DE4324672A1 - Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound - Google Patents

Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound

Info

Publication number
DE4324672A1
DE4324672A1 DE19934324672 DE4324672A DE4324672A1 DE 4324672 A1 DE4324672 A1 DE 4324672A1 DE 19934324672 DE19934324672 DE 19934324672 DE 4324672 A DE4324672 A DE 4324672A DE 4324672 A1 DE4324672 A1 DE 4324672A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
methanol
compound
phase
medium
concentrated
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE19934324672
Other languages
German (de)
Inventor
Hans Prof Dr Reichenbach
Gerhard Prof Dr Hoefle
Rolf Dr Jansen
Brigitte Dr Kunze
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GESELLSCHAFT fur BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) 38124 BRAUNSCHWEIG DE
Original Assignee
GESELLSCHAFT fur BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) 38124 BRAUNSCHWEIG DE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GESELLSCHAFT fur BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) 38124 BRAUNSCHWEIG DE filed Critical GESELLSCHAFT fur BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) 38124 BRAUNSCHWEIG DE
Priority to DE19934324672 priority Critical patent/DE4324672A1/en
Publication of DE4324672A1 publication Critical patent/DE4324672A1/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/22—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

The invention relates to a compound of the formula <IMAGE> to a process for the preparation thereof and to a composition containing the compound.

Description

Die Erfindung betrifft eine Verbindung antibiotischer Aktivität, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ein Mittel mit der Ver­ bindung.The invention relates to a compound of antibiotic activity, a process for their preparation and an agent with the Ver binding.

A. ProduktionsbedingungenA. Production conditions

  • A.1. Produzierende Kultur:
    Das Myxobakterium Chondromyces crocatus, Stamm Cm c3, Un­ terordnung Sorangineae, Ordnung Myxococcales mit einem unbekannten Begleitbakterium in Form kleiner Stäbchen.    A.1. Producing culture:
    The myxobacterium Chondromyces crocatus, strain Cm c3, suborder Sorangineae, order Myxococcales with an unknown accompanying bacterium in the form of small rods.
  • A.2. Herkunft der produzierenden Mischkultur: Isoliert an der GBF im Juni 1985 aus einer Bodenprobe von Madeira.A.2. Origin of the producing mixed culture: Isolated at the GBF in June 1985 from a soil sample from Madeira.
  • A.3. Beschreibung der produzierenden Mischkultur:
    • A.3.1. Die vegetativen Zellen von Cm c3 sind zylindrisch mit breit abgerundeten Enden, 0,8×6 bis 8 µm. Auf festen Nährboden wächst der Organismus in Gegenwart des Begleitbakteriums gut auf Hefeagar, z. B. VY/2-Agar (Backhefe 0,5%, bezogen auf Frischgewicht; CaCl₂·2H₂O 0,1%, Cyanocobalamin 0,5 mg/l, Agar 1,5%; pH 7,2). Auf reinen Glucose-Mineralsalz-Medien ist kein Wachstum zu beobachten. Proteine, z. B. Casein oder Einzellerprotein, werden hydrolysiert. Chitin wird nicht angegriffen. Der Stamm wächst bevorzugt bei 30°C, im neutralen pH-Bereich und aerob. Auf geeignetem Nährboden breitet sich die Ko­ lonie allmählich über die Kulturplatte aus. Auf der Ober­ fläche bilden sich kurze breite radiale Gräben. Sind He­ fezellen im Nährboden vorhanden, werden sie weitgehend abgebaut. Nach einigen Tagen können Fruchtkörper entste­ hen: Diese bestehen aus orangefarbenen Sporangiolen (von etwa 20 bis 30 µm Durchmesser und 30 bis 45 µm Länge) die auf einem verzweigten weißen Stiel sitzen. Im Innern fin­ det man Myxosporen, die morphologisch den vegetativen Zellen sehr ähneln, physiologisch aber trocknungsresi­ stende Ruhezellen darstellen.
    • In Flüssigmedien wächst der Stamm in kleinen Zellklümp­ chen, sowohl in Schüttelkolben bei 160 U/min (100 ml Me­ dium in 250-ml-Erlenmeyerkolben bzw. 400 ml Medium in 1000 ml Erlenmeyerkolben) als auch in Bioreaktoren (gete­ stet bis zum 300-l-Maßstab). Als Kulturmedium ist z. B. Pol 1-Medium geeignet: Probion PS (Einzellerprotein aus Methylomonas clarae; Hoechst, Frankfurt) 0,4%; Stärke 0,3%; MgSO₄·7H₂O 0,1%; CaCl₂·2H₂O 0,05%; 1 ml/l Stan­ dard-Spurenelementlösung und 1 ml/l Standardvitaminlösung (beides Schlegel, Allgemeine Mikrobiologie); pH 7,0. Die Kulturen werden bei 30 C über 3 bis 4 Tage gehalten. Der Stamm wächst auch gut auf der Basis von Sojamehl. Nach Abtrennung des unten beschriebenen Begleitbakteriums wächst der Stamm Cm c3 jedoch wesentlich schlechter und lysiert nach einigen Passagen.
    • Cm c3 läßt sich konservieren: z. B. durch Einfrieren ve­ getativer Zellen von Agarplatten oder Flüssigkulturen in Peptonlösung bei -80 ,C oder im flüssigen Stickstoff.
    • A.3.2 Bei dem Begleitbakterium von Chondromyces crocatus, Stamm Cm c3 handelt es sich um ein pleiomorphes gramnegatives Stäbchen. Es läßt sich durch Ausstreichen der Mischkultur auf Komplettnährböden, z. B. Nutrient Agar, von Stamm Cm c3 abtrennen. Das Bakterium wächst auf Nutrient Agar nur langsam, und nach ca. 1 Woche beobachtet man einen schwach rötlichen Film im Bereich des Ausstrichs. In den unter A.3.1. genannten Flüssigmedien vermehrt sich das Bakterium in etwa parallel zu Stamm Cm c3.
    A.3. Description of the producing mixed culture:
    • A.3.1. The vegetative cells of Cm c3 are cylindrical with broadly rounded ends, 0.8 × 6 to 8 μm. On solid medium, the organism grows well on Hefeagar in the presence of the accompanying bacterium, z. B. VY / 2 agar (yeast 0.5%, based on fresh weight, CaCl₂ · 2H₂O 0.1%, cyanocobalamin 0.5 mg / l, agar 1.5%, pH 7.2). Growth is not observed on pure glucose-mineral salt media. Proteins, e.g. As casein or protozoan protein are hydrolyzed. Chitin is not attacked. The strain preferably grows at 30 ° C, in the neutral pH range and aerobic. On suitable nutrient medium, the colony gradually spreads over the culture plate. On the upper surface form short wide radial trenches. If yeast cells are present in the nutrient medium, they are largely degraded. After a few days fruiting bodies may appear: These consist of orange sporangioles (about 20 to 30 μm in diameter and 30 to 45 μm in length) that sit on a branched white stalk. Inside, myxospores are found, which, in morphological terms, are very similar to vegetative cells, but physiologically represent dehydration-resistant resting cells.
    • In liquid media, the strain grows in small Zellklümp chen chen, both in shake flasks at 160 U / min (100 ml Me dium in 250 ml Erlenmeyer flask or 400 ml medium in 1000 ml Erlenmeyer flasks) and in bioreactors (gete stet until 300- l scale). As a culture medium is z. B. Pol 1 medium suitable: Probion PS (single-celled protein from Methylomonas clarae; Hoechst, Frankfurt) 0.4%; Thickness 0.3%; MgSO₄ · 7H₂O 0.1%; CaCl₂ · 2H₂O 0.05%; 1 ml / l standard trace element solution and 1 ml / l standard vitamin solution (both Schlegel, General Microbiology); pH 7.0. The cultures are maintained at 30 C for 3 to 4 days. The strain also grows well on the basis of soybean meal. After separation of the accompanying bacterium described below, the strain Cm c3 grows much worse and lysed after a few passages.
    • Cm c3 can be conserved: z. By freezing viable cells of agar plates or liquid cultures in peptone solution at -80, C or in liquid nitrogen.
    • A.3.2 The accompanying bacterium of Chondromyces crocatus, strain Cm c3, is a pleiomorphic gram-negative rod. It can be determined by spreading the mixed culture on complete nutrient media, eg. Nutrient agar, from strain Cm c3. The bacterium grows slowly on nutrient agar, and after about 1 week a slightly reddish film is observed near the smear. In the under A.3.1. The bacteria increase in approximately parallel to strain Cm c3.
  • A.4. Zugänglichkeit der Mischkultur: Cm c3 (+ Begleitbakte­ rium) ist bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen (DSM) in Braunschweig unter der Nr. DSM 8227 hinterlegt.A.4. Accessibility of mixed culture: Cm c3 (+ accompanying c rium) is in the German Collection of Microorganisms (DSM) in Braunschweig under the number DSM 8227 deposited.
  • A.5. Nachweise von Crocacin: Zum qualitativen Nachweis von Crocacin werden Zellmassen der produzierenden Kultur mit Aceton extrahiert. Aliquote der konzentrierten Extrakte werden im Agardiffusionstest gegen Pilze getestet. Im dünnschichtchromatischen Test wird Crocacin im Vergleich mit isolierter Reinsubstanz identifiziert. Die Aufarbei­ tung, Isolierung und Charakterisierung erfolgt gemäß Ab­ schnitt B.A.5. Evidence of Crocacin: For the qualitative detection of Crocacin become cell masses of the producing culture Extracted acetone. Aliquots of concentrated extracts are tested in agar diffusion test against fungi. in the Thin-layer chromatographic test is compared to Crocacin identified with isolated pure substance. The Aufarbei tion, isolation and characterization according to Ab cut B.
  • A.6. Produktionsbedingungen von Crocacin: In Schüttelkolben wird Crocacin während des Wachstums gebildet und erreicht nach 3 bis 4 Tagen am Ende der logarithmischen bis zur frühen stationären Phase die höchste Aktivität.A.6. Production conditions of crocacin: in shake flasks Crocacin is formed and reached during growth after 3 to 4 days at the end of the logarithmic to the early stationary phase the highest activity.
B. Isolierung und CharakterisierungB. isolation and characterization B.1. Fermentationsbeispiel im BioreaktorB.1. Fermentation example in the bioreactor

Bioreaktor (b50) mit 65 l Inhalt (Fa. Giavanola Fr´res, Monthey, Schweiz) mit Blattrührer. Medium: Probion PS (Ein­ zellerprotein aus Methylomonas clarae; Hoechst, Frankfurt) 0,4%; MgSO₄·7H₂O 0,1%; CaCl₂·2H₂O 0,05%; Standard- Spurenelementlösung 1 ml/l (Schlegel, Allgemeine Mikrobio­ logie) und 0,23 mg/l Cyanocobalamin; pH 7,2. 60 l Medium werden mit 5 l Kultur aus gut bewachsenen Schüttelkolben beimpft. Die Belüftungsrate wird auf 200 Nl/Stunde, die Drehzahl auf 100 U/min eingestellt. Wegen starker Schaum­ bildung des Mediums wurden zusätzlich 0,05% des Anti­ schaummittels Tegosipon (Fa. Goldschmidt, Essen) zugesetzt. Der pO₂-Wert, der zu Beginn der Fermentation 90% Sättigung beträgt, sinkt bis zum Ende der Fermentation nach 100 Stun­ den kontinuierlich bis auf 50%. Der pH-Wert steigt im Ver­ lauf der Fermentation von 7,0 auf 7,5 an.Bioreactor (b50) with 65 l content (Giavanola Fr'res, Monthey, Switzerland) with paddle stirrer. Medium: Probion PS (Ein cell protein from Methylomonas clarae; Hoechst, Frankfurt) 0.4%; MgSO₄ · 7H₂O 0.1%; CaCl₂ · 2H₂O 0.05%; Default- Trace element solution 1 ml / l (Schlegel, Allgemeine Mikrobio logie) and 0.23 mg / l cyanocobalamin; pH 7.2. 60 l medium become with 5 l culture from well overgrown shake flasks inoculated. The aeration rate is set at 200 Nl / h, the Speed set to 100 rpm. Because of strong foam Formation of the medium was additionally 0.05% of the anti foaming agent Tegosipon (Goldschmidt, Essen) was added. The pO₂ value, the beginning of the fermentation 90% saturation is, decreases until the end of the fermentation after 100 hours continuously up to 50%. The pH increases in Ver run the fermentation from 7.0 to 7.5.

B.2. IsolierungB.2. insulation

Die Zellen einer 60-l-Fermentation von Cm c3 werden durch Zentrifugieren vom Fermentüberstand abgetrennt und nachein­ ander mit 1 l und zweimal mit 0,5 l Aceton extrahiert. Die vereinigten Acetonextrakte werden jeweils durch Filtrieren von Feststoffen befreit und im Vakuum bis zur verbleibenden Wasserphase eingeengt. Diese wird mit insgesamt 600 ml Me­ thylenchlorid in zwei Portionen extrahiert. Die organische Phase wird mit wassserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand (4,3 g) wird in 200 ml Methanol mit 5% Wasser aufgenommen und zweimal mit je 200 ml Heptan extrahiert. Nach Einengen der Methanolphase im Vakuum verbleiben 2 g Rohprodukt, das in zwei Portionen durch Reversed-Phase-Mitteldruckchromatographie aufgetrennt wird [Glas-Säule: 40 mm ID, 530 mm Länge (Fa. Kronwald Separationstechnik, Sinsheim) gefüllt mit RP-Kieselgel (Eu­ rosil Bioselect 100-20 C₁₈, 15 bis 25 µm; (Fa. Knauer, Ber­ lin); Laufmittel: Methanol-Wasser 65 : 25 für 140 min, dann Gradient auf 80% Methanol in 90 min, 80% Methanol für 150 min und Gradient auf 100% Methanol in 60 min, Fluß = 13 ml/min; Detektion: UV-Absorption bei 254 nm]. Die Fraktio­ nen mit dem Peak bei ca. 300 min werden vereinigt, im Va­ kuum zur verbleibenden Wasserphase eingeengt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der Rückstand (107 mg) wird durch Si-HPLC gereinigt [Säule: 20,5 mm ID, 250 mm Länge, gefüllt mit Kieselgel (Nucleosii 100, 7 µm, Fa. Macherey- Nagel, Düren); Laufmittel A: Benzintert.-Butylmethylether 30 : 70 zum Äquilibrieren und Probenauftrag, Laufmittel B: Benzin: tert.-Butylmethylether:Methanol 30 : 96,5 : 0,5 zur Chromatographie, Fluß = 17 ml/min; Detektion: UV-Absorption bei 254 nm]. Die Fraktionen des Hauptpeaks werden vereinigt und im Vakuum zu 57 mg Crocacin (amorph) eingeengt.The cells of a 60 L fermentation of Cm c3 are passed through Separate centrifuged from the fermentation supernatant and nachein extracted with 1 l and twice with 0.5 l of acetone. The combined acetone extracts are each filtered through freed from solids and in vacuo until the remaining Concentrated water phase. This is with a total of 600 ml of Me methylene chloride extracted in two portions. The organic Phase is dried with water-free sodium sulfate and concentrated in vacuo. The residue (4.3 g) is dissolved in 200 ml Methanol with 5% water and twice with 200 ml  Extracted heptane. After concentration of the methanol phase in Vacuum left 2 g of crude product, in two portions separated by reversed phase medium pressure chromatography [Glass column: 40 mm ID, 530 mm length (Kronwald Separationstechnik, Sinsheim) filled with RP silica gel (Eu rosil Bioselect 100-20 C₁₈, 15 to 25 μm; (Knauer, Ber lin); Eluent: methanol-water 65:25 for 140 min, then Gradient to 80% methanol in 90 min, 80% methanol for 150 min and gradient to 100% methanol in 60 minutes, flow = 13 ml / min; Detection: UV absorption at 254 nm]. The fractio with the peak at about 300 min are combined, in the Va concentrated to the remaining aqueous phase and with Extracted methylene chloride. The residue (107 mg) becomes purified by Si-HPLC [column: 20.5 mm ID, 250 mm length, filled with silica gel (Nucleosii 100, 7 .mu.m, Macherey Nagel, Düren); Eluent A: Benzoin tert-butyl methyl ether 30: 70 for equilibration and sample application, eluent B: Gasoline: tert-butyl methyl ether: methanol 30: 96.5: 0.5 to Chromatography, flow = 17 ml / min; Detection: UV absorption at 254 nm]. The fractions of the main peak are combined and concentrated in vacuo to 57 mg Crocacin (amorphous).

B.3. Substanzdaten von Crocacin AB.3. Substance data from Crocacin A

DC: Aluminiumfolie mit 0,2 mm Kieselgel 60 F254, (Merck, Darmstadt); Laufmittel Methylenchlorid:Methanol (9 : 1), Rf 0,67, sichtbar als UV-Löschung bei 254 nm, Anfärbung mit Vanillin/Schwefelsäure-Reagenz, braun nach Erhitzen auf 120°C.-
HPLC: Säule 2 mm ID, 125 mm Länge mit Vorsäule 11 mm (Fa. Macherey-Nagel, Düren) gefüllt mit RP-Kieselgel (Nucleosil 120-5 C₁₈, 5 µ); Laufmittel-Gradient mit Methanol:Wasser, von 65% auf 95% Methanol in 8 min, danach 95% Methanol isokratisch, Fluß = 0,3 ml/min, Rt = 8,3 min.-spez. Drehwert: [α] = + 109,6 (c = 1, in Methanol).-
UV (Methanol): lambdamax (1 g epsilon) = 213, 219 (sh), 254 (4.541), 261, 275 (sh), 282, (4.362), 291 (4.331), 298 (sh).-
IR (KBr): 3252, 3024, 2973, 2932, 2828, (alle m), 1750, 1653, 1611, 1522 (alle s), 144,9, 1363 (alle m), 1265, 1202, 1182 (alle s), 1123 (m), 1089 (s), 974 (m), 750 (m), 694 (w).-
NMR-Daten: s. Tabelle.-
MS (EI): m/z (%) = 538 (100) [M⁺], 506 (15), 449 (11), 340 (16), 308 (16), 277 (12), 276 (11), 259 (16), 249 (40), 248 (15), 233 (11), 209 (26), 169 (21), 165 (16), 147 (74), 115 (21), 109 (23), 91 (29).-
Hochauflösung: C₃₁H₄₂N₂O₆ Ber. 538.3041 Gef. 538.3042 (EI-MS)TLC: aluminum foil with 0.2 mm silica gel 60 F254, (Merck, Darmstadt); Mobile phase methylene chloride: methanol (9: 1), Rf 0.67, visible as UV quenching at 254 nm, staining with vanillin / sulfuric acid reagent, brown after heating to 120 ° C.
HPLC: Column 2 mm ID, 125 mm length with precolumn 11 mm (Macherey-Nagel, Düren) filled with RP silica gel (Nucleosil 120-5 C₁₈, 5 μ); Mobile phase gradient with methanol: water, from 65% to 95% methanol in 8 minutes, then 95% methanol isocratic, flow = 0.3 ml / min, Rt = 8.3 min. Rotation: [α] = + 109.6 (c = 1, in methanol) .-
UV (methanol): lambda max (1 g epsilon) = 213, 219 (sh), 254 (4,541), 261, 275 (sh), 282, (4,362), 291 (4,331), 298 (sh) .-
IR (KBr): 3252, 3024, 2973, 2932, 2828, (all m), 1750, 1653, 1611, 1522 (all s), 144.9, 1363 (all m), 1265, 1202, 1182 (all s ), 1123 (m), 1089 (s), 974 (m), 750 (m), 694 (w) .-
NMR data: s. Table.-
MS (EI): m / z (%) = 538 (100) [M⁺], 506 (15), 449 (11), 340 (16), 308 (16), 277 (12), 276 (11) , 259 (16), 249 (40), 248 (15), 233 (11), 209 (26), 169 (21), 165 (16), 147 (74), 115 (21), 109 (23) , 91 (29) .-
High resolution: C₃₁H₄₂N₂O₆ Ber. 538.3041 Gef. 538.3042 (EI-MS)

B.4. StrukturB.4. structure

NMR-Daten von Crocacin A in [d₆]Aceton NMR data of crocacin A in [d₆] acetone

(13C-NMR 150 MHz; IH-NMR 500 MHz) (13C-NMR 150 MHz, IH-NMR 500 MHz)

C. Biologische Charakterisierung von CrocacinC. Biological characterization of crocacin

Leistungen der produzierenden Mischkultur: In Zellextrakten von Cm c3 ist eine antibiotische Aktivität gegen Hefen (z. B. Saccharomyces cerevisiae, Pilze (z. B. Botrytis cinereae) und einige grampositive Bakterien nachweisbar. Die Aktivität wurde Crocacin genannt. In Zellextrakten des von der Misch­ kultur abgetrennten Begleitbakteriums ist keine antibiotische Aktivität nachweisbar.Performances of the producing mixed culture: In cell extracts of Cm c3 is an antibiotic activity against yeasts (eg. Saccharomyces cerevisiae, fungi (eg Botrytis cinereae) and some Gram-positive bacteria detectable. The activity was called crocacin. In cell extracts of the mixed culture separated accompanying bacteria is not antibiotic Activity detectable.

Die antibiotische Aktivität wird mit Hilfe des Agardiffusi­ onstests anhand des Hemmhofdurchmessers, bzw. im Verdünnungs­ reihentest aus der Kulturdichte ermittelt. Crocacin hemmt das Wachstum von Hefen, Hyphenpilzen und wenigen grampositiven Bakterien. Crocacin ist mit 20 µg/Testblättchen wirksam ge­ gen:The antibiotic activity is controlled by the agar diffusi onstests on the Hemmhofdurchmessers, or in dilution determined from the density of culture. Crocacin inhibits that Growth of yeasts, hyphae fungi and few gram positive Bacteria. Crocacin is effective with 20 μg / test leaflet gene:

Testorganismustest organism Hemmhof mmHemmhof mm Candida albicansCandida albicans (18)(18) Saccharomyces cerevisiae, Glukose-haltiges MediumSaccharomyces cerevisiae, glucose-containing medium 19 @19 @ Saccharomyces cerevisiae, Medium ohne GlukoseSaccharomyces cerevisiae, medium without glucose 38 @38 @ Mucor hiemalisMucor hiemalis 14 @14 @ Botrytis cinereaBotrytis cinerea (16) @(16) @ Pyth ium debaryanumPyth ium debaryanum (13) @(13) @ Gibberella fujikuroiGibberella fujikuroi (13) @(13) @ Rhizopus arrhizusRhizopus arrhizus (12) @(12) @ Corynebacterium fasciansCorynebacterium fascians 14 @14 @ Micrococcus luteusMicrococcus luteus 1717

(Die Zahlen in Klammern stehen für inkomplette Hemmhöfe)(Numbers in parenthesis indicate incomplete inhibition sites)

Die mittlere Hemmkonzentration (MHK) für Saccharomyces cerevisiae beträgt 9,7 ng/ml. Bei submitochondrialen Parti­ keln von Rinderherzen wird durch Crocacin die NADH-Oxidation gehemmt. Differenzspektroskopische Untersuchungen weisen als Wirkort für Crocacin den Komplex III der (eukaryotischen) Atmungskette aus.The mean inhibitory concentration (MIC) for Saccharomyces cerevisiae is 9.7 ng / ml. In submitochondrial parti From cattle hearts, crocacin causes NADH oxidation inhibited. Differential spectroscopic studies have as Site of action for Crocacin complex III (eukaryotic) Respiratory chain out.

Claims (7)

1. Verbindung der Formel 1. Compound of the formula 2. Verbindung der Summenformel C₃₁H₄₂N₂O₆ und mit den folgenden Parametern:Spezifischer Drehwert [α] = + 109,6 (c = 1; in Methanol)
UV-Spektrum (Methanol) lambdamax (1 g epsilon) = 213, 219 (Schulter), 254 (4.541), 261, 275 (Schulter), 282 (4.362), 291 (4.331) und 298 (Schulter)
IR-Spektrum (KBr) lambda = 3252, 3024, 2973, 2932, 2828 (alle mittelstark), 1750, 1653, 1611, 1522 (alle stark), 1449, 1363 (alle mittelstark), 1265, 1202, 1182 (alle stark), 1123 (mit­ telstark), 1089 (stark), 974 (mittelstark), 750 (mittelstark) und 694 (schwach). 2. Compound of the empirical formula C₃₁H₄₂N₂O₆ and with the following parameters: Specific rotation [α] = + 109.6 (c = 1, in methanol)
UV spectrum (methanol) lambda max (1 g epsilon) = 213, 219 (shoulder), 254 (4,541), 261, 275 (shoulder), 282 (4,362), 291 (4,331) and 298 (shoulder)
IR spectrum (KBr) lambda = 3252, 3024, 2973, 2932, 2828 (all moderately strong), 1750, 1653, 1611, 1522 (all strong), 1449, 1363 (all moderately strong), 1265, 1202, 1182 (all strong ), 1123 (with strong), 1089 (strong), 974 (medium), 750 (medium) and 694 (weak). 3. Verbindung antibiotischer Aktivität und dadurch herstellbar, daß man
  • (a) Chondromyces crocatus aus der Mischkultur DSM 8227 auf einem kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen und Mineral­ salze enthaltenden Medium kultiviert,
  • (b) die Zellen vom Kulturmedium abtrennt und mit Aceton ex­ trahiert,
  • (c) den Acetonextrakt bis zur verbleibenden Wasserphase einengt und mit Methylenchlorid extrahiert,
  • (d) die organische Phase abtrennt, trocknet, einengt, in wasserhaltigem Methanol aufnimmt und mit Heptan extra­ hiert,
  • (e) die Methanolphase abtrennt, einengt und einer C₁₈-Umkehr­ phasen-Mitteldruckflüssigchromatographie unterwirft (Laufmittel Methanol/Wasser-Gemisch ggf. mit Gradienten auf 100% Methanol),
  • (f) die mit einer UV-Absorption bei 254 nm detektierte Frak­ tion bis zur verbleibenden Wasserphase einengt und mit Methylenchlorid extrahiert,
  • (g) den abgetrennten Extraktionsrückstand einer Hochdruck­ chromatographie an Kieselgel unterwirft (Laufmittel Ben­ zin/tert-Butylmethylether/Methanol),
  • (h) die mit einer UV-Absorption bei 254 nm detektierte Frak­ tion einengt und die Verbindung antibiotischer Aktivität isoliert.
3. compound antibiotic activity and thereby produced that one
  • (a) cultivating Chondromyces crocatus from mixed culture DSM 8227 on a medium containing carbon sources, nitrogen sources and mineral salts,
  • (b) separating the cells from the culture medium and extracting with acetone,
  • (c) concentrating the acetone extract to the remaining water phase and extracting with methylene chloride,
  • (d) the organic phase is separated off, dried, concentrated, taken up in hydrous methanol and extracted with heptane,
  • (e) the methanol phase is separated off, concentrated and subjected to C₁₈ reverse phase-medium pressure liquid chromatography (eluent methanol / water mixture, optionally with gradients to 100% methanol),
  • (f) the fraction detected by UV absorption at 254 nm is concentrated to the remaining water phase and extracted with methylene chloride,
  • (g) subjecting the separated extraction residue to high-pressure chromatography on silica gel (mobile phase Ben zin / tert-butylmethylether / methanol),
  • (h) the fraction detected by UV absorption at 254 nm narrows and isolates the compound of antibiotic activity.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man Chondromyces crocatus in Form der Mischkultur DSM 8227 kulti­ viert.4. The method according to claim 3, characterized in that one Chondromyces crocatus in the form of mixed culture DSM 8227 kulti fourth. 5. Verfahren zur Gewinnung einer Verbindung antibiotischer Ak­ tivität, bei dem man
  • (a) Chondromyces crocatus aus der Mischkultur DSM 8227 auf einem Kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen und Mineral­ salze enthaltenden Medium kultiviert,
  • (b) die Zellen vom Kulturmedium abtrennt und mit Aceton ex­ trahiert,
  • (c) den Acetonextrakt bis zur verbleibenden Wasserphase einengt und mit Methylenchlorid extrahiert,
  • (d) die organische Phase abtrennt, trocknet, einengt, in wasserhaltigem Methanol aufnimmt und mit Heptan extra­ hiert,
  • (e) die Methanolphase abtrennt, einengt und einer C₁₈-Umkehr­ phasen-Mitteldruckflüssigchromatographie unterwirft (Laufmittel Methanol/Wasser-Gemisch ggf. mit Gradienten auf 100% Methanol),
  • (f) die mit einer UV-Absorption bei 254 nm detektierte Frak­ tion bis zur verbleibenden Wasserphase einengt und mit Methylenchlorid extrahiert,
  • (g) den abgetrennten Extraktionsrückstand einer Hochdruck­ chromatographie an Kieselgel unterwirft (Laufmittel Ben­ zin/tert-Butylmethylether/Methanol),
  • (h) die mit einer UV-Absorption bei 254 nm detektierte Frak­ tion einengt und die Verbindung antibiotischer Aktivität isoliert.
5. A process for obtaining a compound of antibiotic activity in which
  • (a) cultivating Chondromyces crocatus from mixed culture DSM 8227 on a medium containing carbon sources, nitrogen sources and mineral salts,
  • (b) separating the cells from the culture medium and extracting with acetone,
  • (c) concentrating the acetone extract to the remaining water phase and extracting with methylene chloride,
  • (d) the organic phase is separated off, dried, concentrated, taken up in hydrous methanol and extracted with heptane,
  • (e) the methanol phase is separated off, concentrated and subjected to C₁₈ reverse phase-medium pressure liquid chromatography (eluent methanol / water mixture, optionally with gradients to 100% methanol),
  • (f) the fraction detected by UV absorption at 254 nm is concentrated to the remaining water phase and extracted with methylene chloride,
  • (g) subjecting the separated extraction residue to high-pressure chromatography on silica gel (mobile phase Ben zin / tert-butylmethylether / methanol),
  • (h) the fraction detected by UV absorption at 254 nm narrows and isolates the compound of antibiotic activity.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man Chondromyces crocatus in Form der Mischkultur DSM 8227 kulti­ viert.6. The method according to claim 5, characterized in that one Chondromyces crocatus in the form of mixed culture DSM 8227 kulti fourth. 7. Mittel mit antibiotischer Aktivität, dadurch gekennzeichnet, daß es aus einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4 besteht oder diese Verbindung als Wirkstoff neben einem übli­ chen Verdünnungsmittel und/oder Träger enthält.7. agent with antibiotic activity, characterized in that it consists of a compound according to one of claims 1 to 4 exists or this compound as an active ingredient in addition to a übli contains diluents and / or carriers.
DE19934324672 1993-07-22 1993-07-22 Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound Withdrawn DE4324672A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19934324672 DE4324672A1 (en) 1993-07-22 1993-07-22 Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19934324672 DE4324672A1 (en) 1993-07-22 1993-07-22 Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE4324672A1 true DE4324672A1 (en) 1995-01-26

Family

ID=6493481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19934324672 Withdrawn DE4324672A1 (en) 1993-07-22 1993-07-22 Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE4324672A1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001094294A1 (en) * 2000-06-02 2001-12-13 Syngenta Limited Fungicides
CN102369211A (en) * 2009-02-13 2012-03-07 诺瓦提斯公司 Nucleic acid molecule of a biosynthetic cluster encoding non ribosomal peptide synthases and uses thereof

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001094294A1 (en) * 2000-06-02 2001-12-13 Syngenta Limited Fungicides
CN102369211A (en) * 2009-02-13 2012-03-07 诺瓦提斯公司 Nucleic acid molecule of a biosynthetic cluster encoding non ribosomal peptide synthases and uses thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Amade et al. Isolation, structural identification and biological activity of two metabolites produced by Penicillium olsonii Bainier and Sartory
DE69306102T2 (en) MACROCYCLIC LACTONES AND A TRIBE TO MAKE IT
WO1998013375A1 (en) Compounds with antimycotic and cytostatic effect, preparation method, agent containing these compounds and dsm 11 092
DE2509820A1 (en) ACULEACIN ANTIBIOTICS
CH645890A5 (en) MONACOLIN K, ITS PRODUCTION AND ANTI-HYPERCHOLESTERINEEMIC MIXTURE CONTAINING IT.
DE68928606T2 (en) Anti-parasitic macrolide antibiotics
DE3234203C2 (en)
DE3012565A1 (en) ANTITUMOR-ANTIBACTERIAL AGENTS
DE4324672A1 (en) Compound with antibiotic activity, preparation process and composition containing the compound
DE4421113A1 (en) Chondramide, extraction process, means with chondrams and mixed culture for chondramide production
DE69008795T2 (en) TREHALOSTATIN AND ITS PRODUCTION.
CH631740A5 (en) Process for the preparation of maytansinol and its derivatives
WO1999047523A1 (en) A and b apicularene
CH620244A5 (en) Process for the microbiological preparation of a deacylpepsidin
DE69019591T2 (en) Phospholipase A2 inhibitor, process for its preparation and pharmaceutical or veterinary compositions containing it.
DE19811540B4 (en) Apicularen A, process for its preparation and cytostatic agent with Apicularen A
DE4410449C2 (en) Melithiazoles A and B, manufacturing process, agents containing Melithiazol A and / or B and Melittangium lichenicola DSM 9004 with the ability to form Melithiazole A and B.
US6030951A (en) Chrysomycin derivative compounds and use as antitumor agents
DE19630980B4 (en) Etnangien, production, use and production strain sorangium cellulosum DSM 11 028
DE2817113A1 (en) HYDROXYNOVOBIOCINE-LIKE COMPOUNDS AND METHOD FOR THEIR PREPARATION
DE2921052C2 (en)
DE4211056C1 (en) Spiran heterocyclic deriv. for controlling fungi and bacteria uncontrollable - prepd. by fermenting Sorangium e.g. Polyangium cellulosum in medium contg. carbon and nitrogen sources and mineral salts in adsorber resin, and eluting
WO1997031912A1 (en) Heterocyclic compounds obtainable from sorangium cellulosum bacteria, their preparation process, and agents containing these compounds
EP0026485B1 (en) Herbicoline, process for its preparation and compositions containing it
DE2746252A1 (en) ANTIBIOTIC C-15003 MEDICINAL PRODUCT FOR THE TREATMENT OF TUMOROUS WARM BLUETERS

Legal Events

Date Code Title Description
8130 Withdrawal