DE4329309A1 - Lipopeptide compounds - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft Lipopeptid-Verbindungen, ihre Verwendung und pharmazeutische Mittel, welche diese Verbindungen enthalten.The invention relates to lipopeptide compounds, their Use and pharmaceutical agents which these Connections included.
Die EP-A 0 000 330 beschreibt Lipopeptide der Formel:EP-A 0 000 330 describes lipopeptides of the formula:
worin R₁ und R₂ unter anderem einen gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest mit 11 bis 21 Kohlenstoffatomen bedeutet, R³ ein Wasserstoffatom bedeutet und X eine peptidisch gebundene natürliche aliphatische Aminosäure oder eine Aminosäurensequenz von 2 bis 10 natürlichen Aminosäuren bedeutet. Diese Lipopeptide besitzen immunpotenzierende Wirkung und stimulieren beispielsweise die in vitro anhand der Tymidininkorporation bestimmte Proliferation von B-Lymphozyten.wherein R₁ and R₂ include a saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon residue with 11 to 21 Means carbon atoms, R³ means a hydrogen atom and X is a peptide-bound natural aliphatic amino acid or an amino acid sequence of 2 to 10 natural Means amino acids. Possess these lipopeptides immunopotentiating effect and stimulate, for example determined in vitro on the basis of tymidine incorporation B lymphocyte proliferation.
Die EP-A 0 210 412 beschreibt Membrananker-Wirkstoffkonjugate der Formel:EP-A 0 210 412 describes membrane anchor-active substance conjugates of the formula:
worin A unter anderem für ein Schwefelatom steht, n = 0 bis 5; m = 1 oder 2; R, R′, R′′ eine Alkylgruppe mit 7 bis 25 Kohlenstoffatomen bedeuten und X ein Wirkstoff oder eine Spacer-Wirkstoffgruppe ist. Diese Verbindungen werden zur Herstellung von Antikörpern und synthetischen Vaccinen, in der Gentechnologie zur Erleichterung der Zellfusion, zur Herstellung von Zellmarkern, zur Affinitätschromatographie, für Liposomenpräparate, für medizinische Zwecke und als Zusatz zu Lebensmittel oder Futterstoffen im Human- und Tierbereich, sowie als Zusatz zu Kulturmedien für Mikroorganismen und für Zellkulturen verwendet.where A is, inter alia, a sulfur atom, n = 0 to 5; m = 1 or 2; R, R ', R' 'is an alkyl group with 7 to 25 carbon atoms and X is an active ingredient or Spacer drug group is. These connections become Production of antibodies and synthetic vaccines, in the Genetic technology to facilitate cell fusion, for Manufacture of cell markers, for affinity chromatography, for Liposome preparations, for medical purposes and as an addition to Food or feed materials in the human and animal area, as well as an additive to culture media for microorganisms and for Cell cultures used.
Der Hauptnachteil dieser bekannten Lipopeptide besteht darin, daß sie für die meisten Anwendungszwecke nicht ausreichend wasserlöslich sind.The main disadvantage of these known lipopeptides is that that they are insufficient for most applications are water soluble.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß die nachfolgend näher beschriebenen Lipopeptid-Verbindungen auf Basis einer Polyethylenglykol-Einheit diesen Nachteil nicht aufweisen, sondern gute Wasserlöslichkeit besitzen oder sich durch gute Solvatisierbarkeit auszeichnen.Surprisingly, it has now been found that the following lipopeptide compounds based on a Polyethylene glycol unit does not have this disadvantage, but have good water solubility or are good ones Characterize solvatability.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher Lipopeptid- Verbindungen der Formel I:The present invention therefore relates to lipopeptide Compounds of formula I:
worin
X für OR¹; SR¹; NR¹R²; ⊕NR¹R²R³; COOR⁴ oder R-X₁- steht, wobei
R eine Polymermatrix repräsentiert und X₁ eine divalente
Linkergruppe bedeutet, R¹, R², R³ und R⁴ unabhängig
voneinander für ein Wasserstoffatom, eine Benzyl- oder
eine C₁-C₆-Alkylgruppe stehen,
n für eine Zahl im Bereich von 5 bis 500 steht,
Y eine m-valente Gruppe bedeutet, wobei m für mindestens 2
steht,
o für m-1 steht,
wobei, wenn o = 1, Z für ein Adjuvans, ein Peptid-
Adjuvans- Konjugat oder eine Vorstufe davon steht,
wenn o <1, Z für ein Adjuvans, ein Peptid und/oder ein
Peptid-Adjuvans-Konjugat oder eine Vorstufe davon steht,
wobei vorzugsweise wenigstens ein Rest Z ein Adjuvans, ein
Peptid-Adjuvans-Konjugat oder eine Vorstufe davon bedeutet
und wobei der Adjuvansanteil nicht größer als der
Peptidanteil sein kann,
und die Salze davon.wherein
X for OR¹; SR¹; NR¹R²; ⊕NR¹R²R³; COOR⁴ or R-X₁-, wherein
R represents a polymer matrix and X₁ represents a divalent linker group, R¹, R², R³ and R⁴ independently of one another represent a hydrogen atom, a benzyl or a C₁-C₆ alkyl group,
n stands for a number in the range from 5 to 500,
Y is an m-valent group, where m is at least 2,
o stands for m-1,
where if o = 1, Z stands for an adjuvant, a peptide-adjuvant conjugate or a precursor thereof,
when o <1, Z stands for an adjuvant, a peptide and / or a peptide-adjuvant conjugate or a precursor thereof, preferably at least one radical Z being an adjuvant, a peptide-adjuvant conjugate or a precursor thereof and wherein the Adjuvant portion cannot be larger than the peptide portion,
and the salts thereof.
Die Alkylgruppe kann eine Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-, Isopropyl-, n-Butyl-, iso-Butyl-, t-Butylgruppe etc. sein.The alkyl group can be a methyl, ethyl, n-propyl, Isopropyl, n-butyl, iso-butyl, t-butyl group, etc.
In den erfindungsgemäßen Verbindungen kann ein Teil der Polyoxyethyleneinheiten durch Polyoxypropyleneinheiten ersetzt sein. Dabei können ein oder mehrere Polyoxypropylenblöcke neben einem oder mehreren Polyoxyethylenblöcken vorliegen. Die Polyoxypropyleneinheiten können aber auch statistisch verteilt sein. Im allgemeinen sind nicht mehr als etwa 30 Mol-% Polyoxypropyleneinheiten vorhanden.In the compounds according to the invention, part of the Polyoxyethylene units replaced by polyoxypropylene units his. One or more polyoxypropylene blocks can be used in addition one or more polyoxyethylene blocks. The Polyoxypropylene units can also be statistically distributed his. Generally no more than about 30 mole percent Polyoxypropylene units available.
Durch den Einbau der Polyoxypropyleneinheiten ist es möglich, die Löslichkeit der Lipopeptid-Verbindungen temperaturabhängig zu machen. Bei Temperaturen unterhalb der Körpertemperatur, beispielsweise bei 20 bis 25°C, sind Lipopeptid-Verbindungen mit Polypropylenoxideinheiten wasserlöslich, während sie bei Körpertemperatur weitgehend wasserunlöslich sind. Dies hat den Vorteil, daß eine Depotwirkung bzw. eine stärkere Immunantwort erzielt werden kann.By installing the polyoxypropylene units, it is possible to the solubility of the lipopeptide compounds depends on the temperature close. At temperatures below body temperature, for example at 20 to 25 ° C, are lipopeptide compounds water-soluble with polypropylene oxide units, while at Body temperature are largely insoluble in water. This has the Advantage that a depot effect or a stronger immune response can be achieved.
Die erfindungsgemäßen Lipopeptid-Verbindungen umfassen wenigstens einen Rest Z, der für ein Adjuvans, ein Peptid oder ein Peptid-Adjuvans-Konjugat stehen kann. Wenn nur ein Rest Z im Molekül vorhanden ist (o = 1), steht Z für ein Adjuvans oder ein Peptid-Adjuvans-Konjugat. Wenn dagegen mehrere Reste Z vorhanden sind (o <1), steht Z für ein Adjuvans, ein Peptid und/oder ein Peptid-Adjuvans-Konjugat. Wenigstens ein Rest Z bedeutet dabei ein Adjuvans oder ein Peptid-Adjuvans-Konjugat, d. h. es ist wenigstens ein Adjuvansrest im Molekül vorhanden. Die übrigen Reste Z stehen dann für ein Peptid, wobei die Zahl der Adjuvansmoleküle nicht größer als die Zahl der Peptidreste ist.The lipopeptide compounds of the invention include at least one residue Z, which is for an adjuvant, a peptide or a peptide-adjuvant conjugate can stand. If only a remainder of Z is present in the molecule (o = 1), Z stands for an adjuvant or a peptide-adjuvant conjugate. If, however, several Z are present (o <1), Z stands for an adjuvant, a peptide and / or a peptide-adjuvant conjugate. At least one remainder Z means an adjuvant or a peptide-adjuvant conjugate, d. H. there is at least one adjuvant residue in the molecule. The remaining Z radicals then represent a peptide, the number of the adjuvant molecules not larger than the number of peptide residues is.
Jedes beliebige Peptid kann erfindungsgemäß an den Rest Y gebunden oder am Rest Y synthetisiert werden. Im allgemeinen umfassen die Peptide jedoch nicht mehr als 50 Aminosäuren.According to the invention, any peptide can be attached to the radical Y bound or synthesized at the Y radical. In general however, the peptides comprise no more than 50 amino acids.
Die Peptide und, soweit möglich, auch die Adjuvantien werden peptidisch, d. h. über eine Amidbindung, gleich ob vom C- oder N-Terminus ausgehend, oder über andere säure- oder basenstabile Linker (z. B. Crotonsäure, 2-Nitro-4- hydroxybenzoesäure und Derivate davon) gebunden.The peptides and, where possible, the adjuvants peptide, i. H. via an amide bond, whether from the C or N-terminus outgoing, or over other acidic or base stable linker (e.g. crotonic acid, 2-nitro-4- hydroxybenzoic acid and derivatives thereof) bound.
Bei den Adjuvantien handelt es sich insbesondere um Immunstimulantien, die in der Regel nicht oder wenig wasserlöslich sind. Vorzugsweise kommt als Adjuvans Tripalmitoyl-S-Glyceryl-Cystein (Pam₃Cys) der Formel:The adjuvants are in particular: Immune stimulants, usually no or little are water soluble. Preferably comes as an adjuvant Tripalmitoyl-S-glyceryl-cysteine (Pam₃Cys) of the formula:
zur Anwendung. Diese Verbindung wird über die Carboxylgruppe gebunden.to use. This connection is made via the carboxyl group bound.
Die Gruppe Y dient dazu, den bzw. die Reste Z an die Polyoxyethyleneinheit zu binden. Y steht dabei insbesondere für O, NH, S, -OCO-, -O-Alk-COO- oder -NH-Alk-COO-, wobei Alk eine C₁-C₆-Alkylengruppe bedeutet, oder die anderen unten für X₁ angegebenen Reste.The group Y serves the or the residues Z to the Tie polyoxyethylene unit. Y stands in particular for O, NH, S, -OCO-, -O-Alk-COO- or -NH-Alk-COO-, where Alk is a C₁-C₆ alkylene group, or the others below for X₁ specified residues.
Wenn zwei oder mehrere Reste Z im Molekül vorhanden sind, steht Y für eine drei- oder mehrwertige Gruppe, die von einer drei- oder mehrfunktionellen Verbindung abgeleitet ist. Die funktionellen Gruppen müssen so beschaffen sein, daß sie einerseits mit der endständigen Hydroxygruppe der Polyoxyethyleneinheit bzw. einem funktionellen Äquivalent davon und andererseits mit einer funktionellen Gruppe des Adjuvans oder des Peptids reagieren können.If two or more Z radicals are present in the molecule, is Y for a tri-valent or multivalent group consisting of a tri- or multifunctional connection is derived. The functional groups must be such that they on the one hand with the terminal hydroxy group of Polyoxyethylene unit or a functional equivalent thereof and on the other hand with a functional group of the adjuvant or the peptide can react.
Vorzugsweise bedeutet Y eine drei- oder vierwertige Gruppe, die abgeleitet ist von einer Diaminocarbonsäure, Aminodicarbon säure, Dihydroxycarbonsäure, Hydroxydicarbonsäure, Tricarbonsäure, einem Diaminoalkohol, Aminodiol, Triamin, Triol, Trithioalkohol, Triisocyanat, Tetrol oder Tetraisocyanat.Y is preferably a trivalent or tetravalent group which is derived from a diaminocarboxylic acid, aminodicarbon acid, dihydroxycarboxylic acid, hydroxydicarboxylic acid, Tricarboxylic acid, a diamino alcohol, aminodiol, triamine, Triol, trithio alcohol, triisocyanate, tetrol or Tetraisocyanate.
Lysin, Glycerin oder Thioglycerin sind bevorzugt.Lysine, glycerin or thioglycerin are preferred.
Vorzugsweise ist Y aus mehreren trivalenten Gruppen aufgebaut, und zwar derart, daß eine oder beide freien Valenzen der ersten trivalenten Gruppe mit einer Valenz der nächsten trivalenten Gruppe verbunden ist, so daß sich ein baumartiger Aufbau der Gruppe Y z. B. mit folgenden Strukturen ergibt:Y is preferably composed of several trivalent groups, in such a way that one or both free valences of the first trivalent group with a valence of the next trivalent Group is connected, so that a tree-like structure of the Group Y z. B. with the following structures:
oderor
Diese Strukturen können direkt (Y′ = chemische Bindung) oder über eine geeignete Linkergruppe (Y′ = Y wie in Anspruch 4 definiert) an die Polyoxyethyleneinheit gebunden sein.These structures can be directly (Y ′ = chemical bond) or via a suitable linker group (Y ′ = Y as in claim 4 defined) to be bound to the polyoxyethylene unit.
Auf diese Weise ist es möglich, mehrere Adjuvansmoleküle und mehrere Peptidmoleküle in einem Molekül der Formel I vorzusehen, wobei das Verhältnis von Adjuvans zu Peptid innerhalb des oben angegebenen Rahmens frei variierbar ist.In this way it is possible to use multiple adjuvant molecules and several peptide molecules in one molecule of formula I. provide the ratio of adjuvant to peptide is freely variable within the framework specified above.
Eine besonders bevorzugte Ausführungsform sind demnach die Verbindungen der Formel IV:A particularly preferred embodiment is accordingly the Compounds of formula IV:
worin A für einen baumartig aufgebauten Rest aus 1 bis 15 trifunktionellen Verbindungen steht, und Y′ für eine chemische Bindung oder für die in Anspruch 4 für Y angegebenen Bedeutungen steht, wobei die sich ergebenden freien Valenzen mit einem Peptid und ggf. mit mindestens einem Adjuvans besetzt ist.where A is a tree-like remainder from 1 to 15 trifunctional compounds, and Y 'for one chemical bond or for the in claim 4 for Y indicated meanings, the resulting free valences with a peptide and possibly with at least an adjuvant.
Wenn X für R-X₁- steht, ist X₁ eine divalente Linkergruppe,
welche den Polyethylenglykolteil des Moleküls an die
Polymermatrix bindet. X₁ steht dabei vorzugsweise für
für O, NH, S, COO-, -O-Alk-COO- oder -NH-Alk-COO- steht, wobei
Alk eine C₁-C₆-Alkylengruppe bedeutet,
-O-CO-CH = CH-CH₂-O-
-NH-CO-CH = CH-CH₂-O-
-O-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- oder
-NH-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- steht.When X is R-X₁-, X₁ is a divalent linker group which binds the polyethylene glycol part of the molecule to the polymer matrix. X₁ is preferably O, NH, S, COO-, -O-alk-COO- or -NH-alk-COO-, where alk is a C₁-C₆ alkylene group,
-O-CO-CH = CH-CH₂-O-
-NH-CO-CH = CH-CH₂-O-
-O-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- or
-NH-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O-.
Falls Lipopeptid-Verbindungen gewünscht sind, bei denen die Polymermatrix abgespalten ist, muß X₁ so beschaffen sein, daß eine Abspaltung des Moleküls von der Polymermatrix auf übliche Weise erfolgen kann, beispielsweise durch saure oder basische Hydrolyse oder durch katalytische Hydrierung. Geeignete Gruppe X₁ sind dem Fachmann bekannt. In einem derartigen Fall muß dafür Sorge getragen werden, daß nicht gleichzeitig die Reste Z abgespalten werden. Dies kann durch Verwendung geeigneter Linkergruppen Y erfolgen, z. B. katalytisch oder photochemisch spaltbare Linker, wie Crotonsäure, 4-Hydroxy-2-nitrobenzoesäure und Derivate davon.If lipopeptide compounds are desired in which the Polymer matrix is split off, X 1 must be such that a cleavage of the molecule from the polymer matrix to usual Way can be done, for example by acidic or basic Hydrolysis or by catalytic hydrogenation. Suitable group X₁ are known to the expert. In such a case care is taken that the residues Z be split off. This can be done by using appropriate Linker groups Y take place, for. B. catalytically or photochemically cleavable linkers such as crotonic acid, 4-hydroxy-2-nitrobenzoic acid and derivatives thereof.
Die Art des zur Anwendung kommenden Polymers ist nicht kritisch. Das Polymer muß lediglich so beschaffen sein, daß es geeignete funktionelle Gruppen aufweist oder entsprechend funktionalisiert ist, damit der verbleibende Molekülteil über die Gruppe X gebunden werden kann. Das Polymer kann linear sein und gegebenenfalls ein Molekulargewicht im Bereich von 200 bis 10 Millionen aufweisen, es kann aber auch vernetzt vorliegen. Geeignete Polymere sind beispielsweise Polystyrol oder funktionalisierte Derivate davon, wie Chlormethylstyrol, Hydroxymethylstyrol oder Aminomethylstyrol, Polyacrylamid, Polyvinylalkohol, Polyaminosäuren, wie Polylysin und Polyaminocapronsäure, Polyacrylsäure, Polyvinylpyrrolidon, Polyamide, Polyamine, Polysaccharide etc.The type of polymer used is not critical. The polymer only has to be such that it has suitable functional groups or accordingly is functionalized so that the remaining part of the molecule over the group X can be bound. The polymer can be linear and optionally a molecular weight in the range of 200 to 10 million, but it can also be networked. Suitable polymers are, for example, polystyrene or functionalized derivatives thereof, such as chloromethylstyrene, Hydroxymethylstyrene or aminomethylstyrene, polyacrylamide, Polyvinyl alcohol, polyamino acids such as polylysine and Polyaminocaproic acid, polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone, Polyamides, polyamines, polysaccharides etc.
Wenn die Polymermatrix nicht abgespalten wird, verwendet man vorzugsweise Polyvinylalkohol, Polyacrylsäure, Polyaminosäuren, Polyvinylpyrrolidon oder Polysaccharide.If the polymer matrix is not split off, use preferably polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyamino acids, Polyvinyl pyrrolidone or polysaccharides.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Lipopeptid-Verbindungen erfolgt anhand bekannter Methoden.The preparation of the lipopeptide compounds according to the invention is done using known methods.
- 1. Ausgehend von löslichen Polymeren und POE bzw. funktionalisierten Derivaten von POE: das lösliche Polymer wird mit dem Adjuvans und oder Peptid umgesetzt bzw. das Peptid nach der liquid phase Technik direkt am löslichen Träger aufgebaut.1. Starting from soluble polymers and POE or Functionalized derivatives of POE: the soluble polymer implemented with the adjuvant and or peptide or the peptide after the liquid phase technology built directly on the soluble carrier.
- 2. Ausgehend von einem der oben genannten Polymere: Eines der oben genannten Polymere, gegebenenfalls nach geeigneter Funktionalisierung, wird mit Polyoxyethylen oder mit einem Derivat davon umgesetzt bzw. das POE Polymer direkt am Träger aufgebaut. Das erhaltene Produkt wird dann, gegebenenfalls nach Funktionalisierung, mit dem Adjuvans und/oder dem Peptid umgesetzt, bzw. das Peptid nach den üblichen Verfahren der Fest-Phasensynthese am Träger aufgebaut.2. Starting from one of the above-mentioned polymers: One of the above-mentioned polymers, if necessary after suitable functionalization, with polyoxyethylene or with a derivative thereof implemented or the POE polymer directly on Carrier built. The product obtained is then if necessary after functionalization, with the adjuvant and / or the peptide, or the peptide according to the usual methods of solid-phase synthesis built on the carrier.
Alternativ wird das erhaltene Produkt mit mindestens einer tri- oder mehrfunktionellen Verbindung zur Reaktion gebracht. Schließlich werden das Adjuvans und das Peptid (oder die Adjuvantien und die Peptide) angebunden bzw. am Träger direkt stufenweise aufgebaut.Alternatively, the product obtained is treated with at least one tri- or multifunctional compound reacted. Finally, the adjuvant and the peptide (or the Adjuvants and the peptides) attached or directly on the carrier gradually built up.
Die erfindungsgemäßen Lipopeptid-Verbindungen zeichnen sich durch ihre Wasserlöslichkeit aus. Die am vernetzten Träger fixierten Lipopeptid-Verbindungen zeichnen sich durch gute Solvation in wäßrigen Systemen aus. Sie können daher in Form eines wäßrigen Präparates zur Anwendung kommen. Die erfindungsgemäßen Lipopeptid-Verbindungen sind insbesondere brauchbar zur Gewinnung von Antikörpern, zur Herstellung von Vaccinen oder zur Affinitätschromatographie.The lipopeptide compounds according to the invention stand out by their water solubility. Those on the networked carrier fixed lipopeptide compounds are characterized by good Solvation in aqueous systems. They can therefore be in shape of an aqueous preparation are used. The Lipopeptide compounds according to the invention are in particular useful for the production of antibodies, for the production of Vaccines or for affinity chromatography.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch ein pharmazeutisches Mittel, das mindestens eine der erfindungsgemäßen Verbindungen zusammen mit üblichen Hilfs- und Zusatzstoffen enthält. Vorzugsweise liegt das Mittel in wäßriger Form zur Injektion vor.The present invention also relates to a pharmaceutical agent containing at least one of the Compounds according to the invention together with conventional auxiliaries and Contains additives. The agent is preferably in aqueous form for injection.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Erfindung:The following examples illustrate the invention:
3 g α-Methoxy-ω-amino-POE (MW. 3000) werden in 25 ml Methylenchlorid gelöst. Zu dieser Lösung gibt man 1,5 mMol Pam₃Cys, 1,5 mMol Dicyclohexylcarbodiimid, und 1,5 HOBt. Man rührt diese Lösung 24 h bei Raumtemperatur und filtriert dann vom Dicyclohexylharnstoff ab. Die weitere Aufreinigung erfolgt durch Säulenchromatographie.3 g of α-methoxy-ω-amino-POE (MW. 3000) are in 25 ml of methylene chloride dissolved. 1.5 mmol are added to this solution Pam₃Cys, 1.5 mmol dicyclohexylcarbodiimide, and 1.5 HOBt. Man this solution is stirred for 24 h at room temperature and then filtered from the dicyclohexylurea. The further purification takes place by column chromatography.
Im Adjuvanstest zeigt das wasserlösliche Lipopeptid einen deutlichen Adjuvanseffekt, siehe Fig. 1. In the adjuvant test, the water-soluble lipopeptide shows a clear adjuvant effect, see Fig. 1.
3 g α-Methoxy-ω-amino-POE (MW. 3000) werden in 25 ml Methylenchlorid gelöst. Zu dieser Lösung gibt man 1,5 mMol Pam₃Cys Ser (tBu), 1,5 mMol Dicyclohexylcarbodiimid, und 1,5 HOBt. Man rührt diese Lösung 24 h bei Raumtemperatur und filtriert dann vom Dicyclohexylharnstoff ab. Nach Abspaltung der tBu Schutzgruppe mit TFA erfolgt die weitere Aufreinigung durch Säulenchromatographie.3 g of α-methoxy-ω-amino-POE (MW. 3000) are in 25 ml Dissolved methylene chloride. 1.5 mmol are added to this solution Pam₃Cys Ser (tBu), 1.5 mmol dicyclohexylcarbodiimide, and 1.5 HOBt. This solution is stirred for 24 hours at room temperature and then filters off the dicyclohexylurea. After spin-off the tBu protection group with TFA is further purified by column chromatography.
Im Adjuvanstest zeigt das wasserlösliche Lipopeptid einen deutlichen Adjuvanseffekt, siehe Fig. 2. (Melittin jeweils 50 µg).In the adjuvant test, the water-soluble lipopeptide shows a clear adjuvant effect, see Fig. 2. (Melittin in each case 50 µg).
3 g α-Methoxy-ω-amino-POE (MW. 3000) werden in 25 ml Methylenchlorid gelöst. Nach Vorschrift der liquid phase Technik wird Fmoc Lys (Boc) an den löslichen Träger gebunden und zunächst die Boc Schutzgruppe selektiv durch TFA entfernt. Zu dieser Lösung gibt man 1,5 mMol Pam₃Cys, 1,5 mMol Dicyclohexylcarbodiimid, und 1,5 HOBt. Man rührt diese Lösung 24 h bei Raumtemperatur und filtriert dann vom Dicyclohexylharnstoff ab. Die weitere Aufreinigung erfolgt durch fraktionierte Kristallisation. Nach Entfernung der Fmoc Schutzgruppe durch Piperidin erfolgt der Aufbau des Peptides nach der fmoc Strategie in der flüssigen Phase. Nach beendeter Synthese werden die Schutzgruppen mittels TFA entfernt und das Lipopeptidkonjugat chromatographisch gewonnen. Das Laser- Desorptions-Massenspektrum des Konjugates zeigt eindeutig die gewünschte Verbindung (siehe Fig. 3). Nach foot pad Immunisierung von Mäusen ohne zusätzliches Adjuvans zeigt sich eine Stimulation der T-Helferzellen.3 g of α-methoxy-ω-amino-POE (MW. 3000) are dissolved in 25 ml of methylene chloride. In accordance with the liquid phase technique, Fmoc Lys (Boc) is bound to the soluble support and the Boc protective group is first selectively removed by TFA. To this solution are added 1.5 mmol Pam₃Cys, 1.5 mmol dicyclohexylcarbodiimide, and 1.5 HOBt. This solution is stirred for 24 hours at room temperature and then the dicyclohexylurea is filtered off. The further purification is carried out by fractional crystallization. After removal of the Fmoc protective group by piperidine, the peptide is built up according to the fmoc strategy in the liquid phase. After the synthesis is complete, the protective groups are removed by means of TFA and the lipopeptide conjugate is obtained by chromatography. The laser desorption mass spectrum of the conjugate clearly shows the desired compound (see Fig. 3). After foot pad immunization of mice without additional adjuvant, T helper cells are stimulated.
Claims (12)
X für OR¹; SR¹; NR¹R²; ⊕NR¹R²R³; COOR⁴ oder R-X₁- steht, wobei
R eine Polymermatrix repräsentiert und X₁ eine divalente Linkergruppe bedeutet, R¹, R², R³ und R⁴ unabhängig voneinander für ein Wasserstoffatom, eine Benzyl- oder eine C₁-C₆-Alkylgruppe stehen,
n für eine Zahl im Bereich von 5 bis 500 steht,
Y eine m-valente Gruppe bedeutet, wobei m für mindestens 2 steht,
o für m-1 steht,
wobei, wenn o = 1, Z für ein Adjuvans, ein Peptid- Adjuvans-Konjugat oder eine Vorstufe davon steht, wenn o <1, Z für ein Adjuvans, ein Peptid und/oder ein Peptid-Adjuvans-Konjugat oder eine Vorstufe davon steht, wobei der Adjuvansanteil nicht größer als der Peptidanteil sein kann,
und die Salze davon.1. Lipopeptide Compounds of Formula I: wherein
X for OR¹; SR¹; NR¹R²; ⊕NR¹R²R³; COOR⁴ or R-X₁-, wherein
R represents a polymer matrix and X₁ represents a divalent linker group, R¹, R², R³ and R⁴ independently of one another represent a hydrogen atom, a benzyl or a C₁-C₆ alkyl group,
n stands for a number in the range from 5 to 500,
Y is an m-valent group, where m is at least 2,
o stands for m-1,
where if o = 1, Z stands for an adjuvant, a peptide-adjuvant conjugate or a precursor thereof, if o <1, Z stands for an adjuvant, a peptide and / or a peptide-adjuvant conjugate or a precursor thereof , where the adjuvant portion cannot be larger than the peptide portion,
and the salts thereof.
-O-CO-CH = CH-CH₂-O-
-NH-CO-CH = CH-CH₂-O-
-O-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- oder
-NH-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- steht. 3. Compounds according to claim 1 or 2 of formula I, wherein X₁ is O, NH, S, -COO-, -O-alk-COO- or -NH-alk-COO-, wherein alk is a C₁-C₆ alkylene group ,
-O-CO-CH = CH-CH₂-O-
-NH-CO-CH = CH-CH₂-O-
-O-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- or
-NH-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O-.
-O-CO-CH = CH-CH₂-O-
-NH-CO-CH = CH-CH₂-O-
-O-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- oder
-NH-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- steht.4. Compounds according to any one of the preceding claims, wherein Y is O, NH, S, -OCO-, -O-alk-COO- or -NH-alk-COO, where alk is a C₁-C₆ alkylene group,
-O-CO-CH = CH-CH₂-O-
-NH-CO-CH = CH-CH₂-O-
-O-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O- or
-NH-CO-CH₂-O-CH = CH-CH₂-O-.
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