
Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gin 345 350Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gin 345 350
Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu AlaTyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu Ala
355 360355 360
Vai Asn He He Phe Pro Glu LysVai Asn He He Phe Pro Glu Lys
365365
He Asp Met Thr Thr Phe Ser LysHe Asp Met Thr Thr Phe Ser Lys
370 375370 375
Glu Ala Gly Asp Glu Glu He 380 <210> 13 <2H> 383 < 212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 13Glu Ala Gly Asp Glu Glu He 380 <210> 13 <2H> 383 < 212> PROTEIN <213> Homo sapiens <400> 13
- 63 040749- 63 040749
Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Vai Leu Leu Leu Leu Leu Ala 15 1015Met Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Arg Vai Leu Leu Leu Leu Leu Ala 15 1015
Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro 20 2530Phe Gly His Ser Thr Tyr Gly Ala Glu Cys Phe Pro Ala Cys Asn Pro 20 2530
Gin Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Vai Cys Arg Cys Gin Pro Gly 35 4045Gin Asn Gly Phe Cys Glu Asp Asp Asn Vai Cys Arg Cys Gin Pro Gly 35 4045
Trp Gin Gly Pro Leu Cys Asp Gin Cys Vai Thr Ser Pro Gly Cys Leu 50 5560Trp Gin Gly Pro Leu Cys Asp Gin Cys Vai Thr Ser Pro Gly Cys Leu 50 5560
His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gin Cys lie Cys Thr Asp Gly Trp 65 70 7580His Gly Leu Cys Gly Glu Pro Gly Gin Cys lie Cys Thr Asp Gly Trp 65 70 7580
Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Vai Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro 85 9095Asp Gly Glu Leu Cys Asp Arg Asp Vai Arg Ala Cys Ser Ser Ala Pro 85 9095
Cys Ala Asn Asn Arg Thr Cys Vai Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr GluCys Ala Asn Asn Arg Thr Cys Vai Ser Leu Asp Asp Gly Leu Tyr Glu
100 105110100 105110
Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gin Lys Lys Asp 115 120125Cys Ser Cys Ala Pro Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Cys Gin Lys Lys Asp 115 120125
Gly Pro Cys Vai lie Asn Gly Ser Pro Cys Gin His Gly Gly Thr Cys 130 135140Gly Pro Cys Vai lie Asn Gly Ser Pro Cys Gin His Gly Gly Thr Cys 130 135140
Vai Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro ProVai Asp Asp Glu Gly Arg Ala Ser His Ala Ser Cys Leu Cys Pro Pro
145 150 155160145 150 155160
Gly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu lie Vai Ala Asn Ser Cys Thr ProGly Phe Ser Gly Asn Phe Cys Glu lie Vai Ala Asn Ser Cys Thr Pro
165 170175165 170175
Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Vai Cys Thr Asp lie Gly Gly Asp Phe 180 185190Asn Pro Cys Glu Asn Asp Gly Vai Cys Thr Asp lie Gly Gly Asp Phe 180 185190
Arg Cys Arg Cys Pro Ala Gly Phe lie Asp Lys Thr Cys Ser Arg ProArg Cys Arg Cys Pro Ala Gly Phe lie Asp Lys Thr Cys Ser Arg Pro
195 200205195 200205
Vai Thr Asn Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gin Asn Gly Gly Thr Cys LeuVai Thr Asn Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gin Asn Gly Gly Thr Cys Leu
210 215220210 215220
Gin His Thr Gin Vai Ser Tyr Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe ThrGin His Thr Gin Vai Ser Tyr Glu Cys Leu Cys Lys Pro Glu Phe Thr
225 230 235240225 230 235240
Gly Leu Thr Cys Vai Lys Lys Arg Ala Leu Ser Pro Gin Gin Vai ThrGly Leu Thr Cys Vai Lys Lys Arg Ala Leu Ser Pro Gin Gin Vai Thr
245 250255245 250255
- 64 040749- 64 040749
Arg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly Leu 260Arg Leu Pro Ser Gly Tyr Gly Leu 260
Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Vai 265 270Ala Tyr Arg Leu Thr Pro Gly Vai 265 270
His Glu Leu Pro Vai Gin Gin ProHis Glu Leu Pro Vai Gin Gin Pro
275 280275 280
Glu His Arg lie Leu Lys Vai Ser 285Glu His Arg lie Leu Lys Vai Ser 285
Met Lys Glu Leu Asn Lys Lys ThrMet Lys Glu Leu Asn Lys Lys Thr
290 295290 295
Pro Leu Leu Thr Glu Gly Gin AlaPro Leu Leu Thr Glu Gly Gin Ala
300 lie Cys Phe Thr lie Leu Gly Vai300 lie Cys Phe Thr lie Leu Gly Vai
305 310305 310
Leu Thr Ser Leu Vai Vai Leu GlyLeu Thr Ser Leu Vai Vai Leu Gly
315 320315 320
Thr Vai Gly lie Vai Phe Leu Asn 325Thr Vai Gly lie Vai Phe Leu Asn 325
Lys Cys Glu Thr Trp Vai Ser AsnLys Cys Glu Thr Trp Vai Ser Asn
330 335330 335
Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg 340Leu Arg Tyr Asn His Met Leu Arg 340
Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gin 345 350Lys Lys Lys Asn Leu Leu Leu Gin 345 350
Tyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu AlaTyr Asn Ser Gly Glu Asp Leu Ala
355 360355 360
Vai Asn lie lie Phe Pro Glu Lys 365 lie Asp Met Thr Thr Phe Ser LysVai Asn lie lie Phe Pro Glu Lys 365 lie Asp Met Thr Thr Phe Ser Lys
370 375370 375
Glu Ala Gly Asp Glu Glu lie 380 <210>14 <400>14Glu Ala Gly Asp Glu Glu lie 380 <210>14 <400>14
000 <210>15 <400>15000 <210>15 <400>15
000 <210>16 <400>16000 <210>16 <400>16
000 <210>17 <400>17000 <210>17 <400>17
000 <210>18 <400>18000 <210>18 <400>18
000 <210>19 <400>19000 <210>19 <400>19
000 <210> 20000 <210> 20
- 65 040749 <400> 20 ООО <210> 21 <400> 21 ООО <210> 22 <400> 22 ООО <210> 23 <400> 23 ООО <210> 24 <400> 24 ООО <210> 25 <400> 25 ООО <210> 26 <400> 26 ООО <210> 27 <400> 27 ООО <210> 28 <400> 28 ООО <210> 29 <400> 29 ООО <210> 30 <400> 30 ООО <210> 31 <400> 31 ООО <210> 32 <400> 32 ООО- 65 040749 <400> 20 LLC <210> 21 <400> 21 LLC <210> 22 <400> 22 LLC <210> 23 <400> 23 LLC <210> 24 <400> 24 LLC <210> 25 <400 > 25 LLC <210> 26 <400> 26 LLC <210> 27 <400> 27 LLC <210> 28 <400> 28 LLC <210> 29 <400> 29 LLC <210> 30 <400> 30 LLC <210 > 31 <400> 31 OOO <210> 32 <400> 32 OOO
- 66 040749 <210>33 <400>33- 66 040749 <210>33 <400>33
000 <210>34 <400>34000 <210>34 <400>34
000 <210>35 <400>35000 <210>35 <400>35
000 <210>36 <400>36000 <210>36 <400>36
000 <210>37 <400>37000 <210>37 <400>37
000 <210>38 <400>38000 <210>38 <400>38
000 <210>39 <400>39000 <210>39 <400>39
000 <210>40 <400>40000 <210>40 <400>40
000 <210>41 <400>41000 <210>41 <400>41
000 <210>42 <400>42000 <210>42 <400>42
000 <210>43 <400>43000 <210>43 <400>43
000 <210>44 <400>44000 <210>44 <400>44
000 <210>45 <400>45000 <210>45 <400>45
000000
- 67 040749 <210> 46 <400> 46 000 <210> 47 <400> 47 000 <210> 48 <400> 48- 67 040749 <210> 46 <400> 46,000 <210> 47 <400> 47,000 <210> 48 <400> 48
000 <210> 49 <400> 49 000 <210> 50 <400> 50 000 <210> 51 <400> 51 000 <210> 52 <400> 52 000 <210> 53 <400> 53 000 <210> 54 <400> 54 000 <210> 55 <400> 55 000 <210> 56 <400> 56 000 <210> 57 <400> 57 000 <210> 58 <400> 58000 <210> 49 <400> 49,000 <210> 50 <400> 50,000 <210> 51 <400> 51,000 <210> 52 <400> 52,000 <210> 53 <400> 53,000 <210> 54 <400> 54,000 <210> 55 <400> 55,000 <210> 56 <400> 56,000 <210> 57 <400> 57,000 <210> 58 <400> 58
- 68 040749- 68 040749
- 69 040749 <400> 71 ООО <210> 72 <400> 72 ООО <210> 73 <400> 73 ООО <210> 74 <400> 74 ООО <210> 75 <400> 75 ООО <210> 76 <400> 76- 69 040749 <400> 71 LLC <210> 72 <400> 72 LLC <210> 73 <400> 73 LLC <210> 74 <400> 74 LLC <210> 75 <400> 75 LLC <210> 76 <400 > 76
ООО <210> 77 <400> 77 ООО <210> 78 <400> 78 ООО <210>79 <400> 79 ООО <210>80 <400>80LLC <210> 77 <400> 77 LLC <210> 78 <400> 78 LLC <210>79 <400> 79 LLC <210>80 <400>80
ООО <210>81 <400>81LLC <210>81 <400>81
ООО <210>82 <400>82LLC <210>82 <400>82
ООО <210>83 <400>83LLC <210>83 <400>83
ООО <210>84OOO <210>84
- 70 040749 <400>84- 70 040749 <400>84
ООО <210>85 <400>85LLC <210>85 <400>85
ООО <210>86 <400>86LLC <210>86 <400>86
ООО <210>87 <400>87LLC <210>87 <400>87
ООО <210>88 <400>88LLC <210>88 <400>88
ООО <210>89 <400>89LLC <210>89 <400>89
ООО <210>90 <400>90OOO <210>90 <400>90
ООО <210>91 <400>91LLC <210>91 <400>91
ООО <210>92 <400>92LLC <210>92 <400>92
ООО <210>93 <400>93LLC <210>93 <400>93
ООО <210>94 <400>94LLC <210>94 <400>94
ООО <210>95 <400>95LLC <210>95 <400>95
ООО <210>96 <4 Ο 0>9 6OOO <210>96 <4 Ο 0>9 6
ОООOOO
- 71 040749 <210>97 <400>97- 71 040749 <210>97 <400>97
000 <210>98 <400>98000 <210>98 <400>98
000 <210>99 <400>99000 <210>99 <400>99
000 <210>100 <400>100000 <210>100 <400>100
000 <210>101 <211>116 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>000 <210>101 <211>116 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> VH 3Α4 < 400> 101< 223> VH 3Α4 < 400> 101
Gin lie Gin Leu Vai Gin Ser Gly 1 5Gin lie Gin Leu Vai Gin Ser Gly 1 5
Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 10 15Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 10 15
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala 20Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala 20
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp 25 30Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp 25 30
Tyr Met Ser Trp Vai Lys Gin AlaTyr Met Ser Trp Vai Lys Gin Ala
4040
Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 45Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 45
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn GlyGly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Gly
5555
Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 60Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70
Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala TyrAsp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
8080
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85
Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr CysGlu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys
9595
Ala Arg Asp Pro Gly Ala Met Asp 100Ala Arg Asp Pro Gly Ala Met Asp 100
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai 105 110Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai 105 110
Thr Vai Ser SerThr Vai Ser Ser
115 <210> 102 <211> 112115 <210> 102 <211> 112
- 72 040749 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>- 72 040749 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> VL ЗА4 <400>102< 223> VL 3A4 <400>102
Asp lie Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro GlyAsp lie Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly
10151015
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 2530Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 2530
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 4045Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 4045
Pro Gin Leu Leu He Tyr Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 5560Pro Gin Leu Leu He Tyr Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 7580Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 7580
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 9095Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 9095
Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105110 <210>103 <2H>445 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105110 <210>103 <2H>445 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь 3A4 <220><223> Heavy Chain 3A4 <220>
< 221> MOD_RES < 222> (296)..(296) <223> Хаа представляет собой Asn297 <400>103<221> MOD_RES <222> (296)..(296) <223> Haa is Asn297 <400>103
Gin He Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly AlaGin He Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala
10151015
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp 20 2530Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp 20 2530
Tyr Met Ser Trp Vai Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 4045Tyr Met Ser Trp Vai Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 4045
- 73 040749- 73 040749
Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560Gly Asp lie Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Asp Pro Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu VaiAla Arg Asp Pro Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai
100 105110100 105110
Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala 115 120125Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala 115 120125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys LeuPro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135140130 135140
Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser GlyVai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155160145 150 155160
Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser SerAla Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser
165 170175165 170175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser Leu 180 185190Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser Leu 180 185190
Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Vai Asn His Lys Pro Ser Asn ThrGly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Vai Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200205195 200205
Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His ThrLys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215220210 215220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Vai PheCys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Vai Phe
225 230 235240225 230 235240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr ProLeu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro
245 250255245 250255
Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu VaiGlu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp Pro Glu Vai
260 265270260 265270
Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys ThrLys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr
275 280285275 280285
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser VaiLys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai
290 295300290 295300
- 74 040749- 74 040749
Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys CysLeu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315320305 310 315320
Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie SerLys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser
325 330335325 330335
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro ProLys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345350340 345350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu VaiSer Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai
355 360365355 360365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn GlyLys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375380370 375380
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser AspGin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp
385 390 395400385 390 395400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg TrpGly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp
405 410415405 410415
Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His 420 425430Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu Ala Leu His 420 425430
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser LeuAsn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu
435440435440
Ser Leu Ser Pro GlySer Leu Ser Pro Gly
445 <210>104 <2H> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>445 <210>104 <2H> 219 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> Легкая цепь 3A4 <400>104<223> Light chain 3A4 <400>104
Asp He Vai Met Thr Gin Thr Pro 15Asp He Vai Met Thr Gin Thr Pro 15
Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly 1015Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly 1015
Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg 20Glu Pro Ala Ser He Ser Cys Arg 20
Ser Ser Gin Ser Leu Leu His SerSer Ser Gin Ser Leu Leu His Ser
30thirty
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu TrpAsn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp
4040
Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 45Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 45
Pro Gin Leu Leu He Tyr Thr VaiPro Gin Leu Leu He Tyr Thr Vai
5555
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 60Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 65 70Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 65 70
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lieGly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie
8080
- 75 040749- 75 040749
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai 8590Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai 8590
Tyr Tyr CysTyr Tyr Cys
Phe Gin Gly 95Phe Gin Gly 95
Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105110Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105110
Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser Asp GluArg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120125115 120125
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn PheGin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135140130 135140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu GinTyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin
145 150 155160145 150 155160
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp SerSer Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser
165 170175165 170175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr GluThr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185190180 185190
Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200205Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200205
Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu CysPro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210215 <210>105 <2H>10 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>210215 <210>105 <2H>10 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR1 VH 3A4 < 400>105< 223> CDR1 VH 3A4 < 400>105
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp Tyr Met Ser 1510 < 210>106 < 2H>10 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp Tyr Met Ser 1510 < 210>106 < 2H>10 < 212> PROTEIN < 213> Artificial sequence <220>
<223> CDR2 VH 3A4 <400> 106<223> CDR2 VH 3A4 <400> 106
Asp He Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn 15 10Asp He Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn 15 10
- 76 040749 <210> 107 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>- 76 040749 <210> 107 <211> 7 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR3 VH 3Α4 < 400>107< 223> CDR3 VH 3Α4 < 400>107
Asp Pro Gly Ala Met Asp Tyr <210>108 <211>16 <212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Asp Pro Gly Ala Met Asp Tyr <210>108 <211>16 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR1 VL 3A4 <400>108< 223> CDR1 VL 3A4 <400>108
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu GluArg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1015 <210>109 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>1015 <210>109 <211> 7 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR2 VL 3A4 <400>109< 223> CDR2 VL 3A4 <400>109
Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser <210>110 <211>9 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser <210>110 <211>9 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR3 VL 3A4 <400>110< 223> CDR3 VL 3A4 <400>110
Phe Gin Gly Ser His Vai Pro Leu Thr 15 <210>111 <211> 446 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Phe Gin Gly Ser His Vai Pro Leu Thr 15 <210>111 <211> 446 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
- 77 040749 <223> Тяжелая цепь ЗА4, концевой К <220>- 77 040749 <223> Heavy chain ZA4, terminal K <220>
< 221> MOD_RES < 222> (296)..(296) <223> Хаа представляет собой Asn297 <400>111<221> MOD_RES <222> (296)..(296) <223> Haa is Asn297 <400>111
Gin Не Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 1015Gin Not Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 1015
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp 20 2530Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asp 20 2530
Tyr Met Ser Trp Vai Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 4045Tyr Met Ser Trp Vai Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp He 35 4045
Gly Asp He Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560Gly Asp He Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Asp Pro Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu VaiAla Arg Asp Pro Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Vai
100 105110100 105110
Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu AlaThr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe Pro Leu Ala
115 120125115 120125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys LeuPro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135140130 135140
Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155160Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155160
Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser SerAla Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu Gin Ser Ser
165 170175165 170175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser Leu 180 185190Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser Ser Ser Leu 180 185190
Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200205Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200205
Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His ThrLys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215220210 215220
- 78 040749- 78 040749
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Vai PheLeu Leu Gly Gly Pro Ser Vai Phe
235 240235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245
Thr Leu Met lie Ser Arg Thr ProThr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro
250 255250 255
Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp 260Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp 260
Vai Ser His Glu Asp Pro Glu VaiVai Ser His Glu Asp Pro Glu Vai
265 270265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp GlyLys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly
275 280275 280
Vai Glu Vai His Asn Ala Lys ThrVai Glu Vai His Asn Ala Lys Thr
285285
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr XaaLys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa
290 295290 295
Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai 300Ser Thr Tyr Arg Vai Vai Ser Vai 300
Leu Thr Vai Leu His Gin Asp TrpLeu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp
305 310305 310
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys CysLeu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
315 320315 320
Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu ProLys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325325
Ala Pro lie Glu Lys Thr lie SerAla Pro lie Glu Lys Thr lie Ser
330 335330 335
Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu 340Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu 340
Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro 345 350Pro Gin Vai Tyr Thr Leu Pro Pro 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys AsnSer Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360355 360
Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai 365Gin Vai Ser Leu Thr Cys Leu Vai 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lieLys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie
370 375370 375
Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly 380Ala Vai Glu Trp Glu Ser Asn Gly 380
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390
Thr Pro Pro Vai Leu Asp Ser AspThr Pro Pro Vai Leu Asp Ser Asp
395 400395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405
Leu Thr Vai Asp Lys Ser Arg TrpLeu Thr Vai Asp Lys Ser Arg Trp
410 415410 415
Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys 420Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys 420
Ser Vai Met His Glu Ala Leu HisSer Vai Met His Glu Ala Leu His
425 430425 430
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser LeuAsn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu
435440435440
Ser Leu Ser Pro Gly LysSer Leu Ser Pro Gly Lys
445 <210>112 <211>84 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400>112445 <210>112 <211>84 <212> PROTEIN <213> Homo sapiens <400>112
- 79 040749- 79 040749
<210> 114<210> 114
- 80 040749 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>- 80 040749 <211> 219 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> Легкая цепь 3A4-L2 <400>114<223> Light chain 3A4-L2 <400>114
Asp Vai Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro GlyAsp Vai Vai Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly
10151015
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 2530Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 2530
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 4045Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 4045
Pro Lys Leu Leu lie Tyr Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 5560Pro Lys Leu Leu lie Tyr Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 7580Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 7580
Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 9095Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Vai Gly Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 9095
Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105110Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105110
Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp GluArg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120125115 120125
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn PheGin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135140130 135140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu GinTyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin
145 150 155160145 150 155160
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp SerSer Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser
165 170175165 170175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185190Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185190
Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser SerLys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser
195 200205195 200205
Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu CysPro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210215210215
- 81 040749 <210> 115 <2Η> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>- 81 040749 <210> 115 <2Η> 112 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VL 3Α4-Κ4 <400>115<223> VL 3Α4-Κ4 <400>115
Asp He Vai Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Vai Ser Leu Gly 15 1015Asp He Vai Met Thr Gin Ser Pro Asp Ser Leu Ala Vai Ser Leu Gly 15 1015
Glu Arg Ala Thr He Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 2530Glu Arg Ala Thr He Asn Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 2530
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 4045Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 35 4045
Pro Lys Leu Leu He Tyr Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 5560Pro Lys Leu Leu He Tyr Thr Vai Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 50 5560
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 7580Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He 65 70 7580
Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai Ala Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 9095Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai Ala Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 9095
Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Vai Glu He Lys 100 105110 <210>116 <2H> 219 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Vai Glu He Lys 100 105110 <210>116 <2H> 219 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Легкая цепь 3A4-K4 < 400> 116< 223> Light chain 3A4-K4 < 400> 116
Asp He Vai Met Thr Gin Ser Pro 1 5Asp He Vai Met Thr Gin Ser Pro 1 5
Asp Ser Leu Ala Vai Ser Leu Gly 10 15Asp Ser Leu Ala Vai Ser Leu Gly 10 15
Glu Arg Ala Thr He Asn Cys Arg 20Glu Arg Ala Thr He Asn Cys Arg 20
Ser Ser Gin Ser Leu Leu His SerSer Ser Gin Ser Leu Leu His Ser
30thirty
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu TrpAsn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp
4040
Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 45Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Pro 45
Pro Lys Leu Leu He Tyr Thr Vai 50 55Pro Lys Leu Leu He Tyr Thr Vai 50 55
Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 60Ser Asn Arg Phe Ser Gly Vai Pro 60
- 82 040749- 82 040749
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 65 70Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 65 70
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr HeGly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He
8080
Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai 85Ser Ser Leu Gin Ala Glu Asp Vai 85
Ala Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 90 95Ala Vai Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 90 95
Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly 100Ser His Vai Pro Leu Thr Phe Gly 100
Gin Gly Thr Lys Vai Glu He Lys 105 110Gin Gly Thr Lys Vai Glu He Lys 105 110
Arg Thr Vai Ala Ala Pro Ser VaiArg Thr Vai Ala Ala Pro Ser Vai
115 120115 120
Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu 125Phe He Phe Pro Ser Asp Glu 125
Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala SerGin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
130 135130 135
Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe 140Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin 145 150Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Vai Gin 145 150
Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu GinTrp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin
155 160155 160
Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai 165Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai 165
Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp SerThr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser
170 175170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 180Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 180
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 185 190Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 185 190
Lys His Lys Vai Tyr Ala Cys GluLys His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu
195 200195 200
Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 205Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 205
Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn ArgPro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg
210215210215
Gly Glu Cys <210>117 <400>117Gly Glu Cys <210>117 <400>117
000 <210>118 <400>118000 <210>118 <400>118
000 <210>119 <400>119000 <210>119 <400>119
000 <210>120 <400> 120 000 <210>121 <400>121000 <210>120 <400> 120,000 <210>121 <400>121
- 83 040749- 83 040749
ООО <210>122 <400>122LLC <210>122 <400>122
ООО <210>123 <400>123LLC <210>123 <400>123
ООО <210>124 <400>124LLC <210>124 <400>124
ООО <210>125 <400>125OOO <210>125 <400>125
ООО <210>126 <400>126LLC <210>126 <400>126
ООО <210>127 <400>127LLC <210>127 <400>127
ООО <210>128 <400>128LLC <210>128 <400>128
ООО <210>129 <400>129LLC <210>129 <400>129
ООО <210>130 <400>130OOO <210>130 <400>130
ООО <210>131 <400>131LLC <210>131 <400>131
ООО <210>132 <400>132LLC <210>132 <400>132
ООО <210>133 <400>133LLC <210>133 <400>133
ООО <210>134OOO <210>134
- 84 040749 <400>134- 84 040749 <400>134
ООО <210>135 <400>135LLC <210>135 <400>135
ООО <210>136 <400>136LLC <210>136 <400>136
ООО <210>137 <400>137LLC <210>137 <400>137
ООО <210>138 <400>138LLC <210>138 <400>138
ООО <210>139 <400>139LLC <210>139 <400>139
ООО <210>140 <400>140OOO <210>140 <400>140
ООО <210>141 <400>141LLC <210>141 <400>141
ООО <210>142 <400>142LLC <210>142 <400>142
ООО <210>143 <400>143LLC <210>143 <400>143
ООО <210>144 <400>144LLC <210>144 <400>144
ООО <210>145 <400>145OOO <210>145 <400>145
ООО <210>146 <400>146LLC <210>146 <400>146
ООО <210>147OOO <210>147
- 85 040749 <400>147- 85 040749 <400>147
ООО <210>148 <400>148LLC <210>148 <400>148
ООО <210>149 <400>149LLC <210>149 <400>149
ООО <210>150 <400>150OOO <210>150 <400>150
ООО <210>151 <400>151LLC <210>151 <400>151
ООО <210>152 <400>152LLC <210>152 <400>152
ООО <210>153 <400>153LLC <210>153 <400>153
ООО <210>154 <400>154LLC <210>154 <400>154
ООО <210>155 <400>155LLC <210>155 <400>155
ООО <210>156 <400>156LLC <210>156 <400>156
ООО <210>157 <400>157LLC <210>157 <400>157
ООО <210>158 <400>158LLC <210>158 <400>158
ООО <210>159 <400>159LLC <210>159 <400>159
ОООOOO
- 86 040749 <210>160 <400>160- 86 040749 <210>160 <400>160
000 <210>161 <400>161000 <210>161 <400>161
000 <210>162 <400>162000 <210>162 <400>162
000 <210>163 <400>163000 <210>163 <400>163
000 <210>164 <400>164000 <210>164 <400>164
000 <210>165 <400>165000 <210>165 <400>165
000 <210>166 <400>166000 <210>166 <400>166
000 <210>167 <400>167000 <210>167 <400>167
000 <210>168 <400>168000 <210>168 <400>168
000 <210>169 <400>169000 <210>169 <400>169
000 <210>170 <400>170000 <210>170 <400>170
000 <210>171 <400>171000 <210>171 <400>171
000 <210>172 <400>172000 <210>172 <400>172
000000
- 87 040749- 87 040749
- 88 040749- 88 040749
- 89 040749 <400>198- 89 040749 <400>198
ООО <210>199 <400>199LLC <210>199 <400>199
ООО <210> 200 <400> 200 ООО <210> 201 <211> 122 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>OOO <210> 200 <400> 200 OOO <210> 201 <211> 122 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VH ΧΑ4 <400> 201<223> VH ΧΑ4 <400> 201
Gin Vai His Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 15 1015Gin Vai His Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 15 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Vai Ala Ser Gly lie Thr Phe Arg lie Tyr 20 2530Ser Leu Arg Leu Ser Cys Vai Ala Ser Gly lie Thr Phe Arg lie Tyr 20 2530
Gly Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 4045Gly Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 4045
Ala Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 5560Ala Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 5560
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 7580Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 7580
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala lie Tyr Tyr Cys 85 9095Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala lie Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr TrpAla Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr Trp
100 105110100 105110
Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser SerGly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser
115120 <210> 202 <211>107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>115120 <210> 202 <211>107 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VL XA4 <400> 202<223> VL XA4 <400> 202
- 90 040749- 90 040749
Glu He Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 1015Glu He Vai Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 1015
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Tyr 20 2530Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Tyr 20 2530
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 4045Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 4045
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 5560Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 7580Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 7580
Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Leu 85 9095Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Leu 85 9095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu He LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu He Lys
100105 <210> 203 <2H> 451 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>100105 <210> 203 <2H> 451 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь XA4 <220>< 223> Heavy chain XA4 <220>
< 221> MOD_RES < 222> (302) . . (302) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 203< 221> MOD_RES < 222> (302) . . (302) <223> Xaa is Asn297 <400> 203
Gin Vai His Leu Vai Glu Ser Gly 1 5Gin Vai His Leu Vai Glu Ser Gly 1 5
Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 10 15Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Vai Ala 20Ser Leu Arg Leu Ser Cys Vai Ala 20
Ser Gly He Thr Phe Arg He Tyr 25 30Ser Gly He Thr Phe Arg He Tyr 25 30
Gly Met His Trp Vai Arg Gin AlaGly Met His Trp Vai Arg Gin Ala
4040
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 45Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 45
Ala Vai Leu Trp Tyr Asp Gly SerAla Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser
5555
His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 60His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 60
Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg 65 70Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg 65 70
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrAsp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
8080
- 91 040749- 91 040749
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala He Tyr Tyr Cys 85 9095Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala He Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr Trp 100 105110Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr Trp 100 105110
Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120125115 120125
Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly ThrSer Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135140130 135140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr
145 150 155160145 150 155160
Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe ProVai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro
165 170175165 170175
Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai ThrAla Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr
180 185190180 185190
Vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn 195 200205Vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn 195 200205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser
210 215220210 215220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235240225 230 235240
Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuGly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250255245 250255
Met He Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser 260 265270Met He Ser Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser 260 265270
His Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai GluHis Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu
275 280285275 280285
Vai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser ThrVai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr
290 295300290 295300
Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu AsnTyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn
305 310 315320305 310 315320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330335325 330335
- 92 040749 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 340 345350- 92 040749 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 340 345350
Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin VaiVai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai
355 360365355 360365
Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala VaiSer Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai
370 375380370 375380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395400385 390 395400
Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410415405 410415
Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai 420 425430Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai 420 425430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu
435 440445435 440445
Ser Pro Gly 450 <210> 204 <2H> 214 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>Ser Pro Gly 450 <210> 204 <2H> 214 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> Легкая цепь XA4 <400> 204<223> Light chain XA4 <400> 204
Glu lie Vai Leu Thr Gin Ser Pro 1 5Glu lie Vai Leu Thr Gin Ser Pro 1 5
Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 10 15Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 20Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 20
Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Tyr 25 30Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Tyr 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys ProLeu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro
4040
Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 45Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 50 55Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr 50 55
Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 60Gly He Pro Ala Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 65 70
Leu Thr He Ser Ser Leu Glu ProLeu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro
8080
Glu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr CysGlu Asp Phe Ala Vai Tyr Tyr Cys
Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro LeuGin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Leu
- 93 040749- 93 040749
90959095
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu He Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105110Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Vai Glu He Lys Arg Thr Vai Ala Ala 100 105110
Pro Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser GlyPro Ser Vai Phe He Phe Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly
115 120125115 120125
Thr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu AlaThr Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135140130 135140
Lys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser GinLys Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin
145 150 155160145 150 155160
Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu SerGlu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170175165 170175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr 180 185190Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr 180 185190
Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser 195 200205Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser 195 200205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 205 <2H> 5 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 205 <2H> 5 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR1 VH XA4 < 400> 205< 223> CDR1 VH XA4 < 400> 205
He Tyr Gly Met HisHe Tyr Gly Met His
5 <210> 206 <2H> 17 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>5 <210> 206 <2H> 17 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR2 VH XA4 < 400> 206< 223> CDR2 VH XA4 < 400> 206
Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp 15 10Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp 15 10
Ser Vai Lys 15Ser Vai Lys 15
Glygly
- 94 040749 <210> 207 <211> 13 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>- 94 040749 <210> 207 <211> 13 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR3 VH ΧΑ4 <400> 207< 223> CDR3 VH ΧΑ4 <400> 207
Asp Gly Asp Туг Туг Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr 15 10 <210> 208 <211> 11 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr 15 10 <210> 208 <211> 11 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR1 VL XA4 <400> 208<223> CDR1 VL XA4 <400> 208
Arg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Tyr Leu AlaArg Ala Ser Gin Ser Vai Ser Ser Tyr Leu Ala
10 <210> 209 <211> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>10 <210> 209 <211> 7 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR2 VL XA4 < 400> 209< 223> CDR2 VL XA4 < 400> 209
Asp Ala Ser Asn Arg Ala ThrAsp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
5 <210> 210 <211> 9 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>5 <210> 210 <211> 9 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR3 VL XA4 < 400> 210< 223> CDR3 VL XA4 < 400> 210
Gin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Leu ThrGin Gin Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
5 <210> 211 <211> 452 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность5 <210> 211 <211> 452 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence
- 95 040749 <220>- 95 040749 <220>
< 223> Тяжелая цепь ΧΑ4 , концевой К <220>< 223> Heavy chain ΧΑ4 , terminal K <220>
< 221> MOD_RES < 222> (302) .. (302) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 211< 221> MOD_RES < 222> (302) .. (302) < 223> Haa is Asn297 < 400> 211
Gin Vai His Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 15 1015Gin Vai His Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Vai Vai Gin Pro Gly Arg 15 1015
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Vai Ala Ser Gly lie Thr Phe Arg lie Tyr 20 2530Ser Leu Arg Leu Ser Cys Vai Ala Ser Gly lie Thr Phe Arg lie Tyr 20 2530
Gly Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 4045Gly Met His Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai 35 4045
Ala Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 5560Ala Vai Leu Trp Tyr Asp Gly Ser His Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Vai 50 5560
Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 7580Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 7580
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala lie Tyr Tyr Cys 85 9095Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala lie Tyr Tyr Cys 85 9095
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr TrpAla Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Ser Gly Ser Pro Leu Asp Tyr Trp
100 105110100 105110
Gly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly ProGly Gin Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120125115 120125
Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135140Ser Vai Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai ThrAla Ala Leu Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr
145 150 155160145 150 155160
Vai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe ProVai Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro
165 170175165 170175
Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr 180 185190Ala Vai Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr 180 185190
Vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Vai AsnVai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Vai Asn
195 200205195 200205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys SerHis Lys Pro Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser
- 96 040749- 96 040749
210 215210 215
220220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys ProCys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
225 230225 230
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu LeuPro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
235 240235 240
Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe 245Gly Gly Pro Ser Vai Phe Leu Phe 245
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuPro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
250 255250 255
Met He Ser Arg Thr Pro Glu Vai 260Met He Ser Arg Thr Pro Glu Vai 260
Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser 265 270Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser 265 270
His Glu Asp Pro Glu Vai Lys PheHis Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe
275 280275 280
Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu 285Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu 285
Vai His Asn Ala Lys Thr Lys ProVai His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
290 295290 295
Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr 300Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr 300
Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr 305 310Tyr Arg Vai Vai Ser Vai Leu Thr 305 310
Vai Leu His Gin Asp Trp Leu AsnVai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn
315 320315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai 325Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Vai 325
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala ProSer Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
330 335330 335
He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala 340He Glu Lys Thr He Ser Lys Ala 340
Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 345 350Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 345 350
Vai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser ArgVai Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
355 360355 360
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai 365Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai 365
Ser Leu Thr Cys Leu Vai Lys GlySer Leu Thr Cys Leu Vai Lys Gly
370 375370 375
Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai 380Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 385 390Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 385 390
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
395 400395 400
Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly SerPro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser
405405
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu ThrPhe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
410 415410 415
Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 420Vai Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 420
Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai 425 430Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn HisMet His Glu Ala Leu His Asn His
435 440435 440
Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 445Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 445
Ser Pro Gly Lys 450 <210> 212Ser Pro Gly Lys 450 <210> 212
- 97 040749 <2H> 119 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>- 97 040749 <2H> 119 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> VH XFT <400> 212< 223> VH XFT <400> 212
Gin Vai Glu Leu Vai Gin Ser Gly Ala Vai Lys Lys Pro Gly Glu SerGin Vai Glu Leu Vai Gin Ser Gly Ala Vai Lys Lys Pro Gly Glu Ser
10151015
Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 20 2530Leu Lys He Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 20 2530
He Gly Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 4045He Gly Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 4045
He He Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 50 5560He He Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 50 5560
Gly Gin Vai Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu 65 70 7580Gly Gin Vai Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu 65 70 7580
Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 9095Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 9095
Arg Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gin Gly 100 105110Arg Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gin Gly 100 105110
Thr Leu Vai Thr Vai Ser SerThr Leu Vai Thr Vai Ser Ser
115 <210> 213 <2H>111 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>115 <210> 213 <2H>111 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VL XFT <400> 213<223> VL XFT <400> 213
Asp He Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Vai Ser Gly Ser Pro Gly GinAsp He Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Vai Ser Gly Ser Pro Gly Gin
10151015
Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp He Gly Gly Tyr 20 2530Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp He Gly Gly Tyr 20 2530
Asn Ser Vai Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 4045Asn Ser Vai Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 4045
Met He Tyr Gly Vai Asn Asn Arg Pro Ser Gly Vai Ser Asn Arg PheMet He Tyr Gly Vai Asn Asn Arg Pro Ser Gly Vai Ser Asn Arg Phe
- 98 040749- 98 040749
55605560
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 7580Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie Ser Gly Leu 65 70 7580
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp lie Glu 85 9095Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp lie Glu 85 9095
Ser Ala Thr Pro Vai Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie LysSer Ala Thr Pro Vai Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys
100 105110 <210> 214 <211> 448 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>100 105110 <210> 214 <211> 448 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь ХЕТ <220><223> XET heavy chain <220>
< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 214< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Haa is Asn297 < 400> 214
Gin Vai Glu Leu Vai Gin Ser Gly 1 5Gin Vai Glu Leu Vai Gin Ser Gly 1 5
Ala Vai Lys Lys Pro Gly Glu Ser 10 15Ala Vai Lys Lys Pro Gly Glu Ser 10 15
Leu Lys Lie Ser Cys Lys Gly Ser 20Leu Lys Lie Ser Cys Lys Gly Ser 20
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 25 30 lie Gly Trp Vai Arg Gin Ala Pro 35 40Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp 25 30 lie Gly Trp Vai Arg Gin Ala Pro 35 40
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 45 lie lie Asp Pro Gly Asp Ser Arg 50 55Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 45 lie lie Asp Pro Gly Asp Ser Arg 50 55
Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 60Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 60
Gly Gin Vai Thr lie Ser Ala Asp 65 70Gly Gin Vai Thr lie Ser Ala Asp 65 70
Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr LeuLys Ser lie Ser Thr Ala Tyr Leu
8080
Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser 85Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser 85
Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys AlaAsp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
9595
Arg Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr 100Arg Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr 100
Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gin Gly 105 110Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gin Gly 105 110
Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser AlaThr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala
115 120115 120
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 125Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerPro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala LeuThr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
- 99 040749- 99 040749
130130
135135
140140
Gly 145Gly 145
CysCys
LeuLeu
VaiVai
LysLys
Asp 150Asp 150
TyrTyr
PhePhe
ProPro
GluGlu
ProPro
155155
VaiVai
ThrThr
VaiVai
Trp 160TRP 160
AsnAsn
Glygly
AlaAla
LeuLeu
165165
ThrThr
Glygly
VaiVai
HisHis
170170
ThrThr
PhePhe
ProPro
AlaAla
VaiVai
175175
LeuLeu
Gingin
Gly 180Gly 180
LeuLeu
TyrTyr
LeuLeu
VaiVai
VaiVai
ThrThr
185185
VaiVai
190190
ProPro
LeuLeu
195195
Glygly
ThrThr
Gingin
ThrThr
Tyr 200Tyr 200
CysCys
AsnAsn
VaiVai
AsnAsn
205205
HisHis
LysLys
ProPro
AsnAsn
210210
ThrThr
LysLys
VaiVai
Aspasp
Lys 215Lys 215
LysLys
VaiVai
GluGlu
ProPro
Lys 220Lys 220
CysCys
Aspasp
LysLys
ThrThr
225225
HisHis
ThrThr
CysCys
ProPro
ProPro
230230
CysCys
ProPro
AlaAla
ProPro
GluGlu
235235
LeuLeu
LeuLeu
Glygly
Glygly
ProPro
240240
VaiVai
PhePhe
LeuLeu
PhePhe
245245
ProPro
ProPro
LysLys
ProPro
LysLys
250250
Aspasp
ThrThr
LeuLeu
MetMet
255255
ArgArg
ThrThr
ProPro
GluGlu
260260
VaiVai
ThrThr
CysCys
VaiVai
VaiVai
265265
VaiVai
Aspasp
VaiVai
HisHis
270270
GluGlu
Aspasp
ProPro
GluGlu
VaiVai
275275
LysLys
PhePhe
AsnAsn
Trptrp
Tyr 280Tyr 280
VaiVai
Aspasp
Glygly
VaiVai
GluGlu
285285
VaiVai
HisHis
AsnAsn
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 290 295Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 290 295
Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 300Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 300
Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu HisVai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His
305 310305 310
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GluGin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
315 320315 320
Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys 325Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys 325
Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu LysAla Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys
330 335330 335
Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 340Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin 340
Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr ThrPro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr
345 350345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu MetLeu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
355 360355 360
Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr 365Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr 365
Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr ProCys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375370 375
Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp Glu 380Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp Glu 380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn AsnSer Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai LeuTyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu
- 100 040749- 100 040749
- 101 040749- 101 040749
Gly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser ThrGly Asn Ser Gin Glu Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170175165 170175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu LysTyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185190180 185190
His Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser ProHis Lys Vai Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro
195 200205195 200205
Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu CysVai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210215 <210> 216 <2H>10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>210215 <210> 216 <2H>10 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR1 VH XFT <400> 216<223> CDR1 VH XFT <400> 216
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp He GlyGly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp He Gly
10 <210> 217 <2H> 20 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>10 <210> 217 <2H> 20 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR2 VH XFT <400> 217<223> CDR2 VH XFT <400> 217
Trp Met Gly He He Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser ProTrp Met Gly He He Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro
10 1510 15
Ser Phe Gin Gly 20 <210> 218 <2H> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>Ser Phe Gin Gly 20 <210> 218 <2H> 11 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR3 VH XFT <400> 218<223> CDR3 VH XFT <400> 218
Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp GlyGly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly
10 <210> 21910 <210> 219
- 102 040749 <211> 14 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>- 102 040749 <211> 14 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR1 VL XFT <400> 219<223> CDR1 VL XFT <400> 219
Thr Gly Thr Ser Ser Asp lie Gly Gly Tyr Asn Ser Vai Ser 15 10 <210> 220 <211> 11 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>Thr Gly Thr Ser Ser Asp lie Gly Gly Tyr Asn Ser Vai Ser 15 10 <210> 220 <211> 11 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR2 VL XFT <400> 220<223> CDR2 VL XFT <400> 220
Leu Met lie Tyr Gly Vai Asn Asn Arg Pro SerLeu Met lie Tyr Gly Vai Asn Asn Arg Pro Ser
10 <210> 221 <211> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>10 <210> 221 <211> 10 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR3 VL XFT <400> 221<223> CDR3 VL XFT <400> 221
Ser Ser Tyr Asp lie Glu Ser Ala Thr Pro 15 10 <210> 222 <211> 449 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Ser Ser Tyr Asp lie Glu Ser Ala Thr Pro 15 10 <210> 222 <211> 449 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь XFT, концевой К <220><223> XFT heavy chain terminal K <220>
< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Хаа представляет собой Asn297< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Haa is Asn297
- 103 040749- 103 040749
He Gly Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 4045He Gly Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly 35 4045
He He Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 50 5560He He Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 50 5560
Gly Gin Vai Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu 65 70 7580Gly Gin Vai Thr He Ser Ala Asp Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr Leu 65 70 7580
Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 9095Gin Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala 85 9095
Arg Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gin GlyArg Gly Gin Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gin Gly
100 105110100 105110
Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai PheThr Leu Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe
115 120125115 120125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala LeuPro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135140130 135140
Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser TrpGly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp
145 150 155160145 150 155160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai LeuAsn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu
165 170175165 170175
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro SerGin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser
180 185190180 185190
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys ProSer Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro
195 200205195 200205
Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp LysSer Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215220210 215220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly ProThr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235240225 230 235240
Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He SerSer Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser
245 250255245 250255
Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu AspArg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp
260 265270260 265270
Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His AsnPro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn
275 280285275 280285
- 104 040749- 104 040749
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 290 295300Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 290 295300
Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GluVai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315320305 310 315320
Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu LysTyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys
325 330335325 330335
Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr ThrThr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr
340 345350340 345350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu ThrLeu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr
355 360365355 360365
Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp Glu 370 375380Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp Glu 370 375380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai LeuSer Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu
385 390 395400385 390 395400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp LysAsp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys
405 410415405 410415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyAla Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440445435 440445
Lys <210> 223 <2H>119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>Lys <210> 223 <2H>119 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VH X09 <400> 223<223> VH X09 <400> 223
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly AlaGin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
10 1510 15
Ser Vai Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30Ser Vai Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 25 30
Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp HeThr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He
- 105 040749- 105 040749
Gly Leu 50Gly Leu 50
Arg Gly 65Arg Gly 65
Met AspMet Asp
Ala ArgAla Arg
He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn 5560He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn 5560
Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser 7075Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser 7075
Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai 8590Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai 8590
Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp 100105Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp 100105
Gin Lys PheGin Lys Phe
Thr Ala Tyr 80Thr Ala Tyr 80
Tyr Phe Cys 95Tyr Phe Cys 95
Gly Ser Gly 110Gly Ser Gly 110
Thr Pro Vai Thr Vai Ser SerThr Pro Vai Thr Vai Ser Ser
115 <210> 224 <2H> 106 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>115 <210> 224 <2H> 106 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> VL X09 < 400> 224< 223> VL X09 < 400> 224
Asp He Glu Leu Thr Gin Ser Pro 1 5Asp He Glu Leu Thr Gin Ser Pro 1 5
Ala He Met Ser Ala Ser Pro Gly 10 15Ala He Met Ser Ala Ser Pro Gly 10 15
Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser 20Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser 20
Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 25 30Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly 35 40His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly 35 40
Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 45Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly 50 55Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly 50 55
Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 60Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu 65 70Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu 65 70
Thr He Ser Ser Vai Glu Ala GluThr He Ser Ser Vai Glu Ala Glu
8080
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 85Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 85
Gin Trp Ser Lys His Pro Leu ThrGin Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
9595
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Vai Glu 100Phe Gly Ser Gly Thr Lys Vai Glu 100
He Lys 105 <210> 225 <2H> 448 <212> БЕЛОКHe Lys 105 <210> 225 <2H> 448 <212> PROTEIN
- 106 040749 <213> Искусственная последовательность <220>- 106 040749 <213> Artificial sequence <220>
<223> Тяжелая цепь Х09 <220><223> Heavy Chain X09 <220>
< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 225< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Haa is Asn297 < 400> 225
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5
Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala 10 15Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala 10 15
Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala 20Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala 20
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 25 30Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 25 30
Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin SerThr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser
4040
His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 45His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 45
Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly 50 55Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly 50 55
Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 60Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 75 80Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 75 80
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser 85Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser 85
Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys 90 95Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly ArgAla Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg
100100
Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser GlyGly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly
105 110105 110
Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser AlaThr Pro Vai Thr Vai Ser Ser Ala
115 120115 120
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 125Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerPro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135130 135
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 140Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 140
Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe 145 150Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe 145 150
Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser TrpPro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp
155 160155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165
Vai His Thr Phe Pro Ala Vai LeuVai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu
170 175170 175
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu 180
Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro SerSer Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser
185 190185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr TyrSer Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr
195 200195 200
He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 205He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 205
- 107 040749- 107 040749
Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp LysSer Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly ProThr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240225 230 235 240
Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys 245Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys 245
Pro Lys Asp Thr Leu Met He SerPro Lys Asp Thr Leu Met He Ser
250 255250 255
Arg Thr Pro GluArg Thr ProGlu
260260
Vai ThrVai Thr
Cys Vai Vai Vai Asp VaiCys Vai Vai Vai Asp Vai
265265
Ser His Glu AspSer His Glu Asp
270270
Pro Glu Vai LysPro Glu Vai Lys
275275
Phe AsnPhe Asn
Trp Tyr Vai Asp Gly VaiTrp Tyr Vai Asp Gly Vai
280280
Glu Vai His Asn 285Glu Vai His Asn 285
Ala Lys Thr Lys 290Ala Lys Thr Lys 290
Pro ArgPro Arg
Glu Glu Gin Tyr Xaa SerGlu Glu Gin Tyr Xaa Ser
295 300295 300
Thr Tyr Arg VaiThr Tyr Arg Vai
Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu HisVai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His
305 310305 310
Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GluGin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
315 320315 320
Tyr LysTyr Lys
Cys Lys Vai 325Cys Lys Vai 325
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu LysSer Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys
330 335330 335
Thr HeThr He
Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr ThrSer Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr
340 345 350340 345 350
Leu ProLeu Pro
Cys LeuCys Leu
370370
Ser AsnSer Asn
385385
Asp SerAsp Ser
Pro 355Pro 355
VaiVai
Glygly
Aspasp
Ser Arg Asp Glu LeuSer Arg Asp Glu Leu
360360
Lys Gly Phe Tyr Pro 375Lys Gly Phe Tyr Pro 375
Gin Pro Glu Asn AsnGin Pro Glu Asn Asn
390390
Gly Ser Phe Phe Leu 405Gly Ser Phe Phe Leu 405
Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr 365Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr 365
Ser Asp He Ala Vai Glu Trp Glu 380Ser Asp He Ala Vai Glu Trp Glu 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai LeuTyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu
395 400395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp LysTyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys
410 415410 415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai 420Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai 420
Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 425 430Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro GlyAla Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445 <210> 226 <2H> 213 <212> БЕЛОК435 440 445 <210> 226 <2H> 213 <212> PROTEIN
- 108 040749 <213> Искусственная последовательность <220>- 108 040749 <213> Artificial sequence <220>
<223> Легкая цепь Х09 <400> 226<223> Light chain X09 <400> 226
Asp lie Glu Leu Thr Gin Ser Pro 1 5Asp lie Glu Leu Thr Gin Ser Pro 1 5
Ala He Met Ser Ala Ser Pro GlyAla He Met Ser Ala Ser Pro Gly
1515
Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser 20Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser 20
Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 25 30Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 25 30
His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly 35 40His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly 35 40
Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 45Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly 50 55Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly 50 55
Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 60Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu 65 70Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu 65 70
Thr He Ser Ser Vai Glu Ala GluThr He Ser Ser Vai Glu Ala Glu
8080
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 85Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin 85
Gin Trp Ser Lys His Pro Leu Thr 90 95Gin Trp Ser Lys His Pro Leu Thr 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Vai Glu 100Phe Gly Ser Gly Thr Lys Vai Glu 100
He Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro 105 110He Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro 105 110
Ser Vai Phe He Phe Pro Pro SerSer Vai Phe He Phe Pro Pro Ser
115 120115 120
Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 125Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 125
Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu AsnAla Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn
130 135130 135
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 140Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 140
Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala 145 150Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala 145 150
Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin GluLeu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu
155 160155 160
Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys 165Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys 165
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser SerAsp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
170 175170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180
Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala 185 190Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala 185 190
Cys Glu Vai Thr His Gin Gly LeuCys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu
195 200195 200
Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe 205Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 227Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 227
- 109 040749 <211> 5 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>- 109 040749 <211> 5 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR1 VH X09 < 400> 227< 223> CDR1 VH X09 < 400> 227
Gly Tyr Ser Phe ThrGly Tyr Ser Phe Thr
5 <210> 228 <211> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>5 <210> 228 <211> 17 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR2 VH X09 <400> 228<223> CDR2 VH X09 <400> 228
Leu lie Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe ArgLeu lie Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Arg
10 1510 15
Glygly
Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp TyrGly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr
Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met HisSer Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met His
- 110 040749 <220>- 110 040749 <220>
<223> CDR2 VL Χ09 <400> 231<223> CDR2 VL Χ09 <400> 231
Asp Thr Ser Lys Leu Ala SerAsp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
5 <210> 232 <2H> 9 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>5 <210> 232 <2H> 9 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR3 VL X09 < 400> 232< 223> CDR3 VL X09 < 400> 232
Gin Gin Trp Ser Lys His Pro Leu ThrGin Gin Trp Ser Lys His Pro Leu Thr
5 <210> 233 <2H> 449 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>5 <210> 233 <2H> 449 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь X09, концевой К <220><223> Heavy chain X09, terminal K <220>
< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 233< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Haa is Asn297 < 400> 233
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5
Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala 10 15Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala 10 15
Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala 20Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala 20
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 25 30Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 25 30
Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin SerThr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser
4040
His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 45His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 45
Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn GlyGly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly
5555
Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 60Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala TyrAsp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
8080
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser 85Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser 85
Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe CysGlu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys
9595
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly ArgAla Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg
Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser GlyGly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly
- 111 040749- 111 040749
100100
105105
НОBUT
Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 115 120125Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 115 120125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala LeuPro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135140130 135140
Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser TrpGly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp
145 150 155160145 150 155160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai LeuAsn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu
165 170175165 170175
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser 180 185190Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser 180 185190
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 195 200205Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 195 200205
Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp LysSer Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215220210 215220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly ProThr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235240225 230 235240
Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He SerSer Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser
245 250255245 250255
Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp 260 265270Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp 260 265270
Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His AsnPro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn
275 280285275 280285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg VaiAla Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai
290 295300290 295300
Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GluVai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315320305 310 315320
Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu LysTyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys
325 330335325 330335
Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr ThrThr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr
340 345350340 345350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu ThrLeu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr
- 112 040749- 112 040749
355 360365355 360365
Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp GluCys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Vai Glu Trp Glu
370 375380370 375380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai LeuSer Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu
385 390 395400385 390 395400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp LysAsp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys
405 410415405 410415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445
Lys <210> 234 <2H>119 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>Lys <210> 234 <2H>119 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VH X09.2 <400> 234<223> VH X09.2 <400> 234
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly AlaGin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
10151015
Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 2530Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 20 2530
Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 4045Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 4045
Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys 85 9095Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys 85 9095
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105110Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105110
- 113 040749- 113 040749
Thr Thr Vai Thr Vai Ser SerThr Thr Vai Thr Vai Ser Ser
115 <210> 235 <2H> 106 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>115 <210> 235 <2H> 106 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> VL X09.2 <400>235<223> VL X09.2 <400>235
Asp He Glu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Met Ser Ala Ser Pro GlyAsp He Glu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Met Ser Ala Ser Pro Gly
10151015
Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 20 2530Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 20 2530
His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 35 4045His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp He Tyr 35 4045
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 50 5560Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 50 5560
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr He Ser Ser Vai Glu Ala Glu 65 70 7580Gly Ser Gly Asn Ser Tyr Ser Leu Thr He Ser Ser Vai Glu Ala Glu 65 70 7580
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 85 9095Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 85 9095
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100105 <210> 236 <2H>448 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100105 <210> 236 <2H>448 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь X09.2 <220><223> Heavy chain X09.2 <220>
< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Хаа представляет собой Asn297 <400> 236<221> MOD_RES <222> (299)..(299) <223> Haa is Asn297 <400> 236
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly AlaGin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
10 1510 15
Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly TyrSer Vai Lys He Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
- 114 040749- 114 040749
25302530
Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 4045Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 35 4045
Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 50 5560
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 7580
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys 85 9095Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys 85 9095
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly 100 105110Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly 100 105110
Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 115 120125Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe 115 120125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala LeuPro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135140130 135140
Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser TrpGly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp
145 150 155160145 150 155160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai LeuAsn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Vai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu
165 170175165 170175
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser 180 185190Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser 180 185190
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 195 200205Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 195 200205
Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp LysSer Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215220210 215220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly ProThr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235240225 230 235240
Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He SerSer Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser
245 250255245 250255
Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp 260 265270Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp 260 265270
Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His AsnPro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn
- 115 040749- 115 040749
275 280285275 280285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 290 295300Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 290 295300
Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GluVai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315320305 310 315320
Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu LysTyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys
325 330335325 330335
Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr 340 345350Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr 340 345350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu ThrLeu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr
355 360365355 360365
Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp GluCys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp Glu
370 375380370 375380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai LeuSer Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu
385 390 395400385 390 395400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp LysAsp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys
405 410415405 410415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445 <210> 237 <2H> 213 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440445 <210> 237 <2H> 213 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> Легкая цепь X09.2 <400> 237<223> Light chain X09.2 <400> 237
Asp He Glu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Met Ser Ala Ser Pro GlyAsp He Glu Leu Thr Gin Ser Pro Ala He Met Ser Ala Ser Pro Gly
10151015
Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 20 2530Glu Lys Vai Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met 20 2530
His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp lie Tyr 35 4045His Trp Tyr Gin Gin Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp lie Tyr 35 4045
- 116 040749- 116 040749
Asp Thr Ser Lys 50Asp Thr Ser Lys 50
Leu AlaLeu Ala
Ser Gly Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 55 60Ser Gly Vai Pro Gly Arg Phe Ser Gly Ser 55 60
Gly Ser Gly Asn Ser Tyr 65 70Gly Ser Gly Asn Ser Tyr 65 70
Ser Leu Thr He Ser Ser Vai Glu Ala GluSer Leu Thr He Ser Ser Vai Glu Ala Glu
8080
Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser Lys His Pro Leu Thr 85 90 95Asp Asp Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Trp Ser Lys His Pro Leu Thr 85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Vai Glu He Lys Arg Thr Vai Ala Ala ProPhe Gly Ser Gly Thr Lys Vai Glu He Lys Arg Thr Vai Ala Ala Pro
100 105 110100 105 110
Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125Ser Vai Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125
Ala Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala LysAla Ser Vai Vai Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140130 135 140
Vai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin GluVai Gin Trp Lys Vai Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu
145 150 155 160145 150 155 160
Ser Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser SerSer Vai Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala 180 185 190Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Vai Tyr Ala 180 185 190
Cys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser PheCys Glu Vai Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe
195 200 205195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 238 < 2H> 5 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 238 < 2H> 5 < 212> PROTEIN < 213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR1 VH X09.2 < 400> 238< 223> CDR1 VH X09.2 < 400> 238
Gly Tyr Thr Met AsnGly Tyr Thr Met Asn
5 <210> 239 <2H> 17 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность5 <210> 239 <2H> 17 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence
- 117 040749 <220>- 117 040749 <220>
<223> CDR2 VH Χ09.2 <400> 239<223> CDR2 VH Χ09.2 <400> 239
Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe ArgLeu He Thr Pro Tyr Asn Gly Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe Arg
10 1510 15
Glygly
<210> 241 <2H> 10 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220><210> 241 <2H> 10 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
<223> CDR1 VL X09.2 <400> 241<223> CDR1 VL X09.2 <400> 241
Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met His 15 10 <210> 242 <2H> 7 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Ser Ala Ser Ser Ser Vai Ser Tyr Met His 15 10 <210> 242 <2H> 7 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR2 VL X09.2 <400> 242< 223> CDR2 VL X09.2 <400> 242
Asp Thr Ser Lys Leu Ala SerAsp Thr Ser Lys Leu Ala Ser
5 <210> 243 <2H> 9 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>5 <210> 243 <2H> 9 <212> PROTEIN <213> Artificial sequence <220>
< 223> CDR3 VL X09.2 <400> 243< 223> CDR3 VL X09.2 <400> 243
- 118 040749- 118 040749
Gin Gin Trp Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 244 <2H> 449 < 212> БЕЛОК < 213> Искусственная последовательность <220>Gin Gin Trp Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 244 <2H> 449 < 212> PROTEIN < 213> Artificial sequence <220>
< 223> Тяжелая цепь X09.2, концевой К <220><223> Heavy chain X09.2 terminal K <220>
< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Хаа представляет собой Asn297 < 400> 244< 221> MOD_RES < 222> (299)..(299) < 223> Haa is Asn297 < 400> 244
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly 1 5
Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly AlaPro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1515
Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala 20Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala 20
Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 25 30Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 25 30
Thr Met Asn Trp Vai Lys Gin SerThr Met Asn Trp Vai Lys Gin Ser
4040
His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 45His Gly Lys Ser Leu Glu Trp He 45
Gly Leu He Thr Pro Tyr Asn GlyGly Leu He Thr Pro Tyr Asn Gly
5555
Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 60Ala Ser Ser Tyr Asn Gin Lys Phe 60
Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Vai 65 70
Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala TyrAsp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
8080
Met Asp Leu Leu Ser Leu Thr SerMet Asp Leu Leu Ser Leu Thr Ser
Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe CysGlu Asp Ser Ala Vai Tyr Phe Cys
9595
Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg 100Ala Arg Gly Gly Tyr Asp Gly Arg 100
Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly 105 110Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Ser Gly 105 110
Thr Pro Vai Thr Vai Ser Ser AlaThr Pro Vai Thr Vai Ser Ser Ala
115 120115 120
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Vai PheSer Thr Lys Gly Pro Ser Vai Phe
125125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerPro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135130 135
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 140Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 140
Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe 145 150Gly Cys Leu Vai Lys Asp Tyr Phe 145 150
Pro Glu Pro Vai Thr Vai Ser TrpPro Glu Pro Vai Thr Vai Ser Trp
155 160155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly 165
Vai His Thr Phe Pro Ala Vai LeuVai His Thr Phe Pro Ala Vai Leu
170 175170 175
- 119 040749- 119 040749
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser 180 185190Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Vai Vai Thr Vai Pro Ser 180 185190
Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 195 200205Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn His Lys Pro 195 200205
Ser Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp LysSer Asn Thr Lys Vai Asp Lys Lys Vai Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215220210 215220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly ProThr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235240225 230 235240
Ser Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He SerSer Vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser
245 250255245 250255
Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp 260 265270Arg Thr Pro Glu Vai Thr Cys Vai Vai Vai Asp Vai Ser His Glu Asp 260 265270
Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His AsnPro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu Vai His Asn
275 280285275 280285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 290 295300Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Xaa Ser Thr Tyr Arg Vai 290 295300
Vai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GluVai Ser Vai Leu Thr Vai Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315320305 310 315320
Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu LysTyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro He Glu Lys
325 330335325 330335
Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr 340 345350Thr He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Vai Tyr Thr 340 345350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr 355 360365Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Vai Ser Leu Thr 355 360365
Cys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp GluCys Leu Vai Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Vai Glu Trp Glu
370 375380370 375380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai LeuSer Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Vai Leu
385 390 395400385 390 395400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp LysAsp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Vai Asp Lys
405 410415405 410415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Vai Phe Ser Cys Ser Vai Met His Glu 420 425430
- 120 040749- 120 040749
Ala Leu His Asn His Tyr Thr GinAla Leu His Asn His Tyr Thr Gin
435 440435 440
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 445Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 445
Lys <210> 245 <2H> 630 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 245Lys <210> 245 <2H> 630 <212> PROTEIN <213> Homo sapiens <400> 245
Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg ProMet Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro
55
Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro 10 15Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro 10 15
Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu 20Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu 20
Leu Phe Ser Leu Gly Trp Vai Gin 25 30Leu Phe Ser Leu Gly Trp Vai Gin 25 30
Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly GluPro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu
4040
Thr Gly Gin Glu Ala Ala Pro Leu 45Thr Gly Gin Glu Ala Ala Pro Leu 45
Asp Gly Vai Leu Ala Asn Pro ProAsp Gly Vai Leu Ala Asn Pro Pro
5555
Asn He Ser Ser Leu Ser Pro Arg 60Asn He Ser Ser Leu Ser Pro Arg 60
Gin Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala 65 70Gin Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala 65 70
Glu Vai Ser Gly Leu Ser Thr GluGlu Vai Ser Gly Leu Ser Thr Glu
8080
Arg Vai Arg Glu Leu Ala Vai Ala 85Arg Vai Arg Glu Leu Ala Vai Ala 85
Leu Ala Gin Lys Asn Vai Lys LeuLeu Ala Gin Lys Asn Vai Lys Leu
9595
Ser Thr Glu Gin Leu Arg Cys Leu 100Ser Thr Glu Gin Leu Arg Cys Leu 100
Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro 105 110Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro 105 110
Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro LeuGlu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu
115 120115 120
Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro 125Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro 125
Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gin AlaAsp Ala Phe Ser Gly Pro Gin Ala
130 135130 135
Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg He 140Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg He 140
Thr Lys Ala Asn Vai Asp Leu Leu 145 150Thr Lys Ala Asn Vai Asp Leu Leu 145 150
Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg GinPro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gin
155 160155 160
Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala 165Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala 165
Cys Trp Gly Vai Arg Gly Ser LeuCys Trp Gly Vai Arg Gly Ser Leu
170 175170 175
Leu Ser Glu Ala Asp Vai Arg Ala 180Leu Ser Glu Ala Asp Vai Arg Ala 180
Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu 185 190Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu 185 190
- 121 040749- 121 040749
Pro Gly Arg Phe Vai Ala Glu Ser Ala Glu Vai Leu Leu Pro Arg LeuPro Gly Arg Phe Vai Ala Glu Ser Ala Glu Vai Leu Leu Pro Arg Leu
195 200205195 200205
Vai Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gin Asp Gin Gin Glu Ala Ala ArgVai Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gin Asp Gin Gin Glu Ala Ala Arg
210 215220210 215220
Ala Ala Leu Gin Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr TrpAla Ala Leu Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp
225 230 235240225 230 235240
Ser Vai Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Vai Leu GlySer Vai Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Vai Leu Gly
245 250255245 250255
Gin Pro lie lie Arg Ser lie Pro Gin Gly lie Vai Ala Ala Trp Arg 260 265270Gin Pro lie lie Arg Ser lie Pro Gin Gly lie Vai Ala Ala Trp Arg 260 265270
Gin Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gin Pro Glu Arg Thr lieGin Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gin Pro Glu Arg Thr lie
275 280285275 280285
Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Vai Glu Lys Thr Ala Cys Pro SerLeu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Vai Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser
290 295300290 295300
Gly Lys Lys Ala Arg Glu lie Asp Glu Ser Leu lie Phe Tyr Lys LysGly Lys Lys Ala Arg Glu lie Asp Glu Ser Leu lie Phe Tyr Lys Lys
305 310 315320305 310 315320
Trp Glu Leu Glu Ala Cys Vai Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gin MetTrp Glu Leu Glu Ala Cys Vai Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gin Met
325 330335325 330335
Asp Arg Vai Asn Ala lie Pro Phe Thr Tyr Glu Gin Leu Asp Vai Leu 340 345350Asp Arg Vai Asn Ala lie Pro Phe Thr Tyr Glu Gin Leu Asp Vai Leu 340 345350
Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gin Gly Tyr Pro Glu Ser VaiLys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gin Gly Tyr Pro Glu Ser Vai
355 360365 lie Gin His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp lie 370 375380355 360365 lie Gin His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp lie 370 375380
Arg Lys Trp Asn Vai Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu GluArg Lys Trp Asn Vai Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu
385 390 395400385 390 395400
Vai Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gin Ala Pro Arg Arg Pro LeuVai Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gin Ala Pro Arg Arg Pro Leu
405 410415405 410415
Pro Gin Vai Ala Thr Leu lie Asp Arg Phe Vai Lys Gly Arg Gly GinPro Gin Vai Ala Thr Leu lie Asp Arg Phe Vai Lys Gly Arg Gly Gin
420 425430420 425430
Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr 435 440445Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr 435 440445
- 122 040749- 122 040749
Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Vai Pro Pro Ser Ser 450 455460Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Vai Pro Pro Ser Ser 450 455460
He Trp Ala Vai Arg Pro Gin Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg GinHe Trp Ala Vai Arg Pro Gin Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gin
465 470 475480465 470 475480
Leu Asp Vai Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gin Asn Met AsnLeu Asp Vai Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gin Asn Met Asn
485 490495485 490495
Gly Ser Glu Tyr Phe Vai Lys He Gin Ser Phe Leu Gly Gly Ala ProGly Ser Glu Tyr Phe Vai Lys He Gin Ser Phe Leu Gly Gly Ala Pro
500 505510500 505510
Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gin Gin Asn Vai Ser Met Asp Leu 515 520525Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gin Gin Asn Vai Ser Met Asp Leu 515 520525
Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Vai Leu Pro Leu Thr Vai 530 535540Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Vai Leu Pro Leu Thr Vai 530 535540
Ala Glu Vai Gin Lys Leu Leu Gly Pro His Vai Glu Gly Leu Lys AlaAla Glu Vai Gin Lys Leu Leu Gly Pro His Vai Glu Gly Leu Lys Ala
545 550 555560545 550 555560
Glu Glu Arg His Arg Pro Vai Arg Asp Trp He Leu Arg Gin Arg GinGlu Glu Arg His Arg Pro Vai Arg Asp Trp He Leu Arg Gin Arg Gin
565 570575565 570575
Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gin Gly Gly He Pro AsnAsp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gin Gly Gly He Pro Asn
580 585590580 585590
Gly Tyr Leu Vai Leu Asp Leu Ser Met Gin Glu Ala Leu Ser Gly Thr 595 600605Gly Tyr Leu Vai Leu Asp Leu Ser Met Gin Glu Ala Leu Ser Gly Thr 595 600605
Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Vai Leu Thr Vai Leu Ala Leu LeuPro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Vai Leu Thr Vai Leu Ala Leu Leu
610 615620610 615620
Leu Ala Ser Thr Leu AlaLeu Ala Ser Thr Leu Ala
625630 <210> 246 <2H>622 <212> БЕЛОК <213> Homo sapiens <400> 246625630 <210> 246 <2H>622 <212> PROTEIN <213> Homo sapiens <400> 246
Met Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr ProMet Ala Leu Pro Thr Ala Arg Pro Leu Leu Gly Ser Cys Gly Thr Pro
10 1510 15
Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Vai Gin 20 25 30Ala Leu Gly Ser Leu Leu Phe Leu Leu Phe Ser Leu Gly Trp Vai Gin 20 25 30
Pro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gin Glu Ala Ala Pro LeuPro Ser Arg Thr Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gin Glu Ala Ala Pro Leu
- 123 040749- 123 040749
40454045
Asp Gly Vai Leu Ala Asn Pro Pro Asn He Ser Ser Leu Ser Pro Arg 50 5560Asp Gly Vai Leu Ala Asn Pro Asn He Ser Ser Leu Ser Pro Arg 50 5560
Gin Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Vai Ser Gly Leu Ser Thr Glu 65 70 7580Gin Leu Leu Gly Phe Pro Cys Ala Glu Vai Ser Gly Leu Ser Thr Glu 65 70 7580
Arg Vai Arg Glu Leu Ala Vai Ala Leu Ala Gin Lys Asn Vai Lys Leu 85 9095Arg Vai Arg Glu Leu Ala Vai Ala Leu Ala Gin Lys Asn Vai Lys Leu 85 9095
Ser Thr Glu Gin Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro 100 105110Ser Thr Glu Gin Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro Pro 100 105110
Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn ProGlu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn Pro
115 120125115 120125
Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gin Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg He 130 135140Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gin Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg He 130 135140
Thr Lys Ala Asn Vai Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg GinThr Lys Ala Asn Vai Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg Gin
145 150 155160145 150 155160
Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Vai Arg Gly Ser LeuArg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Vai Arg Gly Ser Leu
165 170175165 170175
Leu Ser Glu Ala Asp Vai Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu 180 185190Leu Ser Glu Ala Asp Vai Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp Leu 180 185190
Pro Gly Arg Phe Vai Ala Glu Ser Ala Glu Vai Leu Leu Pro Arg LeuPro Gly Arg Phe Vai Ala Glu Ser Ala Glu Vai Leu Leu Pro Arg Leu
195 200205195 200205
Vai Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gin Asp Gin Gin Glu Ala Ala ArgVai Ser Cys Pro Gly Pro Leu Asp Gin Asp Gin Gin Glu Ala Ala Arg
210 215220210 215220
Ala Ala Leu Gin Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr TrpAla Ala Leu Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr Trp
225 230 235240225 230 235240
Ser Vai Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Vai Leu GlySer Vai Ser Thr Met Asp Ala Leu Arg Gly Leu Leu Pro Vai Leu Gly
245 250255245 250255
Gin Pro lie lie Arg Ser lie Pro Gin Gly lie Vai Ala Ala Trp ArgGin Pro lie lie Arg Ser lie Pro Gly lie Vai Ala Ala Trp Arg
260 265270260 265270
Gin Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gin Pro Glu Arg Thr HeGin Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gin Pro Glu Arg Thr He
275 280285275 280285
Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Vai Glu Lys Thr Ala Cys Pro SerLeu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Glu Vai Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser
- 124 040749- 124 040749
290 295 300290 295 300
- 125 -- 125 -
Claims (25)
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1702031.4 | 2017-02-08 | ||
GB1719398.8 | 2017-11-22 | ||
GB1719393.9 | 2017-11-22 | ||
GB1719391.3 | 2017-11-22 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA040749B1 true EA040749B1 (en) | 2022-07-22 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6704532B1 (en) | Pyrrolobenzodiazepine antibody complex | |
JP6671555B2 (en) | Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugate | |
JP6878287B2 (en) | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugate | |
EP3612234B1 (en) | Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate | |
EA040749B1 (en) | PYRROLOBENZODIAZEPINE-ANTIBODY CONJUGATES | |
EA039826B1 (en) | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates | |
JP7260677B2 (en) | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |