Verfahren zur Herstellung eines Co-carboxylase-Konzentrats bzw. reiner
Co-carboxylase Gegenstand des Patents 7o6 835 ist ein Verfahren zur Herstellung
eines Co-carboxylase-Konzentrats bzw. von reiner Cocarboxylase, das darin besteht,
daß man ein Aneurinsalz, ein Alkalipyrophosphat und Pyrophosphorsäure bei Temperaturen
von etwa ioo bis 2oo° C, vorzugsweise bei ungefähr i 5o bis i 6o°, aufeinander -einwirken
läßt, und daß man gegebenenfalls aus der erhaltenen Schmelze reine Co-carboxylase
isoliert. Gegenüber ähnlichen bekannten Verfahren (vgl. Tauber & Weijlard, Journ.
Am. Chem. Soc. Bd.6o [1g38] S. 2a63/64) liefert dieses Verfahren überraschend hohe
Ausbeuten an der bisher nur sehr schwer zugänglichen Cocarboxylase.Process for the production of a co-carboxylase concentrate or purer
Co-carboxylase The subject of patent 706,835 is a process for the preparation
of a cocarboxylase concentrate or pure cocarboxylase, which consists of
that one aneurine salt, an alkali pyrophosphate and pyrophosphoric acid at temperatures
from about 100 to 200 ° C, preferably at about i 50 to i 60 °, act on one another
and that, if appropriate, pure co-carboxylase is obtained from the melt obtained
isolated. Compared to similar known processes (cf. Tauber & Weijlard, Journ.
At the. Chem. Soc. Vol.6o [1g38] p. 2a63 / 64), this method provides surprisingly high levels
Yields of the cocarboxylase, which was previously very difficult to access.
Es wurde gefunden, daß man mindestens dieselben guten Ausbeuten an
Co-carboxylase erhält, wenn. man beim Verfahren nach dem Hauptpatent den Zusatz
von Alkalipyrophosphat wegläßt. Das neue Verfahren besteht demnach darin, ein Aneurinsalz
mit Pyrophosphorsäure bei etwa ioo bis 20o° C, vorzugsweise bei ungefähr i 5o bis
16o°, zusammenzuschmelzen.It has been found that at least the same good yields can be obtained
Co-carboxylase receives when. one in the procedure according to the main patent the addition
omits alkali pyrophosphate. The new process therefore consists in using an aneurine salt
with pyrophosphoric acid at about 100 to 20 ° C, preferably at about 15 to
16o ° to melt together.
Es ist zu empfehlen, die für die Schmelze benutzten Substanzen in
möglichst wasserfreiem Zustand anzuwenden. Die Schmelze kann im offenen Gefäß bei
gewöhnlichem Druck oder- vorteilhafter im Vakuum durchgeführt werden. Es erscheint
empfehlenswert, die bei dieser Umsetzung benötigte Pyrophosphorsäure im Reaktionsgefäß
selbst kurz vor dem Ansatz herzustellen, -z. B. durch Erhitzen von Ortho-Phosphorsäure
während längerer Zeit auf Temperaturen von über 25o° oder durch Zusammenschmelzen
von Ortho- und Metaphosphorsäure in äquivalen-. ten Mengen oder durch Einwirkung
von Phosphoroxychlorid auf Orthophosphorsäure.
Die so erhaltene
Schmelze ist als ein hoch wirksames Co-carboxylase-Konzentrat zu betrachten. Hieraus
kann die reine Co-carboxylase leicht unter Beachtung &-r Vorschriften isoliert
werden, die man für die Gewinnung dieses Stoffes aus natiirlichein Ausgangsmaterial
ausgearbeitet hat (vgl. z. B. Lohmann und Schuster, Biochemische Zeitschrift, Bd.29.1
[19371 S. 19z/93).It is recommended that the substances used for the melt be in
to be used in as anhydrous condition as possible. The melt can be in the open vessel
Ordinary pressure or, more advantageously, in a vacuum. It appears
it is advisable to keep the pyrophosphoric acid required for this reaction in the reaction vessel
to produce even shortly before the approach, -z. B. by heating orthophosphoric acid
for a long time to temperatures of over 25o ° or by melting together
of ortho and metaphosphoric acid in equivalents. th quantities or by exposure to it
from phosphorus oxychloride to orthophosphoric acid.
The thus obtained
Melt is to be regarded as a highly effective co-carboxylase concentrate. From this
the pure co-carboxylase can easily be isolated by observing & -r regulations
which are used for the extraction of this substance from a natural starting material
(see e.g. Lohmann and Schuster, Biochemische Zeitschrift, Vol. 29.1
[19371 p. 19z / 93).
Man erhält nach dein neuen Verfahren Ausbeuten an reiner Co-carboxylase
um 5o 0/0 der Theorie, während das beste bisher bekannte Verfahren (Tauber und Weijlard,
Journ. Am. Chem. Soc. Bd.6o [i9381 S. 2263/6q.) nur etwa 12 °% der Theorie liefert.
Beispiele i. i io g 85o/oige Phosphorsäure werden unter Rühren im Metallbad durch
einstündiges Erhitzen auf etwa i5o' wasserfrei gemacht. Hierauf trägt man 76 g Metaphospliorsäure
(Acidum phosphoricum meta glaciale) unter Rühren ein. Es tritt sehr bald Lösung
ein: man erhitzt zur Vervollständigung der Umsetzung 5 Stunden auf 27o bis 28o°.
Nach dem Abkühlen der Schmelze auf etwa i 55° trägt man in 2o bis 30 Minuten 30g
wasserfreies Aneurin (Hydrochlorid) ein und rührt 3o Minuten im Vakuum bei i5o bis
16o°. Zuerst schäumt die Masse kurze Zeit. Die erkaltete Schmelze wird in 2 Liter
Wasser gelöst, mit 5o ccm n-Ag N O.,-Lösung versetzt und von geringen Mengen ausgefallenem
Ag Cl abfiltriert. Hierauf neutralisiert man mit Ammoniak (25°/oig) und fällt «-eiter
finit 55o ccili n-Ag N 03 Lösung. Das ausgefallene gelbe Silbersalz der Cocarboxylase
wird abgenutscht, gewaschen, mit 1,5 Liter Wasser angeschlämmt und dann mit Schwefelwasserstoff
bei Zimmertemperatur zerlegt. Das Filtrat wird mit 200 ccm 25%iger Salzsäure angesäuert
und die Cocarboxylase mit etwa 500 ccm Phosphorwolframsäurelösung (-25%ig)
gefällt, bis keine weitere Fällung mehr auftritt. Man saugt ab, wäscht den Niederschlag
mit salzs:äurehaltiäem Wa=-,er aus und löst die Fällung in. 500 ccin Aceton.
Man filtriert von etwas Ungelöstem ab und fällt mit der 5fachen Menge Aceton. Das
ausgeschiedene 01 wird in i5occm n/io-HCI gelöst und mit der 7fachen Menge
Aceton gefällt. Nach noch zweimal wiederholtem Umfällen erhält man reine Co-carboxylase,
die durch Verreiben mit Aceton fest wird. Die reine Co-carboxylase ist nicht mehr
hygroskopisch. Ausbeute 43 0/0 der Theorie, bezogen auf das angewandte Aneurin.
2. 200 g Phosphorsäure (85%ig) (reine Phosphorsäure gibt keine besseren Ausbeuten)
werden im 'Metallbad unter Rühren 7 Stunden '=äuf 28o° erhitzt (Außentemperatur
300°), Wobei alles Wasser weggeht und Pyrophosphorsäure gebildet wird. Nach dem
Abkühlen auf 155 bis 16o0 trägt inan unter Rühren in einer halben Stunde nach und
nach 30 g wasserfreies Aneurin (Hydrochlorid) ein. Hierauf rührt man '/2
Stunde bei i 5o' im Vakuum. Nach dieser Zeit ist die Reaktion beendet. Man läßt
die Schmelze abkühlen, löst in i Liter kaltem Wasser, entfärbt mit i g gereinigter
Kohle, filtriert und bringt die fast wasserhelle Lösung auf 2 Liter.The new process gives yields of pure co-carboxylase around 50% of theory, while the best process known to date (Tauber and Weijlard, Journ. Am. Chem. Soc. Vol. 60 [19381 p. 2263 / 6q. ) delivers only about 12% of theory. Examples i. 100 g of 85% phosphoric acid are rendered anhydrous by heating to about 150 for one hour while stirring in a metal bath. 76 g of metaphosporic acid (Acidum phosphoricum meta glaciale) are then introduced with stirring. A solution occurs very soon: to complete the reaction, the mixture is heated to 27o to 28o ° for 5 hours. After the melt has cooled to about i 55 °, 30 g of anhydrous aneurine (hydrochloride) are introduced in 20 to 30 minutes and the mixture is stirred for 30 minutes in vacuo at 150 to 160 °. First the mass foams for a short time. The cooled melt is dissolved in 2 liters of water, 50 cc of n-Ag N O., Solution is added and small amounts of precipitated Ag Cl are filtered off. It is then neutralized with ammonia (25%) and precipitated further finitely 55o ccili n-Ag N 03 solution. The precipitated yellow silver salt of cocarboxylase is filtered off with suction, washed, slurried with 1.5 liters of water and then decomposed with hydrogen sulfide at room temperature. The filtrate is acidified with 200 cc of 25% hydrochloric acid and the cocarboxylase is precipitated with about 500 cc of phosphotungstic acid solution (-25%) until no further precipitation occurs. It is filtered off with suction, the precipitate is washed with salt: acid-containing Wa = -, and the precipitate is dissolved in 500 cc in acetone. Something undissolved is filtered off and 5 times the amount of acetone is precipitated. The separated 01 was dissolved in i5occm n / io-HCI and precipitated with 7-fold amount of acetone. After reprecipitating twice more, pure co-carboxylase is obtained, which solidifies by trituration with acetone. The pure co-carboxylase is no longer hygroscopic. Yield 43% of theory, based on the aneurine used. 2. 200 g of phosphoric acid (85%) (pure phosphoric acid does not give better yields) are heated in the 'metal bath with stirring for 7 hours' = at 280 ° (outside temperature 300 °), whereby all the water goes away and pyrophosphoric acid is formed. After cooling to 155 to 160 °, inan gradually introduces 30 g of anhydrous aneurine (hydrochloride) over half an hour while stirring. The mixture is then stirred for ½ hour at 15 ° in vacuo. After this time the reaction has ended. The melt is allowed to cool, dissolved in 1 liter of cold water, decolorized with purified charcoal, filtered and the almost water-white solution is brought to 2 liters.
Die weitere Aufarbeitung erfolgt nach der im Beispiel i ausführlich
angegebenen Vorschrift. Die Ausbeuten betragen 5o bis 53 0/0 der Theorie.The further work-up is carried out in detail according to that in Example i
specified regulation. The yields are 50 to 53% of theory.
3. Aneurinsulfat wird dadurch hergestellt, daß malt Aneurin. (Hydrochlorid)
in der iofachen Menge Wasser löst und mit etwas mehr als der theoretischen Menge
Silbersulfat bei Zimmertemperatur schüttelt. Man filtriert vom ausgefallenen Silberchlorid
ab und entfernt das gelöste Silber mit Schwefelwasserstoff. Durch Filtrieren und
Eindampfen im Vakuum erhält man chlorfreies Aneurinsulfat in quantitativer Ausbeute.3. Aneurine sulfate is made by painting aneurine. (Hydrochloride)
dissolves in 10 times the amount of water and with a little more than the theoretical amount
Silver sulfate shakes at room temperature. The precipitated silver chloride is filtered off
and removes the dissolved silver with hydrogen sulfide. By filtering and
Evaporation in vacuo gives chlorine-free aneurine sulfate in quantitative yield.
130 g 85%ige Phosphorsäure werden im Metallbad unter Rühren 7 Stunden
auf 280'
erhitzt, wobei sich 1'yrophosphorsäure bildet. Nach dem Abkühlen
auf 16o0 trägt man nach und nach 20 g Aneurinsulfat (wasserfrei) ein, wobei
die Lösung etwas dunkel wird. Man erhitzt unter Rühren im Vakuum '/2 Stunde auf
150 bis 16o0. Die erkaltete Schmelze wird in Wasser gelöst und mit Silbernitrat
und Phosphorwolfrainsäure gefällt, wie es im Beispiel i beschrieben ist. Das so
erhaltene Rohprodukt wird in i/io ii-Salzsäure gelöst und mit Aceton gefällt. Die
Ausbeute an reiner Co-carbox_vlase beträgt 35 % der Theorie.130 g of 85% phosphoric acid are heated to 280 'for 7 hours in a metal bath with stirring, 1'yrophosphoric acid being formed. After cooling to 160 °, 20 g of aneurine sulfate (anhydrous) are gradually added, the solution becoming a little dark. The mixture is heated to 150 to 160 ° for 1/2 hours while stirring in vacuo. The cooled melt is dissolved in water and precipitated with silver nitrate and phosphoruswolfrainic acid, as described in Example i. The crude product thus obtained is dissolved in 100% hydrochloric acid and precipitated with acetone. The yield of pure Co-carbox_vlase is 35% of theory.