DK152517B - Fremgangsmaade til paavisning af infektioes aids-virus - Google Patents
Fremgangsmaade til paavisning af infektioes aids-virus Download PDFInfo
- Publication number
- DK152517B DK152517B DK379385A DK379385A DK152517B DK 152517 B DK152517 B DK 152517B DK 379385 A DK379385 A DK 379385A DK 379385 A DK379385 A DK 379385A DK 152517 B DK152517 B DK 152517B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cells
- serum
- virus
- cultured
- aids
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
i
DK 152517B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til påvisning af infektiøs AIDS-virus, LAV/HTLV-III virus, i vævsvæsker, såsom blodserum eller andre vævsvæsker.
Sygdommen AIDS ("acquired immunodeficiency syndrome") 5 har kun været kendt i ganske få år, men har udviklet sig nærmest eksplosivt siden 1981. Indtil udgangen af 1984 er der i USA registreret mere end 10 000 nye tilfælde, men det ventes, at yderligere 10 000 tilfælde vil opstå i 1985.
10 AIDS skyldes et virus, der betegnes LAV ("lymphadenopathy- associated virus") eller HTLV-III ("human T-cell lympho-tropic virus type III"). Dette virus inficerer specifikt T-4 lymphocytter, der spiller en central rolle ved kontrol af immunsystemet. Sygdommen er særlig farlig over-15 for personer med svækket immunsystem, idet patienten udsættes for en risiko for at få en lang række sygdomme, som immunsystemet normalt beskytter imod. Eksempler herpå er lungelidelser, som på sådanne patienter udvikler sig dødeligt på kort tid, og Kaposi's sarcom, der hid-20 til har været en overordentlig sjælden sygdom, men som angriber AIDS-ofre med en hyppighed på over 30?ό. Det er også kendt, at mange AIDS-patienter lider af eller har haft hepatitis.
Selv om antallet af patienter med infektiøs AIDS er 25 stærkt stigende, har man konstateret, at et langt større antal personer har udviklet antistoffer mod AIDS, uden at de har udviklet sygdommen. Det har også vist sig, at personer kan være smittet med AIDS og således frembyde en smitterisiko, uden at de endnu har udviklet 30 antistoffer mod AIDS.
For at søge at begrænse sygdommens udbredelse er det
DK 152517 B
2 af stor betydning at påvise alle tilfælde af infektiøs AIDS, således at smitte fra sådanne patienter kan forebygges. Da smitte især sker ved overførsel af blod eller anden vævsvæske fra en smittebærer, er det af stor be-5 tydning at kunne påvise, om bloddonorer har infektiøs AIDS.
Hidtil har man ikke haft nogen metode til at påvise tilstedeværelsen af infektiøs AIDS, hvorimod det har været muligt at påvise antistoffer mod AIDS i vævsvæsker.
10 I en række lande har man indført kontrol af alle blod donorer for tilstedeværelsen af antistoffer mod AIDS og afvist alle positive. Dette sikrer imidlertid ikke mod risikoen for at tappe blod fra AIDS-smittede personer, som (endnu) ikke har udviklet antistoffer.
15 Den foreliggende opfindelse har til formål at løse oven nævnte problem ved at anvise en fremgangsmåde til påvisning af infektiøs AIDS i prøver af vævsvæske.
Endvidere har opfindelsen til formål at påvise, om der i injektionspræparater findes infektiøse AIDS.
20 Fra Nature, vol., 316, 1985, p. 69 - 74 og 262 - 265, er det kendt, at virus fremstillet fra HTLV-III genom er infektiøs og udøver en betydelig cytopatisk effekt in vitro på T4-positive celler. Således har man dyrket humane celler i suspension med T4-markører i et substrat 25 indeholdende HTLV-III virus. Efter dyrkning i nogle dage har der kunnet påvises en cytopatisk effekt på cellerne.
De ovennævnte undersøgelser har imidlertid ikke ført fagmanden på den tanke, at der kan udvikles en sikker 30 metode til påvisning af infektiøs AIDS i prøver af vævs-
DK 152517B
3 væske ved dyrkning af humane celler med T4-markører i et substrat.
Den foreliggende opfindelse er baseret på den idé, at man kan anvende en cellelinie med høj affinitet til 5 LAV/HTLV-III virus, der dyrkes som monolagskultur under nærmere angivne betingelser. Det har overraskende vist sig, at man derved kan opnå en meget sikker identifikation og en rationel og forenklet procedure. Fremgangsmåden, der er af den i indledningen til krav 1 angiv-10 ne art, er således ejendommelig ved det i den kende tegnende del af krav 1 anførte.
De til udøvelse af opfindelsen særlig egnede humane celler er af typen lymfocytter, leukæmiceller eller celler fra hjerne-, lunge-, slimhinde-, lever- eller 15 nyrevæv.
Ued den omhandlede fremgangsmåde vil der i afhængighed af mængden af tilstedeværende LAV/HTLV-III virus, på kortere eller længere tid kunne påvises en cytopatisk effekt af de dyrkede celler. Påvisningen kan ske mikro-20 skopisk, men enhver anden påvisningsmetode kan dog be nyttes. Eksempler herpå er specifikke farvereaktioner eller 1) fiksering, farvning og mikroskopi 2) elektronmikroskopi 25 3) bestemmelse af viral nucleinsyre ved a) specifik farvning b) specifikke inhibitorer og nucleinsyresyntese 4) plaque-assay metode 5) fluorescens antistof-test 30 a) direkte metode b) indirekte metode 6) Reverse transcriptase-aktivitetsmåling.
DK 152517B
4
De under pkt. 1, 3, 4 og 5 nævnte metoder er beskrevet af Robert J. Kuchler: "Biochemical Methods in Cell Culture and Virology", 1977, Dowdon, Hutchinsom & Ross,
Juc.
5 Det er påvist, at visse virus-typer, som er nært beslæg tet med LAV/HTLV-III, forårsager samme eller tilsvarende cytopatiske effekt på humane celler med T4-markører. Eksempler herpå er vira af typen visna, såsom Maedi-vis-na virus, der angriber får, se Nature New Biology, vol.
10 237, May 24, 1972, p. 114-115. LAV/HTLV-III virus er nu klassificeret som tilhørende underfamilien lenti-virus, hvortil også Maedi-visna virus hører, idet RNA-strukturen og de morfologiske egenskaber viser et nært slægtskab.
15 Ved den omhandlede fremgangsmåde til påvisning af AIDS-virus kan som positiv kontrol benyttes en prøve med et kendt indhold af AIDS-virus. I stedet kan man dog anvende et virus med tilsvarende egenskaber, såsom Maedi-visna. Derved undgås risikoen for smitte af laboratorie- 20 personalet med AIDS-virus fra de benyttede reagenser og hjælpemidler.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen skal i det efterfølgende illustreres nærmere ved hjælp af eksempler.
EKSEMPEL 1 25 Den udvalgte cellelinie podes i en vævsdyrkningsbakke med 24 huller, idet der i hvert hul podes samme antal celler, så der på 2 dage opnås 2/3 konfluent, idet der anvendes et serumholdigt vækstmedium. Efter opnåelse af en tilpas vækst (2/3 konfluent) skylles hvert hul 30 tre gange med vækstmedium indeholdende penicillin og streptomycin, men uden indhold af serum.
DK 152517B
5
Kulturen inkuberes med den tredie portion skyllevaske i 10 minutter ved 37 °C, hvorefter vækstmediet fjernes. Derefter behandles hullerne individuelt på følgende måde: 5 1. række huller (fire huller til positiv kontrol) tilsæt tes 1 ml vækstmedium uden indhold af serum, men med fortyndinger af LAV/HTLV-III virus til det dobbelte rumfang.
2. række huller (fire huller til negativ kontrol). Til 10 hvert hul sættes 0,5 ml standardiseret prøvemateriale, der er fundet fri for virus, og 0,5 ml vækstmedium uden serum.
3-6. rækker (testrækker). I hver række til fire test-huller tilsættes 0,5 ml af samme prøvemateriale i de 15 fire huller og 0,5 ml vækstmedium uden serum.
Dyrkningsskålene inkuberes ved 37 °C i 4 timer. Derefter suges al væske fra samtlige huller. Til hvert hul sættes dernæst 3 ml vækstmedium med antibiotica (penicillin og streptomycin) og 2% føtal kalveserum. Dyrkningsskå-20 lene inkuberes derefter ved 37 °C i op til 30 dage.
Der foretages medieskift med vækstmedium indeholdende antibiotica og 2% føtal kalveserum 3 gange ugentlig.
Hver dag foretages mikroskopisk iagttagelse for cytopa-tisk effekt (CPE), som vurderes efter følgende skala: 25 0 - konfluent, normale sunde celler, ingen CPE, 0 - 30¾ PFU (plaque forming unit).
1+ - Isolerede "foci" og celler med CPE, PFU = ca. 50¾.
2+ - Omkring 50¾ af cellerne viser CPE, PFU = ca. 80¾.
3+ - komplet destruktion af cellelag, PFU = ca. 100¾.
DK 152517B
6 EKSEMPEL 2
Den i eksempel 1 beskrevne procedure gentages med den ændring, at der til positiv kontrol anvendes Maedi-visna virus i stedet for LAV/HTLV-III virus.
5 Undersøgelser af en række væskeprøver fra blodserum ved de i eksempel 1 og 2 beskrevne metoder gav samme resultater.
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til påvisning af infektiøs AIDS-virus, LAV/HTLV-III virus, i en væskeprøve, såsom blodserum eller andre vævsvæsker, hvorved humane celler med T4-5 markører dyrkes i et substrat i nærværelse af væske- prøven, hvorefter de dyrkede celler undersøges for cyto-patisk effekt, kendetegnet ved, at celler udvalgt fra en human cellelinie med høj affinitet til LAV/HTLV-III virus dyrkes som monolagskultur ved opforme-10 ring i et serumholdigt substrat til udvikling af aktive celler, hvorefter de aktive celler inkuberes med et serumfrit substrat indeholdende væskeprøven, hvorpå cellekulturen dyrkes videre med et substrat med lavt indhold af serum.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der benyttes humane celler af typen lymfocytter, leukæmiceller eller celler fra hjerne-, lunge-, slimhinde-, lever- eller nyrevæv.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet 20 ved, at dyrkningen af monolagskulturen med lavt indhold af serum udføres i et tidsrum på indtil 30 dage.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3, kendeteg-n e t ved, at cellerne i monolagskulturen efter dyrkningen undersøges mikroskopisk for cytopatisk effekt.
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK379385A DK152517B (da) | 1985-08-21 | 1985-08-21 | Fremgangsmaade til paavisning af infektioes aids-virus |
| AU63322/86A AU6332286A (en) | 1985-08-21 | 1986-08-20 | A method of detecting infectious aids virus |
| PCT/DK1986/000093 WO1987001135A1 (en) | 1985-08-21 | 1986-08-20 | A method of detecting infectious aids virus |
| EP19860905238 EP0233264A1 (en) | 1985-08-21 | 1986-08-20 | A method of detecting infectious aids virus |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK379385A DK152517B (da) | 1985-08-21 | 1985-08-21 | Fremgangsmaade til paavisning af infektioes aids-virus |
| DK379385 | 1985-08-21 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK379385D0 DK379385D0 (da) | 1985-08-21 |
| DK379385A DK379385A (da) | 1987-03-23 |
| DK152517B true DK152517B (da) | 1988-03-07 |
Family
ID=8126828
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK379385A DK152517B (da) | 1985-08-21 | 1985-08-21 | Fremgangsmaade til paavisning af infektioes aids-virus |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0233264A1 (da) |
| AU (1) | AU6332286A (da) |
| DK (1) | DK152517B (da) |
| WO (1) | WO1987001135A1 (da) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU609447B2 (en) * | 1987-02-19 | 1991-05-02 | Nissin Shokuhin Kabushiki Kaisha | Methods and materials for hiv detection and therapy |
-
1985
- 1985-08-21 DK DK379385A patent/DK152517B/da not_active Application Discontinuation
-
1986
- 1986-08-20 AU AU63322/86A patent/AU6332286A/en not_active Abandoned
- 1986-08-20 WO PCT/DK1986/000093 patent/WO1987001135A1/en not_active Application Discontinuation
- 1986-08-20 EP EP19860905238 patent/EP0233264A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0233264A1 (en) | 1987-08-26 |
| WO1987001135A1 (en) | 1987-02-26 |
| DK379385A (da) | 1987-03-23 |
| DK379385D0 (da) | 1985-08-21 |
| AU6332286A (en) | 1987-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nowinski et al. | Oncogenicity of AKR endogenous leukemia viruses | |
| Blood | Human immunodeficiency virus (HIV) | |
| Strizki et al. | Infection of primary human microglia and monocyte-derived macrophages with human immunodeficiency virus type 1 isolates: evidence of differential tropism | |
| Montagnier | Lymphadenopathy-associated virus: from molecular biology to pathogenicity | |
| Carrascosa et al. | Methods for growing and titrating African swine fever virus: field and laboratory samples | |
| Japour et al. | Standardized microtiter assay for determination of syncytium-inducing phenotypes of clinical human immunodeficiency virus type 1 isolates | |
| Nara et al. | The biology of human immunodeficiency virus‐1 IIIB infection in the chimpanzee: in vivo and in vitro correlations | |
| Selling et al. | Plaque assay for black beetle virus | |
| Youngner et al. | Temperature-sensitive mutants of vesicular stomatitis virus are conditionally defective particles that interfere with and are rescued by wild-type virus | |
| Friesen et al. | Some physicochemical and immunological properties of an avian leucosis virus (RIF) | |
| Schmidt et al. | Plaque assay and improved yield of human coronaviruses in a human rhabdomyosarcoma cell line | |
| Kalter et al. | Viral infections of nonhuman primates | |
| Dannevig et al. | Isolation in cell culture of nodavirus from farmed Atlantic halibut Hippoglossus hippoglossus in Norway | |
| Gendelman et al. | The inability of human immunodeficiency virus to infect chimpanzee monocytes can be overcome by serial viral passage in vivo | |
| Whetter et al. | Equine infectious anemia virus derived from a molecular clone persistently infects horses | |
| Ju et al. | Isolation of a heterogeneous population of temperature-sensitive mutants of measles virus from persistently infected human lymphoblastoid cell lines. | |
| Phillpotts et al. | A search for persistent virus infection in Crohn's disease. | |
| Sellon et al. | Equine infectious anemia virus replication is upregulated during differentiation of blood monocytes from acutely infected horses | |
| DK152517B (da) | Fremgangsmaade til paavisning af infektioes aids-virus | |
| Kim et al. | Genomic variation and segregation of equine infectious anemia virus during acute infection | |
| Crane et al. | Separate epitopes in the envelope of visna virus are responsible for fusion and neutralization: biological implications for anti-fusion antibodies in limiting virus replication | |
| Haas et al. | Genomic masking and rescue of dual-tropic murine leukemia viruses: role of pseudotype virions in viral lymphomagenesis | |
| Santillana-Hayat et al. | Transient immunosuppressive effect induced in rabbits and mice by the human spumaretrovirus prototype HFV (human foamy virus) | |
| McCormick et al. | Replication of mengovirus in HeLa cells preinfected with nonreplicating poliovirus | |
| Hollister et al. | criteria for species differentiation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PRF | Application refused |