EA040387B1 - Конструкции антитела к flt3 и cd3 - Google Patents

Description

Настоящее изобретение относится к конструкции биспецифического антитела, содержащей первый связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложены полинуклеотид, кодирующий указанную конструкцию антитела, вектор, содержащий указанный полинуклеотид, и клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная указанным полинуклеотидом или вектором. Кроме того, согласно настоящему изобретению предложены способ получения указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению, медицинское применение указанной конструкции антитела и набор, содержащий указанную конструкцию антитела.

Область техники

Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) представляет собой гетерогенное злокачественное гематологическое заболевание, которое является наиболее распространенным типом острого лейкоза, диагностируемым у взрослых. ОМЛ представляет приблизительно треть всех лейкозов с зарегистрированными в 2013 г. только в Соединенных Штатах ориентировочно 14 500 новых случаями и отличается неудовлетворительными общими уровнями выживаемости. На протяжении последних тридцати лет наблюдались незначительные улучшения стандарта лечения пациентов с ОМЛ. Однако недавние открытия в области молекулярной и клеточной биологии радикально преобразили наше понимание гематопоэза у человека как в норме, так и при заболеваниях. Был идентифицирован ряд играющих ключевые роли элементов, вовлеченных в патогенез заболевания, которые могут быть исследованы в качестве потенциально актуальных мишеней. Одним из таких активирующих запускающих генов, как правило, мутированным приблизительно в 30% случаев ОМЛ, является FLT3.

Fms-подобная тирозинкиназа 3 (FLT3), также известная как киназа печени плода 2 (FLK-2), киназа стволовых клеток человека 1 (SCK-1) или антиген кластера дифференцировки (CD135) представляет собой гематопоэтическую рецепторную тирозинкиназу, которая была клонирована двумя независимыми группами в 1990-х гг. Ген FLT3, расположенный у человека на хромосоме 13q12, кодирует белок рецепторной тирозинкиназы класса III, гомологичный другим представителям семейства класса III, в том числе рецептору фактора стволовых клеток (с-KIT), рецептору макрофагального колониестимулирующего фактора (FMS) и рецептору тромбоцитарного фактора роста (рТРФ).

При связывании с лигандом FLT3 рецептор FLT3 подвергается гомодимеризации, таким образом обеспечивая аутофосфорилирование специфических остатков тирозина в околомембранном домене и нисходящую активацию через пути PI3K/Akt, MAPK и STAT5. FLT3, соответственно, играет критически важную роль в контроле пролиферации, выживания и дифференцировки нормальных гематопоэтических клеток.

FLT3 человека экспрессируется в CD34+CD38-гематопоэтических стволовых клетках (HSC), а также в подгруппе дендритных клеток-предшественников. Экспрессия FLT3 может также детектироваться в мультипотентных клетках-предшественниках, таких как CD34+CD38+CD45RA-CD123^low общий миелоидный предшественник (CMP), CD34+CD38+CD45RA+CD123^low предшественники гранулоцитов и моноцитов (GMP) и CD34+CD38+CD10+CD19- общие лимфоидные клетки-предшественники (CLP). Интересно, что экспрессия FLT3 практически отсутствует в CD34+CD38-CD45RA-CD123-клеткахпредшественниках мегакариоцитов и эритроцитов (МЕР). Экспрессия FLT3, соответственно, в основном ограничена ранними миелоидными и лимфоидными клетками-предшественниками, и некоторая экспрессия наблюдается в линиях более зрелых моноцитарных клеток. Указанный ограниченный паттерн экспрессии FLT3 резко контрастирует с паттерном экспрессии лиганда FLT3, который экспрессируется в большинстве гематопоэтических тканей и предстательной железе, почках, легких, толстой кишке и сердце. Благодаря указанным варьирующим паттернам экспрессии экспрессия FLT3 представляет собой определяющий скорость этап при определении тканеспецифичности сигнальных путей FLT3.

Наиболее распространенной мутацией FLT3 при ОМЛ является внутренняя тандемная дупликация FLT3 (FLT3-ITD), которая обнаруживается у 20-38% пациентов с цитогенетически нормальным ОМЛ. Мутации FLT3-ITD возникают, когда происходит дупликация и вставка части кодирующей последовательности околомембранного домена в ориентации от головы к хвосту. Мутации FLT3 не были идентифицированы у пациентов с хроническим лимфоидным лейкозом (ХЛЛ), неходжкинской лимфомой и множественной миеломой, что предполагает выраженную специфичность для заболевания ОМЛ. Активация мутантного FLT3 обычно наблюдается при всех подтипах FAB, однако она значимо увеличена у пациентов с ОМЛ, характеризующимся FAB M5 (моноцитарный лейкоз), тогда как подтипы FAB M2 и M6 (гранулоцитарный или эритроидный лейкоз) значимо реже ассоциированы с активацией FLT3, на уровне нормальных паттернов экспрессии FLT3.

У незначительного процента пациентов с ОМЛ (5-7%) наблюдаются мутации одной аминокислоты в тирозинкиназном домене FLT3 (FLT3 TKD), чаще всего в положении D835 или в некоторых случаях Т842 или I836; у еще меньшего числа пациентов (~1%) содержатся мутации в околомембранном домене FLT3, вовлекающие остатки 579, 590, 591 и 594. Пациенты с ОМЛ, отличающимся мутантным FLT3-ITD, страдают агрессивной формой заболевания, характеризующейся ранним рецидивом и неудовлетворительной выживаемостью, тогда как на общую выживаемость и бессобытийную выживаемость наличие

- 1 040387 мутаций FLT3-TKD значимо не влияет. Кроме того, пациенты с ОМЛ, у которых присутствует мутация

FLT3-ITD и одновременно присутствуют мутации ТЕТ2 или DNMT3A, имеют неблагоприятный общий профиль риска по сравнению с пациентами с ОМЛ, отличающимся мутантным FLT3-ITD при ТЕТ2 или

DNMT3A дикого типа, что подчеркивает клиническую и биологическую гетерогенность ОМЛ.

Как мутации FLT3-ITD, так и мутации FLT3 TKD индуцируют лиганд-независимую активацию FLT3, приводящую к нисходящей активации пути Ras/MAPK и путей PI3K/Akt. Однако нисходящие сигнальные пути, ассоциированные с любой из мутаций, отличаются главным образом преимущественной активацией STAT5 за счет FLT3-ITD, что приводит к увеличению потенциала пролиферации и аберрантной регуляции путей репарации ДНК.

Независимо от мутационного статуса FLT3, фосфорилирование FLT3 с очевидностью происходит более чем у двух третей пациентов с ОМЛ, a FLT3 экспрессируется более чем в 80% бластов ОМЛ и у ~0% всех пациентов с ОМЛ, что делает его привлекательной терапевтической мишенью, ассоциированной с патогенезом заболевания при выборке значительного размера.

Ряд низкомолекулярных ингибиторов был предложен в качестве привлекательных вариантов терапии для пациентов с ОМЛ с мутациями FLT3. Первые полученные ингибиторы тирозинкиназы (TKI) FLT3 характеризовались отсутствием селективности, эффективности и неблагоприятными фармакокинетическими свойствами. Были разработаны более новые и более селективные агенты, чтобы справиться с указанными проблемами; однако их эффективность была ограниченной в результате возникновения вторичной резистентности.

Несколько ранних FLT3 TKI включали наряду с прочими мидостаурин (РКС412), лестауртиниб (СЕР-701), сунитиниб (SUI1248) и сорафениб (BAY 43-9006). Частота ответа в исследованиях фазы I и фазы II на указанные мультикиназные направленные агенты у пациентов с рецидивирующим или рефрактерным ОМЛ ограничена предположительно ввиду их неспособности обеспечивать эффективное ингибирование FLT3 без дозолимитирующей токсичности. Квизартиниб (АС220) был разработан в качестве FLT3 TKI второго поколения с высокой селективностью в отношении FLT3 дикого типа и FLT3-ITD и продемонстрировал преимущество, в частности, в перитрансплантационных условиях в когорте пациентов более раннего возраста. Однако вторичные мутации FLT3, идентифицированные у пациентов с рецидивирующим заболеванием, которые получали квизартиниб, подчеркивают необходимость разработки лучших терапевтических стратегий для пациентов с ОМЛ, подтверждая при этом валидность FLT3 как терапевтической мишени.

Ряд направленных агентов был протестирован у пациентов с ОМЛ, страдающих заболеванием de novo, рецидивирующим/рефрактерным или вторичным заболеванием.

Эпигенетический сайленсинг генов-супрессоров опухолевого роста играет важную роль в патогенезе заболевания ОМЛ, и ингибиторы ДНК-метилтрансферазы (DNMT), такие как азацитидин и децитабин, обеспечивали некоторый клинический успех. Кроме того, недавняя идентификация мутаций, влияющих на посттрансляционные модификации гистонов (например, мутаций EZH2 и ASXL1), или метилирование ДНК (например DNMT3A, ТЕТ2, IDH1/2) в подгруппе пациентов с ОМЛ, привела к разработке различных вариантов терапии, в том числе ингибиторов EZH2, DOT1L, IDH1/2 наряду с HDAC и ингибиторами протеасом. Однако результаты доклинических исследований многих из указанных соединений в клетках ОМЛ предполагают, что указанные ингибиторы могут изменять фенотип и генную экспрессию, характерные для гематопоэтической дифференцировки, а не обуславливать непосредственную цитотоксичность для бластов ОМЛ. Соответственно, сохраняется выраженная неудовлетворенная медицинская потребность в идентификации новых мишеней/способов для борьбы с ОМЛ и обеспечения направленного лизиса бластных клеток ОМЛ. Другие кандидатные терапевтические средства для ОМЛ включают ингибиторы киназы Aurora, в том числе AMG 900, и ингибиторы polo-подобных киназ, которые играют важную роль при прогрессе клеточного цикла.

Стандартом лечения пациентов с ОМЛ остается химиотерапия с трансплантацией стволовых клеток, когда это возможно. Однако возникновение рецидивов/рефрактерности у значительного большинства получавших лечение пациентов является основанием для поиска дополнительных способов терапии. Идентификация и описание нескольких специфических для лейкоза антигенов наряду с более ясным пониманием иммуноопосредованных эффектов трансплантат против лейкоза создали предпосылки для разработки иммуномодулирующих стратегий борьбы со злокачественными гематологическими новообразованиями, обзор которых приведен в нескольких статьях.

Гемтузумаб озогамицин (GO) представляет собой конъюгат антитело/лекарственное средство, направленный против CD33, универсального маркера поверхности миелоидных клеток. GO был отозван с рынка после проведения рандомизированных испытаний, не показавших улучшения исходов при терапии GO. Тем не менее, имеется потребность в повторной оценке GO при ОМЛ, и было начато несколько испытаний для тщательной оценки эффективности и токсичности GO. Другие биологические агенты против ОМЛ включают линтузумаб (SGN-33), гуманизированное моноклональное антитело против CD33 в неконъюгированной форме или конъюгированное с радиоактивным висмутом, и SL-401, состоящий из ИЛ-3 человека, соединенного с дифтерийным токсином, для нагрузки рецептора ИЛ-3, который сверхэкспрессируется в большинстве бластов ОМЛ. Моноклональные антитела следующего поколения, наце- 2 040387 ленные как на опухолеассоциированный антиген, так и на эффекторные цитолитические Т-клетки, включают AMG 330 (биспецифический Т-клеточный активатор или молекула BiTE, нацеленная на CD33) и

MGD006, переориентирующаяся молекула с двойной аффинностью, которая связывается с CD123 и CD3.

Недавний успех при применении несущих химерный антигенный рецептор Т-клеток при рефрактерном ХЛЛ и остром лимфобластном лейкозе (ОЛЛ) создал предпосылки для разработки специфических в отношении миелоидных клеток CAR-T-клеток, в том числе терапии на основе CD123 CAR-T и CD33 CAR-T. Был предпринят также ряд усилий, направленных на получение вакцин на основе дендритных клеток, а также комбинации с ингибиторами блокады контрольных точек, для улучшения исходов терапии.

Также были получены терапевтические антитела против FLT3. Терапия антителами считается более эффективной, при низкой вероятности развития механизмов вторичной резистентности, поскольку антитело направлено против внеклеточного домена FLT3, менее склонного к мутациям по сравнению с внутриклеточным киназным доменом. Применение антитела Imclone, IMC-EB10, оценивали у пациентов с рецидивирующим ОМЛ в исследовании фазы I, однако указанное исследование было прекращено ввиду отсутствия эффективности (ClinicalTrials.gov, идентификационный номер: NCT00887926). Соответственно сохраняется настоятельная необходимость осуществления оценки применения моноклональных антител второго поколения, в том числе биспецифических антител, при лечении ОМЛ.

Поскольку по-прежнему существует потребность в дополнительных доступных вариантах для лечения гематологических заболеваний, связанных с экспрессией FLT3, в настоящем документе предложены способы и средства для решения указанной проблемы в виде конструкции биспецифического антитела, содержащей связывающий домен, направленный на FLT3 на поверхности опухолевых целевых клеток, и второй связывающий домен, направленный на CD3 на поверхности Т-клеток.

Соответственно согласно первому аспекту согласно настоящему изобретению предложена конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, при этом указанный первый связывающий домен связывается с эпитопом FLT3, который расположен во внеклеточной области FLT3, согласно последовательностям SEQ ID NO: 801-804.

Следует отметить, что в настоящем документе термины в единственном числе, в том числе с определением указанный(ая, ое) включают соответствующие формы множественного числа, если из контекста явным образом не следует иное. Соответственно, например, при упоминании реагента включены один или более различных таких реагентов, а при упоминании (указанного) способа включены эквивалентные этапы и способы, известные специалистам в данной области техники, которые могут представлять собой модифицированные способы или служить заменой способов согласно описанию в настоящем документе.

Если не указано иное, предполагается, что термин по меньшей мере, предваряющий ряд элементов, относится к каждому элементу в серии. Специалистам в данной области техники известны многие эквиваленты специфических вариантов реализации настоящего изобретения согласно описанию в настоящем документе, или такие эквиваленты могут быть определены с применением не более чем рутинных экспериментов. Предполагается, что такие эквиваленты охвачены настоящим изобретением.

Термин и/или в любых разделах настоящего документа включает значения и, или и все или любые другие комбинации элементов, объединяемых указанным термином.

Термин приблизительно или примерно в настоящем документе означает величины в пределах ±20%, предпочтительно в пределах ±15%, более предпочтительно в пределах ±10%, и наиболее предпочтительно в пределах ±5% определенного значения или диапазона.

В настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения, за исключением случаев, когда контекст подразумевает иное, термин содержать и его варианты, такие как содержит и содержащие, подразумевает включение указанного целочисленного значения или этапа, или группы целочисленных значений или этапов, однако не исключает любое другое целочисленное значение или этап, или группу целочисленных значений или этапов. В настоящем документе термин содержащий может быть заменен на термин охватывающий или включающий или иногда на термин имеющий.

В настоящем документе состоящий из исключает любые элементы, этапы или ингредиенты, не указанные в элементе формулы изобретения. В настоящем документе термин состоящий по существу из не исключает материалов или этапов, которые существенным образом не влияют на основные и новые заявленные в формуле изобретения характеристики.

Во всех случаях в настоящем документе любой из терминов содержащий, состоящий по существу из и состоящий из может быть заменен любым из двух других терминов.

Термин конструкция антитела относится к молекуле, структура и/или функция которой основана(ы) на структуре и/или функции антитела, например полноразмерной или целой молекулы иммуноглобулина. Таким образом, конструкция антитела способна к связыванию со специфической мишенью или антигеном. Кроме того, конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением удовлетворяет

- 3 040387 минимальным структурным требованиям для антитела, которые обеспечивают связывание мишени. Указанное минимальное требование может, например, быть определено как присутствие по меньшей мере трех областей CDR легких цепей (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 из VL-области) и/или трех областей CDR тяжелых цепей (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 из VH-области), предпочтительно всех шести областей CDR. Антитела, на которых основаны конструкции в соответствии с настоящим изобретением, включают, например, моноклональные, рекомбинантные, химерные, деиммунизированные, гуманизированные антитела и антитела человека.

В определение конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением входят полноразмерные или целые антитела, включающие также антитела верблюдовых и другие иммуноглобулиновые антитела, полученные с применением биотехнологических способов или процессов, или способов или процессов для конструирования белков. Указанные полноразмерные антитела могут представлять собой, например, моноклональные, рекомбинантные, химерные, деиммунизированные, гуманизированные антитела и антитела человека. Также в определение конструкций антитела входят фрагменты полноразмерных антител, такие как VH, VHH, VL, (s)dAb, Fv, Fd, Fab, Fab', F(ab')₂ или r-IgG (полуантитело). Конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением могут также представлять собой модифицированные фрагменты антител, называемые также вариантами антител, такие как scFv, ди-scFv или 6u(c)-scFv, scFv-Fc, scFv-застежка, scFab, Fab2, Fab3, диатела, одноцепочечные диатела, тандемные диатела (Tandab), тандемные ди-scFv, тандемные три-scFv, минитела, примером которых является структура, приведенная ниже: (VH-VL-CH3)2, (scFv-CH3)₂, ((scFv)2-CH3+CH3), ((scFv)2-CH3) или (scFvCH3-scFv)2, мультитела, такие как триатела или тетратела, и однодоменные антитела, такие как нанотела или однодоменные антитела всего с одним вариабельным доменом, который может быть представлен доменом VHH, VH или VL, которые специфически связывают антиген или эпитоп независимо от других вариабельных областей или доменов.

Связывающий домен может, как правило, содержать вариабельную область легкой цепи (VL) антитела и вариабельную область тяжелой цепи (VH) антитела; однако он не должен содержать их обе. Fdфрагменты, например, содержат две VH-области и часто до некоторой степени сохраняют антигенсвязывающую функцию интактного антигенсвязывающего домена. Дополнительные примеры форматов фрагментов антител, вариантов антител или связывающих доменов включают (1) Fab-фрагмент, моновалентный фрагмент, содержащий домены VL, VH, CL и СН1; (2) F(ab')₂ фрагмент, бивалентный фрагмент содержащий два Fab-фрагмента, соединенные дисульфидным мостиком в шарнирной области; (3) Fdфрагмент, содержащий два домена VH и СН1; (4) Fv-фрагмент, содержащий домены VL и VH одного плеча антитела, (5) dAb-фрагмент (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), который содержит домен VH; (6) выделенная определяющая комплементарность область (CDR) и (7) одноцепочечный Fv (scFv), причем последний является предпочтительным (например, происходящий из библиотеки scFV). Примеры вариантов реализации конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением описаны, например, в WO 00/006605, WO 2005/040220, WO 2008/119567, WO 2010/037838, WO 2013/026837, WO 2013/026833, US 2014/0308285, US 2014/0302037, WO 2014/144722, WO 2014/151910 и WO 2015/048272.

Кроме того, определение термина конструкция антитела включает моновалентные, бивалентное и поливалентные/мультивалентные конструкции и, соответственно, моноспецифические конструкции, специфически связывающиеся только с одной антигенной структурой, а также биспецифические и полиспецифические/мультиспецифические конструкции, которые специфически связывают более чем одну антигенную структуру, например две, три или более, посредством отдельных связывающих доменов. Кроме того, определение термина конструкция антитела включает молекулы, состоящий из единственной полипептидной цепи, а также молекулы, состоящие из более чем одной полипептидной цепи, при этом указанные цепи могут быть либо идентичными (гомодимеры, гомотримеры или гомоолигомеры), либо разными (гетеродимер, гетеротример или гетероолигомер). Примеры представленных выше идентифицированных антител и их вариантов или производных описаны в том числе в источниках: Harlow and Lane, Antibodies a laboratory manual, CSHL Press (1988); Using Antibodies: a laboratory manual, CSHL Press (1999); Kontermann and Dubel, Antibody Engineering, Springer, 2nd ed. 2010; Little, Recombinant Antibodies for Immunotherapy, Cambridge University Press 2009.

Конструкции антитела согласно настоящему изобретению представляют собой предпочтительно полученные in vitro конструкции антитела. Указанный термин относится к конструкции антитела в соответствии с представленным выше определением, вариабельная область которой полностью или частично (например, по меньшей мере одна область CDR) получена без применения иммунных клеток, например, с применением фагового дисплея in vitro, белкового чипа или любого другого способа, позволяющего протестировать способность кандидатных последовательностей к связыванию с антигеном. Указанный термин, соответственно, предпочтительно исключает последовательности, полученные исключительно путем геномной реаранжировки в иммунной клетке животного. Рекомбинантное антитело представляет собой антитело, полученное посредством применения технологии рекомбинантной ДНК или генетического конструирования.

Термин моноклональное антитело (mAb) или конструкция моноклонального антитела в настоящем документе относится к антителу, полученному из популяции, по существу, гомогенных антител, т.е.

- 4 040387 индивидуальные антитела, составляющие популяцию, идентичны, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций и/или посттрансляционных модификаций (например, изомеризаций, амидирований), которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела высокоспецифичны, отличаясь направленностью против единственного антигенного сайта или детерминанты на антигене, в отличие от стандартных (поликлональных) составов с антителами, которые, как правило, включают разные антитела, направленные против разных детерминант (или эпитопов). Помимо специфичности преимущество моноклональных антител заключается в том, что они синтезируются гибридомной культурой, и поэтому не содержат загрязняющих примесей других иммуноглобулинов. Модификатор моноклональные указывает на характер антитела, по существу полученного из гомогенной популяции антител, и не должен быть истолкован как определяющий получение антитела каким-либо конкретным способом.

Для получения моноклональных антител может применяться любая техника, обеспечивающая продуцирование антител непрерывными культурами линий клеток. Например, моноклональные антитела для применения могут быть получены гибридомным способом, впервые описанным в источнике: Koehler et al., Nature, 256: 495 (1975), или могут быть получены с применением методов рекомбинантной ДНК (см., например, патент США № 4816567). Примеры дополнительных техник для получения моноклональных антител человека включают триомную технику, гибридомную технику на основе В-клеток человека (Kozbor, Immunology Today 4 (1983), 72) и EBV-гибридомную технику (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985), 77-96).

Затем может проводиться скрининг гибридом с применением стандартных способов, таких как твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и поверхностный плазмонный резонанс (BIACORE™), для идентификации одной или более гибридом, которые продуцируют антитело, которое специфически связывается с заданным антигеном. В качестве иммуногена может применяться любая форма релевантного антигена, например рекомбинантный антиген, встречающиеся в природе формы, любые их варианты или фрагменты, а также соответствующий антигенный пептид. Поверхностный плазмонный резонанс, используемый в системе BIAcore, может применяться для увеличения эффективности фаговых антител, которые связываются с эпитопом целевого антигена, такого как FLT3 или CD3эпсилон (Schier, Human Antibodies Hybridomas 7 (1996), 97-105; Malmborg, J. Immunol. Methods 183 (1995), 7-13).

Другой пример способа получения моноклональных антител представлен скринингом экспрессионной библиотеки белков, например, библиотек фагового дисплея или рибосомного дисплея. Фаговый дисплей описан, например, в источниках: Ladner et al., патент США № 5223409; Smith (1985) Science 228:1315-1317, Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991) и Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991).

Помимо применения библиотек дисплея релевантный антиген может применяться для иммунизации не являющегося человеком животного, например грызуна (такого как мышь, хомяк, кролик или крыса). Согласно одному варианту реализации в организме указанного, не являющегося человеком животного содержится по меньшей мере часть гена иммуноглобулина человека. Например, возможно конструирование линий мышей, дефицитных по продуцированию антител мыши, с большими фрагментами локусов Ig (иммуноглобулина) человека. С применением гибридомной технологии могут быть получены и выбраны антигенспецифические моноклональные антитела, происходящие из генов с требуемой специфичностью. См., например, XENOMOUSE™, Green et al. (1994) Nature Genetics 7:13-21, US 20030070185, WO 96/34096 и WO 96/33735.

Моноклональное антитело может также быть получено от не являющегося человеком животного, а затем модифицировано, например гуманизировано, деиммунизировано, химеризовано и т.п., с применением техник рекомбинантной ДНК, известных в данной области техники. Примеры модифицированных конструкций антитела включают гуманизированные варианты не принадлежащих человеку антител, антитела с созревшей аффинностью (см., например, Hawkins et al., J. Mol. Biol. 254, 889-896 (1992) и Lowman et al., Biochemistry 30, 10832-10837 (1991)) и мутантные антитела с измененной эффекторной функцией (функциями) (см., например, патент США 5648260, Kontermann and Dubel (2010), см. выше, и Little (2009), см. выше).

В иммунологии аффинное созревание известно как процесс, посредством которого В-клетки продуцируют антитела с увеличенной аффинностью в отношении антигена в ходе иммунного ответа. При повторных воздействиях тем же антигеном у хозяина продуцируются антитела, обладающие последовательно повышающимися показателями аффинности. Как и в случае естественного прототипа, аффинное созревание in vitro основано на принципах мутаций и отбора. Аффинное созревание in vitro успешно применялось для оптимизации антител, конструкций антитела и фрагментов антител. Случайные мутации в области CDR вводят с применением радиации, химических мутагенов или допускающей ошибки ПЦР. Кроме того, генетическое разнообразие может быть увеличено посредством перестановки цепей. Два или три раунда мутаций и отбора с применением способов дисплея, таких как фаговый дисплей, обычно обеспечивают получение фрагментов антител, обладающих показателями аффинности у нижних границ наномолярного диапазона.

- 5 040387

Предпочтительный тип вариаций конструкций антитела в результате замен аминокислот включает замену одного или более остатков гипервариабельной области исходного антитела (например, гуманизированное антитело или антитело человека). Обычно итоговый вариант/варианты, выбранные для дальнейшей разработки, обладают улучшенными биологическими свойствами относительно исходного антитела, из которого они получены. В удобном способе получения таких вариантов с заменами задействовано аффинное созревание с применением фагового дисплея. Вкратце, в несколько сайтов гипервариабельной области (например, 6-7 сайтов) вводят мутации с получением всех возможных замен аминокислот в каждом сайте. Полученные таким образом варианты антитела представлены на частицах нитевидного фага в моновалентном и слитом с продуктом гена III фага М13 виде, упакованном в каждую частицу. Затем проводят скрининг биологической активности вариантов в форме фагового дисплея (например, сродства к связыванию) согласно описанию в настоящем документе. Для идентификации кандидатных сайтов гипервариабельной области для модификации может проводиться аланинсканирующий мутагенез с целью идентификации остатков гипервариабельной области, которые вносят значимый вклад в связывание антигена. Согласно альтернативному или дополнительному варианту может быть благоприятным проведение анализа кристаллической структуры комплекса антиген-антитело для идентификации точек контакта между связывающим доменом и, например, FLT3 человека. Такие контактные остатки и соседние остатки являются кандидатами для замены в соответствии с предложенными согласно настоящему изобретению техниками. После получения таких вариантов проводят скрининг панели вариантов согласно описанию в настоящем документе, и антитела с наилучшими характеристиками по оценке в одном или более релевантных анализах могут быть выбраны для дальнейших разработок.

Моноклональные антитела и конструкции антитела согласно настоящему изобретению, в частности, включают химерные антитела (иммуноглобулины), часть тяжелой и/или легкой цепи которых идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, происходящих из конкретного вида или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антител, а остальная часть цепи(ей) идентична(ы) или гомологична(ы) соответствующим последовательностям в антителах, происходящие из другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они демонстрируют требуемую биологическую активность (патент США № 4816567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)). В настоящем документе представляющие интерес химерные антитела включают приматизированные антитела, содержащие вариабельный домен антигенсвязывающих последовательностей, происходящих из примата, не являющегося человеком (например, обезьян Старого света, человекообразных обезьян и т.п.) и последовательности константной области человека. Были описаны различные способы получения химерных антител. См. например, источники: Morrison et al., Proc. Natl. Acad. ScL U.S.A. 81:6851, 1985; Takeda et al., Nature 314:452, 1985, Cabilly et al., патент США № 4816567; Boss et al., патент США № 4816397; Tanaguchi et al., EP 0171496; EP 0173494; и GB 2177096.

Антитело, конструкция антитела, фрагмент антитела или вариант антитела могут также быть модифицированы посредством специфического удаления Т-клеточных эпитопов человека (способом, называемым деиммунизацией) с применением методов, описанных, например, в WO 98/52976 или WO 00/34317. Вкратце, может быть проведен анализ вариабельных доменов тяжелых и легких цепей антитела на наличие пептидов, которые связываются с МНС класса II; указанные пептиды представляют собой потенциальные Т-клеточные эпитопы (согласно определению в WO 98/52976 и WO 00/34317). Для детекции потенциальных Т-клеточных эпитопов может применяться метод компьютерного моделирования, называемый нанизыванием пептидов; кроме того, по базе данных связывающих пептидов МНС класса II человека может быть проведен поиск мотивов, присутствующих в последовательностях VH и VL, согласно описанию в WO 98/52976 и WO 00/34317. Указанные мотивы связываются с любыми из 18 основных аллотипов DR МНС класса II, и, соответственно, представляют собой потенциальные Т-клеточные эпитопы. Детектированные потенциальные Т-клеточные эпитопы могут быть элиминированы путем замены незначительного числа остатков аминокислот в вариабельных доменах, или, предпочтительно, путем замен одиночных аминокислот. Как правило, осуществляют консервативные замены. Часто, однако не исключительно, может применяться аминокислота, характерная для некоторого положения в последовательностях антител зародышевой линии человека. Последовательности зародышевой линии человека описаны, например, в источниках: Tomlinson, et al. (1992) J. Mol. Biol. 227: 776-798; Cook, G.P. et al. (1995) Immunol. Today Vol. 16 (5): 237-242; и Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14: 14:4628-4638. Каталог V BASE представляет собой обширный каталог последовательностей вариабельных областей иммуноглобулинов человека (составители: Tomlinson, LA. et al., MRC Centre for Protein Engineering, Кембридж, Великобритания). Указанные последовательности могут применяться в качестве источника последовательностей человека, например, каркасных областей и областей CDR. Могут также применяться консенсусные каркасные области человека, например, согласно описанию в патенте США № 6300064.

Гуманизированные антитела, конструкции антитела, их варианты или фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ или другие антигенсвязывающие субпоследовательности антител) представляют собой антитела или иммуноглобулины, состоящие в основном из последовательностей человека, которые содержат (а) минимальную(ые) последовательность(и), происходящую(ие) из не принадлежащего человеку

- 6 040387 иммуноглобулина. В основном, гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (реципиентное антитело), в которых остатки гипервариабельной области (также CDR) реципиента заменены на остатки из гипервариабельной области (донорного антитела) не являющегося человеком вида (например, грызуна), такого как мышь, крыса, хомяк или кролик, обладающей требуемой специфичностью, аффинностью и потенциалом. В некоторых случаях остатки Fv каркасной области (FR) иммуноглобулина человека заменяют на соответствующие не принадлежащие человеку остатки. Кроме того, гуманизированные антитела в настоящем документе могут также содержать остатки, который не обнаруживаются ни в реципиентном антителе, ни в донорном антителе. Указанные модификации осуществляют для дополнительного уточнения и оптимизации действия антител. Гуманизированное антитело может также содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило, иммуноглобулина человека. Более подробную информацию можно найти в источниках: Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992).

Гуманизированные антитела или их фрагменты могут быть получены путем замены последовательностей вариабельного домена Fv, которые прямо не вовлечены в связывание антигена, на эквивалентные последовательности из вариабельных доменов Fv человека. Примеры способов получения гуманизированных антител или их фрагментов предложены в источниках: Morrison (1985) Science 229:1202-1207; Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214; и US 5585089; US 5693761; US 5693762; US 5859205; и US 6407213. Указанные способы включают выделение, манипуляции и экспрессию последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют, полностью или частично, вариабельные домены Fv иммуноглобулинов, по меньшей мере из одной из тяжелых или легких цепей. Такие нуклеиновые кислоты могут быть получены из гибридомы, продуцирующей антитело к заранее заданной мишени, согласно описанию выше, а также из других источников. Рекомбинантная ДНК, кодирующая молекулу гуманизированного антитела, может затем быть клонирована в подходящий экспрессионный вектор.

Гуманизированные антитела могут также быть получены с применением трансгенных животных, таких как мыши, которые экспрессируют гены тяжелых и легких цепей человека, однако неспособны экспрессировать эндогенные гены тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов мыши. У Winter описан пример способа прививки области CDR, который может применяться для получения гуманизированных антител согласно описанию в настоящем документе (Патент США № 5225539). Любые из областей CDR конкретного антитела человека могут быть заменены по меньшей мере частью не принадлежащей человеку области CDR, или только некоторые из указанных областей CDR могут быть заменены не принадлежащими человеку областями CDR. Необходимой является только замена некоторого числа областей CDR, обеспечивающая связывание гуманизированного антитела с заранее заданным антигеном.

Гуманизированное антитело может быть оптимизировано путем введения консервативных замен, замен консенсусных последовательностей, замен последовательностей зародышевой линии и/или обратных мутаций. Такие измененные молекулы иммуноглобулина могут быть получены с применением любых из ряда техник, известных в данной области техники (например, Teng et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80: 7308-7312, 1983; Kozbor et al., Immunology Today, 4: 7279, 1983; Olsson et al., Meth. Enzymol., 92: 3-16, 1982, и ЕР 239400).

Термин антитело человека, конструкция антитела человека и связывающий домен человека включает антитела, конструкции антитела и связывающие домены, содержащие области антител, такие как вариабельные и константные области или домены, которые по существу соответствуют последовательностям иммуноглобулинов зародышевой линии человека, известным в данной области техники, включая, например, описанные Kabat et al. (1991) (см. выше). Антитела, конструкции антитела или связывающие домены человека согласно настоящему изобретению могут включать остатки аминокислот, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, введенные путем случайного или сайт-специфического мутагенеза in vitro, или путем соматической мутации in vivo), например, в областях CDR, и, в частности, в CDR3. В антителах, конструкциях антитела или связывающих доменах человека по меньшей мере в одном, двух, трех, четырех, пяти или более положениях может быть произведена замена на остаток аминокислоты, который не закодирован в последовательности иммуноглобулина зародышевой линии человека. Определение антител, конструкций антитела и связывающих доменов человека в настоящем документе также охватывает полностью принадлежащие человеку антитела, которые включают только не являющиеся искусственно и/или генетически измененными принадлежащие человеку последовательности антител, поскольку указанные последовательности могут быть получены с применением таких технологий или систем, как Xenomouse.

Согласно некоторым вариантам реализации конструкции антитела согласно настоящему изобретению представляют собой выделенные или по существу чистые конструкции антитела. Выделенные или по существу чистые, в отношении описания конструкций антитела согласно описанию в настоящем документе, означает конструкцию антитела, которая была идентифицирована, отделена от и/или выделена из компонента среды ее получения. Предпочтительно указанная конструкция антитела не содержит или по существу не содержит связей со всеми другими компонентами среды ее получения. Загрязняющие компоненты среды ее получения, происходящие, например, из рекомбинантных трансфици

- 7 040387 рованных клеток, представляют собой материалы, как правило, препятствующие диагностическому или терапевтическому применению полипептида, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковоподобные или небелковоподобные растворенные вещества. Конструкции антитела могут, например, составлять по меньшей мере приблизительно 5%, или по меньшей мере приблизительно 50% по массе от общего содержания белка в заданном образце. Предполагается, что выделенный белок может составлять от 5 до 99,9% по массе от общего содержания белка, в зависимости от обстоятельств. Значимо более высокая концентрация полипептида может быть достигнута за счет применения индуцируемого промотора или обеспечивающего высокий уровень экспрессии промотора, таким образом, чтобы при получении обеспечивать повышенные уровни концентрации указанного полипептида. Определение включает получение конструкции антитела в широком спектре организмов и/или клеток-хозяев, известных в данной области техники. Согласно предпочтительным вариантам реализации конструкцию антитела очищают (1) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней последовательности аминокислот путем применения секвенатора с вращающимся стаканом, или (2) до гомогенности посредством ДСН-ПААГ в невосстанавливающих или восстанавливающих условиях с применением окрашивания кумасси голубым или, предпочтительно, серебром. Обычно, однако, выделенную конструкцию антитела получают путем проведения по меньшей мере одного этапа очищения.

Термин связывающий домен в контексте настоящего изобретения характеризует домен, который (в частности) связывается/ взаимодействует с заданным целевым эпитопом или заданным целевым сайтом/распознает заданный целевой эпитоп или заданный целевой сайт на целевых молекулах (антигенах), в данном случае: FLT3 и CD3, соответственно. Структура и функция указанного первого связывающего домена (распознавание FLT3), и предпочтительно также структура и/или функция второго связывающего домена (распознавание CD3) основаны на структуре и/или функции антитела, например, полноразмерной или целой молекулы иммуноглобулина. В соответствии с настоящим изобретением первый связывающий домен характеризуется присутствием трех CDR легких цепей (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 из VLобласти) и/или трех CDR тяжелых цепей (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 из VH-области). Второй связывающий домен предпочтительно также удовлетворяет минимальным структурным требованиям для антитела, которые обеспечивают связывание мишени. Более предпочтительно второй связывающий домен содержит по меньшей мере три области CDR легких цепей (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 из VL-области) и/или три области CDR тяжелых цепей (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 из VH-области). Предусмотрено получение или возможность получения указанного первого и/или второго связывающих доменов с применением методов фагового дисплея или скрининга библиотек, а не путем прививания последовательностей CDR из уже существующего (моноклонального) антитела на скаффолд.

В соответствии с настоящим изобретением связывающие домены находятся в форме одного или более полипептидов. Такие полипептиды могут включать белковоподобные части и не белковоподобные части (например, химические линкеры или химические агенты для перекрестного связывания, такие как глутаральдегид). Белки (в том числе их фрагменты, предпочтительно биологически активные фрагменты, и пептиды, обычно содержащие менее чем 30 аминокислот) содержат две или более аминокислот, соединенные между собой посредством ковалентной пептидной связи (с образованием цепи аминокислот). Термин полипептид в настоящем документе описывает группу молекул, которая, как правило, состоит из более чем 30 аминокислот. Полипептиды могут также образовывать мультимеры, такие как димеры, тримеры и высшие олигомеры, т.е. состоящие из более чем одной молекулы полипептид. Молекулы полипептидов, образующие такие димеры, тримеры и т.п., могут быть идентичными или неидентичными. Соответствующие структуры высшего порядка из таких мультимеров, следовательно, называются гомоили гетеродимерами, гомо- или гетеротримерами и т.п. Примером гетеромультимера является молекула антитела, которая во встречающейся в природе форме состоит из двух идентичных легких полипептидных цепей и двух идентичных тяжелых полипептидных цепей. Термины пептид, полипептид и белок также относятся к естественным образом модифицированным пептидам/полипептидам/белкам, причем указанная модификация осуществляется, например, путем посттрансляционных модификаций, таких как гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п. Пептид, полипептид или белок в настоящем документе может также быть химически модифицирован, например, пегилирован. Такие модификации хорошо известны в данной области техники и описаны ниже в настоящем документе.

Предпочтительно, связывающий домен, который связывается с FLT3, и/или связывающий домен, который связывается с CD3, представляет(ют) собой связывающие домены человека. Антитела и конструкции антитела, содержащие по меньшей мере один связывающий домен человека, позволяют избежать некоторых проблем, ассоциированных с антителами или конструкциями антител, содержащих не принадлежащие человеку вариабельные и/или константные области, например, области грызунов (например, мыши, крысы, хомяка или кролика). Присутствие таких происходящих от грызунов белков может приводить к быстрому выведению антител или конструкций антитела, или может приводить к генерации иммунного ответа против указанного антитела или конструкции антитела у пациента. Чтобы избежать применения происходящих от грызунов антител или конструкций антитела, могут быть получены антитела/конструкции антитела человека или полностью принадлежащие человеку, путем введения грызуну обеспечивающих функцию антитела человека элементов, таким образом, что указанный грызун проду- 8 040387 цирует полностью принадлежащие человеку антитела.

Возможность клонировать и реконструировать локусы человека размером несколько мегабаз в хромосомах YAC и вводить их в зародышевую линию мышей обеспечивает эффективный способ определения функциональных компонентов очень больших или грубо картированных локусов, а также получения полезных моделей заболевания человека. Кроме того, применение такой технологии замены локусов мыши на их эквиваленты у человека может обеспечивать уникальную информацию для понимания экспрессии и регуляции генных продуктов человека в ходе развития, их коммуникации с другими системами и их вовлеченности в индукцию и прогрессирование заболевания.

Важное практическое применение такой стратегии представлено гуманизацией гуморальной иммунной системы мыши. Введение локусов иммуноглобулина (Ig) человека мышам, у которых были инактивированы эндогенные гены Ig, обеспечивает возможность изучения механизмов, лежащих в основе запрограммированной экспрессии и сборки антител, а также их роли в развитии В-клеток. Кроме того, такая стратегия может обеспечивать идеальный источник для получения полностью принадлежащих человеку моноклональных антител (mAb)-важной вехи на пути реализации перспектив терапии антителами при заболеваниях человека. Ожидается, что полностью принадлежащие человеку антитела или конструкции антитела будут минимизировать иммуногенные и аллергические реакции, характерные для mAbантител мыши или дериватизированных mAb мыши, и, соответственно, увеличивать эффективность и безопасность вводимых антител/конструкций антител. Можно ожидать, что применение полностью принадлежащих человеку антител или конструкций антитела будет обеспечивать существенное преимущество при лечении хронических и рецидивирующих заболеваний человека, таких как воспаление, аутоиммунитет и раковые заболевания, которые требуют неоднократного введения соединений.

Один из способов достижения указанной цели заключался в конструировании линий мышей, дефицитных по продуцированию антител мыши, с большими фрагментами локусов Ig человека; предположительно у таких мышей будет продуцироваться большой репертуар антител человека в отсутствие антител мыши. Большие фрагменты Ig человека обеспечивают сохранение значительного разнообразия вариабельных генов, а также надлежащей регуляции продуцирования и экспрессии антител. Используя механизмы обеспечения разнообразия и выбора антител у мышей и отсутствие иммунологической толерантности к белкам человека, воспроизводимый указанными линиями мышей репертуар антител человека должен обеспечивать выработку высокоаффинных антител против любого представляющего интерес антигена, в том числе против антигенов человека. С применением гибридомной технологии можно с легкостью получить и отобрать антиген-специфические моноклональные антитела (mAb) человека с требуемой специфичностью. Указанная общая стратегия была продемонстрирована при получении первых линий мышей XenoMouse (см. Green et al. Nature Genetics 7:13-21 (1994)). Линии XenoMouse были сконструированы с применением дрожжевых искусственных хромосом (YAC), содержащих фрагменты в конфигурации зародышевой линии размером 245 Кб и 190 Кб локуса тяжелой цепи и локуса легкой каппа-цепи человека, соответственно, которые содержали последовательности коровых вариабельных и константных областей. Указанные содержащие Ig человека YAC оказались совместимы с системой как реаранжировки, так и экспрессии антител у мышей, и были способны заменять инактивированные гены Ig мыши, на что указывала их способность индуцировать развитие В-клеток с получением репертуара полностью принадлежащих человеку антител, сходных с репертуаром взрослого человека и образованием антиген-специфических mAb человека. Указанные результаты также предполагали, что введение частей локусов Ig человека большего размера, содержащих большее число V-генов, дополнительные регуляторные элементы и константные области Ig человека, могут воспроизводить по существу полный репертуар, характерный для гуморального ответа человека на инфекцию и иммунизацию. Недавно исследование Green с соавторами было расширено, с изучением введения более чем приблизительно 80% репертуара антител человека путем введения, фрагментов YAC в конфигурации зародышевой линии с локусами тяжелых цепей и локусами легких каппа-цепей человека размером несколько Мб, соответственно. См. Mendez et al. Nature Genetics 15:146-156 (1997) и заявку на патент США сер. № 08/759620.

Получение мышей XenoMouse дополнительно обсуждается и описывается в заявках на патент США сер. № 07/466008; сер. № 07/610515; сер. № 07/919297; сер. № 07/922649; сер. № 08/031801; сер. № 08/112848; сер. № 08/234145; сер. № 08/376279; сер. № 08/430938; сер. № 08/464584; сер. № 08/464582; сер .№ 08/463191; сер. № 08/462837; сер. № 08/486853; сер. № 08/486857; сер. № 08/486859; сер. № 08/462513; сер. № 08/724752; и сер. № 08/759620; патентах США №№ 6162963; 6150584; 6114598; 6075181 и 5939598, и патентах Японии № 3068180 В2, № 3068506 В2 и № 3068507 В2. См. также источники: Mendez et al. Nature Genetics 15:146-156 (1997) и Green and Jakobovits J. Exp. Med. 188:483-495 (1998), EP 0463151 B1, WO 94/02602, WO 96/34096, WO 98/24893, WO 00/76310 и WO 03/47336.

Согласно альтернативному подходу, другие, в том числе GenPharm International, Inc., использовали способ минилокусов. В способе минилокусов экзогенный локус Ig имитируют путем включения фрагментов (индивидуальных генов) из локуса Ig. Соответственно, из одного или более генов VH, одного или более генов DH, одного или более генов JH, константной области мю-цепи и второй константной области (предпочтительно, константной области гамма-цепи) формируют конструкцию для встраивания в организм животного. Указанный подход описан в патенте США № 5545807, выданном Surani et al., и в патен

- 9 040387 тах США №№ 5545806; 5625825; 5625126; 5633425; 5661016; 5770429; 5789650; 5814318; 5877397; 5874299 и 6255458, выданных Lonberg и Kay, в патентах США №№ 5591669 и 6023.010, выданных Krimpenfort; и в патентах США № 5612205; № 5721367 и № 5789215, выданных Berns et al.; в патенте США № 5643763, выданном Choi и Dunn, и в заявке GenPharm International на патент США сер. № 07/574748, сер. № 07/575962, сер. № 07/810279, сер. № 07/853408, сер. № 07/904068, сер. № 07/990860, сер. № 08/053131, сер. № 08/096762, сер. № 08/155301, сер. № 08/161739, сер. № 08/165699, сер. № 08/209741. См. также ЕР 0546073 B1, WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852 и WO 98/24884 и патент США № 5981175. См. также источники: Taylor et al. (1992), Chen et al. (1993), Tuaillon et al. (1993), Choi et al. (1993), Lonberg et al. (1994), Taylor et al. (1994) и Tuaillon et al. (1995), Fishwild et al. (1996).

Kirin также было продемонстрировано получение антител человека от мышей, в организм которых были введены, путем опосредованного микроклетками слияния, большие фрагменты хромосом или целые хромосомы. См. заявки на европейский патент № 773288 и № 843961. Xenerex Biosciences разрабатывает технологию, потенциально применимую для получения антител человека. В указанной технологии мышам SCID вводят для восполнения лимфатические клетки человека, например, В и/или Т-клетки. Затем мышей иммунизируют антигеном, и у них может развиваться иммунный ответ против указанного антигена. См. патенты США № 5476996; № 5698767 и № 5958765.

Ответы, опосредованные антителами человека против антител мыши (HAMA) привели к получению в данной отрасли химерных или иным образом гуманизированных антител. Ожидается, однако, что будут наблюдаться определенные опосредованные антителами человека против химерных антител (НАСА) ответы, в частности, при хроническом или неоднократном введении доз указанного антитела. Соответственно, желательно получить конструкции антитела, содержащие связывающий домен человека против FLT3 и связывающий домен человека против CD3, для устранения проблем и/или эффектов опосредованного HAMA или НАСА ответа.

Термины (в частности) связывается с, (в частности) распознает, (в частности) направленный на и (в частности) вступает в реакцию с означают, в соответствии с настоящим изобретением, что связывающий домен взаимодействует или взаимодействует в частности с заданным эпитопом или заданным целевым сайтом на целевых молекулах (антигенах), в данном случае, FLT3 и CD3 соответственно.

Термин эпитоп относится к сайту на антигене, с которым специфически связывается связывающий домен, такой как антитело или иммуноглобулин, или производное, фрагмент или вариант антитела или иммуноглобулина. Эпитоп обладает антигенностью и, соответственно, эпитоп иногда также обозначается в настоящем документе терминами антигенная структура или антигенная детерминанта. Соответственно, связывающий домен представляет собой сайт взаимодействия с антигеном. Также считается, что указанное связывание/взаимодействие определяет специфическое распознавание.

Эпитопы могут быть образованы как непрерывной последовательностью аминокислот, так и не являющейся непрерывной последовательностью аминокислот, сближаемых за счет третичной укладки белка. Линейный эпитоп представляет собой эпитоп, первичная последовательность аминокислот которого содержит распознаваемый эпитоп. Линейный эпитоп, как правило, включает по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4 аминокислоты, а чаще по меньшей мере 5, или по меньшей мере 6, или по меньшей мере 7 аминокислот, например, от приблизительно 8 до приблизительно 10 аминокислот, расположенных в уникальной последовательности.

Конформационный эпитоп, в отличие от линейного эпитопа, представляет собой эпитоп, отличающийся тем, что первичная последовательность аминокислот, составляющих указанный эпитоп, не является единственным определяющим распознаваемым компонентом эпитопа (например, эпитоп, отличающийся тем, что его первичная последовательность аминокислот не обязательно распознается связывающим доменом). Как правило, конформационный эпитоп содержит большее число аминокислот, чем линейный эпитоп. При распознавании конформационных эпитопов связывающий домен распознает трехмерную структуру антигена, предпочтительно, пептид или белок, или его фрагмент (в контексте настоящего изобретения антигенная структура для одного из связывающих доменов расположена в белке FLT3). Например, при укладке молекулы белка с образованием трехмерной структуры определенные аминокислоты и/или полипептидный остов, образующий конформационный эпитоп, тесно сближаются, что позволяет антителу распознать указанный эпитоп. Способы определения конформации эпитопов включают, не ограничиваясь перечисленными, рентгеновская кристаллография, двумерная ядерная магнитно-резонансная (2D-ЯМР) спектроскопия и сайт-направленное спиновое мечение, и электронная парамагнитно-резонансная (ЭПР) спектроскопия.

Способ картирования эпитопов описан ниже. В том случае, если область (непрерывный аминокислотный отрезок) белка FLT3 человека меняют/заменяют на соответствующую область не принадлежащего человеку и не принадлежащего примату антигена FLT3 (например, FLT3 мыши, однако могут также быть допустимы другие FLT3, например курицы, крысы, хомяка, кролика и т.п.), ожидается, что будет происходить уменьшение связывания связывающего домена, если только указанный связывающий домен не отличается перекрестной-реактивностью в отношении используемого не принадлежащего человеку и не принадлежащего примату FLT3. Указанное уменьшение предпочтительно составляет по меньшей ме

- 10 040387 ре 10, 20, 30, 40 или 50%; более предпочтительно по меньшей мере 60, 70 или 80% и наиболее предпочтительно 90, 95 или даже 100% по сравнению со связыванием с соответствующей областью в белке FLT3 человека, при допущении, что связывание с соответствующей областью в белке FLT3 человека составляет 100%. Предусмотрена экспрессия вышеупомянутых химер FLT3 человека/не принадлежащего человеку FLT3 в клетках СНО. Также предусмотрена возможность слияния химер FLT3 человека/не принадлежащего человеку FLT3 с трансмембранным доменом и/или цитоплазматическим доменом другого мембраносвязанного белка, такого как ЕрСАМ, см. примеры 1 и 2.

Согласно альтернативному или дополнительному способу картирования эпитопов может быть получено несколько усеченных версий внеклеточного домена FLT3 человека для определения специфической области, которая распознается связывающим доменом. В указанных усеченных версиях разные внеклеточные домены/субдомены или области FLT3 пошагово удаляют, начиная с N-конца. Приведены усеченные версии FLT3, которые получали и применяли в контексте настоящего изобретения. Предусмотрена возможность экспрессии усеченных версий FLT3 в клетках СНО. Также предусмотрена возможность слияния усеченных версий FLT3 с трансмембранным доменом и/или цитоплазматическим доменом другого мембраносвязанного белка, такого как ЕрСАМ. Также предусмотрена возможность включения в усеченные версии FLT3 сигнального пептидного домена на N-конце, например, сигнального пептида, происходящего из сигнального пептида тяжелой цепи IgG мыши. Также предусмотрена возможность включения в усеченные версии FLT3 домена v5 на N-конце (после сигнального пептида), который позволяет верифицировать их корректную экспрессию на поверхности клеток, ожидается, что в случае будет происходить уменьшение или утрата связывания тех усеченных версий FLT3, которые уже не включают область FLT3, распознаваемую связывающим доменом. Указанное уменьшение связывания составляет предпочтительно по меньшей мере 10, 20, 30, 40, 50%; более предпочтительно - по меньшей мере 60, 70, 80% и наиболее предпочтительно 90, 95 или даже 100%, при допущении, что связывание полного белка FLT3 человека (или его внеклеточной области или домена) составляет 100%, см. пример 3.

Дополнительный способ определения вклада специфического остатка целевого антигена в распознавание конструкцией антитела или связывающим доменом представлен сканированием аланином (см., например, Morrison KL & Weiss GA. Cur Opin Chem Biol. 2001 Jun; 5(3):302-7), при котором каждый остаток, который должен быть проанализирован, заменяют на аланин, например, посредством сайтспецифического мутагенеза. Аланин применяют ввиду наличия не занимающей значительного объема химически инертной метильной функциональной группы, которая, тем не менее, имитирует шаблон вторичной структуры, которой обладают многие другие аминокислоты. Иногда, в тех случаях, когда требуется сохранение размера мутированных остатков, могут применяться объемные аминокислоты, такие как валин или лейцин. Сканирование аланином представляет собой отработанную технологию, которая применялась на протяжении длительного периода времени.

Взаимодействие связывающего домена и эпитопа или области, содержащей эпитоп, подразумевает, что связывающий домен проявляет поддающуюся оценке аффинность в отношении указанного эпитопа/области, содержащей указанный эпитоп на конкретном белке или антигене (в данном случае, FLT3 и CD3, соответственно) и обычно не проявляет значимой реакционной способности в отношении белков или антигенов, отличных от FLT3 или CD3. Поддающаяся оценке аффинность включает связывание с аффинностью, составляющей приблизительно 10-6 М (кДа), или более сильной. Предпочтительно связывание считают специфическим, если сродство к связыванию составляет приблизительно 10-¹²-10-⁸ М, 10¹²-10-⁹ М, 10-¹²-10-¹⁰ М, 10-11-10-⁸ М, предпочтительно приблизительно 10-11-10-⁹ М. Тестирование на специфическое связывание или реакцию связывающего домена с мишенью может легко быть осуществлено, в том числе, путем сравнения реакции указанного связывающего домена с целевым белком или антигеном, и реакции указанного связывающего домена с белками или антигенами, отличными от FLT3 или CD3. Предпочтительно, связывающий домен согласно настоящему изобретению по существу не связывается с белками или антигенами, отличными от FLT3 или CD3 (т.е. первый связывающий домен не способен связываться с белками, отличными от FLT3, а второй связывающий домен не способен связываться с белками, отличными от CD3).

Термин по существу не связывает или не способен к связыванию означает, что связывающий домен согласно настоящему изобретению не связывает белок или антиген, отличный от FLT3 или CD3, т.е. не демонстрирует реакционной способности, составляющей более чем 30%, и предпочтительно демонстрирует реакционную способность, составляющую не более чем 20%, более предпочтительно не более чем 10%, в частности предпочтительно не более чем 9, 8, 7, 6 или 5% в отношении белков или антигенов, отличных от FLT3 или CD3, при допущении, что связывание FLT3 или CD3, соответственно, составляет 100%.

Считается, что специфическое связывание реализуется специфическими мотивами в последовательности аминокислот связывающего домена и антигена. Соответственно, достижение связывания обусловлено их первичной, вторичной и/или третичной структурой, а также вторичными модификациями указанных структур. Специфическое взаимодействие сайта взаимодействия с антигеном с соответствующим ему специфическим антигеном может приводить к простому связыванию указанного сайта с указанным антигеном. Кроме того, специфическое взаимодействие сайта взаимодействия с антигеном с

- 11 040387 соответствующим ему специфическим антигеном может, согласно альтернативному или дополнительному варианту, приводить к инициированию сигнала, например, благодаря индукции изменения конформации антигена, олигомеризации антигена и т.п.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Тклетки, при этом указанный первый связывающий домен связывается с эпитопом FLT3, который расположен в области FLT3 человека, имеющей последовательность, представленную в последовательности SEQ ID NO: 814 (кластер 1) или SEQ ID NO: 816 (кластер 3).

Предпочтительно, первый связывающий домен указанной конструкции биспецифического антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, и VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 151-156, SEQ ID NO: 161-166, SEQ ID NO: 171-176, SEQ ID NO: 181-186, SEQ ID NO: 191-196, SEQ ID NO: 201-206, SEQ ID NO: 211-216, SEQ ID NO: 221-226, SEQ ID NO: 231-236, SEQ ID NO: 241-246, SEQ ID NO: 251-256, SEQ ID NO: 261-266, SEQ ID NO: 271-276, SEQ ID NO: 281-286, SEQ ID NO: 291-296, SEQ ID NO: 301-306, SEQ ID NO: 311-316, SEQ ID NO: 321-326, SEQ ID NO: 331336, SEQ ID NO: 341-346, SEQ ID NO: 351-356, SEQ ID NO: 361-366, SEQ ID NO: 371-376, SEQ ID NO: 381-386, SEQ ID NO: 391-396, SEQ ID NO: 401-406, SEQ ID NO: 411-416, SEQ ID NO: 421-426, SEQ ID NO: 431-436, SEQ ID NO: 441-446, SEQ ID NO: 451-456, SEQ ID NO: 461-466, SEQ ID NO: 471-476, SEQ ID NO: 481-486, SEQ ID NO: 491-496, SEQ ID NO: 501-506, SEQ ID NO: 511-516, SEQ ID NO: 521-526, SEQ ID NO: 531-536, SEQ ID NO: 541-546, SEQ ID NO: 551-556, SEQ ID NO: 561-566, SEQ ID NO: 571576, SEQ ID NO: 581-586, SEQ ID NO: 591-596, SEQ ID NO: 601-606, SEQ ID NO: 611-616, SEQ ID NO: 621-626, SEQ ID NO: 631-636, SEQ ID NO: 641-646, SEQ ID NO: 651-656, SEQ ID NO: 661-666, SEQ ID NO: 671-676, SEQ ID NO: 681-686, SEQ ID NO: 691-696, SEQ ID NO: 701-706, SEQ ID NO: 711-716, SEQ ID NO: 721-726, SEQ ID NO: 731-736, SEQ ID NO: 741-746, SEQ ID NO: 751-756, SEQ ID NO: 761-766, SEQ ID NO: 771-776, SEQ ID NO: 781-786, SEQ ID NO: 791-796.

Термин вариабельный относится к частям доменов антитела или иммуноглобулина, демонстрирующим вариабельность последовательности и вовлеченным в определение специфичности и сродства к связыванию (аффинности) конкретного антитела (т.е. вариабельный(ые) домен(ы)). При спаривании вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL) образуется один антигенсвязывающий сайт.

Вариабельность распределена по вариабельным доменам антител неравномерно; она сконцентрирована в субдоменах каждой из вариабельных областей тяжелых и легких цепей. Указанные субдомены называют гипервариабельными областями или определяющими комплементарность областями (CDR). Более консервативные (т.е. не гипервариабельные) части вариабельных доменов называют каркасными областями (FRM, или FR); они обеспечивают трехмерный скаффолд для шести CDR с образованием антигенсвязывающей поверхности. Каждый из вариабельных доменов встречающихся в природе тяжелых и легких цепей содержит четыре области FRM (FR1, FR2, FR3 и FR4), главным образом принимающие β-складчатую конфигурацию, соединенные тремя гипервариабельными областями, которые образуют петли, соединяющие β-складчатые структуры, а в некоторых случаях входящие в их состав. Гипервариабельные области каждой цепи удерживаются в непосредственной близости друг от друга областью FRM и, совместно с гипервариабельными областями другой цепи, вносят вклад в образование антигенсвязывающего сайта (см. Kabat et al., выше).

Термины CDR (область CDR) и, во множественном числе, области CDR, относятся к определяющим комплементарность областям, из которых три определяют характер связывания вариабельной области легкой цепи (CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3), и еще три определяют характер связывания вариабельной области тяжелой цепи (CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3). Области CDR содержат большую часть остатков, ответственных за специфические взаимодействия антитела с антигеном и, таким образом, вносят вклад в функциональную активность молекулы антитела: они представляют собой основную детерминанту антигенной специфичности.

Для точного определения границ и длины CDR могут использоваться разные системы классификации и нумерации. Области CDR могут, соответственно, быть названы в соответствии с определениями по Kabat, Chothia, контактной или любой другой границы, в том числе в соответствии с системой нумерации согласно описанию в настоящем документе. Несмотря на расхождения в определении границ, все указанные системы до некоторой степени совпадают в отношении так называемых гипервариабельных областей в пределах вариабельных последовательностей. Определенные в соответствии с указанными системами CDR могут, соответственно, различаться длиной и площадью границ со смежной каркасной областью. См., например, Kabat (подход, основанный на межвидовой вариабельности последовательностей), Chothia (подход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов антигенантитело) и/или MacCallum (Kabat et al., см. выше; Chothia et al., J. Mol. Biol, 1987, 196: 901-917; и MacCallum et al., J. Mol. Biol, 1996, 262: 732). Еще один стандарт для характеризации сайтов связывания ан- 12 040387 тигена представлен определением по AbM, которое используется в программном обеспечении AbM для моделирования антител от Oxford Molecular. См., например, Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Rontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg). В тех случаях, когда согласно двум техникам идентификации остатков выявляют частично совпадающие, однако не идентичные области, они могут быть скомбинированы для определения гибридной CDR. Однако предпочтительной является нумерация в соответствии с так называемой системой Kabat.

Как правило, области CDR образуют петлеобразную структуру, которая может быть классифицирована как каноническая структура. Термин каноническая структура относится к основной конформации цепи, принимаемой антигенсвязывающими (CDR) петлями. С помощью сравнительных структурных исследований было обнаружено, что пять из шести антигенсвязывающих петель имеют только ограниченный репертуар доступных конформаций. Каждая каноническая структура может быть охарактеризована торсионными углами полипептидного остова. Соответствующие петли между антителами могут, соответственно, иметь очень сходные трехмерные структуры, несмотря на высокую вариабельность последовательностей аминокислот в большинстве частей петель (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., 1987, 196: 901; Chothia et al., Nature, 1989, 342: 877; Martin and Thornton, J. Mol. Biol, 1996, 263: 800). Кроме того, имеется взаимосвязь между принимаемой петлевидной структурой и окружающими ее последовательностями аминокислот.

Конформацию для конкретного канонического класса определяют по длине петли и остаткам аминокислот, находящихся в ключевых положениях в пределах петли, а также в пределах консервативного каркаса (т.е. вне петли). Принадлежность к конкретному каноническому классу, может, соответственно, быть установлена на основании присутствия указанных ключевых остатков аминокислот.

Термин каноническая структура может также учитывать такие особенности, как линейная последовательность антитела, например, согласно каталогизированным Kabat (Kabat et al., см. выше). Схема (система) нумерации Kabat представляет собой широко принятый стандарт единообразной нумерации остатков аминокислот вариабельного домена антитела и является предпочтительной схемой для применения согласно настоящему изобретению, как дополнительно указывается в других разделах настоящего документа. При определении канонической структуры антитела могут также учитываться дополнительные структурные особенности. Например, различия, полностью не отраженные при нумерации по Kabat, могут быть описаны в системе нумерации Chothia с соавт. и/или выявлены с применением других техник, например, кристаллографии и двухмерного или трехмерного численного моделирования. Соответственно, заданная последовательность антитела может быть отнесена к каноническому классу, что позволяет, в том числе, идентифицировать подходящие опорные последовательности (например, на основании желания включить в библиотеку множество канонических структур). Нумерация последовательностей аминокислот антител по Kabat и структурные особенности согласно описанию у Chothia et al., см. выше, а также их значение для интерпретации канонических аспектов структуры антител, описаны в опубликованных источниках. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации разных классов иммуноглобулинов хорошо известны в данной области техники. См. обзор структуры антител в источнике: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, eds. Harlow et al., 1988.

Область CDR3 легкой цепи и, в особенности, область CDR3 тяжелой цепи могут представлять собой наиболее важные детерминанты при связывании антигена в пределах вариабельных областей легкой и тяжелой цепей. В некоторых конструкциях антитела CDR3 тяжелой цепи, по-видимому, представляет собой основную область контакта между антигеном и антителом. Схемы выбора in vitro, согласно которым вариации присутствуют только в CDR3, могут применяться для получения варьирующих связывающих свойств антитела, или для определения того, какие остатки вносят вклад в связывание антигена. Поэтому, как правило, CDR3 представляет собой наиболее значительный источник молекулярного разнообразия в пределах сайта связывания антитела. Например, длина H3 может составлять всего два остатка аминокислот или может составлять более чем 26 аминокислот.

В классическом варианте полноразмерного антитела или иммуноглобулина каждая легкая (L) цепь соединена с тяжелой (Н) цепью одной ковалентной дисульфидной связью, а две Н-цепи соединены вместе одной или более дисульфидными связями в зависимости от изотипа Н-цепей. Домен СН, расположенный ближе всего к VH, обычно обозначают как СН1. Константные (С) домены непосредственно не вовлечены в связывание антигена, однако демонстрируют различные эффекторные функции, такие как антитело-зависимая клеточноопосредованная цитотоксичность и активация комплемента. Fc-область антитела расположена в константных доменах тяжелых цепей и способна, например, взаимодействовать с расположенными на клеточной поверхности Fc-рецепторами.

Последовательность генов антител после сборки и соматической мутации в значительной степени варьирует, и указанные варьирующие гены кодируют, согласно подсчетам, 10¹⁰ разных молекул антител (Immunoglobulin Genes, 2^nd ed., eds. Jonio et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995). Соответственно иммунная система обеспечивает репертуар иммуноглобулинов. Термин репертуар относится к по меньшей мере одной последовательности нуклеотидов, происходящей полностью или частично из по меньшей мере одной последовательности, кодирующей по меньшей мере один иммуноглобулин. Указанная

- 13 040387 последовательность или последовательности могут быть получены путем реаранжировки in vivo V-, D- и J-сегментов тяжелых цепей, и V- и J-сегментов легких цепей. Как вариант, указанная последовательность или последовательности могут быть получены из клетки, в ответ на которую происходит реаранжировка, например, при in vitro стимуляции. Как вариант, часть указанной последовательности или последовательностей, или указанная последовательность или последовательности полностью могут быть получены с применением сплайсинга ДНК, синтеза нуклеотидов, мутагенеза и других способов, см., например, патент США 5565332. Репертуар может включать только одну последовательность или может включать совокупность последовательностей, в том числе в виде генетически разнородного набора.

Предпочтительная конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением может также быть определена как конструкция биспецифического антитела, содержащая первый (предпочтительно принадлежащий человеку) связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Тклетки, при этом указанный первый связывающий домен связывается с тем же эпитопом FLT3, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из FL-1 - FL-65, т.е. антитело, содержащие VH-область, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, и VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 151-156, SEQ ID NO: 161-166, SEQ ID NO: 171-176, SEQ ID NO: 181-186, SEQ ID NO: 191-196, SEQ ID NO: 201-206, SEQ ID NO: 211-216, SEQ ID NO: 221-226, SEQ ID NO: 231-236, SEQ ID NO: 241-246, SEQ ID NO: 251-256, SEQ ID NO: 261266, SEQ ID NO: 271-276, SEQ ID NO: 281-286, SEQ ID NO: 291-296, SEQ ID NO: 301-306, SEQ ID NO: 311-316, SEQ ID NO: 321-326, SEQ ID NO: 331-336, SEQ ID NO: 341-346, SEQ ID NO: 351-356, SEQ ID NO: 361-366, SEQ ID NO: 371-376, SEQ ID NO: 381-386, SEQ ID NO: 391-396, SEQ ID NO: 401-406, SEQ ID NO: 411-416, SEQ ID NO: 421-426, SEQ ID NO: 431-436, SEQ ID NO: 441-446, SEQ ID NO: 451-456, SEQ ID NO: 461-466, SEQ ID NO: 471-476, SEQ ID NO: 481-486, SEQ ID NO: 491-496, SEQ ID NO: 501506, SEQ ID NO: 511-516, SEQ ID NO: 521-526, SEQ ID NO: 531-536, SEQ ID NO: 541-546, SEQ ID NO: 551-556, SEQ ID NO: 561-566, SEQ ID NO: 571-576, SEQ ID NO: 581-586, SEQ ID NO: 591-596, SEQ ID NO: 601-606, SEQ ID NO: 611-616, SEQ ID NO: 621-626, SEQ ID NO: 631-636, SEQ ID NO: 641-646, SEQ ID NO: 651-656, SEQ ID NO: 661-666, SEQ ID NO: 671-676, SEQ ID NO: 681-686, SEQ ID NO: 691-696, SEQ ID NO: 701-706, SEQ ID NO: 711-716, SEQ ID NO: 721-726, SEQ ID NO: 731-736, SEQ ID NO: 741746, SEQ ID NO: 751-756, SEQ ID NO: 761-766, SEQ ID NO: 771-776, SEQ ID NO: 781-786, SEQ ID NO: 791-796.

Оценка того, связывается ли конструкция антитела с тем же эпитопом на FLT3, что и другая задан ная конструкция антитела, может осуществляться, например, путем картирования эпитопов с химерными или усеченными целевыми молекулами, например, согласно описанию в настоящем документе выше и в прилагаемых примерах.

Предпочтительная конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением может также быть определена как конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен (предпочтительно, домен человека), который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, при этом указанный первый связывающий домен конкурирует за связывание с антителом, выбранным из группы, состоящей из FL-1 - FL-65, т.е. антитело, содержащее VH-область, содержащую CDR-H1, CDRH2 и CDR-H3, и VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из группы, состоящей из описанных выше последовательностей.

Оценка того, конкурирует ли конструкция антитела за связывание с другой заданной конструкцией антитела может осуществляется в ходе конкурентного анализа, такого как конкурентный ИФА ELISA или клеточный конкурентный анализ. Могут также применяться авидинизированные микрочастицы (гранулы). Аналогично покрытому авидином планшету для ИФА ELISA, при проведении реакции с биотинилированным белком каждая из указанных гранул может применяться в качестве субстрата для выполнения анализа. Антиген наносят на гранулу и затем предварительно покрывают первым антителом. Добавляют второе антитело и определяют какое-либо дополнительное связывание. Возможные способы регистрации включают проточную цитометрию.

Согласно одному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область выбранную из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 167, SEQ ID

NO: 177, SEQ ID NO

NO: 237, SEQ ID NO

NO: 297, SEQ ID NO

NO: 357, SEQ ID NO

NO: 417, SEQ ID NO

NO: 477, SEQ ID NO

NO: 537, SEQ ID NO

NO: 597, SEQ ID NO

NO: 657, SEQ ID NO

187, SEQ ID NO

247, SEQ ID NO

307, SEQ ID NO

367, SEQ ID NO

427, SEQ ID NO

487, SEQ ID NO

547, SEQ ID NO

607, SEQ ID NO

667, SEQ ID NO

197, SEQ ID NO 257, SEQ ID NO 317, SEQ ID NO 377, SEQ ID NO 437, SEQ ID NO 497, SEQ ID NO 557, SEQ ID NO 617, SEQ ID NO 677, SEQ ID NO

207, SEQ ID NO

267, SEQ ID NO

327, SEQ ID NO

387, SEQ ID NO

447, SEQ ID NO

507, SEQ ID NO

567, SEQ ID NO

627, SEQ ID NO

687, SEQ ID NO

217, SEQ ID NO

277, SEQ ID NO

337, SEQ ID NO

397, SEQ ID NO

457, SEQ ID NO

517, SEQ ID NO

577, SEQ ID NO

637, SEQ ID NO

697, SEQ ID NO

227, SEQ ID

287, SEQ ID

347, SEQ ID

407, SEQ ID

467, SEQ ID

527, SEQ ID

587, SEQ ID

647, SEQ ID

707, SEQ ID

- 14 040387

NO: 717, SEQ ID NO: 727, SEQ ID NO: 737, SEQ ID NO: 747, SEQ ID NO: 757, SEQ ID NO: 767, SEQ ID

NO: 777, SEQ ID NO: 787 и SEQ ID NO: 797.

Согласно дополнительному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VL-область, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 208, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 228,

SEQ ID NO: 238, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 278, SEQ ID NO:288,

SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 308, SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 328, SEQ ID NO: 338, SEQ ID NO:348,

SEQ ID NO: 358, SEQ ID NO: 368, SEQ ID NO: 378, SEQ ID NO: 388, SEQ ID NO: 398, SEQ ID NO:408,

SEQ ID NO: 418, SEQ ID NO: 428, SEQ ID NO: 438, SEQ ID NO: 448, SEQ ID NO: 458, SEQ ID NO:468,

SEQ ID NO: 478, SEQ ID NO: 488, SEQ ID NO: 498, SEQ ID NO: 508, SEQ ID NO: 518, SEQ ID NO:528,

SEQ ID NO: 538, SEQ ID NO: 548, SEQ ID NO: 558, SEQ ID NO: 568, SEQ ID NO: 578, SEQ ID NO:588,

SEQ ID NO: 598, SEQ ID NO: 608, SEQ ID NO: 618, SEQ ID NO: 628, SEQ ID NO: 638, SEQ ID NO:648,

SEQ ID NO: 658, SEQ ID NO: 668, SEQ ID NO: 678, SEQ ID NO: 688, SEQ ID NO: 698, SEQ ID NO:708,

SEQ ID NO: 718, SEQ ID NO: 728, SEQ ID NO: 738, SEQ ID NO: 748, SEQ ID NO: 758, SEQ ID NO:768,

SEQ ID NO: 778, SEQ ID NO: 788 и SEQ ID NO:798.

Согласно другому варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область и VL-область, выбранные из группы, состоящей из пар VH-областей и VL-областей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 157+158, SEQ ID NO: 167+168, SEQ ID NO: 177+178, SEQ ID NO: 187+188, SEQ ID NO: 197+198, SEQ ID NO: 207+208, SEQ ID NO: 217+218, SEQ ID NO: 227+228, SEQ ID NO: 237+238, SEQ ID NO: 247+248, SEQ ID NO: 257+258, SEQ ID NO: 267+268, SEQ ID NO: 277+278, SEQ ID NO: 287+288, SEQ ID NO: 297+298, SEQ ID NO: 307+308, SEQ ID NO: 317+318, SEQ ID NO: 327+328, SEQ ID NO: 337+338, SEQ ID NO: 347+348, SEQ ID NO: 357+358, SEQ ID NO: 367+368, SEQ ID NO: 377+378, SEQ ID NO: 387+388, SEQ ID NO: 397+398, SEQ ID NO: 407+408, SEQ ID NO: 417+418, SEQ ID NO: 427+428, SEQ ID NO: 437+438, SEQ ID NO: 447+448, SEQ ID NO: 457+458, SEQ ID NO: 467+468, SEQ ID NO: 477+478, SEQ ID NO: 487+488, SEQ ID NO: 497+498, SEQ ID NO: 507+508, SEQ ID NO: 517+518, SEQ ID NO: 527+528, SEQ ID NO: 537+538, SEQ ID NO: 547+548, SEQ ID NO: 557+558, SEQ ID NO: 567+568, SEQ ID NO: 577+578, SEQ ID NO: 587+588, SEQ ID NO: 597+598, SEQ ID NO: 607+608, SEQ ID NO: 617+618, SEQ ID NO: 627+628, SEQ ID NO: 637+638, SEQ ID NO: 647+648, SEQ ID NO: 657+658, SEQ ID NO: 667+668, SEQ ID NO: 677+678, SEQ ID NO: 687+688, SEQ ID NO: 697+698, SEQ ID NO: 707+708, SEQ ID NO: 717+718, SEQ ID NO: 727+728, SEQ ID NO: 737+738, SEQ ID NO: 747+748, SEQ ID NO: 757+758, SEQ ID NO: 767+768, SEQ ID NO: 777+778, SEQ ID NO: 787+788 и SEQ ID NO: 797+798.

Согласно еще одному дополнительному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает полипептид, выбранный из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789 и SEQ ID NO: 799.

Описанные выше первые связывающие домены (определяемые их областями CDR, VH-областью и VL-областью, и их комбинациями) охарактеризованы как связывающие домены, которые связываются с эпитопом FLT3, который расположен в области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 819.

Термин биспецифический в настоящем документе относится к конструкции антитела, которая является по меньшей мере биспецифической, т.е. содержит по меньшей мере первый связывающий домен и второй связывающий домен, отличающиеся тем, что указанный первый связывающий домен связывается с одним антигеном или мишенью (в данном случае, FLT3), а второй связывающий домен связывается с другим антигеном или мишенью (в данном случае, CD3). Соответственно конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением отличаются специфичностью в отношении по меньшей мере двух разных антигенов или мишеней. Термином конструкция биспецифического антитела согласно настоящему изобретению также охвачены конструкции мультиспецифического антитела, такие как конструкции триспецифического антитела, причем последние включают три связывающих домена, или конструкции, отличающиеся специфичностью в отношении более чем трех (например, четырех, пяти...) мишеней.

Учитывая, что конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением являются (по

- 15 040387 меньшей мере) биспецифическими, они не встречаются в природе и заметно отличаются от встречающихся в природе продуктов. Конструкция биспецифического антитела или иммуноглобулина, соответственно, представляет собой искусственное гибридное антитело или иммуноглобулин, содержащее по меньшей мере два отдельных сайта связывания с разной специфичностью. Конструкции биспецифического антитела могут быть получены с применением различных способов, в том числе слияния гибридом или соединения Fab'-фрагментов. См., например, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990).

По меньшей мере два связывающих домена и вариабельные домены конструкции антитела согласно настоящему изобретению могут содержать или могут не содержать пептидные линкеры (спейсерные пептиды). Термин пептидный линкер содержит в соответствии с настоящим изобретением последовательность аминокислот, посредством которой последовательности аминокислот одного (вариабельного и/или связывающего) домена и другого (вариабельного и/или связывающего) домена указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению соединены между собой. Имеющий существенное значение технический признак такого пептидного линкера заключается в том, что он не отличается какой-либо полимеризационной активностью. К подходящим пептидным линкерам относятся описанные в патентах США 4751180 и 4935233 или в WO 88/09344. Пептидные линкеры могут также применяться для прикрепления других доменов, или модулей, или областей (таких как увеличивающие время полужизни домены) к конструкции антитела согласно настоящему изобретению.

В случае, если используют линкер, длина и последовательность указанного линкера предпочтительно достаточны для обеспечения того, чтобы каждый из указанных первого и второго доменов мог, независимо от другого, сохранять свою дифференциальную связывающую специфичность. Пептидные линкеры, соединяющие по меньшей мере два связывающих домена (или два вариабельных домена) в конструкции антитела согласно настоящему изобретению, предпочтительно содержат только незначительное число остатков аминокислот, например, 12 остатков аминокислот или менее. Соответственно, предпочтительными являются пептидные линкеры, содержащие 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6 или 5 остатков аминокислот. Предусмотренный пептидный линкер, содержащий менее чем 5 аминокислот, содержит 4, 3, 2 аминокислоты или одну аминокислоту, при этом богатые Gly линкеры являются предпочтительными. В частности, предпочтительной одиночной аминокислотой в контексте указанного пептидного линкера является Gly. Соответственно, указанный пептидный линкер может состоять из одной аминокислоты Gly. Другой предпочтительный вариант реализации пептидного линкера представлен последовательностью аминокислот Gly-Gly-Gly-Gly-Ser, т.е. Gly₄Ser (SEQ ID NO: 1), или ее полимерами, т.е. (Gly₄Ser)x, где x представляет собой целое число, составляющее 1 или более (например, 2 или 3). Предпочтительные линкеры представлены в последовательностях SEQ ID NO: 1-9. Характеристики указанного пептидного линкера, включая отсутствие поддержки вторичных структур, известны в данной области техники и описаны, например, в источниках: Dall'Acqua et al. (Biochem. (1998) 37, 9266-9273), Cheadle et al. (Mol Immunol (1992) 29, 21-30), и Raag and Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80). Предпочтительными являются пептидные линкеры, которые помимо прочего не поддерживают образование каких-либо вторичных структур. Связывание указанных доменов между собой может обеспечиваться, например, с применением генетического конструирования, согласно описанию в примерах. Способы получения слитых и функционально связанных биспецифических одноцепочечных конструкций и их экспрессии в клетках млекопитающих или бактерий хорошо известны в данной области техники (см., например, источники: WO 99/54440 или Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2001).

Как описано выше в настоящем документе, согласно настоящему изобретению предложен предпочтительный вариант реализации, отличающийся тем, что формат указанной конструкции антитела выбран из группы, состоящей из (scFv)₂, scFv/однодоменного mAb, диател и олигомеров любых из перечисленных форматов.

В соответствии с частным предпочтительным вариантом реализации и согласно описанию в прилагаемых примерах, указанная конструкция антитела согласно настоящему изобретению представляет собой биспецифическую одноцепочечную конструкцию антитела, более предпочтительно - биспецифический одноцепочечный Fv (scFv). Хотя два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируют отдельные гены, они могут быть объединены с применением рекомбинантных способов, посредством синтетического линкера - согласно описанию выше в настоящем документе - что позволяет продуцировать их в виде одной белковой цепи, в которой области VL и VH спарены с образованием моновалентной молекулы; см. например, Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85: 5879-5883). Указанные фрагменты антител получают с применением стандартных техник, известным специалистам в данной области техники, и функцию фрагментов оценивают таким же образом, как и функцию целых или полноразмерных антител. Одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) представляет собой, таким образом, слитый белок, содержащий вариабельные области тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL) иммуноглобулинов, обычно соединенные коротким линкерным пептидом, длина которого составляет от приблизительно 10 до приблизительно 25 аминокислот, предпочтительно, приблизительно от 15 до 20 аминокислот. Указанный линкер обычно богат глицином для обеспечения гибкости, а также серином или треонином для обеспе- 16 040387 чения растворимости, и может соединять N-конец VH с С-концом VL, или наоборот. Указанный белок сохраняет специфичность исходного иммуноглобулина, несмотря на удаление константных областей и введение линкера.

Биспецифические одноцепочечные молекулы известны в данной области техники и описаны в источниках: WO 99/54440, Mack, J. Immunol. (1997), 158, 3965-3970, Mack, PNAS, (1995), 92, 7021-7025, Kufer, Cancer Immunol. Immunother., (1997), 45, 193-197, Loffler, Blood, (2000), 95, 6, 2098-2103, Bruhl, Immunol., (2001), 166, 2420-2426, Kipriyanov, J. Mol. Biol., (1999), 293, 41-56. Описанные техники получения одноцепочечных антител (см., в том числе, патент США 4946778, Kontermann and Dubel (2010), см. выше, и Little (2009), см. выше) могут быть адаптированы для получения одноцепочечных конструкций антитела, специфически распознающих выбранную(ые) мишень(и).

Бивалентные (также называемые дивалентными) или биспецифические одноцепочечные вариабельные фрагменты (би-scFv или ди-scFv, имеющие формат (scFv)₂ могут быть сконструированы путем соединения двух молекул scFv (например, линкерами согласно описанию выше в настоящем документе). В том случае, если указанные две молекулы scFv имеют одинаковую специфичность связывания, итоговая (scFv)₂ молекула предпочтительно называется бивалентной (т.е. имеет две валентности в отношении одного и того же целевого эпитопа). В том случае, если две молекулы scFv имеют разную специфичность связывания, итоговая молекула (scFv)₂ предпочтительно называется биспецифической. Указанное соединение может осуществляться путем получения одной пептидной цепи с двумя областями VH и двумя областями VL, с получением тандемных scFv (см., например, Kufer P. et al., (2004) Trends in Biotechnology 22(5):238-244). Другая возможность заключается в получении молекул scFv с линкерными пептидами, слишком короткими для совместной укладки двух вариабельных областей (например, длиной приблизительно пять аминокислот), что заставляет scFv димеризоваться. Указанный тип известен как диатела (см., например Hollinger, Philipp et al., (July 1993) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 90 (14): 6444-8.).

В соответствии с дополнительным предпочтительным вариантом реализации конструкции антитела согласно настоящему изобретению тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL) связывающего домена, который связывается с целевым антигеном FLT3 или CD3, не соединены прямо посредством вышеописанного пептидного линкера, а связывающий домен образуется благодаря образованию биспецифической молекулы согласно описанию для диатела. Соответственно VH-цепь связывающего CD3 домена может быть слита с VL связывающего FLT3 домена посредством такого пептидного линкера, а VH-цепь связывающего FLT3 домена - слита с VL связывающего CD3 домена посредством такого пептидного линкера.

Однодоменные антитела содержат всего один (мономерный) вариабельный домен антитела, который способен селективно связываться со специфическим антигеном, независимо от других V-областей или доменов. Первые однодоменные антитела были сконструированы из состоящих из тяжелых цепей антител, обнаруживаемых у верблюдовых, и их называют VHH-фрагментами. У хрящевых рыб также имеются состоящие из тяжелых цепей антитела (IgNAR), из которых могут быть получены однодоменные антитела, называемые VNAR-фрагментами. Альтернативный подход заключается в расщеплении димерных вариабельных доменов из распространенных иммуноглобулинов, например, человека или грызунов, на мономеры, с получением таким образом VH или VL в качестве однодоменного антитела. Хотя в настоящее время большинство исследований однодоменных антител основаны на вариабельных доменах тяжелых цепей, было показано, что нанотела, происходящие из легких цепей, также специфически связываются с целевыми эпитопами. Примеры однодоменных антител называют sdAb, нанотелами или однодоменными антителами с одним вариабельным доменом.

(Однодоменное mAb)2, соответственно, представляет собой конструкцию моноклонального антитела, состоящую (по меньшей мере) из двух однодоменных моноклональных антител, которые индивидуальным образом выбраны из группы, содержащей VH, VL, VHH и V_NAR. Линкер предпочтительно представлен в форме пептидного линкера. Аналогичным образом, scFv/однодоменное mAb представляет собой конструкцию моноклонального антитела, состоящую по меньшей мере из одного однодоменного антитела согласно описанию выше и одной молекулы scFv согласно описанию выше. В этом случае также линкер предпочтительно представлен в форме пептидного линкера.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предусмотрена конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Тклетки, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен связывается с эпитопом FLT3, который расположен в области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 819 (кластер 1).

Соответственно, согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения первый связывающий домен указанной конструкции биспецифического антитела содержит VH-область, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, и VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 151-156, SEQ ID NO: 161-166, SEQ ID NO: 171-176, SEQ ID NO: 181-186, SEQ ID NO: 191-196, SEQ ID NO: 201-206, SEQ ID NO: 211-216, SEQ ID NO: 221-226, SEQ ID NO: 231-236, SEQ ID NO: 241-246, SEQ ID NO: 251-256, SEQ ID NO: 261-266, SEQ ID NO: 271-276, SEQ ID NO: 281-286, SEQ ID NO: 291-296, SEQ ID NO: 301-306, SEQ ID NO: 311-316, SEQ ID NO: 321- 17 040387

326, SEQ ID NO: 331-336, SEQ ID NO: 341-346, SEQ ID NO: 351-356, SEQ ID NO: 361-366, SEQ ID NO: 371-376, SEQ ID NO: 381-386, SEQ ID NO: 391-396, SEQ ID NO: 401-406, SEQ ID NO: 411-416, SEQ ID NO: 421-426, SEQ ID NO: 431-436, SEQ ID NO: 441-446, SEQ ID NO: 451-456, SEQ ID NO: 461-466, SEQ ID NO: 471-476, SEQ ID NO: 481-486, SEQ ID NO: 491-496, SEQ ID NO: 501-506, SEQ ID NO: 511-516, SEQ ID NO: 521-526, SEQ ID NO: 531-536, SEQ ID NO: 541-546, SEQ ID NO: 551-556, SEQ ID NO: 561566, SEQ ID NO: 571-576, SEQ ID NO: 581-586, SEQ ID NO: 591-596, SEQ ID NO: 601-606, SEQ ID NO: 611-616, SEQ ID NO: 621-626, SEQ ID NO: 631-636, SEQ ID NO: 641-646, SEQ ID NO: 651-656, SEQ ID NO: 661-666, SEQ ID NO: 671-676, SEQ ID NO: 681-686, SEQ ID NO: 691-696, SEQ ID NO: 701-706, SEQ ID NO: 711-716, SEQ ID NO: 721-726, SEQ ID NO: 731-736, SEQ ID NO: 741-746, SEQ ID NO: 791-796.

Согласно одному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO:

NO NO NO NO NO NO NO NO NO NO

177, SEQ ID NO

237, SEQ ID NO

297, SEQ ID NO

357, SEQ ID NO

417, SEQ ID NO

477, SEQ ID NO

537, SEQ ID NO

597, SEQ ID NO

657, SEQ ID NO

187, SEQ ID NO

247, SEQ ID NO

307, SEQ ID NO

367, SEQ ID NO

427, SEQ ID NO

487, SEQ ID NO

547, SEQ ID NO

607, SEQ ID NO

667, SEQ ID NO

197, SEQ ID NO

257, SEQ ID NO

317, SEQ ID NO

377, SEQ ID NO

437, SEQ ID NO

497, SEQ ID NO

557, SEQ ID NO

617, SEQ ID NO

697, SEQ ID NO

207, SEQ ID NO

267, SEQ ID NO

327, SEQ ID NO

387, SEQ ID NO

447, SEQ ID NO

507, SEQ ID NO

567, SEQ ID NO

627, SEQ ID NO

707, SEQ ID NO

157, SEQ ID NO: 167, SEQ ID

217, SEQ ID NO

277, SEQ ID NO

337, SEQ ID NO

397, SEQ ID NO

457, SEQ ID NO

517, SEQ ID NO

577, SEQ ID NO

637, SEQ ID NO

717, SEQ ID NO

227, SEQ ID

287, SEQ ID

347, SEQ ID

407, SEQ ID

467, SEQ ID

527, SEQ ID

587, SEQ ID

647, SEQ ID

727, SEQ ID ции

737, SEQ ID NO: 747 и SEQ ID NO: 797.

Согласно дополнительному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкантитела согласно настоящему изобретению включает VL-область, выбранную из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO:

178, SEQ ID NO

238, SEQ ID NO

298, SEQ ID NO

358, SEQ ID NO

418, SEQ ID NO

478, SEQ ID NO

538, SEQ ID NO

598, SEQ ID NO

658, SEQ ID NO

188, SEQ ID NO

248, SEQ ID NO

308, SEQ ID NO

368, SEQ ID NO

428, SEQ ID NO

488, SEQ ID NO

548, SEQ ID NO

608, SEQ ID NO

668, SEQ ID NO

738, SEQ ID NO: 748 и SEQ ID NO

198, SEQ ID NO

258, SEQ ID NO

318, SEQ ID NO

378, SEQ ID NO

438, SEQ ID NO

498, SEQ ID NO

558, SEQ ID NO

618, SEQ ID NO

698, SEQ ID NO

798.

208, SEQ ID NO

268, SEQ ID NO

328, SEQ ID NO

388, SEQ ID NO

448, SEQ ID NO

508, SEQ ID NO

568, SEQ ID NO

628, SEQ ID NO

708, SEQ ID NO

158, SEQ ID NO

218, SEQ ID NO

278, SEQ ID NO

338, SEQ ID NO

398, SEQ ID NO

458, SEQ ID NO

518, SEQ ID NO

578, SEQ ID NO

638, SEQ ID NO

718, SEQ ID NO

168, 228, 288, 348, 408, 468, 528, 588, 648, 728,

Согласно другому варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область и VL-область, выбранные из группы, состоящей из пар VH-областей и VL-областей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 157+158, SEQ ID NO: 167+168, SEQ ID NO: 177+178, SEQ ID NO: 187+188, SEQ ID NO: 197+198, SEQ ID NO: 207+208, SEQ ID NO: 217+218, SEQ ID NO: 227+228, SEQ ID NO: 237+238, SEQ ID NO: 247+248, SEQ ID NO: 257+258, SEQ ID NO: 267+268, SEQ ID NO: 277+278, SEQ ID NO: 287+288, SEQ ID NO: 297+298, SEQ ID NO: 307+308, SEQ ID NO: 317+318, SEQ ID NO: 327+328, SEQ ID NO: 337+338, SEQ ID NO: 347+348, SEQ ID NO: 357+358, SEQ ID NO: 367+368, SEQ ID NO: 377+378, SEQ ID NO: 387+388, SEQ ID NO: 397+398, SEQ ID NO: 407+408, SEQ ID NO: 417+418, SEQ ID NO: 427+428, SEQ ID NO: 437+438, SEQ ID NO: 447+448, SEQ ID NO: 457+458, SEQ ID NO: 467+468, SEQ ID NO: 477+478, SEQ ID NO: 487+488, SEQ ID NO: 497+498, SEQ ID NO: 507+508, SEQ ID NO: 517+518, SEQ ID NO: 527+528, SEQ ID NO: 537+538, SEQ ID NO: 547+548, SEQ ID NO: 557+558, SEQ ID NO: 567+568, SEQ ID NO: 577+578, SEQ ID NO: 587+588, SEQ ID NO: 597+598, SEQ ID NO: 607+608, SEQ ID NO: 617+618, SEQ ID NO: 627+628, SEQ ID NO: 637+638, SEQ ID NO: 647+648, SEQ ID NO: 657+658, SEQ ID NO: 667+668, SEQ ID NO: 697+698, SEQ ID NO: 707+708, SEQ ID NO: 717+718, SEQ ID NO: 727+728, SEQ ID NO: 737+738, SEQ ID NO: 747+748 и SEQ ID NO: 797+798.

Согласно дополнительному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает полипептид, выбранный из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO: SEQ ID NO SEQ ID NO

179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO 239, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319, SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449, SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO 539, SEQ ID NO: 549, SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO

169,

229,

289,

349,

409,

469,

529,

589,

649,

- 18 040387

SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729,

SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 799.

Согласно настоящему изобретению также предусмотрена конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, отличающаяся тем, что указанный первый связывающий домен связывается с эпитопом FLT3, который расположен в области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 821 (кластер 3).

Соответственно, согласно дополнительному аспекту настоящего изобретения первый связывающий домен указанной конструкции биспецифического антитела содержит VH-область, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, и VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, представленные ниже: SEQ ID NO: 671-676, SEQ ID NO: 681-686, SEQ ID NO: 751-756, SEQ ID NO: 761-766, SEQ ID NO: 771-776 и SEQ ID NO: 781-786.

Согласно одному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область, представленную в последовательностях SEQ ID NO: 677, SEQ ID NO: 687, SEQ ID NO: 757, SEQ ID NO: 767, SEQ ID NO: 777 и SEQ ID NO: 787.

Согласно дополнительному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VL-область, представленную в последовательностях SEQ ID NO: 678, SEQ ID NO: 688, SEQ ID NO: 758, SEQ ID NO: 768, SEQ ID NO: 778 и SEQ ID NO: 788.

Согласно другому варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает VH-область и VL-область, выбранные из группы, состоящей из пар VH-областей и VL-областей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 677+678, SEQ ID NO: 687+688, SEQ ID NO: 757+758, SEQ ID NO: 767+768, SEQ ID NO: 777+778 и SEQ ID NO: 787+788.

Согласно дополнительному варианту реализации первый связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает полипептид, выбранный из группы, состоящей из последовательностей, представленных в последовательностях SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789.

Другая предпочтительная конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением может также быть определена как конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен (предпочтительно домен человека), который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, при этом указанный первый связывающий домен конкурирует за связывание с антителом, выбранным из группы, состоящей из FL-1 - FL-53, FL-55 - FL-60 и FL-65, т.е. антителом, содержащим VH-область, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, и VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из группы, состоящей из последовательностей, описанных выше.

Т-клетки или Т-лимфоциты представляют собой тип лимфоцитов (которые сами по себе являются типом лейкоцитов), которые играют центральную роль в клеточно-опосредованном иммунитете. Существует несколько подгрупп Т-клеток, каждая из которых отличается собственной функцией. Т-клетки можно отличить от других лимфоцитов, таких как В-клетки и NK-клетки, по присутствию на поверхности клеток Т-клеточного рецептора (TCR). TCR отвечает за распознавание антигенов, связанных с молекулами главного комплекса гистосовместимости (МНС), и состоит из двух разных белковых цепей. В 95% Т-клеток TCR состоит из цепей альфа (α) и бета (β). При взаимодействии TCR с антигенным пептидом и МНС (комплексом пептид/МНС) Т-лимфоцит активируется в ходе ряда биохимических событий, опосредованных ассоциированными ферментами, корецепторами, специализированными адапторными молекулами, и активируемыми или высвобождаемыми транскрипционными факторами.

Комплекс CD3-рецептора представляет собой белковый комплекс и состоит из четырех цепей. У млекопитающих указанный комплекс содержит цепь CD3y (гамма), цепь CD3δ (дельта) и две цепи CD3ε (эпсилон). Указанные цепи вступают в связь с Т-клеточным рецептором (TCR) и так называемой цепью ζ (зета) с образованием Т-клеточного комплекса рецептора CD3 и генерацией сигнала активации в Тлимфоцитах. Цепи CD3y (гамма), CD3δ (дельта) и CD3ε (эпсилон) представляют собой близкородственные белки клеточной поверхности суперсемейства иммуноглобулинов, содержащих один внеклеточный иммуноглобулиновый домен. Внутриклеточные концевые фрагменты молекул CD3 содержат один консервативный мотив, известный как иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив или, сокращенно, ITAM, который имеет существенное значение для сигнальной способности TCR. Молекула CD3эпсилон представляет собой полипептид, который у человека кодирует ген CD3E, расположенный на 11 хромосоме. Наиболее предпочтительный эпитоп CD3-эпсилон расположен в области остатков аминокислот 1-27 внеклеточного домена CD3-эпсилон человека.

Перенаправленный лизис целевых клеток за счет рекрутинга Т-клеток мультиспецифической, по меньшей мере, биспецифической конструкцией антитела включает образование цитолитического синапса и доставку перфорина и гранзимов. Активированные Т-клетки способны обеспечивать серийный ли- 19 040387 зис целевых клеток, и на них не влияют механизмы ускользания от иммунологического надзора, взаимодействующие с процессингом и представлением пептидного антигена, или клональной дифференцировкой Т-клеток; см., например, WO 2007/042261.

Цитотоксичность, опосредованная конструкциями биспецифического антитела к FLT3xCD3, может быть измерена различными путями. См. раздел примеров 10. Эффекторные клетки могут представлять собой, например, стимулированные обогащенные по CD8-положительным клеткам Т-клетки (человека) или нестимулированные мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) (человека). В том случае, если целевые клетки происходят от макаки, либо экспрессируют FLT3 макаки или трансфицированы FLT3 макаки, указанные эффекторные клетки также должны происходить от макаки, например представлять собой линию Т-клеток макаки, например, 4119LnPx. Целевые клетки должны экспрессировать (по меньшей мере внеклеточный домен) FLT3, например, FLT3 человека или макаки. Целевые клетки могут представлять собой линию клеток (такую как СНО), стабильно или временно трансфицированных FLT3, например, FLT3 человека или макаки. Как вариант, целевые клетки могут представлять собой положительную по FLT3 естественным образом экспрессирующую FLT3 линию клеток, такую как положительные по FLT3 линии клеток ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11. Как правило, ожидается, что значения ЕС50 будут ниже для целевых линий клеток, экспрессирующих более высокие уровни FLT3 на клеточной поверхности. Соотношение эффекторных с целевых клеток (Е:Т) составляет обычно приблизительно 10:1, однако также может варьировать. Цитотоксическая активность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 может быть измерена в анализе с высвобождением хрома-51 (время инкубации приблизительно 18 ч) или в анализе цитотоксичности на основе FACS (время инкубации - приблизительно 48 ч). Также возможны модификации времени инкубации (цитотоксической реакции) при анализе. Другие способы измерения цитотоксичности хорошо известны специалисту и включают анализы МТТ или MTS, анализы на основе АТФ, в том числе биолюминесцентные анализы, анализ с сульфородамином В (SRB), анализ с WST, клоногенный анализ и технологию ECIS.

Цитотоксическую активность, опосредованную конструкциями биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению, предпочтительно измеряют в клеточном анализе цитотоксичности. Она может также быть измерена в анализе с высвобождением хрома-51. Ее отражает значение ЕС₅₀, которое соответствует полумаксимальной эффективной концентрации (концентрации конструкции антитела, которая индуцирует цитотоксический ответ, соответствующий среднему между исходным и максимальным значениями). Предпочтительно значение ЕС₅₀ конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 составляет <5000 пМ или <4000 пМ, более предпочтительно -<3000 пМ или <2000 пМ, еще более предпочтительно -<1000 пМ или <500 пМ, еще более предпочтительно -<400 пМ или <300 пМ, еще более предпочтительно -<200 пМ, еще более предпочтительно -<100 пМ, еще более предпочтительно -<50 пМ, еще более предпочтительно -<20 пМ или <10 пМ и наиболее предпочтительно -<5 пМ.

Представленные выше заданные значения ЕС₅₀ могут быть измерены в различных анализах. Специалисту в данной области техники известно, что значение ЕС₅₀, как можно ожидать, будет ниже при применении в качестве эффекторных клеток стимулированных/обогащенных по клеткам CD8+ Т-клеток по сравнению с применением нестимулированных МКПК. Также можно ожидать, что значения ЕС₅₀ будут ниже, если целевые клетки экспрессируют значительное количество целевого антигена, по сравнению со значениями при низкой целевой скорости экспрессии. Например, при применении стимулированных/обогащенных по клеткам CD8+ Т-клеток человека в качестве эффекторных клеток (и применении в качестве целевых клеток любых трансфицированных FLT3 клеток, таких как клетки СНО или клетки положительных по FLT3 линий ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11), значение ЕС₅₀ конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 предпочтительно составляет <1000 пМ, более предпочтительно -<500 пМ, еще более предпочтительно -<250 пМ, еще более предпочтительно -<100 пМ, еще более предпочтительно -<50 пМ, еще более предпочтительно -<10 пМ и наиболее предпочтительно -<5 пМ. При применении МКПК человека в качестве эффекторных клеток значение ЕС₅₀ конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 составляет предпочтительно <5000 пМ или <4000 пМ (в частности, в тех случаях, когда целевые клетки представлены клетками положительных по FLT3 линий ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11), более предпочтительно -<2000 пМ (в частности, в тех случаях, когда целевые клетки представлены трансфицированными FLT3 клетками, такими как клетки СНО), более предпочтительно -<1000 пМ или <500 пМ, еще более предпочтительно -<200 пМ, еще более предпочтительно -<150 пМ, еще более предпочтительно -<100 пМ и наиболее предпочтительно -<50 пМ, или менее. При применении линии Т-клеток макаки, такой как LnPx4119, в качестве эффекторных клеток, и линии трансфицированных FLT3 клеток макаки, таких как клетки СНО, в качестве целевой линии клеток, значение ЕС₅₀ конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 составляет предпочтительно <2000 пМ или <1500 пМ, более предпочтительно -<1000 пМ или <500 пМ, еще более предпочтительно -<300 пМ или <250 пМ, еще более предпочтительно -<100 пМ и наиболее предпочтительно -<50 пМ.

Предпочтительно конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению не индуцируют/не опосредуют лизис или по существу не индуцируют/не опосредуют лизис

- 20 040387 отрицательных по FLT3 клеток, таких как клетки СНО. Термин не индуцируют лизис, не по существу индуцируют лизис, не опосредуют лизис или по существу не опосредуют лизис означает, что конструкция антитела согласно настоящему изобретению не индуцирует или опосредует лизис более чем 30%, предпочтительно не более чем 20%, более предпочтительно не более чем 10%, в частности предпочтительно не более чем 9, 8, 7, 6 или 5% отрицательных по FLT3 клеток, при допущении, что лизис клеток положительной по FLT3 линии карциномы легких человека SHP-77 (см. выше) составляет 100%. Обычно это применимо к концентрациям конструкции антитела, составляющим до 500 нМ.

Специалисту известно, как без дополнительных сложностей может быть измерен лизис клеток. Кроме того, конкретные рекомендации по измерению лизиса клеток приведены в настоящем описании.

Различие цитотоксической активности мономерной и димерной изоформы индивидуальных конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 называется разницей эффективности. Указанная разница эффективности может, например, быть рассчитана как отношение значений ЕС₅₀ для мономерной и димерной формы молекулы, см. пример 17. Разница эффективности конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению составляет предпочтительной, более предпочтительно -<4, еще более предпочтительно -<3, еще более предпочтительно -<2 и наиболее предпочтительно -<1.

Первый и/или второй (или любой дополнительный) связывающий домен или домены конструкции антитела согласно настоящему изобретению предпочтительно обладают межвидовой специфичностью для представителей млекопитающих отряда приматов. Обладающие межвидовой специфичностью связывающие CD3 домены описаны, например, в WO 2008/119567. В соответствии с одним вариантом реализации первый и/или второй связывающий домен, помимо связывания с FLT3 человека и CD3 человека, соответственно, также связывается с FLT3/CD3 приматов, в том числе (но не ограничиваясь перечисленными) приматов Нового Света (таких как Callithrix jacchus, Saguinus Oedipus или Saimiri sciureus), приматов Старого Света (таких как павианы и макаки), гиббонов, орангутанов и не являющихся человеком гомининов. Предусмотрено, что первый связывающий домен конструкции антитела согласно настоящему изобретению, который связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки, также связывается, по меньшей мере, с FLT3 макаки, и/или второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, также связывается, по меньшей мере, с CD3 макаки. Предпочтительной макакой является Масаса fascicularis. Также включена Масаса mulatta (макак-резус).

Согласно одному аспекту настоящего изобретения первый связывающий домен связывается с FLT3 человека и дополнительно связывается с FLT3 макаки, таким как FLT3 Масаса fascicularis, и, более предпочтительно, с FLT3 макаки, экспрессируемом на поверхности клеток макаки. Предпочтительный FLT3 Масаса fascicularis представлен в последовательности SEQ ID NO: 802. Аффинность указанного первого связывающего домена в отношении FLT3 макаки составляет предпочтительно<15 нМ, более предпочтительно -<10 нМ, еще более предпочтительно -<5 нМ, еще более предпочтительно -<1 нМ, еще более предпочтительно -<0,5 нМ, еще более предпочтительно -<0,1 нМ и наиболее предпочтительно -<0,05 нМ или даже <0,01 нМ.

Предпочтительно разница в аффинности конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением в отношении связывания FLT3 макаки и связывания FLT3 человека [FLT3 макаки: FLT3 человека] (по оценке с применением, например, BiaCore или анализа Скэтчарда) составляет <100, предпочтительно - <20, более предпочтительно - <15, также предпочтительно - <10, еще более предпочтительно - <8, более предпочтительно - <6 и наиболее предпочтительно - <2. Предпочтительные диапазоны разницы в аффинности конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением в отношении связывания FLT3 макаки и связывания FLT3 человека охватывают значения от 0,1 до 20, более предпочтительно от 0,2 до 10, еще более предпочтительно от 0,3 до 6, еще более предпочтительно от 0,5 до 3 или от 0,5 до 2,5, и наиболее предпочтительно от 0,5 до 2 или от 0,6 до 2. См. раздел примеров 5.

Согласно одному варианту реализации указанной конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением второй связывающий домен связывается с CD3-эпсилон человека и CD3-эпсилон Callithrix jacchus, Saguinus Oedipus или Saimiri sciureus. Предпочтительно указанный второй связывающий домен связывается с внеклеточным эпитопом указанных цепей CD3-эпсилон. Предполагается также, что указанный второй связывающий домен может связываться с внеклеточным эпитопом человека и цепью CD3-эпсилон Масаса. Наиболее предпочтительный эпитоп CD3-эпсилон расположен в области остатков аминокислот 1-27 внеклеточного домена CD3-эпсилон человека. Еще более конкретно, указанный эпитоп содержит, по меньшей мере, последовательность аминокислот Gln-Asp-Gly-Asn-Glu. И Callithrix jacchus, и Saguinus oedipus представляют собой приматов Нового Света из семейства Callitrichidae, a Saimiri sciureus представляет собой примата Нового Света из семейства Cebidae.

В частности, предпочтительно, чтобы в указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, содержал VL-область, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из:

(a) CDR-L1 согласно последовательности SEQ ID NO: 27 из WO 2008/119567, CDR-L2 согласно последовательности SEQ ID NO: 28 из WO 2008/119567 и CDR-L3 согласно последовательности SEQ ID

- 21 040387

NO: 29 из WO 2008/119567;

(b) CDR-L1 согласно последовательности SEQ ID NO: 117 из WO 2008/119567, CDR-L2 согласно последовательности SEQ ID NO: 118 из WO 2008/119567 и CDR-L3 согласно последовательности SEQ ID

NO: 119 из WO 2008/119567 и (c) CDR-L1 согласно последовательности SEQ ID NO: 153 из WO 2008/119567, CDR-L2 согласно последовательности SEQ ID NO: 154 из WO 2008/119567 и CDR-L3 согласно последовательности SEQ ID NO: 155 из WO 2008/119567.

Согласно альтернативному предпочтительному варианту реализации указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению указанный второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки содержит VH-область, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDRH3, выбранные из:

(a) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 12 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 13 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 14 из WO 2008/119567;

(b) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 30 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 31 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 32 из WO 2008/119567;

(c) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 48 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 49 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 50 из WO 2008/119567;

(d) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 66 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 67 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 68 из WO 2008/119567;

(e) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 84 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 85 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 86 из WO 2008/119567;

(f) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 102 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 103 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 104 из WO 2008/119567;

(g) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 120 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 121 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 122 из WO 2008/119567;

(h) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 138 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 139 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 140 из WO 2008/119567;

(i) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 156 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 157 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 158 из WO 2008/119567 и (j) CDR-H1 согласно последовательности SEQ ID NO: 174 из WO 2008/119567, CDR-H2 согласно последовательности SEQ ID NO: 175 из WO 2008/119567 и CDR-H3 согласно последовательности SEQ ID NO: 176 из WO 2008/119567.

Также предпочтительно, чтобы второй связывающий домен указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, содержал VL-область, выбранную из группы, состоящей из VL-области, представленной в последовательностях SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 102 (см. также SEQ ID NO: 35, 39, 125, 129, 161 или 165 из WO 2008/119567).

Как вариант, предпочтительно, чтобы указанный второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, содержал VH-область, выбранную из группы, состоящей из VH-области, представленной в последовательностях SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 101 (см. также SEQ ID NO: 15, 19, 33, 37, 51, 55, 69, 73, 87, 91, 105, 109, 123, 127, 141, 145, 159, 163, 177 или 181 из WO 2008/119567).

Более предпочтительно, указанная конструкция антитела согласно настоящему изобретению характеризуется вторым связывающим доменом, который связывается с CD3 человека на поверхности Тклетки, содержащим VL-область и VH-область, выбранные из группы, состоящей из:

(a) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 17 или 21 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 15 или 19 из WO 2008/119567;

(b) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 35 или 39 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 33 или 37 из WO 2008/119567;

(c) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 53 или 57 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 51 или 55 из WO 2008/119567;

- 22 040387 (d) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 71 или 75 из WO 2008/119567, и

VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 69 или 73 из WO 2008/119567;

(e) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 89 или 93 из WO 2008/119567, и

VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 87 или 91 из WO 2008/119567;

(f) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 107 или 111 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 105 или 109 из WO 2008/119567;

(g) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 125 или 129 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 123 или 127 из WO 2008/119567;

(h) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 143 или 147 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 141 или 145 из WO 2008/119567;

(i) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 161 или 165 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 159 или 163 из WO 2008/119567; и (j) VL-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 179 или 183 из WO 2008/119567, и VH-области, представленной в последовательности SEQ ID NO: 177 или 181 из WO 2008/119567.

Также предпочтительным для указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению является второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, содержащий VL-область, представленную в последовательности SEQ ID NO: 102, и VH-область, представленную в последовательности SEQ ID NO: 101.

В соответствии с предпочтительным вариантом реализации указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению связывающие домены и, в частности, второй связывающий домен (который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки) имеют следующий формат: пары VHобластей и VL-областей находятся в формате одноцепочечного антитела (scFv). Указанные VH- и VLобласти расположены в порядке VH-VL или VL-VH. Предпочтительно VH-область располагается в направлении N-конца от линкерной последовательности, а VL-область располагается в направлении Сконца от линкерной последовательности.

Предпочтительный вариант реализации вышеописанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению характеризуется вторым связывающим доменом, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, содержащей последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103 (см. также последовательности SEQ ID NO: 23, 25, 41, 43, 59, 61, 77, 79, 95, 97, 113, 115, 131, 133, 149, 151, 167, 169, 185 или 187 из WO 2008/119567).

Также предусмотрена дополнительная функция конструкции антитела согласно настоящему изобретению, помимо функции связывания с целевыми молекулами FLT3 и CD3. В указанном формате указанная конструкция антитела представляет собой трифункциональную или многофункциональную конструкцию антитела, нацеленную на целевые клетки за счет связывания с FLT3, опосредующую цитотоксическую Т-клеточную активность за счет связывания CD3 и обеспечивающую дополнительную функцию, такую как полностью функциональный константный домен Fc, опосредующий антитело-зависимую клеточную цитотоксичность за счет рекрутинга эффекторных клеток, таких как NK-клетки, метку (флуоресцентную и т.п.), терапевтический агент, такой как токсин или радионуклид, и/или способ увеличения времени полужизни в сыворотке, и т.п.

Примеры способов увеличения времени полужизни в сыворотке конструкций антитела согласно настоящему изобретению включают пептиды, белки или домены белков, которые слиты или иным образом присоединены к указанной конструкции антитела. Группа пептидов, белков или белковых доменов включает связывание пептидов с другими белками с предпочтительным фармакокинетическим профилем в организме человека, такими как сывороточный альбумин (см. WO 2009/127691). Согласно альтернативной концепции такие увеличивающие время полужизни пептиды включают пептиды, связывающиеся с неонатальным Fc-рецептором (FcRn, см. WO 2007/098420), который может также применяться в конструкциях согласно настоящему изобретению. Концепция прикрепления доменов белков большего размера или полных белков включает, например слияние с сывороточным альбумином человека, вариантами или мутантами сывороточного альбумина человека (см. WO 2011/051489, WO 2012/059486, WO 2012/150319, WO 2013/135896, WO 2014/072481, WO 2013/075066) или его доменами, а также слияние с константной областью иммуноглобулинов (доменов Fc) и их вариантов. Такие варианты Fc-доменов могут быть оптимизированы /модифицированы для обеспечения требуемого спаривания димеров или мультимеров, для отмены связывания Fc-рецептора (например, Fcγ-рецептора) или по другим причинам. Дополнительная известная в данной области техники концепция, используемая для увеличения времени полужизни малых белковых соединений в организме человека, заключается в пегилировании указанных соединений, например, конструкции антитела согласно настоящему изобретению.

Согласно предпочтительному варианту реализации указанная конструкция антитела согласно настоящему изобретению описана следующим образом:

(а) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из по- 23 040387 следовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9; и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103; и необязательно, гистидиновую (His) метку, такую как представленная в последовательности SEQ ID NO 10;

(b) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца:

полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9;

полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103;

необязательно, пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9;

полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 104-134; и необязательно, гистидиновую (His) метку, такую как представленная в последовательности SEQ ID NO 10;

(с) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца:

полипептид с последовательностью аминокислот QRFVTGHFGGLX1PANG (SEQ ID NO: 135), где X1 представляет собой Y или Н; и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9;

- 24 040387 полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ

ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103;

полипептид с последовательностью аминокислот QRFVTGHFGGLHPANG (SEQ ID NO: 137) или

QRFCTGHFGGLHPCNG (SEQ ID NO: 139); и необязательно, гистидиновую (His) метку, такую как представленная в последовательности SEQ ID NO 10;

(d) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 101;

пептидный линкер с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 8;

полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

208, SEQ ID NO

268, SEQ ID NO

328, SEQ ID NO

388, SEQ ID NO

448, SEQ ID NO

508, SEQ ID NO

568, SEQ ID NO

628, SEQ ID NO

688, SEQ ID NO

218, SEQ ID NO

278, SEQ ID NO

338, SEQ ID NO

398, SEQ ID NO

458, SEQ ID NO

518, SEQ ID NO

578, SEQ ID NO

638, SEQ ID NO

698, SEQ ID NO

228, SEQ ID NO

288, SEQ ID NO

348, SEQ ID NO

408, SEQ ID NO

468, SEQ ID NO

528, SEQ ID NO

588, SEQ ID NO

648, SEQ ID NO

708, SEQ ID NO

238, SEQ ID NO

298, SEQ ID NO

358, SEQ ID NO

418, SEQ ID NO

478, SEQ ID NO

538, SEQ ID NO

598, SEQ ID NO

658, SEQ ID NO

718, SEQ ID NO

248, SEQ ID NO

308, SEQ ID NO

368, SEQ ID NO

428, SEQ ID NO

488, SEQ ID NO

548, SEQ ID NO

608, SEQ ID NO

668, SEQ ID NO

728, SEQ ID NO

748, SEQ ID NO: 758, SEQ ID NO: 768, SEQ ID NO: 778, SEQ ID NO: 788 и SEQ ID NO

198, 258, 318, 378, 438, 498, 558, 618, 678, 738, 798;

и остатка серина на С-конце;

полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 140; и полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 197,

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

207, SEQ ID NO

267, SEQ ID NO

327, SEQ ID NO

387, SEQ ID NO

447, SEQ ID NO

507, SEQ ID NO

567, SEQ ID NO

627, SEQ ID NO

687, SEQ ID NO

217, SEQ ID NO

277, SEQ ID NO

337, SEQ ID NO

397, SEQ ID NO

457, SEQ ID NO

517, SEQ ID NO

577, SEQ ID NO

637, SEQ ID NO

697, SEQ ID NO

227, SEQ ID NO

287, SEQ ID NO

347, SEQ ID NO

407, SEQ ID NO

467, SEQ ID NO

527, SEQ ID NO

587, SEQ ID NO

647, SEQ ID NO

707, SEQ ID NO

237, SEQ ID NO

297, SEQ ID NO

357, SEQ ID NO

417, SEQ ID NO

477, SEQ ID NO

537, SEQ ID NO

597, SEQ ID NO

657, SEQ ID NO

717, SEQ ID NO

247, SEQ ID NO

307, SEQ ID NO

367, SEQ ID NO

427, SEQ ID NO

487, SEQ ID NO

547, SEQ ID NO

607, SEQ ID NO

667, SEQ ID NO

727, SEQ ID NO

257, 317, 377,

437, 497, 557, 617,

677, 737,

SEQ ID NO: 747, SEQ ID NO: 757, SEQ ID NO: 767, SEQ ID NO: 777, SEQ ID NO: 787 и SEQ ID NO: 797;

пеп тидный линкер с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 8;

пол ипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 102; и остатка серина на С-конце;

пол ипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 141;

(е) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 101;

пеп тидный линкер с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 8;

полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 208, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 238, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 278, SEQ ID NO: 288, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 308, SEQ ID NO: 318, SEQ ID NO: 328, SEQ ID NO: 338, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 358, SEQ ID NO: 368, SEQ ID NO: 378, SEQ ID NO: 388, SEQ ID NO: 398, SEQ ID NO: 408, SEQ ID NO: 418, SEQ ID NO: 428, SEQ ID NO: 438, SEQ ID NO: 448, SEQ ID NO: 458, SEQ ID NO: 468, SEQ ID NO: 478, SEQ ID NO: 488, SEQ ID NO: 498,

- 25 040387

SEQ ID NO: 508, SEQ ID NO: 518, SEQ ID NO: 528, SEQ ID NO: 538, SEQ ID NO: 548, SEQ ID NO: 558,

SEQ ID NO: 568, SEQ ID NO: 578, SEQ ID NO: 588, SEQ ID NO: 598, SEQ ID NO: 608, SEQ ID NO: 618,

SEQ ID NO: 628, SEQ ID NO: 638, SEQ ID NO: 648, SEQ ID NO: 658, SEQ ID NO: 668, SEQ ID NO: 678,

SEQ ID NO: 688, SEQ ID NO: 698, SEQ ID NO: 708, SEQ ID NO: 718, SEQ ID NO: 728, SEQ ID NO: 738,

SEQ ID NO: 748, SEQ ID NO: 758, SEQ ID NO: 768, SEQ ID NO: 778, SEQ ID NO: 788 и SEQ ID NO: 798;

полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 142; и полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 197,

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

SEQ ID NO

207, SEQ ID NO

267, SEQ ID NO

327, SEQ ID NO

387, SEQ ID NO

447, SEQ ID NO

507, SEQ ID NO

567, SEQ ID NO

627, SEQ ID NO

687, SEQ ID NO

217, SEQ ID NO

277, SEQ ID NO

337, SEQ ID NO

397, SEQ ID NO

457, SEQ ID NO

517, SEQ ID NO

577, SEQ ID NO

637, SEQ ID NO

697, SEQ ID NO

227, SEQ ID NO

287, SEQ ID NO

347, SEQ ID NO

407, SEQ ID NO

467, SEQ ID NO

527, SEQ ID NO

587, SEQ ID NO

647, SEQ ID NO

707, SEQ ID NO

237, SEQ ID NO

297, SEQ ID NO

357, SEQ ID NO

417, SEQ ID NO

477, SEQ ID NO

537, SEQ ID NO

597, SEQ ID NO

657, SEQ ID NO

717, SEQ ID NO

247, SEQ ID NO

307, SEQ ID NO

367, SEQ ID NO

427, SEQ ID NO

487, SEQ ID NO

547, SEQ ID NO

607, SEQ ID NO

667, SEQ ID NO

727, SEQ ID NO

257, 317, 377, 437,

497, 557, 617, 677, 737,

SEQ ID NO: 747, SEQ ID NO: 757, SEQ ID NO: 767, SEQ ID NO: 777, SEQ ID NO: 787 и SEQ ID NO: 797;

пеп тидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 8;

пол ипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 102; и остатка серина на С-конце;

[CD 3 VL] полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 143;

(f) [V5 Гетеро-Fc] полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9; и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 144; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 145;

(g) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и

- 26 040387

SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739,

SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 146; и полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца:

полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 147;

(h) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из по следовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 148; и полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 149; или (i) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9; и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103; и полипептид с последовательностью аминокислот, представленной в последовательности SEQ ID NO: 150.

(j) полипептид, содержащий в представленном ниже порядке, начиная с N-конца, полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 199,

SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO: 309, SEQ ID NO: 319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO: 349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO: 369, SEQ ID NO: 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO: 409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO: 429, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 499,

- 27 040387

SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и SEQ ID NO: 559,

SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 619 и

SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO: 669, SEQ ID NO: 679 и

SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO: 729, SEQ ID NO: 739,

SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO: 789; и SEQ ID NO:

799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9; и полипептид, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9; и третий домен, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 843-850.

Согласно предпочтительному аспекту настоящего изобретения связывание указанного первого связывающего домена с FLT3 человека снижено за счет FLT3-лиганда на 25% или менее предпочтительно на 20% или менее, более предпочтительно на 15% или менее, также предпочтительно на 10% или менее, еще более предпочтительно на 8% или менее, более предпочтительно на 6% или менее и наиболее предпочтительно на 2% или менее.

Согласно подробному описанию в примере 18 было неожиданным образом обнаружено, что конструкции, содержащие FL-53, FL-54, FL-61, F-62, FL-63 и FL-64, все из которых связываются с эпитопным кластером 3 FLT3, все еще демонстрируют сигнал связывания, превышающий порог, описанный в примере 18, хотя эпитоп для указанных связывающих элементов находится в области, описанной для взаимодействия лиганда FLT3 с FLT3.

Кроме того, принимая во внимание взаимодействие лиганда FLT3 с областью эпитопного кластера 3, было также сделано предположение, что на связывающий элемент для более отдаленного эпитопного кластера, такого как кластер 1 FLT3, не будет влиять конкуренция с лигандом FLT3. Имелось, однако, значимое число связывающих элементов, не удовлетворяющих условию 75% порога. Связывающие элементы FL-1-FL-53, FL-55-FL-60 и FL-65 входили в группу связывающих элементов, не чувствительных к конкуренции с лигандом FLT3.

Согласно описанию выше несколько предпочтительных конструкций антитела согласно настоящему изобретению модифицируют путем слияния с другим фрагментом, таким как альбумин или варианты альбумина. Как будет понятно специалисту, в том случае, если указанные слитые конструкции охарактерированы исходя из их свойств, в частности, аффинности в отношении мишени или цитотоксической активности, можно ожидать, что аналогичные слитые конструкции или немодифицированные конструкции биспецифического антитела будут иметь аналогичные (или даже лучшие) свойства. Например, в том случае, если конструкция биспецифического антитела, слитая с альбумином, обладает поддающейся оценке или желательной цитотоксической активностью или аффинностью в отношении мишени, можно ожидать, что такая же/аналогичная или даже более высокая цитотоксическая активность/аффинность в отношении мишени будет наблюдаться для конструкции без альбумина.

В соответствии с другим предпочтительным вариантом реализации конструкция биспецифического антитела согласно настоящему изобретению включает (помимо двух связывающих доменов) третий домен, который содержит два полипептидных мономера, каждый из которых содержит шарнир, домен СН2 и домен CH3, причем указанные два полипептида (или полипептидных мономера) слиты друг с другом посредством пептидного линкера. Предпочтительно указанный третий домен содержит, в направлении от N-конца к С-концу: шарнир-СН2-CH3-линкер-шарнир-СН2-CH3. Предпочтительные последовательности аминокислот указанного третьего домена представлены в последовательностях SEQ ID NO: 843850. Каждый из указанных двух полипептидных мономеров предпочтительно имеет последовательность аминокислот, которая выбрана из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 835-842, или последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную указанным последовательностям. Согласно другому предпочтительному варианту реализации указанный первый и второй связывающий домены конструкции биспецифического антитела согласно настоящему изобретению слиты с указанным третьим доменом посредством пептидного линкера, который, например, выбран из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9.

В соответствии с настоящим изобретением шарнир представляет собой шарнирную область IgG. Указанная область может быть идентифицирована аналогичным образом с применением нумерации по Kabat, см. положения 223-243 по Kabat. В соответствии с вышеизложенным, минимальному требованию для шарнира удовлетворяют остатки аминокислот, соответствующие отрезку последовательности IgG1 от D231 до Р243 в соответствии с нумерацией по Kabat. Термины СН2 и СН3 относятся к константным областям 2 и 3 тяжелых цепей иммуноглобулина. Указанные области могут также быть идентифицированы аналогичным образом с применением нумерации по Kabat, см. положения по Kabat 244-360 для

- 28 040387

СН2 и положений по Kabat 361-478 для CH3. Предполагается, что иммуноглобулины содержат некоторые вариации, затрагивающие область Fc IgG1, область Fc IgG₂, область Fc IgG₃, область Fc IgG4, область Fc IgM, область Fc IgA, область Fc IgD и область Fc IgE (см., например, Padlan, Molecular Immunology, 31(3), 169-217 (1993)). Термин мономер Fc относится к последним двум константным областям тяжелых цепей IgA, IgD и IgG, и последним трем константным областям тяжелых цепей IgE и IgM. Мономер Fc может также включать гибкий шарнир, расположенный в направлении N-конца от указанных доменов. В случае IgA и IgM мономер Fc может включать J-цепь. В случае IgG Fc-часть содержит домены иммуноглобулина СН2 и CH3, а также шарнир между первыми двумя доменами и СН2. Хотя границы Fc-части иммуноглобулина могут варьировать, пример Fc-части тяжелой цепи IgG человека, содержащей функциональный шарнир, домены СН2 и CH3, может быть определена, например, таким образом, что она содержит остатки от D231 (в шарнирном домене) до Р476 (на С-конце домена CH3), или остатки от D231 до L476, соответственно, в случае IgG₄; указанная нумерация соответствует системе Kabat.

Конструкция антитела согласно настоящему изобретению может, соответственно, содержать в направлении от N-конца к С-концу:

(a) первый связывающий домен;

(b) пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: последовательностей SEQ ID NO: 1-9;

(c) второй связывающий домен;

(d) пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 6, 8 и 9;

(e) первый полипептидный мономер третьего домена (содержащий шарнир, домен СН2 и домен CH3);

(f) пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 852, 853, 854 и 855; и (g) второй полипептидный мономер третьего домена (содержащий шарнир, домен СН2 и домен CH3).

Также предпочтительно, чтобы указанная конструкция антитела согласно настоящему изобретению включала, в направлении от N-конца к С-концу:

первый связывающий домен, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 189,

SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO SEQ ID NO

199, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 239, SEQ ID NO: 249 и

259, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 289, SEQ ID NO: 299, SEQ ID NO

319 и SEQ ID NO: 329, SEQ ID NO: 339, SEQ ID NO 379 и SEQ ID NO: 389, SEQ ID NO: 399, SEQ ID NO 439, SEQ ID NO: 449 и SEQ ID NO: 459, SEQ ID NO 499, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 519 и SEQ ID NO

309, 369, 429, 489,

349 и SEQ ID NO: 359, SEQ ID NO

409, SEQ ID NO: 419 и SEQ ID NO

469, SEQ ID NO: 479 и SEQ ID NO

529, SEQ ID NO: 539, SEQ ID NO: 549 и

559, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 579 и SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO 619 и SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 639, SEQ ID NO: 649 и SEQ ID NO: 659, SEQ ID NO 679 и SEQ ID NO: 689, SEQ ID NO: 699, SEQ ID NO: 709, SEQ ID NO: 719 и SEQ ID NO 739, SEQ ID NO: 749 и SEQ ID NO: 759, SEQ ID NO: 769, SEQ ID NO: 779 и SEQ ID NO

609, 669, 729, 789;

и SEQ ID NO: 799;

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1-9;

второй связывающий домен, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103 (см. также последовательности SEQ ID NO: 23, 25, 41, 43, 59, 61, 77, 79, 95, 97, 113, 115, 131, 133, 149, 151, 167, 169, 185 или 187 из WO 2008/119567);

пептидный линкер, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1, 2, 4, 5, 6, 8 и 9; и третий домен, имеющий последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 843-850.

Согласно предпочтительному варианту реализации конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением содержит полипептид или состоит из полипептида, представленного в последовательностях SEQ ID NO: 856-871.

Согласно одному предпочтительному варианту реализации конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением указанная конструкция антитела содержит полипептид или состоит из полипептида, представленного в последовательности SEQ ID NO: 856, 858, 860, 862, 864, 866, 868 и 870.

Согласно одному альтернативному предпочтительному варианту реализации конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением указанная конструкция антитела содержит полипептид или состоит из полипептида, представленного в последовательности SEQ ID NO: 857, 859, 861, 863, 865, 867, 869 и 871.

- 29 040387

Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением содержит полипептид или состоит из полипептида, представленного в последовательностях SEQ ID NO: 858, 859, 862, 863, 864 и 865.

Ковалентные модификации конструкций антитела также включены в объем настоящего изобретения, и обычно, однако не всегда, осуществляются посттрансляционно. Например, несколько типов ковалентных модификаций конструкции антитела вводят в молекулу путем проведения реакции специфических остатков аминокислот из указанной конструкции антитела с органическим дериватизирующим агентом, который способен вступать в реакцию с выбранными боковыми цепями, или N- или Сконцевыми остатками.

Для цистеинильных остатков чаще всего проводят реакцию с α-галогенацетатами (и соответствующими аминами), такими как хлоруксусная кислота или хлорацетамид, с получением карбоксиметильных или карбоксиамидометильных производных. Цистеинильные остатки также дериватизируют путем проведения реакции с бромтрифторацетоном, а-бром-в-(5-имидозоил) пропионовой кислотой, хлорацетилфосфатом, N-алкилмалеимидами, 3-нитро-2-пиридилдисульфидом, метил-2-пиридилдисульфидом, пхлорортутьбензоатом, 2-хлорортуть-4-нитрофенолом или хлор-7-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом.

Гистидильные остатки дериватизируют путем проведения реакции с диэтилпирокарбонатом при рН 5,5-7,0, поскольку указанный агент является относительно специфическим в отношении гистидильной боковой цепи. Также подходит для применения пара-бромфенацилбромид; указанную реакцию предпочтительно проводят в 0,1 М какодилате натрия при рН 6,0. Реакцию лизинильных и аминоконцевых остатков проводят с ангидридами янтарной кислоты или других карбоновых кислот. Дериватизация указанными агентами оказывает эффект обращения заряда лизинильных остатков. Другие подходящие реагенты для дериватизации альфа-аминосодержащих остатков включают имидоэфиры, такие как метилпиколинимидат; пиридоксальфосфат; пиридоксаль; хлорборгидрид; тринитробензенсульфоновую кислоту; О-метилизомочевину; 2,4-пентандион; и катализируемую трансаминазой реакцию с глиоксилатом.

Аргинильные остатки модифицируют путем проведения реакции с одним или несколькими стандартными реагентами, в том числе фенилглиоксалем, 2,3-бутандионом, 1,2-циклогександионом и нингидрином. Для дериватизации остатков аргинина необходимо, чтобы реакция проводилась в щелочных условиях, ввиду высокого значения pKa гуанидиновой функциональной группы. Кроме того, указанные реагенты могут вступать в реакцию с группами лизина а также эпсилон-аминогруппой аргинина.

Может осуществляться специфическая модификация тирозильных остатков, с особым акцентом на введение спектральных меток в тирозильные остатки путем проведения реакции с ароматическими соединениями диазония или тетранитрометаном. Чаще всего используют N-ацетилимидазол и тетранитрометан для получения O-ацетилтирозильных веществ и 3-нитропроизводных, соответственно. Тирозильные остатки иодинируют с применением ¹²⁵I или ¹³¹I для получения меченых белков для применения в радиоиммунологическом анализе, для чего подходит описанный выше способ с хлорамином Т.

Карбоксильные боковые группы (аспартильные или глутамильные) селективно модифицируют путем проведения реакции с карбодиимидами (R'-N=C=N--R'), где R и R' представляют собой необязательно разные алкильные группы, такие как 1-циклогексил-3-(2-морфолинил-4-этил)карбодиимид или 1этил-3-(4-азоний-4,4-диметилпентил)карбодиимид. Кроме того, аспартильные или глутамильные остатки преобразуют в аспарагинильные и глутаминильные остатки путем проведения реакции с ионами аммония.

Дериватизация бифункциональными агентами подходит для перекрестного связывания конструкций антитела согласно настоящему изобретению с водонерастворимой опорной матрицей или поверхностью для применения в различных методов. Широко используемые агенты для перекрестного связывания включают, например, 1,1-бис(диазоацетил)-2-фенилэтан, глутаральдегид, сложные эфиры Nгидроксисукцинимида, например, сложные эфиры с 4-азидосалициловой кислотой, гомобифункциональные имидоэфиры, в том числе дисукцинимидильные сложные эфиры, такие как 3,3'дитиобис(сукцинимидилпропионат), и бифункциональные малеимиды, такие как бис-N-малеимидо-1,8октан. Дериватизирующие агенты, такие как метил-3-[(п-азидофенил)дитио]пропиоимидат дают фотоактивируемые промежуточные продукты, которые способны образовывать перекрестные связи на свету. Как вариант, для иммобилизации белка применяют реакционноспособные водонерастворимые матрицы, такие как активированные цианогенбромидом углеводы и реакционноспособные субстраты согласно описанию в патентах США №№ 3969287; 3691016; 4195128; 4247642; 4229537 и 4330440.

Глутаминильные и аспарагинильные остатки часто дезамидируют до соответствующих глутамильных и аспартильных остатков соответственно. Как вариант, указанные остатки дезамидируют в умеренно кислых условиях. Любая форма указанных остатков включена в объем настоящего изобретения.

Другие модификации включают гидроксилирование пролина и лизина, фосфорилирование гидроксильных групп серильных или треонильных остатков, метилирование а-аминогрупп боковых цепей лизина, аргинина и гистидина (Т. Е. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, pp. 79-86), ацетилирование N-концевого амина и амидирование любой Сконцевой карбоксильной группы.

- 30 040387

Другой тип ковалентной модификации конструкций антител, входящих в объем настоящего изобретения, включает изменение паттерна гликозилирования белка. Как известно в данной области техники, паттерны гликозилирования могут зависеть как от последовательности белка (например, от присутствия или отсутствия конкретных гликозилируемых остатков аминокислот, что обсуждается ниже), так и от клетки-хозяина или организма, в котором продуцируется указанный белок. Конкретные экспрессионные системы обсуждаются ниже.

Гликозилирование полипептидов, как правило, является либо N-связанным, либо О-связанным. Nсвязанное гликозилирование относится к прикреплению фрагмента углевода к боковой цепи остатка аспарагина. Трипептидные последовательности аспарагин-Х-серин и аспарагин-Х-треонин, где X представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, представляют собой последовательности распознавания для ферментативного прикрепления фрагмента углевода к боковой цепи аспарагина. Соответственно, присутствие любой из указанных трипептидных последовательностей в полипептиде приводит к возникновению сайта потенциального гликозилирования. О-связанное гликозилирование относится к прикреплению одного из Сахаров, N-ацетилгалактозамина, галактозы или ксилозы, к гидроксиаминокислоте, чаще всего серину или треонину, хотя могут также применяться 5-гидроксипролин или 5гидроксилизин.

Сайты гликозилирования может быть удобно добавлять к конструкции антитела путем изменения последовательности аминокислот таким образом, чтобы она содержала один или более из вышеописанных трипептидных последовательностей (для сайтов N-связанного гликозилирования). Указанное изменение может также осуществляться путем добавления одного или более остатков серина или треонина в стартовую последовательность или замены на один или более остатков серина или треонина в стартовой последовательности (для сайтов О-связанного гликозилирования). Для простоты последовательность аминокислот конструкций антитела предпочтительно изменяют путем замен на уровне ДНК, в частности путем введения мутаций заранее выбранных оснований в ДНК, кодирующую указанный полипептид, таким образом, чтобы получить кодоны, транслируемые в требуемые аминокислоты.

Другим способом увеличения числа углеводных фрагментов на конструкции антитела является химическое или ферментативное присоединение гликозидов к белку. Преимуществом указанных процедур является то, что продуцирование в клетке-хозяине белка, способного подвергаться N- и О-связанному гликозилированию, не требуется. В зависимости от применяемого способа присоединения сахар(а) может(гут) быть присоединен(ы) к (а) аргинину и гистидину, (b) свободным карбоксильным группам, (с) свободным сульфгидрильным группам, таким как сульфгидрильные группы цистеина, (d) свободным гидроксильным группам, таким как гидроксильные группы серина, треонина или гидроксипролина, (е) ароматическим остаткам, таким как ароматические остатки фенилаланина, тирозина или триптофана, или (f) амидной группе глутамина. Указанные способы описаны в WO 87/05330, и в источнике: Aplin and Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306.

Удаление углеводных фрагментов, присутствующих на изначальной конструкции антитела, может осуществляться химическим или ферментативным способом. Для химического дегликозилирования необходимо воздействовать на белок соединением трифторметансульфоновой кислотой, или эквивалентным соединением. Указанная обработка приводит к расщеплению большинства или всех Сахаров, за исключением соединяющего сахара (N-ацетилглюкозамина или N-ацетилгалактозамина), а полипептид остается интактным. Химическое дегликозилирование описано в источниках: Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 и Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131. Ферментативное расщепление углеводных фрагментов на полипептидах может быть достигнуто путем применения различных эндо- и экзогликозидаз согласно описанию в источнике: Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350. Гликозилирование по потенциальным сайтам гликозилирования может быть предотвращено путем применения соединения туникамицина согласно описанию у Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:3105. Туникамицин блокирует образование связей белков с N-гликозидами.

Другие модификации указанной конструкции антитела также предусмотрены настоящим изобретением. Например, другой тип ковалентной модификации указанной конструкции антитела включает соединение указанной конструкции антитела с различными небелковоподобными полимерами, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, различными полиолами, такими как полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, полиоксиалкилены или сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, согласно способу, описанному в патентах США №№ 4640835; 4496689; 4301144; 4670417; 4791192 или 4179337. Кроме того, как известно в данной области техники, могут осуществляться замены аминокислот в различных положениях в пределах конструкции антитела, например, для облегчения добавления полимеров, таких как ПЭГ.

Согласно некоторым вариантам реализации ковалентная модификация конструкций антитела согласно настоящему изобретению включает добавление одной или более меток. Группа для мечения может быть присоединена к конструкции антитела посредством спейсерных фрагментов различной длины для уменьшения потенциального стерического затруднения. В данной области техники известны и могут применяться при реализации настоящего изобретения различные способы мечения белков. Термин метка или группа для мечения относится к любой детектируемой метке. В общем, метки относятся к раз- 31 040387 ным классам в зависимости от анализа, в котором их предполагается детектировать - приведенные ниже примеры включают, не ограничиваясь перечисленными:

a) изотопные метки, которые могут представлять собой радиоактивные изотопы или тяжелые изотопы, такие как радиоизотопы или радионуклиды (например, ³Н, ¹⁴С, ¹⁵N, ³⁵S, ⁸⁹Zr, ⁹⁰Y, ⁹⁹Тс, ⁿ¹In, ¹²⁵I, ¹³¹I);

b) магнитные метки (например, магнитные частицы);

c) редокс-активные фрагменты;

d) оптические красители (в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, хромофоры, фосфоресцентные вещества и флуорофоры) такие как флуоресцентные группы (например, ФИТЦ, родамин, лантанидные люминофоры), хемилюминесцентные группы и флуорофоры, которые могут представлять собой либо низкомолекулярные флуоресцирующие вещества, либо белковоподобный флуоресцирующие вещества;

e) ферментативные группы (например, пероксидаза хрена, β-галактозидаза, люцифераза, щелочная фосфатаза);

f) биотинилированные группы;

g) заранее заданные полипептидные эпитопы, распознаваемые вторичным репортером (например, парные последовательности с лейциновой застежкой, сайты связывания вторичных антител, связывающие металлы домены, эпитопные метки и т.п.).

Под флуоресцентной меткой подразумевается любая молекула, которая может быть детектирована за счет присущих ей флуоресцентных свойств. Подходящие флуоресцентные метки включают, не ограничиваясь перечисленными, флуоресцеин, родамин, тетраметилродамин, эозин, эритрозин, кумарин, метил-кумарины, пирен, малахитовый зеленый, стильбен, люцифер желтый (Lucifer Yellow), каскад голубой (Cascade Blue J), техасский красный (Texas Red), IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy5, Cy5,5, LC Red 705, орегонский зеленый (Oregon green), красители Alexa-Fluor (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), каскад голубой (Cascade Blue), каскад желтый (Cascade Yellow) и Rфикоэритрин (ФЭ) (Molecular Probes, Юджин, Орегон), ФИТЦ, родамин и техасский красный (Texas Red) (Pierce, Рокфорд, Иллинойс), Су5, Су5.5, Су7 (Amersham Life Science, Питтсбург, Пенсильвания). Подходящие оптические красители, в том числе флуорофоры, описаны в руководстве Molecular Probes Handbook, Richard P. Haugland.

Подходящие белковоподобные флуоресцентные метки также включают, не ограничиваясь перечисленными, зеленый флуоресцентный белок, в том числе белок GFP видов Renilla, Ptilosarcus или Aequorea (Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., номер доступа в Genbank: U55762), синий флуоресцентный белок (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc., 1801, Зап. бульв. Де Мезоннев, 8 эт., Монреаль, Квебек, Канада H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), усиленный желтый флуоресцентный белок (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), люциферазу (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), β-галактозидазу (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) и Renilla (WO 92/15673, WO 95/07463, WO 98/14605, WO 98/26277, WO 99/49019, патенты США №№ 5292658; 5418155; 5683888; 5741668; 5777079; 5804387; 5874304; 5876995; 5925558).

Домены с лейциновой застежкой представляют собой пептиды, которые способствуют олигомеризации белков, в которых они обнаруживаются. Лейциновые застежки были впервые идентифицированы в нескольких ДНК-связывающих белках (Landschulz et al., 1988, Science 240:1759), а затем были обнаружены в различных других белках. К известным лейциновым застежкам относятся встречающиеся в природе пептиды и их производные, которые димеризуются или тримеризуются. Примеры доменов с лейциновой застежкой, подходящих для получения растворимых олигомерных белков, описаны в РСТ-заявке WO 94/10308, а лейциновая застежка, происходящая из легочного белка-сурфактанта D (SPD), описана в источнике: Норре et al., 1994, FEBS Letters 344:191. Применение модифицированной лейциновой застежки, которая обеспечивает стабильную тримеризацию слитого с ней гетерологичного белка, описан в источнике: Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78. Согласно одному подходу рекомбинантные слитые белки, содержащие фрагмент или производное антитела FLT3, слитый(ое) с пептидной лейциновой застежкой, экспрессируют в подходящих клетках-хозяевах, и образующиеся растворимые олигомерные фрагменты или производные антител FLT3 выделяют из культурального супернатанта.

Конструкция антитела согласно настоящему изобретению может также содержать дополнительные домены, которые, например, облегчают выделение указанной молекулы или связаны с адаптацией фармакокинетического профиля указанной молекулы. Домены, облегчающие выделение конструкции антитела, могут быть выбраны из пептидных мотивов или вторично введенных фрагментов, которые могут быть захвачены с помощью способа выделения, например, на колонке для выделения. Неограничивающие варианты реализации таких дополнительных доменов включают пептидные мотивы, известные как Мус-метка, НАТ-метка, НА-метка, ТАР-метка, GST-метка, хитинсвязывающий домен (CBD-метка), мальтоза-связывающий белок (МВР-метка), Flag-метка, Strep-метка, и их варианты (например, StrepII- 32 040387 метка), а также His-метку. Все раскрытые в настоящем документе конструкции антитела, охарактеризованные на основании идентифицированных областей CDR, предпочтительно содержат домен гистидиновой (His) метки, известный в общем случае как повтор последовательных остатков His в последовательности аминокислот молекулы, предпочтительно содержащий пять, более предпочтительно - шесть остатков His (гекса-гистидин). His-метка может быть расположена, например, на N- или С-конце указанной конструкции антитела; предпочтительно, она расположена на С-конце. Наиболее предпочтительно, гекса-гистидиновая метка (НННННН) (SEQ ID NO: 10) соединена с С-концом конструкции антитела в соответствии с настоящим изобретением посредством пептидной связи.

Первый связывающий домен конструкции антитела согласно настоящему изобретению связывается с FLT3 человека на поверхности целевой клетки. Предпочтительная последовательность аминокислот FLT3 человека представлена в последовательностях 801, 803, 804 и 805. Следует понимать, что термин на поверхности в контексте настоящего изобретения означает, что связывающий домен специфически связывается с эпитопом, содержащимся во внеклеточном домене FLT3 (ВКД FLT3, см. SEQ ID NO:813). Первый связывающий домен в соответствии с настоящим изобретением, соответственно, предпочтительно связывается с FLT3 при экспрессии клетками или линиями клеток, экспрессирующими его естественным образом, и/или клетками или линиями клеток, трансформированными или (стабильно/временно) трансфицированными FLT3. Согласно предпочтительному варианту реализации указанный первый связывающий домен также связывается с FLT3 в том случае, если FLT3 применяют в качестве молекулы мишени или лиганда в анализе связывания in vitro, таком как BIAcore или анализ Скэтчарда. Целевая клетка может быть представлена любой прокариотической или эукариотической клеткой, экспрессирующей FLT3 на поверхности; предпочтительно, целевая клетка представляет собой клетку, которая входит в состав организма человека или животного, такую как клетка рака яичников, клетка рака поджелудочной железы, клетка мезотелиомы, клетка рака легкого, клетка рака желудка и клетка рака молочной железы с тройным негативным фенотипом.

Термин ВКД FLT3 относится к форме FLT3, которая по существу не содержит трансмембранных и цитоплазматических доменов FLT3. Специалисту будет понятно, что трансмембранный домен, идентифицированный для полипептида FLT3 согласно настоящему изобретению, идентифицирован на основании критериев, часто используемых в данной области техники для идентификации указанного типа гидрофобного домена. Точные границы трансмембранного домена могут варьировать, однако вероятнее всего не более чем приблизительно на 5 аминокислот с каждой стороны домена, конкретным образом описанного в настоящем документе. Предпочтительный ВКД FLT3 человека представлен в последовательности SEQ ID NO: 813.

Аффинность указанного первого связывающего домена в отношении FLT3 человека предпочтительно составляет <20 нМ, более предпочтительно -<10 нМ, еще более предпочтительно -<5 нМ, еще более предпочтительно -<2 нМ, еще более предпочтительно -<1 нМ, еще более предпочтительно -<0,6 нМ, еще более предпочтительно -<0,5 нМ и наиболее предпочтительно -<0,4 нМ. Аффинность может быть измерена, например, в анализе Biacore или в анализе Скэтчарда, например, согласно описанию в примерах. Другие способы определения аффинности также хорошо известны специалисту.

Также предусмотрены модификации последовательностей аминокислот конструкций антитела согласно описанию в настоящем документе. Например, может быть желательно улучшение сродства к связыванию (аффинности) и/или других биологических свойств указанной конструкции антитела. Варианты последовательностей аминокислот конструкций антитела получают путем введения подходящих изменений нуклеотидов в нуклеиновую кислоту указанных конструкций антитела, или посредством пептидного синтеза. Все описанные ниже модификации последовательности аминокислот должны обеспечивать получение конструкции антитела, сохраняющей требуемую биологическую активность (связывание с FLT3 и с CD3) немодифицированной исходной молекулы.

Термин аминокислота, или остаток аминокислоты, как правило, относится к аминокислоте, определенной в данной области техники, например, аминокислоте, выбранной из группы, состоящей из: аланина (Ala, или А); аргинина (Arg, или R); аспарагина (Asn, или N); аспарагиновой кислоты (Asp, или D); цистеина (Cys, или С); глутамина (Gln, или Q); глутаминовой кислоты (Glu, или Е); глицина (Gly, или G); гистидина (His, или Н); изолейцина (Не, или I): лейцина (Leu, или L); лизина (Lys, или K); метионина (Met, или М); фенилаланина (Phe, или F); пролина (Pro, или Р); серина (Ser, или S); треонина (Thr, или Т); триптофана (Trp, или W); тирозина (Tyr, или Y) и валина (Val, или V), хотя при необходимости могут применяться модифицированные, синтетические или редкие аминокислоты. Обычно аминокислоты распределяют в группы имеющих неполярную боковую цепь (например, Ala, Cys, He, Leu, Met, Phe, Pro, Val); отрицательно заряженную боковую цепь (например, Asp, Glu); положительно заряженную боковую цепь (например, Arg, His, Lys); или незаряженную полярную боковую цепь (например, Asn, Cys, Gln, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp и Tyr) аминокислот.

Модификации аминокислот включают, например, удаления, и/или встраивания, и/или замены остатков в составе последовательностей аминокислот конструкций антитела. Для получения конечной конструкции осуществляют любую комбинацию удалений, встраиваний и замен при условии, что указанная

- 33 040387 конечная конструкция обладает требуемыми характеристиками. Изменения аминокислот также могут обуславливать изменения посттрансляционных процессов в конструкциях антитела, например изменение числа или положения сайтов гликозилирования.

Например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислот могут быть встроены или удалены в каждой из областей CDR (разумеется, с учетом их длины), и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 1о, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 25 аминокислот могут быть встроены или удалены в каждой из областей FR. Предпочтительно встраивание последовательностей аминокислот включает слияние с аминоконцом и/или карбоксильным концом последовательностей аминокислот длиной от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также встраивание внутрь последовательностей одного или нескольких остатков аминокислот. Вариант предусматривающей встраивание конструкции антитела согласно настоящему изобретению включает слияние с N-концом или с С-концом указанной конструкции антитела фермента, или слияние с полипептидом, который увеличивает время полужизни указанной конструкции антитела в сыворотке.

Представляющие максимальный интерес сайты для мутагенеза путем замены включают области CDR тяжелой и/или легкой цепи, в частности, гипервариабельных областей, однако также предусмотрены изменения FR тяжелой и/или легкой цепи. Указанные замены предпочтительно представляют собой консервативные замены согласно описанию в настоящем документе. Предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот могут быть заменены в области CDR, и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, или 25 аминокислот могут быть заменены в каркасных областях (областях FR), в зависимости от длины указанной области CDR или FR. Например, если последовательность области CDR охватывает 6 аминокислот, предусмотрена замена одной, двух или трех из указанных аминокислот. Аналогичным образом, если последовательность области CDR охватывает 15 аминокислот, предусмотрена замена одной, двух, трех, четырех, пяти или шести из указанных аминокислот.

Подходящий способ идентификации определенных остатков или областей конструкций антитела, расположенных в предпочтительной для мутагенеза локализации, называют аланин-сканирующим мутагенезом согласно описанию в источнике: Cunningham and Wells, Science, 244: 1081-1085 (1989). Согласно указанному способу идентифицируют остаток или группу целевых остатков в составе конструкции антитела (например, заряженные остатки, такие как arg, asp, his, lys и glu) и заменяют на нейтральную или отрицательно заряженную аминокислоту (наиболее предпочтительно, на аланин или полиаланин), чтобы повлиять на взаимодействие аминокислот с эпитопом.

Затем положения аминокислот, демонстрирующие функциональную чувствительность к заменам, уточняют путем введения дополнительных или отличных вариантов в сайты замены или вместо сайтов замены. Таким образом, несмотря на то, что сайт или область введения вариации последовательности аминокислот заданы заранее, как таковая природа мутации необязательно должна быть заранее задана. Например, для анализа или оптимизации проявлений мутации в заданном сайте может проводиться сканирование аланином или случайный мутагенез в целевом кодоне или области, и скрининг экспрессированных вариантов конструкции антитела для поиска оптимальной комбинации требуемой активности. Техники введения мутаций замены в заранее заданные сайты в ДНК с известной последовательностью хорошо известны, например, мутагенез с праймером М13 и ПЦР-мутагенез. Скрининг мутантов выполняют с применением анализов антигенсвязывающей активности, например, анализов на связывание FLT3 или CD3.

В общем случае, при замене аминокислот в одной или более, или во всех областях CDR тяжелой и/или легкой цепи, предпочтительно, чтобы полученная таким образом последовательность с заменами была по меньшей мере на 60% или 65%, более предпочтительно на 70% или 75%, еще более предпочтительно на 80% или 85%, и наиболее предпочтительно на 90% или 95% идентична оригинальной последовательности CDR. Это означает, что степень идентичности последовательности с заменами зависит от длины области CDR. Например, область CDR, содержащая 5 аминокислот, предпочтительно на 80% идентична соответствующей последовательности с заменами, чтобы по меньшей мере одна аминокислота могла быть заменена. Соответственно, области CDR указанной конструкции антитела могут отличаться разной степенью идентичности соответствующим последовательностям с заменами, например, CDRL1 может быть идентична на 80%, a CDRL3 может быть идентична на 90%.

Предпочтительные замены (или замещения) представляют собой консервативные замены. Однако предусмотрена любая замена (в том числе неконсервативная замена, или один или более из примеров замен, приведенных в табл. 1 ниже), при условии, что конструкция антитела сохраняет способность связываться с FLT3 посредством первого связывающего домена и с CD3 или CD3-эпсилон посредством второго связывающего домена; и/или ее области CDR идентичны полученной соответствующей последовательности с заменами (по меньшей мере на 60 или 65%, более предпочтительно на 70 или 75%, еще более предпочтительно на 80 или 85% и наиболее предпочтительно на 90 или 95% идентичны оригинальной последовательности области CDR).

Консервативные замены приведены в табл. 1 в столбце, озаглавленном предпочтительные замены. В тех случаях, когда такие замены приводят к изменению биологической активности, могут быть введены более существенные изменения, названные примерами замен в табл. 1 или дополнительно пред- 34 040387 ставленные ниже при описании классов аминокислот, и может проводиться скрининг продуктов для поиска требуемой характеристики.

Таблица 1. Замены аминокислот

Исходная аминокислота	Примеры замен	Предпочтительные замены
Ala (А)	val, leu, ile	val
Arg (R)	lys, gin, asn	lys
Asn (N)	gin, his, asp, lys, arg	gin
Asp (D)	glu, asn	glu
Cys (С)	ser, ala	ser
Gin (Q)	asn, glu	asn
Glu (E)	asp, gin	asp
Gly (G)	Ala	ala
His (H)	asn, gin, lys, arg	arg
He (I)	leu, val, met, ala, phe	leu
Leu (L)	норлейцин, ile, val, met, ala	ile
Lys (K)	arg, gin, asn	arg
Met (M)	leu, phe, ile	leu
Phe (F)	leu, val, ile, ala, tyr	tyr
Pro (P)	Ala	ala
Ser (S)	Thr	thr
Thr (T)	Ser	ser
Trp (W)	tyr, phe	tyr
Tyr (Y)	trp, phe, thr, ser	phe
Val (V)	ile, leu, met, phe, ala	leu

Существенные модификации биологических свойств конструкции антитела согласно настоящему изобретению осуществляют путем выбора замен, значимо различающихся по эффекту в отношении сохранения (а) структуры полипептидного остова в области замены, например в виде складчатой или спиральной конформации, (b) заряда или гидрофобности молекулы в целевом сайте или (с) основной части боковой цепи. Встречающиеся в природе остатки разделены на группы на основании общих свойств боковых цепей: (1) гидрофобные: норлейцин, met, ala, val, leu, ile; (2) нейтральные гидрофильные: cys, ser, thr; (3) кислые: asp, glu; (4) основные: asn, gin, his, lys, arg; (5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: gly, pro; и (6) ароматические: trp, tyr, phe.

Неконсервативные замены влекут за собой замену представителя одного из указанных классов на представителя другого класса. Любой остаток цистеина, не вовлеченный в сохранение надлежащей конформации конструкции антитела, может быть заменен обычно на серин для повышения устойчивости молекулы к окислению и предотвращения аберрантного перекрестного связывания. В то же время в антитело может быть добавлена цистеиновая связь или связи для повышения стабильности (в частности, если антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как Fv-фрагмент).

Идентичность и/или сходство последовательностей аминокислот определяют с применением стандартных техник, известных в данной области техники, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, алгоритма локальной идентичности последовательностей Смита и Уотермана (Smith and Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482), алгоритма выравнивания последовательностей по идентичности Нидлмана и Вунша (Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443), метода поиска подобия Пирсона и Липмана (Pearson and Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444), компьютеризированных вариантов указанных алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA из пакета программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Сайенс Драйв, Мэдисон, Висконсин), программы для выравнивания последовательностей Best Fit согласно описанию в источнике: Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387-395, предпочтительно с применением установленных по умолчанию параметров или путем осмотра. Предпочтительно процент идентичности вычисляют с применением FastDB на основе следующих параметров: штраф за несовпадение=1; штраф за пропуск в последовательности^; штраф за размер пропуска=0,33; штраф за объединение=30, Current Methods in Sequence Comparison and Analysis, Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc.

Примером подходящего алгоритма является PILEUP. В PILEUP создается несколько последовательностей выравнивания из группы родственных последовательностей с использованием прогрессивного попарного выравнивания. Он также позволяет построить дерево, отражающее кластерные связи, используемые для выравнивания. В PILEUP применяется упрощенный способ прогрессивного выравнива- 35 040387 ния по Feng & Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35:351-360; указанный способ аналогичен описанному в источнике: Higgins and Sharp, 1989, CABIOS 5:151-153. Подходящие параметры PILEUP включают штраф за введение пропуска по умолчанию=3,00, штраф за удлинение пропуска по умолчанию=0,10 и штраф за концевые пропуски.

Другим примером подходящего алгоритма является алгоритм BLAST, описанный в источниках: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 и Karin et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5787. В частности, подходящей программой с алгоритмом BLAST является программа WU-BLAST-2, происходящая из источника: Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266:460-480. В WU-BLAST-2 используется несколько параметров поиска, для большинства из которых установлены значения по умолчанию. Устанавливают следующие значения настраиваемых параметров: длина перекрывания=1, доля перекрывания=0,125, пороговая длина слова (Т)=Л. Параметры HSP S и HSP S2 принимают динамические значения, устанавливаемые самой программой в зависимости от состава конкретной последовательности и состава конкретной базы данных, поиск по которой ведется для представляющей интерес последовательности; однако указанные значения могут быть скорректированы для увеличения чувствительности.

Дополнительный подходящий алгоритм представлен алгоритмом Gapped BLAST согласно источнику: Altschul et al., 1993, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402. В Gapped BLAST используются оценки замен из BLOSUM-62; порог Т=9; метод двух совпадений для запуска удлинений без пропусков, цена за продолжения пропусков длиной k=10+k; Xu=16; Xg=40 для этапа поиска по базе данных и до 67 для этапа выведения данных указанных алгоритмов. Запуск выравниваний с пропусками происходит на основании оценки, соответствующей приблизительно 22 битам.

В общем случае гомология, сходство или идентичность аминокислот индивидуальных вариантов областей CDR составляет по меньшей мере 60% относительно последовательностей, представленных в настоящем документе, в более типичном случае гомология или идентичность предпочтительно увеличивается по меньшей мере до 65 или 70%, более предпочтительно по меньшей мере до 75 или 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере до 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и до почти 100%. Аналогичным образом, процент (%) идентичности последовательностей нуклеиновых кислот относительно последовательности нуклеиновой кислоты связывающих белков, идентифицированных в настоящем документе, определяется как процент остатков нуклеотидов в кандидатной последовательности, идентичных остаткам нуклеотидов в кодирующей последовательности указанной конструкции антитела. В конкретном способе используется модуль BLASTN пакета WU-BLAST-2 с настройками параметров по умолчанию, со значениями длины перекрывания и доли перекрывания, принятыми за 1 и 0,125 соответственно.

В общем случае гомология, сходство или идентичность последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих индивидуальные варианты областей CDR и последовательностей нуклеотидов, представленных в настоящем документе, составляет по меньшей мере 60%, и в более типичном случае гомология или идентичность предпочтительно увеличивается по меньшей мере до 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% и почти до 100%. Соответственно вариант CDR представляет собой вариант с заданной гомологией, сходством или идентичностью относительно исходной области CDR согласно настоящему изобретению, и сохраняет биологическую функцию, в том числе, но не ограничиваясь перечисленным, сохраняет по меньшей мере на 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% специфичности и/или активности исходной области CDR.

Согласно одному варианту реализации процент идентичности зародышевой линии человека и конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением составляет >70% или >75%, более предпочтительно ->80% или >85%, еще более предпочтительно ->90% и наиболее предпочтительно ->91%, >92%, >93%, >94%, >95% или даже >96%. См. пример 8. Считается, что идентичность антителам, представляющим собой продукты генов зародышевой линии человека, является важным признаком, снижающим риск стимуляции терапевтическими белками иммунного ответа против лекарственного средства у пациента во время лечения. Hwang и Foote (Hwang & Foote, Immunogenicity of engineered antibodies; Methods 36 (2005) 3-10) демонстрируют, что уменьшение не принадлежащих человеку частей лекарственных конструкций антитела приводит к уменьшению риска индукции антител против лекарственного средства у пациентов во время лечения. Сравнение исчерпывающего количества прошедших клиническую оценку лекарственных средств на основе антител и соответствующих данных по иммуногенности выявило тренд, заключающийся в приобретении белками меньшей иммуногенности при гуманизации V-областей антител (в среднем у 5,1% пациентов) по сравнению с антителами, несущими g неизмененные не принадлежащие человеку V-области (в среднем у 23,59% пациентов). Таким образом, желательно получение белковых терапевтических средств на основе V-области в форме конструкций антитела, имеющих более высокую степень идентичности последовательностям человека. С указанной целью определения идентичности зародышевой линии может проводиться выравнивание V-области VL с последовательностями аминокислот V-сегментов и J-сегментов зародышевой линии человека

- 36 040387 (http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) с применением программного обеспечения Vector NTI, и последовательностью аминокислот, рассчитанной путем деления идентичных остатков аминокислот на общее число остатков аминокислот VL в процентах. То же самое может быть осуществлено для VH-сегментов (http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) за исключением того, что VH CDR3 может быть исключен ввиду значительного разнообразия и отсутствия существующих партнеров для выравнивания VH CDR3 зародышевой линии человека. После этого могут применяться рекомбинантные техники для увеличения идентичности последовательностей генам зародышевой линии антител человека.

Согласно дополнительному варианту реализации конструкции биспецифического антитела согласно настоящему изобретению демонстрируют высокие уровни выхода мономеров в стандартных условиях исследования, например, при стандартном двухэтапном способе очищения. Предпочтительно, выход мономеров конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением составляет >0,25 мг/л супернатанта, более предпочтительно ->0,5 мг/л, еще более предпочтительно ->1 мг/л, и наиболее предпочтительно ->3 мг/л супернатанта.

Аналогичным образом может быть определен выход димерной изоформы конструкции антитела и, соответственно, процент мономеров (т.е. мономер: (мономер+димер)) конструкций антитела. Оценка продуктивности мономерных и димерных конструкций антитела и расчетный процент мономеров могут, например, быть получены на этапе очищения путем эксклюзионной хроматографии (SEC) культурального супернатанта в масштабе стандартизированного исследования в роллерных флаконах. Согласно одному варианту реализации процент мономерных конструкций антитела составляет >80%, более предпочтительно ->85%, еще более предпочтительно ->90%, и наиболее предпочтительно ->95%.

Согласно одному варианту реализации конструкции антитела обладают предпочтительной стабильностью в плазме (отношение ЕС₅₀ с плазмой к ЕС₅₀ без плазмы), составляющей <5 или <4, более предпочтительно -<3,5 или <3, еще более предпочтительно -<2,5 или <2, и наиболее предпочтительно -<1,5 или <1. Стабильность конструкции антитела в плазме может быть протестирована путем инкубации указанной конструкции в плазме человека при 37°С в течение 24 ч с последующим определением ЕС₅₀ в анализе цитотоксичности с высвобождением хрома-51. Эффекторные клетки в анализе цитотоксичности могут представлять собой стимулированные обогащенные положительными по CD8 клетками Т-клетки человека. Целевые клетки могут, например, представлять собой клетки СНО, трансфицированные FLT3 человека. Выбранное отношение эффекторных к целевым клеткам (Е:Т) может составлять 10:1. Пул плазмы человека, используемый для указанной цели, происходит из крови здоровых доноров, собранной с применением покрытых ЭДТК шприцев. Клеточные компоненты удаляют путем центрифугирования и собирают верхнюю фазу плазмы, а затем объединяют. В качестве контроля непосредственно перед анализом цитотоксичности конструкции антитела разводят в среде RPMI-1640. Стабильность в плазме рассчитывают как отношение ЕС₅₀ (после инкубации с плазмой) к ЕС₅₀ (в контроле). См. пример 13.

Также предпочтительно, чтобы конверсия конструкций антитела согласно настоящему изобретению из мономеров в димеры была незначительной. Указанная конверсия может быть измерена в разных условиях и проанализирована с применением высокоэффективной эксклюзионной хроматографии. См. пример 11. Например, инкубация мономерных изоформ конструкций антитела может проводиться в течение 7 дней при 37°С и концентрациях, составляющих, например, 100 мкг/мл или 250 мкг/мл, в инкубаторе. Предпочтительно, чтобы в указанных условиях процент димеров конструкций антитела согласно настоящему изобретению составлял <5%, более предпочтительно -<4%, еще более предпочтительно <3%, еще более предпочтительно -<2,5%, еще более предпочтительно -<2%, еще более предпочтительно -<1,5% и наиболее предпочтительно -<1% или <0,5%, или даже 0%.

Также предпочтительно, чтобы наблюдалась очень незначительная конверсия с образованием димеров конструкций биспецифического антитела согласно настоящему изобретению после нескольких циклов замораживания/размораживания. Например, концентрацию мономера указанной конструкция антитела доводят до 250 мкг/мл, например, в обычном рецепторном буфере и подвергают трем циклам замораживания/размораживания (замораживание при -80°С в течение 30 мин с последующим размораживанием в течение 30 мин при комнатной температуре), с последующим проведением высокоэффективной ЭХ для определения исходного процента мономеров конструкции антитела, которые перешли в димеры. Предпочтительно процент димеров конструкций биспецифического антитела составляет <%, более предпочтительно -<4%, еще более предпочтительно -<3%, еще более предпочтительно -<2,5%, еще более предпочтительно -<2%, еще более предпочтительно -<1,5% и наиболее предпочтительно -<1% или даже <0,5%, например, после трех циклов замораживания/размораживания.

Конструкции биспецифического антитела согласно настоящему изобретению предпочтительно проявляют благоприятную термостабильность с температурами агрегации, составляющими >45°С или >50°С, более предпочтительно ->52°С или >54°С, еще более предпочтительно ->56°С или >57°С, и наиболее предпочтительно ->58°С или >59°С. Показатель термостабильности может быть определен через температуру агрегации антитела согласно описанию ниже: раствор антитела в концентрации 250 мкг/мл переносят в одноразовую кювету и помещают в устройство для динамического светорассеяния (DLS).

- 37 040387

Образец нагревают от 40 до 70°С со скоростью 0,5°С/мин при постоянной регистрации измеряемого радиуса. Увеличение радиуса, которое указывает на плавление белка и агрегацию, используют для вычисления температуры агрегации антитела. См. пример 12.

Как вариант, могут быть определены кривые температур плавления с применением дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) для определения собственной биофизической стабильности белков конструкций антитела. Указанные эксперименты осуществляют с применением устройства MicroCal LLC (Нортгемптон, Массачусетс, США) VP-ДСК. Поглощение энергии образцом, содержащим конструкцию антитела, регистрируют при температуре от 20 до 90°С, и сравнивают с образцом, содержащим только рецептурный буфер. Конструкции антитела доводят до конечной концентрации, составляющей 250 мкг/мл, например, в подвижном буфере для ЭХ. Для регистрации соответствующей кривой плавления общую температуру образца поэтапно увеличивают. При каждом значении температуры Т регистрируют поглощение энергии образцом и референсным рецептурным буфером. Строят график зависимости разности поглощения энергии Ср (ккал/моль/°С) образцом и референсным буфером от соответствующей температуры. Температуру плавления определяют как температуру при первом максимуме поглощения энергии.

Также предусмотрено, что конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению не вступают в перекрестные реакции (т.е. по существу не связываются) с паралогами FLT3 человека KIT v1 (SEQ ID NO: 805), CSF1R v1 (SEQ ID NO: 806), PDGFRA (SEQ ID NO: 807) и/или NTM v3 (SEQ ID NO: 808). Кроме того, предусмотрено, что конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению не вступают в перекрестные реакции (т.е. по существу не связываются) с паралогами FLT3 макаки/яванского макака KIT v1, CSF1R v1, PDGFRA и/или NTM v3. См. пример 7.

Также предусмотрено, что конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению отличаются мутностью (по оценке OD340 после концентрирования очищенной мономерной конструкции антитела до 2,5 мг/мл и инкубации в течение ночи), составляющей <0,2, предпочтительно -<0,15, более предпочтительно -<0,12, еще более предпочтительно -<0,1, и наиболее предпочтительно -<0,08. См. пример 14.

Согласно дополнительному варианту реализации конструкция антитела в соответствии с настоящим изобретением стабильна при кислотных значениях рН. Чем более толерантно указанная конструкция антитела ведет себя при нефизиологических значениях рН, таких как рН 5,5 (значение рН, необходимое для проведения, например, катионообменной хроматографии), тем выше уровень выделения указанной конструкции антитела при элюировании с ионообменной колонки относительно общего количества загруженного белка. Уровень выделения указанной конструкции антитела на ионообменной (например, катионообменной) колонке при рН 5,5 предпочтительно составляет >30%, более предпочтительно ->40%, более предпочтительно ->50%, еще более предпочтительно ->60%, еще более предпочтительно ->70%, еще более предпочтительно ->80%, еще более предпочтительно ->90%, еще более предпочтительно ->95% и наиболее предпочтительно ->99%. См. пример 15.

Также предусмотрено, что конструкции биспецифического антитела согласно настоящему изобретению демонстрируют терапевтическую эффективность или противоопухолевую активность. Ее оценка может, например, проводиться в ходе исследования согласно приведенному ниже примеру модели ксенотрансплантата распространенной опухоли человека:

На 1 день исследования 5x106 клеток линии положительных по FLT3 человека раковых клеток (например, OVCAR-8) подкожно инъецируют в дорсальную часть правого бока самкам мышей NOD/SCID. После того, как значение среднего размера опухолей достигает приблизительно 100 мм³, мышам трансплантируют размноженные in vitro положительные по CD3 человека Т-клетки путем инъекции приблизительно 2x107 клеток в брюшную полость животных. Мышам в получающей основу контрольной группе 1 не вводят эффекторные клетки, и используют их в качестве контроля без трансплантации для сравнения с получающей основу контрольной группой 2 (которой вводят эффекторные клетки) для мониторинга влияния на рост опухоли только Т-клеток. Лечение антителом начинают после того, как значение среднего размера опухолей достигает приблизительно 200 мм³. Значение среднего размера опухоли в каждой получающей лечение группе в день начала лечения не должно статистически отличаться от значения в любой другой группе (вариационный анализ). Мыши получают лечение конструкцией биспецифического антитела FLT3xCD3 в дозе 0,5 мг/кг/сутки путем внутривенной болюсной инъекции в течение приблизительно 15-20 дней. Опухоли измеряют калипером в ходе исследования и оценивают прогрессирование путем межгруппового сравнения объемов опухолей (TV). Ингибирование роста опухоли Т/С [%] определяют, рассчитывая TV как Т/С%=100χ(среднее значение TV в анализируемой группе)/(среднее значение TV в контрольной группе 2).

Специалисту известны способы модификации или коррекции определенных параметров данного исследования, таких как число инъецируемых опухолевых клеток, участок инъекции, число трансплантируемых Т-клеток человека, количество конструкций биспецифического антитела, которое предполагается вводить, и временные рамки, с сохранением возможности получения значимого и воспроизводимого

- 38 040387 результата. Предпочтительно, ингибирование роста опухоли Т/С [%] составляет <70 или <60, более предпочтительно -<50 или <40, еще более предпочтительно -<30 или <20 и наиболее предпочтительно

-<10 или <5, или даже <2,5.

Согласно настоящему изобретению также предложена молекула полинуклеотида/нуклеиновой кислоты, кодирующая конструкцию антитела согласно настоящему изобретению.

Полинуклеотид представляет собой биополимер, состоящий из 13 или более нуклеотидных мономеров, соединенных в цепь ковалентными связями. ДНК (такая как кДНК) и РНК (такая как мРНК) представляют собой примеры полинуклеотидов с отдельными биологическими функциями. Нуклеотиды представляют собой органические молекулы, которые служат в качестве мономеров или субъединиц молекул нуклеиновых кислот, таких как ДНК или РНК. Молекула нуклеиновой кислоты, или полинуклеотид может быть двунитевой и однонитевой, линейной и кольцевой. Она предпочтительно находится в векторе, который предпочтительно находится в клетке-хозяине. Указанная клетка-хозяин, например, после трансформации или трансфекции вектором или полинуклеотидом согласно настоящему изобретению способна экспрессировать конструкцию антитела. Для указанной цели полинуклеотид или молекулу нуклеиновой кислоты функционально связывают с последовательностями контроля.

Генетический код представляет собой набор правил, в соответствии с которыми информация, закодированная в генетическом материале (нуклеиновых кислотах), транслируется в белки. Биологическое декодирование в живых клетках осуществляет рибосома, объединяющая аминокислоты в порядке, задаваемом мРНК, с применением молекул тРНК для транспортировки аминокислот и для считывания трех нуклеотидов мРНК за один прием. Указанный код определяет задаваемый последовательностями указанных нуклеотидных триплетов, которые называют кодонами, порядок добавления каждой последующей аминокислоты во время синтеза белка. За некоторыми исключениями, содержащий три нуклеотида кодон в последовательности нуклеиновой кислоты определяет мутацию одной аминокислоты. Поскольку подавляющее большинство генов кодирует полностью идентичный код, указанный конкретный код часто называют каноническим или стандартным генетическим кодом. Генетический код определяет последовательность белка для заданной кодирующей область, тогда как другие геномные области могут оказывать влияние на то, когда и где продуцируются указанные белки.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложен вектор, содержащий полинуклеотид/молекулу нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению.

Вектор представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, применяемую в качестве основы для переноса (чужеродного) генетического материала в клетку. Термин вектор охватывает плазмиды, вирусы, космиды и искусственные хромосомы, однако не ограничивается перечисленным. В общем случае, сконструированные векторы содержат точку начала репликации, сайт множественного клонирования и селектируемый маркер. Собственно вектор обычно представляет собой последовательность нуклеотидов, часто последовательность ДНК, которая содержит вставку (трансген) и последовательность большего размера, которая служить в качестве остова указанного вектора. Современные векторы могут иметь дополнительные признаки, помимо трансгенной вставки и остова: промотор, генетический маркер, устойчивость к антибиотикам, репортерный ген, нацеливающую последовательность, метку для очищения белка. Векторы, называемые экспрессионными векторами (экспрессионными конструкциями), в частности, предназначены для экспрессии трансгена в целевой клетке, и обычно содержат последовательности контроля.

Термин последовательности контроля относится к последовательностям ДНК, необходимым для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организмехозяине. Последовательности контроля, которые подходят для прокариот, например, включают промотор, необязательно последовательность оператора и сайт связывания рибосомы. Эукариотические клетки, как известно, используют промоторы, сигналы полиаденилирования и энхансеры.

Нуклеиновая кислота является функционально связанной, если она находится в состоянии функциональной взаимосвязи с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, ДНК препоследовательности или секреторной лидерной последовательности функционально связана с ДНК полипептида в том случае, если она экспрессируется в виде белка-предшественника, который принимает участие в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связан с кодирующей последовательностью в том случае, если он оказывает влияние на транскрипцию указанной последовательности; или сайт связывания рибосомы функционально связан с кодирующей последовательностью в том случае, если он расположен так, чтобы облегчать трансляцию. Обычно функционально связанный означает, что объединяемые последовательности ДНК являются непрерывными, и, в случае секреторной лидерной последовательности, непрерывными и расположенными внутри рамки считывания. Однако энхансеры не обязательно должны быть непрерывными. Объединение осуществляют путем лигирования в удобных сайтах рестрикции. В том случае, если таких сайтов не существует, применяют синтетические олигонуклеотидные адапторы или линкеры в соответствии со стандартной практикой.

Трансфекция представляет собой процесс преднамеренного введения молекул нуклеиновой кислоты или полинуклеотидов (в том числе векторов) в целевые клетки. Указанный термин в основном

- 39 040387 используют для обозначения не основанных на вирусах методов для эукариотических клеток. Термин трансдукция часто используют для описания вирус-опосредованного переноса молекул нуклеиновой кислоты или полинуклеотидов. Трансфекция клеток животных, как правило, включает открытие временных пор или отверстий в клеточной мембране, обеспечивающих поглощение материала. Трансфекция может проводиться с применением фосфата кальция, путем электропорации, сжатия клеток или путем смешивания катионного липида с материалом для получения липосом, которые сливаются с клеточной мембраной, доставляя внутрь свое содержимое.

Термин трансформация применяют для описания невирусного переноса молекул нуклеиновой кислоты или полинуклеотидов (в том числе векторов) в бактерии, а также в не принадлежащие животным эукариотические клетки, в том числе растительные клетки. Трансформация, таким образом, представляет собой генетическое изменение бактериальной или не принадлежащей животному эукариотической клетки, являющееся результатом непосредственного поглощения через клеточную мембрану (мембраны) из окружения и последующего включения экзогенного генетического материала (молекул нуклеиновых кислот). Трансформация может быть реализована с применением искусственных способов. Для осуществления трансформации клетки или бактерии должны находиться в состоянии компетентности, которое может представлять собой ограниченный по времени ответ на условия окружающей среды, такие как голодание и плотность клеток.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложена клетка-хозяин, трансформированная или трансфицированная молекулой полинуклеотида/нуклеиновой кислоты или вектором согласно настоящему изобретению.

В настоящем документе термины клетка-хозяин или клетка-реципиент включают любые индивидуальные клетки или культуру клеток, которые могут быть или были реципиентами векторов, экзогенных молекул нуклеиновых кислот и полинуклеотидов, кодирующих конструкцию антитела согласно настоящему изобретению; и/или реципиентами собственно указанной конструкции антитела. Введение соответствующего материала в клетку осуществляют путем трансформации, трансфекции и т.п. Подразумевается также, что термин клетка-хозяин включает потомство или потенциальное потомство единственной клетки. Поскольку в последующих поколениях могут возникать определенные модификации, обусловленные естественной, случайной или преднамеренной мутацией или влияние окружающей среды, такое потомство может, фактически, не быть полностью идентичным (по морфологии или по геномному или общему набору ДНК) исходной клетке, однако также входит в объем термина согласно настоящему документу. Подходящие клетки-хозяева включают прокариотические или эукариотические клетки, а также включают, не ограничиваясь перечисленными, бактерии, дрожжевые клетки, грибные клетки, растительные клетки и клетки животных, такие как клетки насекомых и клетки млекопитающих, например мыши, крысы, макаки или человека.

Конструкция антитела согласно настоящему изобретению может быть продуцирована бактериями. После экспрессии конструкцию антитела согласно настоящему изобретению выделяют из клеточной пасты Е. coli в виде растворимой фракции; она может быть очищена посредством, например, аффинной хроматографии и/или размерно-эксклюзионным способом. Конечное очищение может проводиться способом, аналогичным процессу очищения антитела, экспрессированного, например, в клетках СНО.

Помимо прокариот эукариотические микроорганизмы, такие как мицелиальные грибы или дрожжи, являются подходящими хозяевами для клонирования или экспрессии конструкции антитела согласно настоящему изобретению. Из низших эукариотических микроорганизмов в качестве хозяев чаще всего применяют Saccharomyces cerevisiae, или обыкновенные пекарские дрожжи. Однако ряд других родов, видов и штаммов общедоступны и подходят для целей настоящего изобретения, например, Schizosaccharomyces pombe, хозяева из рода Kluyveromyces, такие как K. lactis, K. fragilis (АТСС 12424), K. bulgaricus (АТСС 16045), K. wickeramii (АТСС 24178), K. waltii (АТСС 56500), K. drosophilarum (АТСС 36906), K. thermotolerans и K. marxianus; Yarrowia (EP 402226); Pichia pastoris (ЕР 183070); Candida; Trichoderma reesia (EP 244234); Neurospora crassa; Schwanniomyces, например, Schwanniomyces occidentalis; мицелиальные грибы, такие как Neurospora, Penicillium, Tolypocladium, и хозяева из рода Aspergillus, такие как A. nidulans и A. niger.

Подходящие клетки-хозяева для экспрессии гликозилированной конструкции антитела согласно настоящему изобретению происходят из многоклеточных организмов. Примеры клеток беспозвоночных включают растительные клетки и клетки насекомых. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы и варианты, и соответствующие пермиссивные хозяева - клетки насекомых, таких как Spodoptera frugiperda (гусеница), Aedes aegypti (комар), Aedes albopictus (комар), Drosophila melanogaster (плодовая мушка) и Bombyx mori. Различные вирусные штаммы для трансфекции находятся в открытом доступе, например, вариант L-1 Autographa californica NPV и штамм Bm-5 вируса ядерного полиэдроза (NPV) Bombyx mori, и такие вирусы могут применяться в соответствии с настоящим изобретением согласно описанию в настоящем документе, в частности, в качестве вируса для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda.

Культуры растительных клеток, таких как клетки хлопчатника, кукурузы, картофеля, сои, петунии, томата, резуховидки (Arabidopsis) и табака могут также применяться в качестве хозяев. Клонирующие и

- 40 040387 экспрессионные векторы, подходящие для применения при получении белков в культуре растительных клеток известны специалистам в данной области техники. См. например, источники: Hiatt et al., Nature (1989) 342: 76-78, Owen et al. (1992) Bio/Technology 10: 790-794, Artsaenko et al. (1995) The Plant J 8: 745750 и Fecker et al. (1996) Plant Mol Biol 32: 979-986.

Однако максимальный интерес представляли клетки позвоночных, и размножение клеток позвоночных в культуре (тканевой культуре) стало рутинной процедурой. Примерами подходящих линий хозяев - клеток млекопитающих являются линия клеток почек обезьяны CV1, трансформированная SV40 (COS-7, АТСС CRL 1651); линия клеток эмбриональной почки человека (клетки 293 или 293, субклонированные для роста в суспензионной культуре, Graham et al., J. Gen Virol. 36: 59 (1977)); клетки почки новорожденного хомяка (BHK, АТСС CCL 10); клетки яичника китайского хомячка/-DHFR (СНО, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 (1980)); клетки Сертоли мыши (ТМ4, Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)); клетки почки обезьяны (CVI АТСС CCL 70); клетки почки африканской зеленой обезьяны (VERO-76, АТСС CRL1587); клетки карциномы шейки матки человека (HELA, АТСС CCL 2); клетки почек собаки (MDCK, АТСС CCL 34); клетки печени крысы линии Buffalo (BRL 3A, АТСС CRL 1442); клетки легкого человека (W138, АТСС CCL 75); клетки печени человека (Hep G2, 1413 8065); клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562, АТСС CCL5 1); клетки TRI (Mather et al., Annals N. Y Acad. Sci. (1982) 383: 44-68); клетки MRC 5; клетки FS4; и линия клеток гепатомы человека (Hep G2).

Согласно дополнительному варианту реализации согласно настоящему изобретению предложен способ получения конструкции антитела согласно настоящему изобретению, включающий культивирование клетки-хозяина согласно настоящему изобретению в условиях, обеспечивающих экспрессию указанной конструкции антитела согласно настоящему изобретению и выделение полученной конструкции антитела из культуры.

В настоящем документе термин культивирование относится к in vitro поддержанию, дифференцировке, росту, пролиферации и/или размножению клеток в среде при подходящих условиях. Термин экспрессия включает любой этап, задействованный при получении конструкций антитела согласно настоящему изобретению, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, транскрипцию, посттранскрипционную модификацию, трансляцию, посттрансляционную модификацию и секрецию.

При применении рекомбинантных техник указанная конструкция антитела может быть продуцирована внутриклеточно, в периплазматическом пространстве, или прямо секретирована в среду. В том случае, если указанная конструкция антитела продуцируется внутриклеточно, в качестве первого этапа проводят удаление частиц дебриса, происходящих из клеток-хозяев или лизированных фрагментов, например, путем центрифугирования или ультрафильтрации. В источнике: Carter et al., Bio/Technology 10: 163167 (1992) описана процедура выделения антител, которые секретируются в периплазматическое пространство Е. coli. Вкратце, клеточную пасту размораживают в присутствии ацетата натрия (рН 3,5), ЭДТК и фенилметилсульфонилфторида (ФМСФ) в течение приблизительно 30 мин. Клеточный дебрис может быть удален путем центрифугирования. Если антитело секретируется в среду, супернатанты в таких экспрессионных системах обычно сначала концентрируют с применением коммерчески доступного фильтра для концентрации белка, например, на ультрафильтрационной установке от Amicon или Millipore Pellicon. Любой из вышеперечисленных этапов может включать применение ингибитора протеазы, такого как ФМСФ, для ингибирования протеолиза; для предотвращения роста случайных загрязнителей могут быть включены антибиотики.

Конструкция антитела согласно настоящему изобретению, полученная из клеток-хозяев, может быть выделена или очищена с применением, например, хроматографии с гидроксиапатитом, гельэлектрофореза, диализа и аффинной хроматографии. Также доступны другие техники очищения белков, такие как фракционирование на ионообменной колонке, осаждение этанолом, обращенно-фазовая ВЭЖХ, хроматография на силикагеле, хроматография на гепарин-сефарозе (SEPHAROSE™), хроматография на анионообменной или катионообменной смоле (например, на колонке с полиаспарагиновой кислотой), хроматофокусирование, ДСН-ПААГ-электрофорез и осаждение сульфатом аммония, в зависимости от антитела, которое предполагается выделять. В том случае, если конструкция антитела согласно настоящему изобретению включает домен CH3, для очищения подходит смола Bakerbond ABX (J.T. Baker, Филлипсбург, Нью-Джерси).

Аффинная хроматография представляет собой предпочтительную технику очищения. Матрица, к который присоединен аффинный лиганд, чаще всего представляет собой агарозу, однако доступны и другие матрицы. Механически стабильные матрицы, например, из стекла с контролируемым размером пор или поли(стирендивинил)бензена обеспечивают большие скорости потока и меньшую продолжительность обработки по сравнению с достижимыми при использовании агарозы.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая конструкцию антитела согласно настоящему изобретению или конструкцию антитела, полученную в соответствии со способом согласно настоящему изобретению. Для фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению предпочтительно, чтобы гомогенность указанной конструкции антитела составляла >80%, предпочтительнее >81%, >82%, >83%, >84% или >85%, более предпочтительно

- 41 040387 >86%, >87%, >88%, >89% или >90%, еще более предпочтительно >91%, >92%, >93%, >94% или >95% и наиболее предпочтительно >96%, >97%, >98% или >99%.

В настоящем документе термин фармацевтическая композиция относится к композиции, которая подходит для введения пациенту, предпочтительно пациенту-человеку. В частности, предпочтительная фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит одну или совокупность указанных конструкций антител(а) согласно настоящему изобретению, предпочтительно, в терапевтически эффективном количестве. Предпочтительно в состав с указанной фармацевтической композицией дополнительно включены один или более подходящих (фармацевтически эффективных) носителей, стабилизаторов, вспомогательных веществ, разбавителей, солюбилизаторов, поверхностно-активных веществ, эмульгаторов, консервантов и/или адъювантов. Приемлемые составляющие указанной композиции предпочтительно нетоксичны для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению включают, не ограничиваясь перечисленными, жидкие, замороженные и лиофилизированные композиции.

Предложенные согласно настоящему изобретению композиции могут содержать фармацевтически приемлемый носитель. В целом, в настоящем документе, фармацевтически приемлемый носитель означает все без исключения водные и неводные растворы, стерильные растворы, растворители, буферы, например забуференный фосфатом солевой раствор (ФСБ), воду, суспензии, эмульсии, такие как эмульсии масло/вода, различные типы смачивающих агентов, липосомы, дисперсионные среды и покрытия, которые совместимы с фармацевтическим введением, в частности с парентеральным введением. Применение таких сред и агентов в фармацевтических композициях хорошо известно в данной области техники, и составы с композициями, содержащие такие носители, могут быть получены с применением хорошо известных стандартных способов.

Согласно определенным вариантам реализации предложены фармацевтические композиции, содержащие конструкцию антитела согласно настоящему изобретению и дополнительно содержащие одно или более вспомогательных веществ, таких как иллюстративно описанные в указанном разделе и в других разделах настоящего документа. При этом согласно настоящему изобретению вспомогательные вещества могут применяться для разнообразных целей, например для коррекции физических, химических или биологических свойств составов, например, для коррекции вязкости, и/или способов согласно настоящему изобретению, для улучшения эффективности и/или стабилизации таких составов и способов с защитой от разложения и порчи в результате, например, стрессовых воздействий, возникающих во время производства, транспортировки, хранения, подготовки перед применением и введения, а также впоследствии.

Согласно некоторым вариантам реализации указанная фармацевтическая композиция может содержать материалы для получения составов, предназначенные для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности, аромата, стерильности, стабильности, скорость растворения или высвобождения, адсорбции или проникновения композиции (см. REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18^th Edition, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company). Согласно таким вариантам реализации подходящие материалы для получения составов могут включать, не ограничиваясь перечисленными:

аминокислоты, такие как глицин, аланин, глутамин, аспарагин, треонин, пролин, 2-фенилаланин, в том числе заряженные аминокислоты, предпочтительно, лизин, лизин ацетат, аргинин, глутамат и/или гистидин противомикробные средства, такие как антибактериальные и фунгицидные агенты антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, метионин, сульфит натрия или гидросульфит натрия;

буферы, буферные системы и буферные агенты, которые применяются для поддержания физиологических или чуть более низких значений рН в композиции, как правило, в диапазоне значений рН от приблизительно 5 до приблизительно 8 или 9; примерами буферов являются борат, бикарбонат, Tris-HCl, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты, сукцинат, фосфат, гистидин и ацетат; например Tris-буфер с рН, составляющим приблизительно 7,0-8,5, или ацетатный буфер с рН, составляющим приблизительно 4,0-5,5;

неводные растворители, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и подходящие для инъекций органические сложные эфиры, такие как этилолеат;

водные носители, в том числе вода, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, в том числе солевые растворы и забуференные среды;

биоразлагаемые полимеры, такие как сложные полиэфиры;

объемообразующие агенты, такие как маннит или глицин;

хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК);

изотонические и задерживающие абсорбцию агенты;

комплексообразующие агенты, такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин) наполнители;

моносахариды; дисахариды; и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); угле- 42 040387 воды могут представлять собой нередуцирующие сахара, предпочтительно, трегалозу, сахарозу, октасульфат, сорбит или ксилит;

(низкомолекулярные) белки, полипептиды или белковоподобные носители, такие как сывороточный альбумин человека или бычий, желатин или иммуноглобулины, предпочтительно происходящие от человека;

красящие и вкусоароматические агенты;

серосодержащие восстанавливающие агенты, такие как глутатион, тиоктовая кислота, тиогликолят натрия, тиоглицерин, [альфа]-монотиоглицерин и тиосульфат натрия разбавляющие агенты;

эмульгирующие агенты;

гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон, солеобразующие противоионы, такие как натрий;

консерванты, такие как противомикробные средства, антиоксиданты, хелатирующие агенты, инертные газы и т.п.;

примерами являются хлорид бензалкония, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенетиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода);

комплексы с металлами, такие как комплексы белков с Zn;

растворители и корастворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль);

сахара и сахарные спирты, такие как трегалоза, сахароза, октасульфат, маннит, сорбит или ксилит, стахиоза, манноза, сорбоза, ксилоза, рибоза, миоинозитоза, галактоза, лактит, рибит, миоинозитол, галактит, глицерин, циклитолы (например, инозит), полиэтиленгликоль; и многоатомные сахарные спирты;

суспендирующие агенты;

поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты, такие как плюроники, ПЭГ, сложные эфиры сорбита, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапол; поверхностно-активные вещества могут представлять собой детергенты, предпочтительно, имеющие молекулярную массу >1,2 кДа, и/или простой полиэфир, предпочтительно, имеющий молекулярную массу >3 кДа;

неограничивающие примеры предпочтительных детергентов представлены Tween 20, Tween 40, Tween 60, Tween 80 и Tween 85; неограничивающие примеры предпочтительных простых полиэфиров представлены ПЭГ 3000, ПЭГ 3350, ПЭГ 4000 и ПЭГ 5000;

повышающие стабильность агенты, такие как сахароза или сорбит;

повышающие тоничность агенты, такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, маннит, сорбит;

основы для парентеральной доставки, в том числе раствор хлорида натрия, раствор Рингера с декстрозой, раствор декстрозы и хлорида натрия, раствор Рингера с лактатом, или нелетучие масла;

основы для внутривенной доставки, в том числе восполнители жидкости и питательных веществ, восполнители электролитов (например, на основе раствора Рингера с декстрозой).

Для специалистов в данной области техники очевидно, что разные составляющие фармацевтической композиции (например, перечисленные выше) могут оказывать разные эффекты, например, аминокислота может работать как буфер, стабилизатор и/или антиоксидант; маннит может работать как объемообразующий агент и/или повышающий тоничность агент; хлорид натрия может работать как основа для доставки и/или повышающий тоничность агент и т.п.

Предусмотрено, что композиция согласно настоящему изобретению может содержать, помимо полипептида согласно настоящему изобретению, определенного в настоящем документе, дополнительные биологически активные агенты, в зависимости от предполагаемого применения указанной композиции. Такие агенты могут представлять собой лекарственные средства, оказывающие действие на желудочнокишечный тракт, лекарственные средства, работающие как цитостатики, лекарственные средства, предотвращающие гиперурикемию, лекарственные средства, ингибирующие иммунные реакции (например кортикостероиды), лекарственные средства, модулирующие воспалительный ответ, лекарственные средства, оказывающие действие на систему кровообращения, и/или такие агенты, как цитокины, известные в данной области техники. Также предусмотрено применение конструкции антитела согласно настоящему изобретению в котерапии, т.е. в комбинации с другим противораковым медикаментом.

Согласно некоторым вариантам реализации оптимальная фармацевтическая композиция определяется специалистом в данной области техники на основании, например, предполагаемого способа введения, формата доставки и требуемой дозировки. См., например, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, выше. Согласно некоторым вариантам реализации такие композиции могут оказывать влияние на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость выведения in vivo конструкции антитела согласно настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам реализации природа первичной основы или носителя в фармацевтической композиции может быть водной или неводной. Например, подходящей основой или носителем может быть вода для инъекций, физиологический солевой раствор или искусственная спинномозговая жидкость, с возможным добавлением других материалов, широко применяемых в композициях для парентерального введения. Нейтральный забуфе- 43 040387 ренный солевой раствор или солевой раствор, смешанный с сывороточным альбумином, представляют собой дополнительные примеры основ. Согласно некоторым вариантам реализации композиции, содержащие конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, могут быть подготовлены для хранения путем смешивания выбранной композиции, имеющей требуемую степень чистоты, с необязательными рецептурными агентами (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, выше) в форме уплотненного лиофилизата или водного раствора. Кроме того, согласно некоторым вариантам реализации конструкция антитела согласно настоящему изобретению может быть введена в состав в виде лиофилизата с применением подходящих вспомогательных веществ, таких как сахароза.

В тех случаях, когда предполагается парентеральное введение, терапевтические композиции для применения согласно настоящему изобретению могут быть представлены в форме апирогенного приемлемого для парентерального введения водного раствора, содержащего требуемую конструкцию антитела согласно настоящему изобретению в фармацевтически приемлемой основе. В частности, подходящей основой для парентеральной инъекции является стерильная дистиллированная вода; в этом случае содержащий конструкцию антитела согласно настоящему изобретению состав представляет собой стерильный изотонический раствор, предохраняемый надлежащим образом. Согласно некоторым вариантам реализации при получении состава требуемая молекула может быть включена в состав с агентом, таким как инъецируемые микросферы, биоразлагаемые частицы, полимерные соединения (такие как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), гранулы или липосомы, которые могут обеспечивать контролируемое или продолжительное высвобождение продукта, доставка которого может осуществляться посредством депо-инъекции. Согласно некоторым вариантам реализации может также применяться гиалуроновая кислота, эффект которой способствует увеличению продолжительности нахождения в кровотоке. Согласно некоторым вариантам реализации для введения требуемой конструкции антитела может применяться доставка лекарственных средств с помощью имплантируемых устройств.

Для специалистов в данной области техники будут очевидными дополнительные фармацевтические композиции, в том числе составы, содержащие конструкцию антитела согласно настоящему изобретению в виде составов для продолжительной или контролируемой доставки/высвобождения. Техники получения разнообразных других составов для продолжительной или контролируемой доставки, таких как липосомные носители, биоразлагаемые микрочастицы или пористые гранулы и инъецируемые депо, также известные специалистам в данной области техники. См., например, международную заявку на патент № PCT/US93/00829, где описано контролируемое высвобождение пористых полимерных микрочастиц для доставки фармацевтических композиций. Составы для продолжительного высвобождения могут включать полупроницаемые полимерные матрицы в виде объектов определенной формы, например, пленок или микрокапсул. Матрицы для продолжительного высвобождения могут включать сложные полиэфиры, гидрогели, полилактиды (согласно описанию в патенте США № 3773919 и опубликованной заявке на европейский патент № ЕР 058481), сополимеры L-глутаминовой кислоты и гамма-этил-L-глутамата (Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), поли(2-гидроксиэтил-метакрилата) (Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 и Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), этиленвинилацетата (Langer et al., 1981, выше) или поли-D(-)-3-гидроксимасляной кислоты (опубликованная заявка на европейский патент №ЕР 133988). Композиции для продолжительного высвобождения могут также включать липосомы, которые могут быть получены с применением любого из ряда способов, известных в данной области техники. См., например, Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82: 3688-3692; опубликованные заявки на европейский патент №№ ЕР 036676; ЕР 088046 и ЕР 143949.

Указанная конструкция антитела может также быть заключена в микрокапсулы, полученные, например, с применением техник коацервации или полимеризации на поверхности раздела фаз (например, гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и поли(метилметацилат)ные микрокапсулы, соответственно), в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие техники раскрыты в источнике: Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A., Ed., (1980).

Фармацевтические композиции, применяемые для введения in vivo, как правило, представлены стерильными составами. Стерилизация может осуществляться путем фильтрации через мембраны для стерилизующей фильтрации. Если осуществляется лиофилизация композиции, стерилизация с применением указанного способа может проведена либо до, либо после лиофилизации и восстановления. Композиции для парентерального введения могут храниться в лиофилизированной форме или в растворе. Композиции для парентерального введения обычно помещают в контейнер с устройством для стерильного доступа, например, пакет для внутривенного введения растворов или флакон с пробкой, которая может протыкаться иглой для подкожного введения.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предусмотрены самозабуферивающие составы, содержащие конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, которые могут применяться в качестве фармацевтических композиций, согласно описанию в международной заявке на патент WO 06138181A2 (PCT/US 2006/022599). Описания стабилизации белков, материалов для составов и способов, подходящих для применения в указанных случаях, представлены в различных источниках, таких как Arakawa et al.: Solvent interactions in pharmaceutical formulations, Pharm Res. 8(3): 285-91 (1991); Ken

- 44 040387 drick et al., Physical stabilization of proteins in aqueous solution в руководстве: Rational Design of Stable Protein Formulations: Theory and Practice; Carpenter and Manning, eds. Pharmaceutical Biotechnology. 13: 61-84 (2002), и Randolph et al., Surfactant-protein interactions, Pharm Biotechnol. 13: 159-75 (2002); см., в частности, фрагменты, относящиеся к вспомогательным веществам и связанным с ними способам, для получения самозабуферивающих белковых составов в соответствии с настоящим изобретением, в частности, белковых фармацевтических продуктов и способов, для медицинского применения в ветеринарии и/или у человека.

Соли могут применяться в соответствии с определенными вариантами реализации настоящего изобретения, например, для коррекции ионной силы и/или изотоничности состава и/или для улучшения растворимости и/или физической стабильности белка или другого ингредиента композиции согласно настоящему изобретению. Как хорошо известно, ионы могут стабилизировать белки в их нативном состоянии посредством связывания с заряженными остатками на поверхности белка, экранирования заряженных и полярных групп в белке и уменьшения силы их электростатических взаимодействий, взаимодействий притяжения и отталкивания. Ионы также могут стабилизировать белок в денатурированном состоянии посредством связывания, в частности, с денатурированными пептидными связями (--CONH) указанного белка. Кроме того, ионное взаимодействие с заряженными и полярными групп в белке также может уменьшать межмолекулярные электростатические взаимодействия и, таким образом, предотвращать или снижать агрегацию и нерастворимость белков.

Эффекты ионных форм на белки значимо различаются. Была разработана включающая несколько категорий классификация ионов и их эффектов на белки, которая может применяться при получении составов с фармацевтическими композициями согласно настоящему изобретению. Один из примеров представлен рядом Гофмейстера, в котором ионные и полярные неионные растворенные вещества располагаются исходя из оказываемого ими эффекта на конформационную стабильность белков в растворе. Стабилизирующие растворенные вещества называются космотропными.

Дестабилизирующие растворенные вещества называются хаотропными. Космотропы широко применяются в высоких концентрациях (например, >1 М сульфат аммония) для осаждения белков из раствора (высаливания). Хаотропы широко применяются для денатурации и/или солюбилизации белков (всаливания). Относительная эффективность ионов для всаливания и высаливания определяет их положение в ряде Гофмейстера.

В соответствии с различными вариантами реализации настоящего изобретения в составах, содержащих конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, могут применяться свободные аминокислоты в качестве объемообразующих агентов, стабилизаторов и антиоксидантов, а также в качестве других стандартных вариантов применения. Лизин, пролин, серин и аланин могут применяться для стабилизации белков в составе. Глицин подходит для применения при лиофилизации для обеспечения надлежащей структуры и свойств уплотненного лиофилизата. Аргинин может подходить для ингибирования агрегации белков как в жидких, так и в лиофилизированных составах. Метионин подходит для применения в качестве антиоксиданта.

Полиолы включают сахара, например маннит, сахарозу и сорбит, и многоатомные спирты, такие как, например, глицерин и пропиленгликоль, и применительно к настоящему документу полиэтиленгликоль (ПЭГ) и родственные вещества. Полиолы являются космотропами. Они подходят для применения в качестве стабилизирующих агентов как в жидких, так и в лиофилизированных составах, для защиты белков от процессов физического и химического разложения. Полиолы также подходят для коррекции тоничности составов. Подходящими для применения полиолами согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения являются, среди прочих, маннит, широко используемый для обеспечения структурной стабильности уплотненного лиофилизата в лиофилизированных составов. Он гарантирует структурную стабильность уплотненного лиофилизата. Как правило, его применяют вместе с лиопротектором, например сахарозой. Сорбит и сахароза относятся к предпочтительным агентам для коррекции тоничности и стабилизаторам для защиты от вызванных замораживанием и размораживанием стрессовых воздействий при транспортировке или получении нефасованных продуктов в процессе производства. Редуцирующие сахара (содержащие свободные альдегидные или кетоновые группы), такие как глюкоза и лактоза, могут гликировать поверхность остатков лизина и аргинина. Соответственно, в целом они не относятся к предпочтительным полиолам для применения согласно настоящему изобретению. Кроме того, сахара, которые образуют такие реакционноспособные группы, такие как сахароза, которая гидролизуется с образованием фруктозы и глюкозы в кислотных условиях, и, соответственно, обуславливает гликирование, также, в связи с этим, не относятся к предпочтительным полиолам согласно настоящему изобретению. ПЭГ подходит для стабилизации белков и в качестве криопротектора, и в связи с этим может применяться согласно настоящему изобретению.

Согласно вариантам реализации составы, содержащие конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, дополнительно содержат поверхностно-активные вещества. Молекулы белков могут быть склонны к адсорбции на поверхностях, а также к денатурации и последующей агрегации на поверхностях раздела фаз воздух/жидкость, твердое вещество/жидкость и жидкость/жидкость. Указанные эффекты обычно обратно пропорциональны концентрации белка. Указанные разрушительные взаимодействия

- 45 040387 обратно пропорциональны концентрации белка и, как правило, усугубляются физическим перемешиванием, например, возникающим во время транспортировки и манипуляций с продуктом. Поверхностноактивные вещества часто используются для предотвращения, минимизации или уменьшения поверхностной адсорбции. Подходящие для этой цели поверхностно-активные вещества согласно настоящему изобретению включают полисорбат 20, полисорбат 80, другие сложные эфиры жирных кислот полиэтоксилатов сорбитана, и полоксамер 188. Поверхностно-активные вещества также широко используют для контроля конформационной стабильности белков. Применение поверхностно-активных веществ в этой связи является белок-специфическим, поскольку любое заданное поверхностно-активное вещество, как правило, стабилизирует некоторые белки и дестабилизирует другие.

Полисорбаты подвержены окислительному разложению и при поставке часто содержат количества пероксидов, достаточные для окисления боковых цепей остатков белка, в частности метионина. Соответственно полисорбаты необходимо применять с осторожностью, и в случае их применения должны использоваться минимальные эффективные концентрации. В этом отношении полисорбаты представляют собой пример подчинения общему правилу, согласно которому вспомогательные вещества должны использоваться в минимальных эффективных концентрациях.

Согласно вариантам реализации составы, содержащие конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, содержат дополнительно один или более антиоксидантов. Разрушительное окисление белков в фармацевтических составах до некоторой степени может быть предотвращено путем поддержания надлежащих уровней кислорода и температуры в окружающей среде и предохранения от воздействия света. Антиоксидантные вспомогательные вещества могут также применяться для предотвращения окислительного разложения белков. К подходящим в указанном отношении антиоксидантам относятся восстанавливающие агенты, поглотители кислорода/свободных радикалов и хелатирующие агенты. Антиоксиданты для применения в терапевтических белковых составах согласно настоящему изобретению предпочтительно являются водорастворимыми и сохраняют активность на протяжении всего срока годности продукта. В этой связи ЭДТК представляет собой предпочтительный антиоксидант согласно настоящему изобретению. Антиоксиданты могут повреждать белки. Например, восстанавливающие агенты, такие как глутатион, в частности, может разрушать внутримолекулярные дисульфидные связи. Соответственно антиоксиданты для применения согласно настоящему изобретению выбирают, в том числе, так, чтобы исключить или в достаточной мере снизить возможность повреждения белков в составе ими самими.

Составы согласно настоящему изобретению могут включать ионы металлов, представляющие собой кофакторы белков, необходимые для образования белковых координационных комплексов, такие как цинк, необходимый для образования определенных суспензий инсулина. Ионы металлов также могут ингибировать некоторые процессы, разрушающие белки. Однако ионы металлов также катализируют физические и химические процессы, разрушающие белки. Ионы магния (10-120 мМ) могут применяться для ингибирования изомеризации аспарагиновой кислоты с образованием изоаспарагиновой кислоты. Ионы Са⁺² (в концентрации до 100 мМ) могут увеличивать стабильность дезоксирибонуклеазы человека. Mg⁺², Mn⁺² и Zn⁺², однако, могут дестабилизировать рчДНКазу. Аналогичным образом, Са⁺² и Sr⁺² могут стабилизировать фактор VIII; он может быть дестабилизирован Mg⁺², Mn⁺² и Zn⁺², Cu⁺² и Fe⁺², и его агрегация может увеличиваться под действием ионов Al⁺³.

Варианты реализации составов, содержащих конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, дополнительно содержат один или более консервантов. Консерванты необходимы при разработке многодозовых парентеральных составов, подразумевающих более чем однократное извлечение из одного контейнера. Их первичная функция заключается в ингибировании роста микроорганизмов и обеспечении стерильности продукта на протяжении всего срока годности или продолжительности применения лекарственного продукта. Широко используемые консерванты включают бензиловый спирт, фенол и м-крезол. Хотя консерванты имеют долгую историю применения с низкомолекулярными парентеральными препаратами, разработка белковых составов, включающих консерванты, может представлять собой сложную задачу.

Консерванты практически всегда оказывают дестабилизирующий эффект на белки (обуславливают агрегацию), что стало основным фактором, ограничивающим их применение в многодозовых белковых составах. До сих пор большинство составов с белковыми лекарственными средствами предназначалось исключительно для однократного применения. Однако в тех случаях, когда возможно получение многодозовых составов, это обеспечивает дополнительные преимущества, состоящие в удобстве для пациента и увеличении рыночной реализуемости. Хорошим примером является гормон роста человека (чГР), разработка содержащих консерванты составов с которым привела к коммерциализации более удобных систем с многоразовой инъекционной ручкой. В настоящее время на рынке представлено по меньшей мере четыре варианта таких устройств-ручек с содержащими консерванты составами с чГР. Нордитропин (жидкость, Novo Nordisk), нутропин AQ (жидкость, Genentech) и генотропин (лиофилизированный двухкамерный картридж, Pharmacia & Upjohn) содержат фенол, тогда как в состав соматропа (Eli Lilly) входит м-крезол. При получении и разработках содержащих консерванты лекарственных форм необходимо учитывать несколько аспектов. Эффективная концентрация консерванта в лекарственном продукте должна быть оптимизирована. Для этого требуется тестирование заданного консерванта в лекарственной

- 46 040387 форме в диапазоне концентраций, обеспечивающих противомикробную эффективность, но не нарушающих стабильность белка.

Как можно было бы ожидать, разработка жидких составов, содержащих консерванты, представляет большую сложность, чем разработка лиофилизированных составов. Высушенные замораживанием продукты могут быть лиофилизированы без консерванта и восстановлены содержащим консервант разбавителем в момент применения. Таким образом укорачивается период времени, на протяжении которого консервант контактирует с белком, что значимо минимизирует ассоциированные риски для стабильности. В случае жидких составов эффективность консерванта и стабильность должны сохраняться на протяжении всего срока годности продукта (приблизительно 18-24 месяца). Важно отметить, что эффективность консерванта должна быть продемонстрирована в итоговом составе, содержащем активное лекарственное средство и все вспомогательные компоненты.

Конструкции антитела согласно описанию в настоящем документе могут также входить в состав иммунолипосом. Липосома представляет собой везикулу небольшого размера, образуемую липидами, фосфолипидами и/или поверхностно-активными веществами различных типов, которая подходит для доставки лекарственного средства млекопитающему. Компоненты липосомы обычно располагаются в виде бислоя аналогично расположению липидов в биологических мембранах. Липосомы, содержащие указанная конструкцию антитела, получают в применением способов, известных в данной области техники, например, согласно описанию в источниках: Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980); патенты США №№ 4485045 и 4544545 и WO 97/38731. Липосомы с увеличенным временем циркуляции описаны в патенте США № 5013556. В частности, подходящие липосомы могут быть получены методом обращенно-фазового выпаривания липидной композиции, содержащей фосфатидилхолин, холестерин и ПЭГ-дериватизированный фосфатидилэтаноламин (ПЭГ-ФЭ). Липосомы экструдируют через фильтры с порами определенного размера для получения липосом требуемого диаметра. Fab'-фрагменты конструкции антитела согласно настоящему изобретению могут быть конъюгированы с липосомами согласно описанию в источнике: Martin et al. J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982), посредством реакции обмена дисульфидов. В состав липосомы необязательно входит химиотерапевтический агент. См. Gabizon et al. J. National Cancer Inst. 81 (19) 1484 (1989).

После получения состава с фармацевтической композицией она может храниться в стерильных флаконах в виде раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества, кристаллического вещества, или в виде дегидрированного или лиофилизированного порошка. Такие составы может храниться либо в готовой к применению форме, либо в форме (например, лиофилизированной), предназначенной для восстановления перед введением.

Биологическая активность фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, может быть определена, например, путем проведения анализов цитотоксичности, согласно описанию в представленных ниже примерах, в WO 99/54440 или в источнике: Schlereth et al., Cancer Immunol. Immunother. 20 (2005), 1-12. Эффективность или in vivo эффективность в настоящем документе относится к ответу на терапию фармацевтической композицией согласно настоящему изобретению, по оценке с применением, например стандартизированных критериев ответа Национального института онкологии (NCI). Успешность или in vivo эффективность терапии с применением фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению относится к эффективности композиции для осуществления предусмотренного назначения, т.е. способности указанной композиции приводить к требуемому эффекту, т.е. истощению по патологическим клеткам, например, опухолевым клеткам. Мониторинг эффективности in vivo может проводиться с применением общепринятых стандартных способов оценки соответствующих нозологических единиц, в том числе, но не ограничиваясь перечисленными, подсчета лейкоцитов, подсчета форменных элементов, сортировки клеток с активированной флуоресценцией, аспирации костного мозга. Кроме того, могут использоваться различные специфичные для заболевания клинические биохимические показатели и другие общепринятые стандартные способы. Кроме того, могут применяться компьютерная томография, рентген, ядерная магнитно-резонансная томография (например, для оценки на основе принятых Национальным институтом онкологии критериев ответа [Cheson BD, Horning SJ, Coiffier B, Shipp MA, Fisher RI, Connors JM, Lister ТА, Vose J, Grillo-Lopez A, Hagenbeek A, Cabanillas F, Klippensten D, Hiddemann W, Castellino R, Harris NL, Armitage JO, Carter W, Hoppe R, Canellos GP. Report of an international workshop to standardize response criteria for non-Hodgkin's lymphomas. NCI Sponsored International Working Group. J Clin Oncol. 1999 Apr;17(4):1244]), позитронно-эмиссионное томографическое сканирование, подсчет лейкоцитов, подсчет форменных элементов, сортировка клеток с активированной флуоресценцией, аспирация костного мозга, биопсия/гистологические исследования лимфатических узлов, а также различные клинические биохимические показатели, специфические для лимфомы (например, уровень лактатдегидрогеназы), и другие общепринятые стандартные способы.

Другая серьезная трудность при разработке лекарственных средств, таких как фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению, заключается в обеспечении предсказуемости модуляции фармакокинетических свойств. Для этого может быть установлен фармакокинетический профиль кандидатного лекарственного средства, т.е. профиль фармакокинетических показателей, влияющих на способность конкретного лекарственного средства обеспечивать лечение заданного состояния.

- 47 040387

Фармакокинетические показатели лекарственного средства, оказывающие влияние на способность лекарственного средства обеспечивать лечение определенной нозологической единицы, включают, не ограничиваясь перечисленными: время полужизни, объем распределения, пресистемный метаболизм в печени и степень связывания в сыворотке крови. На эффективность определенного лекарственного агента может влиять каждый из упомянутых выше показателей.

Время полужизни означает время, необходимое для элиминации 50% введенного лекарственного средства за счет биологических процессов, например, метаболизма, экскреции и т.п. Под пресистемным метаболизмом в печени понимают предрасположенность лекарственного средства к метаболизированию при первом контакте с печенью, т.е. во время первого прохождения через печень. Объем распределения означает степень удерживания лекарственного средства в различных компартментах организма, таких как, например, внутриклеточное и внеклеточное пространство, ткани и органы и т.п., и распределение лекарственного средства в пределах указанных компартментов. Степень связывания в сыворотке крови означает предрасположенность лекарственного средства к взаимодействию и связыванию с белками сыворотки крови, такими как альбумин, что приводит к снижению или утрате биологической активности указанного лекарственного средства.

Фармакокинетические показатели также включают биодоступность, латентный период (Tlag), T_max, скорость абсорбции, начала действия и/или C_max для заданного количества введенного лекарственного средства. Биодоступность означает количество лекарственного средства в компартменте крови. Латентный период означает период задержки между введением лекарственного средства и его детекцией и возможностью измерения в крови или плазме. T_max представляет собой период времени, после которого достигается максимальная концентрация лекарственного средства в крови, а C_max представляет собой максимальную достигаемую для заданного лекарственного средства концентрацию в крови. На период времени до достижения в крови или ткани концентрации лекарственного средства, которая необходима для обеспечения его биологического эффекта, влияют все показатели. Фармакокинетические показатели конструкций биспецифического антитела, демонстрирующих межвидовую специфичность, которые могут быть определены в ходе доклинического тестирования на животных - не являющихся шимпанзе приматах, согласно описанию выше, также приведены, например, в публикации: Schlereth et al. (Cancer Immunol. Immunother. 20 (2005), 1-12).

Согласно одному варианту реализации предложена конструкция антитела согласно настоящему изобретению или конструкция антитела, полученная в соответствии со способом согласно настоящему изобретению, для применения при предотвращении, лечении или облегчении гематологического ракового заболевания или метастатического ракового заболевания.

Составы, описанные в настоящем документе, подходят в качестве фармацевтических композиций для лечения, облегчения и/или предотвращения патологического медицинского состояния согласно описанию в настоящем документе у нуждающегося в этом пациента. Термин лечение относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим или превентивным мерам. Лечение включает применение или введение указанного состава в организм, выделенную ткань или клетку пациента, страдающего заболеванием/расстройством, имеющего симптом заболевания/расстройства или предрасположенность к заболеванию/расстройству, для излечения, исцеления, смягчения, ослабления, изменения, устранения, облегчения, улучшения или влияния на указанное заболевание, на симптом указанного заболевания или предрасположенность к указанному заболеванию.

Термин облегчение в настоящем документе относится к любому улучшению болезненного состояния пациента, страдающего опухолью или раковым заболеванием, или метастатическим раковым заболеванием согласно описанию ниже в настоящем документе, путем введения нуждающемуся в этом субъекту конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением. Такое улучшение может также выражаться в виде замедления или остановки прогрессирования у пациента опухоли или ракового заболевания или метастатического ракового заболевания. Термин предотвращение в настоящем документе означает избегание возникновения или повторного возникновения у пациента опухоли или ракового заболевания, или метастатического ракового заболевания согласно описанию ниже в настоящем документе, путем введения нуждающемуся в этом субъекту конструкций антитела в соответствии с настоящим изобретением.

Термин заболевание относится к любому состоянию, при котором лечение указанной конструкцией антитела или фармацевтической композицией согласно описанию в настоящем документе обеспечивает преимущество. Указанный термин включает хронические и острые расстройства или заболевания, в том числе патологические состояния, обуславливающие предрасположенность млекопитающего к рассматриваемому заболеванию.

Неоплазма представляет собой аномальный рост ткани, обычно, но не всегда формирующей образование. В указанном случае формирующееся впоследствии образование обычно называют опухолью. Неоплазмы или опухоли могут быть доброкачественными, потенциально злокачественными (предраковыми) или злокачественными. Злокачественные неоплазмы, как правило, называют раком. Они обычно внедряются в окружающую ткань и разрушают ее, и могут образовывать метастазы, т.е. распространяются в другие части, ткани или органы организма. Таким образом, термин метастатическое раковое забо- 48 040387 левание охватывает метастазы в другие ткани или органы, отличные от пораженных исходной опухолью. Лимфомы и лейкозы представляют собой лимфоидные неоплазмы. Для целей настоящего изобретения они также охвачены терминами опухоль или раковое заболевание.

Согласно предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения гематологическое раковое заболевание представляет собой ОМЛ, и метастатическое раковое заболевание может происходить из него.

Предпочтительные опухолевые или раковые заболевания в контексте настоящего изобретения выбраны из группы, состоящей из рака молочной железы, карциноидной опухоли, рака шейки матки, рака ободочной и прямой кишки, рака эндометрия, рака желудка, рака головы и шеи, мезотелиомы, рака печени, рака легкого, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака кожи, рака почек и рака желудка. Более предпочтительно, опухолевое или раковое заболевание, предпочтительно представляющее собой солидную опухоль, может быть выбрано из группы, состоящей из рака яичников, рака поджелудочной железы, мезотелиомы, рака легкого, рака желудка и рака молочной железы с тройным негативным фенотипом. Метастатическое раковое заболевание может происходить из любого из вышеперечисленных заболеваний.

Согласно настоящему изобретению также предложен способ лечения или облегчение гематологического ракового заболевания или метастатического ракового заболевания, включающий этап введения нуждающемуся в этом субъекту конструкции антитела согласно настоящему изобретению или конструкции антитела, полученной в соответствии со способом согласно настоящему изобретению.

Термины нуждающийся субъект или нуждающиеся в лечении субъекты включает субъектов, уже страдающих расстройством, а также субъектов, указанное расстройство у которых предполагается предотвратить. Нуждающийся субъект или пациент включает человека и других субъектовмлекопитающих, получающих профилактическое или терапевтическое лечение.

Указанную конструкцию антитела согласно настоящему изобретению обычно разрабатывают с учетом специфических путей и способов введения, специфических дозировок и частот введения, специфических вариантов лечения специфических заболеваний, в том числе диапазонов биодоступности и устойчивости. Материалы композиции предпочтительно вводят в состав в концентрациях, приемлемых для участка введения.

Соответственно, согласно настоящему изобретению могут разрабатываться составы и композиции для доставки посредством любого подходящего способа введения. В контексте настоящего изобретения пути введения включают, не ограничиваясь перечисленными, следующие:

местный (например, накожный, ингаляционный, назальный, глазной, аурикулярный/ушной, вагинальный, мукозальный);

энтеральный (например, пероральный, желудочно-кишечный, сублингвальный, сублабиальный, буккальный, ректальный); и парентеральный (например, внутривенный, внутриартериальный, внутрикостный, внутримышечный, интрацеребральный, интрацеребровентрикулярный, эпидуральный, интратекальный, подкожный, внутрибрюшинный, экстраамниотический, внутрисуставный, внутрисердечный, внутрикожный, внутриочаговый, внутриматочный, внутрипузырный, интравитреальный, чрескожный, интраназальный, трансмукозальный, внутрисуставной,интралюминальный).

Фармацевтические композиции и конструкция антитела согласно настоящему изобретению, в частности, подходят для парентерального введения, например, для подкожной или внутривенной доставки, например, путем инъекции, такой как болюсная инъекция, или путем инфузии, такой как непрерывная инфузия. Фармацевтические композиции могут вводиться с применением медицинского устройства. Примеры медицинских устройств для введения фармацевтических композиций описаны в патентах США №№ 4475196; 4439196; 4447224; 4447233; 4486194; 4487603; 4596556; 4790824; 941880; 5064413; 5312335; 5312335;5383851 и 5399163.

В частности, согласно настоящему изобретению предложено бесперебойное введение подходящей композиции. Согласно неограничивающему примеру бесперебойное или, по существу, бесперебойное, т.е. непрерывное введение может быть реализовано с применением насосной системы малого размера, носимой пациентом, для дозированного притока терапевтического агента в организм пациента. Фармацевтическая композиция, содержащая конструкцию антитела согласно настоящему изобретению, может вводиться с применением указанных насосных систем. Такие насосные системы широко известны в данной области техники и обычно подразумевают периодическую замену картриджей, содержащих терапевтический агент для инфузии. Замена картриджа в такой насосной системе может повлечь за собой временный перерыв в бесперебойном в остальное время поступлении терапевтического агента в организм пациента. В таком случае все равно считается, что фаза введения до замены картриджа и фаза введения после замены картриджа, в рамках значений фармацевтических методов и способов согласно настоящему изобретению, в совокупности обеспечивают бесперебойное введение такого терапевтического агента.

Непрерывное или бесперебойное введение конструкций антитела согласно настоящему изобретению может осуществляться внутривенно или подкожно при помощи устройства для доставки текучих

- 49 040387 сред или насосной системы малого размера, включающей механизм приведения текучей среды в движение для обеспечения перемещения текучей среды из резервуара, и пусковой механизм для запуска перемещающего механизма. Насосные системы для подкожного введения могут включать иглу или канюлю для прокалывания кожи пациента и доставки подходящей композиции в организм пациента. Указанные насосные системы могут быть зафиксированы непосредственно на коже или присоединены к коже пациента независимо от вены, артерии или кровеносного сосуда, что обеспечивает прямой контакт насосной системы и кожи пациента. Насосная система может быть присоединена к коже пациента в течение периода от 24 ч до нескольких дней. Насосная система может иметь незначительный размер и содержать резервуар малого объема. Согласно неограничивающему примеру объем резервуара для подходящей для введения фармацевтической композиции может составлять от 0,1 до 50 мл.

Непрерывное введение может также осуществляться чрескожно посредством пластыря, который носится на коже и подлежит замене через определенные интервалы времени. Специалисту в данной области техники известны системы доставки лекарственных средств с применением пластыря, подходящие для указанной цели. Следует отметить, что чрескожное введение, в частности, подходит для бесперебойного введения, поскольку замена первого израсходованного пластыря может благоприятным образом осуществляться одновременно с размещением нового второго пластыря, например, на поверхности кожи в непосредственной близости от первого израсходованного пластыря и непосредственно до удаления первого израсходованного пластыря. Проблемы, связанные с прерыванием поступления или отключением источника питания, не возникают.

В том случае, если фармацевтическая композиция была лиофилизирована, лиофилизированный материал сначала восстанавливают в подходящей жидкости перед введением. Лиофилизированный материал может быть восстановлен, например, в бактериостатической воде для инъекций (BWFI), физиологическом солевом растворе, забуференном фосфатом солевом растворе (ФСБ) или в том же составе, в котором находился белок до лиофилизации.

Композиции согласно настоящему изобретению могут вводиться субъекту в подходящей дозе, которая может быть определена, например, в исследованиях с эскалацией дозы с введением возрастающих доз, демонстрирующих межвидовую специфичность конструкций антитела согласно настоящему изобретению, описанных в настоящем документе, не являющимся шимпанзе приматам, например макакам. Согласно описанию выше демонстрирующая межвидовую специфичность конструкция антитела согласно описанному в настоящем документе изобретению может благоприятным образом применяться в идентичной форме при доклиническом тестировании у не являющихся шимпанзе приматов и в качестве лекарственного средства у человека. Схему дозирования определяет лечащий врач с учетом клинических факторов. Как хорошо известно в области медицины, дозировки для каждого пациента зависят от многих факторов, в том числе от размера пациента, площади поверхности тела, возраста, конкретного соединения, введение которого предполагается осуществлять, пола, времени и способа введения, общего состояния здоровья, и другие лекарственные средства, которые вводятся одновременно.

Термин эффективная доза, или эффективная дозировка определен как количество, достаточное для достижения или, по меньшей мере, частичного достижения требуемого эффекта. Термин терапевтически эффективная доза определен как количество, достаточное для излечения или, по меньшей мере, частичной остановки заболевания и его осложнений у пациента, уже страдающего от указанного заболевания. Количества или дозы, эффективные при указанном применении, зависят от подлежащего лечению состояния (назначения), доставляемой конструкции антитела, терапевтических условий и целей, тяжести заболевания, предшествующей терапии, клинической истории пациента и ответа на терапевтический агент, способа введения, размера (массы тела, площади поверхности тела или размера органа) и/или состояния (возраста и общего состояния здоровья) пациента и общего состояния собственной иммунной системы пациента. Надлежащая доза может быть скорректирована по усмотрению лечащего врача таким образом, чтобы она могла быть введена пациенту однократно или в виде серии введений, и обеспечивать оптимальный терапевтический эффект.

Типичная дозировка может варьировать в диапазоне от приблизительно 0,1 мкг/кг до приблизительно 30 мг/кг или более, в зависимости от упомянутых выше факторов. Согласно конкретным вариантам реализации дозировка может варьировать в диапазоне от 1,0 мкг/кг до приблизительно 20 мг/кг, необязательно - от 10 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг, или от 100 мкг/кг до приблизительно 5 мг/кг.

Терапевтически эффективное количество конструкции антитела согласно настоящему изобретению предпочтительно приводит к уменьшению тяжести симптомов заболевания, увеличению частоты или продолжительности периодов без симптомов заболевания или предотвращению нарушения или инвалидности вследствие поражения заболеванием. Для лечения экспрессирующих FLT3 опухолей терапевтически эффективное количество конструкции антитела согласно настоящему изобретению, например, направленного против FLT3/против CD3 конструкции антитела, предпочтительно ингибирует рост клеток или рост опухоли по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 80% или по меньшей мере приблизительно на 90% относительно не получающих лечения пациентов. Способность соединения ингибировать

- 50 040387 рост опухоли может быть оценена в модели на животных для прогнозирования эффективности в отношении опухолей человека.

Фармацевтическая композиция может вводиться в качестве единственного терапевтического средства или, по мере необходимости, в комбинации с дополнительными видами терапии, такими как противораковая терапия, например, с другими белковоподобными и небелковоподобными лекарственными средствами. Указанные лекарственные средства могут вводиться одновременно с композицией, содержащей конструкцию антитела согласно описанному в настоящем документе изобретению или отдельно, до или после введения указанной конструкции антитела, в установленные сроки и в установленных дозах.

Термин эффективная нетоксическая доза в настоящем документе относится к переносимой дозе предложенной согласно настоящему изобретению конструкции антитела, достаточно высокой для того, чтобы приводить к истощению по патологическим клеткам, элиминации опухоли, уменьшению размеров опухоли или стабилизации заболевания без или по существу без значительных токсических эффектов. Такие эффективные нетоксические дозы могут быть определены, например, в ходе исследований с эскалацией дозы, описанных в данной области техники, и должны быть ниже дозы, индуцирующей серьезные нежелательные побочные явления (дозолимитирующая токсичность, ДЛТ).

Термин токсичность в настоящем документе относится к токсическим эффектам лекарственного средства, которые проявляются в виде нежелательных явлений или серьезных нежелательных явлений. Указанные побочные явления могут относиться к отсутствию переносимости указанного лекарственного средства в целом и/или отсутствию местной переносимости после введения. Токсичность может также включать тератогенные или канцерогенные эффекты, обуславливаемые лекарственным средством.

Термин безопасность, безопасность in vivo или переносимость в настоящем документе относится к введению лекарственного средства без индуцирования серьезных нежелательных явлений непосредственно после введения (местная переносимость) и в течение более продолжительного периода применения указанного лекарственного средства. Безопасность, безопасность in vivo или переносимость может оцениваться, например, через регулярные промежутки времени во время лечения и в период последующего наблюдения. Измерения включают клиническую оценку, например, органных проявлений и скрининг аномалий лабораторных показателей. Может осуществляться клиническая оценка, и отклонения от нормальных результатов регистрируют/кодируют в соответствии со стандартами NCICTC и/или MedDRA. Оценка органных проявлений может включать оценку по таким критериям, как аллергия/иммунология, кровь/костный мозг, сердечная аритмия, коагуляция и т.п., согласно представленным, например, в Общих терминологических критериях нежелательных явлений, v3.0 (СТСАЕ). Лабораторные показатели, которые могут быть протестированы, включают, например, гематологические, клинические химические показатели, коагулограмму и анализ мочи, а также исследования других биологических жидкостей, таких как сыворотка, плазма, лимфатическая или спинномозговая жидкость, ликвор и т.п. Оценка безопасности может, соответственно, осуществляться, например, путем физикального обследования, техник визуализации (т.е. ультразвука, рентгена, КТ-сканирования, магнитно-резонансной визуализации (МРТ), других измерений с применением технических устройств (т.е. электрокардиограммы), по основным показателям жизнедеятельности, изменению лабораторных показателей и регистрации нежелательных явлений. Например, нежелательные явления у не являющихся шимпанзе приматов при применении и в способах согласно настоящему изобретению могут быть исследованы гистопатологическими и/или гистохимическими способами.

Вышеупомянутые термины также упоминаются, например, в S6: Доклиническая оценка безопасности лекарственных средств, полученных биотехнологическими способами (Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived Pharmaceuticals); Гармонизированное трехстороннее руководство ICH; собрание Управляющего комитета ICH 16 июля 1997 г.

Согласно дополнительному варианту реализации настоящего изобретения предложен набор, содержащий конструкцию с антителом согласно настоящему изобретению, конструкцию антитела, полученную в соответствии со способом согласно настоящему изобретению, полинуклеотид согласно настоящему изобретению, вектор согласно настоящему изобретению и/или клетку-хозяина согласно настоящему изобретению.

В контексте настоящего изобретения термин набор означает два или более компонентов - один из которых соответствует конструкции антитела, фармацевтической композиции, вектору или клеткехозяину согласно настоящему изобретению - совместно упакованных в контейнер, реципиента или иным образом. Таким образом, набор может быть описан как совокупность продуктов и/или приспособлений, достаточных для достижения определенной цели, который может продаваться в виде единого комплекта.

Набор может содержать один или более реципиентов (таких как сосуды, ампулы, контейнеры, шприцы, флаконы, пакеты) любой подходящей формы, размера и из любого подходящего материала (предпочтительно, водонепроницаемого, например, пластика или стекла), содержащих конструкцию антитела или фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению в подходящей дозировке для введения (см. выше). Указанный набор может дополнительно содержать инструкции по применению (например, в форме буклета или инструкции по эксплуатации), средства для введения конструкции анти- 51 040387 тела согласно настоящему изобретению, такие как шприц, насос, устройство для инфузии или т.п., средства для восстановления конструкции антитела согласно настоящему изобретению и/или средства для разведения конструкции антитела согласно настоящему изобретению.

Согласно настоящему изобретению также предложены наборы, содержащие формы для однодозового введения. Набор согласно настоящему изобретению может также содержать первый реципиент, содержащие высушенную/лиофилизированную конструкцию антитела, и второй реципиент, содержащий водный состав. Согласно определенным вариантам реализации настоящего изобретения предложены наборы, содержащие однокамерные и многокамерные предварительно заполненные шприцы (например, шприцы с жидкостями и шприцы с лиофилизатом).

Краткое описание чертежей

Фиг. 1: (a) Схематическое изображение структуры мономерного белка FLT3 и (b) кристаллическая структура гомодимера FLT3, взаимодействующего с гомодимером FLT3LG.

Фиг. 2: Схематическое изображение структуры молекул химерного FLT3 человека/мыши, применяемых для определения характеристик связывающего эпитопный кластер элемента.

Фиг. 3: Схематическое изображение структуры усеченных конструкций FLT3, применяемых для определения характеристик связывающего эпитопный кластер элемента.

Фиг. 4: Анализ конкуренции связывающего FLT3 элемента согласно настоящему изобретению с лигандом FLT3 за связывание FLT3.

Клетки СНО, трансфицированные FLT3 человека, инкубировали в присутствии и в отсутствие 10 мкг/мл лиганда FLT3 в течение 30 мин (без этапа промывания). Добавляли периплазматические заготовки scFv и инкубировали в течение 30 мин. Детекцию проводили с применением антитела мыши против FLAG+конъюгированного с ФЭ антитела козы против антител мыши и измерения средней интенсивности флуоресценции с помощью FACS (средний уровень (+ лиганд)/средний уровень (без лиганда)х100%).

Фиг. 5: FACS-анализ связывания отобранных биспецифических одноцепочечных конструкций с межвидовой специфичностью с клетками СНО, трансфицированными FLT3 человека (hu), линией CD3+ Т-клеток человека HPBaLL, клеток СНО, трансфицированных FLT3 яванского макака (cyno) и линией CD3+ Т-клеток макаки LnPx 4119. Красной линией обозначены клетки, инкубированные с 2 мкг/мл очищенного мономерного белка, которые затем инкубировали с антителом мыши против I2C и меченым ФЭ антителом козы против IgG мыши для детекции. Черная линия на гистограмме соответствует отрицательному контролю: клетки, инкубированные только с антителом против I2C, а также меченым ФЭ антителом для детекции (см. пример 6).

Фиг. 6: Цитотоксическая активность, индуцированная отобранными одноцепочечными конструкциями с межвидовой специфичностью, перенаправленными на истощенные по CD56 нестимулированные МКПК человека в качестве эффекторных клеток и трансфицированные FLT3 человека клетки СНО в качестве целевых клеток (Пример 9).

Фиг. 7: Перекрестно-реактивное связывание с CD3, FLT3 и его изоформами). 5 мкг/мл белка BiTE: 4°C 60 мин; 2 мкг/мл антитела против I2C 3Е5.А5: 4°С, 30 мин; конъюгированное с ФЭ антитело козы против антител мыши 1:100: 4°С, 30 мин.

Фиг. 8: Отсутствие связывания с паралогами и нетрансфицированными СНО. 5 мкг/мл белка BiTE: 4°C 60 мин; 2 мкг/мл антитела против I2C 3Е5.А5: 4°С, 30 мин; конъюгированное с ФЭ антитело козы против антител мыши 1:100: 4°С, 30 мин.

Фиг. 9: Картирование эпитопных кластеров - Кластер Е1.

Фиг. 10: Конструкции с антителом scFc к FLT3 активны при применении нестимулированных МКПК человека против трансфицированных FLT3 человека клеток СНО в отсутствие и в присутствии FLT3LG (лиганд FLT3).

Примеры

Настоящее изобретение проиллюстрировано приведенными ниже примерами. Указанные примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего изобретения. Настоящее изобретение ограничено исключительно формулой изобретения.

Пример 1. Получение клеток СНО, экспрессирующих FLT3 дикого типа и химерный FLT3

Антиген FLT3 может быть подразделен на шесть разных субдоменов или областей, которые определены для примеров 1 и 2. Последовательность АК указанных пяти субдоменов представлена в последовательностях SEQ ID NO: 814-818.

Получали следующие молекулы; см. также фиг. 1:

LSP человека - V5 х Flt3-ElmuxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 827

LSP человека - V5 х Flt3-E2muxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 828

LSP человека - V5 х Flt3-E3muxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 829

LSP человека - V5 х Flt3-E3AmuxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 830

LSP человека - V5 х Flt3-E3BmuxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 831

LSP человека - V5 х Flt3-E4muxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 832

- 52 040387

LSP человека - V5 x Flt3-E5muxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 833

LSP человека - V5 x Flt3-E6muxEpC-pEFDHFR SEQ ID NO: 834

LSP человека - FLT3- полный ВКД мыши

LSP человека - FLT3- полный ВКД человека полноразмерный FLT3 человека SEQ ID NO: 801 полноразмерный FLT3 яванского макака SEQ ID NO: 802

Для получения клеток СНО/HEK, экспрессирующих внеклеточный домен человека, мыши и химерный внеклеточный домен (ВКД) FLT3, соответствующие кодирующие последовательности FLT3 человека, FLT3 мыши и восемь версий химерных FLT3 человека/мыши (см. выше) клонировали в плазмиду, обозначаемую как pEF-DHFR (pEF-DHFR описана в источнике: Raum et al. Cancer Immunol Immunother 50 (2001) 141-150). Для экспрессии на поверхности клеток FLT3 человека и мыши использовали оригинальный сигнальный пептид. Все процедуры клонирования проводили в соответствии со стандартными протоколами (Sambrook, Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press, Cold Spring Harbour, New York (2001)). Для получения каждой конструкции соответствующей плазмидой трансфицировали дефицитные по дигидрофолатредуктазе (DHFR) клетки СНО для эукариотической экспрессии согласно описанию у Kaufman R.J. (1990) Methods Enzymol. 185, 537-566.

Экспрессию FLT3 человека, химерного FLT3 и FLT3 мыши на клетках СНО верифицировали с применением FACS-анализа.

Пример 2. Картирование эпитопов конструкции антитела против FLT3

Клетки, трансфицированные FLT3 человека, мыши и молекулами химерного FLT3 человека (См. пример 1) окрашивали неочищенным неразведенным периплазматическим экстрактом, содержащим конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 (связывающий CD3 домен обозначен как I2C), слитые с альбумином человека (вариант 1), в ФСБ/1,5% ФТС. Связанные молекулы детектировали с полученным собственными средствами моноклональным антителом мыши против связывающего домена CD3 (50 мкл), а затем конъюгированным с ФЭ IgG против Fc-гамма мыши (1:100, 50 мкл; Jackson Immunoresearch # 115-116-071) Все антитела разводили в ФСБ/1,5% ФТС. В качестве отрицательного контроля использовали клетки, инкубированные с ФСБ/2% ФТС вместо периплазматического экстракта. Образцы оценивали с помощью проточной цитометрии.

Области, которые распознавались соответствующими связывающими FLT3 доменами, приведены в таблице последовательностей (табл. 2). Исчезновение сигнала FACS в соответствующих химерных конструкциях FLT3, содержащих эпитопный кластер мыши, регистрировали в качестве подтверждения релевантности соответствующего кластера для связывания. Соответствующие результаты в табл. 2 согласуются результатами в примере 3.

Пример 3. Получение клеток СНО, экспрессирующих FLT3 дикого типа и усеченный FLT3

Внеклеточный домен антигена FLT3 может быть подразделен на разные субдомены или области, эпитопные кластеры Е1-Е6, соответственно, определяемые следующими положениями аминокислот:

El АК 27-79 SEQ ID NO: 819

Е2 DI АК 79-167 SEQ ID NO: 820

E3 D2 AK 168-244 SEQ ID NO: 821

ESA D2A AK 168-206 SEQ ID NO: 822

E3B D2B AK 207-244 SEQ ID NO: 823

E4 D3 AK 245-345 SEQ ID NO:824

E5 D4 AK 346-434 SEQ ID NO:825

E6 D5 AK 435-543 SEQ ID NO:826

Для конструирования усеченных молекул FLT3, применяемых для картирования эпитопов (см. фиг. 3), последовательности соответствующих семи областей человека, а также пять комбинаций двух соседних областей человека (см. выше) заменяли на соответствующие области из FLT3 мыши. Кроме того, с С-концом химерных молекул посредством линкера GGGGS сливали V5-метку (GKPIPNPLLGLDST). Итоговые последовательности химерных молекул представлены в последовательностях SEQ ID NO: 827834. Кроме того, конструировали полноразмерный FLT3 человека (SEQ ID NO: 801) и полноразмерный FLT3 яванского макака (SEQ ID NO: 802), оба с меткой V5 (GKPIPNPLLGLDST), слитой с С-концом посредством линкера GGGGS.

Для получения dhfr-клеток СНО, экспрессирующих представленные выше конструкции, соответствующие кодирующие последовательностей клонировали в плазмиду, обозначенную как pEF-DHFR (pEFDHFR описана в источнике: Raum et al. Cancer Immunol Immunother 50 (2001) 141-150). Получали также клетки СНО, трансфицированные FLT3 человека, однако без метки V5. Все процедуры клонирования проводили в соответствии со стандартными протоколами (Sambrook, Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press, Cold Spring Harbour, New York (2001)). Для получения каждой конструкции соответствующей плазмидой трансфицировали дефицитные по DHFR клетки СНО для эукариотической экспрессии, согласно описанию в источнике: Kaufman R.J. (1990)

- 53 040387

Methods Enzymol. 185, 537-566.

Экспрессию указанных конструкций на клетки СНО верифицировали с применением моноклонального антитела мыши IgG2a против метки v5 (1 мкг/мл; AbD Serotec, # MCA 1360). Связанное моноклональное антитело детектировали с применением конъюгированного с ФЭ IgG против Fc-гамма мыши. В качестве отрицательного контроля клетки инкубировали с изотипическим контрольным антителом вместо первого антитела. Образцы оценивали с помощью проточной цитометрии.

Результаты указанного анализа для раскрытого связывающего FLT3 элемента показаны в табл. 2. Указанные результаты согласуются с анализом на основе картирования эпитопов в соответствии с примером 2.

Таблица 2. Картирование эпитопа

Эпитопный кластер	Связывающий элемент		Эпитопный кластер	Связывающий элемент		Эпитопный кластер	Связывающий элемент
FL-1	Е1		FL-23	Е1		FL-45	Е1
FL-2	Е1		FL-24	Е1		FL-46	Е1
FL-3	Е1		FL-25	Е1		FL-47	Е1
FL-4	Е1		FL-26	Е1		FL-48	Е1
FL-5	Е1		FL-27	Е1		FL-49	Е1
FL-6	Е1		FL-28	Е1		FL-50	Е1
FL-7	Е1		FL-29	Е1		FL-51	Е1
FL-8	Е1		FL-30	Е1		FL-52	Е1
FL-9	Е1		FL-31	Е1		FL-53	ЕЗ
FL-10	Е1		FL-32	Е1		FL-54	ЕЗ
FL-11	Е1		FL-33	Е1		FL-55	Е1
FL-12	Е1		FL-34	Е1		FL-56	Е1
FL-13	Е1		FL-35	Е1		FL-57	Е1
FL-14	Е1		FL-36	Е1		FL-58	Е1
FL-15	Е1		FL-37	Е1		FL-59	Е1
FL-16	Е1		FL-38	Е1		FL-60	Е1
FL-17	Е1		FL-39	Е1		FL-61	ЕЗ
FL-18	Е1		FL-40	Е1		FL-62	ЕЗ
FL-19	Е1		FL-41	Е1		FL-63	ЕЗ
FL-20	Е1		FL-42	Е1		FL-64	ЕЗ
FL-21	Е1		FL-43	Е1		FL-65	Е1
FL-22	Е1		FL-44	Е1

Пример 4. Основанное на анализе Biacore определение аффинности антитела в отношении FLT3 человека и яванского макака

Эксперименты на основе анализ Biacore выполняли с применением рекомбинантных слитых белков FLT3-ВКД человека/яванского макака с альбумином для определения целевого связывания конструкций антитела согласно настоящему изобретению.

Подробнее сенсорные чипы СМ5 (GE Healthcare) иммобилизовали приблизительно 600-800 RU (единиц ответа) соответствующего рекомбинантного антигена с применением ацетатного буфера, рН 4,5, в соответствии с инструкцией производителя. Образцы с конструкцией биспецифического антитела к FLT3xCD3 загружали в виде серийных разведений в следующих концентрациях: 50, 25, 12,5, 6,25 и 3,13 нМ в подвижном буфере HBS-EP (GE Healthcare). Скорость потока составляла 30 мкл/мин в течение 3 мин, затем подвижный буфер HBS-EP наносили повторно на 8-20 мин при скорости потока, составляющей 30 мкл/мл. Регенерацию чипа выполняли с применением раствора 10 мМ глицина, 10 мМ NaCl, рН 1,5. Наборы данных анализировали с применением программного обеспечения BiaEval Software. Всего проводили два независимых эксперимента.

Кроме того, в анализе Biacore подтверждали связывание конструкций биспецифического антитела к CD3 человека и CD3 макаки.

Пример 5. Основанный на распределении Скэтчарда анализ аффинности конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 в отношении FLT3 человека и макаки на целевых антиген-положительных клетках и определение межвидовой разницы в аффинности

Значения аффинности конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 в отношении клеток СНО, трансфицированных FLT3 человека или макаки, также определяли посредством анализа Скэтчарда, как наиболее надежного способа измерения потенциальной разницы аффинности в отношении FLT3 человека и макаки. Для проведения анализа Скэтчарда осуществляют эксперименты с насыщающим связыванием с применением моновалентной системы детекции для точного определения моновалентного связывания конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 с соответствующей линией клеток.

2x104 клеток каждой соответствующей линии клеток (рекомбинантной экспрессирующей FLT3 человека линии клеток СНО, рекомбинантной экспрессирующей FLT3 макаки линии клеток СНО) инкубировали с 50 мкл тройных серийных разведений (12 разведений 1:2) соответствующей конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 (до достижения насыщения), начиная с 10-20 нМ, с последующей инкубацией в течение 16 ч при 4°С с перемешиванием и одним этапом остаточного промывания. Затем клетки инкубировали дополнительно в течение часа с 30 мкл раствора конъюгата CD3xALEXA488. После одного этапа промывания клетки ресуспендировали в 150 мкл FACS-буфера, содержащего 3,5% формальдегида, инкубировали в течение дополнительных 15 мин, центрифугировали, ресуспендировали

- 54 040387 в FACS-буфере и анализировали с применением аппарата FACS CantoII и программного обеспечения FACS Diva. Данные получали в ходе двух независимых серий экспериментов, каждая из которых включала три повторности. Выполняли соответствующий анализ Скэтчарда для экстраполяции максимального связывания (Bmax). Определяли концентрации полумаксимального связывания конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3, отражающие соответствующие KD. Строили графики значений полученных в трех повторностях измерений в виде гиперболических кривых и S-образных кривых для демонстрации надлежащих диапазонов концентрации от минимального до оптимального связывания.

Пример 6. Биспецифическое связывание и межвидовая перекрестная реактивность

Для подтверждения связывания с FLT3 и CD3 человека и с FLT3 и CD3 яванского макака конструкции биспецифического антитела согласно настоящему изобретению тестировали с помощью проточной цитометрии с применением клеток СНО, трансфицированных FLT3 человека (SEQ ID NO: 801), с применением изоформ FLT3 человека (изоформа FLT3 человека (Т227М), см. SEQ ID NO: 803 и изоформа FLT3-ITD человека, см. SEQ ID NO:804), и FLT3 макаки (SEQ ID NO: 802), соответственно, линий положительных по FLT3 клеток ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11 (также приемлемы и другие линии положительных по FLT3 клеток человека), линии CD3-экспрессирующих клеток Т-клеточного лейкоза HPB-ALL человека (DSMZ, Брауншвейг, АСС483) и линии CD3-экспрессирующих Т-клеток LnPx 4119 яванского макака.

Для проведения проточной цитометрии по 200 000 клеток соответствующих линий инкубировали в течение 60 мин при 4°С с 50 мкл очищенной конструкции биспецифического антитела в концентрации 5 мкг/мл. Клетки двукратно промывали с ФСБ/2% ФТС и затем инкубировали с антителом мыши собственного производства (2 мкг/мл), специфическим в отношении связывающей CD3 части конструкций биспецифического антитела в течение 30 мин при 4°С. После промывания связанные антитела мыши детектировали с применением антител козы против Fcy мыши, конъюгированных с ФЭ (1:100) в течение 30 мин при 4°С. Образцы оценивали с помощью проточной цитометрии. Нетрансфицированные клетки СНО использовали в качестве отрицательного контроля.

Таблица 3a. Значения аффинности связывающих FLT3 доменов

FLT3-HLE BITE	Эпитопный кластер	Аффинность в отношении FLT3* человека согласно анализу Octet [нМ]	Аффинность в отношении FLT3* макаки согласно анализу Octet [нМ]	Разница в аффинности в отношении FLT3 KDmac/KDhu
FL 39 X I2C-scFc 0	El	0,52 ± 0,03	1,65 ± 0,10	3,2
FL 16 X I2C-scFc	El	0,57**	1,38**	2,4
FL 42 x I2C-scFc	El	0,36 ± 0,11	1,11 ± 0,13	3,1
FL 36 X I2C-scFc	El	5,30 ± 0,08	4,44 ± 0,72	0,8
FL 52 x I2C-scFc	El	4,80 ± 0,25	4,14 ± 0,08	0,9
FL 23 x I2C-scFc	El	0,97 ± 0,19	0,68 ± 0,01	0,7
FL 46 X I2C-scFc	El	1,67 ± 0,08	7,9 ± 1,81	4,7
FL 61 X I2C-scFc	E3	26,50 ± 0,57	3,77 ± 3,74	0,14

Таблица 3b. Значения аффинности для связывающих CD3 доменов

FLT3-HLE BiTE	Эпитопный кластер	Аффинность согласно анализу Biacore в отношении FLT3* человека [нМ]	Аффинность согласно анализу Biacore в отношении FLT3* макаки [нМ]	Разница в аффинности в отношении FLT3 , KDmac/KDhu
FL 39 X I2C-scFc 0	El	8,24 ± 0,15	6,84 ± 0,09	0,8
FL 16 X I2C-scFc	El	6,08 ± 0,12	4,91 ± 0,10	0,8
FL 42 X I2C-scFc	El	9,13 ± 1,03	7,31 ± 1,13	0,8
FL 36 X I2C-scFc	El	7,73 ± 014	6,06 ± 0,42	0,8
FL 52 X I2C-scFc	El	7,40 ± 0,80	5,99 ± 0,78	0,8
FL 23 X I2C-scFc	El	9,64 ± 0,11	7,87 ± 0,15	0,8
FL 46 X !2C-scFc	El	6,06 ± 0,47	4,86 ± 0,35	0,8
FL 61 X I2C-scFc	E3	11,65 ± 1,48	9,37 ± 1,46	0,8

Пример 7. Подтверждение отсутствия связывания с паралогами человека

Паралогами FLT3 человека KIT v1 (SEQ ID NO: 805), CSF1R v1 (SEQ ID NO: 806), PDGFRA (SEQ ID NO: 807) и NTM v3 (SEQ ID NO: 808) стабильно трансфицировали клетки СНО. Последовательность паралога, применяемого в настоящем примере, соответствует идентифицированной в перечне последовательностей.

- 55 040387

Таблица 4а. Идентичность паралогов последовательности FLT3 в пределах полноразмерной последовательности белка

Белок	% идентичности	Идентификатор запроса (%)
C-KIT	29	28
CSF1R	29	28
PDGFRA	27	30

Таблица 4b. Идентичность паралогов последовательности FLT3 в пределах ВКД последовательности белка

Белок	% Идентичности	Идентификатор запроса (%)
NTM	25	28

Экспрессию белков подтверждали с помощью FACS-анализа со специфическими антителами. Проточно-цитометрический анализ проводили согласно описанию в примере 6.

Пример 8. Идентичность зародышевой линии человека

Для анализа идентичности/сходства последовательности конструкций антитела с генами антител зародышевой линии человека связывающие FLT3 домены согласно настоящему изобретению проводили выравнивание согласно описанию ниже: выравнивание полного VL, включая все области CDR; выравнивание полного VH, включая области CDR 1 и 2, но не включая CDR3, относительно генов антител зародышевой линии человека (Vbase). Более подробная информация приведена в описании настоящей заявки.

Пример 9. Цитотоксическая активность

Эффективность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 согласно настоящему изобретению для перенаправления эффекторных Т-клеток против FLT3-экспрессирующих целевых клеток анализировали в пяти анализах цитотоксичности in vitro:

Эффективность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 для перенаправления стимулированных CD8+ эффекторных Т-клеток человека против трансфицированных FLT3 человека клеток СНО измеряли в ходе 18-часового анализа высвобождения хрома-51.

Эффективность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 для перенаправления стимулированных CD8+ эффекторных Т-клеток человека против клеток положительных по FLT3 линий ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11 (также приемлемы и другие положительные по FLT3 человека линий клеток) измеряли в ходе 18-часового анализа высвобождения хрома-51.

Эффективность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 для перенаправления Тклеток в нестимулированных МКПК человека против трансфицированных FLT3 человека клеток СНО измеряли в ходе 48-часового анализа цитотоксичности на основе FACS. Эффекторные клетки: нестимулированные МКПК человека (CD14-/CD56-). Целевые клетки: EOL-1. Отношение эффекторных клеток к целевым клеткам (Е:Т): 10:1. Белок BiTE: в соответствии с указанным________________

Конструкции антитела к FLT3XCD3
	FL 39	FL 16	FL 42	FL 36	FL 52	FL 23	FL 4 6	FL 61
ЕС50 [пМ]	7,5	13	34	35	91	20	25	745

Эффекторные клетки: нестимулированные МКПК человека (CD14-/CD56-). Целевые клетки: MV411. Отношение эффекторных клеток к целевым клеткам (Е:Т): 10:1. Белок BiTE: в соответствии с указанным.

Конструкции антитела к FLT3XCD3
	FL 39	FL 16	FL 42	FL 36	FL 52	FL 23	FL 46	FL 61
ЕС50 [пМ]	4,8	8,1	13	15	14	13	12	270

Эффективность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 для перенаправления Тклеток в нестимулированных МКПК человека против клеток положительных по FLT3 линий человека ОМЛ EOL-1, MOLM-13 и MV4-11 (также приемлемы и другие положительные по FLT3 человека линии клеток) измеряли в ходе 48-часового анализа цитотоксичности на основе FACS.

Для подтверждения того, что перекрестно-реактивные конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 способны перенаправлять Т-клетки макаки против трансфицированных FLT3 макаки клеток СНО, проводили 48-часовой анализ цитотоксичности на основе FACS на линии Т-клеток макаки в качестве эффекторных Т-клеток. Эффекторные клетки: нестимулированные МКПК человека (CD14-/CD56-). Целевые клетки: трансфицированные FLT3 макаки клетки СНО. Отношение эффекторных клеток к целевым клеткам (Е:Т): 10:1. Белок BiTE: в соответствии с указанным.______________________

Конструкции антитела к FLT3XCD3
	FL 39	FL 16	FL 42	FL 36	FL 52	FL 23	FL 46	FL 61
ЕС50 [пМ]	0,2	0,5	1,0	2,5	0,7	1,9	11	0,9

Эффективность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 для перенаправления Тклеток в нестимулированных МКПК человека на трансфицированные FLT3 человека клетки СНО в отсутствие и в присутствии лиганда FLT3 измеряли в ходе 48-часового анализа цитотоксичности на основе FACS. Эффекторные клетки: нестимулированные МКПК человека (CD14-/CD56-). Целевые клетки:

- 56 040387 трансфицированные FLT3 человека клетки СНО. Отношение эффекторных клеток к целевым клеткам (Е:Т): 10:1. Белок BiTE: в соответствии . с указанным.__________________________________

Конструкции антитела к FLT3XCD3	ЕС50 [пМ]
Без лиганда FLT3	с 10 нг/мл лиганда FLT3	с 1 мкг/мл лиганда FLT3
FL 39 X I2C-scFc ®	0,7	13	29
FL 16 X I2C-scFc	0,5	11	23
FL 42 X I2C-scFc	1,0	19	е
FL 36 X I2C-scFc	1,9	24	73
FL 52 X I2C-scFc	2,4	24	71
FL 23 X I2C-scFc	0, 9	15	49
FL 46 X I2C-scFc	1,2	18	43
FL 61 X I2C-scFc	32	662	608

Пример 10.1. Анализ высвобождения хрома на стимулированных Т-клетках человека

Стимулированные Т-клетки, обогащенные по CD8+ Т-клеткам, получали согласно приведенному ниже описанию. Чашку Петри (диаметром 145 мм, Greiner Bio-One GmbH, Кремсмюнстер, Австрия) покрывали коммерчески доступным специфическим антителом против CD3 (OKT3, Orthoclone) в конечной концентрации 1 мкг/мл в течение 1 ч при 37°С. Несвязанный белок удаляли путем одноэтапного промывания ФСБ. В чашку Петри с предварительно нанесенным покрытием добавляли 3-5 х 10⁷ МКПК человека в 120 мл RPMI 1640 со стабилизированным глутамином/10% ФТС/20 ед/мл ИЛ-2 (Proleukin®, Chiron) и стимулировали на протяжении двух дней. На третий день клетки собирали и однократно промывали RPMI 1640. Добавляли ИЛ-2 до конечной концентрации, составляющей 20 ед/мл, и культивировали клетки повторно на протяжении 1 дня в той же клеточной культуральной среде, описанной выше. Культуру обогащали цитотоксическими CD8+ T-лимфоцитами (CTL) посредством истощения по CD4+ Тклеткам и CD56+ NK-клеткам с применением гранул Dynal в соответствии с протоколом производителя.

Трансфицированные FLT3 яванского макака или FLT3 человека целевые клетки СНО двукратно промывали ФСБ и метили 11,1 мБк ⁵¹Cr в конечном объеме 100 мкл RPMI с 50% ФТС в течение 60 мин при 37°С. Затем меченые целевые клетки промывали 3-кратно 5 мл RPMI и применяли для анализа цитотоксичности. Анализ выполняли в 96-луночном планшете в общем объеме, составляющем 200 мкл, дополненной среды RPMI с соотношением Е:Т, составляющим 10:1. Использовали начальную концентрацию 0,01-1 мкг/мл очищенной конструкции биспецифического антитела и ее трехкратные разведения. Время инкубации для указанного анализа составляло 18 ч. Цитотоксичность определяли как относительные значения количества высвобождаемого хрома в супернатанте, применительно к разнице максимального лизиса (при добавлении Triton-X) и спонтанного лизиса (без эффекторных клеток). Все измерения проводили в четырех повторностях. Измерение активности хрома в супернатантах выполняли с помощью счетчика гамма-излучения Wizard 3 (Perkin Elmer Life Sciences GmbH, Кельн, Германия). Анализ результатов проводили с применением Prism 5 для Windows (версия 5.0, GraphPad Software Inc., СанДиего, Калифорния, США). Для сравнения цитотоксической активности использовали значения ЕС₅₀, вычисленные с помощью аналитической программы на основании сигмоидальных кривых зависимости эффекта от дозы.

Пример 10.2. Эффективность перенаправления стимулированных эффекторных Т-клеток человека против трансфицированных FLT3 человека клеток СНО

Цитотоксическую активность конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 в соответствии с настоящим изобретением анализировали в анализе цитотоксичности с высвобождением хрома-51 (⁵¹Cr) с применением клеток СНО, трансфицированных FLT3 человека, в качестве целевых клеток, и стимулированных CD8+ Т-клеток человека в качестве эффекторных клеток. Эксперимент проводили согласно описанию в примере 10.1.

Пример 10.3. Эффективность перенаправления стимулированных эффекторных Т-клеток человека против положительной по FLT3 линии клеток человека

Цитотоксическую активность конструкции биспецифического антитела к FLT3xCD3 анализировали в анализе цитотоксичности с высвобождением хрома-51 (⁵¹Cr) с применением положительных по FLT3 линий клеток ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11 в качестве источника целевых клеток, и стимулированных CD8+ Т-клеток человека в качестве эффекторных клеток. Указанный анализ проводили согласно описанию в примере 10.1.

Пример 10.4. Анализ цитотоксичности на основе FACS с нестимулированными МКПК человека Выделение эффекторных клеток

Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) человека получали посредством центрифугирования в градиенте плотности фиколла из обогащенных лимфоцитами составов (лейкотромбоцитарного слоя), побочного продукта в банках крови, собирающих кровь для переливания. Лейкотромбоцитарный слой предоставлял локальный банк крови, и МКПК получали в тот же день, когда проводился

- 57 040387 сбор крови. После центрифугирования в градиенте плотности фиколла и тщательных промываний ФСБ по Дульбекко (Gibco) оставшиеся эритроциты удаляли из МКПК посредством инкубации с буфером для лизиса эритроцитов (155 мМ NH4Cl, 10 мМ KHCO3, 100 мкМ ЭДТК). Тромбоциты удаляли с супернатантом после центрифугирования МКПК при 100xg. Оставшиеся лимфоциты в основном включают В-и Тлимфоциты, NK-клетки и моноциты. МКПК поддерживали в культуре при 37°С/5% CO2 в среде RPMI (Gibco) с 10% ФТС (Gibco).

Истощение по клеткам CD14+ и CD56+

Для истощения по клеткам CD14+ человека применяли микрогранулы CD14 MicroBeads (Milteny Biotec, MACS, #130-050-201), для истощения по NK-клеткам человека - микрогранулы CD56 MicroBeads (MACS, #130-050-401). МКПК подсчитывали и центрифугировали в течение 10 мин при комнатной температуре и 300xg. Супернатант утилизировали и клеточный осадок ресуспендировали в MACS-буфере для выделения [80 мкл/10⁷ клеток; ФСБ (Invitrogen, #20012-043), 0,5% (по объему) ФСБ (Gibco, #10270106), 2 мМ ЭДТК (Sigma-Aldrich, #E-6511)]. Добавляли микрогранулы CD14 MicroBeads и CD56 MicroBeads (20 мкл/10⁷ клеток) и инкубировали в течение 15 мин при 4-8°С. Клетки промывали MACSбуфером для выделения (1-2 мл/10⁷ клеток). После центрифугирования (см. выше), супернатант утилизировали и клетки ресуспендировали в MACS-буфере для выделения (500 мкл/10⁸ клеток). Затем выделяли отрицательные по CD14/CD56 клетки с применением LS-колонок (Miltenyi Biotec, #130-042-401). МКПК без клеток CD14+/CD56+ культивировали на полной среде RPMI, т.е. RPMI1640 (Biochrom AG, #FG1215) с добавлением 10% ФСБ (Biochrom AG, #S0115), 1х заменимых аминокислот (Biochrom AG, #K0293), 10 мМ буфера Hepes (Biochrom AG, #L1613), 1 мМ пирувата натрия (Biochrom AG, #L0473) и 100 ед/мл пенициллина/стрептомицина (Biochrom AG, #A2213) при 37°С в инкубаторе до применения по назначению.

Мечение целевых клеток

Для проточно-цитометрического анализа лизиса клеток применяли флуоресцентный мембранный краситель DiOC₁₈ (DiO) (Molecular Probes, #V22886) для мечения FLT3 трансфицированных FLT3 человека или макаки клеток СНО в качестве целевых клеток и различения с эффекторными клетками. Вкратце, клетки собирали, однократно промывали ФСБ и доводили плотность клеток до 10⁶ клеток/мл в ФСБ с 2% (по объему) ФСБ и мембранным красителем DiO (5 мкл/10⁶ клеток). После инкубации в течение 3 мин при 37°С клетки двукратно промывали в полной среде RPMI, и доводили количество клеток до 1,25x105 клеток/мл. Жизнеспособность клеток определяли с применением 0,5% (по объему) изотонического раствора Эозина G (Roth, #45380).

Анализ на основе проточной цитометрии

Указанный анализ был разработан для количественного определения лизиса трансфицированных FLT3 яванского макака или человека клеток СНО в присутствии серийных разведений конструкции биспецифического антитела к FLT3. Равные объемы DiO-меченых целевых клеток и эффекторных клеток (т.е. МКПК без CD14+ клеток) смешивали в соотношении Е:Т клеток, составляющем 10:1. 160 мкл указанной суспензии переносили в каждую лунку 96-луночного планшета. Добавляли 40 мкл серийных разведений конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 и биспецифического отрицательного контроля (конструкции биспецифического антитела на основе CD3, распознающей нерелевантный целевой антиген), либо полной среды RPMI в качестве дополнительного отрицательного контроля. Опосредованная биспецифическим антителом цитотоксическая реакция продолжалась в течение 48 ч в увлажненном инкубаторе в атмосфере 7% CO₂. Затем клетки переносили в новый 96-луночный планшет и отслеживали утрату целостности мембраны целевых клеток путем добавления йодида пропидия (PI) в конечной концентрации, составляющей 1 мкг/мл. PI представляет собой не проникающий через мембрану краситель, попадание которого в жизнеспособные клетки в норме исключено, тогда как погибшие клетки поглощают его, что позволяет идентифицировать их по флуоресцентному излучению.

Образцы оценивали с помощью проточной цитометрии на аппарате FACSCanto II и анализировали с применением программного обеспечения FACSDiva (и то, и другое от Becton Dickinson). Целевые клетки идентифицировали как DiO-положительные клетки. PI-отрицательные целевые клетки классифицировали как живые целевые клетки. Процент цитотоксичности рассчитывали по следующей формуле:

ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ [%]= ^П погибшие целевые клетки _χ1θθ ^целевые клетки п=число событий.

С применением программного обеспечения GraphPad Prism 5 (Graph Pad Software, Сан-Диего) строили график зависимости процента цитотоксичности от соответствующих концентраций конструкции биспецифического антитела. Кривые зависимости доза-ответ анализировали с применением четырехпараметрических регрессионных логистических моделей для оценки сигмоидных кривых зависимости доза-ответ с фиксированным коэффициентом наклона, и вычисляли значения ЕС₅₀.

Пример 10.5. Эффективность перенаправления нестимулированных МКПК человека против трансфицированных FLT3 человека клеток СНО

Цитотоксическую активность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 анализировали в анализе цитотоксичности на основе FACS с применением трансфицированных FLT3 человека клеток

- 58 040387

СНО в качестве целевых клеток и нестимулированных МКПК человека в качестве эффекторных клеток.

Указанный анализ проводили согласно описанию в примере 8.4 выше.

Пример 10.6. Эффективность перенаправления нестимулированных МКПК человека против клеток положительной по FLT3 линии карциномы яичника человека

Цитотоксическую активность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 дополнительно анализировали в анализе цитотоксичности на основе FACS с применением положительных по FLT3 линий клеток ОМЛ человека EOL-1, MOLM-13 и MV4-11 в качестве источника целевых клеток и нестимулированных МКПК человека в качестве эффекторных клеток. Указанный анализ проводили согласно описанию в примере 8.4 выше.

Пример 10.7.

Эффективность перенаправления Т-клеток макаки против экспрессирующих FLT3 макаки клеток СНО

Наконец, цитотоксическую активность конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 анализировали в анализе цитотоксичности на основе FACS с применением клеток СНО, трансфицированных FLT3 макаки (яванского макака) в качестве целевых клеток, и линии Т-клеток макаки 4119LnPx (Knappe et al. Blood 95:3256-61 (2000)) в качестве источника эффекторных клеток. Мечение целевых клеток - трансфицированных FLT3 макаки клеток СНО, и анализ цитотоксической активности на основе проточной цитометрии выполняли согласно описанию выше.

Пример 11. Конверсия мономеров в димеры после (i) трех циклов замораживания/размораживания и (ii) 7 дней инкубации при концентрации 250 мкг/мл

Мономерную конструкцию биспецифического антитела к FLT3xCD3 подвергали различным стрессовым воздействиям с последующим проведением ЭХ высокого разрешения для определения изначального процента мономерной конструкции антитела, подвергшейся конверсии в димерную конструкцию антитела.

(i) 25 мкг мономерной конструкции антитела разводили общим рецептурным буфером до концентрации, составляющей 250 мкг/мл, а затем замораживали при -80°С в течение 30 мин с последующим размораживанием в течение 30 мин при комнатной температуре. После трех циклов замораживания/размораживания определяли содержание димеров с применением ВЭЭХ.

(ii) 25 мкг мономерной конструкции антитела разводили общим рецептурным буфером до концентрации, составляющей 250 мкг/мл, с последующей инкубацией при 37°С в течение 7 дней. Содержание димеров определяли с применением ВЭЭХ.

Колонку для ЭХ высокого разрешения TSK Gel G3000 SWXL (Tosoh, Токио, Япония) присоединяли к аппарату для быстрой жидкостной хроматографии Akta Purifier 10 FPLC (GE Lifesciences), оснащенному автоматическим пробозаборником А905. Буфер для уравновешивания колонки и подвижный буфер состояли из 100 мМ KH2PO4-200 мМ Na₂SO₄ с рН, доведенным до значения 6,6. Раствор антитела (25 мкг белка) вносили в уравновешенную колонку и проводили элюирование при скорости потока 0,75 мл/мин с максимальным давлением 7 МПа. На протяжении всего анализа проводили мониторинг оптического поглощения при длинах волн 280, 254 и 210 нм. Анализ выполняли путем интегрирования пиков сигнала при 210 нм, внесенных в форму для оценки результатов анализа программного обеспечения Akta Unicorn. Содержание димеров рассчитывали путем деления площади пиков для димеров на общую площадь пиков для мономеров и димеров.

Пример 12. Термостабильность

Температуру агрегации антител определяли согласно описанию ниже: 40 мкл раствора конструкции антитела в концентрации 250 мкг/мл переносили в одноразовую кювету и помещали в устройство для динамического светорассеяния DynaPro Nanostar (Wyatt). Образец нагревали от 40 до 70°С со скоростью 0,5°С/мин при постоянной регистрации измеряемого радиуса. Увеличение радиуса, которое указывает на плавление белка и агрегацию, используют для вычисления температуры агрегации конструкции антитела с применением пакета программного обеспечения, поставляемого с устройством DLS.

Пример 13. Стабильность после инкубации в течение 24 ч в плазме человека

Очищенные конструкции биспецифического антитела инкубировали в соотношении 1:5 в пуле плазмы человека при 37°С в течение 96 ч в конечной концентрации, составляющей 2-20 мкг/мл. После инкубации в плазме конструкции антитела сравнивали в анализе с высвобождением хрома-51 со стимулированными обогащенными клетками CD8+ Т-клетками человека и трансфицированными FLT3 человека клетками СНО в начальной концентрации, составляющей 0,01-0,1 мкг/мл при отношении количества эффекторных клеток к целевым (Е:Т), составляющем 10:1 (анализ согласно описанию в примере 8.1). Неинкубированные свежеразмороженные конструкции биспецифического антитела включали в качестве контрольных.

Пример 14. Мутность при концентрации антитела 2500 мкг/мл мл раствора очищенной конструкция антитела с концентрацией 250 мкг/мл концентрировали в центрифужном концентраторе до 2500 мкг/мл. Через 16 ч хранения при 5°С определяли мутность раствора антитела путем измерения оптического поглощения OD340 нм с общим рецептурным буфером в

- 59 040387 качестве фона.

Пример 15. Гомогенность белка по оценке с применением катионообменной хроматографии высокого разрешения

Гомогенность белка конструкций антитела согласно настоящему изобретению анализировали с применением катионообменной хроматографии высокого разрешения (CIEX).

мкг мономера конструкции антитела разводили 50 мл буфера для связывания А (20 мМ дигидрофосфат натрия, 30 мМ NaCl, 0,01% октаната натрия, рН 5,5), и 40 мл указанного раствора вносили в колонку BioPro SP-F объемом 1 мл (YMC, Германия) соединенную с системой для быстрой жидкостной хроматографии (FPLC) Akta Micro (GE Healthcare, Германия). После связывания образца проводили этап промывания дополнительным количеством буфера для связывания. Для элюирования белка использовали линейно возрастающий градиент соли в буфере В (20 мМ дигидрофосфат натрия, 1000 мМ NaCl, 0,01% октаната натрия, рН 5,5) до 50% буфера В в 10 объемах колонки. На протяжении всего анализа проводили мониторинг оптического поглощения при длинах волн 280, 254 и 210 нм. Анализ выполняли путем интегрирования пиков сигнала при 280 нм, внесенных в форму для оценки результатов анализа программного обеспечения Akta Unicorn.

Пример 16. Гидрофобность поверхности по оценке с применением бутил-HIC

Гидрофобность поверхности конструкций биспецифического антитела согласно настоящему изобретению тестировали посредством хроматографии с гидрофобным взаимодействием (HIC) в проточном режиме.

мкг мономера конструкции антитела разводили общим рецептурным буфером до конечного объема, составляющего 500 мкл (10 мМ лимонная кислота, 75 мМ лизин HCl, 4% трегалозы, рН 7,0), и вносили в быстропроточную (FF) колонку объемом 1 мл с бутил-сефарозой (Butyl Sepharose) (GE Healthcare, Германия), соединенную с системой для быстрой жидкостной хроматографии (FPLC) Akta Purifier (GE Healthcare, Германия). На протяжении всего анализа проводили мониторинг оптического поглощения при длинах волн 280, 254 и 210 нм. Анализ выполняли путем интегрирования пиков сигнала при 280 нм, внесенных в форму для оценки результатов анализа программного обеспечения Akta Unicorn. Характеристики элюирования оценивали путем сравнения площади и линейной скорости нарастания и снижения сигнала белка, таким образом определяя силу взаимодействия слитого с альбумином BiTE с матрицей.

Пример 17. Разница эффективности мономерной и димерной изоформ конструкций биспецифического антитела

Для определения различий цитотоксической активности мономерной и димерной изоформ индивидуальных конструкций биспецифического антитела к FLT3xCD3 (называемых разницей эффективности), проводили 18-часовой анализ цитотоксичности с высвобождением хрома-51 согласно описанию выше в настоящем документе (пример 10.1) мономера и димера очищенной конструкции биспецифического антитела. Эффекторные клетки представляли собой стимулированные обогащенные по клеткам CD8+ Тклетки человека. Целевые клетки представляли собой трансфицированные FLT3 человека клетки СНО. Отношение эффекторных клеток к целевым (Е:Т) составляло 10:1. Разницу эффективности рассчитывали как отношение значений ЕС₅₀._______________________________________________________

FLT3XCD3 конструкции антитела	ЕС50 [пМ]	Отношение мономеров к димерам (Мономер ECS0/ Димер ЕСБ0)
Мономер	Димер
FL	39 х	I2C-scFc ®	0,37	0,23	0,5
FL	16	х I2C-scFc	0,52	0,16	2,0
FL	42	х I2C-scFc	0,53	0,76	1,2
FL	36	х I2C-scFc	2,70	0,88	1,1
FL	52	х I2C-scFc	1,45	1,69	9,9
FL	23	х I2C-scFc	0,20	0,20	0,2
FL	46	х I2C-scFc	0,34	0,15	0,9
FL	61	х I2C-scFc	18	24	6,3

Пример 18. Конкуренция связывающего FLT3 элемента с лигандом FLT3 за связывание с соответствующей мишенью

Указанный анализ проводили для тестирования возможности нарушения растворимым лигандом FLT3 связывания с FLT3 связывающих анти-FLT3 доменов в соответствии с настоящим изобретением.

Для верификации связывания лиганда FLT3 человека с клетками СНО, трансфицированными FLT3 человека, клетки инкубировали лигандом FLT3 человека в течение 30 мин при 4°С. Связанный лиганд FLT3 детектировали антителом против HIS (5 мкг/мл; AbD Serotec), а затем конъюгированным с ФЭ антителом против Fc-гамма IgG мыши (1:100; Jackson Immunoresearch # 115-116-071). В качестве отрицательного контроля клетки инкубировали с ФСБ/2%ФТС вместо CD27.

Для тестирования конкуренции/замены связывающего FLT3 элемента лигандом FLT3 трансфицированные FLT3 человека клетки СНО инкубировали в присутствии или в отсутствие лиганда FLT3 в течение 30 мин при 4°С (10 мкг/мл лиганда FLT3). После этого клетки не промывали, а непосредственно окрашивали связывающим FLT3 элементом (scFv). Связанный scFv детектировали моноклональным антителом мыши против FLAG M2 (1 мкг/мл; Sigma F1804), а затем конъюгированным с ФЭ антителом

- 60 040387 против Fc-гамма IgG мыши (1:100; Jackson Immunoresearch # 115-116-071). В качестве отрицательного контроля клетки инкубировали с неспецифическим scFv вместо scFv против FLT3. Лиганд FLT3 и все антитела разводили в ФСБ с 2% ФТС.

Для оценки данных детектировали средний уровень флуоресценции при помощи FACS. Утрату более чем 25% сигнала в результате конкуренции с лигандом FLT3 считали значимым влиянием на связывание, что можно понимать как значимое стерическое взаимодействие с тем же доменом FLT3. Все связывающие элементы, результат для которых выше 75% порога (средний уровень [+лиганд]/средний уровень [без лиганда] х100>75%) (что справедливо для FL-1 - FL-65), идентифицируют как нечувствительные к конкуренции с лигандом FLT3.

Взаимодействие лиганда FLT3 с его рецептором, согласно описанию в опубликованных источниках, происходит в области, соответствующей эпитопному кластеру 3. Соответственно, ожидалось, что на сигнал, соответствующий среднему уровню флуоресценции всех связывающих элементов, идентифицированных в ходе проведенного авторами изобретения скрининга как специфические для эпитопного кластера 3, а также связывающих элементов, идентифицированных как специфические для соседних кластеров 2 и 4, будет значимо влиять конкуренция с лигандом FLT3. В целом указанные ожидания оправдались. Неожиданным образом FL-53, FL-54, FL-61, F-62, FL-63 и FL-64, все из которых связываются с эпитопным кластером 3, все же демонстрировали сигнал, превышающий указанный порог.

Кроме того, с учетом взаимодействия лиганда FLT3 с областью эпитопного кластера 3, было также сделано предположение, что на связывающий элемент более отдаленного эпитопного кластера, такого как кластер 1 FLT3, не будет влиять конкуренция с лигандом FLT3. Однако значимое число связывающих элементов не удовлетворяло условию 75% порога. Связывающие элементы FL-1 -FL-53, FL-55 - FL60 и FL-65 входили в группу связывающих элементов, не чувствительных к конкуренции с лигандом FLT3.

Таблица 5. Перечень последовательностей

SEQ ID NO:	Описание	Источник	Последовательность
1.	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	GGGG
2 .	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	GGGGS
3.	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	GGGGQ
4 .	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	PGGGGS
5.	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	PGGDGS
6.	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	SGGGGS
7 .	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	GGGGSGGGS
8 .	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	GGGGSGGGGS
9.	Пептидный линкер	Искусственная последовательность	GGGGSGGGGSGGGGS
10.	Гексагистидин	Искусственная последовательность	НННННН
11.	CDR-L1 из F6A	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGYYPN
12 .	CDR-L2 из F6A	Искусственная последовательность	GTKFLAP
13.	CDR-L3 из F6A	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
14 .	CDR-H1 из F6A	Искусственная последовательность	IYAMN
15.	CDR-H2 из F6A	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKS
16.	CDR-H3 из F6A	Искусственная последовательность	HGNFGNSYVSFFAY
17 .	VH из F6A	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNIYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKSRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY VS FFAYWGQGTLVTVS S

- 61 040387

18 .	VL из F6A	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L
19.	VH-VL из F6A	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNIYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKSRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY VSFFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
20.	CDR-L1 из H2C	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGYYPN
21.	CDR-L2 из Н2С	Искусственная последовательность	GTKFLAP
22 .	CDR-L3 из Н2С	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
23.	CDR-H1 из Н2С	Искусственная последовательность	KYAMN
24 .	CDR-H2 из Н2С	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKD
25.	CDR-H3 из Н2С	Искусственная последовательность	HGNFGNSYISYWAY
26.	VH из Н2С	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY IS YWAYWGQGT LVTVS S
27 .	VL из Н2С	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L
28 .	VH-VL из Н2С	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
29 .	CDR-L1 из Н1Е	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGYYPN
30.	CDR-L2 из Н1Е	Искусственная последовательность	GTKFLAP
31.	CDR-L3 из Н1Е	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
32 .	CDR-H1 из Н1Е	Искусственная последовательность	SYAMN
33.	CDR-H2 из Н1Е	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKG
34 .	CDR-H3 из Н1Е	Искусственная последовательность	HGNFGNSYLSFWAY
35.	VH из Н1Е	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLEQPGGSLKLSCAASGFTFNSYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY L S FWAYWGQ GT LVTVS S
36.	VL из Н1Е	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L

- 62 040387

37.	VH-VL из HIE	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLEQPGGSLKLSCAASGFTFNSYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY LSFWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
38.	CDR-L1 из G4H	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGYYPN
39.	CDR-L2 из G4H	Искусственная последовательность	GTKFLAP
40.	CDR-L3 из G4H	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
41.	CDR-H1 из G4H	Искусственная последовательность	RYAMN
42.	CDR-H2 из G4H	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKG
43.	CDR-H3 из G4H	Искусственная последовательность	HGNFGNSYLSYFAY
44 .	VH из G4H	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNRYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY L S Y FAYWGQ GT LVTVS S
45.	VL из G4H	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L
46.	VH-VL из G4H	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNRYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY LSYFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
47.	CDR-L1 из A2J	Искусственная последовательность	RSSTGAVTSGYYPN
48.	CDR-L2 из А2 J	Искусственная последовательность	ATDMRPS
49.	CDR-L3 из A2J	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
50.	CDR-H1 из A2J	Искусственная последовательность	VYAMN
51.	CDR-H2 из A2J	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKK
52 .	CDR-H3 из A2J	Искусственная последовательность	HGNFGNSYLSWWAY
53.	VH из A2J	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNVYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKKRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY LSWWAYWGQGTLVTVSS
54.	VL из A2J	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTSGYYPN WVQQKPGQAPRGLIGATDMRPSGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L
55.	VH-VL из A2J	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNVYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKKRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY LSWWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGATDMRPSGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
56.	CDR-L1 из E1L	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGYYPN

- 63 040387

57 .	CDR-L2 из EIL	Искусственная последовательность	GTKFLAP
58 .	CDR-L3 из EIL	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
59.	CDR-H1 из EIL	Искусственная последовательность	KYAMN
60.	CDR-H2 из EIL	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKS
61.	CDR-H3 из EIL	Искусственная последовательность	HGNFGNSYTSYYAY
			EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW
62		Искусственная	VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKSRFTI
		последовательность	SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY Т S YYAYWGQ GT LVTVS S QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPN
62		Искусственная	WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK
		последовательность	AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKSRFTI
		Искусственная последовательность	SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY
64 .	EIL	TSYYAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
65.	CDR-L1 из E2M	Искусственная последовательность	RSSTGAVTSGYYPN
66.	CDR-L2 из E2M	Искусственная последовательность	ATDMRPS
67 .	CDR-L3 из E2M	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
68 .	CDR-H1 из E2M	Искусственная последовательность	GYAMN
69 .	CDR-H2 из Е2М	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKE
70.	CDR-H3 из Е2М	Искусственная последовательность	HRNFGNSYLSWFAY
			EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNGYAMNW
71.		Искусственная	VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKERFTI
	последовательность	SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHRNFGNSY LSWFAYWGQGTLVTVSS QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTSGYYPN
72		Искусственная	WVQQKPGQAPRGLIGATDMRPSGTPARFSGSLLGGK
		последовательность	AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNGYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKERFTI
		Искусственная последовательность	SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHRNFGNSY
73 .	Е2М	LSWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGATDMRPSGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
74 .	CDR-L1 из F7O	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGYYPN
75.	CDR-L2 из F7O	Искусственная последовательность	GTKFLAP
76.	CDR-L3 из F7O	Искусственная последовательность	ALWYSNRWV
77 .	CDR-H1 из F7O	Искусственная последовательность	VYAMN
78 .	CDR-H2 из F7O	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKK

- 64 040387

79.	CDR-H3 из F7O	Искусственная последовательность	HGNFGNSYISWWAY
80.	VH из F7O	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNVYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKKRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISWWAYWGQGTLVTVS S
81.	VL из F7O	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTV L
82 .	VH-VL из F7O	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNVYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKKRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISWWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGYYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCALWYSNRWVFGGGTKLTVL
83.	CDR-L1 из F12Q	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGNYPN
84 .	CDR-L2 из F12Q	Искусственная последовательность	GTKFLAP
85.	CDR-L3 из F12Q	Искусственная последовательность	VLWYSNRWV
86.	CDR-H1 из F12Q	Искусственная последовательность	SYAMN
87.	CDR-H2 из F12Q	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKG
88.	CDR-H3 из F12Q	Искусственная последовательность	HGNFGNSYVSWWAY
89.	VH из F12Q	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNSYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY VSWWAYWGQGTLVTVS S
90.	VL из F12Q	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTV L
91.	VH-VL из F12Q	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNSYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY VSWWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
92.	CDR-L1 из I2C	Искусственная последовательность	GSSTGAVTSGNYPN
93.	CDR-L2 из I2C	Искусственная последовательность	GTKFLAP
94.	CDR-L3 из I2C	Искусственная последовательность	VLWYSNRWV
95.	CDR-H1 из I2C	Искусственная последовательность	KYAMN
96.	CDR-H2 из I2C	Искусственная последовательность	RIRSKYNNYATYYADSVKD
97.	CDR-H3 из I2C	Искусственная последовательность	HGNFGNSYISYWAY
98 .	VH из I2C	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY IS YWAYWGQGT LVTVS S

- 65 040387

99.	VL из I2C	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTV L
100.	VH-VL из I2C	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
101.	VH из F12q	Искусственная последовательность	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNSYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY VSWWAYWGQGTLVTVS S
102 .	VL из F12q	Искусственная последовательность	QTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPN WVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGK AALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTV L
103.	F12q	scFv	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNSYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKGRFTI SRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY VSWWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
104 .	HAL В	Последовательность человека	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV AASQAALGL
105.	HAL В 7	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA GTFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAAMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV AASQAALGL

- 66 040387

106.	HALB098	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHРYFYAPЕLLFFAKRYKAAFTЕСCQAADКААСLLР KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL
107.	HALB114	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASKAALGL
108 .	HALB254	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALGVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL

- 67 040387

109.	HALB253	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL
110.	HALB131	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASQAALGL
111.	HALB135	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASKAALGL

- 68 040387

112 .	HALB133	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASKAALGL
		Искусственная последовательность Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH
113.	HALB234	CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASKAALGL DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH
114 .	HALB C34S	CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV AASQAALGL

- 69 040387

115.	HALB7 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA GTFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAAMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV AASQAALGL
116.	HALB098 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL
117 .	HALB114 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASKAALGL

- 70 040387

118 .	HALB254 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALGVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL
119.	HALB253 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL
120.	HALB131 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASQAALGL

- 71 040387

121.	HALB135 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASKAALGL
122.	HALB133 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASKAALGL
123.	HALB234 C34S	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASKAALGL

- 72 040387

124 .	HALB C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV AASQAALGL
125.	HALB7 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA GTFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAAMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV AASQAALGL
126.	HALB098 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL

- 73 040387

127 .	HALB114 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASKAALGL
128.	HALB254 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALGVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL
129.	HALB253 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASQAALGL

- 74 040387

130.	HALB131 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHРYFYAPЕLLFFAKRYKAAFTЕСCQAADКААСLLР KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASQAALGL
131.	HALB135 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPHLV AASKAALGL
132 .	HALB133 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH CIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNA ETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKAT KEQLKAVMDKFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASKAALGL

- 75 040387

133.	HALB234 C34A	Искусственная последовательность	DAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQAPF EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGD KLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDD NPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIAR RHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLP KLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAV ARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLE CADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSH СIАЕVENDEMPADL Р S LAAD FVE S KDVC KNYAEAKD VFLGMFLYEYARRHPDYSWLLLRLAKTYETTLEKC CAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFE QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGK VGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSWLNQLCVLHEKTP VSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALDVDETYVPKEFNA ET FT FHADICTLSEKERQIKKQТALVELVKHКР КАТ KEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGPKLV AASKAALGL
134 .	АЫ56	Искусственная последовательность	RDWD FDVFGGGT РVGG
135.	Линейный FcRnсвязывающий пептид	Искусственная последовательность	QRFVTGHFGGLXPANG
136.	Линейный FcRnсвязывающий пептид Y	Искусственная последовательность	QRFVTGHFGGLYPANG
137 .	Линейный FcRnсвязывающий пептид Н	Искусственная последовательность	QRFVTGHFGGLHPANG
138 .	Коровый FcRnсвязывающий пептид Н	Искусственная последовательность	TGHFGGLHP
139.	Циклический FcRnсвязывающий пептид Н	Искусственная последовательность	QRFCTGHFGGLHPCNG
140.	Кроссантитело 1 НС		ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEP VTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHT CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VWD VS Η Е D Р Е VK FNW YVD GVE VHNAKT KPCEEQYG STYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFF LYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK
141.	Кроссантитело 1 LC		GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPG AVTVAWKADSSРVKAGVETТТРSKQSNNКYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSDK THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNW YVD GVE VHNAKT К Р С Е Е QYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA РIЕКТIS KAKGQ PREP QVYT L Р Р S RKEMT KNQVS LT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPGK

- 76 040387

142 .	Кроссантитело 2 НС		ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEP VTVSWN S GALT S GVHT FPAVLQ S S GL YS L S SWT VP SSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVEPKSSDKTHT CPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VWD VS Η E D P E VK FNWYVD GVE VHNAKT К P RE EQ YN STYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTIS KAKGQPREPQVYTLP P S REEMTKNQVS LTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFF LYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK
143.	Кроссантитело 2 LC		GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPG AVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNКYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSEP KSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S RKEMT KN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK
144 .	Гетеро-Fc, связывающий элемент Fc		DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTIS KAKGQ P RE PQVYT L P P S RKEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLKS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
145.	Гетеро-Fc, партнер Fc		DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTPPVLDS DGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
146.	Макситело 1 Fc к мишени		EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNA KTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
147 .	Макситело 1 Fc к CD3		EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNA KTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTP PVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
148 .	Макситело 2 Fc к мишени		EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRKEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLKSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
149.	Макситело 2 Fc к CD3		EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYDTTP PVLDSDGSFFLYSDLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK

- 77 040387

150.	Моно-Fc		APELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVWDV S Η E D P EVKFNWYVDGVEVHNAKT КP REEQYN S TYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPiEKHSK AKGQ P RE PQVTT L P P S REEMT KNQVS LT CLVKGFYP SD1AVEWESNGQPENNYDTTPPVLDSDGSFFLYSDL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG К
151.	FL 1	VH CDR1	NARMGVS
152 .	FL 1	VH CDR2	H1FSNAEKSYRTSLKS
153.	FL 1	VH CDR3	1PGYGGNGDYHYYGMDV
154 .	FL 1	VL CDR!	RASQG1RNDLG
155.	FL 1	VL CDR2	ASSTLQS
156.	FL 1	VL CDR3	LQHNNFPWT
157 .	FL_!	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSL1NARMGV SW1RQPPGKALEWLAH1FSNAEKSYRTSLKSRLT1S KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCAR1PGYGGNGD YHYYGMDVWGQGTTVTVS S
158 .	FL.1	VL	D1QMTQSPSSLSASLGDRVTITCRASQG1RNDLGWY QQKPGKAPKRL1YASSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LT1SSLQPEDFATYYCLQHNNFPWTFGQGTKVE1K
159.	FL_1	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSL1NARMGV SW1RQPPGKALEWLAH1FSNAEKSYRTSLKSRLT1S KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCAR1PGYGGNGD YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD1 QMTQSPSSLSASLGDRVT1TCRASQG1RNDLGWYQQ KPGKAPKRLTYASSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT 1SSLQPEDFATYYCLQHNNFPWTFGQGTKVEIK
160.	FL_1	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSL1NARMGV SW1RQPPGKALEWLAH1FSNAEKSYRTSLKSRLT1S KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCAR1PGYGGNGD YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD1 QMTQSPSSLSASLGDRVT1TCRASQG1RNDLGWYQQ KPGKAPKRL1YASSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT 1SSLQPEDFATYYCLQHNNFPWTFGQGTKVEIKSGG GGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYA MNWVRQAPGKGLEWVAR1RSKYNNYATYYADSVKDR FT1SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFG NSY1SYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ TWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNW VQQKPGQAPRGL1GGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKA ALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
161.	FL 2	VH CDRi	NARMGVS
162 .	FL 2	VH CDR2	H1FSNDEKTYSTSLKS
163.	FL 2	VH CDR3	1PYYGSGSHNYGMDV
164 .	FL 2	VL CDRi	RASQD1RNDFG
165.	FL 2	VL CDR2	AASTLQS
166.	FL 2	VL CDR3	LQYNTYPWT
167 .	FL_2	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMGV SW1RQPPGKALEWLAH1FSNDEKTYSTSLKSRLT1S RDTSKGQWLTMTKMDPVDTATYYCAR1PYYGSGSH NYGMDVWGQGTTVTVSS
168 .	FL_2	VL	D1QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD1RNDFGWY QQKPGKAPQRLLYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LT1SSLQPEDFATYYCLQYNTYPWTFGQGTKVE1K
169.	FL_2	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMGV SW1RQPPGKALEWLAH1FSNDEKTYSTSLKSRLT1S RDTSKGQWLTMTKMDPVDTATYYCAR1PYYGSGSH NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSD1QM TQSPSSLSASVGDRVT1TCRASQD1RNDFGWYQQKP GKAPQRLLYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT1S SLQPEDFATYYCLQYNTYPWTFGQGTKVE1K

- 78 040387

170.	FL_2	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKTYSTSLKSRLTIS RDTSKGQWLTMTKMDPVDTATYYCARIPYYGSGSH NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDFGWYQQKP GKAPQRLLYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQYNTYPWTFGQGTKVEIKSGGGG SEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMN WVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFT ISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNS YISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTV VTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQ QKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAAL TLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
171.	FL 3	VH CDR1	NARMAVS
172 .	FL 3	VH CDR2	HIFSNGEKSYSTSLKS
173.	FL 3	VH CDR3	IVGYSDWLLPFDH
174 .	FL 3	VL CDR1	RASQNINRFLN
175.	FL 3	VL CDR2	AASSLQS
176.	FL 3	VL CDR3	LQHNSYPWT
177 .	FL_3	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMAV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNGEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKTQWLTMTNTDPVDTATYFCARIVGYSDWLL PFDHWGQGIMVTVSS
178 .	FL_3	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNINRFLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKVDIK
179 .	FL_3	s cFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMAV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNGEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKTQWLTMTNTDPVDTATYFCARIVGYSDWLL PFDHWGQGIMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQ SPSSLSASVGDRVTITCRASQNINRFLNWYQQKPGK APKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL QPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKVDIK
180 .	FL_3	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMAV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNGEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKTQWLTMTNTDPVDTATYFCARIVGYSDWLL PFDHWGQGIMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQ SPSSLSASVGDRVTITCRASQNINRFLNWYQQKPGK APKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSL QPEDFATYYCLQHNSYPWTFGQGTKVDIKSGGGGSE VQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWV RQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTIS RDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYI SYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTWT QEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQK PGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTL SGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
181.	FL 4	VH CDR1	NAKMGVS
182 .	FL 4	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
183.	FL 4	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
184 .	FL 4	VL CDR1	RASQDIRDDLG
185.	FL 4	VL CDR2	GASTLQS
186.	FL 4	VL CDR3	LQHNSYPLT
187 .	FL_4	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNAKMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
188 .	FL_4	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWY QQKPGNAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK

- 79 040387

189 .	FL_4	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNAKMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQWLTMTNMD P VDTAT YYCARIVGYG S GWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG NAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
190 .	FL_4	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNAKMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQWLTMTNMD P VDTAT YYCARI VGYG S GWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG NAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
191.	FL 5	VH CDR1	NARMGVS
192 .	FL 5	VH CDR2	HIFWNDEKSYSTSLKS
193 .	FL 5	VH CDR3	IPYYGSGSYNYGMDV
194 .	FL 5	VL CDR1	RASQGIRNDLG
195 .	FL 5	VL CDR2	AASSLQS
196.	FL 5	VL CDR3	LQHNTYPLT
197 .	FL_5	VH	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVS S
198 .	FL_5	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNTYPLTFGGGTKVDIK
199 .	FL_5	scFv	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQHNTYPLTFGGGTKVDIK
200 .	FL_5	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQHNTYPLTFGGGTKVDIKSGGGG SEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMN WVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFT ISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNS YISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTV VTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQ QKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAAL TLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
201.	FL 6	VH CDR1	NARMAVS
202 .	FL 6	VH CDR2	HIFSNDEKSYSPSLKS
203 .	FL 6	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
204 .	FL 6	VL CDR1	RASQGIRNDLG
205 .	FL 6	VL CDR2	AASVLQS
206.	FL 6	VL CDR3	LQHNSYPLT

- 80 040387

207 .	FL_6	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSPSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVS S
208 .	FL_6	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWF QQKPGKAPKRLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
209 .	FL_6	s cFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSPSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWFQQKPG KAPKRLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
210 .	FL_6	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSPSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWFQQKPG KAPKRLIYAASVLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
211.	FL 7	VH CDR1	NARMGVS
212 .	FL 7	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKN
213.	FL 7	VH CDR3	IVGYGTGWFGYFDY
214 .	FL 7	VL CDR1	RASQDIRTDLA
215.	FL 7	VL CDR2	AASSLQS
216.	FL 7	VL CDR3	LQHNRYPLT
217 .	FL_7	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWF GYFDYWGQGTQVTVS S
218 .	FL_7	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNRYPLTFGGGTKVDIK
219.	FL_7	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWF GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNRYPLTFGGGTKVDIK
220.	FL_7	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWF GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNRYPLTFGGGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
221.	FL 8	VH CDR1	YARMGVS

- 81 040387

222 .	FL 8	VH CDR2	QIFSNDEKSYSTSLKS
223.	FL 8	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
224 .	FL 8	VL CDR1	RASQGIRNDLG
225.	FL 8	VL CDR2	AASSLQS
226.	FL 8	VL CDR3	LQHNSYPLT
227 .	FL_8	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSYARMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGT SN S QWLTMTNMD P EDTAT YYCARIVGYGT GWY GFFDYWGQGILVTVS S
22Θ .	FL_8	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
229.	FL_8	s cFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSYARMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGT SN S QWLTMTNMD P EDTAT YYCARI VGYGT GWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
230.	FL_8	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSYARMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGT SN S QWLTMTNMD P EDTAT YYCARI VGYGT GWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
231.	FL 9	VH CDR1	NARMGVS
232 .	FL 9	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
233.	FL 9	VH CDR3	IPGYGGNFYYHYYGMDV
234 .	FL 9	VL CDR1	RASQGIRNDLA
235.	FL 9	VL CDR2	AASTVQS
236.	FL 9	VL CDR3	LQHNSFPWT
237 .	FL_9	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPGYGGNFY YHYYGMDVWGQGTTVTVS S
238 .	FL_9	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFA LTISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVDIK
239.	FL_9	s cFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPGYGGNFY YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQ KPGKAPKRLIYAASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFALT ISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVDIK

- 82 040387

240.	FL_9	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPGYGGNFY YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQ KPGKAPKRLIYAASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFALT ISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVDIKSGG GGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYA MNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDR FTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFG NSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ TWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNW VQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKA ALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
241.	FL 10	VH CDR1	NARMGVS
242.	FL 10	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
243.	FL 10	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
244 .	FL 10	VL CDR1	RASQDIRDDLG
245.	FL 10	VL CDR2	GASTLQS
246.	FL 10	VL CDR3	LQHNSYPLT
247.	FL_10	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
248 .	FL_10	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWY QQKPGNAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
249.	FL_10	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG NAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
250.	FL_10	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG NAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
251.	FL 11	VH CDR1	NAKMGVS
252.	FL 11	VH CDR2	QIFSNGEKSYSTSLKS
253.	FL 11	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
254 .	FL 11	VL CDR1	RASQGIRNDLG
255.	FL 11	VL CDR2	GASTLQS
256.	FL 11	VL CDR3	LQHNSYPLT
257 .	FL_11	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNAKMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNGEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQWLTMTNMDPVDTAT YYCS RI VGYGS GWY GYFDYWGQGTLVTVSS
258 .	FL_11	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK

- 83 040387

259 .	FL_11	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNAKMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNGEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQ WLTMTNMD P VDTAT YYC S RI VGYG S GWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
260 .	FL_11	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNAKMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNGEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQ WLTMTNMD P VDTAT YYC S RI VGYG S GWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
261.	FL 12	VH CDR1	NARMGVS
262 .	FL 12	VH CDR2	NIFSNDEKSYSTSLKS
263 .	FL 12	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
264 .	FL 12	VL CDR1	RASQGIRNDLG
265 .	FL 12	VL CDR2	AASSLQS
266.	FL 12	VL CDR3	LQHNSYPLT
267 .	FL_12	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
268 .	FL_12	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPQRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
269 .	FL_12	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPQRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
270 .	FL_12	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPQRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
271.	FL 13	VH CDR1	NARMGVS
272 .	FL 13	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKN
273 .	FL 13	VH CDR3	IVGYGSGWYGFFDY
274 .	FL 13	VL CDR1	RASQGIRNDLG
275 .	FL 13	VL CDR2	AASTLQS
276.	FL 13	VL CDR3	LQHNSYPLT

- 84 040387

277 .	FL_13	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSS
278 .	FL_13	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
279 .	FL_13	s cFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
280 .	FL_13	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
281.	FL 14	VH CDR1	NARMAVS
282 .	FL 14	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
283.	FL 14	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
284 .	FL 14	VL CDR1	RASQDIRNDLG
285.	FL 14	VL CDR2	AASTLQS
286.	FL 14	VL CDR3	LQHNSYPLT
287 .	FL_14	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
288 .	FL_14	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
289.	FL_14	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
290.	FL_14	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
291.	FL 15	VH CDR1	NARMAVS

- 85 040387

292 .	FL 15	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
293.	FL 15	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
294 .	FL 15	VL CDR1	RASQDIGNDLG
295.	FL 15	VL CDR2	AASSLQS
296.	FL 15	VL CDR3	LQHNSYPLT
297 .	FL_15	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQWLTMTNMDPVDTAT YYCARI VGYGS GWY GYFDYWGQGTLVTVSS
29Θ .	FL_15	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
299.	FL_15	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQWLTMTNMDPVDTAT YYCARI VGYGS GWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
300.	FL_15	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KGQWLTMTNMDPVDTAT YYCARI VGYGS GWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
301.	FL 16	VH CDR1	NARMAVS
302 .	FL 16	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
303.	FL 16	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
304 .	FL 16	VL CDR1	RASQDIRYDLA
305.	FL 16	VL CDR2	AASSLQS
306.	FL 16	VL CDR3	LQHNFYPLT
307 .	FL_16	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
308 .	FL_16	VL	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDIRYDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNFYPLTFGGGTKVEIK
309.	FL_16	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSVSASVGDRVTITCRASQDIRYDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNFYPLTFGGGTKVEIK

- 86 040387

310.	FL_16	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSVSASVGDRVTITCRASQDIRYDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNFYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
311.	FL 17	VH CDR1	NARMGVS
312 .	FL 17	VH CDR2	NIFSNDEKSYSTSLKS
313.	FL 17	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
314 .	FL 17	VL CDR1	RASQDIRNDLG
315.	FL 17	VL CDR2	ATSIRQS
316.	FL 17	VL CDR3	LQHNSFPLT
317 .	FL_17	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNVNPVDTGTYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
318 .	FL_17	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYATSIRQSGVPSRFTGSGSGTEFT LTISGLQPEDFATYFCLQHNSFPLTFGGGTKVEIK
319 .	FL_17	s cFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNVNPVDTGTYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYATSIRQSGVPSRFTGSGSGTEFTLTISG LQPEDFATYFCLQHNSFPLTFGGGTKVEIK
320 .	FL_17	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNVNPVDTGTYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYATSIRQSGVPSRFTGSGSGTEFTLTISG LQPEDFATYFCLQHNSFPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
321.	FL 18	VH CDR1	NARMGVS
322 .	FL 18	VH CDR2	HIFSNDEKSFSTSLKN
323.	FL 18	VH CDR3	MVGYGSGWYAYFDY
324 .	FL 18	VL CDR1	RASQSISSYLN
325.	FL 18	VL CDR2	AASSLQS
326.	FL 18	VL CDR3	LQHNSYPLT
327 .	FL_18	VH	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSFSTSLKNRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTQVTVS S
328 .	FL_18	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK

- 87 040387

329.	FL_18	scFv	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSFSTSLKNRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPG KAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
330.	FL_18	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSFSTSLKNRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPG KAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
331.	FL 19	VH CDR1	YARMGVS
332 .	FL 19	VH CDR2	QIFSNDEKSYSTSLKS
333.	FL 19	VH CDR3	IVGYGTGWYGYFDY
334 .	FL 19	VL CDR1	RASQDIGDDLG
335.	FL 19	VL CDR2	AASTLQS
336.	FL 19	VL CDR3	LQHNSYPLT
337 .	FL_19	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSYARMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GYFDYWGQGTQVTVSS
338 .	FL_19	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGDDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPFRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
339.	FL_19	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSYARMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGDDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
340.	FL_19	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSYARMGV SWIRQPPGKALEWLAQIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGDDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPFRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
341.	FL 2 0	VH CDR1	NARMAVS
342 .	FL 2 0	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
343.	FL 2 0	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
344 .	FL 2 0	VL CDR1	RASQGIRNDLA
345.	FL 2 0	VL CDR2	AASSLQS
346.	FL 2 0	VL CDR3	LQHNSYPLT

- 88 040387

347 .	FL_2 0	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVS S
348 .	FL_2 0	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
349 .	FL_2 0	s cFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
350 .	FL_2 0	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
351.	FL 21	VH CDR1	NARMGVS
352 .	FL 21	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
353.	FL 21	VH CDR3	IPGYGGNFYYHYYGMDV
354 .	FL 21	VL CDR1	RTSRGIRNDLG
355.	FL 21	VL CDR2	AASTLQS
356.	FL 21	VL CDR3	LQHNNFPWT
357 .	FL_21	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KS QWLTMTNMD P VDTAT YYCARI P GYGGN FY YHYYGMDVWGQGTTVTVS S
358 .	FL_21	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSRGIRNDLGWY QQIPGRAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNNFPWTFGQGTKVEIK
359.	FL_21	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KS QWLTMTNMD P VDTAT YYCARI P GYGGN FY YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSRGIRNDLGWYQQ IPGRAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT ISSLQPEDFATYYCLQHNNFPWTFGQGTKVEIK
360.	FL_21	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KS QWLTMTNMD P VDTAT YYCARI P GYGGN FY YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSRGIRNDLGWYQQ IPGRAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT ISSLQPEDFATYYCLQHNNFPWTFGQGTKVEIKSGG GGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYA MNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDR FTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFG NSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ TWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNW VQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKA ALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
361.	FL 22	VH CDR1	NARMGVS

- 89 040387

362 .	FL 22	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
363.	FL 22	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
364 .	FL 22	VL CDR1	RASQGISNYLA
365 .	FL 22	VL CDR2	AASTLQS
366.	FL 22	VL CDR3	LQHNTYPWT
367 .	FL_22	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
36Θ .	FL_22	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNTYPWTFGQGTKVEIK
369.	FL_22	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNTYPWTFGQGTKVEIK
370 .	FL_22	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNTYPWTFGQGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
371.	FL 23	VH CDR1	NARMGVS
372 .	FL 23	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
373.	FL 23	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
374 .	FL 23	VL CDR1	RASQDIGYDLG
375.	FL 23	VL CDR2	AASTLQS
376.	FL 23	VL CDR3	LQHNSFPWT
377 .	FL_2 3	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
378 .	FL_2 3	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGYDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LIISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIK
379.	FL_2 3	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGYDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLIISS LQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIK

- 90 040387

380.	FL_2 3	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGYDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLIISS LQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ kpgqaprgliggtkflapgtparfsgsllggkaa.lt LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
381.	FL 2 4	VH CDR1	NVRMGVS
382 .	FL 24	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
383.	FL 2 4	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
384 .	FL 2 4	VL CDR1	RASQDIRDDLV
385.	FL 2 4	VL CDR2	AASTLQS
386.	FL 2 4	VL CDR3	LQHHSYPWT
387 .	FL_2 4	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLILTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
388 .	FL_2 4	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLVWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHHSYPWTFGQGTKVEIK
3Θ9 .	FL_2 4	s cFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLILTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHHSYPWTFGQGTKVEIK
390 .	FL_2 4	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLILTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHHSYPWTFGQGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
391.	FL 2 5	VH CDR1	NARMGVS
392 .	FL 2 5	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
393.	FL 2 5	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
394 .	FL 2 5	VL CDR1	RASQDIRDDLG
395.	FL 25	VL CDR2	AASTLQS
396.	FL 2 5	VL CDR3	LQHNSFPFT
397 .	FL_25	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
398 .	FL_25	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFTGGGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSFPFTFGGGTKVEIK

- 91 040387

399.	FL_2 5	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFTGGGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSFPFTFGGGTKVEIK
400.	FL_2 5	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFTGGGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSFPFTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ kpgqaprgliggtkflapgtparfsgsllggkaalt LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
401.	FL 2 6	VH CDR1	NARMGVS
402 .	FL 2 6	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
403.	FL 2 6	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
404 .	FL 2 6	VL CDR1	RASQGIRNDLV
405.	FL 2 6	VL CDR2	GTSTLQS
406.	FL 2 6	VL CDR3	LQHNSYPLT
407.	FL_2 6	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
408 .	FL_2 6	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWY QQKPGKAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
409.	FL_2 6	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
410.	FL_2 6	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
411.	FL 2 7	VH CDR1	NARMGVS
412 .	FL 2 7	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
413.	FL 2 7	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
414 .	FL 2 7	VL CDR1	RTSQGIRNDLV
415.	FL 2 7	VL CDR2	AASTLQS
416.	FL 2 7	VL CDR3	LQHYSYPLT

- 92 040387

417 .	FL_2 7	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
418 .	FL_27	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLVWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGGGTKVEIK
419 .	FL_2 7	s cFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGGGTKVEIK
420 .	FL_2 7	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
421.	FL 2 8	VH CDR1	NARMGVS
422 .	FL 2 8	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
423.	FL 2 8	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
424 .	FL 2 8	VL CDR1	RASQGIGDDLG
425.	FL 2 8	VL CDR2	ATSVLQS
426.	FL 2 8	VL CDR3	LQHNSYPLT
427 .	FL_2 8	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
428 .	FL_2 8	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDDLGWY QQIPGKAPKRLIYATSVLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
429.	FL_2 8	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDDLGWYQQIPG KAPKRLIYATSVLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
430.	FL_2 8	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDDLGWYQQIPG KAPKRLIYATSVLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
431.	FL 2 9	VH CDR1	NARMGVS

- 93 040387

432.	FL 2 9	VH CDR2	HIFSNDEKSYRTSLKS
433.	FL 2 9	VH CDR3	IVGYGSGWYAYFDY
434 .	FL 2 9	VL CDR1	RASQGIRNDLG
435.	FL 2 9	VL CDR2	AASSLQS
436.	FL 2 9	VL CDR3	LQHNSYPLT
437.	FL_2 9	VH	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYRTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSS
43Θ .	FL_2 9	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
439.	FL_2 9	scFv	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYRTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
440.	FL_2 9	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYRTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
441.	FL 30	VH CDR1	NARMGVS
442 .	FL 30	VH CDR2	LIYWNDDKRYSPSLKS
443.	FL 30	VH CDR3	MVGYGSGWYAYFDY
444 .	FL 30	VL CDR1	RASQGIRNDLG
445.	FL 30	VL CDR2	AASSLQS
446.	FL 30	VL CDR3	LQHNSYPLT
447 .	FL_3 0	VH	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDT S KNQWLTMTNMD PVDTATYYCARMVGYGS GWY AYFDYWGQGTLVTVSS
448.	FL_3 0	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
449.	FL_3 0	scFv	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDT S KNQWLTMTNMD P VDTAT YYCARMVGYGS GWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK

- 94 040387

450.	FL_3 0	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDTSKNQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
451.	FL 31	VH CDR1	NARMGVS
452.	FL 31	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
453.	FL 31	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
454 .	FL 31	VL CDR1	RTSQGIRNDLG
455.	FL 31	VL CDR2	AASSLQS
456.	FL 31	VL CDR3	LQHNSYPLT
457.	FL_31	VH	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVS S
458.	FL_31	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
459.	FL_31	scFv	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
460.	FL_31	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
461.	FL 32	VH CDR1	NARMGVS
462 .	FL 32	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
463.	FL 32	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
464.	FL 32	VL CDR1	RASQGIRNDLV
465.	FL 32	VL CDR2	AASTLQS
466.	FL 32	VL CDR3	LQHYSYPLT
467.	FL_32	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
468 .	FL_32	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFI LTISSLQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGGGTKLEIK

- 95 040387

469.	FL_32	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFILTISS LQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGGGTKLEIK
470.	FL_32	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFILTISS LQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
471.	FL 33	VH CDR1	NARMGVS
472.	FL 33	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
473.	FL 33	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
474 .	FL 33	VL CDR1	RASQGIGDDLG
475.	FL 33	VL CDR2	ATSVLQS
476.	FL 33	VL CDR3	LQHNSYPLT
477.	FL_3 3	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
478.	FL_3 3	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDDLGWY QQIPGKAPKRLIYATSVLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
479.	FL_33	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDDLGWYQQIPG KAPKRLIYATSVLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
480.	FL_33	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKGQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIGDDLGWYQQIPG KAPKRLIYATSVLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
481.	FL 3 4	VH CDR1	NARMGVS
482 .	FL 3 4	VH CDR2	HIFWNDEKSYSTSLKS
483.	FL 3 4	VH CDR3	IPYYGSGSYNYGMDV
484.	FL 34	VL CDR1	RASQGIRNDLG
485.	FL 3 4	VL CDR2	AASSLQS
486.	FL 3 4	VL CDR3	LQHNSYPLT

- 96 040387

487 .	FL_34	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVS S
488 .	FL_34	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
489 .	FL_34	s cFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
490 .	FL_34	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIKSGGGG SEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMN WVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFT ISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNS YISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTV VTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQ QKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAAL TLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
491.	FL 35	VH CDR1	NARMGVS
492 .	FL 35	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKN
493.	FL 35	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
494 .	FL 35	VL CDR1	RASQDIRDDLV
495.	FL 35	VL CDR2	GTSTLQS
496.	FL 35	VL CDR3	LQHHSYPLT
497 .	FL_35	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGTQVTVS S
498 .	FL_35	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLVWY QQKPGKAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHHSYPLTFGGGTKLEIK
499.	FL_35	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLVWYQQKPG KAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHHSYPLTFGGGTKLEIK
500.	FL_35	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLVWYQQKPG KAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHHSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
501.	FL 3 6	VH CDR1	YARMGVS

- 97 040387

502 .	FL 3 6	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
503.	FL 36	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
504.	FL 36	VL CDR1	RASQDIRNDLA
505.	FL 36	VL CDR2	AASSLQS
506.	FL 3 6	VL CDR3	LQHNSYPLT
507 .	FL_3 6	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
508 .	FL_3 6	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
509.	FL_3 6	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
510.	FL_3 6	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
511.	FL 37	VH CDR1	NIKMGVS
512.	FL 37	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
513.	FL 37	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
514.	FL 37	VL CDR1	RASQDISNYLA
515.	FL 37	VL CDR2	AASSLQS
516.	FL 37	VL CDR3	LQHNSFPLT
517.	FL_37	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNIKMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
518.	FL_37	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSFPLTFGGGTKLEIK
519.	FL_37	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNIKMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSFPLTFGGGTKLEIK

- 98 040387

520.	FL_37	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNIKMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSFPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
521.	FL 38	VH CDR1	NARMGVS
522.	FL 38	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
523.	FL 38	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
524 .	FL 38	VL CDR1	RASQGIRNDLG
525.	FL 38	VL CDR2	AASSLQS
526.	FL 38	VL CDR3	LQHNSYPLT
527 .	FL_3 8	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTLVTVSS
528.	FL_3 8	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
529.	FL_3 8	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIK
530.	FL_3 8	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
531.	FL 39	VH CDR1	NARMGVS
532.	FL 39	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKN
533.	FL 39	VH CDR3	IVGYGSGWYGFFDY
534 .	FL 39	VL CDR1	RASQGIRNDLG
535.	FL 39	VL CDR2	AASTLQS
536.	FL 39	VL CDR3	LQHNSYPLT
537 .	FL_3 9	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSS
538.	FL_3 9	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK

- 99 040387

539.	FL_3 9	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
540.	FL_3 9	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
541.	FL 4 0	VH CDR1	NARMGVS
542.	FL 4 0	VH CDR2	NIFSNDEKSYSTSLKS
543.	FL 4 0	VH CDR3	IVGYGSGWYGYFDY
544 .	FL 4 0	VL CDR1	RASQDIRNDLG
545.	FL 4 0	VL CDR2	ATSIRQS
546.	FL 4 0	VL CDR3	LQHNSFPLT
547 .	FL_4 0	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNVNPVDTGTYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSS
548.	FL_4 0	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYATSIRQSGVPSRFTGSGSGTEFT LTISGLQPEDFATYFCLQHNSFPLTFGCGTKVEIK
549.	FL_4 0	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNVNPVDTGTYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYATSIRQSGVPSRFTGSGSGTEFTLTISG LQPEDFATYFCLQHNSFPLTFGGGTKVEIK
550.	FL_4 0	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLANIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KGTSKSQWLTMTNVNPVDTGTYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYATSIRQSGVPSRFTGSGSGTEFTLTISG LQPEDFATYFCLQHNSFPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
551.	FL 41	VH CDR1	NARMGVS
552 .	FL 41	VH CDR2	HIFSNDEKSFSTSLKN
553.	FL 41	VH CDR3	MVGYGSGWYAYFDY
554.	FL 41	VL CDR1	RASQSISSYLN
555.	FL 41	VL CDR2	AASSLQS
556.	FL 41	VL CDR3	LQHNSYPLT

- 100 040387

557 .	FL_41	VH	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSFSTSLKNRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTQVTVS S
558 .	FL_41	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
559 .	FL_4 1	s cFv	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSFSTSLKNRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPG KAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
560 .	FL_4 1	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSFSTSLKNRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPG KAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
561.	FL 42	VH CDR1	NARMAVS
562 .	FL 42	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
563.	FL 42	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
564 .	FL 42	VL CDR1	RASQGIRNDLA
565.	FL 42	VL CDR2	AASSLQS
566.	FL 42	VL CDR3	LQHNSYPLT
567 .	FL_42	VH	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVS S
568 .	FL_42	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
569.	FL_42	scFv	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
570.	FL_42	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
571.	FL 4 3	VH CDR1	NARMGVS

- 101 040387

572.	FL 43	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
573.	FL 43	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
574.	FL 43	VL CDR1	RASQGIRNDLV
575.	FL 4 3	VL CDR2	GTSTLQS
576.	FL 43	VL CDR3	LQHNSYPLT
			QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV
577			SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS
			KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS
			GAFDIWGQGTMVTVSS
			DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWY
57Θ .	FL 4 3	VL	QQKPGKAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT
			LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
			QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV
			SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS
			KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS
579.	FL 4 3	scFv	GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT
			QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWYQQKPG
			KAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
			LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
			QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV
			SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS
			KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS
			GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT
			QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLVWYQQKPG
			KAPKRLIYGTSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
S я η		Биспецифическая	LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS
		молекула	EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW
			VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI
			SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY
			ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW
			TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ
			KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT
			LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
581.	FL 44	VH CDR1	NARMGVS
582.	FL 44	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
583.	FL 4 4	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
584 .	FL 4 4	VL CDR1	RTSQGIRNDLV
585.	FL 4 4	VL CDR2	AASTLQS
586.	FL 44	VL CDR3	LQHYSYPLT
			QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV
587			SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS
			KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS
			GAFDIWGQGTMVTVSS
			DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLVWY
588.	FL 44	VL	QQKPGKAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT
			LTISSLQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGCGTKVEIK
			QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV
			SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS
			KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS
589.	FL 4 4	scFv	GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT
			QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLVWYQQKPG
			KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS
			LQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGCGTKVEIK

- 102 040387

590.	FL_4 4	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLVWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYFCLQHYSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ kpgqaprgliggtkflapgtparfsgsllggkaalt LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
591.	FL 45	VH CDR1	NARMGVS
592.	FL 45	VH CDR2	HIFSNDEKSYRTSLKS
593.	FL 45	VH CDR3	IVGYGSGWYAYFDY
594 .	FL 4 5	VL CDR1	RASQGIRNDLG
595.	FL 45	VL CDR2	AASSLQS
596.	FL 4 5	VL CDR3	LQHNSYPLT
597.	FL_4 5	VH	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYRTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSS
598 .	FL_4 5	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
599.	FL_4 5	scFv	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYRTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
600.	FL_4 5	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYRTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
601.	FL 4 6	VH CDR1	NARMGVS
602.	FL 4 6	VH CDR2	LIYWNDDKRYSPSLKS
603.	FL 4 6	VH CDR3	MVGYGSGWYAYFDY
604 .	FL 4 6	VL CDR1	RASQGIRNDLG
605.	FL 4 6	VL CDR2	AASSLQS
606.	FL 4 6	VL CDR3	LQHNSYPLT
607.	FL_4 6	VH	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDTSKNQWLTMTNMDPVDTATYYCARMVGYGSGWY AYFDYWGQGTLVTVSS
608 .	FL_4 6	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK

- 103 040387

609 .	FL_4 6	scFv	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDT S KNQWLTMTNMD PVDTATYYCARMVGYG S GWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
610 .	FL_4 6	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDT S KNQWLTMTNMD P VDTAT YYCARMVGYG S GWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
611.	FL 4 7	VH CDR1	NARMGVS
612 .	FL 4 7	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
613 .	FL 4 7	VH CDR3	IVGYGTGWYGFFDY
614 .	FL 4 7	VL CDR1	RTSQGIRNDLG
615 .	FL 47	VL CDR2	AASSLQS
616.	FL 4 7	VL CDR3	LQHNSYPLT
617 .	FL_4 7	VH	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVS S
618 .	FL_4 7	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
619 .	FL_4 7	scFv	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
620 .	FL_4 7	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTDMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRTSQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
621.	FL 4 8	VH CDR1	NARMGVS
622 .	FL 4 8	VH CDR2	HIFWNDEKSYSTSLKS
623 .	FL 4 8	VH CDR3	IPYYGSGSYNYGMDV
624 .	FL 4 8	VL CDR1	RASQGIRNDLG
625 .	FL 4 8	VL CDR2	AASSLQS
626.	FL 4 8	VL CDR3	LQHNTYPLT

- 104 040387

627 .	FL_4 8	VH	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVS S
628 .	FL_4 8	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNTYPLTFGCGTKVDIK
629 .	FL_4 8	s cFv	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQHNTYPLTFGCGTKVDIK
630 .	FL_4 8	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTFSGFSLRNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFWNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPYYGSGSY NYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQM TQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKP GKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTIS SLQPEDFATYYCLQHNTYPLTFGCGTKVDIKSGGGG SEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMN WVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFT ISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNS YISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTV VTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQ QKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAAL TLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
631.	FL 4 9	VH CDR1	NARMGVS
632 .	FL 4 9	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKN
633.	FL 4 9	VH CDR3	IVGYGTGWFGYFDY
634 .	FL 4 9	VL CDR1	RASQDIRTDLA
635.	FL 4 9	VL CDR2	AASSLQS
636.	FL 4 9	VL CDR3	LQHNRYPLT
637 .	FL_4 9	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWF GYFDYWGQGTQVTVS S
638 .	FL_4 9	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNRYPLTFGCGTKVDIK
639.	FL_4 9	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWF GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNRYPLTFGCGTKVDIK
640.	FL_4 9	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGTGWF GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRTDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNRYPLTFGCGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
641.	FL 5 0	VH CDR1	NARMGVS

- 105 040387

642 .	FL 5 0	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
643.	FL 5 0	VH CDR3	IPGYGGNFYYHYYGMDV
644 .	FL 50	VL CDR1	RASQGIRNDLA
645.	FL 5 0	VL CDR2	AASTVQS
646.	FL 5 0	VL CDR3	LQHNSFPWT
647 .	FL_5 0	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPGYGGNFY YHYYGMDVWGQGTTVTVS S
64Θ .	FL_5 0	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFA LTISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGCGTKVDIK
649.	FL_5 0	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPGYGGNFY YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQ KPGKAPKRLIYAASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFALT ISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGCGTKVDIK
650.	FL_5 0	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIPGYGGNFY YHYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDI QMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQ KPGKAPKRLIYAASTVQSGVPSRFSGSGSGTEFALT ISSLQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGCGTKVDIKSGG GGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYA MNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDR FTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFG NSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQ TWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNW VQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKA ALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
651.	FL 51	VH CDR1	NVRMGVS
652 .	FL 51	VH CDR2	HISSNDEKSYSTSLRS
653.	FL 51	VH CDR3	MPGDSNTWRGFFDY
654 .	FL 51	VL CDR1	RTSQSVNNNLA
655.	FL 51	VL CDR2	GAST RAT
656.	FL 51	VL CDR3	LQHNSYPLT
657 .	FL_51	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKCLEWLAHISSNDEKSYSTSLRSRLTIS TDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSS
658 .	FL_51	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRTSQSVNNNLAWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK
659.	FL_51	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKCLEWLAHISSNDEKSYSTSLRSRLTIS TDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMT QSPATLSVSPGERATLSCRTSQSVNNNLAWYQQKPG QAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK

- 106 040387

660.	FL_51	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKCLEWLAHISSNDEKSYSTSLRSRLTIS TDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMT QSPATLSVSPGERATLSCRTSQSVNNNLAWYQQKPG QAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
661.	FL 52	VH CDR1	YARMGVS
662.	FL 52	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
663.	FL 52	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
664.	FL 52	VL CDR1	RASQDIRNDLA
665.	FL 52	VL CDR2	AASSLQS
666.	FL 52	VL CDR3	LQHNSYPLT
667 .	FL_52	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
668.	FL_52	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWY QQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKLEIK
669.	FL_52	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKLEIK
670.	FL_52	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
671.	FL 53	VH CDR1	SYGMH
672 .	FL 53	VH CDR2	VISYDGSNEFYADSVKG
673.	FL 53	VH CDR3	GGEITMVRGVIGYYYYGMDV
674.	FL 53	VL CDR1	RTSQSISSYLN
675.	FL 53	VL CDR2	AASSLQS
676.	FL 53	VL CDR3	LQHNSYPLT
677.	FL_53	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVS S
678.	FL_53	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVDIK

- 107 040387

679.		scFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVDIK
FL 53
		Биспецифическая	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVDIKS
680.	FL 53	GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK
		молекула	YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRS KYNNYATYYAD SVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
681.	FL 54	VH CDR1	SYGMH
682 .	FL 54	VH CDR2	VISYDGSNEFYADSVKG
683.	FL 54	VH CDR3	GGEITMVRGVIGYYYYGMDV
684 .	FL 54	VL CDR1	RASQGVRNNLV
685.	FL 54	VL CDR2	GAST RAT
686. 687.	FL 54	VL CDR3 VH	LQHNSYPLT QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR
	DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVS S EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQGVRNNLVWY
688.	FL_54	VL	QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQSEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV
689.	FL_54	scFv	IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQGVRNNLVWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQSEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIK QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQGVRNNLVWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQSEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKS
690.	FL 54		GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK
		молекула	YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRS KYNNYATYYAD SVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
691.	FL 55	VH CDR1	SYGMH
692.	FL 55	VH CDR2	VISYDGSNKYYADSVKG
693.	FL 55	VH CDR3	SYGMDV
694.	FL 55	VL CDR1	RASQGISSWLA
695.	FL 55	VL CDR2	AASSLQS
696.	FL 55	VL CDR3	QQANSFPWT

- 108 040387

697.	FL_55	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYGMDVWGQG TTVTVSS
698.	FL_55	VL	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQANSFPWTFGCGTKLEIK
699.	FL_55	s cFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYGMDVWGQG TTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSAS VGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYA ASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQANSFPWTFGCGTKLEIK
700.	FL_55	Биспецифическая молекула	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKCLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYGMDVWGQG TTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSAS VGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYA ASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQANSFPWTFGCGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGG GLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGL EWVARIRS KYNNYATYYAD SVKDRFTIS RDD S KNTA YLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQ GTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTWTQEPSLTVS PGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGL IGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDE AEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
701.	FL 56	VH CDR1	NVRMGVS
702.	FL 56	VH CDR2	HIFSNDEKLYTTSLKS
703.	FL 56	VH CDR3	IVGYGTGWYGYFDY
704 .	FL 5 6	VL CDR1	RASQDIRDDLG
705.	FL 5 6	VL CDR2	ATSIRQS
706.	FL 56	VL CDR3	LQHHSFPLT
707.	FL_5 6	VH	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKLYTTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GYFDYWGQGTQVTVS S
708.	FL_56	VL	DIQMTQSPSSLSASIGDRVTITCRASQDIRDDLGWY QREPGKAPKRLIYATSIRQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISGLQPEDFATYFCLQHHSFPLTFGGGTKVDIK
709.	FL_56	scFv	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKLYTTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASIGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQREPG KAPKRLIYATSIRQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISG LQPEDFATYFCLQHHSFPLTFGGGTKVDIK
710.	FL_5 6	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKLYTTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GYFDYWGQGTQVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASIGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQREPG KAPKRLIYATSIRQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISG LQPEDFATYFCLQHHSFPLTFGGGTKVDIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
711.	FL 57	VH CDR1	YARMGVS

- 109 040387

712 .	FL 57	VH CDR2	HISSNDEKSFSTALES
713.	FL 57	VH CDR3	MPGDSNTWRGFFDY
714 .	FL 57	VL CDR1	RTSQTVTNSYIA
715.	FL 57	VL CDR2	GTSTRAT
716.	FL 57	VL CDR3	QKYGSSPLT
717 .	FL_57	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHISSNDEKSFSTALESRLTIS TDTSKSQMVLTMTNVDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSS
71Θ .	FL_57	VL	EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRTSQTVTNSYIAW YQQRPGQAPRLLIYGTSTRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQKYGSSPLTFGGGTKLEIK
719.	FL_57	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHISSNDEKSFSTALESRLTIS TDTSKSQMVLTMTNVDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMT QSPGTLSLSPGERATLSCRTSQTVTNSYIAWYQQRP GQAPRLLIYGTSTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIS RLEPEDFAVYYCQKYGSSPLTFGGGTKLEIK
720.	FL_57	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHISSNDEKSFSTALESRLTIS TDTSKSQMVLTMTNVDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMT QSPGTLSLSPGERATLSCRTSQTVTNSYIAWYQQRP GQAPRLLIYGTSTRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTIS RLEPEDFAVYYCQKYGSSPLTFGGGTKLEIKSGGGG SEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMN WVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFT ISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNS YISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTV VTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQ QKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAAL TLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
721.	FL 5 8	VH CDR1	NVRMGVS
722 .	FL 58	VH CDR2	HISSNDEKSYSTSLRS
723.	FL 5 8	VH CDR3	MPGDSNTWRGFFDY
724 .	FL 5 8	VL CDR1	RTSQSVNNNLA
725.	FL 5 8	VL CDR2	GAST RAT
726.	FL 5 8	VL CDR3	LQHNSYPLT
727 .	FL_5 8	VH	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHISSNDEKSYSTSLRSRLTIS TDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSS
728 .	FL_5 8	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRTSQSVNNNLAWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
729.	FL_5 8	scFv	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHISSNDEKSYSTSLRSRLTIS TDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMT QSPATLSVSPGERATLSCRTSQSVNNNLAWYQQKPG QAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK

- 110 040387

730.	FL_5 8	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHISSNDEKSYSTSLRSRLTIS TDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARMPGDSNTWR GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMT QSPATLSVSPGERATLSCRTSQSVNNNLAWYQQKPG QAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
731.	FL 59	VH CDR1	NVRMGVS
732.	FL 59	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
733.	FL 59	VH CDR3	MPEYSSGWSGAFDI
734 .	FL 5 9	VL CDR1	RASQDIRDDLG
735.	FL 59	VL CDR2	GASTLQS
736.	FL 5 9	VL CDR3	LQHNSYPLT
737.	FL_5 9	VH	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSS
738 .	FL_5 9	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWY QQKPGNAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTRLEIK
739.	FL_5 9	scFv	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG NAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTRLEIK
740.	FL_5 9	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPMLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNVRMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRDDLGWYQQKPG NAPKRLIYGASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTRLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
741.	FL 60	VH CDR1	NARMGVS
742 .	FL 60	VH CDR2	HIFSNDEKSYSTSLKS
743.	FL 60	VH CDR3	MVGYGSGWYAYFDY
744 .	FL 60	VL CDR1	RSSQSLLHSNGYNYLY
745.	FL 60	VL CDR2	EVSNRFS
746.	FL 60	VL CDR3	MQALQTPLT
747.	FL_60	VH	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KRQWLTMTNMD PVDTATYYCARMVGYGS GWY AYFDYWGQGTLVTVSS
748 .	FL_60	VL	DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLLHSNGYN YLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGS GTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTK VEIK

- 111 040387

749.	FL_60	scFv	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KRQWLTMTNMD PVDTATYYCARMVGYGS GWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMT QTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLLHSNGYNYLYWY LQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT LKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK
750.	FL_60	Биспецифическая молекула	QVTLKESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDT S KRQWLTMTNMD P VDTAT YYCARMVGYGS GWY AYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMT QTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLLHSNGYNYLYWY LQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT LKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
751.	FL 61	VH CDR1	SYGMH
752 .	FL 61	VH CDR2	VISYDGSNEFYADSVKG
753.	FL 61	VH CDR3	GGEITMVRGVIGYYYYGMDV
754 .	FL 61	VL CDR1	RASQSISSYLN
755.	FL 61	VL CDR2	AASSLQS
756.	FL 61	VL CDR3	LQHNSYPLT
757 .	FL_61	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVS S
758 .	FL_61	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
759.	FL_61	scFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
760.	FL_61	Биспецифическая молекула	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
761.	FL 62	VH CDR1	SYGMH
762 .	FL 62	VH CDR2	VISYDGSNEFYADSVKG
763.	FL 62	VH CDR3	GGEITMVRGVIGYYYYGMDV
764 .	FL 62	VL CDR1	RASQGVRNNLV
765.	FL 62	VL CDR2	GAST RAT
766.	FL 62	VL CDR3	LQHNSYPLT

- 112 040387

767 .	FL_62	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVS S
768 .	FL_62	VL	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQGVRNNLVWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQSEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
769.	FL_62	scFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQGVRNNLVWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQSEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIK
770.	FL_62	Биспецифическая молекула	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQGVRNNLVWY QQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFT LTISSLQSEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
771.	FL 63	VH CDR1	SYGMH
772 .	FL 63	VH CDR2	VISYDGSNEFYADSVKG
773.	FL 63	VH CDR3	GGEITMVRGVIGYYYYGMDV
774 .	FL 63	VL CDR1	RTSQSISSYLN
775.	FL 63	VL CDR2	AASSLQS
776.	FL 63	VL CDR3	LQHNSYPLT
777 .	FL_63	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVS S
778 .	FL_63	VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
779.	FL_63	scFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK

- ИЗ 040387

780 .	FL_63	Биспецифическая молекула	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
781.	FL 64	VH CDR1	SYGMH
782 .	FL 64	VH CDR2	VISYDGSNEFYADSVKG
783 .	FL 64	VH CDR3	GGEITMVRGVIGYYYYGMDV
784 .	FL 64	VL CDR1	RASQSISSYLN
785 .	FL 64	VL CDR2	AASSLQS
786.	FL 64	VL CDR3	LQHNSYPLT
787 .	FL_64	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVS S
788 .	FL_64	VL	DIQMTQSPSSLSASVGNRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
789 .	FL_64	s cFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGNRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIK
790 .	FL_64	Биспецифическая молекула	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNEFYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGNRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVDIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VL
791.	FL 65	VH CDR1	SYGMH
792 .	FL 65	VH CDR2	VISYDGSNKYYADSVKG
793 .	FL 65	VH CDR3	SYGMDV
794 .	FL 65	VL CDR1	RASQGISSWLA
795 .	FL 65	VL CDR2	AASSLQS
796.	FL 65	VL CDR3	QQANSFPWT
797 .	FL_65	VH	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYGMDVWGQG TTVTVSS
798 .	FL_65	VL	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCQQANSFPWTFGQGTKLEIK

- 114 040387

799.	FL_65	scFv	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYGMDVWGQG TTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSAS VGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYA ASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQANSFPWTFGQGTKLEIK
800.	FL_65	Биспецифическая молекула	QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSYGMDVWGQG TTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSVSAS VGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYA ASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATY YCQQANSFPWTFGQGTKLEIKSGGGGSEVQLVESGG GLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNWVRQAPGKGL EWVARIRS KYNNYATYYAD SVKDRFTIS RDD S KNTA YLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYISYWAYWGQ GTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTWTQEPSLTVS PGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQKPGQAPRGL IGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDE AEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVL
801.	FLT3 человека vl NM_004119	Последовательность человека	MPALARDGGQLPLLWFSAMIFGTITNQDLPVIKCV LINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSS GTVYEAAAVEVDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFK HSSLNCQPHFDLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLF IQSEATNYTILFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQD ALVCISESVPEPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKK EEKVLHELFGTDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQT PQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELE NKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARND TGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYE IDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKG LDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFT LNIRRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCS DKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMS EAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQD NISFYATIGVCLLFIWLTLLICHKYKKQFRYESQL QMVQVTGSSDNEYFYVDFREYEYDLKWEFPRENLEF GKVLGSGAFGKVMNATAYGISKTGVSIQVAVKMLKE KADSSEREALMSELKMMTQLGSHENIVNLLGACTLS GPIYLIFEYCCYGDLLNYLRSKREKFHRTWTEIFKE HNFSFYPTFQSHPNSSMPGSREVQIHPDSDQISGLH GNSFHSEDEIEYENQKRLEEEEDLNVLTFEDLLCFA YQVAKGMEFLEFKSCVHRDLAARNVLVTHGKWKIC D FGLARD IMS D SN YWRGNARL P VKWMAP E S L FEGI YTIKSDVWSYGILLWEIFSLGVNPYPGIPVDANFYK LIQNGFKMDQPFYATEEIYIIMQSCWAFDSRKRPSF PNLTSFLGCQLADAEEAMYQNVDGRVSECPHTYQNR RPFSREMDLGLLSPQAQVEDS

- 115 040387

802.	FLT3 яванского макака xl ХМ_00558554 4	Последовательность макаки	MPALARGGGRLPLLWFSAMIFGTITNQDLPVIKCV LINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSA GTVYEAATVEVDVSASIТ LQVLVDT Р GNIS CLWVFK HSSLNCQPHFDVQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLF IQSEATNYTILFTVSIRNTLLFTLRRPYFRKMENQD ALVCISESVPEPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKK EEKVLHELFGTDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQT PQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELE NKALEEGSYFEMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARND TGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYE IDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKG LDDGYSVSKFCNHKHQPGEYIFHAENGDAQFTKMFT LNIRRKPQVLAEASASQASCSSDGYPLPSWTWKKCS DKSPNCTEDIPEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMS EAMKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQD SISFYATIGVCLLFIWLTMLICHKYKKQFRYESQL QMVQVTGSSDNEYFYVDFRDCDYDLKWEFPRENLEF GKVLGSGAFGKVMNATAYGISKTGVSIQVAVKMLKE KADSSEREALMSELKMMTQLGSHENIVNLLGACTLS GPIYLIFEYCCYGDLLNYLRSKREKFHRTWTEIFKE HNFSFYPTFQSHPNSSMPGSRDVQIHPHSDPISGLH GNSFHSEDEIEYENQKRLEEEEDLNVLTFEDLLCFA YQVAKGMEFLEFKSCVHRDLAARNVLVTHGKWKIC D FGLARD IMS D SN YWRGNARL РVKWMAP Е S L FEGI YTIKSDVWSYGILLWEIFSLGVNPYPGIPVDANFYK LIRNGFKMDQPFYATEEIYIIMQSCWAFDSRKRPSF PHLTSFLGCQLEDAEEAMYQNVDGRVSERPHIYQNR RPFSREMDSGPLSPKAQVEDS
803.	FLT3 человека (Т227М) изоформа	Последовательность человека	MPALARDGGQLPLLWFSAMIFGTITNQDLPVIKCV LINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSS GTVYEAAAVEVDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFK HSSLNCQPHFDLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLF IQSEATNYTILFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQD ALVCISESVPEPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKK EEKVLHELFGMDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQT PQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELE NKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARND TGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYE IDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKG LDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFT LNIRRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCS DKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMS EAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQD NISFYATIGVCLLFIWLTLLICHKYKKQFRYESQL QMVQVTGSSDNEYFYVDFREYEYDLKWEFPRENLEF GKVLGSGAFGKVMNATAYGISKTGVSIQVAVKMLKE KADSSEREALMSELKMMTQLGSHENIVNLLGACTLS GPIYLIFEYCCYGDLLNYLRSKREKFHRTWTEIFKE HNFSFYPTFQSHPNSSMPGSREVQIHPDSDQISGLH GNSFHSEDEIEYENQKRLEEEEDLNVLTFEDLLCFA YQVAKGMEFLEFKSCVHRDLAARNVLVTHGKWKIC D FGLARD IMS D SN YWRGNARL P VKWMAP E S L FEGI YTIKSDVWSYGILLWEIFSLGVNPYPGIPVDANFYK LIQNGFKMDQPFYATEEIYIIMQSCWAFDSRKRPSF PNLTSFLGCQLADAEEAMYQNVDGRVSECPHTYQNR RPFSREMDLGLLSPQAQVEDS

- 116 040387

804.	FLT3 человекаITD изоформа	Последовательность человека	MPALARDGGQLPLLWFSAMIFGTITNQDLPVIKCV LINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSS GTVYEAAAVEVDVSASIТ LQVLVDAP GNIS CLWVFK HSSLNCQPHFDLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLF IQSEATNYTILFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQD ALVCISESVPEPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKK EEKVLHELFGTDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQT PQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELE NKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARND TGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYE IDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKG LDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFT LNIRRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCS DKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMS EAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQD NISFYATIGVCLLFIWLTLLICHKYKKQFRYESQL QMVQVTGSSDNEYFYVDFREYEYSSSDNEYFYVDFR EYEYDLKDLKWEFPRENLEFGKVLGSGAFGKVMNAT AYGISKTGVSIQVAVKML KE KAD S S ЕREALMS ЕLКМ MTQLGSHENIVNLLGACTLSGPIYLIFEYCCYGDLL NYLRSKREKFHRTWTEIFKEHNFSFYPTFQSHPNSS MPGSREVQIHPDSDQISGLHGNSFHSEDEIEYENQK RLEEEEDLNVLTFEDLLCFAYQVAKGMEFLEFKSCV HRDLAARNVLVTHGKWKICDFGLARDIMSDSNYW RGNARLPVKWMAPESLFEGIYTIKSDVWSYGILLWE IFSLGVNPYPGIPVDANFYKLIQNGFKMDQPFYATE EIYIIMQSCWAFDSRKRPSFPNLTSFLGCQLADAEE AMYQNVDGRVSECPHTYQNRRPFSREMDLGLLSPQA QVEDS
805.	Паралог KIT vl человека	Последовательность человека	MRGARGAWDFLCVLLLLLRVQTGSSQPSVSPGEPSP PSIHPGKSDLIVRVGDEIRLLCTDPGFVKWTFEILD ETNENKQNEWITEKAEATNTGKYTCTNKHGLSNSIY VFVRDPAKLFLVDRSLYGKEDNDTLVRCPLTDPEVT NYSLKGCQGKPLPKDLRFIPDPKAGIMIKSVKRAYH RLCLHCSVDQEGKSVLSEKFILKVRPAFKAVPWSV SKASYLLREGEEFTVTCTIKDVSSSVYSTWKRENSQ TKLQEKYNSWHHGDFNYERQATLTISSARVNDSGVF MCYANNTFGSANVTTTLEWDKGFINIFPMINTTVF VNDGENVDLIVEYEAFPKPEHQQWIYMNRTFTDKWE DYPKSENESNIRYVSELHLTRLKGTEGGTYTFLVSN SDVNAAIAFNVYVNTKPEILTYDRLVNGMLQCVAAG FPEPTIDWYFCPGTEQRCSASVLPVDVQTLNSSGPP FGKLWQS SI DS SAFKHNGTVECKAYNDVGKT SAYF NFAFKGNNKEQIHPHTLFTPLLIGFVIVAGMMCIIV MILTYKYLQKPMYEVQWKWEEINGNNYVYIDPTQL PYDHKWEFPRNRLSFGKTLGAGAFGKWEATAYGLI К S DAAMTVAVKML К Р SАН LT Е REALMS Е L KVL S YL G NHMNIVNLLGACTIGGPTLVITEYCCYGDLLNFLRR KRDSFICSKQEDHAEAALYKNLLHSKESSCSDSTNE YMDMKPGVSYWPTKADKRRSVRIGSYIERDVTPAI MEDDELALDLEDLLSFSYQVAKGMAFLASKNCIHRD LAARNILLTHGRITKICDFGLARDIKNDSNYWKGN ARLPVKWMAPESIFNCVYTFESDVWSYGIFLWELFS LGSSPYPGMPVDSKFYKMIKEGFRMLSPEHAPAEMY DIMKTCWDADPLKRPTFKQIVQLIEKQISESTNHIY SNLANCSPNRQKPWDHSVRINSVGSTASSSQPLLV HDDV

- 117 040387

806.	Паралог CSF1R vl человека NM_005211	Последовательность человека	MGPGVLLLLLVATAWHGQGIPVIEPSVPELWKPGA TVTLRCVGNGSVEWDGPPSPHWTLYSDGSSSILSTN NATFQNTGTYRCTEPGDPLGGSAAIHLYVKDPARPW N VL AQ Е VWF Е DQDALLPCLLTDPVLEAGVSLVRVR GRPLMRHTNYSFSPWHGFTIHRAKFIQSQDYQCSAL MGGRKVMSISIRLKVQKVIPGP PALTLVPAELVRIR GEAAQIVCSASSVDVNFDVFLQHNNTKLAIPQQSDF HNNRYQKVLTLNLDQVDFQHAGNYSCVASNVQGKHS TSMFFRWESAYLNLSSEQNLIQEVTVGEGLNLKVM VEAYPGLQGFNWTYLGPFSDHQPEPKLANATTKDTY RHTFTLSLPRLKPSEAGRYSFLARNPGGWRALTFEL TLRYPPEVSVIWTFINGSGTLLCAASGYPQPNVTWL QCSGHTDRCDEAQVLQVWDDPYPEVLSQEPFHKVTV QSLLTVETLEHNQTYECRAHNSVGSGSWAFIPISAG AHTHPPDEFLFTPVWACMSIMALLLLLLLLLLYKY KQKPKYQVRWKIIESYEGNSYTFIDPTQLPYNEKWE FPRNNLQFGKTLGAGAFGKWEATAFGLGKEDAVLK VAVKMLKSTAHADEKEALMSELKIMSHLGQHENIVN LLGACTHGGPVLVITEYCCYGDLLNFLRRKAEAMLG PSLSPGQDPEGGVDYKNIHLEKKYVRRDSGFSSQGV DTYVEMRPVSTSSNDSFSEQDLDKEDGRPLELRDLL Н F S S QVAQ GMAFLAS KN СIНRDVAARNVLLTNGHVA KIGDFGLARDIMNDSNYIVKGNARLPVKWMAPESIF DCVYTVQSDVWSYGILLWEIFSLGLNPYPGILVNSK FYKLVKD GYQMAQ РAFAP KNIYSIMQACWALЕ Р Т Н R PTFQQICSFLQEQAQEDRRERDYTNLPSSSRSGGSG SSSSELEEESSSEHLTCCEQGDIAQPLLQPNNYQFC
807 .	Паралог PDGFRA человека NM_006206	Последовательность человека	MGTSHPAFLVLGCLLTGLSLILCQLSLPSILPNENE KWQLNSSFSLRCFGESEVSWQYPMSEEESSDVEIR NEENNSGLFVTVLEVSSASAAHTGLYTCYYNHTQTE ENELEGRHIYIYVPDPDVAFVPLGMTDYLVIVEDDD SAIIPCRTTDPETPVTLHNSEGWPASYDSRQGFNG TFTVGPYICEATVKGKKFQTIPFNVYALKATSELDL EMEALKTVYKSGETIWTCAVFNNEWDLQWTYPGE VKGKGITMLEEIKVPSIKLVYTLTVPEATVKDSGDY ECAARQATREVKEMKKVTISVHEKGFIEIKPTFSQL EAVNLHEVKHFWEVRAYPPPRISWLKNNLTLIENL TEITTDVEKIQEIRYRSKLKLIRAKEEDSGHYTIVA QNEDAVKSYTFELLTQVPSSILDLVDDHHGSTGGQT VRCTAEGTPLPDIEWMICKDIKKCNNETSWTILANN VSNIITEIHSRDRSTVEGRVTFAKVEETIAVRCLAK NLLGAENRELKLVAPТLRSЕLTVAAAVLVLLVIVII SLIVLWIWKQKPRYEIRWRVIESISPDGHEYIYVD PMQLPYDSRWEFPRDGLVLGRVLGSGAFGKWEGTA YGLSRSQPVMKVAVKMLKPTARSSEKQALMSELKIM THLGPHLNIVNLLGACTKSGPIYIITEYCFYGDLVN YLHKNRDSFLSHHPEKPKKELDIFGLNPADESTRSY VILSFENNGDYMDMKQADTTQYVPMLERKEVSKYSD IQRSLYDRPASYKKKSMLDSEVKNLLSDDNSEGLTL L D L L S FT YQVARGME FLAS KN СVH RD LAARNVL LAQ GKIVKICDFGLARDIMHDSNYVSKGSTFLPVKWMAP ESIFDNLYTTLSDVWSYGILLWEIFSLGGTPYPGMM VDSTFYNKIKSGYRMAKPDHATSEVYEIMVKCWNSE PEKRPSFYHLSEIVENLLPGQYKKSYEKIHLDFLKS DHPAVARMRVDSDNAYIGVTYKNEEDKLKDWEGGLD EQRLSADSGYIIPLPDIDPVPEEEDLGKRNRHSSQT SEESAIETGSSSSTFIKREDETIEDIDMMDDIGIDS SDLVEDSFL

- 118 040387

808 .	Паралог NTM v3 человека	Последовательность человека	MGVCGYLFLPWKCLVWSLRLLFLVPTGVPVRSGDA TFPKAMDNVTVRQGESATLRCTIDNRVTRVAWLNRS TILYAGNDKWCLDPRWLLSNTQTQYSIEIQNVDVY DEGPYTCSVQTDNHPKTSRVHLIVQVSPKIVEISSD ISINEGNNISLTCIATGRPEPTVTWRHIS PKAVGFV SEDEYLEIQGITREQSGDYECSASNDVAAPWRRVK VTVNYPPYISEAKGTGVPVGQKGTLQCEASAVPSAE FQWYKDDKRLIEGKKGVKVENRPFLSKLIFFNVSEH DYGNYTCVASNKLGHTNASIMLFEVKTTALTPWKGP GAVSEVSNGTSRRAGCVWLLPLLVLHLLLKF
809.	FLT3D2xEpCAM человека с меткой V5	Искусственная последовательность	MGWSCIILFLVATATGVHSGKPIPNPLLGLDSTSGT LRRPYFRKMENQDALVCISESVPEPIVEWVLCDSQG ESCKEESPAWKKEEKVLHELFGTDIRCCARNELGR ECTRLFTIDLNQTPQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAV HVNHGFGLTWELENKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIR IL FAFVS SVARNDT GYYT CSSSKHPSQ SALVTIVEК GFINATNSSEDYEIDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTW TFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFH AEN D DAQ FT KMFT LNIRRKPQVLAEASAS QAS C FS D GYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEITEGVWNRKANRKV FGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETI LLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSGAGVIAVIWWIA IVAGIWLVISRKKRMAKYEKAEIKEMGEMHRELNA
810.	FLT3D3xEpCAM человека с меткой V5	Искусственная последовательность	MGWSCIILFLVATATGVHSGKPIPNPLLGLDSTSGF TIDLNQTPQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHGF GLTWELENKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAFV SSVARNDTGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFINAT NSSEDYEIDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSRKS FPCEQKGLDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHAENDDA Q FT KMFT LNIRRKPQVLAEASAS QASCFSDGYPLPS WTWKKCSDKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVS SSTLNMSEAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPG PFPFIQDNISSGGGGSGAGVIAVIWWIAIVAGIV VLVISRKKRMAKYEKAEIKEMGEMHRELNA
811.	FLT3D4xEpCAM человека с меткой V5	Искусственная последовательность	MGWSCIILFLVATATGVHSGKPIPNPLLGLDSTSGG FINATNSSEDYEIDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWT FSRKSFPCEQKGLDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHA END DAQ FTKMFTLNIRRKP QVLAEASAS QAS C F S D G YPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVF GQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETIL LNSPGPFPFIQDNISSGGGGSGAGVIAVIWWIAI VAGIWLVISRKKRMAKYEKAEIKEMGEMHRELNA
812 .	FLT3D5xEpCAM человека с меткой V5	Искусственная последовательность	MGWSCIILFLVATATGVHSGKPIPNPLLGLDSTSGI RRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKS PNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAI KGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNIS SGGGGSGAGVIAVIWWIAIVAGIWLVISRKKRM AKYEKAEIKEMGEMHRELNA
813.	ЕЬТЗ-ВКД человека	Последовательность человека	MPALARDGGQLPLLWFSAMIFGTITNQDLPVIKCV LINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSS GTVYEAAAVEVDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFK HSSLNCQPHFDLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLF IQSEATNYTILFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQD ALVCISESVPEPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKK EEKVLHELFGTDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQT PQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELE NKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARND TGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYE IDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKG LDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFT LNIRRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCS DKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMS EAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQD NIS

- 119 040387

814 .	FLT3-D1 человека	Последовательность человека	AAVEVDVSASIТ LQVLVDAP GNIS СLWVFKH S S LNС QPHFDLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEAT NYTILFTVSIR
815.	FLT3-D2 человека	Последовательность человека	TLRRPYFRKMENQDALVCISESVPEPIVEWVLCDSQ GESCKEESPAWKKEEKVLHELFGTDIRCCARNELG RECTRL
816.	FLT3-D3 человека	Последовательность человека	FTIDLNQTPQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHG FGLTWELENKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAF VSSVARNDTGYYTCSSSKHPSQSALVTIV
817 .	FLT3-D4 человека	Последовательность человека	GFINATNSSEDYEIDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTW TFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFH AENDDAQFTKMFTLN
818 .	FLT3-D5 человека	Последовательность человека	IRRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDK SPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEA IKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPG
819.	LSP человека V5 х Flt3 ElmuxEpCpEF DHFR	Искусственная последовательность	NQDLPVIKCVLINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPED LGCALRPQSSGTVYEA
820.	LSP человека V5 x Flt3 E2muxEpCpEF DHFR	Искусственная последовательность	AAVEVDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFKH S S LNC QPHFDLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEAT NYTILFTVSIRNTLLYT
821.	LSP человека V5 x Flt3 ЕЗтихЕрСpEF DHFR	Искусственная последовательность	LRRPYFRKMENQDALVCISESVPEPIVEWVLCDSQG ESCKEESPAWKKEEKVLHELFGTDIRCCARNELGR ECTRL
822.	LSP человека V5 x Flt3 ЕЗАтихЕрСpEF DHFR	Искусственная последовательность	LRRPYFRKMENQDALVCISESVPEPIVEWVLCDSQG ESC
823.	LSP человека V5 x Flt3 ЕЗВтихЕрСpEF DHFR	Искусственная последовательность	KEESPAWKKEEKVLHELFGTDIRCCARNELGRECT RL
824.	LSP человека V5 x Flt3 E4muxEpCpEF DHFR	Искусственная последовательность	FTIDLNQTPQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNHG FGLTWELENKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFAF VSSVARNDTGYYTCSSSKHPSQSALVTIV
825.	LSP человека V5 x Flt3 E5muxEpCpEF DHFR	Искусственная последовательность	EKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFSVRFKAYPQIRC TWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKFCNHKHQPGEYI FHAEN D DAQ FT KMFT LN
826.	LSP человека V5 x Flt3 ЕбтихЕрСpEF DHFR	Искусственная последовательность	IRRKPQVLAEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDK SPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEA IKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNI S

- 120 040387

827.	LSP человека V5 x Flt3ElmuxEpCpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLISHENNGSS AGKPSSYRMVRGSPEDLQCAPRRQSEGTVYEAAAVE VDVSASIТ LQVLVDAP GNIS СLWVFKH SSLNCQPHF DLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEATNYTI LFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQDALVCISESVP EPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKKEEKVLHELFG TDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQTPQTTLPQLFL KVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELENKALEEGNYF EMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFS VRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKF CNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFTLNIRRKPQVL AEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI TEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKC CAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVIAVIWWIAIVAGIWLVISRKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA
828 .	LSP человека V5 x Flt3E2muxEpCpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLINHKNNDSS VGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSSGTVYEAATVE VAESGSITLQVQLATPGDLSCLWVFKHSSLGCQPHF DLQNRGIVSMAILNVTETQAGEYLLHIQSEAANYTV LFTVNVRDTQLYVLRRPYFRKMENQDALVCISESVP EPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKKEEKVLHELFG TDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQTPQTTLPQLFL KVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELENKALEEGNYF EMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFS VRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKF CNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFTLNIRRKPQVL AEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI TEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKC CAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVIAVIWWIAIVAGIWLVISRKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA
829.	LSP человека V5 x Flt3ЕЗтихЕрСpEFDHFR	Искусственная последовательность	MGWSCIILFLVATATGVHSGKPIPNPLLGLDSTSGN QDLPVIKCVLINHKNNDSSVGKSSSYPMVSESPEDL GCALRPQ S S GTVYEAAAVEVDVSASIT LQVLVDAP G NISCLWVFKHSSLNCQPHFDLQNRGWSMVILKMTE TQAGEYLLFIQSEATNYTILFTVSIRNTLLYTLRRP YFRKMENQDALLCISEGVPEPTVEWVLCSSHRESCK EEGPAWRKEEKVLHELFGTDIRCCARNALGRECTK LFTIDLNQTPQTTLPQLFLKVGEPLWIRCKAVHVNH GFGLTWELENKALEEGNYFEMSTYSTNRTMIRILFA FVSSVARNDTGYYTCSSSKHPSQSALVTIVEKGFIN ATNSSEDYEIDQYEEFCFSVRFKAYPQIRCTWTFSR KSFPCEQKGLDNGYSISKFCNHKHQPGEYIFHAEND DAQ FTKMFTLNIRRKP QVLAEASAS QASCFSDGYPL PSWTWKKCSDKSPNCTEEITEGVWNRKANRKVFGQW VSSSTLNMSEAIKGFLVKCCAYNSLGTSCETILLNS PGPFPFIQDNISSGGGGSGAGVIAVIWWIAIVAG IWLVISRKKRMAKYEKAEIKEMGEMHRELNA

- 121 040387

830.	LSP человека V5 x Flt3ЕЗАтихЕрСpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLINHKNNDSS VGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSSGTVYEAAAVE VDVSASIТ LQVLVDAP GNIS СLWVFKH SSLNCQPHF DLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEATNYTI LFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQDALLCISEGVP EPTVEWVLCSSHRESCKEESPAWKKEEKVLHELFG TDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQTPQTTLPQLFL KVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELENKALEEGNYF EMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFS VRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKF CNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFTLNIRRKPQVL AEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI TEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKC CAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVI AVI WWI AI VAGI WLVIS RKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA
831.	LSP человека V5 x Flt3ЕЗВтихЕрСpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLINHKNNDSS VGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSSGTVYEAAAVE VDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFKH SSLNCQPHF DLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEATNYTI LFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQDALVCISESVP EPIVEWVLCDSQGESCKEEGPAWRKEEKVLHELFG TDIRCCARNALGRECTKLFTIDLNQTPQTTLPQLFL KVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELENKALEEGNYF EMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFS VRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKF CNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFTLNIRRKPQVL AEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI TEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKC CAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVI AVI WWI AI VAGI WLVI S RKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA
832 .	LSP человека V5 x Flt3E4muxEpCpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLINHKNNDSS VGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSSGTVYEAAAVE VDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFKH SSLNCQPHF DLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEATNYTI LFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQDALVCISESVP EPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKKEEKVLHELFG TDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQAPQSTLPQLFL KVGEPLWIRCKAIHVNHGFGLTWELEDKALEEGSYF EMSTYSTNRTMIRILLAFVSSVGRNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTILEKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFS VRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKF CNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFTLNIRRKPQVL AEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI TEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKC CAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVI AVI WWI AI VAGI WLVI S RKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA

- 122 040387

833.	LSP человека V5 x Flt3E5muxEpCpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLINHKNNDSS VGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSSGTVYEAAAVE VDVSASIТ LQVLVDAP GNIS СLWVFKH S S LNCQ РН F DLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEATNYTI LFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQDALVCISESVP EPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKKEEKVLHELFG TDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQTPQTTLPQLFL KVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELENKALEEGNYF EMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTIVEKGFINATSSQEEYEIDPYEKFCFS VRFKAYPRIRCTWIFSQASFPCEQRGLEDGYSISKF CDHKNKPGEYIFYAENDDAQFTKMFTLNIRRKPQVL AEASASQASCFSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI TEGVWNRKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAIKGFLVKC CAYNSLGTSCETILLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVIAVIWWIAIVAGIWLVISRKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA
834 .	LSP человека V5 x Flt3E6muxEpCpEFDHFR	Искусственная последовательность	GKPIPNPLLGLDSTSGNQDLPVIKCVLINHKNNDSS VGKSSSYPMVSESPEDLGCALRPQSSGTVYEAAAVE VDVSASIT LQVLVDAP GNIS CLWVFKH SSLNCQPHF DLQNRGWSMVILKMTETQAGEYLLFIQSEATNYTI LFTVSIRNTLLYTLRRPYFRKMENQDALVCISESVP EPIVEWVLCDSQGESCKEESPAWKKEEKVLHELFG TDIRCCARNELGRECTRLFTIDLNQTPQTTLPQLFL KVGEPLWIRCKAVHVNHGFGLTWELENKALEEGNYF EMSTYSTNRTMIRILFAFVSSVARNDTGYYTCSSSK HPSQSALVTIVEKGFINATNSSEDYEIDQYEEFCFS VRFKAYPQIRCTWTFSRKSFPCEQKGLDNGYSISKF CNHKHQPGEYIFHAENDDAQFTKMFTLNIRKKPQVL ANASASQASCSSDGYPLPSWTWKKCSDKSPNCTEEI PEGVWNKKANRKVFGQWVSSSTLNMSEAGKGLLVKC CAYNSMGTSCETIFLNSPGPFPFIQDNISSGGGGSG AGVIAVIVVWIAIVAGIWLVISRKKRMAKYEKAE IKEMGEMHRELNA
835.	Мономер Fc -1 +c/-g	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
836.	Мономер Fc -2 +c/-g/delGK	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP
837 .	Мономер Fc -3 -c/+g	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P R EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
838 .	Мономер Fc -4 -c/+g/delGK	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P R EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP

- 123 040387

839.	Мономер Fc -5 -c/-g	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT Р Е VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNWYVD GVE VHNAKT К Р R EEQYGSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL РАРIЕКТIS KAKGQ PREPQVYT L Р Р S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
840.	Мономер Fc -6 -c/-g/delGK	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT Р Е VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNWYVD GVE VHNAKT К Р R EEQYGSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL РАРIЕКТISKAKGQ PREPQVYT L Р Р S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP
841.	Мономер Fc -7 +c/+g	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYNSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK
842 .	Мономер Fc -8 +c/+g/delGK	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYNSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSP
843.	scFc-1	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNA KTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
844 .	scFc-2	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P C EEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG GGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT KPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KAL PAPIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSP

- 124 040387

845.	scFc-3	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT Р Е VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNWYVD GVEVHNAKT К Р R EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL РАРIЕКТIS KAKGQ PREPQVYT L Р Р S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT Р Е VT С VWD VS Н Е D Р Е VK FNWYVD GVE VHNA KTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
846.	scFc-4	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT Р Е VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNWYVD GVE VHNAKT К Р R EEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL РАРIЕКТIS KAKGQ PREPQVYT L Р Р S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG GGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KAL PAPIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSP
847 .	scFc-5	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P R EEQYGSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNA KTKPREEQYGSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
848 .	scFc-6	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P R EEQYGSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL PAPIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG GGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT KPREEQYGSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KAL PAPIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSP

- 125 040387

849.	scFc-7	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT Р Е VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNWYVD GVEVHNAKT К Р С EEQYNSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL РАРIЕКТISKAKGQ PREPQVYT L Р Р S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MI S RT Р Е VT С VWD VS Н Е D Р Е VK FNWYVD GVE VHNA KTKPCEEQYNSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA LHNHYTQKSLSLSPGK
850.	scFc-8	Искусственная последовательность	DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT Р Е VT С VWD VS Η Е D Р Е VK FNWYVD GVE VHNAKT К Р С EEQYNSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL РАРIЕКТISKAKGQ PREPQVYT L Р Р S REEMT KNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGG GGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI S RT P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT KPCEEQYNSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSP
851.	Пептидный линкер	Линкер (G4S ) 4	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
852 .	Пептидный линкер	Линкер (G4S ) 5	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
853.	Пептидный линкер	Линкер (G4S ) 6	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
854 .	Пептидный линкер	Линкер (G4S ) 7	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
855.	Пептидный линкер	Линкер (G4S ) 8	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGS

- 126 040387

856.	FL_16xCD3scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSVSASVGDRVTITCRASQDIRYDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNFYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNWYVD GVEVHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQ PREP QVYT L P P S RE EMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
857 .	FL_16xCD3scFc delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLRNARMAV SWIRQPPGKTLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GYFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSVSASVGDRVTITCRASQDIRYDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNFYPLTFGGGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQ PREP QVYT L P P S RE EMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 127 040387

858 .	FL_23xCD3scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGYDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLIISS LQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNWYVD GVEVHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWDVS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
859.	FL_23xCD3scFc delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTVSGFSFRNARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGYDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLIISS LQPEDFATYYCLQHNSFPWTFGQGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 128 040387

860.	FL_36xCD3scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNWYVD GVEVHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
861.	FL_36xCD3scFc delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 129 040387

862 .	FL_39_xCD3scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNWYVD GVEVHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWDVS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
863.	FL_39_xCD3scFc delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKNRLTIS KDSSKTQWLTMTNVDPVDTATYYCARIVGYGSGWY GFFDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 130 040387

864 .	FL_42_xCD3scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
865.	FL_42_xCD3scFc delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPALVKPTETLTLTCTLSGFSLNNARMAV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTMTNMDPEDTATYYCARIVGYGTGWY GFFDYWGQGILVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 131 040387

866.	EL_46_CCxCD 3-scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTESGESLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDT S KNQ WLTMTNMD PVDTATYYCARMVGYGS GWY AYEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRESGSGSGTEETLTISS LQPEDEATYYCLQHNSYPLTEGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGETENKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRETI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNEGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKELAPGTPARESGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVEGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVELEPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK ENW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGEYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSEELYSKLTVDKSRWQQGNVESCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVELEPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK ENW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGEYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSEELYSKLTVDKSRWQQGNVESCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
867 .	EL_46_CCxCD 3scEc delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPVLVKPTQTLTLTCTESGESLSNARMGV SWIRQPPGKCLEWLALIYWNDDKRYSPSLKSRLTIT KDT S KNQWLTMTNMD PVDTATYYCARMVGYGS GWY AYEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRESGSGSGTEETLTISS LQPEDEATYYCLQHNSYPLTEGCGTKVEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGETENKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRETI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNEGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKELAPGTPARESGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVEGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVELEPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK ENW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTIS KAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGEYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSEELYSKLTVDKSRWQQGNVESCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVELEPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK ENW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGEYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSEELYSKLTVDKSRWQQGNVESCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 132 040387

868.	FL_52_CCxCD 3-scFc	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ kpgqaprgliggtkflapgtparfsgsllggkaa.lt LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMIS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGK
869.	FL_52_CCxCD 3scFc_delGK	Биспецифическая молекула HLE	QVTLKESGPTLVKPTETLTLTCTFSGFSLRYARMGV SWIRQPPGKCLEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTIS KDTSKSQWLTLTNMDPVDTATYFCARMPEYSSGWS GAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMT QSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNDLAWYQQKPG KAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISS LQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGCGTKLEIKSGGGGS EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNKYAMNW VRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTI SRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSY ISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQTW TQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYPNWVQQ KPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGGKAALT LSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLTVLGGG GDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISR T P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAKT К P CEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKA L PАРIEKTISKAKGQ PREPQVYT L P P S REEMT KNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM IS RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHNAK TKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL HNHYTQKSLSLSPGK

- 133 -

Claims (19)

1. 870. FL_61xCD3scFc Биспецифическая молекула HLE QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYEGSNEFYAESVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMI S RT P E VT CVWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVT C VWD VS HEDPEVKFNW YVDG VEVHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGK EYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

   871. FL_61xCD3scFc_delGK Биспецифическая молекула HLE QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHW VRQAPGKGLEWVAVISYEGSNEFYAESVKGRFTISR DNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGEITMVRGV IGYYYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGS DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWY QQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFT LTISSLQPEDFATYYCLQHNSYPLTFGGGTKVEIKS GGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFNK YAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVK DRFTISRDDSKNTAYLQMNNLKTEDTAVYYCVRHGN FGNSYISYWAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGG SQTWTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTSGNYP NWVQQKPGQAPRGLIGGTKFLAPGTPARFSGSLLGG KAALTLSGVQPEDEAEYYCVLWYSNRWVFGGGTKLT VLGGGGDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMI S RT P E VT C VWD VS Η E D P E VK FNW YVD GVE VHN AKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSGGGGSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVT C VWD VS HEDPEVKFNW YVD GVE VHNAKTKPCEEQYGSTYRCVSVLTVLHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYTQKSLSLSPGK

   ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Конструкция биспецифического антитела, содержащая первый связывающий домен, который связывается с FLT3 человека на поверхности мишеневой клетки, и второй связывающий домен, который связывается с CD3 человека на поверхности Т-клетки, где первый связывающий домен связывается с эпитопом FLT3, который содержится в участке, показанном как SEQ ID NO: 819, и содержит область VH, содержащую CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, и содержит область VL, содержащую CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, выбранные из группы, состоящей из

   - 134 040387

   SEQ ID NO:151-156,

   SEQ ID NO:181-186,

   SEQ ID NO:211-216,

   SEQ ID NO:241-246,

   SEQ ID NO:271-276,

   SEQ ID N0:301-306,

   SEQ ID NO:331-336,

   SEQ ID NO:361-366,

   SEQ ID NO:391-396,

   SEQ ID NO:421-426,

   SEQ ID NO:451-456,

   SEQ ID NO:481-486,

   SEQ ID NO:511-516,

   SEQ ID NO:541-546,

   SEQ ID NO:571-576,

   SEQ ID NO:601-606,

   SEQ ID NO:631-636,

   SEQ ID NO:661-666,

   SEQ ID NO:721-726,

   SEQ ID NO:161-166,

   SEQ ID NO:191-196,

   SEQ ID NO:221-226,

   SEQ ID NO:251-256,

   SEQ ID NO:281-286,

   SEQ ID NO:311-316,

   SEQ ID NO:341-346,

   SEQ ID NO:371-376,

   SEQ ID N0:401-406,

   SEQ ID NO:431-436,

   SEQ ID NO:461-466,

   SEQ ID NO:491-496,

   SEQ ID NO:521-526,

   SEQ ID NO:551-556,

   SEQ ID NO:581-586,

   SEQ ID NO:611-616,

   SEQ ID NO:641-646,

   SEQ ID N0:701-706,

   SEQ ID NO:731-736

   SEQ ID NO:171-176, SEQ ID N0:201-206, SEQ ID NO:231-236, SEQ ID NO:261-266, SEQ ID NO:291-296, SEQ ID NO:321-326, SEQ ID NO:351-356, SEQ ID NO:381-386, SEQ ID NO:411-416, SEQ ID NO:441-446, SEQ ID NO:471-476, SEQ ID N0:501-506, SEQ ID NO:531-536, SEQ ID NO:561-566, SEQ ID NO:591-596, SEQ ID NO:621-626, SEQ ID NO:651-656, SEQ ID NO:711-716, : SEQ ID NO:741-746.
2. 2. Конструкция антитела по п.1, где первый связывающий домен связывается с FLT3 человека и ма кака.
3. 3. Конструкция антитела по п.1 или 2, где конструкция антитела имеет форму, выбранную из груп пы, состоящей из (scFv)₂, scFv-одиночный домена mAb, диател и олигомеров этих форм.
4. 4. Конструкция антитела по п.3, где первый связывающий домен содержит участок VH, выбранный из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:237, SEQ ID NO:277, SEQ ID NO:317, SEQ ID NO:357, SEQ ID NO:397, SEQ ID NO:437, SEQ ID NO:477, SEQ ID NO:517, SEQ ID NO:557, SEQ ID NO:597, SEQ ID NO:637, SEQ ID NO:707, SEQ ID NO:747.

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   SEQ ID

   NO:167, NO:207, NO:247, NO:287, NO:327, NO:367, NO:407, NO:447, NO:487, NO:527, NO:567, NO:607, NO:647, NO:717,

   SEQ ID NO:177,

   SEQ ID NO:217,

   SEQ ID NO:257,

   SEQ ID NO:297,

   SEQ ID NO:337,

   SEQ ID NO:377,

   SEQ ID NO:417,

   SEQ ID NO:457,

   SEQ ID NO:497,

   SEQ ID NO:537,

   SEQ ID NO:577,

   SEQ ID NO:617,

   SEQ ID NO:657,

   SEQ ID NO:727,

   SEQ ID NO:187,

   SEQ ID NO:227,

   SEQ ID NO:267,

   SEQ ID NO:307,

   SEQ ID NO:347,

   SEQ ID NO:387,

   SEQ ID NO:427,

   SEQ ID NO:467,

   SEQ ID NO:507,

   SEQ ID NO:547,

   SEQ ID NO:587,

   SEQ ID NO:627,

   SEQ ID NO:667,

   SEQ ID NO:737 и
5. 5. Конструкция антитела по п.3 или 4, где первый связывающий домен содержит участок VL, выбранный из группы, состоящей из

   - 135 040387

   SEQ ID NO:158,

   SEQ ID NO:198,

   SEQ ID NO:238,

   SEQ ID NO:278,

   SEQ ID NO:318,

   SEQ ID NO:358,

   SEQ ID NO:398,

   SEQ ID NO:438,

   SEQ ID NO:478,

   SEQ ID NO:518,

   SEQ ID NO:558,

   SEQ ID NO:598,

   SEQ ID NO:638,

   SEQ ID NO:708, SEQ ID NO:748.

   SEQ ID NO:168,

   SEQ ID NO:208,

   SEQ ID NO:248,

   SEQ ID NO:288,

   SEQ ID NO:328,

   SEQ ID NO:368,

   SEQ ID NO:408,

   SEQ ID NO:448,

   SEQ ID NO:488,

   SEQ ID NO:528,

   SEQ ID NO:568,

   SEQ ID NO:608,

   SEQ ID NO:648,

   SEQ ID NO:718,

   SEQ ID NO:178,

   SEQ ID NO:218,

   SEQ ID NO:258,

   SEQ ID NO:298,

   SEQ ID NO:338,

   SEQ ID NO:378,

   SEQ ID NO:418,

   SEQ ID NO:458,

   SEQ ID NO:498,

   SEQ ID NO:538,

   SEQ ID NO:578,

   SEQ ID NO:618,

   SEQ ID NO:658,

   SEQ ID NO:728,

   SEQ ID NO:188,

   SEQ ID NO:228,

   SEQ ID NO:268,

   SEQ ID NO:308,

   SEQ ID NO:348,

   SEQ ID NO:388,

   SEQ ID NO:428,

   SEQ ID NO:468,

   SEQ ID NO:508,

   SEQ ID NO:548,

   SEQ ID NO:588,

   SEQ ID NO:628,

   SEQ ID NO:668,

   SEQ ID NO:738 и
6. 6. Конструкция антитела по любому из пп.3-5, где

   VH и участок VL, выбранные из группы, состоящей из пар участков VH и VL первый связывающий домен содержит участок

   SEQ ID NO:157+158,

   SEQ ID NO:187+188,

   SEQ ID NO:217+218,

   SEQ ID NO:247+248,

   SEQ ID NO:277+278,

   SEQ ID N0:307+308,

   SEQ ID NO:337+338,

   SEQ ID NO:367+368,

   SEQ ID NO:397+398,

   SEQ ID NO:427+428,

   SEQ ID NO:457+458,

   SEQ ID NO:487+488,

   SEQ ID NO:517+518,

   SEQ ID NO:547+548,

   SEQ ID NO:577+578,

   SEQ ID NO:607+608,

   SEQ ID NO:637+638,

   SEQ ID NO:667+668,

   SEQ ID NO:167+168,

   SEQ ID NO:197+198,

   SEQ ID NO:227+228,

   SEQ ID NO:257+258,

   SEQ ID NO:287+288,

   SEQ ID NO:317+318,

   SEQ ID NO:347+348,

   SEQ ID NO:377+378,

   SEQ ID N0:407+408,

   SEQ ID NO:437+438,

   SEQ ID NO:467+468,

   SEQ ID NO:497+498,

   SEQ ID NO:527+528,

   SEQ ID NO:557+558,

   SEQ ID NO:587+588,

   SEQ ID NO:617+618,

   SEQ ID NO:647+648,

   SEQ ID N0:707+708,

   SEQ ID NO:177+178, SEQ ID N0:207+208, SEQ ID NO:237+238, SEQ ID NO:267+268, SEQ ID NO:297+298, SEQ ID NO:327+328, SEQ ID NO:357+358, SEQ ID NO:387+388, SEQ ID NO:417+418, SEQ ID NO:447+448, SEQ ID NO:477+478, SEQ ID N0:507+508, SEQ ID NO:537+538, SEQ ID NO:567+568, SEQ ID NO:597+598, SEQ ID NO:627+628, SEQ ID NO:657+658, SEQ ID NO:717+718,

   SEQ ID NO:727+728,

   SEQ ID NO:737+738 и SEQ ID NO:747+748.
7. 7. Конструкция антитела по любому из пп.3-6, где первый связывающий домен содержит полипеп тид, выбранный из группы, состоящей из

   - 136 040387

   SEQ ID NO:159,

   SEQ ID NO:199,

   SEQ ID NO:239,

   SEQ ID NO:269,

   SEQ ID NO:299,

   SEQ ID NO:339,

   SEQ ID NO:369,

   SEQ ID NO:399,

   SEQ ID NO:439,

   SEQ ID NO:469,

   SEQ ID NO:499,

   SEQ ID NO:539,

   SEQ ID NO:569,

   SEQ ID NO:599,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:669,

   SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749.
8. 8. Конструкция антитела по любому из пп.1-7, где второй связывающий домен связывается с CD3 эпсилон человека и с CD3 эпсилон Callithrix jacchus, Saguinus Oedipus или Saimiri sciureus.
9. 9. Конструкция антитела по любому из пп.1-8, содержащая:

   (а) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца: полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:269, SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:299, SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:339, SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:369, SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:399, SEQ ID NO:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:439, SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:469, SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:499, SEQ ID NO:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:539, SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:599, SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:669, SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9; и полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46,

   SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82,

   SEQ ID NO:91, SEQ ID NQ:100, и SEQ ID NO:103; и

   b) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   - 137 040387

   SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:269, SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:299, SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:339, SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:369, SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:399, SEQ ID NQ:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:439, SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:469, SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:499, SEQ ID NQ:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:539, SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:599, SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:669, SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO: 1-9;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46,

   SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82,

   SEQ ID NO:91, SEQ ID NQ:100 и SEQ ID NO:103;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1-9;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 104-134; и (с) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца, полипептид с аминокислотной последовательностью QRFVTGHFGGLX₁PANG (SEQ ID NO: 135), где X₁ представляет собой Y или Н; и полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:269, SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:299, SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:339, SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:369, SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:399, SEQ ID NO:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:439, SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:469, SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:499, SEQ ID NO:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:539, SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:599, SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:669, SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   - 138 040387

   SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:100 и SEQ ID NO:103;

   полипептид с аминокислотной последовательностью QRFVTGHFGGLHPANG (SEQ ID NO: 137) или QRFCTGHFGGLHPCNG (SEQ ID NO: 139) и (d) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:44,

   SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:80,

   SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:98 и SEQ ID NO:101;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:158,

   SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:238,

   SEQ ID NO:278,

   SEQ ID NO:318,

   SEQ ID NO:358,

   SEQ ID NO:398,

   SEQ ID NO:438,

   SEQ ID NO:478,

   SEQ ID NO:518,

   SEQ ID NO:558,

   SEQ ID NO:598,

   SEQ ID NO:638,

   SEQ ID NO:708,

   SEQ ID NO:168, SEQ ID NO:208, SEQ ID NO:248,

   SEQ ID NO:288,

   SEQ ID NO:328,

   SEQ ID NO:368,

   SEQ ID NO:408,

   SEQ ID NO:448, SEQ ID NO:488, SEQ ID NO:528, SEQ ID NO:568, SEQ ID NO:608, SEQ ID NO:648, SEQ ID NO:718,

   SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:218, SEQ ID NO:258, SEQ ID NO:298, SEQ ID NO:338, SEQ ID NO:378, SEQ ID NO:418, SEQ ID NO:458, SEQ ID NO:498, SEQ ID NO:538, SEQ ID NO:578, SEQ ID NO:618, SEQ ID NO:658, SEQ ID NO:728,

   SEQ ID NO:188,

   SEQ ID NO:228, SEQ ID NO:268,

   SEQ ID NO:308,

   SEQ ID NO:348,

   SEQ ID NO:388,

   SEQ ID NO:428,

   SEQ ID NO:468,

   SEQ ID NO:508,

   SEQ ID NO:548,

   SEQ ID NO:588,

   SEQ ID NO:628,

   SEQ ID NO:668,

   SEQ ID NO:738 и

   SEQ ID NO:748, и остаток серина на С-конце;

   полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 140 и (е) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ

   ID

   NO:157

   SEQ

   ID

   NO:167

   SEQ

   ID

   NO:177

   SEQ

   ID

   NO:187

   SEQ

   ID

   NO:197

   SEQ

   ID

   NO:207

   SEQ

   ID

   NO:217

   SEQ

   ID

   NO:227

   SEQ

   ID

   NO:237

   SEQ

   ID

   NO:247

   SEQ

   ID

   NO:257

   SEQ

   ID

   NO:267

   SEQ

   ID

   NO:277

   SEQ

   ID

   NO:2 8 7

   SEQ

   ID

   NO:297

   SEQ

   ID

   NO:307

   SEQ

   ID

   NO:317

   SEQ

   ID

   NO:327

   SEQ

   ID

   NO:337

   SEQ

   ID

   NO:347

   SEQ

   ID

   NO:357

   SEQ

   ID

   NO:367

   SEQ

   ID

   NO:377

   SEQ

   ID

   NO:387

   SEQ

   ID

   NO:397

   SEQ

   ID

   NO:407

   SEQ

   ID

   NO:417

   SEQ

   ID

   NO:427

   SEQ

   ID

   NO:437

   SEQ

   ID

   NO:447

   SEQ

   ID

   NO:457

   SEQ

   ID

   NO:467

   SEQ

   ID

   NO:477

   SEQ

   ID

   NO:4 8 7

   SEQ

   ID

   NO:497

   SEQ

   ID

   NO:507

   SEQ

   ID

   NO:517

   SEQ

   ID

   NO:527

   SEQ

   ID

   NO:537

   SEQ

   ID

   NO:547

   SEQ

   ID

   NO:557

   SEQ

   ID

   NO:567

   SEQ

   ID

   NO:577

   SEQ

   ID

   NO:587

   SEQ

   ID

   NO:597

   SEQ

   ID

   NO:607

   SEQ

   ID

   NO:617

   SEQ

   ID

   NO:627

   SEQ

   ID

   NO:637

   SEQ

   ID

   NO:647

   SEQ

   ID

   NO:657

   SEQ

   ID

   NO:667

   SEQ

   ID

   NO:707

   SEQ

   ID

   NO :717

   SEQ

   ID

   NO:727

   SEQ

   ID

   NO:737 и

   SEQ ID NO:747;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   - 139 040387

   SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:45,

   SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:81,

   SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:99 и SEQ ID NO:102 и остаток серина на С-конце;

   полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 141;

   (f) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:44,

   SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:71, SEQ ID NO:80,

   SEQ ID NO:89, SEQ ID NO:98 и SEQ ID NO:101;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:158,

   SEQ ID NO:198,

   SEQ ID NO:238,

   SEQ ID NO:278,

   SEQ ID NO:318,

   SEQ ID NO:358,

   SEQ ID NO:398,

   SEQ ID NO:438,

   SEQ ID NO:478,

   SEQ ID NO:518,

   SEQ ID NO:558,

   SEQ ID NO:598,

   SEQ ID NO:638,

   SEQ ID NO:708,

   SEQ ID NO:168,

   SEQ ID NO:178, SEQ ID NO:188,

   SEQ ID NO:208, SEQ ID NO:218,

   SEQ ID NO:248, SEQ ID NO:258,

   SEQ ID NO:288, SEQ ID NO:298,

   SEQ ID NO:328, SEQ ID NO:338,

   SEQ ID NO:368, SEQ ID NO:378,

   SEQ ID NO:408, SEQ ID NO:418,

   SEQ ID NO:448, SEQ ID NO:458,

   SEQ ID NO:488, SEQ ID NO:498,

   SEQ ID NO:528, SEQ ID NO:538,

   SEQ ID NO:568, SEQ ID NO:578,

   SEQ ID NO:608, SEQ ID NO:618,

   SEQ ID NO:648, SEQ ID NO:658,

   SEQ ID NO:718, SEQ ID NO:728,

   SEQ ID NO:228,

   SEQ ID NO:268,

   SEQ ID NO:308,

   SEQ ID NO:348,

   SEQ ID NO:388,

   SEQ ID NO:428,

   SEQ ID NO:468,

   SEQ ID NO:508,

   SEQ ID NO:548,

   SEQ ID NO:588,

   SEQ ID NO:628,

   SEQ ID NO:668,

   SEQ ID NO:738 и

   SEQ ID NO:748;

   полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 142 и (g) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:157,

   SEQ ID NO:197,

   SEQ ID NO:237,

   SEQ ID NO:277,

   SEQ ID NO:317,

   SEQ ID NO:357,

   SEQ ID NO:397,

   SEQ ID NO:437,

   SEQ ID NO:477,

   SEQ ID NO:517,

   SEQ ID NO:557,

   SEQ ID NO:597,

   SEQ ID NO:637,

   SEQ ID NO:707,

   SEQ ID NO:167,

   SEQ ID NO:207,

   SEQ ID NO:247,

   SEQ ID NO:287,

   SEQ ID NO:327,

   SEQ ID NO:367,

   SEQ ID NO:407,

   SEQ ID NO:447,

   SEQ ID NO:487,

   SEQ ID NO:527,

   SEQ ID NO:567,

   SEQ ID NO:607,

   SEQ ID NO:647,

   SEQ ID NO:717,

   SEQ ID NO:177,

   SEQ ID NO:217,

   SEQ ID NO:257,

   SEQ ID NO:297,

   SEQ ID NO:337,

   SEQ ID NO:377,

   SEQ ID NO:417,

   SEQ ID NO:457,

   SEQ ID NO:497,

   SEQ ID NO:537,

   SEQ ID NO:577,

   SEQ ID NO:617,

   SEQ ID NO:657,

   SEQ ID NO:727,

   SEQ ID NO:187,

   SEQ ID NO:227,

   SEQ ID NO:267,

   SEQ ID NO:307,

   SEQ ID NO:347,

   SEQ ID NO:387,

   SEQ ID NO:427,

   SEQ ID NO:467,

   SEQ ID NO:507,

   SEQ ID NO:547,

   SEQ ID NO:587,

   SEQ ID NO:627,

   SEQ ID NO:667,

   SEQ ID NO:737 и

   SEQ ID NO:747;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 8;

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   - 140 040387

   SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:81, SEQ ID NO:90, SEQ ID NO:99 и SEQ ID NO:102 и остаток серина на С-конце;

   полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 143;

   (h) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:269, SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:299, SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:339, SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:369, SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:399, SEQ ID NO:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:439, SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:469, SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:499, SEQ ID NO:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:539, SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:599, SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:669, SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9; и полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46,

   SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82,

   SEQ ID NO:91, SEQ ID NO:100 и SEQ ID NO:103; и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 144 и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 145;

   (i) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:199, SEQ ID NQ:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:269, SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:299, SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:339, SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:369, SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:399, SEQ ID NO:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:439, SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:469, SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:499, SEQ ID NQ:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:539, SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:599, SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:669, SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749; и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 146 и

   - 141 040387 (j) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ

   ID

   NO:19,

   SEQ

   ID

   NO:28,

   SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46

   SEQ

   ID

   NO:55,

   SEQ

   ID

   NO:64,

   SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82

   SEQ

   ID

   NO:91,

   SEQ

   ID

   NO:100 и SEQ ID NO:103; и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 147;

   (k) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ

   ID

   NO:159

   SEQ

   ID

   NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189

   SEQ

   ID

   NO:199

   SEQ

   ID

   NO:209, SEQ ID NO:219 и

   SEQ

   ID

   NO:229

   SEQ

   ID

   NO :2 3 9

   SEQ

   ID

   NO:249 и SEQ ID NO:259

   SEQ

   ID

   NO:269

   SEQ

   ID

   NO:279 и SEQ ID NO:289

   SEQ

   ID

   NO:299

   SEQ

   ID

   NO:309, SEQ ID NO:319 и

   SEQ

   ID

   NO:329

   SEQ

   ID

   NO:339

   SEQ

   ID

   NO:349 и SEQ ID NO:359

   SEQ

   ID

   NO:369

   SEQ

   ID

   NO:379 и SEQ ID NO:389

   SEQ

   ID

   NO:399

   SEQ

   ID

   NO:409, SEQ ID NO:419 и

   SEQ

   ID

   NO:429

   SEQ

   ID

   NO :4 3 9

   SEQ

   ID

   NO:449 и SEQ ID NO:459

   SEQ

   ID

   NO:469

   SEQ

   ID

   NO:479 и SEQ ID NO:489

   SEQ

   ID

   NO:499

   SEQ

   ID

   NO:509, SEQ ID NO:519 и

   SEQ

   ID

   NO:529

   SEQ

   ID

   NO:539

   SEQ

   ID

   NO:549 и SEQ ID NO:559

   SEQ

   ID

   NO:569

   SEQ

   ID

   NO:579 и SEQ ID NO:589

   SEQ

   ID

   NO:599

   SEQ

   ID

   NO:609

   SEQ ID NO:619 и

   SEQ

   ID

   NO:629

   SEQ

   ID

   NO:639

   SEQ

   ID

   NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ

   ID

   NO:669

   SEQ

   ID

   NO:709

   SEQ ID NO:719 и

   SEQ

   ID

   NO:729

   SEQ

   ID

   NO:739 и SEQ ID NO:749; и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 148 и (l) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ

   ID

   NO: 19

   SEQ

   ID

   NO:28,

   SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46

   SEQ

   ID

   NO: 55

   SEQ

   ID

   NO:64,

   SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82

   SEQ

   ID

   NO: 91

   SEQ

   ID

   NO:100 и SEQ ID NO:103; и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 149 или (m) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ

   ID

   NO:159,

   SEQ

   ID

   NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ

   ID

   NO:199,

   SEQ

   ID

   NO:209, SEQ ID NO:219 и

   SEQ

   ID

   NO:229,

   SEQ

   ID

   NO:239,

   SEQ

   ID

   NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ

   ID

   NO:269,

   SEQ

   ID

   NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ

   ID

   NO:299,

   SEQ

   ID

   NO:309, SEQ ID NO:319 и

   SEQ

   ID

   NO:329,

   SEQ

   ID

   NO:339,

   SEQ

   ID

   NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ

   ID

   NO:369,

   SEQ

   ID

   NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ

   ID

   NO:399,

   SEQ

   ID

   NO:409, SEQ ID NO:419 и

   SEQ

   ID

   NO:429,

   SEQ

   ID

   NO:439,

   SEQ

   ID

   NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ

   ID

   NO:469,

   SEQ

   ID

   NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ

   ID

   NO:499,

   SEQ

   ID

   NO:509, SEQ ID NO:519 и

   SEQ

   ID

   NO:529,

   SEQ

   ID

   NO:539,

   SEQ

   ID

   NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ

   ID

   NO:569,

   SEQ

   ID

   NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ

   ID

   NO:599,

   SEQ

   ID

   NO:609, SEQ ID NO:619 и

   SEQ

   ID

   NO:629,

   SEQ

   ID

   NO:639,

   SEQ

   ID

   NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ

   ID

   NO:669,

   SEQ

   ID

   NO:709, SEQ ID NO:719 и

   SEQ

   ID

   NO:729,

   SEQ

   ID

   NO:739 и SEQ ID NO:74 9;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   - 142 040387

   SEQ ID NO: 1-9; и полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:46,

   SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:82,

   SEQ ID NO:91, SEQ ID NQ:100 и SEQ ID NO:103; и полипептид с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 150;

   (n) полипептид, содержащий в следующем порядке, начиная с N-конца:

   полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из

   SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:169, SEQ ID NO:179, SEQ ID NO:189,

   SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:219 и SEQ ID NO:229,

   SEQ ID NO:239, SEQ ID NO:249 и SEQ ID NO:259,

   SEQ ID NO:269, SEQ ID NO:279 и SEQ ID NO:289,

   SEQ ID NO:299, SEQ ID NO:309, SEQ ID NO:319 и SEQ ID NO:329,

   SEQ ID NO:339, SEQ ID NO:349 и SEQ ID NO:359,

   SEQ ID NO:369, SEQ ID NO:379 и SEQ ID NO:389,

   SEQ ID NO:399, SEQ ID NO:409, SEQ ID NO:419 и SEQ ID NO:429,

   SEQ ID NO:439, SEQ ID NO:449 и SEQ ID NO:459,

   SEQ ID NO:469, SEQ ID NO:479 и SEQ ID NO:489,

   SEQ ID NO:499, SEQ ID NO:509, SEQ ID NO:519 и SEQ ID NO:529,

   SEQ ID NO:539, SEQ ID NO:549 и SEQ ID NO:559,

   SEQ ID NO:569, SEQ ID NO:579 и SEQ ID NO:589,

   SEQ ID NO:599, SEQ ID NO:609, SEQ ID NO:619 и SEQ ID NO:629,

   SEQ ID NO:639, SEQ ID NO:649 и SEQ ID NO:659,

   SEQ ID NO:669, SEQ ID NO:709, SEQ ID NO:719 и SEQ ID NO:729,

   SEQ ID NO:739 и SEQ ID NO:749;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9; и полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 100 и SEQ ID NO: 103;

   пептидный линкер с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-9; и третий домен с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 843-850.
10. 10. Конструкция антитела по п.9, где полипептид имеет His-tag с последовательностью SEQ ID NO: 10.
11. 11. Конструкция антитела по любому из пп.1-10, содержащая или состоящая из полипептида с любой последовательностью из SEQ ID NO: 856-869.
12. 12. Конструкция антитела по любому из пп.1-11, где связывание первого связывающего домена с FLT3 человека уменьшено благодаря FLT3-лиганду на <25%, предпочтительно на <20%, более предпочтительно на <15%, еще более предпочтительно на <10%, даже еще более предпочтительно на <8%, более предпочтительно на <6% и наиболее предпочтительно на <2%.
13. 13. Полинуклеотид, кодирующий конструкцию антитела по любому из предыдущих пунктов.
14. 14. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п.13.
15. 15. Клетка-хозяин для продукции конструкции антитела по любому из пп.1-12, где клетка трансформирована или трансфицирована полинуклеотидом по п.13 или вектором по п.14.
16. 16. Способ получения конструкции антитела по любому из пп.1-12, включающий культивирование клетки-хозяина по п.15, в условиях, позволяющих экспрессию конструкции антитела по пп.1-12, и вос становление конструкции антитела из культуры.
17. 17. Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит конструкцию антитела по любому из пп.1-12 или полученную способом по п.16.
18. 18. Применение конструкции антитела по любому из пп.1-12 для профилактики, лечения или облегчения онкологических заболеваний крови или злокачественных новообразований.
19. 19. Применение конструкции антитела, полученной способом по п.16 для профилактики, лечения или облегчения онкологических заболеваний крови или злокачественных новообразований.

    - 143 -