DK155499B - Fremgangsmaade til fremstilling af blodplasma-fraktioner - Google Patents

Description

DK 155499 B

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af plasmafraktioner ved fældning.

Til adskillige anvendelser inden for human- og veterinærmedicinen anvendes der albuminer og globuliner. Disse 5 proteiner opnås ved fraktioneret fældning ud fra plasma fra mennesker eller dyr. Hidtil har fældningen været gennemført på den måde, at der til at begynde med blev tilvejebragt plasma, hvorefter de enkelte fraktioner blev udvundet ved langsom inddosering af fældningsmidlet. Ulemperne ved denne 10 diskontinuerlige metode består i, at den på grund af de lange opholdstider er særdeles tidsrøvende og ikke desto mindre resulterer i vanskeligt fraskillelige fældninger.

Opfindelsens formål er således at finde frem til en fraktioneringsmetode, som inden for et passende tidsrum 15 giver godt fraskillelige fældninger.

Det har vist sig, at dette formål kan opnås ved, at det plasma, der skal fraktioneres, fældningsmidlet og et pufferstof bringes i kredsløb.

Den foreliggende opfindelse angår således en frem-20 gangsmåde til fremstilling af plasma-fraktioner ved blanding af plasma med et fældningsmiddel, ved konstant temperatur og i nærværelse af et pufferstof, og fraskillelse af det udfældede plasmaprotein, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at blandingen af plasma, fældningsmiddel, pufferstof 25 og udfældet protein føres ind i en sløjfereaktor, som består af et med en cirkulationspumpe forbundet rørkredsløb, en del af denne blanding udtages løbende, og en tilsvarende mængde af det medium, der skal fraktioneres, fældningsmiddel og pufferstof samtidig tilføres igen.

30 Ifølge en særlig udførelsesform for fremgangsmåden går man frem på den måde at blandingen af plasma, fældningsmiddel, pufferstof og udfældet protein bringes i kredsløb i en sløjfereaktor, som består af en rørebeholder, hvis udløb er forbundet med tilgangen af en cirkulationspumpe, og hvis 35 tilløb er forbundet med udgangen af denne cirkulationspumpe, at plasmaet, fældningsmidlet og pufferstoffet adskilt i en

DK 155499B

2 zone med en høj hvirveleffekt sættes til systemet, og at en mængde af reaktionsblandingen svarende til den tilførte mængde af plasma, fældningsmiddel og pufferstof løbende fjernes fra systemet gennem en mellem rørebeholderudløbet 5 og pumpetilgangen anbragt forgreningsledning.

Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse gennemføres i en slags "sløjfereaktor". Denne sløjfereaktor består af en rørebeholder og en kredsløbsledning, i hvilken der er indskudt en cirkulationspumpe.

10 Ifølge en yderligere udførelsesform for fremgangsmåden går man frem på den måde, at den reaktionsblanding, der fjernes fra sløjfereaktoren, inden fraskillelse af det udfældede protein gennemstrømmer en opholdstidsstrækning.

Rørebeholderen er af den gængse art og er udstyret 15 med anordninger til måling og regulering af temperaturen og pH-værdien for fældningsmediet og til opvarmning eller afkøling og omrøring af indholdet. Opvarmningen eller afkølingen kan f.eks. ske ved hjælp af en dobbeltkappe eller ydre eller indre rørslanger. Indholdet i beholderen omrøres ved hjælp 20 af en ved en motor dreven omrører, ved indføring af en indifferent gas eller ved impulsen af det tilstrømmende fældningsmedium. Tilløb og udløb for det medium, der skal bringes i kredsløb, kan være anbragt vilkårligt, men fortrinsvis anbringes udløbet ved beholderens bund, og tilløbet ender, 25 når det kommer fra oven, under væskespejlet. Beholderudløbet er forbundet med tilgangen af en cirkulationspumpe, og udgangen af denne pumpe er forbundet med beholdertilløbet. Mellem beholderafgang og pumpeindgang er der anbragt en forgreningsledning, som kan lukkes med en ventil og fører til en fra-30 skillelsesanordning, f.eks. et filter eller en centrifuge. Ligeledes fører yderligere tilledningerne fra doseringspumperne for det medium, der skal fraktioneres, for fældningsmidlet og for pufferstoffet til en zone med særlig høj hvirveleffekt. Som cirkulationspumpe anvendes der en pumpe med 35 stor produktionsydelse, fortrinsvis en pakningsløs centrifugalpumpe, og som doseringspumper er slange-, tandhjuls-,

DK 155499 B

3 stempel- eller membranpumper egnede.

Alt efter apparaturets størrelse tempereres også rørledningerne og pumperne ved hjælp af f.eks. dobbeltkapper, eller varme- og køleslanger, eller hele sløjfereaktoren med 5 doseringspumperne anbringes i et tempereret rum.

Som materiale til apparaturet er glas, emalje, korrosionsfast formstof eller metal, f.eks. ædelstål, egnet. Materialevalget retter sig i første række efter apparaturets størrelse. Medens små apparaturer kan fremstilles helt af 10 glas og/eller formstof, foretrækkes der metal, glas eller emalje til store apparaturer.

Rørebeholderens størrelse retter sig efter de mængder, der skal omsættes, idet den andrager fra 0,5 liter til 100 liter, fortrinsvis fra 0,5 liter til 10 liter. Målene for 15 de øvrige apparatdele er altid tilpasset størrelsen af røre-beholderen.

Den foretrukne opbygning af et til fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendeligt apparatur fremgår af tegningen. En rørebeholder (1) med røreapparatur (2) er via en 20 rørledning (3) forbundet med en cirkulationspumpe (4). Fra pumpen (4) fører en rørledning (5) atter tilbage til rørebe-holderen (1). Fra ledningen (3) bøjer en rørledning (6) af og fører via en opholdstidsstrækning (6a) til en ikke vist fraskillelsesanordning. Denne ledning (6) kan lukkes ved en 25 ventil (7). Desuden er doseringspumper (8), (11) og (12) via rørledninger (9), (10) og (13) forbundet med tilgangen af pumpen (4). Rørebeholderen tempereres ved hjælp af en dobbeltkappe (14). Hele apparaturet kan også være anbragt i et tempereret rum, som er antydet ved en stiplet linje (15).

30 Den her omhandlede fremgangsmåde anvendes til frak tionering af plasma eller plasmafraktioner fra mennesker eller dyr, men er også anvendelige til fraktionering af andre æggehvidestoffer.

Fældningsmidlet må tilpasses efter det materiale, 35 der skal fældes, idet der til plasma fra mennesker eller dyr fortrinsvis anvendes (NH4) 2SO4-opløsning, alkohol, f.eks.

DK 155499B

4 ethanol, eller en polyetheralkohol, f.eks. polyethylenglycol.

Også mængden af fældningsmidlet retter sig efter arten og mængden af de æggehvidefraktioner, der skal fældes og kan konstateres ved et for-forsøg.

5 For at holde den for fældningen optimale pH-værdi konstant anvendes der en syre eller base eller et i handelen værende pufferstof.

Blandingen af det medium, der skal fraktioneres, fældningsmiddel, pufferstof og udfældet protein fjernes fra 10 rørebeholderen ved hjælp af cirkulationspumpen og tilføres atter på et andet sted. En del af denne blanding udtages imidlertid kontinuerligt ved forgreningen og skilles fra det udfældede protein i fraskillelsesanordningen. Samtidig tilføres den samlede mængde, medium, der skal fraktioneres, 15 fældningsmiddel og pufferstof atter systemet gennem doseringspumperne, således at der i systemet hersker en i vid udstrækning udlignet stofbalance. Tilsætningen skal i denne forbindelse ikke ske kontinuerligt, men kan udføres intermitterende. Det er vigtigt, at koncentrationssvingningerne i 20 hele sløjfereaktoren ligger inden for de grænser, der kan tolereres for den protein-fraktion, der skal fraskilles.

Ved den her omhandlede fremgangsmåde opnås der protein-flager, som let kan fraskilles. Ved anvendelse af en centrifuge kan der anvendes et apparat, som kan tømmes kon-25 tinuerligt, idet den nødvendige centrifugalkraft til fraskil-lelse af protein-flagerne er meget lav. Ved den korte opholdstid i sløjfereaktoren kan mængden, der strømmer gennem apparaturet, i forhold til den kendte fældningsmetode forøges til det flerdobbelte af den gennemstrømmende mængde. Endvi-30 dere har det vist sig, at den forøgede kimdannelsesrisiko, der måtte frygtes ved længere driftstid, ikke eksisterer.

Eksempel 1 Rørebeholderen (1) ifølge tegningen har et indhold 35 på 1,5 liter, har dobbeltvægge, består af glas og temperes til -2°C. Ledningerne (3) og (5) består af isolerede glas-

DK 155499B

5 -dobbeltrør. Den pakningsløse centrifugalpumpe (4) omrører indholdet af rørebeholderen (1) og ledningerne (3) og (5) med en produktionsydelse på 200 liter/time. Slangepumperne (8), (11) og (12) fører 800 m/time af et humanplasma, 93 5 ml/time ethanol og så meget af et i handelen værende pufferstof (pH 4,8) til systemet, at pH-værdien i systemet er 7,4. Ved ventilen (7) fjernes der kontinuerligt 900 ml/time reaktionsvæske, fra hvilken der ved centrifugering fraskilles ca. 10 g/time af en beriget fibrinogenfraktion.

10

Eksempel 2 I et lignende apparatur som nævnt i eksempel 1, men med en glasbeholder med dobbelte vægge og med et indhold på 3,0 liter som rørebeholder (1) tilføres der ved en temperatur 15 på -6“C og en pH-værdi på 7,6 800 ml/time humanplasma, 280 ml/time ethanol samt en pufferstof-opløsning, og der fjernes 1000 ml/time reaktionsvæske. Der fås ca. 50 g/time af en beriget immunglobulinfraktion. '

Claims (3)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af plasma-fraktioner ved blanding af plasma med et fældningsmiddel, ved konstant temperatur og i næværelse af et pufferstof, og fraskillelse 5 af det udfældede plasmaprotein, kendetegnet ved, at blandingen af plasma, fældningsmiddel, pufferstof og udfældet protein føres ind i en sløjfereaktor, som består af et med en cirkulationspumpe forbundet rørkredsløb, en del af denne blanding udtages løbende, og en tilsvarende 10 mængde af det medium, der skal fraktioneres, fældningsmiddel og pufferstof samtidig tilføres igen.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at blandingen af plasma, fældningsmiddel, pufferstof og udfældet protein bringes i kredsløb i en sløjfe- 15 reaktor, som består af en rørebeholder, hvis udløb er forbundet med tilgangen af en cirkulationspumpe, og hvis tilløb er forbundet med udgangen af denne cirkulationspumpe, at plasmaet, fældningsmidlet og pufferstoffet adskilt i en zone med en høj hvirveleffekt sættes til systemet, og at en 20 mængde af reaktionsblandingen svarende til den tilførte mængde af plasma, fældningsmiddel og pufferstof løbende fjernes fra systemet gennem en mellem rørebeholderudløbet og pumpetilgangen anbragt forgreningsledning.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendete g-25 net ved, at den reaktionsblanding, der fjernes fra sløjfereaktoren inden fraskillelse af det udfældede protein gennemstrømmer en opholdstidsstrækning.