DK152832B - Process for preparing an aqueous insulin solution which is physically stabilized against boundary surface polymerization - Google Patents
Process for preparing an aqueous insulin solution which is physically stabilized against boundary surface polymerization Download PDFInfo
- Publication number
- DK152832B DK152832B DK479182A DK479182A DK152832B DK 152832 B DK152832 B DK 152832B DK 479182 A DK479182 A DK 479182A DK 479182 A DK479182 A DK 479182A DK 152832 B DK152832 B DK 152832B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- insulin
- solution
- approx
- added
- process according
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
! DK 152832B! DK 152832B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af vandige insulinopløsninger, der er fysisk stabiliserede mod grænsefladepolymerisation, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at insulin blandes med et 5 phospholipid med den almene formel IThe present invention relates to a process for the preparation of aqueous insulin solutions physically stabilized against interface polymerization, characterized in that insulin is mixed with a phospholipid of the general formula I
H-CH-OR' CH-OR" (I) 10 H-CH-O-P(O)(OH)-OR"1 hvor R' og R" er ens eller forskellige og hver betegner hydrogen, alkylcarbonyl, alkenylcarbonyl, alkadienylcarbonyl, alkatrienylcarbonyl eller alkatetraenylcarbonyl, med det forbehold, at ikke både R' og R" samtidig betegner hydrogen, 15 og R"1 betegner en hydrofil gruppe, og med vand og eventuelt med et zinksalt, et konserveringsmiddel, et middel, der gør opløsningen isotonisk, og et pufferstof, hvorhos vægtforholdet mellem phospholipidet og insulinet er i området 1:5 til 1:10.000, og koncentrationen af phospholipidet er i om-20 rådet fra ca. 10 til ca. 200 μg/ml.H-CH-OR 'CH-OR "(I) H-CH-OP (O) (OH) -OR" 1 wherein R' and R "are the same or different and each represents hydrogen, alkylcarbonyl, alkenylcarbonyl, alkadienylcarbonyl, alkatrienylcarbonyl or alkatetraenylcarbonyl, with the proviso that not both R 'and R "simultaneously represent hydrogen, 15 and R" 1 represent a hydrophilic group, and with water and optionally with a zinc salt, a preservative, an agent which makes the solution isotonic, and a buffer substance wherein the weight ratio of the phospholipid to the insulin is in the range of 1: 5 to 1: 10,000, and the concentration of the phospholipid is in the range of about 10 to about 200 µg / ml.
Insulin, som er opløst i et flydende medium, f.eks. vand, kan opbevares adskillige år ved stuetemperatur, og præparaterne er stabile inden for den pågældende periode. Hvis man imidlertid opvarmer en insulinopløsning til ca.Insulin dissolved in a liquid medium, e.g. water, can be stored for several years at room temperature, and the preparations are stable within that period. However, if an insulin solution is heated to ca.
25 80°C, denaturerer insulinet i løbet af få minutter, hvilket her betegnes varmedenaturering eller varmepolymerisering.25 80 ° C, the insulin denatures within minutes, which is referred to as heat denaturation or heat polymerization.
Hvis man ryster en insulinopløsning i nogle få dage ved en lavere temperatur, hvor der ikke sker nogen eller i det væsentlige ikke nogen varmedenaturering, f.eks. ved 41°C, vil 30 der ske en anden slags polymerisering, og denne slags poly-merisering betegnes her ikke-covalent grænsefladepolymerise-ring.Shaking an insulin solution for a few days at a lower temperature where no or substantially no heat denaturation occurs, e.g. at 41 ° C, another kind of polymerization will occur, and this kind of polymerization is referred to herein as non-covalent interface polymerization.
Hos insulinfabrikanterne, insulinforhandlerne og patienterne opbevares insulinpræparater sædvanligvis ved ca.In insulin manufacturers, insulin dealers and patients, insulin preparations are usually stored at approx.
DK 152832 BDK 152832 B
2 5°C, og der sker tilsyneladende ikke nogen grænsefladepoly-merisering i sådanne præparater, selv om præparaterne uundgåeligt fra tid til anden rystes under transport.2 5 ° C, and there does not appear to be any interface polymerization in such compositions, although the compositions are inevitably shaken from time to time during transport.
I løbet af de sidste år er der blevet ydet en sta-5 dig større indsats for at udvikle bærbare eller implanter-bare systemer til kontinuerlig infusion af insulin. Den mekaniske del af et apparat til kontinuerlig afgivelse af insulin omfatter i princippet bestanddele såsom et insulinreservoir, et pumpesystem og et egnet kateter til afgivelse 10 af insulin til patienten. Hvis insulinopløsningen tilføres af en pumpe, kan den også virke som insulinreservoir.Over the past few years, a steady effort has been made to develop portable or implantable systems for continuous infusion of insulin. The mechanical portion of a continuous insulin delivery apparatus comprises, in principle, components such as an insulin reservoir, a pump system, and a suitable catheter for delivering insulin to the patient. If the insulin solution is supplied by a pump, it can also act as an insulin reservoir.
Når insulin i kommercielt tilgængelige opløsninger anbringes i sådanne systemer, har det desværre vist sig, at insulinet har en evne til at undergå grænsefladepolymerise-15 ring ved legemstemperatur og dermed tilstoppe både mekaniske dele og tilførselskatetre. Dette karakteristikum ved insulinopløsninger har vist sig at være en stor hindring for yderligere udvikling og klinisk anvendelse af kontinuerligt infusionsapparatur.Unfortunately, when insulin in commercially available solutions is placed in such systems, it has been found that the insulin has the ability to undergo interface polymerization at body temperature and thus clog both mechanical parts and supply catheters. This characteristic of insulin solutions has proven to be a major obstacle to further development and clinical use of continuous infusion apparatus.
20 Det er klart, at insulinopløsninger i en hvilken som helst slags kontinuerligt tilføringsapparatur udsættes for bevægelser, der giver grænsefladepolymerisering. Den generelle ufuldkommenhed af kendte insulinpræparater i denne sammenhæng er righoldigt dokumenteret i litteraturen, jfr.It is clear that insulin solutions of any kind of continuous delivery apparatus are subjected to motions that provide interface polymerization. The general imperfection of known insulin preparations in this context is richly documented in the literature, cf.
25 f.eks. Diabetologia 19 (1980), 1-9.25 e.g. Diabetologia 19 (1980), 1-9.
Til løsning af dette problem er det blevet foreslået at anvende sure insulinopløsninger indeholdende gluta-minsyre eller asparaginsyre, jfr. Diabetes 30 (1981), 83. Insulin er imidlertid kemisk ustabilt i syre, selv ved tem-30 peraturer under legemstemperatur. Det er yderligere blevet foreslået at anvende insulinpræparater indeholdende ikke-ioniske overfladeaktive stoffer, jfr. DE offentliggørelsesskrift nr. 2.952.119. Ikke-ioniske overfladeaktive stoffer kan imidlertid betragtes som uønskede i lægemidler til pa-35 renteral anvendelse.To solve this problem, it has been proposed to use acidic insulin solutions containing glutamic acid or aspartic acid, cf. Diabetes 30 (1981), 83. However, insulin is chemically unstable in acid, even at temperatures below body temperature. It has further been proposed to use insulin preparations containing nonionic surfactants, cf. DE Publication No. 2,952,119. However, nonionic surfactants may be considered undesirable in drugs for parenteral use.
3 DK 152832 B3 DK 152832 B
sådanne gener overvindes ifølge den foreliggende opfindelse, der angår en fremgangsmåde til fremstilling af vandige insulinopløsninger, i hvilke insulinet er væsentligt mindre tilbøjeligt til at undergå ikke-covalent grænseflade-5 polymerisering under de betingelser, der foreligger i kontinuerligt insulintilførselsapparatur, end det er tilfældet med konventionelle insulinpræparater.such genes are overcome according to the present invention, which relates to a process for preparing aqueous insulin solutions in which the insulin is substantially less likely to undergo non-covalent interface polymerization under the conditions of continuous insulin delivery apparatus than is the case with conventional insulin preparations.
Det har nu overraskende vist sig, at vandige insulinopløsninger kan stabiliseres mod grænsefladepolymerise-10 ring, når der er mindst et phospholipid med formel I til stede i opløsningen.It has now surprisingly been found that aqueous insulin solutions can be stabilized against interface polymerization when at least one phospholipid of formula I is present in the solution.
I phospholipider med formel I er den hydrofile gruppe (R,n) fortrinsvis 2-(trimethylammonio)ethyl, 2-amino-ethyl, 2-carboxy-2-aminoethyl, 2,3-dihydroxypropyl eller 15 2,3,4,5,6-pentahydroxycyclohexyl, idet de pågældende phos pholipider giver særlig fordelagtige egenskaber, og blandt de pågældende substituenter foretrækkes 2-(trimethylammo-nio)ethyl. De ovennævnte alkylcarbonyl-, alkenylcarbonyl-, alkadienylcarbonyl-, alkatrienylcarbonyl- og alkatetraenyl-20 carbonylgrupper kan indeholde fra ca. 8 til ca. 22 carbon- atomer, og i en udføreselsform for denne opfindelse indeholder de fra ca. 12 til ca. 22 carbonatomer.In phospholipids of formula I, the hydrophilic group (R, n) is preferably 2- (trimethylammonio) ethyl, 2-aminoethyl, 2-carboxy-2-aminoethyl, 2,3-dihydroxypropyl or 2,3,4,5 , 6-pentahydroxycyclohexyl, the phosolipids concerned having particularly advantageous properties and of the substituents in question, 2- (trimethylammonio) ethyl is preferred. The aforementioned alkylcarbonyl, alkenylcarbonyl, alkadienylcarbonyl, alkatrienylcarbonyl and alkatetraenylcarbonyl groups may contain from ca. 8 to approx. 22 carbons, and in one embodiment of this invention, they contain from ca. 12 to approx. 22 carbon atoms.
De ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede vandige insulinopløsning kan indeholde 25 ét eller flere phospholipider med formlen I og eventuelt et zinksalt, et konserveringsmiddel, et middel, der gør opløsningen isotonisk, et pufferstof og andre fysiologisk acceptable forbindelser, der er kendt som additiver til insulinopløsninger .The aqueous insulin solution prepared by the process of the present invention may contain 25 one or more phospholipids of formula I and optionally a zinc salt, a preservative, an agent which is isotonic, a buffer and other physiologically acceptable compounds known as additives for insulin solutions.
30 En foretrukken undergruppe af forbindelser med formlen I er forbindelser, hvor R' og R" hver betegner alkylcarbonyl. En yderligere foretrukken undergruppe af forbindelser med formlen I er forbindelser, hvor R"1 betegner 2-(trimethylammonio)ethyl, hvilke forbindelser er kendt som 35 lecithiner. Yderligere foretrækkes forbindelser med formlen I, hvor R' og R" hver betegner alkylcarbonyl med fra ca. 8A preferred subgroup of compounds of formula I are compounds wherein R 1 and R "each represent alkylcarbonyl. A further preferred subgroup of compounds of formula I are compounds wherein R" 1 represents 2- (trimethylammonio) ethyl, which compounds are known like 35 lecithins. Further preferred are compounds of formula I wherein R 1 and R "each represent alkylcarbonyl having from about 8
4 DK 152832 B4 DK 152832 B
til ca. 16 carbonatomer eller fra ca. 12 til ca. 16 carbon-atomer, og R" * betegner 2-(trimethylammonio)ethyl. Den mest foretrukne undergruppe af forbindelser med formlen I er forbindelser, hvor R' og R" hver betegner octanoyl. Forbindel-5 ser med formlen I, hvor R' og R" hver betegner octanoyl, foretrækkes, fordi de ikke synes at danne liposomer og endvidere fordi de ikke ved lavere koncentrationer, f.eks. under ca. 160 μg/ml, synes at danne miceller.to approx. 16 carbon atoms or from approx. 12 to approx. 16 represents carbon (2) and R "represents 2- (trimethylammonio) ethyl. The most preferred subgroup of compounds of formula I are compounds wherein R 1 and R" each represent octanoyl. Compounds of formula I, wherein R 'and R "each represent octanoyl, are preferred because they do not appear to form liposomes and, moreover, because they do not appear at lower concentrations, e.g., below about 160 µg / ml. forming micelles.
Mængden af et phospholipid med formlen I, der er 10 nødvendig til stabilisering af en insulinopløsning, er i området fra ca. 10 til ca. 200 μg/ml, mere foretrukket fra ca. 10 til ca. 100 μg/ml, fortrinsvis fra ca. 25 til ca. 75 μg/ml, mest foretrukket fra ca. 30 til ca. 50 μg/ml, insulinopløsning. Koncentrationen af opløst insulin i de ved 15 fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede opløsninger er i området fra ca. 5 til ca. 1000 internationale enheder (I.U.) pr. ml eller endog højere.The amount of a phospholipid of formula I required to stabilize an insulin solution is in the range of about 10 to approx. 200 µg / ml, more preferably from ca. 10 to approx. 100 µg / ml, preferably from ca. 25 to approx. 75 µg / ml, most preferably from ca. 30 to approx. 50 µg / ml, insulin solution. The concentration of dissolved insulin in the solutions prepared by the process of the present invention is in the range of about 5 to approx. 1000 international units (I.U.) per ml or even higher.
Nogle af de stabiliserede insulinopløsninger, der er fremstillet ifølge de følgende eksempler, kan indeholde 20 liposomer. Det er imidlertid usandsynligt, at sådanne liposomer indeholder insulin, idet de er dannet før tilsætning af insulin. Hvis der er liposomer til stede i de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger, foretrækkes det, at insulinet i det væ-25 sentlige er uden for sådanne liposomer. Udtrykket i det væsentlige betegner, at fortrinsvis mere end 90%, dog helst mere end 99%, af insulinet er uden for eventuelt tilstedeværende liposomer.Some of the stabilized insulin solutions prepared according to the following examples may contain 20 liposomes. However, such liposomes are unlikely to contain insulin as they are formed before the addition of insulin. If liposomes are present in the insulin solutions prepared by the process of the present invention, it is preferred that the insulin be substantially outside such liposomes. The term essentially denotes that preferably more than 90%, but preferably more than 99%, of the insulin is outside any liposomes present.
Kendte liposomer indeholdende insulin, jfr. f.eks. 30 europæisk patentansøgning nr. 32.622, kan skelnes fra denne opfindelse både ved deres formål og på grund af, at tilstedeværelsen af insulin inde i en evt. tilstedeværende lipo-somvesikel i de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger udelukkende er 35 tilfældig. Medens de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger er beregnetKnown liposomes containing insulin, cf. eg. 30 European Patent Application No. 32622 can be distinguished from this invention both by their purpose and by the fact that the presence of insulin within an liposomal vesicle present in the insulin solutions prepared by the process of the present invention is purely random. While the insulin solutions prepared by the process of the present invention are calculated
s DK 152832 Bs DK 152832 B
til parenteral administration, er oral administration den primære begrundelse for at indkapsle insulin i liposomer. Et formål med liposomer indeholdende insulin er at beskytte insulinet mod uønsket kemisk angreb, f.eks. kemisk nedbrydning 5 af insulinet i maven, hvis insulinet administreres oralt.for parenteral administration, oral administration is the primary reason for encapsulating insulin in liposomes. One purpose of liposomes containing insulin is to protect the insulin from unwanted chemical attack, e.g. chemical breakdown 5 of the insulin in the stomach if the insulin is administered orally.
Artiklerne vedrørende liposomer indeholdende insulin beskæftiger sig slet ikke med fysisk stabilisering af insulinopløsninger mod grænsefladepolymerisering. I kendte liposomer indeholdende insulin er vægtforholdet mellem phospholipidet 10 og insulin f.eks. i området fra 1:0,01 til 1:0,001, medens vægtforholdet for de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger er i området fra 1:5 til 1:10.000, fortrinsvis fra 1:10 til 1:1000.The articles on liposomes containing insulin do not deal with the physical stabilization of insulin solutions against interface polymerization. In known liposomes containing insulin, the weight ratio of the phospholipid 10 to insulin is e.g. in the range of 1: 0.01 to 1: 0.001, while the weight ratio of the insulin solutions prepared by the process of the present invention is in the range of 1: 5 to 1: 10,000, preferably 1:10 to 1: 1000.
Vesttysk offentliggørelsesskrift nr. 2.652.636 an-15 går en fremgangsmåde til stabilisering af følsomme proteiner ved tilsætning af beskyttelsesforbindelser med amphophil opbygning. Modsat den foreliggende opfindelse opnås stabiliseringen ifølge ovennævnte offentliggørelsesskrift ved indkapsling af det følsomme protein for at undgå kontakt med 20 vand. Insulin er yderligere, ifølge ovennævnte offentliggørelsesskrifts terminologi, ikke at betragte som et følsomt protein.West German Publication No. 2,652,636 discloses a method for stabilizing sensitive proteins by the addition of protective compounds with amphophilic structure. Contrary to the present invention, the stabilization of the aforementioned disclosure is achieved by encapsulating the sensitive protein to avoid contact with water. In addition, according to the terminology of the aforementioned publication, insulin is not to be considered a sensitive protein.
Et formål med denne opfindelse er at holde insulinet i kontakt med vand, d.v.s i opløsning, idet insulinet 25 udelukkes fra kontakt med andre grænseflader.It is an object of this invention to keep the insulin in contact with water, i.e. in solution, the insulin 25 being excluded from contact with other interfaces.
De ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger indeholder fortrinsvis okse-, svine- eller humaninsulin.The insulin solutions prepared by the process of the present invention preferably contain bovine, porcine or human insulin.
Ifølge en foretrukken udførelsesform indeholder de 30 ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger zink. Mængden af zink skal imidlertid vælges således, at der ikke sker nogen udfældning. En god stabilitet mod grænsefladepolymerisering opnås i insulinopløsninger, hvor forholdet mellem den molære koncentra-35 tion af zinkioner, der er til rådighed for insulinet, og den molære koncentration af insulin beregnet som hexamer insulinIn a preferred embodiment, the insulin solutions prepared by the process of the present invention contain zinc. However, the amount of zinc must be chosen so that no precipitation occurs. Good stability to interface polymerization is achieved in insulin solutions where the ratio of the molar concentration of zinc ions available to the insulin to the molar concentration of insulin calculated as hexamer insulin
6 DK 152832B6 DK 152832B
er i området fra ca. 1,5 til ca. 4,6, fortrinsvis fra ca. 3 til ca. 4,5, mest foretrukket fra ca. 3,6 til ca. 4,3. Foretrukne zinksalte er opløselige zinksalte såsom zinkacetat eller -chlorid. Hvis de ved fremgangsmåden ifølge den fore-5 liggende opfindelse fremstillede insulinopløsninger indeholder forbindelser, der danner komplekser med insulin, såsom en aminosyre, f.eks. glycin eller histidin, eller en hydroxy c arboxy syre, f.eks. citronsyre, er kun en del af det totale zinkindhold til rådighed for insulinet.is in the area from approx. 1.5 to approx. 4.6, preferably from ca. 3 to approx. 4.5, most preferably from ca. 3.6 to approx. 4.3. Preferred zinc salts are soluble zinc salts such as zinc acetate or chloride. If the insulin solutions prepared by the process of the present invention contain compounds which form complexes with insulin, such as an amino acid, e.g. glycine or histidine, or a hydroxy carboxylic acid, e.g. citric acid, is only part of the total zinc content available for the insulin.
10 Et eksempel på fremstilling af insulinopløsninger ifølge opfindelsen omfatter opløsning af insulin, f.eks. krystallinsk zinkinsulin, f.eks. højrenset insulin såsom "monokomponent" insulin, jfr. britisk patentskrift nr. 1.285.023, i vand i nærværelse af syre, f.eks. saltsyre. Der 15 fremstilles separat en vandig opløsning af et konserveringsmiddel, f.eks. phenol, en alkylphenol såsom cresol, eller p-hydroxybenzoesyremethylester, og opløsningen indeholder om ønsket også et middel, der gør opløsningen isotonisk, såsom natriumchlorid eller glycerol. Konserveringsmiddelopløsning-20 en kan endvidere indeholde et pufferstof såsom natriumortho-phosphat, natriumcitrat, natriumacetat eller TRIS (tris(hydroxymethyl) aminomethan) . Den resulterende konserveringsmiddelopløsning sættes derefter om ønsket til den sure insulinopløsning efterfulgt af tilsætning af en base, f.eks. en 25 natriumhydroxydopløsning, til indstilling af pH-værdien på neutral. I sammenhæng med denne opfindelse angiver betegnelsen neutral en pH-værdi i området fra ca. 6,5 til ca. 8. Phospholipidet med formlen I kan sættes til insulinopløsningen som en opløsning eller kolloid opløsning, der er 30 fremstillet ved at opløse eller suspendere phospholipidet med formlen I i vand og om nødvendigt underkaste en eventuel suspension for ultralydbehandling før blanding med insulinopløsningen. Phospholipidopløsningen kan om ønsket indeholde et pufferstof og et konserveringsmiddel. Efter tilblanding 35 af phospholipidet kan insulinpræparatets pH-værdi indstilles på neutral. Den resulterende insulinopløsning fyldes tilAn example of the preparation of insulin solutions according to the invention comprises dissolving insulin, e.g. crystalline zinc insulin, e.g. high purified insulin such as "monocomponent" insulin, cf. British Patent Specification No. 1,285,023, in water in the presence of acid, e.g. hydrochloric acid. Separately an aqueous solution of a preservative, e.g. phenol, an alkyl phenol such as cresol, or p-hydroxybenzoic acid methyl ester, and the solution also contains, if desired, an agent which renders the solution isotonic, such as sodium chloride or glycerol. The preservative solution may further contain a buffer such as sodium orthophosphate, sodium citrate, sodium acetate or TRIS (tris (hydroxymethyl) aminomethane). The resulting preservative solution is then added, if desired, to the acidic insulin solution followed by addition of a base, e.g. a sodium hydroxide solution to adjust the pH to neutral. In the context of this invention, the term neutral indicates a pH in the range of about 6.5 to approx. 8. The phospholipid of formula I may be added to the insulin solution as a solution or colloidal solution prepared by dissolving or suspending the phospholipid of formula I in water and subjecting, if necessary, to ultrasound treatment prior to admixture with the insulin solution. The phospholipid solution may, if desired, contain a buffer and a preservative. After admixture of the phospholipid, the pH of the insulin preparation can be set to neutral. Make up the resulting insulin solution
7 DK 152832 B7 DK 152832 B
slut op til det beregnede rumfang ved tilsætning af vand, steriliseres derefter ved filtrering og overføres efterfølgende aseptisk til sterile hætteglas, som derefter lukkes.add up to the calculated volume by adding water, then sterilize by filtration and then transfer aseptically to sterile vials, which are then closed.
Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse 5 kan udføres ved at blande insulin med en forbindelse med formlen I og evt. med et zinksalt, et konserveringsmiddel, et middel, der gør opløsningen isotonisk, og et pufferstof i nærværelse af vand.The process of the present invention 5 can be carried out by mixing insulin with a compound of formula I and optionally. with a zinc salt, a preservative, an agent that makes the solution isotonic, and a buffer in the presence of water.
Nogle forbindelser med formel I er kendte, og de 10 resterende forbindelser med formel I kan fremstilles analogt med fremstillingen af kendte forbindelser.Some compounds of formula I are known and the remaining 10 compounds of formula I can be prepared analogously to the preparation of known compounds.
Yderligere detaljer for udførelsen af den foreliggende opfindelse gives i de følgende eksempler. Det insulinudgangsmateriale, der benyttes i eksemplerne, indeholder fra 15 ca. 20 til ca. 35 μg zink pr. mg nitrogen. Bestemmelsen af stabilitetsfaktoren fremgår af det følgende.Further details of the practice of the present invention are given in the following examples. The insulin starting material used in the Examples contains from about 15 20 to approx. 35 µg zinc per mg of nitrogen. The determination of the stability factor is shown below.
Til bestemmelse af insulinopløsningernes stabilitet mod grænsefladepolymerisering underkastes opløsningerne en stabilitetstest under forcerede betingelser på følgende 20 måde: 12,5 ml's hætteglas indeholdende 10 ml testprøve forsynes hver med en gummiprop og anbringes vertikalt i et rysteapparatur (forhandles af Heto, Danmark), der er totalt neddyppet i et vandbad, som holdes ved 41°C +/- 0,1°C. Hæt-25 teglassene underkastes horisontalt, rokkende bevægelser med en frekvens og amplityde på henholdsvis 100 rpm og 50 mm.To determine the stability of the insulin solutions against interface polymerization, the solutions are subjected to a stability test under forced conditions as follows: 12.5 ml vials containing 10 ml of test sample are each provided with a rubber stopper and placed vertically in a shaker (sold by Heto, Denmark) in total immersed in a water bath maintained at 41 ° C +/- 0.1 ° C. The cap-25 slides are subjected to horizontal, rocking movements with a frequency and amplitude of 100 rpm and 50 mm, respectively.
Testprøvernes opalecens bestemmes med regelmæssige tidsintervaller på et "Fischer DRT 1000 nefelometer" (forhandles af Fischer, Canada). Det skønnes at der er sket 30 grænsefladepolymerisering, når uklarheden overstiger 10 NTU (nephelometric turbidity units).The opalescence of the test samples is determined at regular time intervals on a "Fischer DRT 1000 nephelometer" (negotiated by Fischer, Canada). It is estimated that 30 interface polymerization has occurred when the cloudiness exceeds 10 NTU (nephelometric turbidity units).
Stabilitetsfaktoren beregnes som forholdet mellem den tid der går, før der sker grænsefladedenaturering i testprøven, og den tilsvarende tid for en kontrolprøve, der 35 er fremstillet på samme'måde som testprøven, med det forbehold, at der ikke er tilsat en forbindelse med formlen I.The stability factor is calculated as the ratio of time elapsed before interface denaturation in the test sample to the corresponding time for a control sample prepared in the same manner as the test sample, with the proviso that no compound of formula I is added. .
Eksempel 1Example 1
DK 152832 BDK 152832 B
8 500 mg semisyntetisk humaninsulin opløses i 10 ml 0,045 N saltsyre, og der tilsættes 359 mg p-hydroxybenzoe-syremethylester, som er opløst i 300 ml destilleret vand.Dissolve 8,500 mg of semisynthetic human insulin in 10 ml of 0.045 N hydrochloric acid and add 359 mg of p-hydroxybenzoic acid methyl ester, which is dissolved in 300 ml of distilled water.
5 Der tilsættes endvidere 476 mg natriumacetattrihydrat, 2,46 g natriumchlorid og 4,73 ml af en 0,2 N natriumhydroxydop-løsning opløst i 15 ml destilleret vand. 9 mg dimyristo-yl,L-alfa-phosphatidylcholin suspenderes i 10 ml af en opløsning af 70 mg natriumchlorid, 13,6 mg natriumacetat og 10 10 mg p-hydroxybenzoesyremethylester i destilleret vand. Der bobles nitrogen gennem opslæmningen, som behandles med ultralyd i et ultralydbad i 2 timer. Den resulterende kolloide opløsning sættes under omrøring til insulinopløsningen. pH-værdien indstilles på 7,45 med 0,2 N saltsyre eller en 0,2 N 15 natriumhydroxydopløsning, og der tilsættes destilleret vand til et rumfang på 350 ml. Den resulterende insulinopløsnings stabilitetsfaktor er over 125.Further, 476 mg of sodium acetate trihydrate, 2.46 g of sodium chloride and 4.73 ml of a 0.2 N sodium hydroxide solution dissolved in 15 ml of distilled water are added. 9 mg of dimyristoyl, L-alpha-phosphatidylcholine are suspended in 10 ml of a solution of 70 mg of sodium chloride, 13.6 mg of sodium acetate and 10 mg of p-hydroxybenzoic acid methyl ester in distilled water. Nitrogen is bubbled through the slurry, which is treated with ultrasound in an ultrasonic bath for 2 hours. The resulting colloidal solution is stirred into the insulin solution. The pH is adjusted to 7.45 with 0.2 N hydrochloric acid or a 0.2 N sodium hydroxide solution, and distilled water is added to a volume of 350 ml. The resulting insulin solution stability factor is above 125.
Eksempel 2 9,65 g svineinsulin opløses i 400 ml 0,02 N salt-20 syre, der tilsættes 5,0 g krystallinsk phenol og 40 g vandfrit glycerol, og der tilsættes yderligere destilleret vand til et rumfang på 2200 ml. pH-værdien indstilles på 7,45 med en 0,2 N natriumhydroxydopløsning. 125 mg distearoyl,L-alfa-phosphatidylcholin opløses ved forsigtig opvarmning i 2 25 ml ethanol (96%) og sprøjtes under kraftig omrøring via en kanyle ned i 100 ml destilleret vand med en temperatur på 70°C. Den resulterende, uklare opløsning behandles i 15 min med ultralyd med en højenergiultralydsonde, den resulterede, kollide opløsning sættes under omrøring til insulinopløs-30 ningen, og der tilsættes destilleret vand til et rumfang på 2500 ml. pH-værdien indstilles om nødvendigt på 7,45. Stabilitetsfaktoren er over 30.Example 2 9.65 g of porcine insulin is dissolved in 400 ml of 0.02 N hydrochloric acid, 5.0 g of crystalline phenol and 40 g of anhydrous glycerol are added, and further distilled water is added to a volume of 2200 ml. The pH is adjusted to 7.45 with a 0.2 N sodium hydroxide solution. Dissolve 125 mg of distearoyl, L-alpha-phosphatidylcholine by gentle heating in 25 ml of ethanol (96%) and spray vigorously, through a cannula, into 100 ml of distilled water at a temperature of 70 ° C. The resulting cloudy solution is treated for 15 minutes with ultrasound with a high-energy ultrasound probe, the resulting collide solution is stirred into the insulin solution and distilled water is added to a volume of 2500 ml. If necessary, adjust the pH to 7.45. The stability factor is over 30.
Eksempel 3-8Examples 3-8
9 DK 152832B9 DK 152832B
Der fremstilles insulinopløsninger på analog måde som beskrevet i eksempel 1 med det forbehold, at de anvendte phospholipider er lecithiner, hvori de hydrofobe dele, 5 d.v.s. R' og R", er identiske og er som angivet i tabel I. Resultaterne fremgår også af tabel I.Insulin solutions are prepared in an analogous manner as described in Example 1, with the proviso that the phospholipids used are lecithins, wherein the hydrophobic moieties, i.e. R 'and R "are identical and are as given in Table I. The results are also shown in Table I.
Tabel I _______Table I _______
Eksempel R' og Insulin- Stabilitets- nr.___art_faktor_ 10 3 myristoyl svin over 120 4 palmitoyl svin 104 5 stearoyl svin over 117 6 lauroyl human over 133 7 myristoyl human over 133 15 8 palmitoyl human 75Example R 'and Insulin Stability No. __Article Factor_ 10 3 myristoyl pigs above 120 4 palmitoyl pigs 104 5 stearoyl pigs above 117 6 lauroyl human over 133 7 myristoyl human over 133 15 8 palmitoyl human 75
Eksempel 9Example 9
Der fremstilles en insulinopløsning på analog måde som beskrevet i eksempel 1 med det forbehold, at det anvendte phospholipid er æglecithin, og det anvendte insulin er 20 svineinsulin. Stabilitetsfaktoren er 96.An insulin solution is prepared in an analogous manner as described in Example 1, with the proviso that the phospholipid used is egg lecithin and the insulin used is porcine insulin. The stability factor is 96.
Eksempel 10-14Examples 10-14
Der fremstilles insulinopløsninger på analog måde som beskrevet i eksempel 1 med det forbehold, at svineinsulin er tilsat i en mængde, der giver de i tabel II angivne 25 slutkoncentrationer. Resultaterne fremgår også af tabel II.Insulin solutions are prepared in an analogous manner as described in Example 1, with the proviso that swine insulin is added in an amount which gives the final concentrations indicated in Table II. The results are also shown in Table II.
10 DK 152832 BDK 152832 B
Tabel IX__Table IX__
Eksempel Insulin, Stabilitets- nr._I. U. /ml_faktor_ 10 20 over 120 5 11 40 over 120 12 100 97 13 200 79 14 500 53Example Insulin, Stability No._I. U. / ml_factor_ 10 20 over 120 5 11 40 over 120 12 100 97 13 200 79 14 500 53
Eksempel 15 10 1,50 g svineinsulin opløses i 6,5 ml 0,2 N salt syre, og der tilsættes vand til et rumfang på 50 ml. 1,0 g p-hydroxybenzoesyremethylester og 1,78 g natriumphosphat opløses i 900 ml destilleret vand, og insulinopløsningen tilsættes. pH-værdien indstilles på 7,45 med en 0,2 N natrium-15 hydroxydopløsning. En kolloid dimyristoyl,L-alfa-phosphati-dylcholinopløsning, der er fremstillet på analog måde som beskrevet i eksempel 2, tilsættes sammen med destilleret vand til et rumfang på 1000 ml til opnåelse af en phospholipids lutkoncentration på 50 μg/ml. Stabilitetsfaktoren er 20 over 30.Example 15 10 1.50 g of porcine insulin is dissolved in 6.5 ml of 0.2 N hydrochloric acid and water is added to a volume of 50 ml. Dissolve 1.0 g of p-hydroxybenzoic acid methyl ester and 1.78 g of sodium phosphate in 900 ml of distilled water and add the insulin solution. The pH is adjusted to 7.45 with a 0.2 N sodium hydroxide solution. A colloidal dimyristoyl, L-alpha-phosphatidylcholine solution prepared in an analogous manner as described in Example 2 is added together with distilled water to a volume of 1000 ml to obtain a phospholipid lute concentration of 50 µg / ml. The stability factor is 20 over 30.
Eksempel 16Example 16
Der fremstilles en insulinopløsning på analog måde som beskrevet i eksempel 15 med det forbehold, at den endelige opløsning indeholder 20 I.U. insulin pr. ml. Stabili-25 tetsfaktoren er over 17.An insulin solution is prepared in an analogous manner as described in Example 15, with the proviso that the final solution contains 20 I.U. insulin per ml. The stability factor is over 17.
Eksempel 17Example 17
u DK 152832Bu DK 152832B
Der fremstilles en insulinopløsning på analog måde som beskrevet i eksempel 15 med det forbehold, at den endelige insulinkoncentration er 500 I.U./ml, og det endelige 5 indhold af dimyristoyl,L-alfa-phosphatidylcholin er 50 μg/ml. Stabilitetsfaktoren er over 30.An insulin solution is prepared by analogy as described in Example 15, with the proviso that the final insulin concentration is 500 I.U./ml and the final 5 content of dimyristoyl, L-alpha-phosphatidylcholine is 50 µg / ml. The stability factor is over 30.
Eksempel 18-20Examples 18-20
Der fremstilles insulinopløsninger på analog måde som beskrevet i eksempel 2, med det forbehold, at dimyri-10 stoyl,L-alfa-phosphatidylcholin anvendes i en mængde til opnåelse af den i tabel III angivne slutkoncentration. Resultaterne fremgår også af tabel III.Insulin solutions are prepared in an analogous manner as described in Example 2, with the proviso that dimyro-10oyl, L-alpha-phosphatidylcholine is used in an amount to obtain the final concentration indicated in Table III. The results are also shown in Table III.
Tabel III________Table III________
Eksempel Dimyristoylforbindelse, Stabilitets- 15 nr _ _μg/'ml_ faktor 18 1 1,3 19 10 1,8 20 50 over 33Example Dimyristoyl Compound, Stability 15 No. _µg / ml ml factor 18 1 1.3 19 10 1.8 20 50 over 33
Eksempel 21 20 Dioctanoyl,L-alfa-phosphatidylcholin opløses i destilleret vand og sættes, i en tilstrækkelig mængde til opnåelse af en slutkoncentration på 30 μg/ml, til en insulinopløsning, der er fremstillet analogt med insulinopløsningen i eksempel 1. Stabilitetsfaktoren er over 63.Example 21 Dioctanoyl, L-alpha-phosphatidylcholine is dissolved in distilled water and added, in a sufficient amount to reach a final concentration of 30 µg / ml, to an insulin solution prepared analogous to the insulin solution of Example 1. The stability factor is above 63 .
Claims (10)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK479182A DK152832C (en) | 1981-10-30 | 1982-10-29 | PROCEDURE FOR PREPARING Aqueous INSULIN SOLUTION PHYSICALLY STABILIZED AGAINST INTERFACE POLYMERIZATION |
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DK478681 | 1981-10-30 | ||
DK478681 | 1981-10-30 | ||
DK324782 | 1982-07-20 | ||
DK324782 | 1982-07-20 | ||
DK479182A DK152832C (en) | 1981-10-30 | 1982-10-29 | PROCEDURE FOR PREPARING Aqueous INSULIN SOLUTION PHYSICALLY STABILIZED AGAINST INTERFACE POLYMERIZATION |
DK479182 | 1982-10-29 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK479182A DK479182A (en) | 1983-05-01 |
DK152832B true DK152832B (en) | 1988-05-24 |
DK152832C DK152832C (en) | 1988-12-05 |
Family
ID=27221764
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK479182A DK152832C (en) | 1981-10-30 | 1982-10-29 | PROCEDURE FOR PREPARING Aqueous INSULIN SOLUTION PHYSICALLY STABILIZED AGAINST INTERFACE POLYMERIZATION |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
DK (1) | DK152832C (en) |
-
1982
- 1982-10-29 DK DK479182A patent/DK152832C/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK479182A (en) | 1983-05-01 |
DK152832C (en) | 1988-12-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI80595C (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV EN VATTENHALTIG INSULINLOESNING SOM AER FYSIKALISKT STABILISERAD MOT GRAENSYTEPOLYMERISATION. | |
US4476118A (en) | Stabilized insulin preparations | |
EP0177478B2 (en) | Prolonged release of biologically active somatotropins | |
US5411951A (en) | Prolonged release of biologically active somatotropin | |
US4985404A (en) | Prolonged release of biologically active polypeptides | |
EP2120859B1 (en) | Sustained-release formulations comprising bmp-7 crystals | |
US7037516B2 (en) | Non-aqueous surfactant-containing formulations for extended release of somatotropin | |
US5849704A (en) | Pharmaceutical formulation | |
MX2008001129A (en) | Peroxide removal from drug delivery vehicle. | |
JPS6038398A (en) | Stable protein aqueous solution and preparation | |
US20100009911A1 (en) | Osteogenic synergic composition | |
CN1177300A (en) | Enrofloxacine injection or infusion solutions | |
US5474980A (en) | Prolonged release of biologically active somatotropins | |
DK152832B (en) | Process for preparing an aqueous insulin solution which is physically stabilized against boundary surface polymerization | |
KR20030068541A (en) | Infusion of ciprofloxacin having reduced acid content and being stable in storage | |
WO2002087592A1 (en) | Injectable pamidronate disodium | |
JPH0366291B2 (en) | ||
KR950003493B1 (en) | Aqueous elcatonin solution composition | |
JP3103535B2 (en) | Prefilled syringe preparation of calcitonin | |
WO2001062296A2 (en) | Non-aqueous injectable formulations for extended release of somatotropin | |
IT201800001890A1 (en) | PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF POSTOPERATIVE PAIN |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PBP | Patent lapsed |