EA015684B1 - Дансилгидразид 24-эпикастастерона в качестве меченого антигена для иммунохимического анализа (24r)-метилбрассиностероидов - Google Patents
Дансилгидразид 24-эпикастастерона в качестве меченого антигена для иммунохимического анализа (24r)-метилбрассиностероидов Download PDFInfo
- Publication number
- EA015684B1 EA015684B1 EA200801655A EA200801655A EA015684B1 EA 015684 B1 EA015684 B1 EA 015684B1 EA 200801655 A EA200801655 A EA 200801655A EA 200801655 A EA200801655 A EA 200801655A EA 015684 B1 EA015684 B1 EA 015684B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- epicastasterone
- dansylhydrazide
- methylbrassinosteroids
- labeled antigen
- conjugate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области иммунохимического анализа фитогормонов брассиностероидов, а именно к новому химическому соединению - дансилгидразиду 24-эпикастастерона. Задачей настоящего изобретения является конъюгат 24-эпикастастерона с дансилгидразином, который может быть использован в качестве меченого антигена в иммунофлуоресцентном определении (24R)-метилбрассиностероидов. Поставленная цель достигается заявляемым конъюгатом 24-эпикастастерона с дансилгидразином, который получают взаимодействием 24-эпикастастерона в смеси диметилформамида и уксусной кислоты с дансилгидразином и последующим выделением целевого конъюгата методом колоночной хроматографии.
Description
Изобретение относится к области иммунохимического анализа фитогормонов брассиностероидов, а именно к новому химическому соединению - дансилгидразиду 24-эпикастастерона формулы I он
который может быть использован в качестве меченого антигена в аналитической тест-системе для иммунофлуоресцентного определения (24К)-метилбрассиностероидов.
Брассиностероиды - природные низкомолекулярные биорегуляторы, которые являются гормонами растений [1]. Они присутствуют во всех растительных объектах и обладают ростмодулирующим и адаптогенным действием. Содержание брассиностероидов в растениях очень низко - 105-10-9% и менее. В очень малых концентрациях они проявляют и свое биологическое действие. Установлено, например, что при обработке различных сельскохозяйственных культур брассиностероидами в дозах 5-20 мг на гектар посевов наблюдается заметный ростостимулирующий и адаптогенный эффект, приводящий к увеличению урожая, повышению качества продукции и устойчивости растений к неблагоприятным условиям и болезням [2-7]. Эти свойства брассиностероидов делают их привлекательными в качестве основы для агропрепаратов. Одним из наиболее известных в настоящее время является препарат эпин, действующим веществом которого стал фитогормон 24-эпибрассинолид. Доступность последнего (как и других брассиностероидов) может обеспечить только химический синтез.
Все вышеизложенное ставит на повестку дня разработку методов анализа брассиностероидов, которые должны обладать высокой чувствительностью, избирательностью, простотой в исполнении и быть доступными. Развитие в последнее время иммунофлуоресцентных методов анализа требует наличия как иммуногена, так и иммунофлуоресцентной метки, в качестве которой может выступать субстрат, меченный дансилгидразином.
В настоящее время неизвестны конъюгаты брассиностероидов с дансилгидразином (или другой флуоресцентной меткой), которые были получены и могли бы быть использованы в иммуноаналитических системах для определения 24-эпикастастерона и эпибрассинолида.
Целью изобретения является ранее неизвестный конъюгат 24-эпикастастерона и дансилгидразина дансилгидразид 24-эпикастастерона формулы I, который может быть использован в качестве меченого антигена в иммунофлуоресцентном анализе (24В)-метилбрассиностероидов.
Поставленная цель достигается заявляемым конъюгатом I, который получают взаимодействием 24эпикастастерона с дансилгидразином в смеси диметилформамида и уксусной кислоты.
Сущность изобретения подтверждается примерами конкретного выполнения.
Пример 1. Эпикастастерон (0,051 г, 0,11 моль) и дансилгидразин (0,0318 г, 0,12 моль) растворяют в смеси диметилформамида и уксусной кислоты (1 мл, 1/1), затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре до исчезновения исходного соединения (контроль по ТСХ). Растворитель удаляют в вакууме, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем. Выход конъюгата I составляет 77%. Т. пл. 160-163°С (ЕЮАс-гексан). Спектр '11 ΝΜΒ: Ή-ЯМР (δ, м.д.): 0.50 (8, 1Н, Н18), 0.84-0.97 (т, 15Н, Н19, Н21, Н-26, Н27, Н-28), 2.41 (άά, 1Н, 1= 3.6, 13.7 Гц, Н-5), 2.88 (8, 6Н, -ΝΜ^), 3.41 (т, 1Н), 3.54 (т, 1Н), 3.69 (т, 1Н), 3.90 (т, 1Н), 7.15 (ά, 1Н, 1 = 7.5 Гц), 7.55 (т, 3Н), 8.30-8.36 (т, 2Н), 8.54 (ά, 1Н, 1=8.4Гц). 13С-ЯМР (δ, м.д.): 11.3, 12.7, 12.8, 13.2, 17.6, 22.2, 22.7, 23.7, 25.0, 28.1, 28.9, 29.6, 33.1, 33.2, 37.5, 40.8, 40.9, 41.7, 42.8, 44.0, 45.9, 46.1, 54.2, 55.4, 57.7, 69.3, 69.8, 73.5, 77.4, 116.5, 120.7, 124.4, 129.4, 131.1, 131.2, 131.5, 132.0, 135.7, 153.0, 162.8.
Синтезированный дансилгидразид 24-эпикастастерона может быть использован в качестве меченого антигена для количественного определения (24В)-метилбрассиностероидов (24-эпибрассинолида и 24опикастастерона) методом иммунофлуоресцентного анализа, что подтверждается примером конкретного выполнения.
Пример 2. В качестве компонентов аналитической системы используют: антисыворотку к 24эпикастастерону, полученную согласно методу, описанному ранее [8]; заявляемый дансилгидразид 24эпикастастерона; калибровочные пробы - буферные растворы с содержанием 24-эпибрассинолида 0 мкг/мл; 1 мкт/мл, 10 мкг/мл и 100 мкг/мл; буферный раствор для разведения дансилгидразида 24эпикастастерона; промывочный буферный раствор. Антитела к 24-эпибрассинолида иммобилизуют на внутренней поверхности 96-ти луночных микропланшетов, обычно использующихся в иммуноферментном анализе. Для проведения анализа в лунки планшета вносят по 0,05 мл калибровочных проб. Затем во все лунки вносят по 0,1 мл раствора дансилгидразида 24-эпикастастерона. Инкубируют смесь в течение 2 ч при 37°С. Затем содержимое лунок переносят в непрозрачные плашки (Отешет) для измерения флуоресценции. Флуоресцентные измерения проводят на приборе !пПпЦс Μ200 (Тесап, Австрия) при 20°С.
- 1 015684
Возбуждение люминесценции проводят при длине волны 340 нм. Спектры флюоресценции регистрируют в диапазоне 370-620 нм.
Интенсивность флуоресценции в калибровочных пробах составляет для 0 мкг/мл - 10 отн.ед., 1 мкг/мл - 50 отн.ед., 10 мкг/мл - 400 отн.ед., 100 мкг/мл - 1200 отн.ед., для аналитического образца 20 мкг/мл - 570 отн.ед. Таким образом, на основании сравнения интенсивности флуоресценции анализируемого образца и калибровочных проб можно установить концентрацию брассиностероида в анализируемом образце.
Приведенные результаты подтверждают возможность использования заявляемого дансилгидразида 24-эпикастастерона для количественного определения (24К)-метилбрассиностероидов с чувствительностью 0,5 мкг/мл.
Заявляемый дансилгидразид 24-эпикастастерона получается с высоким выходом, обеспечивает необходимую иммуногенность метки и позволяет проводить количественное определение (24К)метилбрассиностероидов методом иммунофлуоресцентного анализа. Он является устойчивым соединением и не обнаруживает признаков разложения, по меньшей мере, в течение нескольких месяцев при комнатной температуре. Для сравнения, используемый для аналогичных целей в иммуноферментном анализе в качестве меченого антигена конъюгат 24-эпибрассинолида с пероксидазой хрена отличается недостаточной стабильностью (хранение при -18°С) и многостадийностью синтеза [9].
Литература
1. Хрипач В.А., Лахвич Ф.А., Жабинский В.Н. Брассиностероиды. Минск: Навука ί тэхшка, 1993. 288 с.
2. Патент РБ № 2806 от 23.11.1995. Средство для снижения накопления радионуклидов растениями и способ его применения. / Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Литвиновская Р.П., Завадская М.И., Деева В.П., Веденеев А.П. // Оф. Бюл. Белгос-пат., 2000, N2 (26), с. 159.
3. Патент РБ № 3488 от 04.07.1996. Способ повышения питательной ценности картофеля. / Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Литвиновская Р.П., Завадская М.И., Савельева Е.А., Карась И.И. (Беларусь), Вакуленко В.В. (Россия). // Оф. Бюл. Белгос-пат., 2000, N3 (27), с.74.
4. Патент РБ № 3400 от 04.07.1996. Способ защиты картофеля от фитофтороза. / Хрипач В. А., Жабинский В.Н., Литвиновская Р.П., Завадская М.И., Савельева Е.А., Карась И.И., Кильчевский А.В., Титова С.Н. // Оф. Бюл. Бел-гос-пат., 2000, N2(25), с.75.
5. Патент РБ 5168. /Хрипач В.А., Литвиновская Р.П., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Волынец А.П., Прохорчик Р.А., Пшеничная Л. А., Манжелесова Н.Е., Морозик Г.В.// Оф. Бюл. НЦИС РБ, 2003 2(37), с.95.
6. Патент РБ 5212. Способ повышения урожайности льна и улучшения качества льноволокна. /Воскресенская Л.Г., Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Литвиновская Р.П. // Оф. Бюл. НЦИС РБ, 2003 2(37), с.93.
7. Патент РБ N5698. Способ размножения оздоровленного семенного материала картофеля. / Бобрик А.О., Хрипач В. А., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Литвиновская Р.П. // Оф.Бюл.НЦИС РБ, 2003 4(39).
8. Хрипач В.А., Свиридов О.В., Прядко А.Г., Литвиновская Р.П., Драч С.В., Матвеенцев В.Д., Новик Т.В., Михайлопуло К.И., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Аверькова М.А., Драченова О.А., Чащина Н.М. Биоорган. химия, 33 (2007) 371-378.
Claims (1)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯДансилгидразид 24-эпикастастерона формулы I в качестве меченого антигена для иммунофлуоресцентного определения (24Я)-метилбрассиностероидов.Евразийская патентная организация, ЕАПВРоссия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA200801655A EA015684B1 (ru) | 2008-06-10 | 2008-06-10 | Дансилгидразид 24-эпикастастерона в качестве меченого антигена для иммунохимического анализа (24r)-метилбрассиностероидов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA200801655A EA015684B1 (ru) | 2008-06-10 | 2008-06-10 | Дансилгидразид 24-эпикастастерона в качестве меченого антигена для иммунохимического анализа (24r)-метилбрассиностероидов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200801655A1 EA200801655A1 (ru) | 2010-02-26 |
| EA015684B1 true EA015684B1 (ru) | 2011-10-31 |
Family
ID=42041948
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200801655A EA015684B1 (ru) | 2008-06-10 | 2008-06-10 | Дансилгидразид 24-эпикастастерона в качестве меченого антигена для иммунохимического анализа (24r)-метилбрассиностероидов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA015684B1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4591650A (en) * | 1983-02-17 | 1986-05-27 | Schering Aktiengesellschaft | Hexanor-brassinolid-22-ethers |
| SU1433005A1 (ru) * | 1987-02-13 | 1991-12-30 | Институт биоорганической химии АН БССР | 2 @ ,3 @ ,22S,23S-Тетраокси-24S-этилхолест-4-ен-он, обладающий фиторостостимулирующей активностью |
| RU2114116C1 (ru) * | 1993-06-01 | 1998-06-27 | Тама Биокемикал Ко., Лтд. | Брассиностероидные производные и регулирующее рост растений средство |
| WO2006023073A1 (en) * | 2004-07-23 | 2006-03-02 | Drebsk Comptech, Inc. | Medical uses of 24-epibrassinolide |
-
2008
- 2008-06-10 EA EA200801655A patent/EA015684B1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4591650A (en) * | 1983-02-17 | 1986-05-27 | Schering Aktiengesellschaft | Hexanor-brassinolid-22-ethers |
| SU1433005A1 (ru) * | 1987-02-13 | 1991-12-30 | Институт биоорганической химии АН БССР | 2 @ ,3 @ ,22S,23S-Тетраокси-24S-этилхолест-4-ен-он, обладающий фиторостостимулирующей активностью |
| RU2114116C1 (ru) * | 1993-06-01 | 1998-06-27 | Тама Биокемикал Ко., Лтд. | Брассиностероидные производные и регулирующее рост растений средство |
| WO2006023073A1 (en) * | 2004-07-23 | 2006-03-02 | Drebsk Comptech, Inc. | Medical uses of 24-epibrassinolide |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA200801655A1 (ru) | 2010-02-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zeng et al. | Two-photon fluorescent probe for detection of exogenous and endogenous hydrogen persulfide and polysulfide in living organisms | |
| Zhang et al. | Sensitive and selective off–on rhodamine hydrazide fluorescent chemosensor for hypochlorous acid detection and bioimaging | |
| Yang et al. | BODIPY-based fluorescent probe for cysteine detection and its applications in food analysis, test strips and biological imaging | |
| US8143069B2 (en) | Fluorescent probe and method of measuring hypochlorite ion | |
| Zhang et al. | A selective fluorescent probe for thiols based on α, β-unsaturated acyl sulfonamide | |
| Huo et al. | A turn-on green fluorescent thiol probe based on the 1, 2-addition reaction and its application for bioimaging | |
| Opletalova et al. | Ring substituted 3-phenyl-1-(2-pyrazinyl)-2-propen-1-ones as potential photosynthesis-inhibiting, antifungal and antimycobacterial agents | |
| Song et al. | Development of an endoplasmic reticulum-targeting fluorescent probe for the imaging of polarity in living cells and tissues | |
| Yuan et al. | Reaction-based fluorescent probe for hydrogen sulfide with large signal-to-noise ratio in living cells and tissues | |
| Niu et al. | A novel colorimetric and ratiometric fluorescent probe for sensing SO 2 derivatives and their bio-imaging in living cells | |
| CN109836394B (zh) | 一种用于识别硫化氢的近红外荧光探针及其制备方法和应用 | |
| US11472825B2 (en) | Real-time fluorescence imaging sensor for measuring glutathione in organelle and preparation method therefor | |
| CN106220640A (zh) | 一类汞离子荧光探针及其制备方法和应用 | |
| US8409820B2 (en) | Kinase sensors | |
| He et al. | Two isomeric and distinguishable H 2 S fluorescence probes for monitoring spoilage of eggs and visualizing exogenous and endogenous H 2 S in living cells | |
| Monti et al. | Scalaradial, a dialdehyde‐containing marine metabolite that causes an unexpected noncovalent PLA2 inactivation | |
| CN110092773A (zh) | 一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN115340521B (zh) | 一种硫化氢化学发光探针及其制备方法和应用 | |
| Zhu et al. | A novel and effective benzo [d] thiazole-based fluorescent probe with dual recognition factors for highly sensitive and selective imaging of cysteine in vitro and in vivo | |
| Song et al. | A sensitive and selective red fluorescent probe for imaging of cysteine in living cells and animals | |
| Gao et al. | Fluorescent sensors based on [12] aneN3-modified BODIPY: Discrimination of different biological thiols in aqueous solution and living cells | |
| Agarwalla et al. | Fluorescent chemodosimeter for quantification of cystathionine-γ-synthase activity in plant extracts and imaging of endogenous biothiols | |
| Peng et al. | Hydrogen Sulfide Detection Using Nucleophilic Substitution–Cyclization-Based Fluorescent Probes | |
| Wang | Molecular engineering of an efficient iminocoumarin-based probe for practical sensing applications | |
| WO2014088512A1 (en) | Ratiometric fluorescent dye for the detection of glutathione in cell and tissue |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY RU |