DE60025369T2

DE60025369T2 - SUBSTITUTED ACID CONTAINING SUPEROXYATED WATER FOR THE TREATMENT OF WOUNDS

Info

Publication number: DE60025369T2
Application number: DE60025369T
Authority: DE
Inventors: Joe B. Headington SELKON
Original assignee: Sterilox Medical Europe Ltd
Current assignee: Puricore International Ltd
Priority date: 1999-08-23
Filing date: 2000-08-23
Publication date: 2006-09-21
Anticipated expiration: 2020-08-24
Also published as: US20040208940A1; US8632823B2; CA2382569C; US20020182262A1; DE60025369D1; WO2001013926A2; US7276255B2; US20080160612A1; AU6712500A; WO2001013926A3; CA2382569A1; EP1214081A2; GB9919951D0; GB2355190B; EP1214081B1; GB2355190A; US20090092685A1

Description

Diese Erfindung betrifft Mischungen von Oxidationsmitteln oder Oxidantien, die in dieser Beschreibung als „superoxidiertes Wasser" bezeichnet werden, einem Ausdruck, der im Stand der Technik bekannt ist.These Invention relates to mixtures of oxidizing agents or oxidants, referred to in this specification as "super-oxidized water", a term known in the art.

Superoxidiertes Wasser kann als sterilisierende, desinfizierende und als biozid (pestizid) wirkende Lösung eingesetzt werden. Eine Form von superoxidiertem Wasser wird von der Anmelderin unter der Handelsmarke STERILOX^® vertrieben. Dieses superoxidierte STERILOX-Wasser wird an dem Ort der Verwendung, beispielsweise in einem Krankenhaus, erzeugt, indem Salzlösung (oder Kochsalzlösung) bei einem Strom von etwa 6 bis 9 Amp über beschichtete Titanelektroden geleitet wird, die durch eine semipermeable Keramikmembran voneinander getrennt sind. Eine Vorrichtung mit beschichteten Titanelektroden, die durch eine semipermeable Keramikmembran getrennt sind, ist in den Beschreibungen der UK-Patente mit den Nummern 2253860 und 2274113 beschrieben. Die grundlegende Struktur der Vorrichtung ist in GB 2253860 beschrieben und kann eingesetzt werden, um das superoxidierte STERILOX-Wasser zu erzeugen.Superoxidated water can be used as a sterilizing, disinfecting and biocidal (pesticidal) solution. A form of super-oxidised water is sold by the applicant under the trademark STERILOX ^®. This super-oxidized STERILOX water is generated at the site of use, for example in a hospital, by passing saline (or saline) at a current of about 6 to 9 amps over coated titanium electrodes separated by a semipermeable ceramic membrane. A device with coated titanium electrodes separated by a semipermeable ceramic membrane is described in the specifications of UK Patents Nos. 2253860 and 2274113. The basic structure of the device is in GB 2253860 and can be used to produce the super-oxidized STERILOX water.

Superoxidiertes STERILOX-Wasser enthält eine Mischung von oxidierenden Spezies, vorwiegend hypochlorige Säure (HOCl) und Natriumhypochlorit. Das superoxidierte STERILOX-Wasser besitzt einen pH von 5 bis 7 und ein Oxidations-Reduktions-Potential (Redox-Potential) von etwa 1000mV. Das hohe Redox-Potential ermöglicht die schnelle und wirksame Zerstörung von Mikroben (Bakterien, Viren, Pilzen und Sporen). Hypochlorige Säure und Hopychlorit stehen im Gleichgewicht miteinander, und die Position des Gleichgewichts wird ausschließlich vom pH bestimmt.super-oxidised Contains STERILOX water a mixture of oxidizing species, predominantly hypochlorous Acid (HOCl) and sodium hypochlorite. The super-oxidized STERILOX water has a pH of 5 to 7 and an oxidation-reduction potential (redox potential) from about 1000mV. The high redox potential enables fast and effective destruction of microbes (bacteria, viruses, fungi and spores). hypochlorous Acid and Hopychlorite are in balance with each other, and the position of equilibrium is determined solely by the pH.

Die Anmelderin hat herausgefunden, dass das gebildete superoxidierte Wasser für die Haut ungefährlich ist, keine Irritationen hervorruft und die Haut nicht sensibilisiert, an den Augen keine Irritationen hervorruft, unschädlich ist, wenn es verschluckt wird und keinen Hinweis auf eine mögliche mutagene Aktivität zeigt.The Applicant has found that the formed super-oxidized Water for the skin is harmless is not irritating and does not sensitize the skin, does not cause irritation to the eyes, is harmless, if swallowed and no indication of a possible mutagen activity shows.

Es ist anzunehmen, dass hypochlorige Säure dadurch als Biozid wirkt, dass sie die Oberfläche und Plasmamembran-Proteine von Bakterienzellen angreift, den Transport von gelösten Stoffen darin behindert und ihr Salz-Gleichgewicht nachteilig beeinflusst (Pieterson et al, Water SA (1996) 22(1); 43–48). Man nimmt jedoch an, dass HOCl nicht frei in eukaryontische Zellen eindringen kann, was die Selektivität von hypochlorigen Lösungen erklären könnte.It it can be assumed that hypochlorous acid thereby acts as a biocide, that they are the surface and plasma membrane proteins of bacterial cells attacks the transport of solved It impedes substances in them and adversely affects their salt balance (Pieterson et al, Water SA (1996) 22 (1): 43-48). But it is believed that HOCl can not freely enter eukaryotic cells, which the selectivity of hypochlorous solutions to explain could.

Das STERILOX-Verfahren erzeugt eine extrem wirksame, sterilisierende, kalte, nicht-toxische Lösung, die frei von hochtoxischen Chemikalien ist und gegen eine große und breit gefächerte Anzahl von Bakterien, Pilzen, Viren und Sporen wirkt. Die Erzeugung von STERILOX-Lösungen erfordert nichts als Wasser, Elektrizität und reines, vakuumgetrocknetes, kristallines Salz. Die Anmelderin ist der Überzeugung, dass das superoxidierte STERILOX-Wasser sich für einen breiten Anwendungsbereich sowohl auf medizinischen als auch nicht-medizinischen Feldern eignet, beispielsweise für die Haltbarmachung von Geflügel und Fisch und allgemeine Verwendungen in der Landwirtschaft und der Petrochemie, für das Zerstören von bakteriellen Biofilmen, für die Wasserbehandlung und die allgemeine Desinfektion auf medizinischem und tiermedizinischem Gebiet. Es hat sich herausgestellt, dass das superoxidierte STERILOX-Wasser besonders brauchbar für die Desinfektion von Endoskopen ist, die empfindlich gegenüber anderen, üblicherweise eingesetzten kalten Desinfektionsmitteln wie z.B. Peroxyessigsäure sind.The STERILOX process produces an extremely effective, sterilizing, cold, non-toxic solution that is free of highly toxic chemicals and is against a big and wide ranging Number of bacteria, fungi, viruses and spores acts. The production from STERILOX solutions requires nothing but water, electricity and pure, vacuum-dried, crystalline salt. The Applicant is convinced that the superoxidized STERILOX-water for yourself a wide range of applications both medical and non-medical Fields, for example the preservation of poultry and fish and general uses in agriculture and the petrochemical, for the destruction of bacterial biofilms, for the water treatment and general disinfection on medical and veterinary field. It turned out that that Superoxidised STERILOX water particularly useful for disinfection Of endoscopes is that sensitive to others, usually cold disinfectants used, e.g. Are peroxyacetic acid.

Während Glutaraldehyd als zuverlässiges Desinfektionsmittel für biegsame faseroptische Endoskope und andere wärmeempfindliche Instrumente verwendet werden kann, und obwohl dies in großem Umfang in vielen Krankenhäusern praktiziert wird, kann seine Verwendung bei dem Pflegepersonal Asthma und Dermatitis hervorrufen, wenn diese Personen Glutaraldehyd-Dämpfen ausgesetzt sind, und so gibt es doch ein Vorurteil gegenüber der Verwendung von Peroxyessigsäure und der erst seit kurzem erfolgenden Bewegung in Richtung der Verwendung von superoxidiertem STERILOX-Wasser für solche Anwendungen.While glutaraldehyde as reliable Disinfectant for Flexible fiber optic endoscopes and other thermosensitive instruments can be used, and although this is widely practiced in many hospitals Its use in nursing staff may be asthma and dermatitis when exposed to glutaraldehyde vapors, and so there is a prejudice against the use of peroxyacetic acid and the recent movement towards use of super-oxidized STERILOX water for such Applications.

Superoxidiertes STERILOX-Wasser ist untersucht worden und ist Gegenstand zweier wissenschaftlicher Artikel von Selkon et al. (Journal of Hospital Infection (1999) 41; 59–70) und Shetty et al. (Journal for Hospital Infection (1999) 41; 101–105). In diesen Studien wurde gefunden, dass frisch erzeugtes superoxidiertes STERILOX-Wasser hoch aktiv gegen Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium-intracellulare, Mycobacterium chelonea, Escherichia coli (einschließlich Typ 0157), Enferococcus feacalis, Pseudomonas aeruginosa, Baccillus subtilis var niger-Sporen, methicillin-resistenten Staphylococcus aureus, Candida albicans, Poliovirus vom Typ 2 und das menschliche Immundefizienz-Virus HIV-1 ist.super-oxidised STERILOX water has been studied and is the subject of two scientific article by Selkon et al. (Journal of Hospital Infection (1999) 41; 59-70) and Shetty et al. (Journal of Hospital Infection (1999) 41; 101-105). In In these studies, it was found that freshly produced super-oxidized STERILOX water was highly active against Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium-intracellulare, Mycobacterium chelonea, Escherichia coli (including type 0157), Enferococcus feacalis, Pseudomonas aeruginosa, Baccillus subtilis var niger spores, methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Candida albicans, Type 2 poliovirus and human immunodeficiency virus HIV-1 is.

In jüngster Zeit hat es einen deutlichen Anstieg des Interesses am Gebrauch von superoxidiertem Wasser als Desinfektionsmittel gegeben, und zwar wegen seiner schnellen und hochgradig biozid wirkenden Aktivität gegen ein breites Spektrum von Bakterien. Tanaka et al (Journal of Hospital Infection (1996) 34; 43–49) berichten über die Elektrolyse einer Salzlösung zur Erzeugung eines superoxidierten Wassers mit einem stark sauren pH von 2,3 bis 2,7, was seine Verwendbarkeit für viele Gebiete begrenzt, insbesondere die Desinfektion von Endoskopen. Der saure pH des superoxidierten Wassers, das gemäß dem Verfahren von Tanaka erzeugt wurde, schließt auch seinen Gebrauch für andere medizinische Indikationen aus.Recently, there has been a marked increase in interest in the use of super-oxidized Water is given as a disinfectant because of its rapid and highly biocidal activity against a broad spectrum of bacteria. Tanaka et al (Journal of Hospital Infection (1996) 34; 43-49) report the electrolysis of a saline solution to produce a super-oxidized water having a strongly acidic pH of 2.3 to 2.7, which limits its utility for many areas. in particular the disinfection of endoscopes. The acidic pH of the super-oxidized water produced according to the method of Tanaka also precludes its use for other medical indications.

Nachdem die Anmelderin Versuche für eine große Anzahl von Anwendungen einschließlich der oben erwähnten durchgeführt hatte, wandte sie ihre Aufmerksamkeit der Verwendung von superoxidiertem STERILOX-Wasser als Desinfektionsmittel für Säugetier-Gewebe zu, insbesondere der Behandlung von offenen Wunden wie Beingeschwüren.After this the applicant attempts for a big Number of applications including the one mentioned above, She turned her attention to the use of super-oxidized To use STERILOX water as a disinfectant for mammalian tissue, in particular the treatment of open wounds such as leg ulcers.

Ein Artikel von Cherry in The Prescriber (Mai 1996) mit dem Titel „GP guide to the care of patients with leg ulcers" stellt fest: „Beingeschwüre sind bekanntermaßen kaum erfolgreich zu behandeln und können die Lebensqualität des Patienten ernsthaft verringern". Tatsächlich haben nach Cherry „epidemiologische Studien gezeigt, dass es zu jedem beliebigen Zeitpunkt annähernd 100.000 Patienten im Vereinigten Königreich gibt, die Beingeschwüre haben. Es wurde geschätzt, dass bei der Behandlung dieser Patienten über 39 Millionen £ pro Jahr allein für Materialien ausgegeben wird, die für die Behandlung ihrer Geschwüre benötigt werden".One Article by Cherry in The Prescriber (May 1996) titled "GP guide to the care of patients with leg ulcers "states:" Leg ulcers are known barely treat successfully and can improve the quality of life of the patient reduce it seriously ". Indeed have to cherry "epidemiological Studies have shown that at any one time approximately 100,000 Patients in the United Kingdom there, the leg ulcers to have. It was estimated that in the treatment of these patients over £ 39 million a year alone for Materials that are needed for the treatment of their ulcers ".

Es gibt zwei Arten von Beingeschwüren; arterielle und venöse. Arterielle Beingeschwüre, die sehr viel schwerer zu behandeln sind, werden durch Ischaemie verursacht, während venöse Geschwüre durch Blutstauungen in den Venen verursacht werden.It There are two types of leg ulcers; arterial and venous. Arterial leg ulcers, which are much harder to treat are caused by ischemia caused while venous ulceration caused by blood congestion in the veins.

Es gib viele Vorschläge für das Versorgen von Geschwüren, die alle verschiedene Erfolgsgrade aufweisen. Eine erfolgreiche Versorgung von Geschwüren ist stark abhängig von der strikten Befolgung eines Behandlungsprogramms in Kombination mit einer effektiven Wunddesinfektion, die die bakterielle Infektion verringert und die Regeneration von Hautfibroblasten und -keratinozyten im Bett des Geschwürs beschleunigt, die für das Heilen der Wunde und das Wachstum von neuem Gewebe essentiell benötigt werden. Wenn das Bakterienwachstum nicht kontrolliert wird, kann die Wunde nicht heilen.It give many suggestions for the Caring for ulcers, all have different degrees of success. A successful Supply of ulcers is highly dependent strict adherence to a treatment program in combination with an effective wound disinfection, which is the bacterial infection reduces and regenerates skin fibroblasts and keratinocytes in the bed of the ulcer accelerates that for the healing of the wound and the growth of new tissue essential needed become. If bacterial growth is not controlled, can do not heal the wound.

Die brauchbarste Behandlung für venöse Geschwüre ist der Einsatz von Kompressionsverbänden zusammen mit einer Hochlagerung des oder der Beine. Dies ahmt die Pumpwirkung der Wadenmuskeln nach, die das Blut zurück zum Körper führen, und maximiert die Entfernung von Blut aus dem oder den Beinen. In Verbindung damit umfassen andere Behandlungsstrategien den Einsatz von topischen Behandlungen wie beispielsweise mit GRANUFLEX^® zur Unterstützung der Körnchenbildung und der Hautreparatur, mit Alginaten, um die Wunde von Schmutzteilchen zu reinigen, mit trockenen, inerten Umschlägen oder Kompressen, um die Wunde zu schützen (was jedoch die Heilung nicht beschleunigt), und mit bakteriostatischen oder bakteriziden Salben zur Verringerung der Infektion. Während Antibiotika in der Vergangenheit eingesetzt wurde, um Infektionen zu verringern, ist dies heutzutage aufgrund des angestiegenen Risikos einer antibiotischen Resistenz keine Behandlung der Wahl.The most useful treatment for venous ulcers is the use of compression bandages together with an elevation of the legs or legs. This mimics the pumping action of the calf muscles, which carry the blood back to the body, and maximizes the removal of blood from the legs or legs. In connection with this, other treatment strategies include clean of dirt the use of topical treatments such as with GRANUFLEX ^® to support the grain formation and skin repair, with alginates to the wound to protect with dry, inert envelopes or compresses to the wound (which however, the healing does not accelerate), and with bacteriostatic or bactericidal ointments to reduce the infection. While antibiotics have been used in the past to reduce infections, this is not the treatment of choice today due to the increased risk of antibiotic resistance.

Während Kaliumpermanganat (KMnO₄) ein Oxidationsmittel ist, das den Langzeittest bei der Behandlung von Beingeschwüren bestanden hat, hat es dennoch die Nachteile, frisch nachgewachsene Haut zu reizen und zu schädigen und eine Entfärbung der Haut zu bewirken. Bekannte Hypochlorite, beispielsweise EUSOL (Edinburgh University Solution Of Lime) und Daikin's Lösung, beruhen hinsichtlich ihrer Desinfektionseigenschaften auf einer hohen Konzentration von Hypochlorit-Ionen. In der Tat wird der Einsatz dieser Verbindungen aufgrund ihrer reizenden und schmerzhaften Wirkungen und der Beeinträchtigung des Zellwachstums nicht mehr empfohlen, weil dies ihrem therapeutischen Wert die Waage hält, was dazu führt, dass diese Präparationen aus dem Gebrauch herausgenommen worden sind. Man hat Versuche unternommen, den basischen Effekt des hohen Hypochlorit-Ionen-Gehalts dieser Lösungen zu verringern, beispielsweise durch den Einsatz von geeigneten Puffern, aber diese Versuche haben sich als unwirksam für solche Umstände herausgestellt.While potassium permanganate (KMnO ₄ ) is an oxidizing agent that has passed the long-term test in the treatment of leg ulcers, it nevertheless has the disadvantages of irritating and damaging freshly regrown skin and causing discoloration of the skin. Known hypochlorites, such as EUSOL (Edinburgh University Solution Of Lime) and Daikin's solution, are based on a high concentration of hypochlorite ions in their disinfecting properties. In fact, the use of these compounds is no longer recommended because of their irritating and painful effects and the impairment of cell growth, as this balances their therapeutic value, which results in these preparations being taken out of use. Attempts have been made to reduce the basic effect of the high hypochlorite ion content of these solutions, for example by the use of suitable buffers, but these attempts have been found to be ineffective for such circumstances.

All dies sprach gegen den Einsatz von Hypochlorite enthaltenden Präparationen für die Behandlung von Beingeschwüren. Der Erfolg beim Desinfizieren und Sterilisieren von Endoskopen und die bekannten, nicht reizenden Effekte des superoxidierten STERILOX-Wassers haben die Anmelderin jedoch dazu gebracht, sich der Behandlung von offenen Wunden wie Beingeschwüren wieder zuzuwenden.Alles this spoke against the use of hypochlorite-containing preparations for the Treatment of leg ulcers. The success in disinfecting and sterilizing endoscopes and the well-known, non-irritating effects of super-oxidised STERILOX water however, have led the applicant to seek the treatment of open wounds like leg ulcers to turn again.

In einem ersten Schritt wurden in vitro-Versuche an Einzelschichten kultivierter Fibroblastenzellen und Keratinozyten-Zellen der menschlichen Haut durchgeführt, um festzustellen, ob superoxidiertes Wasser überhaupt einen Effekt auf die Lebensfähigkeit der Zellen hat oder nicht. Die Zellen wurden unter sterilen Bedingungen in superoxidiertem Wasser inkubiert, das auf der Grundlage von hypochloriger Säure hergestellt war, Natriumhypochlorit und andere oxidierende Chlor-Spezies enthielt und einen pH-Bereich von 4 bis 7 und ein Redox-Potential von rund 1000mV aufwies.In a first step, in vitro experiments were performed on single layers of cultured fibroblast cells and keratinocyte cells of the human skin to determine whether super-oxidized water over has an effect on the viability of the cells or not. The cells were incubated under sterile conditions in super-oxidized water prepared on the basis of hypochlorous acid, containing sodium hypochlorite and other oxidizing chlorine species, having a pH range of 4 to 7 and a redox potential of around 1000mV.

Überraschenderweise fand die Anmelderin, dass es ein pH-Optimum gibt, bei dem das Zellwachstum nicht inhibiert wird, obwohl es andere pH-Werte innerhalb des Bereichs gibt, bei denen die Lebensfähigkeit der Zellen beeinträchtigt ist. In der Tat erwartete die Anmelderin angesichts der Erkenntnisse von Tanaka et al., dass der niedrigere pH-Bereich wirksamer sein würde.Surprisingly Applicant found that there is a pH optimum at which cell growth does not is inhibited, although there are other pH values within the range there, where the viability affects the cells is. In fact, the Applicant expected the findings by Tanaka et al., that the lower pH range may be more effective would.

Der nächste Schritt war entscheidend, weil die Anmelderin nun festzustellen hatte, ob die in vitro erhaltenen Ergebnisse nicht nur in vivo wiederholt werden konnten, sondern ob ein ausreichender biozidaler Effekt vorhanden sein würde, um einer möglicherweise vorhandenen bakteriellen Aktivität entgegen zu wirken, die die Lebensfähigkeit neuer Zellen nachteilig beeinflussen würde. Dementsprechend wurde ein klinischer Test an einem Patienten mit chronischen venösen Beingeschwüren durchgeführt, für den frisch erzeugtes superoxidiertes Wasser auf Basis von hypochloriger Säure mit einem pH von 5,4 eingesetzt wurde.Of the next Step was crucial, because the applicant now determine had whether the results obtained in vitro not only repeated in vivo but whether a sufficient biocidal effect is present would be, possibly one existing bacterial activity counteract the detrimental effect of the viability of new cells would affect. Accordingly, a clinical test was performed on a patient with chronic venous leg ulcers carried out, for the freshly produced superoxidised water based on hypochlorous Acid with a pH of 5.4 was used.

Der Patient verspürte keine Schmerzen und teilte in der Tat mit, dass die Behandlung angenehm war und eine lindernde Wirkung hatte. Ein positiver Effekt auf die Bakterienflora wie auch auf die klinische Erscheinung der Wunden wurde festgestellt. Auf der umgebenden Haut, die bei einer Anzahl von Patienten mit lange offen bleibenden Geschwüren häufig empfindlich ist, ließen sich keine nachteiligen Wirkungen beobachten.Of the Patient felt no pain and indeed communicated that the treatment was pleasant was and had a soothing effect. A positive effect on the Bacterial flora as well as the clinical appearance of the wounds was ascertained. On the surrounding skin, in a number Patients with long-open ulcers are often susceptible observe no adverse effects.

Die Anmelderin glaubt, dass die beobachteten Effekte durch die niedrige Konzentration an oxidiertem (frei verfügbarem) Chlor erklärt werden können, die in superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure vorhanden ist. Dies steht im Gegensatz zu den üblichen bekannten Hypochlorit-Lösungen, die ihre biozidale Aktivität einer hohen Konzentration an freiem Chlor (einschließlich Hypochlorit) verdanken, was sich an ihrem charakteristischen Geruch zeigt.The Applicant believes that the observed effects due to the low Concentration of oxidized (freely available) chlorine can be explained can, which are present in super-oxidized water based on hypochlorous acid is. This is in contrast to the usual known hypochlorite solutions, their biocidal activity a high concentration of free chlorine (including hypochlorite) owe, as evidenced by their characteristic odor.

Es lässt sich sagen, dass die Anmelderin ein Prinzip aufgefunden hat, das darin liegt, dass ein Gleichgewicht zwischen der biozidalen Wirkung und der fehlenden Inhibition des Zellwachstums dafür sorgt, dass die in einer Wunde vorhandene mikrobielle Population so kontrolliert werden kann, dass ein Zellwachstum möglich ist.It let yourself say that the Applicant has discovered a principle in that is that a balance between the biocidal effect and The lack of inhibition of cell growth ensures that in one Wound existing microbial population can be controlled so that cell growth is possible.

Um dieses Prinzip umzusetzen und ausgehend von einem Aspekt der Erfindung wird die Verwendung von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure für die Herstellung eines Medikaments mit einem pH von 4 bis 7 für die Behandlung von Hautgeschwüren, Beingeschwüren und anderen offenen Wunden eines menschlichen oder tierischen Körpers bereitgestellt, indem dieses als Biozid wirkt und eine Zellproliferation für die Wundheilung erlaubt.Around to implement this principle and starting from one aspect of the invention The use of super-oxidized water is based on hypochlorous acid for the Preparation of a drug with a pH of 4 to 7 for the treatment of skin ulcers, leg ulcers and other open wounds of a human or animal body, by acting as a biocide and cell proliferation for wound healing allowed.

Um Zweifel zu vermeiden, sollte klar sein, dass der pH-Wert entweder der des Medikaments oder der des superoxidierten Wassers sein kann.Around To avoid doubt, it should be clear that the pH is either that of the drug or the super-oxidized water.

Anders ausgedrückt, die vorliegende Erfindung liegt in der Bereitstellung von superoxidiertem Wasser, bei welchem die biozidale Wirkung auf hypochloriger Säure beruht und die von inhibitorischen Einflüssen freie Wirkung auf das Zellwachstum von dem pH-Wert der Lösung der hypochlorigen Säure abhängt.Different expressed The present invention is to provide super-oxidized Water in which the biocidal effect is due to hypochlorous acid and the effect of the inhibitory effects on the Cell growth depends on the pH of the solution of hypochlorous acid.

Ausgehend von einem weiteren Aspekt der Erfindung wird die Verwendung von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure für die Herstellung eines Medikaments mit einem pH von 4 bis 7 für die Behandlung von Hautgeschwüren oder Beingeschwüren eines menschlichen oder tierischen Körpers bereitgestellt, indem dieses als Biozid wirkt und eine Zellproliferation für die Wundheilung erlaubt.outgoing Another aspect of the invention is the use of Super-oxidized water based on hypochlorous acid for the production a drug with a pH of 4 to 7 for the treatment of skin ulcers or leg ulcers a human or animal body provided by this acts as a biocide and a cell proliferation for wound healing allowed.

Die Erfindung umfasst außerdem die Auswahl eines pH-Werts im Bereich von 4,0 bis 6,5, vorzugsweise im Bereich von 4,0 bis 6,2, oder am meisten bevorzugt im Bereich von 4,3 bis 6,2, für superoxidiertes Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure für die Herstellung eines Medikaments oder einer anderen Rezeptur mit einem pH von 4 bis 7. Die Anmelderin hat festgestellt, dass es im Falle von Wunden wie beispielsweise Beingeschwüren vorteilhaft ist, wenn der pH auf 5,4 oder etwa in diesem Bereich eingestellt wird.The Invention also includes the selection of a pH in the range of 4.0 to 6.5, preferably in the range of 4.0 to 6.2, or most preferably in the range from 4.3 to 6.2, for Superoxidised water based on hypochlorous acid for the production a drug or other formulation with a pH of 4 to 7. The Applicant has stated that in the case of wounds such as leg ulcers advantageous if the pH is at 5.4 or about this range is set.

Vorzugsweise stellt die Erfindung die Verwendung von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure für die Herstellung eines Medikaments mit einem pH von 4 bis 7 und einem Redox-Potential von mehr als 950mV und vorzugsweise von etwa 1000mV bereit.Preferably the invention provides the use of super-oxidized water the basis of hypochlorous acid for the Preparation of a drug with a pH of 4 to 7 and a Redox potential of more than 950mV and preferably about 1000mV ready.

In jedem der oben definierten Aspekte oder Ausgestaltungen der Erfindung besitzt das superoxidierte Wasser oder das Medikament eine Biozid-Rate (einen D-Wert) mit einer Absenkeinheit von annähernd 1 log bei Sporen von bacillus subtilis in weniger als 1 Minute bei Einsatz einer Mischung aus 9:1 von superoxidiertem Wasser:Inoculum.In any of the aspects or embodiments of the invention as defined above the super-oxidized water or drug has a biocide rate (a D value) with a sinking unit of approximately 1 log for spores of bacillus subtilis in less than 1 minute using a mixture 9: 1 of super-oxidized water: inoculum.

Das superoxidierte Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure kann durch die Elektrolyse einer Salzlösung erhalten werden. Vorzugsweise enthält das Medikament eine Austrittslösung, erhalten durch elektrochemisches Behandeln einer Salzlösung, wobei der pH des Medikaments unter Einsatz einer alkalischen Austrittslösung aus der elektrochemischen Zelle, in der die Salzlösung behandelt wurde, auf den gewünschten Wert eingestellt wird. Durch die auf diese Weise erfolgende Verwendung einer alkalischen Lösung wird der Zusatz von üblichen Puffern mit den damit verbundenen Kosten vermieden. Die Austrittslösung kann weiterhin einen Phosphatpuffer enthalten, um den pH auf den gewünschten Wert einzustellen.The Super-oxidized water based on hypochlorous acid can obtained by the electrolysis of a saline solution. Preferably contains the drug is an exit solution, obtained by electrochemically treating a saline solution, wherein the pH of the drug using an alkaline effluent solution the electrochemical cell in which the saline solution has been treated is placed on the desired value is set. By using this way an alkaline solution becomes the addition of usual Buffers with the associated costs avoided. The exit solution can Continue to contain a phosphate buffer to adjust the pH to the desired Value to set.

Mit Hilfe eines jeden der Ausführungsformen oder Aspekte der Erfindung wie oben definiert wird die Desinfektion von offenen Wunden wie Beingeschwüren leicht ohne Reizung und Schmerzen erreicht, die Ausbreitung von Infektionen wird verringert und das Zellwachstum und die Regeneration sind erleichtert, was die Heilung beschleunigt.With Help of each of the embodiments or aspects of the invention as defined above, the disinfection from open wounds like leg ulcers easily without irritation and Aching pain, the spread of infections is reduced and cell growth and regeneration are facilitated, which the healing accelerates.

Ein weiterer Vorteil liegt darin, dass keine Resistenz oder Toleranz gegenüber einem Desinfektionsmittel entwickelt werden kann, wie es bei Antibiotika der Fall sein würde.One Another advantage is that no resistance or tolerance across from A disinfectant can be developed, as is the case with antibiotics the case would be.

Weiterhin eignet sich das Medikament der Erfindung ohne weiteres dafür, dass die Behandlung auf viele Arten und Weisen durchgeführt wird, obwohl festgestellt wurde, dass ein wässriges Bad, in welches das Bein oder die offene Wunde eingetaucht wird, lindernd und allgemein angenehm für den Patienten ist. Das Medikament kann für die Aufbringung auf die Wunde durch Sprühen auch in flüssiger Form vorliegen. Es sollte beachtet werden, dass auch andere Präparationen als Lösungen eingesetzt werden können, beispielsweise Gele.Farther the medicament of the invention is readily suitable for the treatment is done in many ways, although it was found that an aqueous bath, in which the leg or the open wound is dipped, soothing and generally pleasant for the Patient is. The drug can be applied to the wound by spraying also in liquid Form present. It should be noted that other preparations as solutions can be used for example gels.

Die Anmelderin glaubt, dass die vorliegende Erfindung in einigen oder allen ihrer Ausführungsformen einen Durchbruch darstellt und die Behandlung von offenen Wunden, insbesondere von Beingeschwüren, auf eine Weise revolutionieren wird, die man bisher für nicht möglich gehalten hätte.The Applicant believes that the present invention in some or all of their embodiments one Breakthrough represents and the treatment of open wounds, in particular of leg ulcers, It's going to revolutionize in a way you've never thought before possible would have held.

Um das Verständnis der Erfindung noch weiter zu erleichtern, wird nun beispielhaft auf die beigefügten Beispiele Bezug genommen, worin:

Beispiel 1 eine in vitro-Studie beschreibt, die die Wirkung von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure auf die Proliferation von kultivierten menschlichen Fibroblasten-Hautzellen untersucht;
Beispiel 2 eine in vitro erfolgende Studie beschreibt, die den zytotoxischen Effekt von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure auf kultivierte menschliche Fibroblasten-Hautzellen untersucht;
Beispiel 3 eine in vitro erfolgende Studie beschreibt, die die Wirkung von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure auf die Proliferation von kultivierten menschlichen Keratinozyten-Zellen untersucht;
Beispiel 4 einen klinischen Test mit superoxidiertem Wasser an einem Patienten mit chronischen Beingeschwüren beschreibt.

To further facilitate the understanding of the invention, reference will now be made, by way of example, to the accompanying examples, in which:

Example 1 describes an in vitro study examining the effect of super-oxidized hypochlorous acid-based water on the proliferation of cultured human fibroblast skin cells;
Example 2 describes an in vitro study examining the cytotoxic effect of super-oxidized hypochlorous acid-based water on cultured human fibroblast skin cells;
Example 3 describes an in vitro study examining the effect of super-oxidized hypochlorous acid-based water on the proliferation of cultured human keratinocyte cells;
Example 4 describes a clinical test with super-oxidized water on a patient with chronic leg ulcers.

Beispiel 1example 1

Fibroblasten sind abgeplattete, unregelmäßig geformte Bindegewebszellen, die in fibrösem Bindegewebe ubiquitär sind: sie sezernieren Bestandteile der extrazellulären Matrix einschließlich Kollagen und spielen eine wichtige Rolle bei der Geweberegenerierung.fibroblasts are flattened, irregularly shaped Connective tissue cells found in fibrous Connective tissue ubiquitous are: they secrete components of the extracellular matrix including Collagen and play an important role in tissue regeneration.

Drei in vitro erfolgende Versuche mit superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure wurden an einzelzellschichtigen Zellkulturen menschlicher Hautfibroblastenzellen (HDF-Zellen) durchgeführt, um festzustellen, ob das superoxidierte Wasser die Proliferation von HDF-Zellen beeinflusst. Ein Bereich von Verdünnungen von superoxidiertem Wasser bei verschiedenen pH-Werten wurde untersucht.Three in vitro experiments with superoxidated water on the Basis of hypochlorous acid were on single-cell cell cultures of human dermal fibroblast cells (HDF cells) performed to determine if the super-oxidized water prolongs the proliferation of HDF cells affected. A range of dilutions of super-oxidized Water at various pH's was examined.

Verfahrenmethod

Das in den Untersuchungen eingesetzte superoxidierte Wasser war das Produkt der Elektrolyse einer wässrigen Salzlösung, die über eine Mischung aus eigenen Katalysatoren auf Titanelektroden geleitet worden war, wobei eine Mischung von oxidierten Spezies, insbesondere hypochlorige Säure (HOCl), mit einer Konzentration von etwa 144mg/l bis 400mg/l an verfügbarem freiem Chlor (Cl) entstand. Das superoxidierte Wasser wurde je nach Bedarf für jede Untersuchung erzeugt; die Vorrichtung (zur Verfügung gestellt von Sterilox Medical Limited, Abingdon, UK) wurde so betrieben, dass sich ein Redox-Potential von > 950mV für die schließlich erzeugte Lösung ergab, wie von der Gesellschaft empfohlen.The super-oxidized water used in the studies was the product of the electrolysis of an aqueous salt solution which had been passed over a mixture of proprietary catalysts on titanium electrodes using a mixture of oxidized species, especially hypochlorous acid (HOCl), with a conc from about 144 mg / l to 400 mg / l of available free chlorine (Cl). The super-oxidized water was generated as needed for each test; the device (provided by Sterilox Medical Limited, Abingdon, UK) was operated to give a redox potential of> 950mV for the final solution produced, as recommended by the Company.

Geeignete Verdünnungen des superoxidierten Wassers wurden hergestellt, und der pH der Endlösung wurde unter Verwendung eines Phosphatpuffers eingestellt.suitable dilutions of the super-oxidized water were prepared and the pH of the final solution became adjusted using a phosphate buffer.

Für den Proliferationstest wurden HDF-Zellen in normalem (10%) fetalem Kälberserum (FCS) und Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) mit 1,5 × 10³ Zellen pro Vertiefung oder Schale ausgesät. Nach 24 Stunden wurde das Medium gegen niedriges (0,4%) FCS/DMEM ausgetauscht. Nach einer weiteren 48-stündigen Inkubation wurde superoxidiertes Wasser in unterschiedlichen Konzentration zu den Zellen hinzugefügt. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde unter Einsatz eines standardmäßigen Absorptionstest drei und sechs Tage nach dem Aufbringen von superoxidiertem Wasser untersucht.For the proliferation test, HDF cells were seeded in normal (10%) fetal calf serum (FCS) and Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) at 1.5 x 10 ³ cells per well or dish. After 24 hours, the medium was changed to low (0.4%) FCS / DMEM. After another 48 hour incubation, super-oxidized water of different concentration was added to the cells. The viability of the cells was examined using a standard absorption test three and six days after the super-oxidized water application.

Ergebnisse Results

i) Test 1 HDF cells were incubated with super-oxidized water in various dilution ranges at a pH of 4.3. The dilutions used were: 1, 1/3, 1/7, 1/14, 1/28, 1/56, 1/112, 1/224, 1/448, 1/896, 1/1792, and 0. Like In the attached graphs, dilutions of the super-oxidized water of 1/28 or less on both day 3 and day 6 significantly inhibited HDF proliferation or killed the cells. A slight inhibition of proliferation was observed at a dilution of 1/56. Dilutions of 1/112 to 1/448 did not affect proliferation, while the 1/896 dilution showed some cell proliferation and the 1/1792 dilution showed significant proliferation of HDF cells. These results indicate that high levels of super-oxidized water significantly inhibit HDF proliferation, probably due to the acidity and consequent toxicity of the super-oxidized water. The high level of proliferation observed with a 1/1792 superoxidised water concentration may be due to other factors. Effect of super-oxidized water on the proliferation of dermal fibroblasts
ii) Test 2 Under the same conditions as in Test 1, HDF cells were incubated with super-oxidized water of various dilutions at a pH of 6.2. The dilutions were as follows: 1/20, 1/40, 1/60, 1/80, 1/100, 1/120, 1/1000, 1/1500, 1/2000 1/3000, 1/4000 and 0 No proliferation stimulation was observed, and in fact, inhibition of HDF growth was observed in cells incubated with dilution of super-oxidized water of 1/20. The higher dilution of 1/40 on the other hand showed no cell toxicity. This test was repeated with the HDF cells seeded in super-oxidized water at dilutions of 1, 1/4, 1/8 1/12, 1/16, 1/20, 1/24, 1/28, and 1/32. Both after day 3 and after day 6, cell damage or inhibition of proliferation was observed at dilutions of 1/20 and below. In contrast, a dilution of more than 1/20 showed no damage or inhibition of proliferation. The conclusion is that while the more alkaline pH appears to be less toxic to HDF cells, proliferation of HDF cells can not be observed at this pH.
iii) Test 3 In this test, two plates with cells were always grown in normal growth medium (10% FCS / DMEM). A plate with cells was treated as described in Test 1, but after three days Incubation with the super-oxidized water became the growth medium changed, with 0.4% FCS / DMEM exchanged for 10% FCS / DMEM was to observe the recovery of the cells.

HDF-Zellen wurden bei 31 °C mit superoxidiertem Wasser mit verschiedenen Verdünnungen bei einem pH von 5,4 inkubiert. Die eingesetzten Verdünnungen waren die folgenden: 1/10, 1/20, 1/40, 1/60, 1/80, 1/100, 1/150, 1/1000, 1/1500, 1/2000, 1/4000 und 0.HDF cells were at 31 ° C with super-oxidized water with various dilutions incubated at a pH of 5.4. The dilutions used were the following: 1/10, 1/20, 1/40, 1/60, 1/80, 1/100, 1/150, 1/1000, 1/1500, 1/2000, 1/4000 and 0.

Am Tag 3 und Tag 6 ließ sich eine Zellproliferation an Zellen beobachten, die mit superoxidiertem Wasser bei einer Verdünnung von 1/20 oder höher in entweder 0,4%igem oder 10%igem FCS/DMEM inkubiert worden waren. Einige Proliferationsniveaus hatten statistische Signifikanz erlangt.At the Day 3 and Day 6 settled observe cell proliferation on cells superimposed with superoxide Water at a dilution from 1/20 or higher in either 0.4% or 10% FCS / DMEM. Some proliferation levels had gained statistical significance.

Eine Verdünnung von 1/10 superoxidiertem Wasser inhibierte das Zellwachstum in HDF-Zellen, die in 0,5% FCS/DMEM, aber nicht solche, die in 10% FCS/DMEM gezüchtet worden waren.A dilution 1/10 super-oxidized water inhibited cell growth in HDF cells, those in 0.5% FCS / DMEM, but not those that have been bred in 10% FCS / DMEM were.

Nach 3-tägier Inkubation in 0,4% FCS/DMEM mit oder ohne superoxidiertem Wasser wurde das Medium gegen 10% FCS/DMEM ausgetauscht. Die Zellen, die mit superoxidiertem Wasser inkubiert worden waren, zeigten die gleiche Fähigkeit, sich von der Unterdrückung des Zellwachstums zu erholen, die beim Züchten unter 0,4% FCD/DMEM beobachtet worden war, wie Kontrollzellen.To 3-tägier Incubate in 0.4% FCS / DMEM with or without super-oxidized water the medium was changed to 10% FCS / DMEM. The cells that were incubated with super-oxidized water, showed the same Ability, from the oppression of cell growth observed when growing under 0.4% FCD / DMEM had been like control cells.

Diese Tests wurden mit den HDF-Zellen wiederholt, die in superoxidiertem Wasser mit Verdünnungen von 1/7, 1/10, 1/15, 1/20, 1/40, 1/60, 1/100, 1/500, 1/1000, 1/2000, 1/4000 und 0 ausgesät worden waren.These Tests were repeated with the HDF cells in super-oxidized Water with dilutions of 1/7, 1/10, 1/15, 1/20, 1/40, 1/60, 1/100, 1/500, 1/1000, 1/2000, Seeded 1/4000 and 0 had been.

Wiederum wurde sowohl am Tag 3 als auch am Tag 6 Zellproliferation an HDF-Zellen beobachtet, die in 0,4% FCS/DMEM gezüchtet worden waren, wobei der beobachtete Unterschied bei den meisten Verdünnungen statistisch signifikant war. Keine Inhibierung des Zellwachstums wurde beobachtet, nicht einmal bei der Verdünnung von 1/7 superoxidiertem Wasser. Eine Stimulation des Zellwachstums wurde auch bei solchen Fällen beobachtet, die in 10% FCS/DMEM in Gegenwart von superoxidiertem Wasser gezüchtet worden waren; das Proliferationsniveau erreichte hier jedoch keine statistische Signifikanz. Wo das Zellwachstum durch Inkubation mit superoxidiertem Wasser beeinträchtigt worden war, wurde eine Erholung beobachtet, was die Beobachtungen aus dem ersten Satz von Experimenten bestätigte.In turn was cell proliferation on HDF cells both on day 3 and day 6 observed in 0.4% FCS / DMEM, with the observed difference at most dilutions statistically significant was. No inhibition of cell growth was observed once at dilution of 1/7 super-oxidized water. A stimulation of cell growth was also in such cases observed in 10% FCS / DMEM in the presence of super-oxidized Water bred had been however, the proliferation level did not reach this level statistical significance. Where cell growth by incubation with impaired super-oxidized water A recovery was observed, observing the observations confirmed from the first set of experiments.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass HDF-Zellen, die mit superoxidiertem Wasser von pH 5,4 inkubiert worden waren, keine Inhibition des Zellwachstums zeigten, nicht einmal in Gegenwart einer 1/7-Verdünnung des superoxidierten Wassers.In summary let yourself say that HDF cells react with super-oxidized water of pH 5.4 were incubated, showed no inhibition of cell growth, not even in the presence of a 1/7 dilution of super-oxidized water.

Schlussfolgerungconclusion

Die Gegenwart von superoxidiertem Wasser mit einem pH von 5,4 inhibiert das HDF-Zellwachstum in vitro nicht.The Presence of super-oxidized water with a pH of 5.4 inhibited HDF cell growth in vitro is not.

Beispiel 2Example 2

Drei in vitro Versuche wurden durchgeführt, um den zytotoxischen Effekt von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure auf HDF-Zellen zu untersuchen.Three In vitro experiments were performed to assess the cytotoxic effect of super-oxidized water based on hypochlorous acid To study HDF cells.

Methodemethod

Das superoxidierte Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure war identisch mit dem, das in Beispiel 1 beschrieben wurde.The was super-oxidized water based on hypochlorous acid identical to that described in Example 1.

HDF-Zellen wurden in 10% FCS/DMEM mit 5 × 10³ Zellen pro Vertiefung oder Schale ausgesät. Nach 72-stündiger Inkubation bei 31 °C wurden Verdünnungen von superoxidiertem Wasser in HBSS hergestellt und den Zellen zugesetzt. Die Lebensfähigkeit der Zellen wurde durch einen standardisierten Absorptionstest in Zeitintervallen von 15 Minuten bis zum Ende einer Stunde ab dem Zusatz des superoxidierten Wassers sichergestellt.HDF cells were seeded in 10% FCS / DMEM at 5 x 10 ³ cells per well or dish. After 72 hours of incubation at 31 ° C, dilutions of super-oxidized water in HBSS were prepared and added to the cells. The viability of the cells was ensured by a standardized absorption test at time intervals of 15 minutes to the end of one hour from the addition of the super-oxidized water.

ErgebnisseResults

i) Test 1 HDF cells were superoxidized Water in different dilutions incubated at a pH of 4.3. The prepared dilutions were: 1, 1/3, 1/7, 1/14, 1/28, 1/56, 1/112, 1/224, 1/448, 1/896, 1/1792 and 0. No effect on the viability of the cells was in Presence of super-oxidized water with dilutions of 1/28 or above to any one of the times observed. A dilution of 1/14 caused a slight damage the cells while dilutions 1/7 and under killed the cells.
ii) Test 2 Using the same conditions as in Test 1 HDF cells were treated with super-oxidized water at various dilutions incubated at a pH of 6.2. The dilutions used were the following: 1, 1/4, 1/8, 1/12, 1/16, 1/20, 1/24, 1/28, 1/32, 1/36, 1/40 and 0. At no time was a significant Influence on viability of HDF cells in the presence of super-oxidized water with dilutions of 1/20 or above observed. dilutions 1/16 or less, however, induced cell damage.
iii) Test 3 Using the same conditions as in the tests 1 and 2 were HDF cells with super-oxidized water with different dilutions incubated at a pH of 4.0. The dilutions used were the following: 1, 1/4, 1/8, 1/12, 1/16, 1/20, 1/24, 1/28, 1/50, 1/100, 1/200 and 0.

Verdünnungen von superoxidiertem Wasser mit 1/24 und 1/20 induzierten eine geringfügige Schädigung der Zellen, während eine Verdünnung von 1/16 oder darunter den Zelltod induzierten.dilutions of 1/24 and 1/20 super-oxidized water induced minor damage to the Cells while a dilution of 1/16 or less induced cell death.

Schlussfolgerungconclusion

Die Ergebnisse dieser Tests stützen die in Beispiel 1 gezeigten Ergebnisse, denn während superoxidiertes Wasser bei pH 4,0 bis 4,3 und pH 6,2 Schäden an kultivierten HFD-Zellen induziert, werden größere zytotoxische Effekte bei dem niedrigeren pH beobachtet.The Support the results of these tests the results shown in Example 1, because while super-oxidized water at pH 4.0 to 4.3 and pH 6.2 damage to cultured HFD cells induced, become larger cytotoxic Effects observed at the lower pH.

Beispiel 3Example 3

Unter Berücksichtigung der in den Beispielen 1 und 2 beschriebenen Ergebnisse wurden zwei Tests in vitro durchgeführt, um die Wirkung von superoxidiertem Wasser auf die Zellproliferation von menschlichen Keratinozyten (HK) zu untersuchen. Das in diesen Tests eingesetzte superoxidierte Wasser war identisch mit dem, das in Bespiel 1 beschrieben wurde.Under consideration The results described in Examples 1 and 2 became two Tests done in vitro, the effect of super-oxidized water on cell proliferation of human keratinocytes (HK). That in these Tests used super-oxidized water was identical to that, the in Example 1 was described.

Keratinozyten sind Hautzellen der Epidermis, die Keratin synthetisieren und zusammen mit Hautfibroblasten wesentlich für die Hautheilung sind.keratinocyte are skin cells of the epidermis that synthesize and synthesize keratin with skin fibroblasts are essential for skin healing.

Test 1Test 1

HK-Zellen (subkultiviert, P2, FS, 7 Jahre) wurden mit 8 × 10³ Zellen pro Vertiefung oder Schale ausgesät und bei 31 °C in vier 24 Vertiefungen enthaltenden Platten in CLONETICS^® (Biowhittaker, US) serumfreiem Medium mit vollständigen Ergänzungen inkubiert, nachstehend bezeichnet als Keratinozyten-Wachstumsmedium (KBM). Nach 24-stündiger Inkubation wurde das Medium in den Platten 1 und 2 gegen CLONETICS^® (Biowhittaker, US) serumfreiem Medium ohne vollständige Ergänzungen ausgetauscht, das nachstehend als Keratinozyten-Basalmedium (KBM) bezeichnet wird.HK cells (subcultured, P2, FS, 7 years) were seeded at 8 x 10 ³ cells per well or dish and incubated serum-free at 31 ° C in four 24-well plates containing in Clonetics ^® (Biowhittaker, US) medium with complete supplements , hereinafter referred to as keratinocyte growth medium (KBM). After 24 hours of incubation, the medium in plates 1 and 2 against Clonetics ^® (Biowhittaker, US) was exchanged for serum-free medium without complete supplements, hereinafter referred to as keratinocyte basal medium (KBM).

Bei einer weiteren, 48 Stunden dauernden Inkubation wurde superoxidiertes Wasser, verdünnt in KBM mit pH 5,4, den Platten 1 und 2 zugesetzt, und superoxidiertes Wasser, verdünnt in KGM, wurde den Platten 3 und 4 zugesetzt. Die Verdünnungen des superoxidierten Wassers waren die folgenden: 1/10, 1/20, 1/50, 1/100, 1/150 und 0. Der pH der schließlich erhaltenen Lösung des superoxidierten Wassers wurde unter Verwendung eines Phosphatpuffers eingestellt.at another 48 hour incubation was superoxidized Water, diluted in KBM pH 5.4, plates 1 and 2 added, and super-oxidized Water, diluted in KGM, was added to plates 3 and 4. The dilutions of super-oxidized water were the following: 1/10, 1/20, 1/50, 1/100, 1/150 and 0. The pH is finally obtained solution of the super-oxidized water was made using a phosphate buffer set.

Nach Inkubation für weitere 3 Tage wurde ein standardisierter Absorptionstest an Platte 3 durchgeführt, um die Lebensfähigkeit und das Wachstum der Zellen zu beobachten. Der Absorptionstest wurde an Platte 4 nach weiteren 2 Tagen durchgeführt. Da die in KBM inkubierten Zellen nicht gut wuchsen, wurden die Platten 1 und 2 verworfen.To Incubation for another 3 days was a standardized absorption test on plate 3 performed, for viability and to observe the growth of the cells. The absorption test was performed on plate 4 after another 2 days. Because those incubated in KBM Cells did not grow well, plates 1 and 2 were discarded.

Der Absorptionstest zeigte, dass sowohl am 3. als auch am 5. Tag eine Zellproliferation in Gegenwart aller Verdünnungen des superoxidierten Wassers stattgefunden hatte. Am Tag 5 hatte das Ausmaß der Zellproliferation ein signifikantes Niveau im Vergleich zu dem Zellwachstum in Abwesenheit von superoxidiertem Wasser erreicht.The absorption test showed that cell proliferation had occurred in the presence of all dilutions of super-oxidized water on both the 3rd and 5th day. By day 5, the extent of cell had proliferation reached a significant level compared to cell growth in the absence of super-oxidized water.

Test 2Test 2

Angesichts der Tatsache, dass die HK-Zellen in KBM nicht wuchsen und in Gegenwart von superoxidiertem Wasser in KGM eine signifikante Proliferation zeigten, wurde entschieden, dass KBM mit niedrigeren Konzentrationen an Ergänzungen als Vorratshaltungsmedium eingesetzt werden sollte, mit oder ohne superoxidiertem Wasser.in view of the fact that HK cells did not grow in KBM and in the presence of super-oxidized water in KGM a significant proliferation showed that KBM was using lower concentrations at additions should be used as storage medium, with or without super-oxidized water.

HK-Zellen (aufgetaut, P2, FS, 7 Jahre) wurden auf sechs Platten mit jeweils 96 Vertiefungen in einer Dichte von 3 × 10³ Zellen/Vertiefung in KGM ausgesät. Nach einer 24-stündigen Inkubation wurde das Medium auf den Platten 1 und 2 gegen KBM mit 20% Ergänzungen ausgetauscht, und das Medium der Platten 3 und 4 wurde gegen KBM mit 50% Ergänzungen ausgetauscht.HK cells (thawed, P2, FS, 7 years) were seeded on six 96-well plates at a density of 3 x 10 ³ cells / well in KGM. After a 24 hour incubation, the medium on plates 1 and 2 was changed to KBM with 20% supplements, and the medium of plates 3 and 4 was changed to KBM with 50% supplements.

Nach einer weiteren 24-stündigen Inkubation wurde den Platten 1 und 2 in KBM mit 20% Ergänzungen verdünntes superoxidiertes Wasser zugegeben, den Platten 3 und 4 wurde in KBM mit 50% Ergänzungen verdünntes superoxidiertes Wasser zugegeben, und die Platten 5 und 6 erhielten superoxidiertes Wasser, das in vollständigem KGM verdünnt war. Die Verdünnungen des superoxidierten Wassers waren die folgenden: 1/7, 1/10, 1/15, 1120, 1/40, 1/60, 1/100, 1/500, 1/1000, 1/2000, 1/4000 und 0.To another 24-hour Incubation was superimposed to plates 1 and 2 in KBM diluted with 20% supplements Water was added to plates 3 and 4 in KBM with 50% additions diluted Superoxidiertes water was added, and the plates 5 and 6 received super-oxidized water diluted in complete KGM. The dilutions of super-oxidized water were the following: 1/7, 1/10, 1/15, 1120, 1/40, 1/60, 1/100, 1/500, 1/1000, 1/2000, 1/4000 and 0.

Die Zellen wurden in Gegenwart des superoxidierten Wassers weitere 3 Tage inkubiert, worauf ein standardisierter Absorptionstest an den Platten 1, 3 und 5 durchgeführt wurde, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu bestätigen, und das Medium der Platten 2, 4 und 6 gegen KGM ausgetauscht wurde. Die Platten 2, 4 und 6 wurden nach einer weiteren 48-stündigen Inkubation untersucht.The Cells became 3 additional in the presence of super-oxidized water Days incubated, followed by a standardized absorption test on the Plates 1, 3 and 5 performed became the viability to confirm the cells and the medium of plates 2, 4 and 6 was replaced with KGM. Plates 2, 4 and 6 were after another 48 hour incubation examined.

Eine Stimulation der Zellproliferation sowohl am Tag 3 als auch am Tag 5 wurde mit allen Prozentsätzen der KGM-Ergänzungen beobachtet. Das Ausmaß der Stimulation unterschied sich jedoch nicht signifikant im Vergleich mit dem Zellwachstum der Kontrollen. Eine Zytotoxizität wurde nicht beobachtet, nicht einmal bei der niedrigen Verdünnung von 1/7 des superoxidierten Wassers.A Stimulation of cell proliferation both on day 3 and during the day 5 was with all percentages KGM supplements observed. The extent of However, stimulation did not differ significantly in comparison with the cell growth of the controls. A cytotoxicity was not observed even at the low dilution of 1/7 of the super-oxidized water.

Schlussfolgerungconclusion

In der Gegenwart von KGM und superoxidiertem Wasser kultivierte Haut-Keratinozyten zeigten eine beschleunigte Zellproliferation, und in Gegenwart von superoxidiertem Wasser konnte keine Zytotoxizität beobachtet werden.In showed the presence of KGM and super-oxidized water cultured skin keratinocytes an accelerated cell proliferation, and in the presence of super-oxidized Water could not be cytotoxic to be watched.

Beispiel 4Example 4

Eine vorläufige klinische Bewertung von superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure wurde an einem Patienten mit chronischen venösen Geschwüren sowohl am linken als auch am rechten Bein durchgeführt. Das Ziel der Studie war es, festzustellen, ob sich der bakterielle Zustand der Geschwüre verändert und ob sich das Bett des Geschwürs bei einer Behandlung mit superoxidiertem Wasser verbessert.A provisional clinical evaluation of superoxidised water based on hypochlorous acid was on a patient with chronic venous ulcers both on the left as well performed on the right leg. The aim of the study was to determine if the bacterial Condition of the ulcers changed and whether the bed of the ulcer improved when treated with super-oxidized water.

Verfahrenmethod

Die Beine des Patienten wurden in einem Wasserbad 15 Minuten lang in 40 Liter superoxidiertem Wasser eingetaucht, bevor man sie trocknen ließ.The Legs of the patient were placed in a water bath for 15 minutes Dipped 40 liters of super-oxidised water before you dry them left.

Eine Zwischenbewertung ohne Behandlung wurde nach einer Woche durchgeführt. Eine zweite Behandlung mit superoxidiertem Wasser wurde nach 2 Wochen wiederholt, und bei dieser Behandlung wurde der Patient drei jeweils 15 Minuten dauernden Waschungen unterworfen, die jeweils einen Abstand von ungefähr 3 Stunden voneinander hatten.A Interim evaluation without treatment was performed after one week. A second treatment with super-oxidized water was after 2 weeks repeated, and in this treatment, the patient was three each Subjected to 15-minute washes, one at a time from about 3 Hours apart.

Die klinische Folgebehandlungs-Bewertung wurde einen und mehrere Tage nach der zweiten Behandlung durchgeführt.The Clinical follow-up evaluation was one and several days performed after the second treatment.

Eine semi-quantitative mikrobiologische Analyse der Beingeschwüre wurde an Tupfern durchgeführt, die vor und 15 Minuten nach der Behandlung mit superoxidiertem Wasser genommen wurden.A semi-quantitative microbiological analysis of leg ulcers performed on swabs, the before and 15 minutes after treatment with super-oxidized water were taken.

ErgebnisseResults

Nach der ersten Behandlung berichtete der Patient, dass die Behandlung angenehm und schmerzfrei war. Das Aussehen der Geschwüre beider Beine hatte sich bei einer Bewertung fünf Stunden nach der Behandlung merklich verbessert.To At the first treatment, the patient reported that the treatment was pleasant and painless. The appearance of the ulcers of both Legs had a rating five hours after treatment noticeably improved.

Wie in Tabelle 1 zu sehen, zeigte die quantitative Mikrobiologie eine Verringerung der Anzahl an koloniebildenden Einheiten an den Geschwüren des rechten Beins in der Größenordnung von 10² und eine Verringerung am linken Bein in der Größenordnung von 10⁴.As can be seen in Table 1, quantitative microbiology showed a reduction in the number of colony-forming units on the right leg ulcers of the order of 10 ² and a decrease in the left leg of the order of 10 ⁴ .

Tabelle 1 – halbquantitative mikrobiologische Analyse von Beingeschwüren vor und nach der Behandlung mit superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure. Die angegebenen Ziffern beziehen sich auf die Anzahl von koloniebildenden Einheiten (cfu) pro ml.

Table 1 - Semi-quantitative microbiological analysis of leg ulcers before and after treatment with super-oxidized water based on hypochlorous acid. The numbers given refer to the number of colony forming units (cfu) per ml.

Eine Woche nach der ersten Behandlung gab es einen Besuch des Patienten bzw. beim Patienten, und dabei wurde er mit der üblichen Therapie behandelt, darunter mit Kaliumpermanganat. Dessen Wirkung auf das Erscheinungsbild der Beingeschwüre als Folge der Behandlung schien nicht derart eindrucksvoll wie die, die man mit superoxidiertem Wasser beobachten konnte.A Week after the first treatment there was a visit of the patient or in the patient, and he was treated with the usual therapy, including potassium permanganate. Its effect on the appearance the leg ulcers as a result of the treatment did not seem as impressive as that which you could observe with super-oxidized water.

Eine zweite Behandlung mit superoxidiertem Wasser wurde eine Woche später wiederholt, und man erhielt vergleichbare günstige Ergebnisse. Zwischen den Behandlungsperioden waren die Geschwüre an beiden Beinen schorfig geworden. Sofort nach der ersten Waschung war das Bett des Geschwürs weißlich-blass aufgrund von Brandigkeit (Schaumbildung). Ein reinigender Effekt wurde nach den späteren beiden Waschungen beobachtet, und eine merkliche Verbesserung am Zustand des Geschwürs wurde 18 Stunden nach der ersten Waschung beobachtet.A second treatment with super-oxidized water was repeated a week later, and you got comparable cheap Results. Between the treatment periods, the ulcers were at both Legs become scabby. Immediately after the first wash it was Bed of the ulcer whitish-pale due of gangrene (foaming). A cleansing effect was after later observed both washes, and a marked improvement in the Condition of the ulcer was observed 18 hours after the first wash.

Der Patient berichtet, dass die Behandlung nicht unangenehm sei; die Lösung in dem Bad wirkte lindernd, und die Haut fühlte sich danach etwas gestrafft an. Der Patient berichtete, dass er die Straffung fühlen konnte, sobald kalte Luft an die Haut gelangte.Of the Patient reports that the treatment is not unpleasant; the solution in the bath had a soothing effect, and the skin felt a little taut afterwards at. The patient reported that he could feel the tightening, as soon as cold air gets to the skin.

Bezugnehmens auf Tabelle 2 zeigte die quantitative Mikrobiologie eine Verringerung der Anzahl an koloniebildenden Einheiten in der Größenordnung von 10² in den Geschwüren des rechten Beins und eine Verringerung in der Größenordnung von 10⁴ am linken Bein.Referring to Table 2, quantitative microbiology showed a reduction in the number of colony-forming units on the order of 10 ² in the right leg ulcers and a 10 ⁴ reduction in the left leg.

Tabelle 2 – halbquantitative mikrobiologische Analyse von Beingeschwüren vor und nach der Behandlung mit superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure. Die angegebenen Ziffern beziehen sich auf die Anzahl von koloniebildenden Einheiten (cfu) pro ml.

Table 2 - Semi-quantitative microbiological analysis of leg ulcers before and after treatment with super-oxidized water based on hypochlorous acid. The numbers given refer to the number of colony forming units (cfu) per ml.

Schlussfolgerungconclusion

Die Hauptziele der klinischen Studie lagen darin, die Bequemlichkeit und Sicherheit für den Patienten sowie die Effizienz einer Behandlung mit superoxidiertem Wasser auf der Basis von hypochloriger Säure zu untersuchen.The The main objectives of the clinical trial were comfort and safety for the patient as well as the efficiency of a treatment with super-oxidized To study water based on hypochlorous acid.

Der Einsatz von antiseptischen Mitteln zum Reinigen von Wunden ist kontraindiziert, insbesondere in Hinblick auf den Grad an Schmerzen, der mit dieser Art von Behandlung verbunden ist. Dieser Patient fühlte keine Schmerzen, und er berichtete in der Tat über einen lindernden Effekt. Es gab sowohl eine positive Wirkung hinsichtlich der bakteriellen Flora als auch hinsichtlich der klinischen Erscheinung der Wunden. Es gab keine nachteilige Beeinflussung der umgebenden Haut, die bei vielen Patienten mit lange offen bleibenden Geschwüren häufig empfindlich ist.Of the Use of antiseptic agents to clean wounds is contraindicated especially with regard to the degree of pain associated with this Type of treatment is connected. This patient did not feel any Pain, and he actually reported a soothing effect. There was both a positive effect in terms of bacterial Flora as well as the clinical appearance of the wounds. There was no adverse affect on the surrounding skin In many patients with long open ulcers often sensitive is.

Claims

Use of super-oxidized water on the Base of hypochlorous acid for the Preparation of a drug with a pH of 4 to 7 for the treatment of skin ulcers, leg ulcers or other open wounds of a human or animal body by this acts as a biocide and allows cell proliferation for wound healing.

Use of super-oxidized water on the base hypochlorous acid for the Preparation of a drug with a pH of 4 to 7 for the treatment of skin ulcers or leg ulcers human or animal body, by acting as a biocide and cell proliferation for wound healing allowed.

Use of super-oxidized water according to claim 1 or claim 2 wherein the medicament is a liquid form for application to the wound by bathing possesses.

Use of super-oxidized water according to claim 1 or claim 2 wherein the medicament is a liquid form for application on the wound by spraying has.

Use of super-oxidized water according to claim 1 or claim 2, wherein the medicament is for topical application gelatinous on the wound is.

Use of super-oxidized water after one the claims 1 to 5, wherein the pH is selected within the range of 4.0 to 6.5.

Use of super-oxidized water after one the claims 1 to 5, wherein the pH is selected within the range of 4.0 to 6.2.

Use of super-oxidized water after one the claims 1 to 5, wherein the pH is selected within the range of 4.3 to 6.2.

Use of super-oxidized water after one the claims 1 to 5, wherein the pH is about 5.4.

Use of super-oxidized water according to one of the preceding claims and with a redox potential of> 950mV.

Use of super-oxidized water according to claim 10 and with a redox potential of about 1000mV.

Use of super-oxidized water according to one of the preceding claims, wherein the super-oxidized water or drug has a biocide (D) value of nearly 1 log lowering unit for spores of Bacillus subtilis in less than a minute with a mixture of super-oxidized water: inoculum of 9: 1.

Use of super-oxidized water as claimed in any one of the preceding claims, wherein the medicament comprises an effluent solution obtained by electrochemically treating a saline solution and wherein the pH of the medicament is eluted using an alkaline effluent solution mix cell in which the saline solution is treated or is adjusted to the desired value.

Use of super-oxidized water according to claim 13, wherein the exit solution further contains a phosphate buffer to adjust the pH to the desired level Value to set.