DK2786150T3 - Detektion af multiple analytter - Google Patents

Claims (10)

1. Fremgangsmåde til at detektere mindst to forskellige ikke-nukleinsyre-analytter i en prøve, hvilken fremgangsmåde omfatter: at tilvejebringe til et reaktionsbeholder: (i) mindst ét fast substrat omfattende et eller flere immobiliseringsmidler, hvor substratet omfatter en plastoverflade eller en hydrofobisk overflade; (ii) prøven; (iii) mindst to forskellige indfangningsmidler der binder til mindst to forskellige analytter og de mindst to forskellige indfangningsmidler kan immobiliseres på det mindst ene faste substrat, hvor de mindst to forskellige indfangningsmidler omfatter et antistof; (iv) mindst to forskellige detekterbare midler der binder til de mindst to forskellige analytter, hvor de mindst to forskellige detekterbare midler omfatter et antistof; og at detektere de mindst to forskellige analytter i prøven ved at detektere tilstedeværelsen af de mindst to forskellige analytter bundet til det mindst ene faste substrat, hvor detekteringen af de mindst to forskellige analytter ikke omfatter vaskning af det mindst ene faste substrat efter at bringe det mindst ene faste substrat i kontakt med prøven, et eller flere af de mindst to forskellige indfangningsmidler og et eller flere af de mindst to forskellige detekterbare midler; hvor det ene eller flere immobiliseringsmidler er passivt bundet til det mindst ene faste substrat; hvor et eller flere af de mindst to forskellige indfangningsmidler omfatter en ligand for det ene eller flere immobiliseringsmidler, hvor liganden er bundet til et eller flere af de mindst to forskellige indfangningsmidler; hvor liganden og et af det ene eller flere immobiliseringsmidler er et bindingspar omfattende et peptid-mærke og et anti-peptid-antistof; og hvor de mindst to forskellige analytter detekteres simultant, hvor et eller flere af de mindst to forskellige analytter vælges fra gruppen bestående af et protein, en komponent afen cellesignaleringsvej, et cytokin, en tumorsuppressor, eller et antistof.

2. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor fremgangsmåden omfatter at tilvejebringe et eller flere af de mindst to forskellige indfangningsmidler i en koncentration på 10 ng/ml til 1000 ng/ml.

3. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor peptid-mærket omfatter peptidsekvensen DYKDDDDK (SEQ ID NO.l) og anti-peptid-antistoffet omfatter et anti-DYKDDDDK-antistof.

4. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor a) et eller flere af de mindst to forskellige detekterbare midler omfatter en fluorofor, en eller flere lanthanid-ioner, fortrinsvis en eller flere af Eu3+, Sm3+, Tb3+, og Dy3+; og b) fortrinsvis et af de mindst to forskellige detekterbare midler omfatter Eu3+, og et andet af de mindst to forskellige detekterbare midler omfatter Sm3+.

5. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor fremgangsmåden omfatter at danne et kompleks mellem et eller flere af de mindst to forskellige indfangningsmidler, et eller flere af de mindst to forskellige analytter, og et eller flere af de mindst to forskellige detekterbare midler før eller samtidig med at komplekset bringes i kontakt med det mindst ene faste substrat.

6. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor a) det mindst ene faste substrat har en total bindingskapacitet på 5 pg/ml eller mindre for protein, b) reaktionsbeholderen omfatter det mindst ene faste substrat, c) reaktionsbeholderen omfatter en pipettespids, hvor pipettespidsen omfatter det mindst ene faste substrat; og/eller d) det mindst ene faste substrat omfatter en flerhed af beads, hvor fortrinsvis flerheden af beads tilbageholdes i pipettespidsen.

7. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor prøven er en blodprøve, en serumprøve, en urinprøve, en celleprøve, et cellelysat eller en kombination afen hvilken som helst af de førnævnte.

8. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor fremgangsmåden omfatter fremstilling af mindst to forskellige detekterbare signaler, hvor: a) mindst ét af de mindst to detekterbare signaler har en emissionsbølgelængdetop i området fra 500-560 nm og et andet detekterbart signal har en emissionsbølgelængdetop i området fra 570-610 nm, b) mindst ét af de mindst to detekterbare signaler har en emissionsbølgelængdetop i området fra 380-490 nm og et andet detekterbart signal har en emissionsbølgelængdetop i området fra 500-560, c) mindst ét af de mindst to detekterbare signaler har en emissionsbølgelængdetop i området fra 380-490 nm og et andet detekterbart signal har en emissionsbølgelængdetop i området fra 570-750 nm, eller d) mindst ét af de mindst to detekterbare signaler har en emissionsbølgelængdetop i området fra 500-560 nm og et andet detekterbart signal har en emissionsbølgelængdetop i området fra 570-750 nm.

9. Fremgangsmåden ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 8, hvor detekteringen af de mindst to forskellige analytter opnås i en tidsperiode på 2 timer eller mindre og/eller hvor fremgangsmåden omfatter at tilvejebringe et eller flere filtre og/eller en eller flere lyskilder og/eller en eller flere lysdetektorer til en pladelæserindretning for at muliggøre detektion af de mindst to forskellige analytter.

10. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor et af de mindst to forskellige detekterbare midler omfatter Eu3+ og et andet af de mindst to forskellige detekterbare midler omfatter Sm3+.