EA008765B1

EA008765B1 - Антигриппозное средство

Info

Publication number: EA008765B1
Application number: EA200501621A
Authority: EA
Inventors: Евгений Вениаминович КУПСИН
Original assignee: Закрытое Акционерное Общество «Научно-Производственное Объединение "Антивирал"» (Зао «Нпо "Антивирал"»)
Priority date: 2004-11-22
Filing date: 2005-11-16
Publication date: 2007-08-31
Also published as: RU2004134082A; RU2286770C2; EA200501621A1

Abstract

Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения гриппа. Композиция на основе парацетамола, ремантадина, аскорбиновой кислоты, рутина, лоратадина и глюконата кальция представляет собой комплексный препарат для перорального приема. Изобретение является лекарственной формой длительного срока хранения и благодаря стабильности состава пригодно для промышленного производства в виде ГЛС (готового лекарственного средства). Стабильность композиции достигается тем, что при выпуске ГЛС в виде таблеток или капсул входящие в состав композиции ингредиенты разнесены в две разные капсулы или таблетки, которые при одновременном приеме обеспечивают лечебный терапевтический эффект. При выпуске ГЛС в виде порошка для приготовления раствора для питья стабильность его обеспечивается включением в порошок вспомогательных веществ, масса которых в 5 раз превышает массу композиции активных компонентов, т.е. действующих веществ. Предлагаемый состав композиции обладает действием на основные симптомы гриппа, обладает жаропонижающим, противовирусным, противовоспалительным, антиаллергическим, общеукрепляющим действием. Он также влияет на выработку организмом альфа-интерферона и гамма-интерферона. При лечении предлагаемым антигриппозным средством сроки лечения гриппа и ОРВИ сокращаются на 2-3 дня, а сама болезнь протекает без осложнений.

Description

Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения гриппа путем приема перорально композиции на основе известных лекарственных препаратов. Композиция представляет собой готовое лекарственное средство (ГЛС) с длительным сроком хранения при сохранении своей биологической активности и пригодна для промышленного производства.

Грипп - вирусное заболевание, имеющее массовый характер в период эпидемии, которое часто сопровождается осложнениями. Он характеризуется острым началом. Инкубационный период при гриппе А составляет от нескольких часов до 2-х суток, при гриппе В - до 3-х суток (Грипп. /Под. ред. Г.И. Карпухина, Лениздат, «Медицина», 1986).

Во время гриппа больной страдает от высокой температуры, головной боли, лихорадки, происходит общая интоксикация организма, поражаются слизистая оболочка дыхательных путей, нервная и сердечно-сосудистая системы. У больных отмечается появление мышечных и суставных болей, общая слабость и нарушение со стороны крови (лейкопения) и со стороны лимфатической системы (лимфопения).

Лечение гриппа осуществляется таким образом, чтобы предотвратить осложнения, одновременно облегчая течение гриппа (снижая высокую температуру, интоксикацию организма, головную боль и т.д.), активизируя борьбу организма с вирусной инфекцией.

Для этого в композициях для лечения гриппа используют жаропонижающие, противовоспалительные, противовирусные, антиаллергические, общеукрепляющие препараты.

При гриппе больному назначают для ликвидации симптоматических проявлений болезни такие препараты, как ацетилсалициловая кислота (Видаль. Лекарственные препараты в России./Справочник, 1999, Е-5), иные жаропонижающие и болеутоляющие средства.

В качестве антигистаминных препаратов назначают димедрол (М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М., 1987, т. 1, с. 309), супрастин (М.Д. Машковский, Лекарственные средства, М., т. 1, с. 316) и подобные препараты. Они предупреждают развитие вызываемого гистамином отека тканей, понижают токсичность гистамина, уменьшают проницаемость капилляров.

Лучшие результаты лечения гриппа получают при назначении больным комплексных препаратов, т.е. композиций, которые воздействуют на различные клинические проявления болезни одновременно.

Такие композиции удобны для приема во время болезни, так как в них содержатся разнонаправленные лекарственные компоненты.

Известна для лечения гриппа композиция «Колдрекс». Она состоит из парацетамола, фенилэфрина, кофеина, терпингидрата и аскорбиновой кислоты (Видаль. Лекарственные препараты в России./Справочник, 1999, Б-307).

В состав «Колдрекса» входит кофеин, который является психостимулятором, способным нарушать сон, а нарушение сна свойственно самому гриппу. В результате этот симптом усиливается при приеме «Колдрекса», что является недостатком данной композиции. Также неудачным является использование в композиции фенилэфрина, который способствует нарушению гемодинамики в таких органах, как легкие, головной мозг.

Прототипом предлагаемого изобретения является композиция, состоящая из ацетилсалициловой кислоты, аскорбиновой кислоты, рутина, димедрола и солей кальция. Данная смесь препаратов была предложена в качестве аптечной прописи (Грипп./Под ред. Г.И. Карпухина. Лениздат, «Медицина», 1986, с. 285). Ее недостатком является невысокая анальгетическая активность.

В процессе лечения таким составом препаратов сохранялись головная боль, ломота в суставах, температурная реакция организма. Длительный прием такого лекарственного средства из-за присутствия в композиции ацетилсалициловой кислоты (более 50%) может вызвать обострение язвенной болезни желудка или двенадцатиперстной кишки.

Целью предлагаемого изобретения является создание такой композиции для лечения гриппа, которая облегчает течение болезни и уменьшает ее проявления (угнетение сознания, головная боль, тянущие боли в конечностях, потеря вкуса и обоняния, замедление пульса, чувство раздражения в трахее и гортани и т. д.), а также обладает противовирусной активностью и антитоксическим действием.

Композиция должна быть пригодна для промышленного выпуска и обладать стабильностью в течение длительного времени.

Сущностью предлагаемого изобретения является сочетанное использование парацетамола и ремантадина в композиции, т. е. симптоматического препарата с препаратом с противовирусной активностью, и одновременное использование в лекарственной форме таких препаратов, как парацетамол, ремантадин, аскорбиновая кислота, лоратадин, рутин, глюконат кальция. За счет присутствия в композиции парацетамола удалось снизить разовую дозу ремантадина для взрослых со 100 до 50 мг, получая высокий лекарственный эффект композиции.

При стремлении современной медицины работать с готовыми лекарственными средствами, а не с прописями для аптек, возникает необходимость создавать составы для промышленного производства, стабильные при хранении и эффективные при лечении болезни.

Предлагаемый по изобретению состав опробован в таких формах выпуска фармацевтической продукции, как капсулы, таблетки, растворимые в воде порошки для приготовления раствора для принятия внутрь по схеме лечения, т. е. питья-лекарства.

- 1 008765

Для стабилизации композиции при ее промышленном производстве в виде капсул или таблеток составляющие разнесены в 2 капсулы или 2 таблетки, которые предназначены для одновременного приема и которые при совместном приеме дают высокий сочетанный лечебный эффект.

При приготовлении порошка стабилизацию обеспечивают вспомогательные вещества, которых в порошке по массе в 5 раз больше, чем композиции, состоящей из лекарственных препаратов и обеспечивающей лечебный эффект. Главную роль в стабилизации играет лактоза (молочный сахар), которую в фармпроизводстве часто используют для этих целей. Активные компоненты разнесены по массе вспомогательных веществ и при хранении не влияют друг на друга.

Комбинированный препарат обладает противовирусным и интерфероногенным, жаропонижающим, противовоспалительным, обезболивающим, антигистаминным, ангиопротекторным действием.

Выбор компонентов для композиции был основан на известных фармакологических свойствах, однако лечебный эффект превзошел ожидания.

По-видимому, сочетание парацетамола с ремантадином усиливает интерфероногенное действие, за счет чего в композиции стало возможным уменьшить разовую дозу ремантадина до 50 мг при общей дневной дозе 100-150 мг. Сочетание компонентов в композиции позволяет уже в первые сутки лечения облегчить состояние больного, сократив срок болезни на 2-3 дня, т.е. курс лечения в течение 5 дней дает высокий процент излечившихся больных, осложнения болезни не отмечены.

Входящие в состав композиции препараты подбирали с учетом их биологической активности. Ремантадин (римантадин) блокирует включение вируса в клетку-хозяина, ингибирует высвобождение вирусного генома в клетке. Вирус гриппа обладает пневмотропными свойствами, чем отчасти объясняется частота гриппозных пневмоний. За счет присутствия в организме вируса гриппа резко снижается сопротивляемость организма к различным вторичным инфекциям (пневмококк, стрептококк, палочка Пфейфера).

Ремантадин обладает противовирусной активностью в отношении вируса гриппа типа А (особенно А2), уменьшает токсические проявления, вызванные вирусом гриппа типа В и вирусами, вызывающими острую респираторную вирусную инфекцию (ОРВИ). Он обладает выраженными интерфероногенными свойствами, повышая общее содержание интерферонов и особенно гамма-интерферона в крови.

Лечебная доза для взрослых в чистом виде составляет 100 мг 3 раза в сутки или 300 мг одноразово.

Включив ремантадин в композицию в дозе 50 мг на разовый прием, при общей суточной дозе 100-150 мг, получили очень высокий лечебный эффект, когда в антигриппозной композиции одновременно присутствует парацетамол.

Парацетамол, как и ремантадин, быстро и достаточно полно всасывается в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ). Обычно его назначают в качестве болеутоляющего, жаропонижающего и противовоспалительного средства. Он ингибирует синтез простогландинов (ПГ) и снижает возбудимость центра терморегуляции гипоталамуса.

Парацетамол в композициях с ремантадином и используемыми по изобретению составляющими композицию препаратами ранее в ГЛС не применяли. Эффект от совместного использования был неожиданным.

Разовая доза парацетамола при приеме его в чистом виде (вне композиции) составляет для взрослых 200-400 мг, прием 3 раза в сутки. Максимальная суточная доза составляет 1500 мг.

В предлагаемой композиции его суточная доза составляет 700-1100 мг при приеме композиции 2-3 раза в сутки.

Известно, что грипп сопровождается мощной интоксикацией организма, такими осложнениями, как воспаление придаточных полостей, воспаление среднего уха, катаральная пневмония аспирационноателектанического типа.

У парацетамола вне композиционного приема противовоспалительная активность слабая, он значительно уступает салицилатам, производным пиразолона. Однако в сочетании с ремантадином, с глюконатом кальция (100 мг на разовый прием), с антигистаминным препаратом лоратадином (3 мг на разовый прием), аскорбиновой кислотой (300 мг на разовый прием) и рутином (рутозидом) (20 мг на разовый прием) противовоспалительная активность парацетамола увеличивается. Рутин является ангиопротектором, он уменьшает проницаемость капилляров, отечность, воспаление, укрепляет сосудистые стенки, тормозит агрегацию и увеличивает степень деформации эритроцитов. Именно он придает композиции зеленовато-желтоватый цвет. В заявляемую композицию его включили в минимальной из известных из литературы доз. Аскорбиновая кислота (витамин С) участвует в окислительно-восстановительных процессах, регулирует эти процессы и углеводный обмен, проницаемость капилляров, свертывание крови, регенерацию тканей и активирует иммунные реакции.

При получении ГЛС в виде капсул или таблеток наличие в композиции аскорбиновой кислоты и рутина не влияет на стабильность состава композиции, где содержатся лоратадин, ремантадин и глюконат кальция, но из-за химического строения парацетамола (И-(4-гидроксифенил)ацетамид, или параацетаминофенол) при низком содержании по технологическим нормам вспомогательных веществ возможно взаимное влияние компонентов, превращение парацетамола и иных составляющих композиции в другие химические соединения, и как следствие, потеря композицией биологической (противовирусной,

- 2 008765 противовоспалительной и т.д.) активности.

В ГЛС в виде порошка такая опасность отсутствует из-за введения в состав большого количества (по массе) вспомогательных веществ и разнесения по всей массе порошка активных ингредиентов.

Характеристики биологически активных препаратов, составляющих композицию:

лоратадин: выраженное антигистаминное действие, предупреждает развитие отека тканей, связанного с высвобождением гистамина;

кальция глюконат: предотвращает развитие повышенной проницаемости и ломкости сосудов, обусловливающих геморрагические процессы при гриппе и ОРВИ, а также восстанавливает капиллярное кровообращение, оказывает антиаллергическое действие.

В композицию глюконат кальция включен в дозе 100 мг на разовый прием, что в 10 раз ниже минимальной дозы на прием в чистом виде.

Когда все 6 ингредиентов находятся в одной капсуле/таблетке и вспомогательных веществ, мало их разъединяющих (около 3,5% от общей массы), химические реакции между составляющими препаратами в процессе хранения нарушают общий состав лекарственной формы, т.е. ГЛС теряет стабильность. Из-за этого состав разделили на 2 части по химической совместимости, таким образом, ГЛС в виде капсул/таблеток - это 2 капсулы или 2 таблетки.

В результате изучения свойств единой композиции заявляемых лекарственных препаратов и подбора количественных соотношений активных ее компонентов было найдено оптимальное соотношение ингредиентов, обладающих высоким лечебным эффектом при их совместном приеме. Их весовое соотношение в ГЛС-порошке или с указанием разбивки по ГЛС-капсулам/таблеткам, мг:

360 (входит в капсулу/таблетку 1)

300

100

Парацетамол

Ремантадин

Аскорбиновая кислота Рутин

Лоратадин

Кальция глюконат (последние 5 компонентов входят в таблетку 2).

При изготовлении лекарственной формы (ГЛС) такого состава каждая из капсул/таблеток, входящих в заявляемую композицию, содержала фармакологически и технологически приемлемые вспомогательные вещества: капсула/таблетка 1-20 мг, капсула/таблетка 2-7 мг. В ГЛС-порошке вспомогательных веществ - 4167 мг.

Действие предложенной противогриппозной композиции из активных компонентов (в опытах означена ПП) проверяли на мышах и крысах. Оценивали острую и подострую токсичность, противовирусное и интерфероногенное действие предложенного состава. Острая токсичность 1111 на мышах составила 1100 мг/кг при внутрибрюшном введении. Исследование подострой (в течение 15 дней) токсичности препарата 1111 в дозе 480 мг/кг (10-50-кратная терапевтическая доза) в сравнении с контролем при введении внутрь показало безопасность данного препарата.

Безопасность композиции подтверждена исследованиями общего состояния животных, их поведением, системы крови, сердечно-сосудистой, выделительной и пищеварительной системами, посмертными морфологическими исследованиями внутренних органов.

Двойное слепое сравнительное плацебоконтролируемое экспериментальное исследование противогриппозной активности композиции показало, что она обладает выраженным защитным лечебнопрофилактическим антигриппозным действием, которое было выявлено на модели летальной гриппозной инфекции у белых мышей.

Этот эффект проявляется по всем исследованным показателям:

индексу защиты, длительности инкубационного периода, макроскопическим проявлениям типичного для мышей постгриппозного хронического бронхолегочного процесса.

Механизм противовирусной активности композиции ίη νίνο обусловлен индукцией сывороточного интерферона.

Введение ПП в дозе 100 мг/кг стимулировало выработку как альфа-, так и гамма-интерферона, суммарные титры при этом достигали к пятому дню показателей 73,6-120,6 ед./мл. Такие показатели выработки сывороточного интерферона при пероральном введении препарата свидетельствуют о его потенциальной возможности использования в качестве индуктора интерферона в комплексном лечении вирусных заболеваний.

Благодаря этому оправдано применение композиции в лечении гриппа, острых респираторных вирусных инфекций, лихорадочных состояний с поражением бронхолегочного дерева.

Исходя из того, что стабильность композиции сохраняется, когда она разделена по химической совместимости компонентов, испытание на больных проводили, назначая композицию в виде ГЛС.

Больные принимали одновременно две капсулы/таблетки (взаимодополняющие) перорально. Суточный прием композиции по изобретению составил 2-3 раза. Срок лечения - 3-5 дней, улучшение со

- 3 008765 стояния отмечается в более короткий срок.

Такие же результаты были получены, когда больным назначали питье (лучше горячее) на основе заявляемой композиции в виде ГЛС-порошка для раствора.

Высокая клиническая эффективность комплексного препарата представлена в табл. 1.

Предлагаемые ГЛС оказывают действие и как средство симптоматической терапии, и как средство, влияющее на репродукцию вирусов гриппа.

Таблица 1

Влияние антигриппозного средства на продолжительность фебрильной фазы заболевания

Группа (по 10 человек)	Тяжесть заболевания
Легкая (дни)	Средняя(дни)	Тяжелая (дни)
Группа в опыте	1	2-3	3-5
Контрольная (без лечения)	2-3	3-5	5-7

Испытания в клинике предлагаемой композиции на больных ОРВИ продемонстрировали влияние заявляемых ГЛС на показатели иммунной системы и на функциональное состояние макрофагов крови (табл. 2, 3).

Таблица 2

Влияние антигриппозной композиции на показатели иммунной системы у больных ОРВИ

Показатель	Единицы измерения	Контрольная группа	Группа в опыте
Начало болезни	Конец болезни	В начале лечения	В конце лечения
Лизоцим	Мг/л	8.4 ± 0.4	12.1 ±0.5	10.4 ±2.1	11.3 ± 1.4
Комплемент	Ед	52.0 ±2.7	52.5 ± 5.3	47.9 ± 4.6	48.8 ±6.2
1§А	Мг/л	163 ± 13	172 ±28	155 ±23	174 + 21*
1ёМ	Мг/л	135 ± 8	134 ±8	120± 12	154+17*
	Мг/л	194 ±8	200 ± 15	189± 14	20.5 + 7*

Таблица 3

Влияние антигриппозного средства на функциональное состояние макрофагов крови

Группа больных	Процент фагоцитирующих мононуклеаров	Процент мононуклеарных фагоцитов, содержащих вирусные включения
До лечения	После лечения	До лечения	После лечения
Группа в опыте	8.4 + 3.0	33.5+6.2*	49.7+13.2	12.0 + 4.2
Контрольная	11.0 + 3.0	20.4 + 7.1	47.1+7.5	32.0 + 8.1

*Различия с показателями до лечения достоверны, р<0,01.

ГЛС - капсулы/таблетки

Для промышленного производства композиция в виде ГЛС - капсул/таблеток должна быть стабильна, соответствовать требованиям фармакопеи. Компоненты сгруппировали по их химическим свойствам и по совместимости в две разные капсулы или таблетки.

Капсула (таблетка) 1, обозначена П в испытаниях - содержит парацетамол и вспомогательные вещества (для капсулирования или таблетирования).

Капсула (таблетка) 2, обозначена Р в испытаниях - содержит ремантадин, аскорбиновую кислоту, кальция глюконат, рутин, лоратадин и вспомогательные вещества (для капсулирования или таблетирования).

Одновременный прием предлагаемых двух разных капсул или таблеток дает лечебный эффект благодаря сохранению композиционного состава заявляемого средства. Стабильность состава композиции сохраняется длительное время при хранении из-за раздельного хранения химически несовместимых компонентов.

Бинарный препарат готовят смешиванием сухих действующих (активных) и вспомогательных компонентов.

- 4 008765

Количественный состав каждой из капсул.

Капсула 1 (П): масса содержимого капсулы в среднем составляет 380 мг, при содержании в ней парацетамола 360 мг и вспомогательных веществ 20 мг.В качестве вспомогательных веществ используют, мг:

Крахмал (картофельный или крахмал желатинизированный)9,0

Сахар молочный (лактоза)4,2

Магния стеарат3,8

Кремния диоксид коллоидный3,0

В процессе производства отклонения в массе содержимого капсулы составляют ±10%, т.е. масса содержимого равна 0,342-0,418 г.

Таким образом, состав капсулы или таблетки 1 представляет весовое соотношение компонентов, мг: Парацетамол 324-396

Вспомогательные вещества 18-22, причем вспомогательные вещества состоят из крахмала - 8,1-9,9 мг, сахара молочного - 3,8-4,6 мг, магния стеарата - 3,4-4,2 мг, кремния диоксида коллоидного - 2,7-3,3 мг.

Капсула 2 (Р): масса содержимого одной капсулы в среднем составляет 480 мг, при содержании в ней активных ингредиентов - 473 мг и вспомогательных веществ - 7 мг.

Активные составляющие композиции в данной капсуле, мг:

Ремантадин (римантадин)50

Аскорбиновая кислота300

Рутин (рутозид)20

Лоратадин3

Кальция глюконат100

В качестве вспомогательных веществ используют, мг:

Магния стеарат4,8

Крахмал (картофельный)2,2

В процессе производства отклонения в массе содержимого капсулы составляют ±10%, т. е. масса содержимого равна 0,432-0,528 г.

Таким образом, состав капсулы или таблетки 2 представляет весовое соотношение компонентов, мг:

Ремантадин	45-55
Аскорбиновая кислота	270-330
Рутин	18-22
Лоратадин	2,7-3,3
Кальция глюконат	90-110
Вспомогательные вещества	6,3-7,7

причем вспомогательные вещества состоят из магния стеарата - 4,3-5,3 мг, крахмала (картофельного) 2,0-2,4 мг.

В промышленном производстве капсулы разного наполнения окрашены пищевыми красителями в разные цвета, что делает их удобными при приеме больными.

Аналогичный подход при выпуске таблеток - два разных цвета у каждого состава из общей компо зиции.

Разброс в массе входящих в композицию биологически активных ингредиентов при полном сохранении активности (лекарственного эффекта) составляет ±10%. Таким образом, в одноразовой дозе из 2 капсул/таблеток содержатся лекарственные препараты в соотношении, г:

Парацетамол Ремантадин Аскорбиновая кислота Рутин Лоратадин Кальция глюконат

0,324-0,396 0,045-0,055 0,270-0,330 0,018-0,022 0,0027-0,0033 0,090-0,110

Проверку стабильности композиции осуществляли через 12 месяцев и через 24 месяца содержимое каждой капсул (таблеток) № 1 и 2 проверяли на соответствие компонентного (качественного и количественного) состава в соответствии с требованиями фармакопеи ГФ XI, 1.2. Испытаны 10 капсул каждого состава 5 партий композиций. Все значения нормируемых показателей оказались в норме, т.е. соответствовали заявленному составу. В табл. 4 приведены средние значения. Капсулы (содержимое их) сохраняли первоначальный цвет (соответствие требованиям ГФ XI, вып.2, с. 143):

капсула 1 (П) - смесь порошка и/или гранул белого или белого с кремоватым или розовым оттен ком;

капсула 2 (Р) - смесь порошка и/или гранул желтого с зеленоватым оттенком и белого цвета.

- 5 008765

Таблица 4

Результаты проверки стабильности содержимого капсул № 1 и 2, составляющих заявляемую композицию

№ партии	Наименование показателей	Год изготовления, 2002г. Средняя масса в г	Год проверки, 2003г. Средняя масса в г	Год проверки 2004г. Средняя масса в г	Соответствие цветности
	№ 1 Парацетамол	0,362	0,363	0,362	соответствует
1	N° 2 Аскорбиновая кислота	0,301	0,302	0,302
	Кальция глюконат	0,099	0,096	0,097
	Ремантадин	0,050	0,051	0,049	соответствует
	Рутин	0,020	0,019	0,019
	Лоратадин	0,0029	0,0029	0,0030
	№ 1 Парацетамол	0,357	0,356	0,358	соответствует
2	№2 Аскорбиновая кислота	0,297	0,299	0,298
	Кальция глюконат	0,101	0,100	0,102
	Ремантадин	0,051	0,052	0,051	соответствует
	Рутин	0,021	0,020	0,021
	Лоратадин	0,0031	0,0030	0,0031
	№ 1	П Ί/ΙΟ	η алл	η алА.
	ιΐίψαμνΛ сиукам
з	№2 Аскорбиновая кислота	0,294	0,296	0,296
	Кальция глюконат	0,104	0,104	0,102
	Ремантадин	0,053	0,052	0,051	соответствует
	Рутин	0,019	0,019	0,020
	Лоратадин	0,0028	0,0029	0,0028
	№ 1 Парацетамол	0,348	0,349	0,350	соответствует
4	№2 Аскорбиновая кислота	0,310	0,309	0,307
	Кальция глюконат	0,092	0,094	0,096
	Ремантадин	0,049	0,049	0,050	соответствует
	Рутин	0,019	0,020	0,019
	Лоратадин	0,0031	0,0031	0,0030
	№ 1 Парацетамол	0,364	0,363	0,364	соответствует
	№2 Аскорбиновая кислота	0,295	0,297	0,297
	Кальция глюконат	0,103	0,102	0,102
	Ремантадин	0,052	0,050	0,049	соответствует
	Рутин	0,020	0,021	0,021
	Лоратадин \|	0,0028	0,0028	0,0031

Проверка стабильности композиции, когда все входящие компоненты были соединены вместе в одну капсулу, показала, что нарушения в составе наблюдаются уже через 12 месяцев визуально. При хранении при температуре +30°С и относительной влажности 70% содержимое такой капсулы приобретает бурый цвет, порошок изменяет свой вид - слипается в комки.

Количественное определение аскорбиновой кислоты и парацетамола показало их уменьшение в композиции на 15% через 12 месяцев и на 20-25% через 24 месяца хранения.

Исходя из этого, выпуск композиции в виде ГЛС - капсул/таблеток возможен только в виде разных капсул или таблеток, имеющих химически совместимый состав.

ГЛС-порошок для приготовления раствора для приема Рег о§

ГЛС-порошок готовят смешиванием сухих активных и вспомогательных компонентов или их гранулированием с последующей расфасовкой в пакет (контурную безъячейковую упаковку).

В процессе производства отклонения в массе содержимого пакетов допустимы и составляют ±10%. Действующие вещества, мг:

Парацетамол	360
Кальция глюконат	100
Ремантадин	50
Аскорбиновая кислота	300
Рутин	20
Лоратадин	3

- 6 008765

Вспомогательные вещества, мг:

Аспартам30

Оксипропилметилцеллюлоза10

Ароматизатор60

Кремния диоксид коллоидный (аэросил)20

Лактоза (молочный сахар)4047

Лактоза - наполнитель в фармацевтических препаратах, этот дисахарид является стабилизирующим композицию веществом.

Аспартам - метилированный дипептид из двух аминокислот: аспарагиновой и фенилаланиновой, используют в качестве подсластителя.

Аспартам входит в состав заявляемой композиции - порошка, так как он приемлем для пациентов с сахарным диабетом, и здесь не возникает ограничений в назначении антигриппозного средства.

В качестве связующего вещества в ГЛС-порошок включена оксипропилметилцеллюлоза (ОПМЦ).

В промышленном производстве в состав порошка обычно вводят для снятия электростатического заряда аэросил. В качестве «скользящего» вспомогательного вещества, препятствующего смеси электризоваться, аэросил включен в заявляемый ГЛС-порошок.

Для придания раствору приятного вкуса, коммерческой привлекательности лекарственного средства в ГЛС-порошок включен сухой ароматизатор. Ароматизаторы, которые добавляют в порошок, обладают вкусом меда, или лимона, или черной смородины, или иных ягод либо фруктов. Такие ароматизаторы разрешены к применению в фармацевтической промышленности.

ГЛС-порошок проверяли на стабильность в соответствии с требованиями фармакопеи ГФ XI, 1.2. Состав качественно и количественно проверяли через 12 и через 24 месяца. Все значения испытанных компонентов смеси оказались в норме. Результаты проверки 2-х партий приведены в табл. 5.

Таблица 5

Результаты проверки стабильности антигриппозного средства-порошка

№ партии	Наименование показателей	Год изготовления 2002г. средняя масса в мг.	Год проверки, 2003г. средняя масса в мг	Год проверки, 2004г. средняя масса в мг	Соответствие цветности
1	Парацетамол Аскорбиновая кислота Кальция глюконат Ремантадин Рутин Лоратадин	356 299 100 50 21 зд	355 297 100 50 20 3,0	356 298 101 51 21 3,1	Соответствует
2	Парацетамол Аскорбиновая кислота Кальция глюконат Ремантадин Рутин Лоратадин	371 305 101 52 20 2,9	370 303 102 51 21 2,9	370 304 100 51 20 2,9	Соответствует

В результате испытаний на стабильность ГЛС-порошка установлено, что изменений в составе не происходит при хранении даже через 24 месяца.

Введенные в состав вспомогательные вещества делают композицию хорошо растворимой в воде, при хранении ее органолептические свойства не изменяются.

Допустимый разброс в массе вспомогательных веществ и составляет ±10%. Поэтому одноразовая доза ГЛС-порошка содержит действующие вещества, мг:

Парацетамол	324-396
Ремантадин	45-55
Аскорбиновая кислота	270-330
Рутин	18-22
Лоратадин	2,7-3,3
Кальция глюконат	90-110
вспомогательные вещества, мг:
Лактоза	3642-4452
Аспартам	27-33
ОПМЦ	9-11
Аэросил	18-22
Ароматизатор	54-66

- 7 008765

Общая масса содержимого ГЛС-порошка составляет 5000 мг±10%, т.е. 4500-5500 мг.

Методы испытания композиции в экспериментальных исследованиях, подтверждающие вышеуказанное о ее лечебном эффекте

Испытуемые образцы.

В экспериментальных исследованиях были изучены три образца препаратов. Противогриппозный препарат (1111) представлял собой порошок желтоватого цвета, относительно плохо растворимый в воде. В качестве препаратов сравнения использовали известный противогриппозный препарат ремантадин и производное тиобензимидазола-алмид.

Животные.

Экспериментальные исследования проведены на белых беспородных мышах массой 18-22 г, полученных из питомника «Рапполово» РАМН. Мыши были разделены на 6 групп по сорок голов в каждой. Всего в данной работе использовано 270 животных.

Вирус.

Использовали вирус гриппа А, штамм АюЫ/2/68 (Η3Ν2), полученный из музея НИИ гриппа РАМН и адаптированный к белым мышам.

Методика постановки экспериментальной гриппозной инфекции.

Испытания проводили в соответствии с разработанными в НИИ гриппа РАМН методическими указаниями (Ильенко В.И. Методы испытания и оценки противовирусной активности химических соединений в отношении вируса гриппа (методические указания), Л., 1977). Для этого испытуемые образцы предварительно растворяли (или ресуспендировали) в 1% растворе крахмала в кипяченой воде. Введение препаратов проводили в испытуемых дозах, которые указаны в табл. 5, перорально (через зонд) в объеме 0,2 мл пятикратно по следующей схеме: за 24 и 1 ч до заражения, через 24, 48 и 72 ч после заражения. Мышам контрольной группы аналогично вводили 1% раствор крахмала. Заражение мышей проводили интраназально патогенным вирусом гриппа Α/Αίο1ύ/2/68 под легким эфирным наркозом в дозе 0,1 и 1 ЬО₅₀ (летальная доза). Указанная схема предусматривает одновременно испытание профилактического и лечебного действия испытуемого соединения. Учет результатов проводили по следующим показателям:

а) сравнение летальности животных в группе леченых и контрольных мышей на 9-й день после заражения;

б) определение длительности инкубационного периода для всей группы животных, включенных в опыт, в течение всего периода наблюдения (14 дней после заражения). В этом расчете делается условный допуск, что длительность жизни выживших животных равна длительности опыта (срока наблюдения);

в) макроскопическое (визуальное) определение интенсивности вирусного поражения легких выживших мышей на 14-й день после заражения. Оценку проводили по наличию очагов хронической гриппозной пневмонии и выражали в процентах: 0% - отсутствие видимых поражений, 25% - сегментарные поражения, 50% - поражения, состоящие из нескольких слившихся сегментов, но не занимающих всей доли легкого, 75% - поражение отдельных долей, 100% -тотальное поражение легких.

Статистическую обработку результатов макроскопического исследования проводили путем сравнения доверительных интервалов средних арифметических величин р=0,05.

Результаты исследования.

Выживаемость мышей во время экспериментальной гриппозной инфекции после перорального введения им испытуемых образцов по лечебно-профилактической схеме представлена в табл. 6. В качестве показателя противовирусной активности при сравнении летальности опытных и контрольных групп животных использовали индекс защиты (ИЗ), который рассчитывали по следующей формуле:

143 _ КЗ - 1 х 100 — процент погибших мышей в контроле КЗ процент погибших мышей в опыте где КЗ - коэффициент или кратность защиты.

Результаты показывают, что рассчитанная величина ИЗ для 1111 и алмида при заражающей дозе 1 ЬО₅₀ составляет от 52 до 62%, что позволяет оценить эти соединения как обладающие достаточно выраженной противовирусной активностью. Следует отметить, что они уступают классическому противогриппозному средству ремантадину, у которого этот показатель равен 90,9%.

Оценка противовирусного действия испытуемых образцов по длительности инкубационного периода (табл. 6) также подтверждает вывод о высокой противогриппозной активности исследуемых препаратов. У мышей, которым вводили 1111 и алмид, при заражающей дозе 1 ЬО₅₀, инкубационный период увеличился по сравнению с контролем на 1,8-2,2 дня. Однако наибольшее его увеличение (на 3,5 дня) наблюдалось при введении ремантадина.

-8008765

Таблица 6

Влияние испытуемых препаратов на течение экспериментальной гриппозной инфекции у мышей

Образцы препарата, доза, мг/кг	Количество животных в Г рупле	Доза вируса, ПО50	Количество погибших животных на 9-й день	Индекс защиты, %	Оценка активности препарата **
Алмид, 10 мг/кг	20	0,1	1/5,0*	50,0	-н-
19	1	5/26,3	52,3	++
ПП, 10 мг/кг	20	0,1	1/5,0	50,0	++
20	1	4/20,0	62,9	+ -Г+
ПП, 100 мг/кг	19	0,1	2/10,5	0,0	—
20	1	5/25,0	54,5	++
Ремантадин 50 мг/кг	20	0,1	0	1000	+-Н-+
20	1	1/5,0	90,9	1 1 и
Контроль, плацебо	20	0,1	2/10,0	—	—
20	1	11/55,0	-	—

*В числителе - абсолютное количество павших животных, в знаменателе - этот показатель, выраженный в процентах.

**Препарат не активен.

+, ++, +++, ++++ - степень выраженности противовирусного эффекта.

Исследованы легкие выживших мышей, зараженных 0,1 14Э₅₀. Характер патологического процесса свидетельствует о том, что интенсивность специфического для вируса гриппа поражения легочной ткани у мышей, которым вводили ПП и алмид, была достоверно ниже по сравнению с контрольной группой животных. Из двух испытуемых доз ПП наибольший защитный эффект по этому показателю проявился в дозе 10 мг/кг.

Таблица 7

Расчет длительности инкубационного периода для всей группы животных

Препарат, доза, мг/кг	Доза вируса Ю 50	Количество мышей	Из них пали в указанные дни опыта	Всего пало	Инкубационный период, дни
4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
Алмид, 10 мг/кг	0,1	20		-	1	-	-	-	1	-	-	-	-	2	13,4
1	19		2	1	-	2	1	-	1	-	-		6	12,3
ПП, 10 мг/кг	0,1	20		-	-	-	-	1				-		1	13,7
1	20		-	1	2	-	1				-		4	12,6
ПП, 100 мг/кг	0,1	19		-	-	-	1	1				1		3	13,7
1	20		-	2	2	-	1				-		5	12,2
Ремантад ин, 50 мг/кг	0,1	20												0	14,0
1	20									1	-		1	13,9
Контроль, плацебо	0,1	20		1	-	-	-	1		1	-	-	-	3	13,1
1	20	-	1	2	2	3	3		-	-	-	-	11	10,4

В результате двойного слепого исследования установлено, что интенсивность макроскопических поражений легких на 14-й день гриппозной инфекции составляет при введении ал мида - 30%,

ПП (10 мг/кг) - 20%,

ПП (100 мг/кг) - 35%, фитопрепарата (маргали) - 63%, ремантадина - 5%, в контроле - 55% (р<0,5 по сравнению с контролем).

Заключение

На основании полученных экспериментальных данных установлено, что испытуемые образцы ПП обладают выраженным защитным лечебно-профилактическим противогриппозным действием, которое было выявлено на модели летальной гриппозной инфекции у белых мышей. Этот эффект проявлялся по всем трем показателям: индексу защиты, длительности инкубационного периода, а также макроскопическим проявлениям типичного для мышей постгриппозного хронического бронхолегочного процесса. Механизм противовирусной активности этих соединений ίη νίνο может быть обусловлен индукцией сывороточного интерферона, который был обнаружен у мышей после введения этих препаратов. Это согласуется с данными литературы о том, что препараты, способные стимулировать выработку в организме мышей гамма-интерферона, обеспечивают защиту от летальной гриппозной инфекции благодаря антидепрессивному действию на систему клеточного иммунитета. Поэтому препарат ПП применим для ком

-9008765 плексной профилактики и лечения гриппозной и другой вирусной инфекции.

Изучение интерферогенного действия ИИ

В данном исследовании была изучена продукция сывороточного альфа- и гамма-интерферона у мышей при введении им исследуемых соединений, предположительно обладающих интерфероногенной активностью. Работа проведена на базе лаборатории гриппозных вакцин НИИ гриппа РАМН и лаборатории этиологических методов диагностики НИИ детских вакцин МЗ РФ. Исследование проведено двойным слепым методом.

Материалы и методы

Испытуемые образцы.

В экспериментальных исследованиях были изучены три образца препаратов. Иротивогриппозный препарат представляет собой порошок желтоватого цвета, плохо растворимый в воде. В качестве препарата сравнения использовали производное тиобензимидазола алмид. Дозы препаратов составили 10 и 100 мг/кг для НИ и 10 мг/кг для алмида. Испытуемые образцы предварительно растворяли (или ресуспендировали) в 1% растворе крахмала на дистиллированной воде. Введение препаратов проводили перорально (через зонд) в объеме 0,2 мл.

Животные.

Экспериментальные исследования проведены на белых беспородных мышах массой 18-22 г, полученных из питомника «Рапполово» РАМН. Мыши были разделены на 5 групп по 25 голов в каждой. Всего в данной работе использовано 110 животных.

Метод тестирования интерферона.

Интерферон тестировали по методу Гш1ег Ν.Β. (1968) в модификации О.А.Аксенова с использованием индикаторного вируса Сендай (мышиный вариант) и культуры клеток Ь-929. В полистероловые панели засевали культуру Ь-929 в концентрации 200 тыс. кл./мл по 100 мкл в каждую лунку. Через сутки на выросший пласт клеток вносили сыворотки мышей после введения им указанных препаратов - индукторов интерферона в разведении 1:20. Каждая сыворотка вводилась в двух видах: нативной и после обработки с удалением гамма-интерферона.

Дозу тест-вируса Сендай определяли в специальном опыте его раститровкой на той же тканевой культуре в пределах 1:25-1:1600. Тестирование активности вируса проводили методом количественной гемадсорбции. Для этого через сутки после внесения указанных разведений вируса проводили отмывку тканевого пласта зараженных клеток, подсушивали и на пласт вносили 0,5% взвесь эритроцитов морской свинки. Через 30 мин проводили отмывку от неадсорбированных на пласт клеток 4-кратно фосфатнобуферным раствором, высушивали 10 мин в термостате при температуре 37°С. После этого пласт зараженных клеток с адсорбированными эритроцитами заливали дистиллированной водой для лизирования эритроцитов по 100 мкл на лунку.

Далее в лизате эритроцитов тестировали активность оксидазных ферментов по принципу иммуноферментного анализа. Ферменты определяли с помощью окислительной системы, включающей перекись водорода и ортофенилен-диамин. Иринцип метода заключается в том, что степень окисления этого субстрата эритроцитарными оксидазными ферментами находится в линейной зависимости от величины лизиса адсорбированных вирусом эритроцитов, т. е. от активности вируса Сендай. Использование такой модификации позволяет выявлять вирус в цветовом количественном показателе при длине волны 495 нм с использованием иммуноферментных анализаторов различного типа.

Рабочей дозой тест-вируса служило разведение, отражающее начало снижения активности тествируса (табл. 8).

Таблица 8

Расчет рабочей дозы тест-вируса Сендай

Тествирус	Активность в иммуноферментном тесте вируса Сендай (ОП - 495 нм) при внесении его в культуру Ь-929 в разведении 1:25 - 1600
25	50	100	200	400	800	1600	Без вируса
Сендай	0,366	0,340	0,326	0,350	0,236	0,115	0,060	0,010

Таким образом, рабочей дозой тест-вируса в данном исследовании служило разведение вируса 1:200. Это разведение вируса вносили в основной опыт с испытуемыми сыворотками на сутки при 37°С. Через сутки весь материал опыта отмывали так же, как и при определении рабочей дозы вируса, рассчитывали показатель в иммуноферментном тесте и по калибровочной кривой активности мышиного интерферона определяли титр интерферона в исследуемых сыворотках. Интерфероны определяли в сыворотке крови в нативном виде и после разрушения гамма-интерферона прогреванием при 56°С в течение 30 мин и 2-дневной обработки 1Ν соляной кислотой.

Результаты исследования.

Для изучения интерферонопродуцирующей активности исследуемые препараты вводили мышам перорально через зонд в объеме 0,2 мл в следующих дозах: алмид - 10 мг/кг, ИИ - 10 и 100 мг/кг. Цикл введения препаратов составил 3 дня. Через 1, 2, 3, 4, 5 суток после первого введения препарата брали

- 10 008765 кровь от 5 мышей каждой группы и получали сыворотку. Сыворотку контрольных животных получали до начала опыта.

Установлено, что при пероральном введении алмида интерферон начал появляться уже через сутки после первого введения - 28,2 ед., и на протяжении последующих 5 дней его уровень варьировал в пределах 30-44 ед. в 1 мл. Более высокие значения интерферона выявляли при введении ПП. Через 5 дней после первого введения дозы ПП 10 мг/кг стимулировали выработку интерферона до концентрации 76,3 ед./мл, после введения дозы НН 100 мг/кг - до 120,6 ед./мл (табл. 9).

При оценке выработки альфа-интерферона (табл. 10) установлено, что алмид 10 мг/кг стимулировал выработку альфа-интерферона на протяжении 3-х суток после перорального введения до 40,5 ед./мл, в дальнейшем его активность падала до 17,9 ед./мл. Максимальной активностью обладал ПП в дозе 100 мг/кг, когда величина альфа-интерферона возрастала на протяжении 5 дней с 36,8 до 80,6 ед./мл.

Таблица 9

Концентрация общего интерферона в крови мышей после перорального введения препаратов-интерфероногенов

Препараты, доза, мг/кг	Титр интерферона в крови мышей, дни после перорального введения
1	2	3	4	5
Алмид, 1 0 мг/кг	28,2	44,3	4,05	31,1	30,2
ПП, 10 мг/кг	17,8	26,5	51,4	55,2	76,3
ПП, 100 мг/кг	36,8	46,1	96,0	116,4	120,6

Таблица 10

Концентрация альфа-интерферона в крови мышей после перорального введения испытуемых препаратов

Препараты, доза, мг/кг	Титр интерферона в крови мышей, дни после первого введения
1	2	3	4	5
Алмид, 1 0 мг/кг	25,7	36,7	40,5	25,8	17,9
ПП, 10 мг/кг	17,8	26,5	38,9	40,6	35,8
ПП, 100 мг/кг	36,8	40,8	63,5	79,6	80,6

При расчете выработки гамма-интерферона (табл. 11) оказалось, что минимальная активность этого типа интерферона наблюдалась у алмида. Титр интерферона практически обнаруживался после 5 введений препарата - 12,3 ед./мл. При введении ПП гамма-интерферон начинал появляться в крови мышей через 2-3 дня и к 5-му дню составил при введении дозы 10 мг/кг - 30,5 ед./мл и при введении другой дозы 100 мг/кг - 40,0 ед./мл.

Таблица 11

Концентрация гамма-интерферона в крови мышей после перорального введения препаратов-интерфероногенов

Препараты, доза, мг/кг	Титр интерферона в крови мышей, дни после первого введения
1	2	3	4	5
Алмид, 1 0 мг/кг	2,5	7,6	0	5,3	12,3
ПП, 10 мг/кг	0	0	12,5	14,6	30,5
ПП, 100 мг/кг	0	15,3	32,5	36,8	40,0

Заключение.

Из испытанных двух препаратов алмид 10 мг/кг стимулировал альфа-интерферон в течение первых 3 дней после перорального введения. Гамма-интерферон при этом не вырабатывался. Наилучшие результаты по интерфероногенной активности были получены после введения ПП. Введение его в дозе 100 мг/кг стимулировало выработку как альфа-, так и гамма-интерферона, суммарные титры при этом достигали к 5-му дню показателей 73,6-120,6 ед./мл. Такие показатели выработки сывороточного интерферона при пероральном введении препарата свидетельствуют о его потенциальной возможности использования в качестве индуктора интерферона в комплексном лечении вирусных заболеваний.

Claims

1. Антигриппозное комплексное лекарственное средство для перорального применения, состоящее из парацетамола, ремантадина, аскорбиновой кислоты, рутина, лоратадина, кальция глюконата, при следующем соотношении компонентов на одну дозу по массе, мг:

2. Антигриппозное комплексное лекарственное средство по п.1, характеризующееся тем, что дополнительно содержит вспомогательные вещества для приготовления готового лекарственного средства в виде капсул или таблеток, причем их масса составляет 24,3-29,7 мг в одноразовой дозе.

3. Антигриппозное комплексное лекарственное средство по п.1, характеризующееся тем, что дополнительно содержит вспомогательные вещества для приготовления готового лекарственного средства в виде порошка для приготовления раствора для питья, причем их масса составляет 3750-4584 мг в одноразовой дозе.

4. Антигриппозное комплексное лекарственное средство по п.2, характеризующееся тем, что активные компоненты разделены по химической совместимости в две капсулы или таблетки, составляющие вместе одноразовую дозу, причем капсула 1 или таблетка 1 содержит парацетамол и вспомогательные вещества, мг:

Крахмал 8,1-9,9

Сахар молочный 3,8-4,6

Магния стеарат 3,4-4,2

Кремний диоксид коллоидный 2,7-3,3 капсула 2 или таблетка 2 содержит ремантадин, аскорбиновую кислоту, рутин, лоратадин, кальция глюконат и вспомогательные вещества, мг:

Магния стеарат 4,3-5,3

Крахмал 2,0-2,4

5. Антигриппозное комплексное лекарственное средство по п.3, характеризующееся тем, что выполнено в виде порошка для приготовления раствора для питья, содержащего в качестве вспомогательных веществ, мг:

Аспартам

Оксипропилметилцеллюлозу

Ароматизатор

Кремний диоксид коллоидный

Лактоза

27-33

9-11

54-66

18-22

3642-4452

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2/6