EA023387B1 - РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pFK3, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО ПЕПТИДА RL3, ЯВЛЯЮЩЕГОСЯ АНАЛОГОМ ФРАГМЕНТА КАППА-КАЗЕИНА ЧЕЛОВЕКА, РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI XL1-Blue/pFK3 И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПЕПТИД RL3 - АНАЛОГ ФРАГМЕНТА КАППА-КАЗЕИНА ЧЕЛОВЕКА, ОБЛАДАЮЩИЙ АПОПТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПО ОТНОШЕНИЮ К РАКОВЫМ КЛЕТКАМ - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к рекомбинантной плазмидной ДНК, обеспечивающей увеличенный выход рекомбинантного пептида RL3, содержащего фрагмент каппа-казеина человека, рекомбинантному штамму Escherichia coli (депонированному в КЭМТК ИХБФМ СО РАН под номером ЭМТК 1346), который продуцирует с увеличенным выходом рекомбинантный пептид RL3 - аналог каппа-казенина человека, и рекомбинантному пептиду RL3, обладающему увеличенной апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, который состоит из трех компонентов: N-концевой полигистидиновой последовательности MRGSHHHHHHGS, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о. Изобретение может быть использовано в биотехнологии.

Description

(57) Изобретение относится к рекомбинантной плазмидной ДНК, обеспечивающей увеличенный выход рекомбинантного пептида КЬЗ, содержащего фрагмент каппа-казеина человека, рекомбинантному штамму ЕксйепсЫа сой (депонированному в КЭМТК ИХБФМ СО РАН под номером ЭМТК 1346), который продуцирует с увеличенным выходом рекомбинантный пептид КЕЗ - аналог каппаказенина человека, и рекомбинантному пептиду КЕЗ, обладающему увеличенной апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, который состоит из трех компонентов: Ν-концевой полигистидиновой последовательности МКС8ННННННС8, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о. Изобретение может быть использовано в биотехнологии.

Изобретение относится к рекомбинантной плазмидной ДНК с фрагментами каппа-казеина человека, обеспечивающей синтез рекомбинантного пептида - аналога каппа-казеина человека, обладающего апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, рекомбинантному штамму ЕксйейсЫа сой - продуценту пептида - аналога каппа-казенина человека, обладающего апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, и рекомбинантному пептиду - аналогу каппа-казенина человека, обладающему апоптотической активностью по отношению к опухолевым клеткам, и может быть использовано в биотехнологии, в частности в генетической и белковой инженерии.

Одним из возможных перспективных подходов для эффективного лечения опухолей могут стать препараты, способные избирательно вызывать апоптоз в раковых клетках, не повреждая здоровые клетки организма.

Claims (2)

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК рРК3, обеспечивающая увеличенный выход рекомбинантного пептида КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2, который является аналогом фрагмента каппа-казеина человека и состоит из трех компонентов: Ν-концевой полигистидиновой последовательности МКОБННННННОБ, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о.; и который обладает увеличенной апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам, причем указанная ДНК характеризуется молекулярной массой 2,41 МИа и размером 3647 п.о. и содержит в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг. 2, следующие элементы:

1) фрагмент Ват Н1/Нт 6Ш размером 258 п.о., имеющий нуклеотидную последовательность БЕЦ ГО N0: 1, которая кодирует указанный пептид КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2;

2) фрагмент плазмидного вектора рОЕ30. обеспечивающий эффективную экспрессию фрагмента каппа-казеина человека и содержащий:

а) сайт инициации репликации плазмиды рВК322;

б) промотор бактериофага Т5;

в) генетический маркер АМРг - ген резистентности к ампициллину (ген β-лактамазы), определяющий устойчивость к ампициллину при трансформации ЕксйепсЫа сой;

г) уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами, имеющими следующие координаты: Ауа I (2), Есо К1 (89), Ват Н1 (146), Нт 6Ш (374), Να> I (1047), Ара Ь1 (1579), Ара Ь1 (2077), Ара Ь1 (3323).

2. Рекомбинантный штамм бактерии ЕксйепсЫа сой ХЬ1-В1ие/рРК3, продуцирующий с увеличенным выходом рекомбинантный пептид КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2, причем штамм содержит рекомбинантную плазмидную ДНК рРК3 по п.1 и депонирован в КЭМТК ИХБФМ СО РАН под номером ЭМТК 1346.

3. Рекомбинантный пептид КЕ3 с аминокислотной последовательностью БЕЦ ГО N0: 2, который является аналогом фрагмента каппа-казеина человека, имеет молекулярную массу около 10 кДа и состоит из трех компонентов: ^концевой полигистидиновой последовательности МКОБННННННОБ, остатка метионина, введенного в конструкцию для возможности отщепления полигистидиновой последовательности, и фрагмента каппа-казеина человека с 31 по 102 а.о., и который обладает увеличенной апоптотической активностью по отношению к раковым клеткам.

- 7 023387

аСд ада дда Сед сас сас саС сас сас сас дда Ссс аСд саС дад 45 МеС Агд С1у Зег Нгз Нгз Нгз Нгз Нгз Нгз С1у Зег МеС НЬз СЬи 1 5 10 15 ааС даС даа ада сса ССс СаС сад ааа аса дсС сса СаС дСс сса 90 Азп Азр С1и Агд Рго РЬе Туг СЬп Ьуз ТЬг АЬа Рго Туг Уа1 Рго 20 25 30 аСд СаС СаС дед сса ааС аде СаС ссС СаС сас дда асе аас ССд 135 МеС Туг Туг Уа1 Рго Азп Зег Туг Рго Туг Туг С1у ТЬг Азп Ьеи 35 40 45 Сас саа сдС ада сса дсС аСа дса аСС ааС ааС сса СаС дед ссс 180 Туг СЬп Агд Агд Рго А1а 11е А1а Не Азп Азп Рго Туг Уа1 Рго 50 55 60 сдс аса СаС СаС дса аас сса дсс дса дСС адд сса саС дсс саа 225 Агд ТЬг Туг Туг АЬа Азп Рго АЬа Уа1 Уа1 Агд Рго Нгз А1а С1п 65 70 75 аСС ссС сад едд саа Сас сСд сса ааС аде Саа 258 11е Рго С1п Агд СЬп Туг Ьеи Рго Азп Зег ★ 80 35