DE7930900U1 - Device for electrophoresis - Google Patents
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Description
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C. DESAGA GmbH
Nachf. Erich Fecht
Maaßstr. 26-28C. DESAGA GmbH
Nachf. Erich Fecht
Maassstrasse 26-28
6900 Heidelberg6900 Heidelberg
"Vorrichtung für die Elektrophorese""Device for electrophoresis"
Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Durchführung eines elektrophoretischen Verfahrens für die, insbesondere immunelektrophoretische Untersuchung und/oder Darstellung chemischer Substanzen, bei welchem die zu untersuchenden Substanzen oder die Ausgangsprodukte der darzustellenden Substanzen in wässriger Lösung in einem Trägermedium, z.B. einem Gel, zur Behinderung bzw. Stabilisierung des konvektiven Transports unter Einwirkung eines elektrischen Feldes transportiert werden, wobei z.B. die wässrige Lösung Reaktionsmittel enthält, welche mit den quantitativ zu bestimmenden Substanzen Präzipitate bilden und aufgrund elektrophoretischen Transports in die wässrige Phase des Trägermediums gelangen, um eine Präzipitation über eine Wanderstrecke zu erhalten, deren Länge proportional zur Menge der zu bestimmenden Substanzen ist.The invention relates to an apparatus for performing an electrophoretic method for, in particular immunoelectrophoretic examination and / or representation of chemical substances, in which the to be examined Substances or the starting products of the substances to be represented in aqueous solution in a carrier medium, e.g. a gel to hinder or stabilize the convective transport under the action of an electric field can be transported, whereby e.g. the aqueous solution contains reactants, which with the to be determined quantitatively Substances form precipitates and get into the aqueous phase of the carrier medium due to electrophoretic transport, to get a precipitation over a walking distance, the length of which is proportional to the amount of the substances to be determined is.
Bei der quantitativen Bestimmung von Substanzen, beispielsweise Proteinen, wird z.B. ein Typ der Immunelektrophorese angewandt, die als "Rocket-Elektrophorese" bezeichnet wird (vergl. Lawrell C.B., Anal. Biochem. 15 (1966), Seite 45 ff.). Hierbei wird auf die Oberseite einer horizontal angeordneten Glasplatte eine etwa 1 mm starke Schicht eines wasserhaltigen Agarosegels aufgetragen, das Antikörper gegen Ai eigene enthält, welche die zu bestimmenden Substanzen sind. Die zu untersuchenden Probelösungen,In the quantitative determination of substances such as proteins, for example, one type of immunoelectrophoresis is used which is referred to as "rocket electrophoresis" (see Lawrell C.B., Anal. Biochem. 15 (1966), p. 45) was used ff.). Here, an approximately 1 mm thick layer of a is placed on top of a horizontally arranged glass plate applied water-containing agarose gel, which contains antibodies against Ai own, which the substances to be determined are. The sample solutions to be examined,
" '4M-ERnTETVIS & KEI"' 4 M-HARVESTVIS & KEI
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welche die Antigene enthalten, werden in kleine runde Vertiefungen gefüllt, die zuvor entlang der einen Kante des-Gels ausgeschnitten wurden. Entlang dieser Kante wird ein Flüssigkeitskontakt mit einem eine wässrige Pufferlösung enthaltenden und mit einer Kathodenelektrode versehenen Gefäß mit Hilfe dochtähnlicher Verbindungsstreifen, z.B. aus Papier, hergestellt. Die gegenüberliegende Kante der Agarosegelschicht ist auf analoge Weise mit einer Pufferlösung in einem Anodengefäß in Verbindung gebracht. Während die Glasplatte horizontal auf eine gekühlten Ober-which contain the antigens are filled into small round depressions that were previously made along one edge des gels were cut out. Along this edge will be a liquid contact with an aqueous buffer solution containing and provided with a cathode electrode Vessel made with wick-like connecting strips, e.g. made of paper. The opposite edge the agarose gel layer is connected in an analogous manner to a buffer solution in an anode vessel. While the glass plate is placed horizontally on a cooled top
^ fläche ruht, wird die Elektrophorese so ausgeführt, daß die Antigene in das Agarosegel transportiert werden, und zwar in Richtung der Anode. Während dieses Vorganges reagieren die Antigene mit den Antikörpern. Es ergeben sich Präzipitate, die, von oben gesehen, als konischer Teil einer Rakete beschrieben werden können, wobei die Spitze in Richtung der Anode weist. Die Fläche, die durch die Umrißlinie des Präzipitats und eine Tangentenlinie durch den am nächsten liegenden Teil der runden Vertiefung begrenzt wird, ist, jedenfalls in einem begrenzten Bereich, direkt proportional zu der Menge des Antigens. Eine 'analoge Proportionalität wird jedoch in einem engen Konzentrations-^ surface rests, the electrophoresis is carried out so that the antigens are transported into the agarose gel in the direction of the anode. React during this process the antigens with the antibodies. The result is precipitates which, seen from above, appear as a conical part a missile with the tip pointing towards the anode. The area covered by the Outline of the precipitate and a tangent line delimited by the closest part of the circular depression is, at least within a limited range, directly proportional to the amount of antigen. An 'analog However, proportionality is used in a narrow concentration
/ bereich auch bezüglich der maximalen Höhe bzw. Länge des Präzipitatflächenbereiches festgestellt. Auf diese Weise können nicht nur Antigene bestimmt werden, sondern auch solche Substanzen, die eine spezifische Affinität zu einer anderen Substanz haben und mit welcher Präzipitate gebildet werden können. So kann beispielsweise Protein A von Staphylococcen mit bestimmten Immunoglobulinen Präzipitate bilden, ebenso Lektine mit Proteinen, die bestimmte Polysacharide enthalten. Diese Verfahren werden Affinoelektrophorese genannt und in analoger Weise wie die "Rocket-Elektrophorese" ausgeführt. Ein Nachteil bei der Elektrophorese vom "Rocket"—Typ besteht darin, daß ein großer/ area also with regard to the maximum height or length of the Precipitate surface area was determined. In this way, not only can antigens be determined, but also those substances that have a specific affinity for another substance and with which precipitates are formed can be. For example, protein A from staphylococci can precipitate with certain immunoglobulins form, as well as lectins with proteins that contain certain polysaccharides. These procedures are called affinoelectrophoresis called and in a manner analogous to "rocket electrophoresis" executed. A disadvantage of "rocket" -type electrophoresis is that a large
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Anteil der reaktiven Agenzien in dem Gel nicht ausgenutzt wird. Ein weiterer Nachteil besteht darin, daß mit der "Rocket-Elektrophorese" auch in Kombination mit der Proteinfärbemethode sehr niedrige Proteinkonzentrationen nicht bestimmt werden können. Nur unter sehr günstigen Bedingungen ist es möglich, Proteinkonzentrationen von etwa 5 mg pro Liter oder höher z*o bestimmen. Obgleich die Ercpfindlichkeit relativ gut ist, besteht häufig die Notwendigkeit der Bestimmung niedrigerer Proteinkonzentrationen. Ein weiterer Nachteil der "Rocket-Elektrophorese" besteht in der Schwierigkeit, in den Vertiefungen ein genügend großes Volumen der ProbenflUssigkeit unterzubringen, um d:e gewünschte hohe Empfindlichkeit zu erzielen. Nachteilig ist auch bei der "Rockef-Methode der hohe Zeitaufwand. In vielen Fällen muß man die Elektrophorese über mehrere Stunden, z.B. 12 Stunden oder über Nacht, ausführen, was teilweise von der Möglichkeit abhängt, die Wärme durch einen unter der Glasplatte angeordneten Kühler abzuleiten. Die Wärmeableitung ist nicht so wirkungsvoll, als daß man die Stromstärke in dem gewünschten Maß für eine signifikante Verkürzung der Elektrophoresezeit anheben könnte. Durch die Verwendung der dochtähnlichen Verbindungsmittel entstehen ebenfalls Nachteile durch signifiKante Feldverluste und Wärmeerzeugung. Die dochtähnlichen Verbindungsmittel tragen auch zur Kontamination durch Mikroorganismen, Preteine und dergl. bei. Proportion of reactive agents in the gel is not used. Another disadvantage is that rocket electrophoresis can not be used to determine very low protein concentrations, even in combination with the protein staining method. Only under very favorable conditions is it possible to determine protein concentrations of around 5 mg per liter or higher z * o. Although the sensitivity is relatively good, there is often a need to determine lower protein concentrations. Another disadvantage of "Rocket electrophoresis" is the difficulty to lodge in the recesses, a sufficiently large volume of the ProbenflUssigkeit to d: e to achieve desired high sensitivity. The "Rockef method" is also disadvantageous in that it takes a long time. In many cases, the electrophoresis has to be carried out over several hours, for example 12 hours or overnight, which partly depends on the possibility of dissipating the heat through a cooler arranged under the glass plate The heat dissipation is not so effective that the current intensity could be increased to the desired extent for a significant shortening of the electrophoresis time. The use of wick-like connecting means also results in disadvantages due to significant field losses and heat generation. The wick-like connecting means also contribute to contamination by microorganisms , Preteine and the like.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine Elektrophoresevorrichtung der eingangs genannten Art vorzuschlagen, welche die Nachteile bekannter Vorrichtungen zur Durchführung des zuvor geschilderten Verfahrens nicht aufweist und die es insbesondere ermöglicht, zur Erhöhung der Empfindlichkeit größere Mengen Probeflüssigkeit zu verwenden und die verwendeten Reagenzien unter günstigeren Feldbedingungen auszunutzen.The object of the present invention is to provide an electrophoresis device to propose the type mentioned, which the disadvantages of known devices for performing the does not have the previously described method and which in particular makes it possible to increase the sensitivity to use larger amounts of sample liquid and to utilize the reagents used under more favorable field conditions.
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Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß gelöst durch eine Trägerplatte, welche für die Aufnahme der Trägermittelstreifen langgestreckte, im wesentlichen parallele Mulden, Schlitze, Rillen oder dergl. aufweist, welche durch Anlegen wenigstens eines platten- oder folienförmigen Elementes auf die jeweilige Flachseite der Trägerplatte an ihren freiliegenden Längsseiten, ggf. unter Freihaltung eines oberen und unteren Endbereiches verschließbar sind. Mit Hilfe einer solchen Vorrichtung läßt sich das erfindungsgemäße Verfahren bei einfacher Konstruktion wirksam ausführen, wobei insbesondere nach der Ausführung der Elektrophorese die Zugänglichkeit der Trägermediumstreifen einfach und schnell gegeben ist.This object is achieved according to the invention by a carrier plate, which are elongated, essentially parallel troughs, slots, Has grooves or the like. Which by applying at least one plate or film-shaped element to the respective Flat side of the carrier plate on its exposed long sides, if necessary while keeping an upper and lower end area free are lockable. With the aid of such a device, the method according to the invention can be constructed in a simple manner execute effectively, especially after the execution of the electrophoresis, the accessibility of the carrier medium strips is given quickly and easily.
Mit einer solchen Vorrichtung kann ein Verfahren ausgeführt werden, bei welchem der elektrophoretische Transport in einem schichtförmigen Trägermedium durchgeführt wird, welches zwischen wenigstens zwei zueinander beweglichen platten- oder : folienförmigen Elementen so gehalten wird, daß die einander gegenüberliegenden Enden des Trägermediums mit je einer in zugeordneten Elektrodenbehältern enthaltenen Pufferlösung unmittelbar in Verbindung steht, und bei welchem nach dem elektrophoretischen Transport durch Abnehmen wenigstens einer der platten- oder folienförmigen Elemente die eine Flachseite des schichtförmigen Trägermediums freigelegt wird.With such an apparatus, a method may be performed, wherein the electrophoretic transport which between at least two relatively movable plate or is carried out in a layer-shaped carrier medium: sheet-shaped elements is maintained so that the opposed ends of the carrier medium with one in the associated The buffer solution contained in the electrode container is directly connected, and in which, after the electrophoretic transport, by removing at least one of the plate-shaped or film-shaped elements, one flat side of the layered carrier medium is exposed.
Dieses neue elektrophoretische Verfahren eignet sich für die quantitative oder semiquantitative Bestimmung von Substanzen sowie für immunelektrophoretische Untersuchungen in einem Trägermedium in vergleichsweise sehr kurzer Zeit, beispielsweise bis zu 1/6 der Zeit, die bei der "Rocket"-Elektrophorese notwendig ist. Das Verfahren ist daher sehr wertvoll für die Anwendung beispielsweise in Krankenhäusern, wo kurzfristig ein Ergebnis erwünscht oder notwendig ist. Das Verfahren bringt erhöht« Empfindlichkeit insbesondere , This new electrophoretic method is suitable for the quantitative or semi-quantitative determination of substances and for immunoelectrophoretic investigations in a carrier medium in a comparatively very short time, for example up to 1/6 of the time required for "rocket" electrophoresis. The method is therefore very valuable for use, for example, in hospitals, where a short-term result is desired or necessary. The procedure brings increased «sensitivity in particular,
dadurch, daß größere Probenroengen, beispielsweise mehr als das 10-fache wie bei der "Rockef'-Elektrophorese verarbeitet werden können. Durch die Verwendung eines Trägermediums, welches nach der Ausführung der Elektrophorese weitgehend freigelegt werden kann, sind auch die anschließenden Untersuchungsschritte, wie Anfärben oder dergl. schnell und wirkungsvoll ausführbar. Dadurch, daß das Trägermedium unmittelbar mit den Pufferlösungen in Verbindung steht, werden die Sachteile, die mit der Verwendung von dochtähnlichen Verbindungsmitteln hinsichtlich der ungünstigen Beeinflussung des elektrischen Feldes und der Verunreinigung verbunden sind, ausgeschlossen. in that larger sample volumes, for example more than processed 10 times as in the "Rockef" electrophoresis can be. By using a carrier medium which, after the electrophoresis has been carried out, largely can be exposed, the subsequent examination steps, such as staining or the like. Quick and effective executable. Because the carrier medium is in direct contact with the buffer solutions, the material parts, those with the use of wick-like connecting means with regard to the unfavorable influence on the electrical Field and the contamination are excluded.
Vorzugsweise kann auch der elektrophoretische Transport in einem vertikalen schichtförmigen Trägermedium ausgeführt werden, welches benachbart eines oberen und unteren Randes jeweils mit einer der Pufferlösung unmittelbar in Verbindung steht.The electrophoretic transport can preferably also be carried out in a vertical, layered carrier medium be, which is adjacent to an upper and lower edge, each directly in connection with one of the buffer solutions stands.
Wenn der elektrophoretische Transport in einem schichtförmigen Trägermedium ausgeführt wird, welches in mehrere im wesentlichen parallel zueinander verlaufende Streifen unterteilt ist, kann die Elektrophorese gleichzeitig für eine Vielzahl von Proben entsprechend der Anzahl der Streifen ausgeführt werden. Trotz der Unterteilung in Streifen ist die Freilegung des Trägermediums nach der Ausführung der Elektrophorese auf einfache Weise möglich.When the electrophoretic transport in a layered Carrier medium is executed, which is divided into several essentially parallel strips electrophoresis can be carried out simultaneously for a plurality of samples according to the number of strips will. Despite the division into strips, the carrier medium is exposed after the electrophoresis has been carried out possible in a simple way.
Der elektrophoretische Transport kann auch in einem schichtförmigen Trägermedium ausgeführt werden, welches in mehrere im wesentlichen parallel zueinander verlaufende Streifen unterteilt ist, die über einen geringen Bereich, vorzugsweise benachbart dem Ende, das dem Ende der Probenapplikation gegenüberliegt, miteinander in Verbindung stehen. Auf diese Weise The electrophoretic transport can also be carried out in a layered carrier medium which is divided into several essentially parallel strips which are connected to one another over a small area, preferably adjacent to the end opposite the end of the sample application. In this way
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kann einfach die gemeinsame unmittelbare Verbindung des in Streifen unterteilten Trägerraediums mit der zweiten Pufferlösung hergestellt werden.can simply be the direct joint connection of the carrier medium divided into strips with the second buffer solution getting produced.
Wenn die Streifen des Trägermediums für den elektrophoretischen Transport jeweils in einem kanalförmigen Abteil gehalten sind, und die zu untersuchenden Substanzen von einem sich stirnseitig von den jeweiligen Streifen nach außen erweiternden Abschnitt des Abteils dem Streifen zugeführt wird, kann bei günstiger Geometrie für die Ausführung der Elektrophorese und einfacher Freilegbarkeit der Streifen des Trägermaterials ein relativ großes Probenvolumen eingesetzt werden.When the strips of carrier medium for electrophoretic transport are each held in a channel-shaped compartment are, and the substances to be examined from a frontal widening from the respective strip to the outside Section of the compartment to which the strip is fed can, if the geometry is favorable, for the execution of the electrophoresis and easy exposure of the strips of the carrier material, a relatively large sample volume can be used.
Wenn das Trägermedium ein die Präzipitatio« der zu untersuchenden Substanz förderndes und/oder der Elektroendosmose entgegenwirkendes Reaktionsmittel, z.B. Polyäthylenglykol, enthält, kann die ¥irksamkeit des mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung auszuführenden Verfahrens noch weiter verbessert werden.If the carrier medium is a precipitate of the to be examined Contains substance promoting and / or electroendosmosis counteracting agent, e.g. polyethylene glycol, the effectiveness of the method to be carried out with the device according to the invention can be improved even further will.
Das gleiche trifft zu, wenn die zu untersuchenden Substanzen in einer Probenlösung verwendet werden, deren Ionenzusammensetzung und/oder -konzentration von denjenigen/derjenigen wässrigen Lösung des Trägermediums verschieden sind/ist.The same is true when the substances to be examined are used in a sample solution, their ionic composition and / or concentration are / is different from that / that aqueous solution of the carrier medium.
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Bei einer besonderen Ausgestaltung der erfindungsgemäßen Vorrichtung stehen die Mulden, Schlitzen, Rillen oder deigl., vorzugsweise in Nachbarschaft des dem Ende der Probenapplikation gegenüberliegenden Ende, über eine quer verlaufende Mulde, einen solchen Kanal, eine solche Rille oder dergl. miteinander in Verbindung.In a special embodiment of the device according to the invention, the troughs, slots, grooves or deigl., preferably in the vicinity of the end of the Sample application opposite end, across a running trough, such a channel, such a groove or the like. In connection with one another.
Eine besondere Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vor- * richtung besteht darin, daß die Trägerplatte, die nach ;i einer Flachseite offene Mulden aufweist, mit welcher Flächig * seite die Trägerplatte an eine Frontplatte des einen Elektro- A special embodiment of the device according to the invention consists in that the carrier plate, which according to ; i one flat side has open troughs, with which flat side the carrier plate is attached to a front plate of the one electrical
dengefäßes derart anlegbar ist, daß die Mulden bis über eine Schwelle einer am oberen Rand der Frontplatte vorgesehenen Aussparung reichen und daß die Trägerplatte im Bereich der die Mulden verbindenden, quer verlaufenden Mulde einen im wesentlichen über die Länge der quer verlaufenden Mulde reichenden Spalt zur Verbindung mit dem anderen Elektrodengefäß aufweist, welcher Spalt auf der der Trägerplatte abgewandten Seite abdeckbar ist.dengefäßes can be applied in such a way that the troughs are provided over a threshold at the upper edge of the front panel Sufficient recess and that the carrier plate in the area of the crosswise connecting the troughs Trough a gap extending essentially over the length of the transverse trough for connection to the has another electrode vessel, which gap can be covered on the side facing away from the carrier plate.
Es ist aber auch möglich, daß die Trägerplatte die durch Latten abgeteilte nach beiden Flachseiten der Trägerplatte offene Schlitze aufweist, wobei die Trägerplatte mit einer Fiachaeite an eine Frontplatte des einen Elektrodenge fäßes derart anlegbar ist, daß die Schlitze bis über eine Schwelle einer am oberen Rand der Frontplatte vorgesehenen Aussparung reichen, daß die Schlitze durch einen in die Latten eingeformten, quer verlaufenden Kanal miteinander in Verbindung stehen, und daß an die äußere Flachseite der Trägerplatte eine Stutzplatte mit einem im Bereich des Kanals quer ve" J. auf enden Spalt zur Verbindung mit dem anderen Elektrodengefäß anlegbar ist, welcher Spalt ggf. im wesentlichen fluchtend zu dem Kanal an ordenbar ist.But it is also possible that the carrier plate is divided by slats on both flat sides of the carrier plate Has open slots, wherein the support plate with a Fiachaeite to a front plate of the one electrode fäßes can be applied in such a way that the slots are provided over a threshold at the upper edge of the front panel Recess is sufficient that the slots with one another through a transverse channel formed in the slats are in connection, and that on the outer flat side of the support plate a support plate with one in the area of the canal transversely ve "J. to end gap for connection with the other electrode vessel can be placed, which gap can optionally be arranged essentially in alignment with the channel is.
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Bei der zuvor genannten ersten AuefUhrungsform kann die ttußere Flachse!te der Trägerplatte ebenfalls eine Stutzplatte mit einen dem unteren Ende der Mulde zugeordneten Spalt anlegbar sein, welcher Spalt im wesentlichen fluchtend zu dem Spalt in der Trägerplatte anordenbar ist.In the aforementioned first embodiment, the The outer flat face of the carrier plate also has a support plate with a gap assigned to the lower end of the trough be applied, which gap can be arranged essentially in alignment with the gap in the carrier plate.
Bei einer dritten AusfUhrungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung ist vorgesehen, daß die Trägerplatte als eine Wand eines der Elektrodengefäße ausgebildet ist, welche an einer Oberfläche die mittels Rippen abgeteilte Rillen ' aufweist, die an ihren oberen Enden jeweils bis zu einer Schwelle einer am oberen Rand der Wand vorgesehenen Aussparung reichen und daß die Rillen durch ein an die die Rillen aufweisende Fläche anlegbares platten- oder folienförmiges Element, gegebenenfalls bis auf einen Schlitz im Bereich einer die Rillen verbindenden Querrille der Wand abdeckbar sind.In a third embodiment of the invention Device is provided that the carrier plate is designed as a wall of one of the electrode vessels, which on a surface which has divided grooves' by means of ribs, each of which has up to one at its upper ends Threshold of a recess provided at the top of the wall and that the grooves through a to the Plate-shaped or film-shaped element which can be placed on the surface having grooves, optionally except for a slot can be covered in the area of a transverse groove in the wall connecting the grooves.
Für das «lek trophoretischäf erfahren kann also eine Vorrichtung verwendet werden, deren Teile aus lichtdurchlässigem Material, beispielsweise Glas, Polyäthylen, Polystyrol oder Polymethacrylat besteht. Die Vorrichtung weist im wesentlichen zwei Elektrodengefäße auf, in denen die Elektroden, z.B. aus Platin, angebracht sind, sowie aus im wesentlichen flächenförmige wand-, platten- oder folienförmigen Elementen zur Begrenzung des Trägermediums, in welchem der elektrophoretische Transport der zu untersuchenden Substanzen stattfindet. Das Trägermedium kann ein Gel aus beispielsweise Agar, Agarose, Polyacrylamid oder Zelluloseacetat sein und insbesondere in Wasser aufgelöste Puffersubstanzen, sowie zusätzlich Antikörper und analoge Substanzen enthalten, die besonders auf die zu bestimmenden Elemente reagieren, so daß PrMzipitäte in dem Trägermedium gebildet werden. Das Trägermedium wird also als Schicht zwischenFor the "lek trophoretischäf can experience a device are used whose parts are made of translucent material, such as glass, polyethylene, or polystyrene Polymethacrylate is made. The device essentially has two electrode vessels in which the electrodes, e.g. made of platinum, as well as of essentially flat wall, plate or foil-shaped elements to delimit the carrier medium in which the electrophoretic transport of the substances to be examined takes place. The carrier medium can be a gel made of, for example, agar, agarose, polyacrylamide or cellulose acetate and in particular contain buffer substances dissolved in water, as well as antibodies and analogous substances that are particularly sensitive to the elements to be determined react so that precipitates are formed in the carrier medium will. The carrier medium is thus used as a layer between
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zwei voneinander lösbaren flächenförmigen Elementen begrenzt, zwischen welchen Einzelabteile für die streifenliirmige Aufnahme des Trägermediums vorgesehen sein können. Diese Abteile können runden, ovalen oder rechteckigen Querschnitt haben. In diesen Abteilen sind langgestreckte, z.B. gelförmige Trägermittelstreifen parallel angeordnet, beispielsweise mit den Abmessungen 3 mm Breite, 1, 5 mm Tiefe und 60 mm Länge, Die flächenförmigen Begrenzungen des schichtförmigen Trägermediums brauchen nicht flach zu sein, sie können beispielsweise auch gekrümmt, insbesondere in Anpassung an die Krümmung der Wandung eines Elektrodengefäßes selbst, sein. Die zwischen den Flächenbegrenzungen vorgesehenen langgestreckten Abteilungen für die Aufnahme des Trägermediums sind beispielsweise vertikal stehend nur bis zur halben Höhe mit dem Trägermedium gefüllt. Über ihnen können die einzelnen Probelösungen leicht von oben her mit Hilfe von kapillarförmigen Röhrchen eingegeben werden. Dadurch, daß die flächenförmigen Begrenzungen des schichtförmigen Trägermediums geeignete Aussparungen am oberen und unteren Ende aufweisen, läßt sich die unmittelbare Verbindung des Trägermediums mit den Pufferlösungen auf einfache und wirksame Weise herstellen. Bei Anwendung von isotachophoretischen Grundsätzen oder zumindest im Hinblick auf Leitfähigkeit und/oder pH-Wert nicht kontinuierlichen Puffersystemen ist es auch möglich, eine Konzentration der zu bestimmenden Substanzen während ihres elektrophoretischen Transportes von oben nach unten zu erreichen.two releasable sheet-like elements limited, between which individual compartments for the streifenliirmige Recording of the carrier medium can be provided. These compartments can be round, oval or rectangular Have cross-section. In these compartments elongated, e.g. gel-shaped carrier center strips are arranged in parallel, for example with the dimensions 3 mm wide, 1.5 mm deep and 60 mm long, the planar boundaries of the layered carrier medium do not need to be flat; they can also, for example, be curved, in particular in adaptation to the curvature of the wall of an electrode vessel itself. The one between the area boundaries provided elongated compartments for receiving the carrier medium are, for example, vertically upright only half filled with the carrier medium. The individual sample solutions can easily be accessed from entered above with the help of capillary-shaped tubes will. Because the planar boundaries of the layered carrier medium have suitable recesses have at the upper and lower end, the direct connection of the carrier medium with the buffer solutions can be in a simple and effective way. When applying isotachophoretic principles or at least im With regard to conductivity and / or pH value, non-continuous buffer systems, it is also possible to use a concentration of the substances to be determined during their electrophoretic transport from top to bottom.
Von den wand—, platten- oder folienförmigen Flächenelementen, die das Trägermedium begrenzen, ist mindestens eines aus tansparentem Material wie Glas oder Kunststoff, insbesondere Polystyrol, Polyäthylen, Polyvinylchlorid, Polycarbonat oder Polyester und vorzugsweise aus relativ dünnem Material von einer Stärke von weniger als 1 mm,Of the wall, plate or foil-shaped surface elements, that limit the carrier medium is at least one made of transparent material such as glass or plastic, in particular polystyrene, polyethylene, polyvinyl chloride, polycarbonate or polyester and preferably made of relative thin material less than 1 mm thick,
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um den Kuhleffekt zu erhöhen. Die Abdeckung bzw. Abgrenzung des schjchtförmigen Trägermediums ist jeweils so getroffen, daß jetfes Probeabteil mit der bei der Elektrophorese verwendeten Pufferlösung an beiden Enden in Verbindung steht. Durch diese unmittelbare Berührung entsteht ein guter Flüssigkeitskontakt mit den Pufferlösungen in den Elektrodengefäßen, vorzugsweise am oberen und am unteren Ende des Trägermediums, so daß Verbindungen mittels dochtähnlicher Verbindungsmittel entbehrlich sind.to increase the cooling effect. The coverage or delimitation of the schjcht-shaped carrier medium is made in such a way that that the sample compartment is connected to the buffer solution used in the electrophoresis at both ends. This direct contact creates good liquid contact with the buffer solutions in the electrode vessels, preferably at the upper and lower end of the carrier medium, so that connections by means of wick-like Lanyards are dispensable.
Bei der Elektrophorese werden die zu bestimmenden Substanzen von ihren entsprechenden Probeabteilen in das Trägermedium transportiert. Hier reagieren sie mit den vorher in dem Trägermedium verteilten Substanzen mit zu den zu untersuchenden Probesubstanzen hoher und spezifischer Affinität. Ein solches Reaktionspaar kann in einem Antigen und einem Antikörper bestehen oder Protein-Lektine und rezeptor-spezifische Proteine enthalten, analog zu der Affino-Elektrophorese. Hierbei werden Präzipitate in Zonen gebildet, die z.B. durch die Proteinanfärbung sichtbar gemacht werden können (vgl. z.B. Krantz Th. et al, Z. Klien. Chem. Klin. Biochem. 12 (1974) 124) oder einfach durch Denaturierung. Die Präzipitate werden über eine desto längere Strecke in dem Trägermedium gebildet, desto mehr Probensubstanz vorhanden ist, die zu bestimmen ist. Es besteht annähernd direkte Proportionalität zwischen dieser Weglänge und der Probenlänge.In electrophoresis, the substances to be determined are transferred from their respective sample compartments into the carrier medium transported. Here they react with the substances previously distributed in the carrier medium with those to be examined Sample substances of high and specific affinity. Such a reaction pair can be in one antigen and one Antibodies are made up or contain protein lectins and receptor-specific proteins, analogous to Affino electrophoresis. Here, precipitates are formed in zones, which are made visible, for example, by the protein staining can (cf. e.g. Krantz Th. et al, Z. Klien. Chem. Klin. Biochem. 12 (1974) 124) or simply by denaturation. The longer the distance the precipitates are formed in the carrier medium, the more sample substance there is to be determined. It is approximately there direct proportionality between this path length and the sample length.
Aufgrund der geringen Wandstärke wenigstens einer der begrenzenden Wände und dem guten Flüssigkeitskontakt zwischen dieser Wand und der Pufferlösung sind gute Bedingungen für die Ableitung der Joule*sehen Wärme vorhanden, die bei der Elektrophorese in dem Trägermedium entsteht. Die Wärme, die in die Pufferlösung übergeht, kann auf einfache Weise mittels eines Wärmetauschers abtransportiert werden.Due to the small wall thickness of at least one of the delimiting walls and the good liquid contact between them this wall and the buffer solution are good conditions for the dissipation of the Joule * see heat that exists arises during electrophoresis in the carrier medium. The heat that passes into the buffer solution can be in a simple manner Way to be transported away by means of a heat exchanger.
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Aufgrund dieses verbesserten KUhIsystems und der Ausschaltung dochtähnlicher Verbindunginittel können wesentlich höhere elektrische Feldstärken in dem Trägermedium erzielt werden als bisher, wodurch der benötigte Zeitaufwand für die Ausführung der Elektrophorese erheblich gesenkt werden kann. Because of this improved cooling system and the elimination of wick-like connection means, significantly higher electrical field strengths can be achieved in the carrier medium than before, which can considerably reduce the time required to carry out the electrophoresis.
Aufgrund des Umstandes, daß bei der Erfindung das schicht- _: förmige Trägermedium zwischen zwei voneinander lösbaren % Wänden eingeschlossen ist, können relativ große Mengen ζ an Probelösungen eingesetzt werden, bei guter Zugänglichkeit des Trägermediums nach der Elektrophorese.Due to the fact that, in the invention, the layer-_:-shaped carrier medium between two mutually detachable walls% is included, relatively large quantities of sample solutions ζ be used, with good accessibility of the carrier medium after electrophoresis.
Weitere Merkmale, Vorteile und Anwendungsmöglichkeiten der vorliegenden Erfindung ergeben sich aus der nachfolgenden Beschreibung von Ausführungsbeispielen anhand der beiliegenden Zeichnung. Dabei bilden alle beschriebenen und/oder bildlich dargestellten Merkmale für sich oder in beliebiger sinnvoller Kombination den Gegenstand der vorliegenden Erfindung auch unabhängig von ihrer Zusammenfassung in „ den Ansprüchen oder deren Rückbeziehung«Further features, advantages and possible uses The present invention emerges from the following description of exemplary embodiments with reference to the enclosed Drawing. All of the described and / or graphically represented features form individually or in any desired way meaningful combination the subject of the present invention regardless of their summary in "The claims or their reference back"
Es zeigt:It shows:
Fig. 1 schematisch die auseinandergezogene, teilweise weggebrochene Ansicht der Stützplatte, der mit Mulden versehenen Trägerplatte für die Aufnahme des Trägermediums und der Frontplatte eines Elektrodenbehälters einer die Erfindung aufweisenden Vorrichtung,Fig. 1 schematically shows the exploded, partially broken away view of the support plate, with Well-provided carrier plate for receiving the carrier medium and the front plate of an electrode container a device incorporating the invention,
Fig. 2 schematisch in perspektivischer Ansicht eineFig. 2 is a schematic perspective view
andere Ausgestaltung einer Trägerplatte zur streifenförmigen Aufnahme des Trägermediums,another configuration of a carrier plate to the strip-shaped Recording of the carrier medium,
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Fig. 3 schematisch in perspektivischer Ansicht eine Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung für die Ausführung des erfindungsgemäßen Elektrophoreseverfahrens, und3 shows, schematically in a perspective view, an embodiment of the device according to the invention for carrying out the electrophoresis method according to the invention, and
Fig. 4 schematisch in perspektivischer Ansicht eine weitere Ausgestaltung der erfindungsgemäßen Vorrichtung, bei welcher die das Trägermedium in Rillen aufnehmenden Trägerplatte als Wandung des inneren Pufferelektrodengefäßes ausgebildet ist.4 schematically in a perspective view a further embodiment of the device according to the invention, in which the carrier plate receiving the carrier medium in grooves is the wall of the inner buffer electrode vessel is formed.
Fig. 1 zeigt die Frontplatte 1 eines (inneren) Elektrodengefäßes 13 (vgl. auch Fig. 3). Die Frontplatte 1 besteht beispielsweise aus Glas. Eine Trägerplatte 2 aus relativ dünnem Kunststoffmaterial, beispielsweise Polystyrol oder Polyvinylchlorid, hat Rippen 3, die aus einer Fläche der Trägerplatte 2 herausragen und auf der Rückseite langgestreckte, kanalförmige vertikale Mulden 3' bilden. Die Mulden 3* sind nach vorne von dem die Rippen 3 bildenden Material der Trägerplatte abgeschlossen und können durch Anlegen der Trägerplatte 2 an die Außenfläche der Frontplatte 1 auch zur Rückseite hin zur Bildung geschlossener, röhrenförmiger Kanäle abgedeckt werden. Der Abschluß der Mulden 3* zur Rückseite hin kann während des Einfüllens des Trägermediums in die Mulden 3' und der Aufbewahrung auch durch Anlegen einer dünnen Folie erfolgen. Die Trägerplatte 2 mit den Rippen 3 und Mulden 3' kann einfach durch Vakuumverformen einer dünnen Materialplatte hergestellt werden. Im unteren Bereich sind die Mulden 3' über eine horizontale Mulde A miteinander verbunden, die, wenn die Trägerplatte 2 an die Frontplatte 1 angepreßt ist, eine horizontale geschlossene Röhre bildet, die sich an die Mulden 3* gebildeten vertikalen Röhren anschließt. Eine StUtsplette 7 1st von aufien an die Trägerplatte 2 anlegbar und anpreßbar. Die Trägerplatte 2 und die Stutzplatte 7 sind beispielsweise mittels Klammern der Frontplatte 1 bef«stigbar» 1 shows the front plate 1 of an (inner) electrode vessel 13 (see also FIG. 3). The front plate 1 consists for example of glass. A carrier plate 2 made of a relatively thin plastic material, for example polystyrene or polyvinyl chloride, has ribs 3 which protrude from a surface of the carrier plate 2 and form elongated, channel-shaped vertical troughs 3 'on the rear side. The troughs 3 * are closed to the front by the material of the carrier plate forming the ribs 3 and can be covered by placing the carrier plate 2 on the outer surface of the front plate 1 also to the rear to form closed, tubular channels. The wells 3 * can be closed to the rear during the filling of the carrier medium into the wells 3 'and storage by applying a thin film. The carrier plate 2 with the ribs 3 and troughs 3 'can be produced simply by vacuum forming a thin sheet of material. In the lower area, the troughs 3 ' are connected to one another via a horizontal trough A which, when the carrier plate 2 is pressed against the front panel 1, forms a horizontal closed tube which connects to the vertical tubes formed by the troughs 3 *. A StUtsplette 7 can be placed and pressed against the carrier plate 2 from outside. The carrier plate 2 and the support plate 7 can be attached to the front plate 1, for example, by means of clamps.
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Die (nicht dargestellten) Klammern können beispielsweise an den Seiten und an der Unterkante der Frontplatte 1 ansetzen. Um die Berührungsflächen zwischen Trägerplatte 2 und Frontplatte 1 einerseits und Stutzplatte 7 andererseits abzudichten, kann es von Vorteil sein, die Platten in ihren Randbereichen vor dem Aneinanderlegen einzufetten oder miteinander lösbar, zu verleimen. Beim Einfüllen der Lösung eines Trägermediums, beispielsweise Gels, in die von den Mulden 31 gebildeten vertikalen Röhren dient die horizontale Mulde 4 als Verb indungs leitung, so daß alle die von den vertikalen Mulden 31 beispielsweise durch Anlegen einer Folie gebildeten Röhren leicht bis zu einer gewünschten Höhe in einem Arbeitsgang gefüllt werden können. Auf diese Weise entstehen in den Mulden 3· der Trägerplatte 2 mehrere parallele, vertikale Streifen des Trägermediums. Über jedem der Trägermediumstreifen ist in der jeweiligen Mulde 3· eine obere Abteilung für das Einfüllen einer Probenlösung mittels einer Kapillare freigehalten. Die Mulden 3* haben eine solche Länge, daß beim bündigen Anlegen der Trägerplatte 2 die Mulden 3* zu dem Elektrodengefäß 13 hin im Bereich einer oberen Aussparung 34 der Frontplatte 1, die nach unten durch eine Schwelle 5 begrenzt wird, offen liegen. In diesem Bereich kann das streifenförmige Trägermedium in unmittelbare Berührung mit der in dem inneren Elektrodengefäß 13 vorhandenen Pufferlösung treten, die in dem Elektrodengefäß 13 höher steht als die Schwelle 5 liegt. Die übrigen Wandungen des Elektrodengefäßes 13 sind alsc, wie aus Fig. 1 und 3 ersichtlich, höher als die Frontplatte 1 im Bereich der oberen Randaussparung 34. Am unteren Ende des in den Mulden 31 und 4 enthaltenen gelförmigen Trägermediums wird die unmittelbare Berührung mit einer in dem äußeren Elektrodengefäß 14 (Fig. 3) enthaltenen Pufferlösung dadurchThe brackets (not shown) can be attached to the sides and the lower edge of the front panel 1, for example. In order to seal the contact surfaces between carrier plate 2 and front plate 1 on the one hand and support plate 7 on the other hand, it can be advantageous to grease the edge areas of the plates or to glue them together in a detachable manner. When filling the solution of a carrier medium, for example gel, into the vertical tubes formed by the wells 3 1 , the horizontal well 4 serves as a connection line, so that all of the tubes formed by the vertical wells 3 1, for example by applying a film, easily up to a desired height can be filled in one operation. In this way, several parallel, vertical strips of the carrier medium are created in the troughs 3 · of the carrier plate 2. An upper compartment for filling in a sample solution by means of a capillary is kept free in the respective well 3 above each of the carrier medium strips. The troughs 3 * have such a length that when the carrier plate 2 is placed flush, the troughs 3 * are open to the electrode vessel 13 in the area of an upper recess 34 of the front plate 1, which is delimited at the bottom by a threshold 5. In this area, the strip-shaped carrier medium can come into direct contact with the buffer solution present in the inner electrode vessel 13, which is higher in the electrode vessel 13 than the threshold 5. The remaining walls of the electrodes vessel 13 are ALSC, as shown in Fig. 1 and 3, higher than the front plate 1 in the region of the upper edge of the recess 34. At the lower end of the gel-carrier medium contained in the wells 3 1 and 4, the direct contact with a in the outer electrode vessel 14 (Fig. 3) contained buffer solution thereby
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hergestellt, daß im -Bereich der horizontalen Mulde 4 die Trägerplatte 2 einen quer verlaufenden Spalt 6 aufweist. Beim Einfüllen der Trägermediumlösung in die Mulden 3·, 4 wird der Spalt 6 von der Stützplatte 7 abgedeckt, die auf den Rippen 3 und der der Mulde 4 entsprechenden Rippe anliegt. Die Stützplatte 7 hat einen dem Spalt 6 entsprechenden Spalt 8, der beim vertikalen Verschieben der Stützplatte 7 in eine solche Lage gebracht werden kann, daß er mit dem Spalt 6 fluchtet, was während der Ausführung der Elektrophorese der Fall ist. Vor dem Beginn der Elektrophorese vird die Einheit aus innerem Elektrodengefäß 13, Trägerplatte 2 und Stützplatte 7 gemäß Fig. 3 in das mit Pufferlösung gefüllte äußere Elektrodengefäß 14 eingestellt. made that in the range of the horizontal trough 4 the Carrier plate 2 has a transverse gap 6. When filling the carrier medium solution into the wells 3, 4, the gap 6 is covered by the support plate 7 on the ribs 3 and the rib corresponding to the trough 4 is applied. The support plate 7 has a gap 8 corresponding to the gap 6, which gap occurs when the support plate is moved vertically 7 can be brought into such a position that it is flush with the gap 6, which occurs during execution electrophoresis is the case. Before the start of the electrophoresis, the unit consisting of the inner electrode vessel 13, Carrier plate 2 and support plate 7 according to FIG. 3 are set in the outer electrode vessel 14 filled with buffer solution.
Der elektrophoretische Transport der in den oberen Abteilungen der Mulden 3· befindlichen, zu bestimmenden Substanzen führt nach unten, so daß die zu bestimmenden Substanzen mit Reagenzien, die zuvor in wässriger Lösung in das Trägermedium eingebracht wurden, in Berührung kommen, mit welchen sie dann Niederschläge bilden. Nach der Ausführung der Elektrophorese kann man einfach Zugang zu den Trägermediumstreifen dadurch bekommen, daß man die Trägerplatte 2 mit der Stützplatte 7 von der Frontplatte 1 abnimmt. Durch Ausstülpen der TrMgermediumstreifen auf eine Glasplatte können diese, getrocknet und/oder die darin enthaltenen Präzipitate angefärbt werden.The electrophoretic transport of the substances to be determined located in the upper compartments of the wells 3 leads downwards, so that the substances to be determined with reagents that were previously in aqueous solution in the carrier medium were introduced, come into contact with which they then form precipitates. After running the Electrophoresis allows one to easily access the carrier media strip get by removing the carrier plate 2 with the support plate 7 from the front panel 1. By Eversion of the carrier medium strips onto a glass plate these can be dried and / or the precipitates contained therein can be colored.
Fig. 2 veranschaulicht eine Trägerplatte 9, die ebenfalls aus Kunststoff, beispielsweise Polymethacrylat, Polystyrol oder Polyvinylchlorid besteht. Mittels mehrerer vertikaler Latten 10 sind in der Trägerplatte 9 vertikale SchlitzeFig. 2 illustrates a carrier plate 9, which is also made of plastic, for example polymethacrylate, polystyrene or polyvinyl chloride. By means of a plurality of vertical slats 10 are 9 vertical slots in the support plate
11 gebildet. Die Breite der Latten 10 beträgt zwischen 1 und 5 mm. Im unteren Bereich der Latten 10 ist durch Einbuchten der Latten 10 ein horizontal verlaufender Kanal11 formed. The width of the slats 10 is between 1 and 5 mm. In the lower area of the slats 10 is through Buckling of the slats 10 is a horizontally extending channel
12 gebildet. Wenn die Trägerplatte 9 mit ihrer hinteren12 formed. When the support plate 9 with its rear
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Flachseite gegen die Frontplatte 1 gelegt wird und die vordere Flachseite der Trägerplatte 9 von der Stützplatte 7 abgedeckt ist, bilden die beidseitig abgedeckten Schlitze 11 ebenfalls vertikale Kanäle für die streifenförmige Aufnahme des Trägermediums, wobei die vertikalen Streifen untereinander über den horizontalen Kanal 12 miteinander in Verbindung stehen. Das Einfüllen des Trägermediums erfolgt wie in Zusammenhang mit Fig. 1 beschrieben, d.h. der horizontale Spalt 8 liegt in diesem Fall versetzt zu dem horizontalen Kanal 12. Bei der Ausführung der Elektrophorese kann die Stützplatte so vertikal verschoben werden, daß der Spalt 8 den Kanal 12 überdeckt und somit die Verbindung mit der Pufferlösung in dem äußeren Elektrodengefäß 14 hergestellt ist.Flat side is placed against the front panel 1 and the the front flat side of the carrier plate 9 is covered by the support plate 7, the slots that are covered on both sides form 11 likewise vertical channels for the strip-shaped reception of the carrier medium, the vertical strips are in communication with one another via the horizontal channel 12. The filling of the carrier medium takes place as described in connection with Fig. 1, i.e. the horizontal gap 8 is offset in this case to the horizontal channel 12. When performing the electrophoresis, the support plate can be shifted vertically so that that the gap 8 covers the channel 12 and thus the connection with the buffer solution in the outer electrode vessel 14 is made.
Fig. 3 zeigt den inneren Elektrodenbehälter 13 mit der Frontplatte 1 in dem äußeren Elektrodenbehälter 14 stehend. Die Behälter 13 und 14 können aus Glas oder Kunststoff •hergestellt sein. Sie haben jeweils eine Elektroden 15 und 16, beispielsweise aus Platindraht, die mit Bananensteckern 17 und 18 an den Wänden der Elektrodengefäße 13 und 14 verbunden sind. Am Deckel 19 befinden sich entsprechende Buchsen 20 und 21, von welchen aus elektrische Leitungen 22 und 23 zu den beiden Polen einer Gleichstromquelle führen. Beim Aufsetzen des Deckels 19 auf das äußere Elektrodengefäß 14 entsteht ein elektrischer Kontakt zwischen den Bananensteckern 17 bzw. 18 und den Buchsen 20 bzw. 21. Die Joule'sehe Wärme, die bei der Elektrophorese von den Pufferlösungen in den Gefäßen 13 und 14 aufgenommen wird, wird mittels einer Kühlrohre 24, welche in der dargestellten Pfeilrichtung von einer Kühlflüssigkeit durchströmt wird, abtransportiert.3 shows the inner electrode container 13 with the front plate 1 standing in the outer electrode container 14. The containers 13 and 14 can be made of glass or plastic •. They each have an electrode 15 and 16, for example made of platinum wire, with banana plugs 17 and 18 on the walls of the electrode vessels 13 and 14 are connected. On the cover 19 there are corresponding sockets 20 and 21, from which electrical Lines 22 and 23 lead to the two poles of a direct current source. When placing the lid 19 on the outer Electrode vessel 14 creates an electrical contact between the banana plugs 17 and 18 and the sockets 20 and 21. The Joule heat generated in electrophoresis is absorbed by the buffer solutions in the vessels 13 and 14, is by means of a cooling tube 24, through which a cooling liquid flows in the direction of the arrow shown is transported away.
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Pig. 4 veranschaulicht eine AusfUhrungsform eines inneren Elektrodengefäßes 25 mit rundem Quersehnltt und mit einem wasserdicht angebrachtem Boden 26. über einen gewissen Wandungsbereich des Elektrodengefäßes 25 ist am oberen Rand eine Aussparung 35 vorgesehen, die von einer unteren Schwelle 31, die in ihrer Funktion der Schwelle 5 gleichkommt, begrenzt ist. Über die Breite der Aussparung 35 sind in der Außenfläche der Gefäßwandung zur Bildung einer erfindungsgemäßen Trägerplatte durch parallele vertikale Rippen 28 abgeteilte Rillen 27 zur streifenförmigen Aufnahme eines Trägermediums vorgesehen. Die Rillen 27 stehen über eine horizontale Querrille 29 untereinander in Verbindung. Die Rillen 27 reichen mit ihrem oberen Ende jeweils bis zu der Schwelle 31. Die Querrille 29 und die vertikalen Rillen 27 können gemeinsam von einer beispielsweise durchsichtigen Kunststoffolie 30 nach außen abgedeckt werden, die bis Über die Schwelle 31 hinaus nach oben übersteht. Dadurch wird durch die außen abgedeckten Rillen 27 ein System vertikaler Kanäle gebildet, die Über die horizontale Querrille 29 miteinander in Verbindung stehen und an ihrem oberen Ende in das innere Elektrodengefäß 25 münden. Die Kanäle können mit der gelförmigen Trägermediumlösung, z.B. aus Agarose, bis zur gewünschten Höhe gefüllt.werden. Wenn sich die Lösung beispielsweise zu einem Gel verfestigt hat, kann leicht aus der Folie 30 im Bereich der Querrille 29 mit dem Messer ein schmaler Streifen abgeschnitten werden, so daß nach dem Einsetzen des inneren Elektrodengefäßes 25 mit der Folie 30 in ein dem Elektrodengefäß 14 entsprechendes äußeres Elektrodengefäß das streifenförmige Trägermedium am unteren Ende unmittelbar mit der Pufferlösung in dem äußeren Elektrodengefäß in Verbindung steht. Die Pufferlösung im inneren des Elektrodengefäßes 25 wird bis zu einem Niveau, das oberhalb der Schwelle 31 liegt, eingefüllt, so daß das streifenfönnige Träger-Pig. 4 illustrates one embodiment of an interior Electrode vessel 25 with a round transverse tendon and with a bottom 26 attached in a watertight manner over a certain wall area of the electrode vessel 25 is at the top Edge a recess 35 is provided which is delimited by a lower threshold 31, which is equivalent to the threshold 5 in its function. Across the width of the recess 35 are in the outer surface of the vessel wall to form a support plate according to the invention by parallel vertical Ribs 28 divided grooves 27 for strip-shaped reception a carrier medium provided. The grooves 27 are connected to one another via a horizontal transverse groove 29. The upper end of the grooves 27 extends as far as the threshold 31. The transverse groove 29 and the vertical ones Grooves 27 can be covered together to the outside by, for example, a transparent plastic film 30, which protrudes to the top beyond the threshold 31. As a result, a system of vertical channels is formed by the externally covered grooves 27, the over the horizontal Transverse groove 29 are connected to one another and open into the inner electrode vessel 25 at their upper end. the Channels can be filled to the desired height with the gel-like carrier medium solution, e.g. made of agarose. If the solution has solidified to form a gel, for example, it can easily be removed from the film 30 in the area of the transverse groove 29 a narrow strip can be cut off with the knife, so that after the insertion of the inner electrode vessel 25 with the foil 30 in one of the electrode vessels 14 corresponding outer electrode vessel, the strip-shaped carrier medium at the lower end directly with the Buffer solution in the outer electrode vessel is in communication. The buffer solution inside the electrode vessel 25 is filled up to a level which is above the threshold 31, so that the strip-like carrier
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medium am oberen Ende mit dieser Pufferlösung unmittelbar in Verbindung steht. Das Einfüllen der Proben in die von den Rillen 27 oberhalb des Trägermediums gebildeten Abteilungen kann, wie in Verbindung mit Fig. 1 beschrieben, erfolgen. medium at the upper end is in direct contact with this buffer solution. The filling of the samples in the The compartments formed in the grooves 27 above the carrier medium can, as described in connection with FIG. 1, take place.
Nachfolgend wird ein Ausführungsbeispiel für ein mit einer erfindungsgemäßen Vorrichtung auszuführendes Verfahren näher erläutert:The following is an exemplary embodiment for a with a The method according to the invention to be carried out is explained in more detail:
Zu 10 ml einer 1%-igen wässrigen Lösung aus Agarose in 0,04 M wässriger Lösung mit einem ph-Wert von 8,6, welche Natriumsalz der Barbitursäure und 4% Polyäthylenglykol enthielt, und mit einer Temperatur von 55° C wurden 10 ul eines Serums aus Kaninchen-Antihuman-Transferrin (DAKO Immunglobuline, Kopenhagen) gegeben. Nach Einfüllen dieser Lösung in die Röhrchen einer Vorrichtung gemäß Fig. 1 erreichte die Gellösung eine Höhe von etwa 3 cm unterhalb der Schwelle 5 der Aussparung 34 in der Frontplatte 1 des Elektrodengefäßes 13. Nach 20 Minuten wurde Pufferlösung in die Elektrodengefäße 13 und 14 eingefüllt. Zu jeder Probenabteilung oberhalb des Gels wurden 20 ul von normalem menschlichen Serum in Verdünnungen zwischen 1:500 und 1:1600 mit gleichmäßigen Schritten von 100, in der erwähnten Pufferlösung, jedoch mit einem. Gehalt von 8 % Sucrose, eingefüllt. Danach wurde ein Potential von 110 Volt einer Gleichstromquelle an die Elektroden 15 und 16 gelegt. Nach 2 Stunden wurde der Strom abgeschaltet und die Vorrichtung auseinandergenommen. Die Gelstreifen wurden auf eine Glasplatte gelegt und luftgetrocknet. Sie wurden dann 60 Minuten lang in eine Proteinfärbelösung, enthaltend 0,5 % Coomassie Brilliant Blau R 250 (einem Natriumanoxinaphthonat-Färbstoff der ICI, Manchester, England), 45 % Äthanol, 45 % Wasser und 10 % Essigsäure eingetaucht. Danach wurde der Überschuß an AnfärbeinittelTo 10 ml of a 1% aqueous solution of agarose in 0.04 M aqueous solution with a pH of 8.6, which contained the sodium salt of barbituric acid and 4% polyethylene glycol, and at a temperature of 55 ° C, 10 ul of a serum made from rabbit anti-human transferrin (DAKO Immunoglobuline, Copenhagen). After filling this solution into the tubes of a device according to FIG. 1, the gel solution reached a height of about 3 cm below the threshold 5 of the recess 34 in the front plate 1 of the electrode vessel 13. After 20 minutes, buffer solution was poured into the electrode vessels 13 and 14. For each sample compartment above the gel, 20 μl of normal human serum in dilutions between 1: 500 and 1: 1600 with equal steps of 100, in the mentioned buffer solution, but with one. 8 % sucrose content, filled in. Thereafter, a potential of 110 volts from a direct current source was applied to electrodes 15 and 16. After 2 hours the power was turned off and the device disassembled. The gel strips were placed on a glass plate and air dried. They were then immersed for 60 minutes in a protein staining solution containing 0.5% Coomassie Brilliant Blue R 250 (a sodium anoxinaphthonate dye from ICI, Manchester, England), 45 % ethanol, 45 % water and 10 % acetic acid. Thereafter, the excess of stain was used
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mit derselben Lösung, jedoch ohne den Farbstoff, weggelöst. In jedem Gelstreifen wurde die Wanderstrecke vom oberen Gelrand der Probenapplikation zu der Stelle, bis zu der das Präzipitat am weitesten gewandert war, gemessen. Diese Strecke war proportional zur Menge des Transferrin. In typischen Fällen wurde ein Regressionskoeffizient von 0,97 festgestellt. Dieses Experiment zeigte, daß das erfindungsgemäße Verfahren für die quantitative Bestimmung von Substanzen gut geeignet ist. dissolved away with the same solution but without the dye. The distance from the upper gel edge of the sample application to the point to which the precipitate had migrated the furthest was measured in each gel strip. This distance was proportional to the amount of transferrin. In typical cases, a regression coefficient of 0.97 was found. This experiment showed that the method according to the invention is well suited for the quantitative determination of substances.
Änderungen des dargestellten AusfUhrungsbeispieles sind ohne weiteres möglich. Dabei ist es insbesondere auch möglich, die bereits mit Gel gefüllte Trägerplatte durch allseitige Abdeckung für mehrere Tage aufzubewahren. Es kann auch vorteilhaft sein, daß die Probe vor der Einführung in die erfindungsgemäße Vorrichtung in einer Agaroselösung mit einer Konzentration von etwa 0,05 bis 0,2 % gehalten wird, wodurch konvektiven Störungen entgegengewirkt wird und was Sucrose und entsprechende Agenzien, wie sie in dem Ausfuhrungsbeispiel genannt wurden, ersetzen kann.Changes to the illustrated exemplary embodiment are easily possible. In particular, it is also possible to pass through the carrier plate already filled with gel keep all-round cover for several days. It can also be advantageous to have the sample prior to introduction in the device according to the invention in an agarose solution with a concentration of about 0.05 to 0.2% is held, whereby convective disturbances are counteracted and what sucrose and corresponding agents, as they were mentioned in the exemplary embodiment, can replace.
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1 Frontplatte1 front panel
2 Trägerplatte2 support plate
3 Rippen3 ribs
3' vertikale Mulden3 'vertical troughs
4 horizontale Mulden4 horizontal troughs
5 Schwelle5 threshold
6 Spalt6 gap
7 Stützplatte7 support plate
8 Spalt8 gap
9 Trägerplatte9 carrier plate
10 Latten10 battens
11 Schlitze11 slots
12 horizontaler Kanal12 horizontal channel
13 inneren Elektrodengefäß13 inner electrode vessel
14 äußeres Elektrodengefäß14 outer electrode vessel
15 Elektrode15 electrode
16 Elektrode16 electrode
17 Stecker17 connector
18 Stecker18 connector
19 Deckel19 lid
20 Steckerbuchse20 female connector
21 Steckerbuchse21 socket
22 elektrische Leitung22 electrical line
23 elektrische leitung23 electrical line
24 Kühlröhre24 cooling tube
25 inneres Elektrodengefäß25 inner electrode vessel
26 Boden26 floor
27 Rillen27 grooves
28 Rippen28 ribs
29 Querrille29 transverse groove
30 Folie30 slide
31 Schwelle31 threshold
32 Schlitz32 slot
33 Trägerplatte33 carrier plate
34 Aussparung34 recess
35 Aussparung35 recess
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Applications Claiming Priority (1)
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| SE7811720 | 1978-11-13 |
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