DE4201461A1 - Agent for selective hyperthermia and chemotherapy of tumours - consists of ferromagnetic particles encapsulated in matrix which is not phagocyted and is able to couple with antitumour agent - Google Patents

Agent for selective hyperthermia and chemotherapy of tumours - consists of ferromagnetic particles encapsulated in matrix which is not phagocyted and is able to couple with antitumour agent

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Abstract

A therapeutic agent (I) for selective tumor therapy comprises ferromagnetic particles with a Curie temp. of 42.5-70 deg.C and particle size below 500 nm encapsulated in a polymer or bipolymer matrix which is not phagocyted by the reticuloendothelical system and which has reactive gps which couple with tumor cell targetting active ingredients. The polymer layer is of starch, polyvinyl alcohol, polyacrylanide, dextra, agarose or gelatine. The ferromagnetic particles are themselves encapsulated in liposomes (vesicles) of phospholipids, sphingolipids, glycosphingolipids, ceramids or other substances that make up cell membranes. USE/ADVANTAGE - (I) can be used for selective hyperthermia and chemotherapy in tumor therapy. (I), unlike previous agents is able to generate sufficient heat and is also suitable for the treatment of deep-lying tumors, as the ferromagnetic particles are coupled with the cytostatic active ingredients. As the whole is then encapsulated in the polymer matrix, normal tissue does not come into direct contact with the tox

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind ferromagnetische Mikropartikel mit einer Curie-Temperatur zwischen 42,5 und 70°C und einer Teilchengröße <500 nm, die induktiv exakt bis zum Curiepunkt aufheizbar sind und alternativ in Kombination mit Tumortoxinen simultan für die selektive Hyperthermie und Chemotherapie im Rahmen der Tumortherapie verwendet werden können.The present invention relates to ferromagnetic Microparticles with a Curie temperature between 42.5 and 70 ° C and a particle size <500 nm, which is inductively exact up to can be heated to the Curie point and alternatively in combination with tumor toxins simultaneously for selective hyperthermia and Chemotherapy can be used as part of tumor therapy can.

Die heute vorwiegend praktizierten Tumortherapien stammen durchweg aus dem Bereich der Chemo- und und Strahlungstherapie. Beide als klassisch zu bezeichnenden Methoden waren in den letzten Jahren Gegenstand intensiver Forschung mit dem Ziel, durch verbesserte Medikamente bzw. Bestrahlungstechniken eine effektivere und vor allem selektivere Therapie zu erreichen, um dadurch die teilweise eklatanten Nebenwirkungen der Behandlungen zu vermindern. Trotz vielfältiger Verbesserungen stellen beide Verfahren relativ radikale Methoden dar, die bis dato kaum gestatten, zwischen gesundem und erkranktem Gewebe zu diskriminieren. Die Folge davon ist, daß die erheblichen Nebenwirkungen wie Haarausfall, Erbrechen, Schwindelanfälle etc. nach wie vor kaum beherrscht werden. Aufgrund der enormen Nachteile, die diese Verfahren mit sich bringen, hat man schon frühzeitig versucht, alternative Verfahren zu konzipieren. In diesem Zusammenmhang sind die Entwicklungen im Bereich der Sauerstoffmehrschritttherapie, Übersäuerungstherapie, Immuntherapie und Hyperthermie zu nennen, die auch Eingang in die medizinische Praxis gefunden haben. Unter diesen Verfahren haben sich vor allem die Hyperthermie und Immuntherapie als erfolgversprechende Ansätze entpuppt.The tumor therapies predominantly practiced today come from consistently from the field of chemotherapy and radiation therapy. Both methods, which can be described as classic, were in the has been the subject of intensive research in recent years with the aim of through improved medication or radiation techniques to achieve more effective and, above all, more selective therapy, to thereby reduce the sometimes blatant side effects of Lessen treatments. Despite various improvements Both methods are relatively radical methods to date hardly allow between healthy and sick Discriminate against tissues. The consequence of this is that the significant side effects such as hair loss, vomiting, Dizziness attacks etc. are still hardly controlled. Because of the enormous drawbacks that these procedures involve bring, they tried early on, alternative To design procedures. In this context they are Developments in the field of oxygen multi-step therapy, Acidification therapy, immunotherapy and hyperthermia too name that also found its way into medical practice to have. These are the main processes Hyperthermia and immunotherapy as promising Approaches turned out to be.

Ausgangspunkt bei der Hyperthermie ist der Umstand, daß Krebszellen aufgrund ihrer höheren Stoffwechselrate wärmeempfindlicher sind als gesunde Zellen. Das bedeutet in praxi, daß die Tumorzelle bei einer künstlichen Erwärmung bereits bei einer Temperatur oberhalb 42,5°C abstirbt, während die normalen Zellen unter diesen Bedingungen überleben. Dieser Tatbestand wird nun in der Hyperthermie dadurch genutzt, daß man versucht, Tumorgewebe künstlich auf über 42°C aufzuheizen. Hierfür werden in der Praxis heiße Bäder, Behandlungen mit heißen Wachsen, Erzeugung künstlichen Fiebers sowie seit neuerem Mikrowellen, Induktionsheizung und Ultraschall herangezogen. Das Hauptproblem bei allen Hyperthermie- Behandlungen besteht darin, genügend Energie auf vor allem tieferliegende Tumorbereiche zu übertragen. Abgesehen von den teilweise erheblichen körperlichen Belastungen, die die Erwärmungen mit sich bringen, werden mit den heute zur Verfügung stehenden Heizsystemen kaum Eindringtiefen von mehr als 7 cm erreicht (JAMA, 252, 3341, 1984), so daß die tiefer­ liegenden Tumorzellen nicht auf den Schwellenwert von <42,5°C gebracht werden können, d. h., diese Zellen überleben unter diesen Bedingungen und können proliferieren. Um dieses Problem der ungenügenden Wärmefokussierung zu umgehen, hat man alternativ versucht. Metallnadeln operativ in den Tumorherd zu implantieren (IEEE Trans. Biomed. Eng., 31, 227, 1984), die mittels eines Radiosenders aufgeheizt werden. Zu einem Durchbruch hat diese Verfahrensweise bis dato jedoch nicht geführt. Der heutige Trend geht vielmehr dahin, Hyperthermie als adjuvantes Verfahren in Kombination mit anderen Therapien, z. B. der Chemotherapie, zu benutzen. So scheint erwiesen zu sein, daß Chemotherapeutika in Kombination mit der Hyperthermie eine höhere Responsrate aufweisen als Cytostatika allein (Tanaka et al., Cancer J., 4, 193, 1991; Akuta et al., Int. J. Hyperthermy, 7, 231, 1991).The starting point for hyperthermia is the fact that Cancer cells are more sensitive to heat due to their higher metabolic rate are as healthy cells. In practice, that means that the tumor cell already with artificial heating dies at a temperature above 42.5 ° C, while the normal cells survive under these conditions. This Fact is now used in hyperthermia in that attempts are being made to artificially create tumor tissue at over 42 ° C  to heat up. In practice, hot baths, Treatments with hot waxes, creating artificial ones Fieber and recently microwaves, induction heating and Ultrasound used. The main problem with all hyperthermia Treatments consist of having enough energy before to transmit all underlying tumor areas. Except from the sometimes considerable physical strain that the warming that comes with it becomes the Available heating systems hardly penetration depths of more than 7 cm (JAMA, 252, 3341, 1984), so that the deeper tumor cells do not lie on the threshold value of <42.5 ° C can be brought, d. that is, these cells survive under these conditions and can proliferate. To this To avoid the problem of insufficient heat focusing alternatively you try. Surgical needles in the metal To implant tumor focus (IEEE Trans. Biomed. Eng., 31, 227, 1984), which are heated up by means of a radio transmitter. To However, this procedure has had a breakthrough to date not led. The current trend is rather hyperthermia as an adjuvant procedure in combination with others Therapies, e.g. B. chemotherapy. It seems proven to be chemotherapy drugs in combination with hyperthermia have a higher response rate than Cytostatics alone (Tanaka et al., Cancer J., 4, 193, 1991; Akuta et al., Int. J. Hyperthermy, 7, 231, 1991).

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, ein neues Hyperthermieverfahren zu entwickeln, das einerseits die bisherigen Nachteile der ungenügenden Heizleistung beseitigt und andererseits zur Behandlung auch von tiefliegenden Tumoren geeignet ist.The object of the present invention is a to develop new hyperthermia procedures, on the one hand the previous disadvantages of insufficient heating power eliminated and on the other hand for the treatment of deep Tumors is suitable.

Diese Aufgabe kann überraschenderweise durch ein Verfahren gelöst werden, das sich ferromagnetischer Partikel (FMP) bedient, die eine definierte Curie-Temperatur aufweisen. Mittel hierfür sind mikropartikuläre FMP mit einer Größe von <500 nm, die aus einer bestimmten Legierungszusammensetzung bestehen und einen Curiepunkt zwischen 43 und 70°C aufweisen. Legierungen dieser Art sind aus der DE-OS 35 02 998 bekannt. Es handelt sich dabei um Metallegierungen des Ferrittyps der allgemeinen Formel Me₁-xZnxFe₂O₄, wobei Me vorzugsweise Kobalt oder Nickel ist. Durch Variation des Kobalt- bzw. Nickelgehaltes kann der Curiepunkt genau eingestellt werden. Derartige Legierungen sowie Verfahren zu ihrer Herstellung sind allgemein bekannt (J. Smit; H. P. J. Wÿn, "Ferrites", Wiley, New York, 1959). Neben diesen Verbindungen können auch Legierungen des Typs MgCrFeO₄ verwendet werden, die Curie- Temperaturen um 50°C aufweisen.Surprisingly, this object can be achieved by a method which uses ferromagnetic particles (FMP) which have a defined Curie temperature. Means for this are microparticulate FMP with a size of <500 nm, which consist of a certain alloy composition and have a Curie point between 43 and 70 ° C. Alloys of this type are known from DE-OS 35 02 998. These are metal alloys of the ferrite type of the general formula Me₁- x Zn x Fe₂O₄, where Me is preferably cobalt or nickel. The Curie point can be set precisely by varying the cobalt or nickel content. Such alloys and processes for their preparation are generally known (J. Smit; HPJ Wÿn, "Ferrites", Wiley, New York, 1959). In addition to these compounds, alloys of the MgCrFeO₄ type which have Curie temperatures around 50 ° C can also be used.

In der DE-OS 28 28 941 werden Fe(III)hydroxid- und Fe-Oxid- Teilchen mit einer Größe bis zu 1 µm beschrieben, die, in den Körper injiziert, anschließend induktiv aufgeheizt werden können. Das Ziel dort ist, mit Hilfe der induktiv aufheizbaren Partikel Wärme so selektiv auf die Tumorzellen zu übertragen, daß eine Temperatur von über 42°C erreicht wird, wodurch die Tumorzellen schließlich abgetötet werden sollen. Das beschriebene Verfahren weist eine Reihe grundsätzlicher Mängel auf und ist daher kaum geeignet, Tumorzellen selektiv aufzuheizen. Zum einen lassen sich die verwendeten Eisenverbindungen mittels der applizierten Induktionsfelder nur sehr unkontrolliert aufheizen - ein Nachteil, der in diesem physiologisch empfindlichen Bereich gravierend ist -, zum anderen dürfte es kaum möglich sein, Partikel mit einer Größe um 1 µm, intravenös appliziert, an den Ort des Tumors zu dirigieren. Die Nichtdurchführbarkeit dieses Verfahrens liegt darin begründet, daß die Blutgefäße mit einer Endothelzellschicht ausgekleidet sind, die die Diffusion solch großer Teilchen in das Körperinnere verhindern. Darüber hinaus ist das vorgeschlagene Verfahren, die Partikel mit Toxinen oder Radioisotopen zu beladen, nicht geeignet, Tumorzellen speziell aufzuspüren, da diese unspezifischen Mittel grundsätzlich nicht zwischen einer Tumorzelle und einer gesunden Zelle diskriminieren können. Ähnliches gilt auch für die dort beschriebenen Tumor-Antikörper. Die bis heute produzierten Antikörper (AK) besitzen keine 100%ige Tumorspezifität (Seiler et al., Angew. Chemie, 97, 141, 1985). Insofern ist das beschriebene Verfahren nicht, wie beansprucht, generell praktikabel. Der gravierendste Nachteil des zitierten Verfahrens besteht jedoch darin, daß keinerlei Maßnahmen angeführt oder beschrieben sind, die geeignet wären, die Phagozytose der injizierten Partikel durch das retikuloendotheliale System (RES) zu umgehen. Es ist bekannt, daß Phagozyten, speziell die Makrophagen, solche Teilchen innerhalb von Minuten eliminieren und somit unwirksam machen. Dieses fundamentale Problem ist auch bei dem in der DE-OS 35 02 998 beschriebenen Verfahren der selektiven Hyperthermie mittels FMP nicht gelöst. FMP werden hier mit Polymeren beschichtet, an die Tumor-AK gekoppelt werden, die als carrier zum Ort des Tumors fungieren sollen. Die dabei verwendeten Teilchengrößen von 0,5-1 µm sowie die angegebenen Beschichtungen sind ebenfalls nicht geeignet, den Eliminierungsmechanismus des RES zu umgehen.In DE-OS 28 28 941 Fe (III) hydroxide and Fe oxide are Particles with a size of up to 1 µm are described, which, in the Body injected, then inductively heated can. The goal there is with the help of inductively heatable Particles heat so selectively to the tumor cells transferred that a temperature of over 42 ° C is reached, which will eventually kill the tumor cells. The method described has a number of basic ones Defects and is therefore hardly suitable for selective selection of tumor cells to heat up. Firstly, the iron compounds used only very much by means of the applied induction fields heating up uncontrollably - a disadvantage in this physiologically sensitive area is serious - to others are unlikely to be able to get particles of one size by 1 µm, administered intravenously, to the site of the tumor conduct. The impracticability of this procedure is because the blood vessels with a Endothelial cell layer are lined, which diffusion prevent such large particles from entering the body. In addition, the proposed method is the particles to be loaded with toxins or radioisotopes, not suitable, Detect tumor cells specifically, as these are non-specific Fundamentally not between a tumor cell and discriminate against a healthy cell. The same applies also for the tumor antibodies described there. The up Antibodies produced today do not have 100% Tumor specificity (Seiler et al., Angew. Chemie, 97, 141, 1985). In this respect, the method described is not how claimed, generally practicable. The most serious disadvantage However, the procedure cited is that none Measures are listed or described that are suitable  would be the phagocytosis of the injected particles by the bypass reticuloendothelial system (RES). It is known, that phagocytes, especially macrophages, such particles eliminate within minutes and thus render it ineffective. This fundamental problem is also with that in the DE-OS 35 02 998 described methods of selective hyperthermia not solved by FMP. FMP are used here with polymers coated, to be coupled to the tumor AK, which as carrier should act to the location of the tumor. The one there used particle sizes of 0.5-1 microns and the specified Coatings are also not suitable Work around the elimination mechanism of the RES.

Dieser Nachteil kann überraschenderweise dadurch beseitigt werden, daß manSurprisingly, this disadvantage can thereby be eliminated be that one

  • a) zu sehr feinen Teilchen mit einer Größe von unter 500 nm übergeht, vorzugsweise solchen zwischen 10 und 100 nm, unda) too fine particles with a size of less than 500 nm, preferably between 10 and 100 nm, and
  • b) diese Teilchen speziell mit solchen Polymeren bzw. bioaktiven Substanzen beschichtet, die keine Affinität zu den Makrophagen des RES aufweisen, d. h., von diesen nicht als fremd erkannt werden.b) these particles specifically with such polymers or bioactive substances coated that none Have affinity for the macrophages of the RES, d. i.e. from these are not recognized as foreign.

Eine weitere Maßnahme zur Umgehung der Makrophagen-Phagozytose wird durch die Verwendung der Fab- bzw. F(ab')₂-Fragmente des AK statt des intakten Moleküls erreicht, wodurch die durch das Fc-Fragment des AK vermittelte Phagocytose ausgeschaltet wird. Aus diesem Grund sind die Beschichtungen der FMP mit tumorspezifischen AK, wie in den zitierten Patentschriften beschrieben, ungeeignet, die Phagozytose des RES zu umgehen.Another measure to bypass macrophage phagocytosis is by the Use of the Fab or F (ab ') ₂ fragments of the AK instead of the intact molecule, which is achieved by the Fc fragment of the AK mediated phagocytosis is switched off. For this reason, the coatings of the FMP are included tumor-specific AK, as in the cited patents described, unsuitable for circumventing the phagocytosis of the RES.

FMP mit einer Größe zwischen 10 und 500 nm können mit den bekannten naßtechnischen Verfahren durch Ausfällen der entsprechenden Verbindungen hergestellt werden. Solche Verfahren sind u. a. in der DE-OS 35 08 000 beschrieben. Eine weitere Möglichkeit zur Herstellung dieser Teilchen bietet die Plasmasprühtechnik.FMP with a size between 10 and 500 nm can be used with the known wet process by failure of the corresponding Connections are made. Such procedures are u. a. described in DE-OS 35 08 000. A offers further possibility for the production of these particles the plasma spraying technique.

Hauptanliegen der vorliegenden Erfindung ist es, FMP mit eine definierten Curie-Temperatur im Bereich zwischen 43 und 70°C so mit tumorspezifischen Substanzen zu beschichten (coaten), daß sich die Teilchen nach entsprechender Injektion am Ort des Tumors anreichern und anschließend induktiv mittels eines Hochfrequenzwechselfeldes auf oberhalb 42,5°C aufgeheizt werden können. Ein weiteres Ziel besteht darin, bei der Präparation der FMP diese mit Tumortoxinen so zu kombinieren, daß sie simultan für die Tumortherapie angewendet werden können.Main concern of the present invention is using FMP a defined Curie temperature in the range between 43 and 70 ° C so to coat with tumor-specific substances (Coating) that the particles after an appropriate injection Enrich at the tumor site and then inductively  by means of a high-frequency alternating field to above 42.5 ° C can be heated. Another goal is when preparing the FMP this with tumor toxins combine that they are applied simultaneously for tumor therapy can be.

Es hat sich gezeigt, daß der Prozeß der Phagozytose überraschenderweise durch Beschichten der FMP mit biokompatiblen Polymeren, inerten Proteinen oder Polysaccharid- Derivaten umgangen werden kann. Für die Beschichtung mit biokompatiblen Polymern haben sich grundsätzlich drei Verfahren als vorteilhaft erwiesen:It has been shown that the process of phagocytosis surprisingly, by coating the FMP with biocompatible Polymers, inert proteins or polysaccharide Derivatives can be avoided. For coating with There are basically three biocompatible polymers Process proven to be advantageous:

  • A) Liposomentechnik,A) liposome technology,
  • B) Plasmapolymerisation undB) plasma polymerization and
  • C) Phasen-Separations-Suspensions-Polymerisation (PSSP).C) Phase Separation Suspension Polymerization (PSSP).

Die Liposomen-Technik ist seit geraumer Zeit als alternative Methodik für die Applikation besonders von cytotoxischen Agenzien Gegenstand diverser Entwicklungen. Das Hauptanliegen dabei ist, die Toxizität der Medikamente durch den Einschluß in Liposomen, die in der Regel aus einer Phospholipid-Doppelschicht bestehen, zu reduzieren. Bei den hierfür benutzten Lipiden handelt es sich vorwiegend um Glycerin-3-phosphat- Derivate sowie N-Acetylneuraminsäure-verknüpfte Phospholipide, desgleichen Sphingosin- und Ceramid-Derivate, die allesamt Konstituenten der natürlichen Zellmembran sind. Man hat in der Vergangenheit zeigen können (Fendler und Romero, Life Sci., 20, 1109, 1977), daß mit Hilfe der Liposomen nicht nur unerwünschte Nebenreaktionen der Toxine besser beherrscht werden können, es wird auch beschrieben, daß durch Änderung der Liposomenmembran deren Anwendung in vielfacher Weise erweitert werden kann. Der physikalische Zustand der Membran wie Größe, Ladung und Fluidität sowie die Zusammensetzung der Membran bestimmen den Mechanismus der Liposomeninkorporation in die Zielzelle, seine "Clearance"-Rate sowie ihre Verteilung im Körper nach der Injektion. So werden neutrale Liposomen vorzugsweise von der Leber, der Milz und der Niere aufgenommen, während positiv geladene Liposomen mehr in der Lunge, negativ geladene vorwiegend in der Milz und im Knochenmark abgelagert werden. Im Hinblick auf die erfindungsgemäßen Mittel in Form der Ferromagnetika kann jetzt gezeigt werden, daß durch Zugabe einer wäßrigen Suspension der FMP zu den festen Lipiden nach anschließender Homogenisierung, z. B. im Ultraschallbad, die FMP überraschenderweise in die gebildeten Liposomen inkorporiert werden. Auch der kombinierte Einschluß von Toxinen und FMP in die Liposomen ist durch einfache Zugabe der letzteren zu der wäßrigen Suspension im Fall wasserlöslicher Toxine oder einer Chloroform-Suspension für die Applikation apolarer Toxine möglich. Die Konzentration der eingekapselten Pharmaka kann erfahrungsgemäß durch Variation der Lösungsmittelvolumina in den Liposomen sowohl für apolare als auch für polare Toxine in der Weise gesteuert werden, daß generell mit steigendem Volumen auch die Menge der inkorporierten Toxine erhöht wird. Die Stabilität der Liposomen in bezug auf die Phasenübergangstemperatur kann durch Zugabe von Co-Lipiden in Form geladener Spezies und vor allem durch Zugabe von Cholesterin gesteigert werden. Das molare Verhältnis einer solchen zusammengesetzten Membran beträgt in der Regel 9 : 1, 8 : 2, 7 : 3, für eine Lipid-Cholesterin- Membran vorzugsweise 9 : 1 sowie vorzugsweise 7 : 2 : 1 im Falle einer ternären Membran aus geladenen Lipidanteilen und Cholesterin. Die Freisetzung der in den Liposomen eingekapselten Substrate ist unmittelbar von ihrem physikalischen Zustand, insbesondere der flüssigkristallinen-Phasen-Übergangstemperatur bestimmt. Unterhalb dieser Übergangstemperatur befindet sich die Membran in einem "festen" und oberhalb in einem "fluiden" Zustand. Dieser Zustand bestimmt nun die Freisetzungsgeschwindigkeit ("releasing rate") der eingekapselten Toxine derart, daß nahe der Übergangstemperatur die Diffusion der Pharmaka ansteigt. Dieser Sachverhalt kann in Verbindung mit den erfindungsgemäßen Mitteln überraschenderweise dazu genutzt werden, das "drug releasing" mit Hilfe der miteingekapselten FMP direkt zu beeinflussen. Durch die induktive Aufheizung wird parallel mit Erreichen der Curie-Temperatur auch die Übergangstemperatur vom Gel zur flüssigkristallinen Phase überschritten, wodurch die Toxine unmittelbar freigesetzt werden.The liposome technique has been an alternative for some time Methodology for the application of especially cytotoxic Agents subject to various developments. The main concern is, the toxicity of the medication due to the inclusion in liposomes, which usually consist of a phospholipid bilayer exist to reduce. For those used for this Lipids are predominantly glycerol-3-phosphate Derivatives and N-acetylneuraminic acid-linked phospholipids, likewise sphingosine and ceramide derivatives, the are all constituents of the natural cell membrane. Man has shown in the past (Fendler and Romero, Life Sci., 20, 1109, 1977) that with the help of liposomes not only better controls unwanted side reactions of the toxins , it is also described that by modification the liposome membrane expands their application in many ways can be. The physical state of the membrane such as size, charge and fluidity as well as the composition of the Membranes determine the mechanism of liposome incorporation into the target cell, its "clearance" rate and its distribution in the body after the injection. This is how neutral liposomes become preferably absorbed by the liver, spleen and kidney, while positively charged liposomes are more in the lungs, negatively charged predominantly in the spleen and bone marrow be deposited. With regard to the invention Funds in the form of ferromagnetics can now be shown  that by adding an aqueous suspension of the FMP to the solid lipids after subsequent homogenization, e.g. B. in Ultrasonic bath, the FMP surprisingly formed in the Liposomes are incorporated. Combined inclusion too of toxins and FMP in the liposomes is through simple addition the latter to the aqueous suspension in the case of water-soluble Toxins or a chloroform suspension for that Application of apolar toxins possible. The concentration of Encapsulated pharmaceuticals can, according to experience, be varied of solvent volumes in the liposomes for both apolar as well as for polar toxins can be controlled in such a way that generally with increasing volume also the amount of incorporated toxins is increased. The stability of the Liposomes in relation to the phase transition temperature can by adding co-lipids in the form of charged species and before can all be increased by adding cholesterol. The molar ratio of such a composite membrane is usually 9: 1, 8: 2, 7: 3, for a lipid cholesterol Membrane preferably 9: 1 and preferably 7: 2: 1 im Case of a ternary membrane of charged lipid portions and Cholesterol. The release of the encapsulated in the liposomes Substrates is immediate from their physical State, especially the liquid crystalline phase transition temperature certainly. Below this transition temperature the membrane is in a "fixed" and above in a "fluid" state. This condition determines now the release rate ("releasing rate") of the encapsulated toxins such that near the transition temperature the diffusion of the pharmaceuticals increases. This fact can surprisingly in connection with the agents according to the invention to be used with "drug releasing" To influence the encapsulated FMP directly. By the inductive heating is carried out in parallel when the Curie temperature also the transition temperature from gel to liquid crystalline phase exceeded, causing the toxins be released immediately.

Während die so präparierten Liposome vorzugsweise in die Leber, die Niere und die Milz transpsortiert und daher im Falle eines Tumors dieser Organe auch dort zur Behandlung eingesetzt werden können, ergibt sich durch Einsatz solcher Lipide, die über eine Zuckerfunktion oder ander aktivierbare Substituenten verfügen, überraschenderweise die Möglichkeit eines gezielten Zell-Targetings. Beispiele für diese aktivierbaren Derivate sind Glykosphingolipide, Sphingosine oder Ceramid-Derivate. Über die Hydroxyl- bzw. Aminofunktionen der Substituenten lassen sich nach entsprechender Aktivierung mit den bekannten Kupplungsagenzien, wie z. B. BrCN, Hexamethylendiisocyanat oder 1,4-Butandiol-diglycidyläther (weitere Beispiele s. Ausführungen im unteren Teil dieser Erfindung), Tumor-AK oder ander Wirksubstanzen durch einfache Inkubation bei Raumtemperatur bzw. 4°C kovalent koppeln. Bei der anschließenden Erzeugung der Liposomen wird so vorgegangen, daß die gekoppelten Lipide den oben beschriebenen Lipidansätzen in einer solchen Konzentration zugemischt werden, daß pro Liposom 1 bis 5, vorzugsweise 1 bis 2 Wirksubstanz-Moleküle in die Membran eingebaut werden.While the liposomes so prepared preferably in the Liver, kidney and spleen transpsorted and therefore in In the event of a tumor of these organs also there for treatment  can be used results from the use of such Lipids that have a sugar function or other activatable Surprisingly, substituents have the possibility targeted cell targeting. Examples of these can be activated Derivatives are glycosphingolipids, sphingosines or Ceramide derivatives. About the hydroxyl or amino functions of Substituents can be activated after appropriate activation the known coupling agents, such as. B. BrCN, hexamethylene diisocyanate or 1,4-butanediol diglycidyl ether (further examples s. Statements in the lower part of this invention), Tumor AK or other active substances by simple incubation couple covalently at room temperature or 4 ° C. In the subsequent Generation of the liposomes is carried out in such a way that the coupled lipids the lipid approaches described above are mixed in such a concentration that per Liposome 1 to 5, preferably 1 to 2 active substance molecules be built into the membrane.

Die Beschichtung der FMP mittels der Plasmapolymerisation kann nach den bekannten Verfahren, wie sie in der Literatur beschrieben sind (Bell, Shen, Hrsg., "Plasma Polymerisation", ACS Symp. ser. 108, American Chem. Soc., Washington, 1979; Yasuda, J. Polym. Sci.: Macromol. rev., 16, 199, 1981), erfolgen. Die Erzeugung des Plasmas kann wahlweise mittels Gleichstrom- und Niederfrequenz-Glimmentladung, Mikrowellenentladung, Coronaentladung oder Hochfrequenz- bzw. Radio- Glimmentladung bewerkstelligt werden. Durch Variation bestimmter Verfahrensparameter wie Gasdurchflußrate, Druck, Verdünnungsgrad des Monomeren mit dem Trägergas, elektrische Leistung, Elektrodenanordnung können die Plasmaparameter wie Gasteilchendichte, Verweilzeit des Plasmas, e-Dichte etc., die die Art und Weise der Polymerbeschichtung bestimmen, entsprechend den Anforderungen für den therapeutischen Einsatz angepaßt werden. Es können Polymerschichten von 5 bis 200 nm erzeugt werden, wobei Schichtdicken zwischen 10 und 50 nm vorzuziehen sind, da dünnere Schichten rascher biologisch abgebaut werden können als dickere. Als Substrate für die Beschichtung kommen grundsätzlich solche Substanzen bzw. Polymere in Frage, die nicht oder nur wenig mit den Blutbestandteilen oder dem RES interagieren. Monomere bzw. die daraus gebildeten Polymere, die sich hierfür eignen, sind z. B. 2-Hydroxyäthyl-methacrylat, N-Vinylpyrrolidon, 2- Hydroxyäthyl-acrylat, Glycidyl-acrylat, Glycidyl-methacrylat. Besonders gute Biokompatibilitäten werden überraschenderweise durch die Verwendung von Monomermischungen des 2-Hydroxyäthyl- methacrylats mit N-Vinylpyrrolidon erzeugt (Kirkpatrick, Müller-Schulte et al., Cells & Mat., 1, 93, 1991).The coating of the FMP by means of plasma polymerization can according to the known methods, as in the literature (Bell, Shen, ed., "Plasma Polymerization", ACS Symp. Ser. 108, American Chem. Soc., Washington, 1979; Yasuda, J. Polym. Sci .: Macromol. rev., 16, 199, 1981), respectively. The plasma can optionally be generated by means of DC and low frequency glow discharge, microwave discharge, Corona discharge or radio frequency or radio Glow discharge can be accomplished. By varying certain Process parameters such as gas flow rate, pressure, Degree of dilution of the monomer with the carrier gas, electrical Power, electrode arrangement can like the plasma parameters Gas particle density, residence time of the plasma, e-density etc., which determine the type of polymer coating, according to the requirements for therapeutic Use to be adjusted. Polymer layers from 5 to 200 nm are generated, with layer thicknesses between 10 and 50 nm are preferable because thinner layers are more organic can be mined as thicker. As substrates for the Such substances or Polymers in question that do not or only little with the  Blood components or the RES interact. Monomers or the polymers formed therefrom which are suitable for this are e.g. B. 2-hydroxyethyl methacrylate, N-vinyl pyrrolidone, 2- Hydroxyethyl acrylate, glycidyl acrylate, glycidyl methacrylate. Particularly good biocompatibilities are surprisingly through the use of monomer mixtures of 2-hydroxyethyl methacrylate with N-vinylpyrrolidone (Kirkpatrick, Müller-Schulte et al., Cells & Mat., 1, 93, 1991).

Die Beschichtung der FMP nach dem PSSP-Verfahren (Variante C) wird vorzugsweise mit Polyvinylalkohol, Stärke, Gelatine oder Acrylamid bewerkstelligt. Nach einem bekannten Verfahren (Holzscherer et al., Colloid und Polymer Sci., 265, 1067, 1987) werden Polyacrylamid-Mikroemulsionen durch Suspension einer wäßrigen Lösung von Acrylamid und Na-Acetat in einer Mischung aus Paraffinöl und Emulgator erhalten. Die gebildeten Polymerpartikel weisen eine Größenverteilung, je nach Versuchsbedingungen, zwischen 80 und 150 nm auf. Es hat sich überraschenderweise gezeigt, daß durch Zugabe von 10 bis 80 nm großen FMP zu der Suspension diese in die Polyacrylamid- Matrix eingekapselt werden. Diese Art der Beschichtung wird praktisch nicht vom RES als fremd erkannt. In ähnlicher Weise kann die Einkapselung der FMP auch mit Polyvinylalkohol (PVA) vorgenommen werden. Hierzu wird eine Mineralsäure enthaltende wäßrige PVA-Lösung, in der die FMP suspendiert sind, in eine Pflanzenöl-Phase eingetragen und durch Zugabe von Glutaraldehyd vernetzt. Durch Zugabe z. B. von 0,5 bis 1 Gew.-% Na- Dodecylsulfat, bezogen auf die Polymer-Phase, werden PVA- beschichtete Teilchen mit einem Durchmesser von 50 bis 500 nm erhalten. Als organische Phase können herkömmliche Öle wie Leinsamenöl, Olivenöl, Sonnenblumenöl, Rapsöl, Sojaöl etc., ferner Paraffinöl sowie bei Zimmertemperatur flüssige gesättigte und ungesättigte Fettsäure sowie deren Mischungen verwendet werden. Die Größe der PA-gecoateten Partikel wird dabei, außer von der vorgegebenen Größe der FMP, durch die Rührgeschwindigkeit, die Emulgatorkonzentration und die Viskosität der PVA-Phase bestimmt. Die Viskosität der Polymer- Phase, die vorzugsweise zwischen 1 und 12 Centipoise liegt, kann direkt durch die mittlere Molmasse des PVA sowie dessen Konzentration, die vorzugsweise zwischen 1 und 2,5 Gew.-%, bezogen auf die wäßrige Phase, beträgt, eingestellt werden, wobei mit sinkender Viskosität die Teilchengröße bzw. Dicke der Beschichtung abnimmt.The coating of the FMP according to the PSSP process (variant C) is preferably with polyvinyl alcohol, starch, gelatin or Acrylamide accomplished. According to a known method (Holzscherer et al., Colloid and Polymer Sci., 265, 1067, 1987) become polyacrylamide microemulsions by suspension an aqueous solution of acrylamide and Na acetate in one Obtain a mixture of paraffin oil and emulsifier. The educated Polymer particles have a size distribution, depending on Test conditions, between 80 and 150 nm. It has Surprisingly shown that by adding 10 to 80 nm large FMP to the suspension these into the polyacrylamide Matrix are encapsulated. This type of coating will practically not recognized by the RES as foreign. In a similar way the FMP can also be encapsulated with polyvinyl alcohol (PVA) be made. For this purpose a mineral acid is used aqueous PVA solution in which the FMP are suspended in a Vegetable oil phase entered and by adding glutaraldehyde networked. By adding z. B. from 0.5 to 1 wt .-% Na Dodecyl sulfate, based on the polymer phase, are PVA coated particles with a diameter of 50 to 500 nm receive. Conventional oils such as Linseed oil, olive oil, sunflower oil, rapeseed oil, soybean oil etc., also paraffin oil and saturated liquid at room temperature and unsaturated fatty acid and mixtures thereof be used. The size of the PA-coated particles becomes besides the specified size of the FMP, by the Stirring speed, the emulsifier concentration and the Viscosity of the PVA phase determined. The viscosity of the polymer Phase, preferably between 1 and 12 centipoise lies directly through the average molecular weight of the PVA as well  its concentration, which is preferably between 1 and 2.5 % By weight, based on the aqueous phase, is adjusted are, the particle size or Coating thickness decreases.

Eine alternative Einkapselung der FMP mit PVA ohne Zugabe eines Vernetzers kann nach einem bekannten Verfahren (Müller-Schulte, DE-OS 39 00 945) in der Weise durchgeführt werden, daß einer in Äthylenglykol oberhalb von 100°C gelösten PVA-Phase FMP zugemischt werden und diese Mischung in Pflanzenöl analog obigem Verfahren suspendiert wird. Der Suspensionsvorgang wird vorzugsweise in einem Ultraschallbad oder mittels eines Vortexrührers durchgeführt. Beim Abkühlprozeß erstarrt die PVA-Phase zu submikroskopischen festen perlförmigen Partikeln, deren Größe von der Viskosität sowie der Art der Homogenisierung der Suspension abhängt. Die Konzentration des PVA in der gelösten Phase beträgt allgemein 1 bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 0,5 bis 2,5 Gew.-%. Die Viskosität der PVA-Phase wird durch die Konzentration des gelösten PVA sowie die Temperatur der Polymer-Phase festgelegt. Die Emulgatorkonzentration beträgt in der Regel 1 bis 5 Gew.-%, bezogen auf die Polymer-Phase.An alternative encapsulation of the FMP with PVA without addition a crosslinker can be prepared by a known method (Müller-Schulte, DE-OS 39 00 945) performed in the manner be that one dissolved in ethylene glycol above 100 ° C. PVA phase FMP are added and this mixture in Vegetable oil is suspended analogously to the above procedure. The The suspension process is preferably carried out in an ultrasonic bath or carried out using a vortex mixer. During the cooling process solidifies the PVA phase to submicroscopic solid pearl-shaped particles, their size depends on the viscosity as well depends on the type of homogenization of the suspension. The concentration of the PVA in the dissolved phase is generally 1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 2.5% by weight. The viscosity The PVA phase is determined by the concentration of the dissolved PVA as well as the temperature of the polymer phase. The emulsifier concentration is usually 1 to 5 wt .-%, based on the polymer phase.

In ähnlicher Weise wie PVA kann für die Einkapselung der FMP auch Stärke verwendet werden. Hierzu wird ein in FEBS Letters, 102, 112, 1979, beschriebenes Verfahren in modifizierter Form genutzt. Stärke wird zunächst in der Hitze in Wasser gelöst und mit den FMP intensiv vermischt. Diese Mischung wird in einer Pflanzenöl-Phase, in der 1 bis 5% Emulgator gelöst sind, unter Zuhilfenahme eines Ultraschallbades suspendiert. Beim Abkühlen der Suspension auf Raumtemperatur fallen perlförmige Partikel an, dern Durchmesser, je nach Konzentration der Stärke und des Emulgators, zwischen 50 und 300 nm variiert. Nach dem gleichen Verfahren läßt sich auch Gelatine für die Beschichtung verwenden. Die nach der PSSP-Technik hergestellten Teilchen bieten den Vorteil, daß die Polymermatrix nach der Anreicherung im Tumor enzymatisch abgebaut und leicht aus dem Körper ausgeschieden werden kann. Similar to how PVA can encapsulate the FMP starch can also be used. For this, one in FEBS Letters, 102, 112, 1979 modified form used. Starch is first in the heat dissolved in water and mixed intensively with the FMP. These Mixture is in a vegetable oil phase in which 1 to 5% Emulsifier are solved with the help of an ultrasonic bath suspended. When the suspension cools down Pearl-shaped particles are obtained at room temperature, their diameter, depending on the concentration of the starch and the emulsifier, varies between 50 and 300 nm. Following the same procedure gelatin can also be used for the coating. The Particles produced using the PSSP technique offer the advantage that the polymer matrix after accumulation in the tumor enzymatically broken down and easily excreted from the body can be.  

Neben der Ausschaltung des RES durch die oben beschriebenen Coating-Maßnahmen spielt bei den erfindungsgemäßen Mitteln und Verfahren die zielgerichtete Applikation der FMP eine essentielle Rolle. Die bis heute verwendeten Cytostatika rufen allesamt mehr oder weniger starke Nebenwirkungen hervor und können, wie bereits hervorgehoben, grundsätzlich nicht zwischen normalen und Tumorzellen unterscheiden. Es sind daher seit einigen Jahren Bestrebungen im Gange, die Toxine dadurch gezielter einzusetzen, daß man sie an tumorspezifische bzw. -assoziierte AK kovalent bindet, um sie so als "carrier" zum Ort des Tumors zu benutzen. Der Nachteil dieser Verfahren besteht darin, daß die Cytostatika-AK-Konjugate in den Zellkern gelangen müssen, um dort ihre Wirkung voll zu entfalten. Dies wird jedoch häufig dadurch verhindert, daß nach der Endozytose die Toxin-AK-Konjugate in die Lysosomen gelangen und dort enzymatisch abgebaut werden. Eine weitere Schwierigkeit besteht in der entsprechenden Freisetzung des Toxins, d. h., in der entsprechenden Abspaltung des Toxins vom Konjugat in den Phagosomen. Dies stellen bis heute kaum beherrschte Probleme dar, ein Grund, weshalb diese Methodik trotz intensiver Bemühungen nur sehr vereinzelt Eingang in die medizinische Praxis gefunden hat.In addition to switching off the RES by the ones described above Coating measures play a role in the agents according to the invention and method the targeted application of FMP one essential role. The cytostatics used to date all cause more or less severe side effects and, as already emphasized, basically cannot distinguish between normal and tumor cells. There are hence, for some years now efforts have been made to get the toxins by using them more specifically, that they are tumor-specific or -associated AK binds covalently so as to to use "carrier" to the location of the tumor. The disadvantage of this The method is that the cytostatics-AK conjugates in must reach the cell nucleus in order to be fully effective there unfold. However, this is often prevented by the fact that after endocytosis, the toxin-AK conjugates into the lysosomes arrive and are broken down enzymatically there. Another Difficulty lies in the corresponding release of the Toxins, d. that is, in the corresponding release of the toxin from Conjugate in the phagosomes. To date, this has hardly been mastered Problems, one reason why this methodology in spite of intensive efforts only very occasionally entrance in has found medical practice.

Dieser Nachteil kann nun durch die erfindungsgemäßen Verfahren und Mittel überraschenderweise dadurch umgangen werden, daß man die Cytostatika kombiniert mit den FMP anwendet, derart, daß FMP und Toxin zusammen in eine Polymermatrix eingekapselt werden. Hierdurch ist sowohl die selektive Hyperthermie als auch eine simultane Chemotherapie realisiert. Die obenerwähnten Nachteile der Toxin-Konjugate sind einerseits durch die Applikation des ungebundenen freien Toxins umgangen, andererseits können aufgrund der Einkapselung gegenüber den herkömmlichen Methoden höhere Toxin-Konzentrationen gewählt werden, da normales Gewebe aufgrund der Einkapselung nicht direkt mit dem Toxin in Kontakt kommt.This disadvantage can now be caused by the method according to the invention and surprisingly bypassed means that the cytostatics are used in combination with the FMP, such that FMP and toxin together in a polymer matrix be encapsulated. This makes both the selective Hyperthermia as well as simultaneous chemotherapy were realized. The above mentioned disadvantages of toxin conjugates are on the one hand through the application of the unbound bypassed free toxin, on the other hand, due to the Encapsulation higher than traditional methods Toxin concentrations are chosen because of normal tissue due to the encapsulation, not directly in with the toxin Contact comes.

Nachdem durch die beschriebenen Coating-Verfahren das RES umgangen werden kann, besteht der nächste Schritt darin, die beschichteten FMP mit solchen Tumor-AK bzw. Wirksubstanzen zu beladen, die einen gezielten Transport der Teilchen an den Ort des Tumors gewährleisten. Zu diesen AK gehören solche, die gegen eine Reihe von tumorassoziierten Antigenen gerichtet sind. Diese Antigene werden von bestimmten Tumoren verstärkt produziert und können sowohl auf der Zelloberfläche als auch in den Körperflüssigkeiten nachgewiesen werden. Beispiele hierfür sind carcinoembryonales Antigen (CEA), α- Fetoprotein, Choriogonadotropin, β₂-Mikroglobulin und Prostata-Phosphatase. Da diese Antigene nicht absolut tumorspezifisch sind, sondern auch im normalen Gewebe vorkommen, wurden sie bis heute lediglich für die Tumor-Diagnostik als Marker verwendet. Die erfindungsgemäßen Mittel und Verfahren ermöglichen es nun, AK gegen diese Tumor-Marker auch für die Therapie zu nutzen. Dies wird überraschenderweise dadurch möglich, daß mit Hilfe der Curie-Punkt-Methode die FMP und dementsprechend die Zellen exakt auf eine Temperatur von 42,5°C aufgeheizt werden können, d. h., selbst normale Zellen, die mit den FMP-AK-Konjugaten beladen und ebenfalls aufgeheizt werden, bleiben im Gegensatz zu den wärmeempfindlichen Tumorzellen intakt. Das vorliegende Verfahren bietet daher zwei fundamentale Vorteile gegenüber früheren Methoden: Zum einen können tumorassoziierte AK für eine Therapie verwendet werden, zum anderen wird eine wesentlich bessere Diskriminierung zwischen kranken und intakten Zellen ermöglicht.After the RES the next step is to bypass the coated FMP with such tumor AK or active substances  loaded that a targeted transport of the particles to the Ensure the location of the tumor. These AK include those which are directed against a number of tumor-associated antigens are. These antigens are enhanced by certain tumors produces and can both on the cell surface as well as in the body fluids. Examples for this are carcinoembryonic antigen (CEA), α- Fetoprotein, choriogonadotropin, β₂-microglobulin and Prostate phosphatase. Because these antigens are not absolutely are tumor-specific, but also occur in normal tissue, until today they were only used for tumor diagnostics used as a marker. The agents and Procedures now make it possible to AK against these tumor markers can also be used for therapy. This will be surprising possible by using the Curie point method the FMP and, accordingly, the cells at exactly one temperature can be heated from 42.5 ° C, d. i.e., yourself normal cells loaded with the FMP-AK conjugates and also be heated, remain in contrast to the heat-sensitive tumor cells intact. The present Process therefore offers two fundamental advantages over previous methods: on the one hand, tumor-associated AK for one therapy is used, the other one becomes essential better discrimination between sick and intact Cells.

Neben den obenerwähnten AK gibt es eine Reihe weiterer AK, die sich als tumorspezifisch bzw. tumorassoziiert herausgestellt haben und sich bis zu 80% im Tumor anreichern können (UCLA Symposia on Molecular and Cellular Biology, A. Liss, Hrsg., New York, Vol. 27, 1985). Hierzu zählen z. B. AK gegen Fibrin, colorectales Antigen (CA 19-9) (Koprowski et al., Science, 212, 53, 1981), Ca 125-Determinanten in Epithel Ovarialcarcinoma, Melanom-assoziierte Antigene wie Chondroitin Sulfat Proteoglycan und Disialogangliosid (GD2, GD3) oder Human T-Zellen 3A1 Antigen.In addition to the AKs mentioned above, there are a number of other AKs which turned out to be tumor-specific or tumor-associated have and can accumulate up to 80% in the tumor (UCLA Symposia on Molecular and Cellular Biology, A. Liss, Ed., New York, Vol. 27, 1985). These include e.g. B. AK against Fibrin, colorectal antigen (CA 19-9) (Koprowski et al., Science, 212, 53, 1981), Ca 125 determinants in epithelium Ovarian carcinoma, melanoma-associated antigens such as chondroitin Sulfate proteoglycan and disialoganglioside (GD2, GD3) or human T cells 3A1 antigen.

Aus in vivo Studien geht hervor (UCLA Symposium on Molecular and Cellular Biology, vol. 27, pp 523), daß die Reaktivität der AK gegen diverse Tumore stark variiert. Ein 2-139-AK reagiert z. B. stark gegen Colon- und Prostata-Carcinome, während er gegen Tumore der Lunge und des Pankreas wesentlich geringere Reaktivitäten aufweist. Die vorliegenden Verfahren können daher vor allem bei solchen Tumoren erfolgreich eingesetzt werden, gegen die eine hohe Reaktivität zu erwarten ist.In vivo studies show (UCLA Symposium on Molecular and Cellular Biology, vol. 27, pp 523) that reactivity the AK against various tumors varies greatly. A 2-139-AK responds e.g. B. strong against colon and prostate carcinomas,  while essential against tumors of the lungs and pancreas has lower reactivities. The present proceedings can therefore be successful especially with such tumors against which a high reactivity can be expected is.

Bei der Kopplung der AK an die FMP werden, wie bereits erwähnt, vorzugsweise die Fab- oder F(ab')₂-Fragmente des AK verwendet, die nach bekannten Verfahren durch enzymatische Spaltung mit Papain bzw. Pepsin erhältlich sind. Die Verwendung dieser Fragmente gegenüber dem kompletten Molekül bietet den Vorteil, die durch das Fc-Fragment des AK vermittelten Reaktionen wie die Phagozytose, Komplementaktivierung oder Thrombozytenaktivierung auszuschalten. Darüber hinaus können die beiden Fragmente wesentlich besser als das komplette Molekül in das Gewebe penetrieren, woraus ein verbessertes und rascheres Targetin resultiert.When the AK is linked to the FMP, as already mentioned, preferably the Fab or F (ab ') ₂ fragments of the AK used by known methods by enzymatic Cleavage with papain or pepsin are available. The usage of these fragments compared to the complete molecule the advantage mediated by the Fc fragment of the AK Reactions such as phagocytosis, complement activation or Turn off platelet activation. In addition, you can the two fragments much better than the complete one Molecule penetrate into the tissue, resulting in an improved and faster targetin results.

Eine alternative Möglichkeit der Kopplung der Tumor-AK an die FMP unter Verwendung des intakten Moleküls ergibt sich überraschenderweise durch die Kopplung über die Zuckerliganden des Fc-Fragmentes. Dafür werden im ersten Schritt durch Oxidation mit Perjodat in saurer Lösung Aldehydfunktionen in die Zuckerliganden eingeführt. An diese Gruppen können im zweiten Schritt FMP, die eine Hydrazidgruppe tragen, kovalent gebunden werden. Die Fc-Region des AK ist dadurch automatisch blockiert und kann nicht mehr von den Rezeptoren der Makrophagen erkannt werden. Die Oxidation der Hydroxylgruppen der Oligosaccharid-Substituenten geschieht durch einfache Inkubation des AK in eine 1 bis 15 mM, vorzugsweise 4 bis 10 mM Na-Perjodat enthaltende Na-Acetat-Pufferlösung, pH 5-6, über einen Zeitraum von 30 bis 60 Min. bei 4°C. Die Hydrazidfunktionen werden beispielsweise durch Reaktion von Adipinsäuredihydrazid mit den Epoxygruppen der z. B. mit Glycidylmethacrylat beschichteten FMP durch einfaches Inkubieren bei Raumtemperatur eingeführt.An alternative way of coupling the tumor AK to the FMP surprisingly results using the intact molecule by coupling via the sugar ligands of the Fc fragment. For this, the first step is through oxidation with periodate in acidic solution aldehyde functions in the Sugar ligands introduced. To these groups in the second Step FMP, which carry a hydrazide group, covalently bound will. The Fc region of the AK is therefore automatic blocked and can no longer by the receptors of the macrophages be recognized. The oxidation of the hydroxyl groups Oligosaccharide substituents are done by simple incubation of the AK into a 1 to 15 mM, preferably 4 to 10 mM Na acetate buffer solution containing Na periodate, pH 5-6 a period of 30 to 60 minutes at 4 ° C. The hydrazide functions are, for example, by reaction of adipic acid dihydrazide with the epoxy groups of the z. B. with glycidyl methacrylate coated FMP by simply incubating Room temperature introduced.

Eine interessante Variante für das Zelltargeting und die Tumortherapie eröffnet sich durch die Verwendung heterobispezifischer AK. Diese seit geraumer Zeit verwendeten künstlichen Hybridantikörper sind aus zwei verschiedenen Immunglobulinen aufgebaut und können simultan gegen die Epitope zweier unterschiedlicher Antigene gerichtet sein. Die Herstellung dieser Spezies ist in den letzten Jahren beschrieben worden (Nature, 314, 628, 1985; Clin. Exp. Immunol., 79, 315). Mit Hilfe dieser Hybridantikörper lassen sich die FMP zusätzlich mit einer Reihe anderer Therapieverfahren kombinieren. Durch Kopplung der bifunktionellen AK mit Spezifitäten sowohl gegen Tumorzellen als auch z. B. gegen Radionuklide, Toxine, cytotoxische Zellen oder CD3-, CD16- Effektor-Zellen, Streptavidin, Avidin, Biotin kann die Effizienz der FMP durch die dadurch zusätzlich vermittelte Zellzerstörung überraschenderweise deutlich gesteigert werden. Für die Bindung der heterobifunktionellen AK an die polymerbeschichteten FMP kommen grundsätzlich die gleichen Kopplungsverfahren wie für die herkömmlichen AK oder AK- Fragmente in Frage (nähere Ausführungen s. unten). Vorzugsweise werden pro FMP 2 bis 5 bifunktionelle AK gekoppelt.An interesting variant for cell targeting and Tumor therapy opens up through the use of heterobispecific AK. These have been used for quite some time Artificial hybrid antibodies are made of two different ones Immunoglobulins built up and can simultaneously against the  Epitopes of two different antigens can be directed. The Production of this species has been described in recent years (Nature, 314, 628, 1985; Clin. Exp. Immunol., 79, 315). With the help of these hybrid antibodies the FMP also deals with a number of other therapy procedures combine. By coupling the bifunctional AK with specificities against both tumor cells and e.g. B. against Radionuclides, toxins, cytotoxic cells or CD3-, CD16- Effector cells, streptavidin, avidin, biotin can be the Efficiency of the FMP through the additionally conveyed Surprisingly, cell destruction increased significantly will. For the binding of the heterobifunctional AK to the polymer-coated FMP basically come the same Coupling procedures as for the conventional AK or AK- Fragments in question (for more details see below). Preferably 2 to 5 bifunctional AKs are coupled per FMP.

In den letzten Jahren hat sich mehr und mehr herauskristallisiert, daß maligne Transformationen mit Strukturveränderungen der Glykoproteine und Lectine auf der Zellmembran einhergehen. Es wird sogar diskutiert, daß die Interaktionen von Glykokonjugaten mit den veränderten Lectinrezeptoren eine wesentliche Rolle bei der biologischen Information, der Zellwachstumsregulation und Differenzierung (z. B. der Metastasenbildung) spielen. Diese Erkenntnis eröffnet neue Ansätze auch für das Tumorzell-Targeting. Durch Einsatz von Proteinen wie z. B. Human-Serum-Albumin, die nach bekannten Verfahren mit einem Zuckerliganden wie z. B. Lactose, Asialofetuin, Melibiose, Mannan, Fucose, Mannose, Glucose, Rhamnose, Sialinsäure, Mannose-6-Phosphat, Xylose, N-Acetyl- D-Glucosamin oder Galactose gekoppelt werden, können Tumorzellen gezielt markiert werden. Diese Technik wurde in der Vergangenheit zur Differenzierung von Tumorzellen, u. a. der Lunge, des Colons, der Murin-Lymphome oder der Testikel, herangezogen. Mit Hilfe dieser sogenannten Neoglykoprotein- Technik läßt sich überraschenderweise ein ähnliches Zelltargetin realisieren wie mit den Tumor-AK.In recent years, more and more has emerged that malignant transformations with structural changes of glycoproteins and lectins on the Cell membrane go hand in hand. It is even discussed that the Interactions of glycoconjugates with the modified lectin receptors an essential role in biological information, cell growth regulation and differentiation (e.g. of metastasis formation). This realization opens up new approaches also for tumor cell targeting. Through commitment of proteins such as B. Human serum albumin, which according to known Process with a sugar ligand such. B. lactose, Asialofetuin, melibiosis, mannan, fucose, mannose, glucose, Rhamnose, sialic acid, mannose-6-phosphate, xylose, N-acetyl- D-glucosamine or galactose can be coupled to tumor cells be specifically marked. This technique was used in the Past to differentiate tumor cells, u. a. the Lungs, colon, murine lymphomas or testicles, used. With the help of these so-called neoglycoprotein Technology surprisingly allows a similar cell target to be found realize like with the tumor AK.

Die für die jeweiligen Tumore spezifischen Liganden werden zunächst in vitro mit Hilfe der Zell-Affinitäts-Chromatographie ermittelt. Zu diesem Zweck werden Zuckerliganden zunächst an eine Polymermatrix, so wie sie heute üblicherweise in der Säulenchromatographie verwendet wird, gekoppelt. Anschließend wird die betreffende Tumorzellsuspension mit dem Affinitätsharz inkubiert. Besteht nun eine hohe Affinität zwischen dem Liganden und der zuckerbindenden Struktur, also dem Lectin der Tumorzelle, so kommt es zu einer festen Bindung zwischen Festphase und Tumorzelle. Normale Zellen werden dabei nicht gebunden und können eluiert werden. Die ermittelten Liganden können direkt für das Tumorzelltargeting der FMP eingesetzt werden, indem sie entweder, wie oben beschrieben, über ein inerters Protein (z. B. Human Serum Albumin) oder über ein Spacermolekül, wie es in der herkömmlichen Affinitäts-Chromatographie üblich ist, an das polymergecoatete FMP gekoppelt werden.The ligands specific for the respective tumors are initially in vitro using cell affinity chromatography  determined. For this purpose, sugar ligands first to a polymer matrix, as is common today is used in column chromatography. Then the tumor cell suspension in question with the Affinity resin incubated. There is now a high affinity between the ligand and the sugar-binding structure, ie the lectin of the tumor cell, so there is a firm bond between solid phase and tumor cell. Become normal cells are not bound and can be eluted. The determined Ligands can be used directly for tumor cell targeting FMP can be used either as described above, via an inert protein (e.g. human serum albumin) or via a spacer molecule, as in the conventional Affinity chromatography is common on the polymer-coated FMP be coupled.

Neben AK und Neoglykoproteinen wird durch die Verwendung des Blutdruckmittels Angiotensin II eine zusätzliche Möglichkeit zum Tumortargeting eröffnet. In-vivo-Studien (Goldberg et al., Brit. J. Cancer, 64, 114, 1991) haben ergeben, daß bei colorectalen Tumoren Metastasen durch Applikation von Angiotensin II injizierte Mikropartikel sehr viel besser vom Tumor aufgenommen werden als ohne Angiotensin-Gabe. Dieser Sachverhalt kann überraschenderweise dazu genutzt werden, ein verbessertes Zelltargeting der FMP dadurch zu erreichen, daß das Octapeptid Angiotensin II direkt an die FMP kovalent gekoppelt wird. Auch hierbei kommen die üblichen Immobilisierungs- Methoden, wie noch näher zu erläutern sein wird, zur Anwendung.In addition to AK and neoglycoproteins, the use of Blood pressure agent angiotensin II an additional option opened for tumor targeting. In vivo studies (Goldberg et al., Brit. J. Cancer, 64, 114, 1991) have shown that colorectals Tumors metastases due to angiotensin application II injected microparticles absorbed much better by the tumor are considered to be without angiotensin. This fact can surprisingly be used to create an improved To achieve cell targeting of the FMP in that the Octapeptide angiotensin II directly covalently coupled to the FMP becomes. Here, too, the usual immobilization Methods, as will be explained in more detail, are used.

Eine deutliche Verbesserung des Zelltargetings für die FMP ergibt sich überraschenderweise durch die Verwendung der Biotin/Streptavidin- bzw. Avidin-Reaktion. Seit geraumer Zeit wird die hohe Bindungsaffinität zwischen Biotin und dem Protein Streptavidin (oder Avidin) in der Molekularbiologie zur Auftrennung von Nukleinsäuren und Proteinen genutzt. Diese System läßt sich nun in hervorragender Weise für das Zelltargeting nutzen. Bei Tumoren, insbesondere dem Mamacarcinom, wurde eine verstärkte Bildung der Rezeptoren für den Epidermal Growth Factor (EGF) nachgewiesen. Dieser Sachverhalt kann wie folgt für das Tumorzelltargeting genutzt werden: Die erste Möglichkeit besteht darin, Biotin nach den bekannten Methoden (Guigni et al., J. Cell Biology, 104, 1291, 1987) über das N-biotinyl-N-Hydroxysuccinimid an den EGF zu koppeln, wobei vorzugsweise ein Biotin-Molekül pro EGF immobilisiert wird. Nach Injektion des biotinylierten EGF wird dieser vom EGF-Rezeptor der Tumorzelle fest gebunden. Im nächsten Schritt erfolgt die Bindung der applizierten Streptavidin gekoppelten FMP an das Biotin-EGF-EGF-Rezeptor-Konjugat. Eine weitere Möglichkeit, das Streptavidin-Biotin- Prinzip zu nutzen, ergibt sich anhand der bekannten Tumor-AK. Hierbei wird zunächst ein nach bekannten Verfahren (z. B. Schechter et al., Int. J. Cancer, 48, 167, 1991) biotinylierter Tumor-AK appliziert. Nachdem sich der Biotin-AK am Ort des Tumors angereichert hat, werden die FMP, an die zuvor Streptavidin kovalent gebunden wurde, injiziert. Es resultiert schließlich eine feste Bindung zwischen biotinyliertem AK und Streptavidin-FMP.A significant improvement in cell targeting for FMP surprisingly results from the use of the Biotin / streptavidin or avidin reaction. For quite some time is the high binding affinity between biotin and the protein Streptavidin (or avidin) in molecular biology Separation of nucleic acids and proteins used. These System can now be excellently used for cell targeting use. For tumors, especially mama carcinoma, was an increased formation of receptors for the epidermal Growth factor (EGF) detected. This fact can be used for tumor cell targeting as follows: The  first possibility is to use biotin according to the known Methods (Guigni et al., J. Cell Biology, 104, 1291, 1987) to couple to the EGF via the N-biotinyl-N-hydroxysuccinimide, preferably one immobilized biotin molecule per EGF becomes. After injection of the biotinylated EGF this is firmly bound by the EGF receptor of the tumor cell. in the The next step is to bind the applied streptavidin coupled FMP to the biotin-EGF-EGF receptor conjugate. Another way to use streptavidin-biotin Using the principle results from the well-known tumor AK. First of all, a known method (e.g. Schechter et al., Int. J. Cancer, 48, 167, 1991) biotinylated Tumor AK applied. After the biotin AK on The location of the tumor is enriched, the FMP to which previously Streptavidin was covalently bound, injected. It results finally a tight bond between biotinylated AK and streptavidin-FMP.

Die Kopplung der beschriebenen bioaktiven, das Tumorzelltargeting vermittelnden Substanzen wie Tumor-AK, Zuckerliganden, Oligosaccharide, Glykoproteine, Lectine, Streptavidin, Avidin oder Biotin an die polymerbeschichteten FMP geschieht nach den bekannten Verfahren zur Immobilisierung von Biomolekülen an polymere Träger (Methods in Enzymology, Mosbach Hrsg., Vol. 135, 3-170, 1987). Als Kopplungsmedien kommen grundsätzlich solche Agenzien in Frage, die sich bei der Präparation von Affinitätsharzen bewährt haben. Hierzu zählen z. B. Bromcyan, Hexamethylendiisocyanat, Tosylchlorid, Tresylchlorid, 2-Fluor-1-methyl-pyridinium-toluol-4-sulfonat, Epichlorhydrin, N-Hydroxysuccinimid, Chlorcarbonat, Isonitrile, Hydrazide, Glutaraldehyd, 1,1′-Carbonyldiimidazol oder 1,4-Butandiol-diglycidyläther.The coupling of the bioactive described, the tumor cell targeting mediating substances such as tumor AK, sugar ligands, Oligosaccharides, glycoproteins, lectins, streptavidin, Avidin or biotin to the polymer coated FMP happens according to the known methods of immobilization from biomolecules to polymeric supports (Methods in Enzymology, Mosbach ed., Vol. 135, 3-170, 1987). As coupling media in principle, such agents come into question that have proven the preparation of affinity resins. For this count z. B. cyanogen bromide, hexamethylene diisocyanate, tosyl chloride, Tresyl chloride, 2-fluoro-1-methyl-pyridinium-toluene-4-sulfonate, Epichlorohydrin, N-hydroxysuccinimide, chlorocarbonate, isonitrile, Hydrazides, glutaraldehyde, 1,1'-carbonyldiimidazole or 1,4-butanediol diglycidyl ether.

Für die Applikation der FMP allein hat es sich als vorteilhaft erwiesen, aus sterischen Gründen pro FMP ein bis zwei Tumor-AK, AK-Fragmente oder andere, Targetin vermittelnde Proteine zu koppeln. Für die niedermolekularen Zuckerliganden bestehen dagegen keinerlei Beschränkungen. It has proven to be advantageous for the application of the FMP alone proven one or two per FMP for steric reasons Tumor AK, AK fragments or other targetin mediating To couple proteins. For the low molecular weight sugar ligands there are no restrictions.  

Da aufgrund des erhöhten Stoffwechsels Tumorzellen stärker zur Endocytose neigen als normale Zellen, ist allein aufgrund dieses Mechanismusses die Möglichkeit gegeben, alternativ zu den bisher beschriebenen Verfahren die FMP auch ohne irgendein Polymercoating und ohne Kopplung eines Tumor- Carriers selektiv an die Tumorzelle heranzubringen. Wie allgemein bekannt, werden körperfremde Substanzen, nachdem sie in den Körper gelangt sind, sehr rasch - innerhalb von Minuten - vom RES phagozytiert. Dieser Prozeß kann überraschenderweise für die erfindungsgemäßen Mittel und Verfahren dadurch genutzt werden, daß man die unbeschichteten FMP intravenös injiziert. Der dadurch ausgelöste Phagozytose- Mechanismus bedingt, daß die FMP vorwiegend in der Leber, der Niere und der Milz abgelagert werden. Im Falle eines Tumors dieser Organe werden sich die FMP nach der Injektion dort anreichern und infolge der erhöhten Endozytoserate vorwiegend in den Tumorzellen dieser Organe einlagern.Because tumor cells are stronger due to the increased metabolism tend to endocytosis than normal cells, is due solely to this mechanism has given the opportunity to alternatively the methods described so far, the FMP without any polymer coating and without coupling a tumor To selectively bring carriers to the tumor cell. How Generally known, foreign substances after they got into the body very quickly - within Minutes - phagocytized by the RES. This process can surprisingly for the agents and methods according to the invention be used in that the uncoated FMP injected intravenously. The phagocytosis triggered by this Mechanism causes that the FMP predominantly in the liver, the Kidney and spleen are deposited. In the case of a tumor of these organs, the FMP will accumulate there after the injection and predominantly due to the increased endocytosis rate store in the tumor cells of these organs.

Neben der Verwendung heterobispezifischer, partiell gegen Tumoreffektoren gerichtete AK zur Verstärkung der Anti- Tumorwirkung der FMP, trägt ein zusätzliches Verfahren bei, das es ermöglicht, die mittels FMP vermittelte Hyperthermie mit dem therapeutischen Prinzip der Immuntoxine so zu kombinieren, daß überraschenderweise ein integrales Therapieverfahren realisiert wird. Beide Methoden, die in der Praxis durch Kombination zweier separater Therapien heute schon angewendet werden, können mit Hilfe der FMP-Technik simultan in einem Therapieschritt durchgeführt werden. Dazu werden die heute allgemein in der Tumortherapie verwendeten Toxine bzw. Cytostatika, wie z. B. Ricin, Diphtherie-Toxin, Methotrexat, Daunomycin, Cis-Platin, Doxorubicin, Adriamycin, Abrin etc., während der Phasenseparations-Suspensionspolymerisation zusammen mit den FMP zugegeben. Dabei werden überraschenderweise nicht nur die FMP, sondern auch die Toxine in die Polymermatrix eingelagert. Als Polymermatrix werden hierfür vorzugsweise PVA, Gelatine oder Stärke verwendet. Auch mittels der oben beschriebenen erfindungsgemäßen Liposomen- Technik kann eine kombinierte Einkapselung bewerkstelligt werden. Zu diesem Zweck wird eine Toxine bzw. Cytostatika, FMP, Phospholipide und Tumor-AK enthaltende wäßrige Suspension in einem Ultraschallbad so homogenisiert, daß Teilchengrößen zwischen 200 und 500 nm entstehen. Die Konzentration der zugefügten Phospholipide, Toxine und FMP wird so eingestellt, daß pro Liposom ein FMP und 5 bis 10 niedermolekulare Toxin-Moleküle sowie maximal 5 Protein-Toxin-Moleküle (z. B. Ricin, Abrin, Diphtherie-Toxin) eingekapselt werden. Nach Anreicherung der FMP-Toxin-Teilchen im Tumor kann sich durch Anlegen eines äußeren hochfrequenten Wechselfeldes sowohl das hyperthermische als auch das cytotoxische Prinzip gleichzeitig entfalten. Durch Variation der Porosität der Polymermatrix (z. B. PVA), die sowohl mit Hilfe der zur Einkapselung verwendeten Polymerkonzentration als auch durch die Konzentration des zugesetzten Vernetzers genau eingestellt werden kann, läßt sich die Diffusion der Toxine in die Tumorzelle gezielt im Sinne einer Langzeit- oder Kurzzeittherapie steuern. Hohe Polymerkonzentrationen sowie niedrige Molekulargewichte in Verbindung mit hoher Vernetzerkonzentration führen in der Regel zu geringer Porosität und damit niedriger Diffusionsrate. Aus einem hohen Molekulargewicht (<150 000) und einer niedrigen Vernetzerkonzentration resultieren dagegen erhöhte Diffusionsraten. Kombinationen der verschiedenen Versuchsparameter sind auch möglich und richten sich nach den jeweiligen Anforderungen der Praxis.In addition to using heterobispecific, partially against Tumor effectors directed AK to strengthen the anti Tumor effect of FMP, contributes an additional procedure, which enables hyperthermia mediated by FMP to combine with the therapeutic principle of immunotoxins so that surprisingly an integral therapy process is realized. Both methods in practice by combining two separate therapies today can be applied simultaneously with the help of FMP technology be carried out in one therapy step. To do this, the toxins used today generally in tumor therapy or Cytostatics such as B. ricin, diphtheria toxin, methotrexate, Daunomycin, cis-platinum, doxorubicin, adriamycin, abrin etc., during the phase separation suspension polymerization together added with the FMP. Surprisingly not only the FMP but also the toxins in the Polymer matrix embedded. As a polymer matrix for this preferably PVA, gelatin or starch used. Also by means of the liposome according to the invention described above Technology can accomplish a combined encapsulation will. For this purpose, a toxin or cytostatics,  Aqueous suspension containing FMP, phospholipids and tumor AK homogenized in an ultrasonic bath so that particle sizes between 200 and 500 nm arise. The concentration the added phospholipids, toxins and FMP will be so set that one FMP and 5 to 10 low molecular weight per liposome Toxin molecules and a maximum of 5 protein toxin molecules (e.g. ricin, abrin, diphtheria toxin). After accumulation of the FMP toxin particles in the tumor can become by applying an external high-frequency alternating field both the hyperthermic as well as the cytotoxic principle unfold at the same time. By varying the porosity of the Polymer matrix (e.g. PVA), both with the help of encapsulation used polymer concentration as well the concentration of the added crosslinker is precisely adjusted can be, the diffusion of the toxins into the Targeted tumor cells in the sense of long-term or short-term therapy Taxes. High polymer concentrations as well as low ones Molecular weights in connection with high crosslinker concentration usually lead to low porosity and thus lower diffusion rate. From a high molecular weight (<150,000) and a low crosslinker concentration however, increased diffusion rates result. Combinations of the different test parameters are also possible and depend on the respective requirements practice.

Die Hauptproblematik bei den gegenwärtigen Immuntoxinen besteht darin, daß infolge der labilen Verknüpfung zwischen Toxin und Tumor-AK das Konjugat einem enzymatischen Abbau sowohl außerhalb als auch innerhalb der Zelle unterworfen ist. Dies hat zur Folge, daß das Toxin-Targeting erheblich beeinträchtigt und letztlich die für den Zelltod erforderliche letale Toxin-Dosis am Wirkort nicht mehr realisiert ist. Dieser Nachteil wird überraschenderweise durch den Einsatz der FMP-Toxin-Kolloide dadurch umgangen, daß das isolierte Toxin sofort und nicht erst nach der notwendigen Bindungsspaltung des AK-Toxin-Konjugates wirksam werden kann. Hierdurch läßt sich die Konzentration an Toxin gegenüber früheren Verfahren für die therapie deutlich steigern. In der Regel genügen 5 bis 10 Toxin-Moleküle pro Zelle zur Abtötung.The main problem with current immunotoxins is in that, due to the fragile link between Toxin and tumor-AK conjugate an enzymatic breakdown subject both outside and inside the cell is. As a result, toxin targeting is significant impaired and ultimately the necessary for cell death lethal toxin dose at the site of action no longer realized is. This disadvantage is surprisingly caused by the Avoided the use of the FMP toxin colloids in that the isolated toxin immediately and not after the necessary Binding cleavage of the AK toxin conjugate can be effective. This allows the concentration of toxin to be compared  significantly increase previous therapy procedures. In the As a rule, 5 to 10 toxin molecules per cell are sufficient to kill them.

Die Applikation der FMP oder der FMP-Toxin-Kombinationskolloide kann je nach den medizinischen Erfordernissen und Gegebenheiten mittels subkutaner, intravenöser, intraarterieller, intraperitonealer, intralymphatischer oder direkter Injektion in den Tumorherd erfolgen. Die Menge der injizierten Teilchen richtet sich erfahrungsgemäß nach dem jeweiligen Tumorvolumen.The application of the FMP or the FMP-toxin combination colloids can vary depending on medical needs and Conditions using subcutaneous, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intralymphatic or more direct Injection into the tumor focus. The amount injected Experience has shown that particles depend on each Tumor volume.

Die Geometrie und Leistung des Induktionsgerätes richtet sich nach den Erfordernissen der zu behandelnden Körperbereiche. Im Falle tiefliegender Tumore wird vorzugsweise eine Induktionsspule von 40 bis 70 cm Durchmesser verwendet, in die der Körper des Patienten hineingeschoben werden kann. Die Spule ist an einen herkömmlichen Hochfrequenzgenerator angeschlossen, dessen Leistung im Bereich von 0,1 bis 1 kW liegt. Die einstellbare Frequenz liegt im Bereich von 0,5 bis 10 MHz, wobei für die Praxis vorzugsweise eine solche von 0,5 bis 2 MHz verwendet wird. Bei diesen Frequenzen wird die gesamte Energie auf die FMP übertragen. Gesundes Gewebe wird im Gegensatz zu den heute gebräuchlichen Techniken innerhalb der Hyperthermie wie Mikrowelle, Ultraschall oder Induktionsheizung, nicht erfaßt. Die Stärke des angewandten Magnetfeldes liegt in der Regel zwischen 400 und 800 A/m.The geometry and performance of the induction device depends according to the needs of the areas of the body to be treated. In the case of deep-seated tumors, an induction coil is preferred used from 40 to 70 cm in diameter the patient's body can be pushed in. The Coil is connected to a conventional high frequency generator, whose power is in the range of 0.1 to 1 kW. The adjustable frequency is in the range from 0.5 to 10 MHz, in practice preferably 0.5 up to 2 MHz is used. At these frequencies the transfer all energy to the FMP. Healthy tissue will in contrast to the techniques currently used within hyperthermia such as microwave, ultrasound or induction heating, not recorded. The strength of the magnetic field applied is usually between 400 and 800 A / m.

Die erforderlichen Behandlungszeiten richten sich nach den jeweiligen therapeutischen Erfordernissen und liegen üblicherweise zwischen einigen Minuten bis hin zu mehreren Stunden. Auch eine Intervall-Behandlung über einen längeren Zeitraum hinweg ist möglich, wobei ein genaues "Monitoring" der FMP im Körper angezeigt ist.The required treatment times depend on the respective therapeutic requirements and are usually between a few minutes to several Hours. Interval treatment over a longer period Period is possible, with a precise "monitoring" the FMP is displayed in the body.

Die Erfindung wird im folgenden anhand einiger Beispiele näher beschrieben. The invention is illustrated below using a few examples described in more detail.  

Beispiel 1Example 1

0,1 g einer Ni0,2Zn0,8Fe2O4-Verbindung mit einer Curie- Temperatur von 43°C und einer mittleren Teilchengröße von 50 nm werden mit 7,5 ml einer wäßrigen PVA-Lösung (Mw=150 000), der 100 mg Na-Dodecylsulfat, 0,5 ml 1N HCl und 0,1 ml 25%iges Glutaraldehyd zugegeben werden, in 25 ml Leinsamenöl suspendiert und 5 Min. in einem Ultraschallbad (100 W) beschallt. Danach wird die Suspension für 15 Min. bei Raumtemperatur bei 2000 U/Min. mittels eines herkömmlichen Rührwerks weitergerührt. Anschließend wird die Suspension mehrfach mit jeweils 30 ml n-Hexan extrahiert, bis die wäßrige Phase ölfrei ist. daran schließt sich eine weitere Extraktion mit Diäthyläther an. Durch 15minütiges Zentrifugieren (4000×g) sowie 24stündige Dialyse gegen Wasser wird das Produkt von noch gelöstem Polymer, Vernetzer und Fremdionen befreit. Es folgt eine 12stündige Vakuumtrocknung über Phosphorpentoxid. Das getrocknete Produkt wird sodann mit 3 ml absolutem Dimethylsulfoxid (DMSO), in dem 0,5 ml Hexamethylendiisocyanat und 20 µl Zinn-octoat gelöst sind, versetzt und unter Schütteln 30 Min. bei 40°C umgesetzt. Mittels eines Magneten wird das umgesetzte Produkt aus der Reaktionslösung entfernt und durch mehrfache abwechselnde Suspension in 20 ml Dimethylformamid und 20 ml Aceton und anschließendes Dekantieren unter jeweiliger Anwendung des Magneten gereinigt. Danach wird das Produkt im Vakuum (1300 Pa) über KOH 5 Stunden getrocknet.0.1 g of a Ni 0.2 Zn 0.8 Fe 2 O 4 compound with a Curie temperature of 43 ° C. and an average particle size of 50 nm are mixed with 7.5 ml of an aqueous PVA solution (Mw = 150 000), 100 mg of sodium dodecyl sulfate, 0.5 ml of 1N HCl and 0.1 ml of 25% glutaraldehyde are added, suspended in 25 ml of linseed oil and sonicated in an ultrasonic bath (100 W) for 5 minutes. The suspension is then left at 2000 rpm for 15 minutes at room temperature. stirred further using a conventional stirrer. The suspension is then extracted several times with in each case 30 ml of n-hexane until the aqueous phase is oil-free. this is followed by a further extraction with diethyl ether. By centrifuging for 15 minutes (4000 × g) and dialysis against water for 24 hours, the product is freed of polymer, crosslinking agent and foreign ions that are still dissolved. This is followed by vacuum drying over phosphorus pentoxide for 12 hours. The dried product is then mixed with 3 ml of absolute dimethyl sulfoxide (DMSO) in which 0.5 ml of hexamethylene diisocyanate and 20 μl of tin octoate are dissolved and reacted with shaking at 40 ° C. for 30 minutes. The converted product is removed from the reaction solution by means of a magnet and purified by repeated alternating suspensions in 20 ml of dimethylformamide and 20 ml of acetone and subsequent decanting using the magnet in each case. The product is then dried in vacuo (1300 Pa) over KOH for 5 hours.

0,1 mg eines in PBS-Puffer, pH 7,0, gelösten monoklonalen AK, der gegen den EGF-Rezeptor gerichtet ist (Schlechter et al., Int. J. Cancer, 48, 167, 1991), wird durch 6stündige Inkubation bei Raumtemperatur an die aktivierten FMP kovalent gekoppelt. das immobilisierte Produkt wird 20 Min. bei 4000×g zentrifugiert und der Überstand anschließend lyophilisiert. Das gewonnene Produkt wird in 3 ml physiologischer NaCl- Lösung suspendiert und sterilfiltriert. Die Suspension kann so für eine direkte Applikation verwendet und nach Anreicherung im betreffenden Tumor durch Anlegen eines 2-MHz- Wechselfeldes auf die festgelegte Curie-Temperatur aufgeheizt werden. 0.1 mg of a monoclonal AK dissolved in PBS buffer, pH 7.0, which is directed against the EGF receptor (Schlechter et al., Int. J. Cancer, 48, 167, 1991), is incubated for 6 hours at room temperature to the activated FMP covalently coupled. the immobilized product is 20 min. at 4000 × g centrifuged and the supernatant then lyophilized. The product obtained is dissolved in 3 ml of physiological NaCl Suspended solution and sterile filtered. The suspension can so used for direct application and after enrichment in the tumor in question by applying a 2 MHz Alternating field heated to the specified Curie temperature will.  

Beispiel 2Example 2

Isocyanat-aktivierte FMP-Tumormittel gemäß Beispiel 1 werden mit 50 mg Mannose, die in 3 ml absolutem DMSO gelöst sind, versetzt und 6 Stunden bei 30°C umgesetzt. Das Produkt wird sodann gegen Wasser 24 Stunden dialysiert und anschließend lyophilisiert. Die weitere Präparation erfolgt gemäß Beispiel 1.Isocyanate-activated FMP tumor agents according to Example 1 with 50 mg mannose dissolved in 3 ml absolute DMSO, added and reacted at 30 ° C for 6 hours. The product will then dialyzed against water for 24 hours and then lyophilized. The further preparation is carried out according to example 1.

Beispiel 3Example 3

PVA-gecoatetes Ferrit-Pulver gemäß Beispiel 1 wird nach der Trocknung im Vakuum über KOH mit 3 ml absolutem DMSO, in dem 3 mM 4-Dimethylaminopyridin und 2,5 mM 2-Fluor-1-methylpyridinium- toluol-4-sulfonat (FPTS) gelöst sind, versetzt und unter Schütteln bei Raumtemperatur 45 Min. aktiviert. Das umgesetzte Produkt wird anschließend wie oben beschrieben abwechselnd mit Aceton und Dimethylformamid unter Verwendung eines Magneten gereinigt und anschließend im Vakuum über KOH getrocknet. Das so gewonnene Produkt kann direkt mit AK oder anderen Tumor-Targeting vermittelnden Substanzen durch einfache Inkubation bei Raumtemperatur gekoppelt werden.PVA-coated ferrite powder according to Example 1 is according to the Drying in vacuo over KOH with 3 ml of absolute DMSO, in which 3mM 4-dimethylaminopyridine and 2.5mM 2-fluoro-1-methylpyridinium toluene-4-sulfonate (FPTS) are dissolved, added and activated with shaking at room temperature for 45 min. The converted product is then as described above alternating with acetone and dimethylformamide using of a magnet and then in vacuum over KOH dried. The product obtained in this way can be used directly with AK or other tumor targeting mediating substances through simple Incubation can be coupled at room temperature.

Beispiel 4Example 4

1,5 nM zuckerfreies Human-Serum-Albumin werden mit 50 ml 0,1M Phosphat-Puffer, pH 5,0, in dem 0,01M N-cyclohexyl-N′-[β- (N-methylmorpholin)-äthyl]carbodiimid-p-toluolsulfonat gelöst sind, versetzt und für 2 Stunden bei Raumtemperatur umgesetzt. Das Produkt wird danach 30 Min. mit 4000×g zentrifugiert, anschließend 24 Stunden gegen PBS, pH 7,0, dialysiert und schließlich lyophilisiert. Das Trockenprodukt wird in 1,5 ml 0,1M K-Phosphat-Puffer, pH 6,4, aufgenommen und mit 1,5 ml desselben Puffers, in dem 95 nM N-Acetyl-D- Galactosamin gelöst sind, versetzt. Die Kopplung geschieht unter Schütteln bei 4°C über einen Zeitraum von 18 Stunden. Danach erfolgt Zentrifugation, Dialyse und Lyophilisierung. Das gewonnene Festprodukt wird in 2 ml PBS-Puffer, pH 7,2, gelöst und anschließend mit den PVA-gecoateten und FPTS- aktivierten FMP gemäß Beispiel 3 für 15 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Es folgen Aufarbeitung und Präparation gemäß Beispiel 1. Die Substanz ist somit gebrauchsfertig.1.5 nM sugar-free human serum albumin are mixed with 50 ml 0.1M Phosphate buffer, pH 5.0, in which 0.01M N-cyclohexyl-N ′ - [β- (N-methylmorpholine) ethyl] carbodiimide p-toluenesulfonate dissolved are added and reacted for 2 hours at room temperature. The product is then centrifuged at 4000 × g for 30 min. then dialyzed against PBS, pH 7.0 for 24 hours and finally lyophilized. The dry product will in 1.5 ml 0.1M K-phosphate buffer, pH 6.4, and with 1.5 ml of the same buffer in which 95 nM N-acetyl-D- Galactosamine are dissolved, added. The coupling happens with shaking at 4 ° C for 18 hours. This is followed by centrifugation, dialysis and lyophilization.  The solid product obtained is dissolved in 2 ml of PBS buffer, pH 7.2. solved and then with the PVA-coated and FPTS- activated FMP according to Example 3 for 15 hours at room temperature incubated. Processing and preparation follow according to example 1. The substance is thus ready for use.

Beispiel 5Example 5

5 ml einer 10%igen wäßrigen Stärkelösung werden bei 95°C mit 0,1 g Ferrit-Pulver mit einer Curie-Temperatur von 45°C und einer mittleren Teilchengröße von 80 nm unter Rühren kurz vermischt und anschließend in der Hitze in 45 ml auf 80°C vorgeheiztes Olivenöl, in dem 1 ml Pluronic® PE 3100 gelöst ist, eingerührt und mittels eines Vortex-Rührers homogenisiert. Danach wird die Suspension in einem Eisbad abgekühlt. Es fallen feste perlförmige Partikel mit einer mittleren Teilchengröße von 100 nm an, die durch abwechselndes Suspendieren in 20 ml Eiswasser und 20 ml Aceton und anschließendes Dekantieren unter Zuhilfenahme eines Magneten gereinigt werden. Diese Prozedur wird 10mal wiederholt. Das getrocknete Produkt wird sodann mit 50 mg BrCN, gelöst in 2 ml 0,1M Carbonat-Bicarbonat-Puffer, pH 11, 5 Stunden bei Raumtemperatur umgesetzt. Das aktivierte Produkt wird mehrmals mit Wasser versetzt und in üblicher Weise unter Zuhilfenahme eines Magneten gewaschen. Trocknung und anschließendes Lyophilisieren erfolgt wie oben angegeben. Durch 12stündige Inkubation einer 3 nM Anti-CEA-IgG enthaltenden 0,1M NaHCO₃- Lösung, pH 8,5, bei 4°C werden Anti-Tumormittel erhalten, die nach den üblichen Präparationsschritten gemäß Beispiel 1 für die Therapie solcher Tumore geeignet sind, die hohe CEA-Werte aufweisen.5 ml of a 10% aqueous starch solution are at 95 ° C with 0.1 g ferrite powder with a Curie temperature of 45 ° C and an average particle size of 80 nm briefly with stirring mixed and then in the heat in 45 ml at 80 ° C preheated olive oil, dissolved in 1 ml Pluronic® PE 3100 is stirred in and homogenized using a vortex stirrer. The suspension is then cooled in an ice bath. Solid pearl-shaped particles with a medium size fall Particle size of 100 nm, which is characterized by alternating Suspend in 20 ml ice water and 20 ml acetone and then Decant using a magnet getting cleaned. This procedure is repeated 10 times. The the dried product is then dissolved in 50 mg of BrCN in 2 ml 0.1M carbonate bicarbonate buffer, pH 11, at 5 hours Room temperature implemented. The activated product is repeated several times mixed with water and in the usual way with the help of a magnet. Drying and subsequent lyophilization is done as indicated above. By 12 hours Incubation of 0.1M NaHCO₃- containing 3 nM anti-CEA-IgG Solution, pH 8.5, at 4 ° C anti-tumor agents are obtained after the usual preparation steps according to Example 1 for the therapy of such tumors are suitable, the high CEA values exhibit.

Beispiel 6Example 6

Mit Stärke gecoatetes Ferrit-Pulver gemäß Beispiel 5 wird im Vakuum über KOH mehrere Stunden getrocknet. 20 mg Tosylchlorid und 0,4 ml Äthanolamin, gelöst in 1 ml absolutem Aceton, werden zugefügt und die Mischung 20 Min. bei 25°C geschüttelt. Danach wird mehrfach mit Aceton in üblicher Weise gewaschen. Das Produkt wird sodann mit 30 ml 0,1M Carbonat-Bicarbonat-Puffer, pH 9,0, gewaschen und mit 1 ml dieses Puffers, in dem 0,5M NaCl und 0,1 mg Angiotensin II gelöst sind, versetzt. Die Kopplung erfolgt innerhalb von 12 Stunden bei 4°C. Nach Dialyse und weiterer Präparation analog Beispiel 1 ist das Produkt verwendungsfertig.Ferrite powder coated with starch according to Example 5 is used in Vacuum dried over KOH for several hours. 20 mg tosyl chloride and 0.4 ml ethanolamine, dissolved in 1 ml absolute  Acetone are added and the mixture at 25 ° C for 20 min shaken. Then it is repeated several times with acetone in the usual way Way washed. The product is then mixed with 30 ml 0.1M Carbonate-bicarbonate buffer, pH 9.0, washed and with 1 ml this buffer, in which 0.5M NaCl and 0.1 mg angiotensin II are resolved. The coupling takes place within 12 Hours at 4 ° C. Analogously after dialysis and further preparation Example 1 is the product ready for use.

Beispiel 7Example 7

Gecoatete und mit BrCN aktivierte FMP gemäß Beispiel 5 werden mit 3 ml einer 0,1M NaHCO₃/0,5M NaCl-Lösung, pH 8,5, in der 10 µg EGF gelöst sind, inkubiert und über einen Zeitraum von 10 Stunden bei 4°C umgesetzt. Reinigung und Präparation erfolgt analog den obigen Beispielen.Coated and activated with BrCN FMP according to Example 5 are with 3 ml of a 0.1M NaHCO₃ / 0.5M NaCl solution, pH 8.5, in which 10 µg EGF are dissolved, incubated and over a period of time of 10 hours at 4 ° C implemented. Cleaning and Preparation is carried out analogously to the examples above.

Beispiel 8Example 8

0,1 g Ferrit-Pulver mit einem Curiepunkt von 45°C und einem mittleren Teilchendurchmesser von 20 nm werden mit einer PVA- Lösung analog Beispiel 1, die zusätzlich 0,1 mg Ricin enthält, in einem Ultraschallbad 10 Min. homogenisiert. Nach den üblichen Reinigungs- und Aufarbeitungsschritten werden FMP- Toxin-Kolloide mit einer mittleren Teilchengröße von 80 nm gewonnen. Das Produkt wird nach der üblichen Vakuumtrocknung mit FPTS/4-Dimethylaminopyridin gemäß Beispiel 3 aktiviert. Nach den üblichen Reinigungsschritten können in PBS-Puffer, pH 7,0, gelöste Tumor-AK oder Zell-Targeting-Substanzen an das gewonnene Produkt durch Inkubation gemäß obigen Beispielen bei Raumtemperatur gekoppelt werden.0.1 g ferrite powder with a Curie point of 45 ° C and one average particle diameters of 20 nm with a PVA Solution analogous to Example 1, which additionally contains 0.1 mg ricin, homogenized in an ultrasonic bath for 10 minutes. After the usual cleaning and refurbishment steps are FMP Toxin colloids with an average particle size of 80 nm won. The product is after the usual vacuum drying activated with FPTS / 4-dimethylaminopyridine according to Example 3. After the usual cleaning steps, in PBS buffer, pH 7.0, dissolved tumor AK or cell targeting substances the product obtained by incubation according to the above examples be coupled at room temperature.

Beispiel 9Example 9

0,1 g Ferrit-Pulver der Formel CO0,2Zn0,8Fe2O4 mit einem Curiepunkt von 45°C und einem mittleren Teilchendurchmesser von 80 nm werden auf einem 4×4-cm-Glas-Objektträger, der sich 2 cm oberhalb der inneren Elektrode eines herkömmlichen Glimmentladungsgerätes befindet, ausgebreitet. Reinst­ stickstoff wird durch eine Waschflasche, die eine Mischung, bestehend aus 70% (V/V) Glycidyl-methacrylat und 30% (V/V) N- Vinylpyrrolidon, enthält, geleitet. die Waschflasche wird konstant bei einer Temperatur von 45°C gehalten, um den Monomerpartialdruck entsprechend zu erhöhen. Vor dem Versuch wird die Plasmakammer mit der Probe 10 Min. mit dem Reaktionsgas durchspült. Während des mit 300 W Elektrodenleistung gefahrenen Versuches wird der Gasdruck während der 10minütigen Versuchsdauer konstant auf 300 Pa eingeregelt. Dieser Versuchszyklus wird 2mal wiederholt, um eine gleichmäßige Beschichtung der FMP zu erreichen. Nach dem Versuch werden die gecoateten FMP 3 Stunden im Ölpumpenvakuum evakuiert, um restliches Monomer zu entfernen. Danach wird das Material mehrfach abwechselnd mit Aceton und Wasser versetzt und die Lösung nach Anlegen des Magneten dekantiert. Es folgt die Trocknung im Vakuum (1300 Pa) über KOH. Das gewonnene Präparat wird anschließend mit 30 ml einer Lösung, bestehend aus je 50 Volumenteilen 0,1M Borat-NaOH-Puffer, pH 9,5, und frisch destilliertem Dimethylformamid, gewaschen. 2 ml dieser Lösung, in der 1 mg N-Acetyl-Neuraminsäure gelöst sind, werden sodann 20 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Restliche Epoxygruppen werden durch anschließende 20stündige Inkubation mit 0,2M Mercaptoäthanol-Lösung abgesättigt. Nach 24stündiger Dialyse gegen PBS, pH 7,0, sowie den üblichen Aufreinigungs- und Präparationsschritten gemäß Beispiel 1 kann die Substanz für die Therapie eingesetzt werden.0.1 g ferrite powder of the formula CO 0.2 Zn 0.8 Fe 2 O 4 with a Curie point of 45 ° C. and an average particle diameter of 80 nm are placed on a 4 × 4 cm glass slide, which can be 2 cm above the inner electrode of a conventional glow discharge device. Ultrapure nitrogen is passed through a wash bottle containing a mixture consisting of 70% (V / V) glycidyl methacrylate and 30% (V / V) N-vinylpyrrolidone. the wash bottle is kept constant at a temperature of 45 ° C in order to increase the monomer partial pressure accordingly. Before the experiment, the plasma chamber with the sample is flushed with the reaction gas for 10 minutes. During the test run with 300 W electrode power, the gas pressure is constantly adjusted to 300 Pa over the 10-minute test period. This test cycle is repeated twice in order to achieve an even coating of the FMP. After the experiment, the coated FMPs are evacuated for 3 hours in an oil pump vacuum to remove residual monomer. Then the material is alternately mixed with acetone and water several times and the solution is decanted after the magnet has been applied. This is followed by drying in vacuo (1300 Pa) over KOH. The preparation obtained is then washed with 30 ml of a solution consisting of 50 parts by volume 0.1M borate-NaOH buffer, pH 9.5, and freshly distilled dimethylformamide. 2 ml of this solution, in which 1 mg of N-acetyl-neuraminic acid are dissolved, are then incubated for 20 hours at room temperature. Residual epoxy groups are saturated by subsequent incubation for 20 hours with 0.2M mercaptoethanol solution. After 24 hours of dialysis against PBS, pH 7.0, and the usual purification and preparation steps according to Example 1, the substance can be used for the therapy.

Beispiel 10Example 10

Ferrit-Pulver gemäß Beispiel 1 wird dem Plasma-Coating- Verfahren, wie in Beispiel 9 angegeben, unterworfen. Der Stickstoffstrom wird durch eine 50%-(V/V-)Glycidyl-methacrylat- und 50%-Hydroxyäthyl-acrylat-Lösung geleitet. Der Speisedruck beträgt 500 Pa. Ferrite powder according to Example 1 is the plasma coating Procedures as in Example 9 subjected. The Nitrogen flow is through a 50% (v / v) glycidyl methacrylate and 50% hydroxyethyl acrylate solution passed. The Feed pressure is 500 Pa.  

Reinigung und Aufarbeitung erfolgen analog Beispiel 9. 10 mg Glucose, gelöst in 3 ml 0,1M Borat-Puffer, pH 9,5, werden 20 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Es werden Glucose-immobilisierte Tumormittel erhalten, die, nach entsprechender Inkubation in 0,2M Mercaptoäthanol gemäß obigem Beispiel, in 3 ml physiologischer Kochsalzlösung suspendiert werden und nach anschließender Sterilfiltration analog obigen Beispielen verwendungsfertig sind.Cleaning and working up are carried out analogously to Example 9. 10 mg Glucose, dissolved in 3 ml 0.1M borate buffer, pH 9.5, becomes 20 Incubated for hours at room temperature. Glucose-immobilized Tumor agents received, according to the appropriate Incubation in 0.2M mercaptoethanol according to the above example, in 3 ml of physiological saline are suspended and after subsequent sterile filtration analogous to the above examples are ready to use.

Beispiel 11Example 11

Ferrit-Pulver gemäß Beispiel 1 wird mit einem Plasma, das, in Abänderung der Versuchsbedingungen aus Beispiel 9, mit einer Monomerzusammensetzung, bestehend aus 80% Hydroxyäthyl-methacrylat und 20% N-Vinylpyrrolidon, gespeist wird, bei einem Druck von 150 Pa 10 Min. behandelt. Der Versuchszyklus wird 2mal wiederholt. Aufarbeitung und Reinigung erfolgen gemäß obigen Beispielen. Die Hydroxylgruppen enthaltende Matrix wird anschließend mit dem System Hexamethylen­ diisocyanat/DMSO analog Beispiel 1 aktiviert. Nach den üblichen Reinigungs- und Aufarbeitungsschritten wird ein Kolloid gewonnen, an das Zuckerliganden in einem Borat- Puffer, pH 9 bis 10, oder Proteine in einem 0,5-1M Kalium- Phosphat-Puffer, pH 7-8, durch einfaches Inkubieren gekoppelt werden können.Ferrite powder according to Example 1 is mixed with a plasma which, in Modification of the test conditions from example 9, with a Monomer composition consisting of 80% hydroxyethyl methacrylate and 20% N-vinyl pyrrolidone Pressure of 150 Pa treated for 10 min. The trial cycle is repeated twice. Refurbishment and cleaning take place according to the examples above. The hydroxyl groups Matrix is then made using the Hexamethylene system diisocyanate / DMSO activated analogously to Example 1. After the usual cleaning and refurbishment steps is a Colloid obtained, to which sugar ligands in a borate Buffer, pH 9-10, or proteins in a 0.5-1M potassium Phosphate buffer, pH 7-8, coupled by simple incubation can be.

Beispiel 12Example 12

0,1 g Ferrit-Pulver mit einem Curiepunkt von 45°C und einem mittleren Teilchendurchmesser von 85 nm werden in eine Wasser-Öl-Suspension, bestehend aus 14,5% zweimal rekristallisiertem Acrylamid, 0,6% N,N′-Methylen-bis-acrylamid, 3,5% Na-Acetat, 41% Leinsamenöl, 0,2% (alle W/W) Azo-bis- isobutyronitril, gegeben und in einem Ultraschallbad (100 W) homogenisiert. Die Reaktion wird mittels einer herkömmlichen Quecksilber-Hochdrucklampe initiiert und ist nach 10 Min. beendet. Danach wird das Produkt 10 Min. bei 4000×g zentrifugiert und anschließend 24 Stunden gegen Wasser dialysiert. Das gewonnene Produkt wird mehrfach in Wasser suspendiert und nach Anlegen eines Magneten dekantiert. Die gewonnene Festphase wird gemäß Beispiel 1 für die Applikation präpariert und ist für die Behandlung von Leber- und Nierentumoren verwendbar.0.1 g ferrite powder with a Curie point of 45 ° C and one average particle diameter of 85 nm are in a Water-oil suspension consisting of 14.5% recrystallized twice Acrylamide, 0.6% N, N'-methylene-bis-acrylamide, 3.5% Na acetate, 41% linseed oil, 0.2% (all W / W) azo-bis- isobutyronitrile, given and in an ultrasonic bath (100 W) homogenized. The reaction is carried out using a conventional High pressure mercury lamp initiated and is after 10 min. completed. Then the product is at 4000 × g for 10 min  centrifuged and then against water for 24 hours dialyzed. The product obtained is repeatedly in water suspended and decanted after applying a magnet. The Solid phase obtained is used according to Example 1 for the application prepared and is for the treatment of liver and kidney tumors usable.

Beispiel 13Example 13

0,1 g Ferrit-Pulver gemäß Beispiel 12 werden nach der Acrylamid- Beschichtung mit 3 ml einer 5%igen wäßrigen Glutaraldehyd- Lösung versetzt. Die Aktivierung erfolgt bei Raumtemperatur über einen Zeitraum von 2 Stunden. Das Material wird anschließend 30 Min. bei 3000×g zentrifugiert und mehrfach mit Wasser in der üblichen Weise unter Anwendung eines Magneten gewaschen. 1 ml PBS-Puffer, pH 6,9, in dem 0,1 mg Anti-CEA-IgG1 sowie 0,5 mM NaBH₃CN gelöst sind, werden 10 Stunden bei 4°C inkubiert. Es folgen Zentrifugation und Präparation gemäß Beispiel 1. Das so gewonnene Präparat kann direkt zur Therapie eingesetzt werden.0.1 g ferrite powder according to Example 12 are Coating with 3 ml of a 5% aqueous glutaraldehyde Solution added. The activation takes place at Room temperature over a period of 2 hours. The Material is then centrifuged at 3000 × g for 30 min and using several times with water in the usual way of a magnet. 1 ml PBS buffer, pH 6.9, in which 0.1 mg Anti-CEA-IgG1 and 0.5 mM NaBH₃CN are dissolved, 10th Incubated at 4 ° C for hours. Centrifugation and preparation follow according to Example 1. The preparation obtained in this way can can be used directly for therapy.

Beispiel 14Example 14

Das Verfahren gemäß Beispiel 12 wird verwendet, um ein FMP- Toxin-Kombinationspräparat herzustellen. Dazu wird der Wasser-Öl-Suspension zusätzlich 0,05 mg Ricin zugefügt. Es entstehen so Kolloide, die für eine Langzeittherapie geeignet sind.The procedure of Example 12 is used to create an FMP Manufacture toxin combination preparation. For this the Water-oil suspension additionally 0.05 mg ricin added. It This creates colloids that are suitable for long-term therapy are.

Beispiel 15Example 15

Acrylamid-gecoatete Partikel werden gemäß Beispiel 12 unter Verwendung von 0,1% (W/W) N,N′-Methylen-bis-acrylamid hergestellt. Weitere Präparation erfolgt gemäß Beispiel 12. Es entsteht so ein Therapeutikum, das für eine Kurzzeittherapie geeignet ist. Acrylamide-coated particles are according to Example 12 under Use of 0.1% (w / w) N, N'-methylene-bis-acrylamide produced. Further preparation is carried out according to Example 12. It This creates a therapeutic agent for short-term therapy suitable is.  

Beispiel 16Example 16

40 µM L-Dipalmitoyl-α-lecithin und 8,2 µM Cholesterin werden in einem 50-ml-Rundkolben in 5 ml Chloroform gelöst und anschließend im Vakuum zur Trockne eingeengt. Nach 10stündigem Trocknen im Hochvakuum werden 3 ml physiologische Kochsalzlösung, in der 0,1 g Ferrit-Pulver gemäß Beispiel 1 und 0,012 mg Ricin suspendiert sind, zugegeben und die Mischung unter Stickstoffzuleitung 30 Min. bei 45°C homogenisiert. Danach wird die Suspension in einem Eisbad abgekühlt und bei 4°C 6 Stunden unter Stickstoff aufbewahrt. Das Produkt wird sodann mehrmals in physiologischer Kochsalzlösung suspendiert und unter Zuhilfenahme des Magneten dekantiert. Um nicht inkorporiertes Ricin vollständig zu entfernen, wird die Suspension über eine mit physiologischer Kochsalzlösung equilibrierte Sephadex-G-50-Säule (1×25 cm, Fluß 0,5 ml/Stunde) geschickt. Es fallen Liposomen mit einer Teilchengröße von ca. 450 nm an, die zur Behandlung von Leber-, Nieren- und Milzcarcinomen geeignet sind.40 µM L-dipalmitoyl-α-lecithin and 8.2 µM cholesterol dissolved in 5 ml chloroform in a 50 ml round bottom flask and then concentrated to dryness in vacuo. After 10 hours Drying in a high vacuum is 3 ml physiological Saline solution in which 0.1 g ferrite powder according to Example 1 and 0.012 mg of ricin are added, and the Mixture homogenized at 45 ° C. for 30 minutes under a nitrogen supply. The suspension is then cooled in an ice bath and stored at 4 ° C for 6 hours under nitrogen. The The product is then several times in physiological saline suspended and with the help of the magnet decanted. To completely not incorporate ricin remove the suspension over a with physiological Saline solution equilibrated Sephadex G-50 column (1 × 25 cm, Flow 0.5 ml / hour). Liposomes with one fall Particle size of approximately 450 nm, which is used to treat Liver, kidney and spleen carcinomas are suitable.

Beispiel 17Example 17

Das Verfahren gemäß Beispiel 16 wird benutzt, um FMP-Liposomen mit negativer Ladung herzustellen. Dazu wird in Abänderung obiger Rezeptur 35 µM L-Dipalmitoyl-α-lecithin, 10,2 µM Cholesterin und 4,8 µM L-dipalmitoyl-α-phosphatid- dinatriumsalz zur Herstellung der Liposomen verwendet. Die weiteren Verfahrensweisen verlaufen analog obigem Beispiel.The method of Example 16 is used to make FMP liposomes with negative charge. For this, in Modification of the above formulation 35 µM L-dipalmitoyl-α-lecithin, 10.2 µM cholesterol and 4.8 µM L-dipalmitoyl-α-phosphatide disodium salt used to prepare the liposomes. The further procedures proceed analogously to the example above.

Beispiel 18Example 18

0,5 mg Streptavidin, gelöst in 1 ml PBS-Puffer, pH 7,2, werden durch 12stündige Inkubation bei Raumtemperatur an das gemäß Beispiel 1 mit PVA beschichtete und mit Isocyanat aktivierte Ferrit-Pulver gekoppelt. Das gewonnene Produkt wird sodann durch mehrmalige Suspension in physiologischer Kochsalzlösung und Dekantieren unter Verwendung der Magnetfeldabtrennung gereinigt. Ein Anti-EGF-Rezeptor-IgG wird in Abänderung einer bekannten Vorschrift (Int. J. Cancer, 48, 167, 1991) biotinyliert. Dazu werden 1 mg AK in 1 ml 0,1M Na-Acetat-Puffer, pH 5,5, der 12,5 mM NaJO₄ enthält, bei 4°C eine Stunde unter Lichtabschluß oxidiert. nach der Dialyse gegen denselben Puffer werden 30 mg Biotin-Hydrazid und 0,05 mg NaHB₃CN zugegeben. Die Kopplung ist nach einer weiteren Stunde bei 4°C abgeschlossen. Sodann wird der biotinylierte AK gegen PBS- Puffer, pH 7,0, 24 Stunden dialysiert; anschließend folgt Lyophilisierung. Das gewonnene Festprodukt wird in 2 ml physiologischer Kochsalzlösung aufgenommen und kann nach der Sterilfiltration direkt für die Injektion verwendet werden. Nach Absättigung der EGF-Rezeptoren mit dem biotinylierten IgG können die Streptavidin-beladenen FMP injiziert werden, die dann mit dem Biotin-IgG konjugieren.0.5 mg streptavidin, dissolved in 1 ml PBS buffer, pH 7.2 by incubating at room temperature for 12 hours according to the Example 1 coated with PVA and activated with isocyanate Coupled ferrite powder. The product obtained is then by repeated suspension in physiological saline and decanting using magnetic field separation  cleaned. An anti-EGF receptor IgG is modified in one known protocol (Int. J. Cancer, 48, 167, 1991) biotinylated. For this, 1 mg AK in 1 ml 0.1M Na acetate buffer, pH 5.5, which contains 12.5 mM NaJO₄, at 4 ° C for one hour Light termination oxidized. after dialysis against the same Buffers are 30 mg of biotin hydrazide and 0.05 mg of NaHB₃CN admitted. The link is at after another hour 4 ° C completed. Then the biotinylated AK against PBS Buffer, pH 7.0, dialyzed for 24 hours; then follows Lyophilization. The solid product obtained is in 2 ml physiological saline solution can be added after the Sterile filtration can be used directly for injection. After saturation of the EGF receptors with the biotinylated IgG, the streptavidin-laden FMP can be injected which then conjugate with the biotin IgG.

Es folgt das Anlegen des entsprechenden Induktionsfeldes.The corresponding induction field follows.

Claims (16)

1. Therapeutische Mittel für die selektive Tumortherapie, dadurch gekennzeichnet, daß ferromagnetische Partikel mit einer Curie-Temperatur zwischen 42,5 und 70°C und einer Teilchengröße von <500 nm in eine Polymer- oder Biopolymermatrix eingekapselt sind, die nicht vom reticulo­ endothelialen System (RES) phagozytiert werden und die mit Tumorzell-Targeting vermittelnden Wirksubstanzen koppelnde, reaktive Gruppen aufweisen.1. Therapeutic agent for selective tumor therapy, characterized in that ferromagnetic particles with a Curie temperature between 42.5 and 70 ° C and a particle size of <500 nm are encapsulated in a polymer or biopolymer matrix that are not from the reticulo endothelial system (RES) are phagocytosed and have the reactive substances which couple with tumor cell targeting-active substances. 2. Therapeutische Mittel gemäß Beispiel 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Polymerschicht aus Stärke, Polyvinylalkohol, Polyacrylamid, Dextran, Agarose oder Gelatine besteht.2. Therapeutic agents according to Example 1, thereby characterized in that the polymer layer is made of starch, Polyvinyl alcohol, polyacrylamide, dextran, agarose or Gelatin exists. 3. Therapeutische Mittel gemäß Beispiel 1, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel in Liposome (Vesikel) aus Phospholipiden, Sphingolipiden, Glykosphingolipiden, Ceramiden sowie anderen, die Zellmembran konstituierenden Substanzen oder Mischungen derselben eingekapselt sind.3. Therapeutic agent according to Example 1, characterized in that that the ferromagnetic particles in liposomes (Vesicles) from phospholipids, sphingolipids, glycosphingolipids, Ceramides as well as others, the cell membrane constituent substances or mixtures thereof are encapsulated. 4. Therapeutische Mittel gemäß Beispiel 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Liposome aktivierte Lipide enthalten, die mit den Tumorzell-Targeting vermittelnden Wirksubstanzen koppelnde, reaktive Gruppen aufweisen. 4. Therapeutic agent according to Example 3, characterized in that the liposomes contain activated lipids which with active substances that mediate tumor cell targeting have coupling, reactive groups.   5. Therapeutische Mittel gemäß Beispiele 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die das Tumorzell-Targeting vermittelnden Wirksubstanzen Tumor-Antikörper, tumorassoziierte Antikörper, Antikörper-Fragmente, heterobispezifische Antikörper, Glykoproteine, Saccharide, Oligosaccharide, Neoglykoproteine, Angiotensin II, Streptavidin, Avidin, Biotin oder Epidermal Growth Faktor sind.5. Therapeutic agents according to Examples 1 to 4, thereby characterized in that the mediating the tumor cell targeting Active substances tumor antibodies, tumor-associated antibodies, Antibody fragments, heterobispecific antibodies, Glycoproteins, saccharides, oligosaccharides, neoglycoproteins, Angiotensin II, streptavidin, avidin, biotin or Are epidermal growth factor. 6. Therapeutische Mittel gemäß Beispiel 1, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel mit Polymeren, die in einem Plasma aus Vinylmonomeren oder einer Vinylmonomermischung gebildet werden, beschichtet sind.6. Therapeutic agents according to Example 1, thereby characterized in that the ferromagnetic particles with Polymers in a plasma from vinyl monomers or a Vinyl monomer mixture are formed, are coated. 7. Therapeutische Mittel gemäß Beispiele 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel zusammen mit einem Tumor-Toxin oder einer cytotoxischen Substanz in die Polymermatrix eingekapselt sind.7. Therapeutic agents according to Examples 1 to 5, thereby characterized in that the ferromagnetic particles together with a tumor toxin or a cytotoxic substance in the polymer matrix is encapsulated. 8. Verfahren zur Herstellung von Mitteln zur selektiven Tumortherapie, dadurch gekennzeichnet, daß ferromagnetische Partikel mit einer Curie-Temperatur zwischen 42,5 und 70°C und einer Teilchengröße von <500 nm in eine Polymer- oder Biopolymermatrix eingekapselt werden, die nicht vom RES phagozytiert wird und auf deren Oberfläche reaktive Gruppen erzeugt werden, an die Tumor-Targeting vermittelnde Wirksubstanzen kovalent gekoppelt werden.8. Process for the preparation of selective agents Tumor therapy, characterized in that ferromagnetic Particles with a Curie temperature between 42.5 and 70 ° C and a particle size of <500 nm in a polymer or Biopolymer matrix are encapsulated that are not covered by the RES is phagocytized and reactive groups on its surface are generated, to the tumor targeting mediating active substances be covalently coupled. 9. Verfahren gemäß Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel mittels der Phasenseparations- Suspensionspolymerisation mit Stärke, Polyvinylalkohol, Polyacrylamid, Dextran, Agarose oder Gelatine eingekapselt werden.9. The method according to claim 8, characterized in that the ferromagnetic particles by means of the phase separation Suspension polymerization with starch, polyvinyl alcohol, Encapsulated in polyacrylamide, dextran, agarose or gelatin will. 10. Verfahren gemäß Beispiel 8, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel durch aus Phospholipiden, Sphingolipiden, Glykosphingolipiden, Ceramiden sowie anderen, die Zellmembran konstituierenden Substanzen oder Mischungen derselben gebildeten Liposome (Vesikel) eingekapselt werden. 10. The method according to Example 8, characterized in that the ferromagnetic particles through from phospholipids, Sphingolipids, glycosphingolipids, ceramides and others, substances or mixtures constituting the cell membrane the same liposomes (vesicles) formed are encapsulated.   11. Verfahren gemäß Beispiele 8 und 10, dadurch gekennzeichnet, daß in die die ferromagnetischen Partikel einkapselnden Liposome solche Lipide eingebaut werden, an die über aktivierbare Gruppen Tumorzell-Targeting vermittelnde Wirksubstanzen kovalent gebunden werden.11. The method according to Examples 8 and 10, characterized in that encapsulate in the ferromagnetic particles Such lipids are incorporated into the liposomes mediating tumor cell targeting via activatable groups Active substances are bound covalently. 12. Verfahren gemäß Beispiel 8, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel durch ein aus Monomeren oder einer Monomermischung bestehendes Plasma, das entweder durch Hochfrequenz- bzw. Radiofrequenz-Glimmentladung, Gleichstrom- und Niederfrequenz-Glimmentladung, Mikrowellenentladung oder Coronaentladung erzeugt wird, beschichtet werden.12. The method according to Example 8, characterized in that the ferromagnetic particles by one of monomers or a monomer mixture of existing plasma, which is either by High frequency or radio frequency glow discharge, direct current and low frequency glow discharge, microwave discharge or Corona discharge is generated, coated. 13. Verfahren gemäß Beispiele 8, 9, 11 und 12 dadurch gekennzeichnet, daß an die rekative Gruppen enthaltenden Polymere oder Biopolymere, mit denen die ferromagnetischen Partikel beschichtet sind, Tumor-Targeting vermittelnde Wirksubstanzen gemäß Beispiel 5 kovalent gekoppelt werden.13. Process according to Examples 8, 9, 11 and 12 thereby characterized in that the recative groups containing Polymers or biopolymers with which the ferromagnetic Particles are coated, mediating tumor targeting Active substances are covalently coupled according to Example 5. 14. Verfahren gemäß Beispiele 8 bis 11 und 13, dadurch gekennzeichnet, daß die ferromagnetischen Partikel zusammen mit Tumor-Toxinen oder cytotoxischen Substanzen in die Polymer- oder Biopolymermatrix eingekapselt werden.14. The method according to Examples 8 to 11 and 13, thereby characterized in that the ferromagnetic particles together with tumor toxins or cytotoxic substances in the Polymer or biopolymer matrix are encapsulated. 15. Verwendung von ferromagnetischen Partikeln mit einer Curie-Temperatur zwishen 42,5 und 70°C und einer Teilchengröße von <500 nm, die entweder allein oder zusammen mit Tumor-Toxinen oder cytotoxischen Substanzen in eine Polymermatrix eingekapselt sind, die nicht vom RES phagozytiert wird und an die Tumor-Targetin vermittelnden Wirksubstanzen gekoppelt sind, zur selektiven Tumortherapie durch induktiv erzeugte Hyperthermie.15. Use of ferromagnetic particles with a Curie temperature between 42.5 and 70 ° C and a particle size of <500 nm, either alone or together with Tumor toxins or cytotoxic substances in one Polymer matrix are encapsulated that are not covered by the RES is phagocytosed and mediating to the tumor targetin Active substances are coupled for selective tumor therapy through inductively generated hyperthermia. 16. Verwendung von ferromagnetischen Partikeln mit einer Curie-Temperatur zwischen 42,5 und 70°C sowie einer Teilchengröße von <500 nm ohne Polymerbeschichtung zur selektiven Therapie der Leber oder Niere durch induktiv erzeugte Hyperthermie.16. Use of ferromagnetic particles with a Curie temperature between 42.5 and 70 ° C as well as one Particle size of <500 nm without polymer coating for  selective therapy of the liver or kidney by induction generated hyperthermia.
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