DE936890C

DE936890C - Process for the preparation of live foot-and-mouth disease virus vaccines

Info

Publication number: DE936890C
Application number: DEB29028A
Authority: DE
Inventors: Albert Dr Med Vet Demnitz; Bernhard Dr Med Vet Schneider
Original assignee: Behringwerke AG
Current assignee: Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
Priority date: 1953-12-29
Filing date: 1953-12-29
Publication date: 1955-12-22

Description

Verfahren zur Herstellung von lebendes Maul- und Klauenseuche-Virus enthaltenden Impfstoffen Die aktive Immunisierung gegen Maul- und Klauenseuche (MKS) wurde bislang in den weitaus überwiegenden Fällen mit einem Impfstoff nach Schmidt-Waldmann durchgeführt, der vom Rind gewonnenes Virus im durch Formalin und Wärme inaktivierten bzw. abgetöteten Zustand enthält. Bei dem Abtötungs- bzw. Inaktivierungsprozeß des Rindervirus durch Formalin kann auf die Zuführung von Wärme nicht verzichtet werden, und die Inaktivierung geschieht im allgemeinen bei 250 während einer Zeitspanne von 24 bis 48 Stunden.Process for the production of live foot and mouth disease virus containing vaccines Active immunization against foot and mouth disease (FMD) was so far in the overwhelming majority of cases with a vaccine according to Schmidt-Waldmann carried out the bovine virus inactivated by formalin and heat or dead state contains. In the killing or inactivation process of the Bovine virus through formalin cannot do without the supply of heat, and inactivation generally occurs at 250 for a period of time from 24 to 48 hours.

Im Immunisierungsprozeß stellt das inaktivierte, vom Rind stammende MKS-Virus das Immunisationsantigen dar. Erfahrungsgemäß ist es wichtig, das Antigen, d. h. das inaktivierte Virus, an ein Adsorbens, z. B. Aluminiumhydroxyd, zu adsorbieren, um dadurch die Antigenmicelle zu vergrößern. In the immunization process, the inactivated, bovine FMD virus is the immunization antigen. Experience shows that it is important to use the antigen d. H. the inactivated virus, to an adsorbent, e.g. B. aluminum hydroxide to adsorb, to thereby enlarge the antigen micelle.

Bei der Herstellung des neuerdings vielfach angewendeten MKS-Impfstoffes nach Frenkel (Amsterdam) -benutzt man MKS-Virus, das in vitro in Gegenwart von überlebendem Rinderzungenepithelgewebe bei 370 unter Belüftung mit einem Sauerstoffkohlendioxydgemisch in einem besonders zusammengesetzten Medium zur Vermehrung gekommen ist. In the manufacture of the recently widely used FMD vaccine according to Frenkel (Amsterdam) - one uses FMD virus, which in vitro in the presence of surviving Bovine tongue epithelial tissue at 370 with aeration with an oxy-carbon dioxide mixture has increased in a particularly complex medium.

Bis zum Jahre I948 galt es als feststehend, daß das MKS-Virus nur in Kontakt mit bestimmten lebenden oder überlebenden Geweben des Rindes wachsen und sich vermehren kann. Im Jahre I948 wurde aber erstmalig durch Traub und Schneider das Virus der MKS an das embryonierte Hühnerei adaptiert (»Zeitschrift für Natur- forschung«, I948, 3b, Heft 5/6; »Monatshefte für praktische Tierheilkunde«, Brd.3, Heft I, I95I, Bernhard Schneider und Anne-Lise Bürger: Uber das serologische Verhalten des Maul- und Klauenseuche-Hühnereivirus und seine Verwendung in Form der Adsorbatvakzine zur Immunisierung von Rindern, S. 35 bis 45). Mit diesem an Hühnereier adaptierten Virus der MKS läßt sich ein wirkender Impfstoff zur aktiven Immunisierung von Rindern und anderen für die MKS empfänglichen Tieren gegen diese Krankheit herstellen, der allerdings ziemlich hoch dosiert angewendet werden muß. Until 1948 it was considered certain that the FMD virus was only grow in contact with certain living or surviving tissues of the bovine and can multiply. In 1948, however, was the first time by Traub and Schneider the FMD virus adapted to the embryonated hen's egg (»Journal for Natural research", 1948, 3b, issue 5/6; "Monthly notebooks for practical veterinary medicine", Brd.3, Heft I, I95I, Bernhard Schneider and Anne-Lise Bürger: About the serological behavior of the mouth and chicken egg mouth disease virus and its use in the form of adsorbate vaccines for the immunization of cattle, pp. 35 to 45). With this adapted to chicken eggs The FMD virus can be used as an effective vaccine for the active immunization of cattle and other animals susceptible to foot-and-mouth disease however, it must be used in fairly high doses.

Es ist bereits bekannt (Skinner, Propagation of Strains of Foot-and-Mouth Disease Virus in Unweaned White Mice, Proceedings of the Royal Society of Medicine, Section of Comparative Medicine, Bd. 44, S. 1041 bis Io44 [I95I], und Nature, Bd. I69 [1952], S. 794 und 795), das Virus der MKS auf saugende Jungmäuse zu übertragen und dort zum Anwachsen und zur Vermehrung zu bringen. Im Laufe der Adaptierung des MKS-Virus an Mäusesäuglingen kann der Virustiter, der der Ausdruck ist für die Anzahl infektiöser Einheiten - festgestellt durch den 508/o-Infekt-Effekt an der Zungenschleimhaut gesunder lebender Rinder -, für das Rind herabgesetzt werden. Für den Mäusesäugling aber ergibt sich nach wenigen Passagen eine beträchtliche Zunahme des Titers. Man hat mit MKS-Virus, welches die genannten Passagen über Mäusesäuglinge hinter sich hat, Impfstoff nach der Formel Schmidt-Waldmann, d.h. mit Formalin und Wärme, hergestellt und experimentell am Rind mit immunisierendem Erfolg verwendet. It is already known (Skinner, Propagation of Strains of Foot-and-Mouth Disease Virus in Unweaned White Mice, Proceedings of the Royal Society of Medicine, Section of Comparative Medicine, Vol. 44, pp. 1041 to Io44 [I95I], and Nature, Vol. I69 [1952], pp. 794 and 795) to transmit the FMD virus to suckling young mice and to make it grow and multiply there. In the course of the adaptation of the FMD virus in infant mice can have the virus titer, which is the expression for the number infectious units - determined by the 508 / o infection effect on the tongue mucous membrane healthy live cattle - for which cattle are degraded. For the baby mouse but after a few passages there is a considerable increase in the titer. Man has with foot-and-mouth disease virus, which the passages mentioned above about baby mice behind made a vaccine according to the Schmidt-Waldmann formula, i.e. with formalin and heat and used experimentally on cattle with immunizing results.

Es wurde nun gefunden, daß bei Fortsetzung der Viruspassagen über Nagetiere, z.B. Ratten- oder Kaninchensäuglinge, insbesondere Mäusesäuglinge, von einem bestimmten Zeitpunkt ab, der durch Austesten der Infektiosität in bekannter Weise an der lebenden Rinderzunge zu ermitteln ist, d. h. also von einer jeweils bestimmbaren Anzahl von Viruspassagen ab, das passagierte MKS-Virus von Rind oder Schwein einen Höchsttiter für die Passagetiere, vorzugsweise Mäuse, erwirbt, während die Infektiosität des Passagevirus für die MKS-empfänglichen Tiere allmählich abnimmt und schließlich ganz erlischt. Dies erfolgt z. B. bei Mäusesäuglingen nach über hundert Passagen. Nachdem am Rinderzungentest sichergestellt ist, daß die Infektiosität für Rinder definitiv verlorengegangen ist, also Apathogenität erzielt wurde, läßt sich das z. B. Mäusepassagevirus im lebenden Zustand schon in sehr kleinen Mengen zur Immunisierung der Rinder heranziehen. It has now been found that with continuation of the virus passages over Rodents, e.g., rat or rabbit babies, especially mouse babies, from a certain point in time, which is known by testing the infectivity in Way can be determined on the live beef tongue, d. H. so from one at a time determinable number of virus passages from the passaged FMD virus from bovine or Pig acquires a maximum titer for the passenger animals, preferably mice, while the infectivity of the passage virus for the FMD-susceptible animals gradually decreases and eventually goes out completely. This is done e.g. B. in baby mice after about a hundred passages. After the beef tongue test has ensured that the infectivity has definitely been lost for cattle, i.e. apathogenicity has been achieved, leaves the z. B. Mouse passage virus in the living state even in very small quantities use to immunize cattle.

Die Erfindung beruht also darauf, daß man von Natur aus hochvirulentes Schweine- und Rindervirus durch zahlreiche Passagen über vorzugsweise Mäusesäuglinge, von denen innere Organe, z. B. Herz oder Lunge, jeweils zur Weiterführung der Passagen gedient haben, so verändert, daß dieses veränderte Virus in Form von Gewebeextrakten bei Rindern zwar die MKS nicht mehr auslösen, wohl aber im lebenden Zustand Rinder und sonst natürlicherweise für die MKS empfängliche Tiere immunisieren kann. The invention is based on the fact that one is naturally highly virulent Porcine and bovine virus through numerous passages, preferably through babies, of which internal organs, e.g. B. heart or lungs, each to continue the passages have served so altered that this altered virus in the form of tissue extracts In cattle, the foot-and-mouth disease is no longer triggered, but cattle can do so in the living state and can otherwise naturally immunize animals susceptible to FMD.

Man kann den virushaltigen Gewebextrakt, d. h. den Impfstoff, lyophilisieren, d. h. gefriertrocknen und damit tropenfest machen. Gegebenenfalls kann man den Trockenimpfstoff zur Injektion in Adsorbentien, z. B. Aluminiumhydroxyd enthaltenden wäßrigen Lösungen, aufnehmen oder die wäßrigen Gewebeextrakte unmittelbar mit Adsorptionsmitteln versetzen. The virus-containing tissue extract, i. H. the vaccine, lyophilize, d. H. Freeze-dry and thus make tropicalized. If necessary, one can use the dry vaccine for injection into adsorbents, e.g. B. aqueous solutions containing aluminum hydroxide, absorb or add adsorbents to the aqueous tissue extracts.

Beispiel Rindervirus der MKS des Typs o (Vall e' e) wird durch intraperitoneale oder subkutane Injektion Mäusesäuglingen in einer Menge von 0,I ccm einverleibt. Aus Herz und Lunge der daraufhin spezifisch absterbenden Mäusesäuglinge stellt man einen etwa 20logen Extrakt her, den man wiederum saugenden Jungmäusen injiziert. Hat man auf diese Weise die 104. Passage erreicht, so wird aus den an MKS abgestorbenen Mäusen unter Zugabe von m/I5-K-Na-Phosphatpuffer (pH 7,6) ein 500/obiger Extrakt hergestellt. Dieser Extrakt erwies sich bei einer Ausprüfung an der Rinderzunge als nichtinfektiös, seine LD 50 für die Maus war 10-8,2. Example bovine virus of the FMD type o (Vall e 'e) is transmitted intraperitoneally or subcutaneous injection into infant mice in an amount of 0.1 cc. From the heart and lungs of the specifically dying baby mice are made an extract of about 20,000 units, which in turn is injected into suckling young mice. If you have reached the 104th passage in this way, the ones that have died of FMD become Mice with the addition of m / I5-K-Na phosphate buffer (pH 7.6) a 500 / above extract manufactured. This extract was found in a test on the beef tongue being non-infectious, its LD 50 for the mouse was 10-8.2.

Durch Zusatz von Streptomycin t Penicillin wird dieser für Mäuse hochvirulente Vi rus extrakt bakteriell keimfrei gemacht. Ein solcher Impfstoff eignet sich zur aktiven Immunisierung von Rindern oder anderen MKS-empfänglichen Tieren, indem man ihn in einer Dosis von I ccm in oder unter die Haut injiziert.The addition of streptomycin t penicillin makes it highly virulent for mice Virus extract made bacterially sterile. Such a vaccine is suitable for active immunization of cattle or other FMD-susceptible animals by injected it into or under the skin at a dose of 1 cc.

Claims

PATENT CLAIM Process for the production of live foot and mouth disease virus containing vaccines against foot and mouth disease by means of virus passages Rodent babies, preferably mouse babies, characterized in that one the virus passage continues until apathogenicity of a virus-containing tissue extract from the rodent infants for cattle and other spontaneous foot and mouth disease susceptible animals is reached, and that the tissue extracts, if necessary Subjected to freeze-drying in a known manner and possibly in adsorbents containing aqueous solutions - redissolves or the tissue extracts immediately mixed with adsorbents.