DE4026964A1

DE4026964A1 - New infectious acid-resistant rhinovirus strain - is e.g. mutant of serotype 14; for treating rhinovirus infection

Info

Publication number: DE4026964A1
Application number: DE19904026964
Authority: DE
Inventors: Timothy Dr Skern; Herbert Ing Auer; Dieter Dr Blaas; Ernst Prof Kuechler; Helge Dr Torgensen
Original assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date: 1990-08-25
Filing date: 1990-08-25
Publication date: 1992-02-27

Abstract

New human rhinovirus is acid-resistant and infectious. DNA corresp. to all the viral RNA or parts of the viral RNA of the new human rhinovirus is also new. Oligopeptide coded from the DNA above is also new. Human rhinovirus is pref. a mutant of Serotype 14 and is esp. a mutation localised in the VP1-region (Asn100 is Ile) and/or in the VP2 region (Thr 17 is Ile) or in the VP1 region (Asn 101 is Glu) or VP2 region (Thr 17 is Ile). Human rhinovirus can be prepd. by incubating the wild type HRV at pH less than 5, esp. pH 4.5, then adjusting the pH to ca.7 and propagating. Cycle is repeated several times, pref. 3 times and the mutants produced isolated. USE/ADVANTAGE - Rhinovirus can be used in pharmaceuticals for the treatment of rhinoviral infections.

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind säureresistente, infektiöse Mutanten humaner Rhinoviren, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung.The present invention relates to acid-resistant, infectious mutants more human Rhinoviruses, process for their preparation and their Use.

Humane Rhinoviren wurden ursprünglich als die säurelabile Gruppe in der Familie der Picornaviren definiert (Hughes et al. 1973). Die den Rhinoviren eng verwandten Polioviren sind hingegen auch nach Inkubation bei stark sauren pH-Werten, wie sie im Magensaft vorkommen, noch immer infektiös. Untersuchungen der dreidimensionalen Struktur von Vertretern dieser beiden Gruppen konnten aber bisher keine Erklärung für die Unterschiede in der Stabilität liefern (Rossmann et al., 1985, Hogle et al., 1985). Es konnte gezeigt werden, daß die Kapside sowohl von Rhino- wie von Polioviren in vitro nach einer Inkubation bei niedrigem pH Veränderungen unterliegen. Diese Veränderungen konnten bei Rhinoviren mittels monospezifischer Antisera (Lonberg-Holm et al., 1973), durch Sedimentationsanalyse (Korant et al., 1975) und durch monoklonale Antikörper gegen Epitope des Kapsids von HRV2, die erst nach Behandlung bei niedrigem pH zugänglich sind (Neubauer et al., 1987) nachgewiesen werden. Während diese Konformationsänderungen bei Rhinoviren irreversibel sind, sind sie bei Polioviren reversibel (Vriesen et al., 1983, Madshus et al., 1984).Human rhinoviruses were originally thought to be the Acid-labile group in the Picorna virus family defined (Hughes et al. 1973). The closely related to the rhinoviruses related polioviruses, however, are also after Incubation at strongly acidic pH values, as in Gastric juice occur, still infectious. Investigation of the three dimensional structure of Representatives of these two groups have so far been able to no explanation for the differences in stability provide (Rossmann et al., 1985, Hogle et al., 1985). It could be shown that the capsids of both Rhino- like polioviruses in vitro after one Incubation at low pH is subject to change. In rhinoviruses, these changes could be monospecific antisera (Lonberg-Holm et al., 1973), by sedimentation analysis (Korant et al., 1975) and by monoclonal antibodies against capsid epitopes of HRV2, which is only after treatment at low pH accessible (Neubauer et al., 1987) will. While these changes in conformation Rhinoviruses are irreversible, they are polioviruses reversible (Vriesen et al., 1983, Madshus et al., 1984).

Das saure Milieu in den Endosomen ist die Voraussetzung für das "Uncoating" des viralen Genoms. Dies konnte sowohl bei Poliovirus (Madshus et al., 1984) als auch bei HRV2 (Neubauer et al., 1987) gezeigt werden. Bei HRV2 wurde die konformationelle Änderung des viralen Kapsids in vivo mittels eines monoklonalen Antikörpers nachgewiesen.The acidic environment in the endosomes is the prerequisite for the "uncoating" of the viral genome. This could both in poliovirus (Madshus et al., 1984) and in HRV2 (Neubauer et al., 1987). At HRV2 was the conformational change of the viral Capsids in vivo using a monoclonal antibody proven.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung war, säureresistente, infektiöse Mutanten humaner Rhinoviren zu isolieren.The object of the present invention was acid-resistant, infectious mutants of human rhinoviruses isolate.

Zur Lösung der gestellten Aufgabe wurde HRV14 verwendet, da dessen Genomsequenz der des Poliovirus am ähnlichsten ist (Palmenberg, 1988).HRV14 was used to solve the task used because its genome sequence that of the poliovirus on is most similar (Palmenberg, 1988).

Wenn Wildtyp HRV14 bei pH 5,2 inkubiert wird, zeigt sich ein rascher Infektiositätsverlust (Hughes et al., 1973). Nimmt man eine Mutationsrate von 10^-4 bis 10^-5 an, wie sie für Rhinovirusmutationen im Neutralisationstest mit monoklonalen Antikörpern berichtet wird (Sherry et al., 1985), so kann davon ausgegangen werden, daß die ursprüngliche HRV14 Präparation bereits eine größere Zahl von Säureresistenzmutanten enthält, die eine Punktmutation besitzen. Um stabile, säureresistente Mutanten in größerer Menge zu erhalten, wurden drei pH 4,5 Behandlungszyklen durchgeführt, durch die im letzten Schritt eine scheinbar homogene Population erhalten wurde. Eine 20minütige Inkubation des Wildtyp-HRV14 bei pH 4,5 führte zu einer Reduktion der Infektiosität um 4 Größenordnungen (Fig. 1). Die so erhaltenen Viren wurden in 2 weiteren Zyklen vermehrt und einer Behandlung bei pH 4,5 ausgesetzt. Nach dieser Behandlung betrug der Infektiositätsverlust noch ca. 1,7 Größenordnungen. Nach einer weiteren pH 4,5 Behandlung war die Plaqueanzahl zwischen säurebehandeltem und unbehandeltem Virus etwa gleich groß. Aus drei Plaques wurde Virus präpariert. Eines dieser Isolate erzeugte überraschenderweise signifikant kleinere Plaques (HRV14 ar1) als die beiden anderen (HRV14 ar2 und HRV14 ar3), deren Plaques de facto nicht vom Wildtyp unterscheidbar waren.When wild type HRV14 is incubated at pH 5.2, there is a rapid loss of infectivity (Hughes et al., 1973). Assuming a mutation rate of 10 ^-4 to 10 ^-5 , as reported for rhinovirus mutations in the neutralization test with monoclonal antibodies (Sherry et al., 1985), it can be assumed that the original HRV14 preparation already has a larger number of Contains acid resistance mutants that have a point mutation. In order to obtain stable, acid-resistant mutants in large quantities, three pH 4.5 treatment cycles were carried out, through which an apparently homogeneous population was obtained in the last step. A 20-minute incubation of the wild-type HRV14 at pH 4.5 led to a 4-order reduction in the infectivity ( FIG. 1). The viruses thus obtained were propagated in a further 2 cycles and subjected to treatment at pH 4.5. After this treatment, the loss of infectivity was approximately 1.7 orders of magnitude. After a further pH 4.5 treatment, the number of plaques between the acid-treated and untreated virus was approximately the same. Virus was prepared from three plaques. One of these isolates surprisingly produced significantly smaller plaques (HRV14 ar1) than the other two (HRV14 ar2 and HRV14 ar3), whose plaques were in fact indistinguishable from the wild type.

Die Kapsid-Regionen der isolierten HRV14-ar2 und HRV14-ar3 wurden sequenziert. Im HRV14-ar2 wurden zwei Mutationen gefunden, von denen die eine in VP1 (Asn 100 → Ile) und die andere in VP2 (Thr 17 → Ile) lag. Auch im HRV14-ar3 lagen zwei Mutationen vor: in VP1 (Asp 101 → Glu) und in VP2 (Thr 17 → Ile).The capsid regions of the isolated HRV14-ar2 and HRV14-ar3 were sequenced. In HRV14-ar2 there were two Mutations were found, one of which was found in VP1 (Asn 100 → Ile) and the other was in VP2 (Thr 17 → Ile). There were also two mutations in HRV14-ar3: in VP1 (Asp 101 → Glu) and in VP2 (Thr 17 → Ile).

Die Säureinaktivierungsexperimente mit dem HRV14 Wildtyp und den 3 Isolaten erfolgte in einem pH-Bereich von 7,4 bis 3,2. Hier konnte gezeigt werden, daß das Wildtypvirus bereits nach einer Behandlung bei pH 4,7 eine Größenordnung an Infektiosität verloren hat, während die Mutanten einen Infektiositätsverlust erst unterhalb eines pHs von 3,8 zeigten (Fig. 1). Bei pH 4,3 zeigten die Mutanten praktisch keine Veränderung des Titers, während der Wildtyp unter diesen Bedingungen etwa 5 Größenordnungen seiner ursprünglichen Infektiosität verloren hatte. Bei pH 3,9 zeigte der Wildtypvirus einen Infektiositätsverlust von 6 Größenordnungen, während eine Infektiositätsänderung bei den Mutanten nicht meßbar war. Somit konnte gezeigt werden, daß alle HRV14-ar-Mutanten unter sauren Bedingungen wesentlich stabiler sind als das Wildtypvirus.The acid activation experiments with the HRV14 wild type and the 3 isolates were carried out in a pH range from 7.4 to 3.2. It could be shown here that the wild-type virus lost an order of magnitude of infectivity after treatment at pH 4.7, while the mutants only showed a loss of infectivity below a pH of 3.8 ( FIG. 1). At pH 4.3, the mutants showed practically no change in titer, while the wild type had lost about 5 orders of magnitude of its original infectivity under these conditions. At pH 3.9, the wild-type virus showed an infectivity loss of 6 orders of magnitude, while an infectivity change in the mutants was not measurable. It could thus be shown that all HRV14-ar mutants are considerably more stable than the wild-type virus under acidic conditions.

Bei Poliovirus kommt es (Madshus et al., 1984) bei niedrigen pH-Werten zu einer Strukturänderung, die zu einem Anstieg der Hydrophobizität des Kapsides und damit zu einer Anreicherung in der Triton-Phase im Wasser - Triton X-114 System führt. Diese Methode wurde ursprünglich für die Extraktion von Membranproteinen beschrieben und basiert auf der Mischbarkeit von Triton X-114 und Wasser bei 0°C, während bei 37°C eine Phasentrennung entsteht (Bordier, 1981). Mit dieser Methode konnte ein signifikanter Verteilungsunterschied zwischen HRV14-wt und HRV14-ar Mutanten nach der Inkubation bei schwach sauren pH-Werten und darauffolgender Neutralisation festgestellt werden (Fig. 2). Während der Anteil an Wildtyp-Virus in der hydrophoben Phase (Triton X-114) von 10% (nach pH 7,5 Inkubation) auf 30% (nach pH 3,8 Inkubation) anstieg, war die Verteilung bei den Mutanten bei pH-Werten oberhalb 3,8 konstant und lag bei ca. 10% Anteil in der hydrophoben Phase.With poliovirus (Madshus et al., 1984) there is a structural change at low pH values, which leads to an increase in the hydrophobicity of the capsid and thus to an accumulation in the Triton phase in the water - Triton X-114 system. This method was originally described for the extraction of membrane proteins and is based on the miscibility of Triton X-114 and water at 0 ° C, while phase separation occurs at 37 ° C (Bordier, 1981). With this method, a significant distribution difference between HRV14-wt and HRV14-ar mutants could be determined after incubation at weakly acidic pH values and subsequent neutralization ( FIG. 2). While the proportion of wild-type virus in the hydrophobic phase (Triton X-114) increased from 10% (after pH 7.5 incubation) to 30% (after pH 3.8 incubation), the distribution among the mutants at pH Values constant above 3.8 and was approximately 10% in the hydrophobic phase.

Die im Plaquetest sichtbaren Unterschiede in der Plaquegröße, könnten möglicherweise darauf zurückzuführen sein, daß die Viruspräparation verschiedene Mutanten enthält, die sich in ihrer Vermehrungsfähigkeit unterscheiden. Da insgesamt drei Zyklen von pH 4,5 Behandlungen durchgeführt worden sind, könnte es auch zu einer Anreicherung von Mutanten mit mehr als einer Mutation im Kapsid gekommen sein. Das Ergebnis der Sequenzierung von HRV14-ar2 und -ar3 weist in diese Richtung. Die Sequenzierung des Genoms der anderen HRV14-ar Mutanten wird diese Fragen beantworten. Nach Lokalisation der Mutationen lassen sich auf Grund der bekannten dreidimensionalen Struktur des Wildtyp-HRV14 die Stelle des Aminosäureaustausches im Kapsid lokalisieren. Die Röntgenstrukturanalyse der säureresistenten HRV14-Mutanten wird letztlich über die strukturellen Änderungen in der Kapsidstruktur als Folge des Aminosäureaustausches Auskunft geben. The visible differences in the plaque test Plaque size, could possibly be on it be attributed to the virus preparation contains different mutants that are in their Distinguish reproductive ability. Since a total of three Cycles of pH 4.5 treatments have been performed there could also be an accumulation of mutants with more than one mutation in the capsid. The result of the sequencing of HRV14-ar2 and -ar3 points in this direction. Genome sequencing the other HRV14-ar mutant will ask these questions answer. Leave after localization of the mutations due to the well-known three-dimensional structure of wild-type HRV14 the site of amino acid exchange localize in capsid. The X-ray structure analysis of the acid-resistant HRV14 mutants is ultimately about structural changes in the capsid structure as Provide information on the sequence of the amino acid exchange.

Ebenso wie säureresistente Mutanten des Serotyps HRV14 lassen sich auch entsprechende Mutanten der anderen Serotypen des HRV, insbesondere Mutanten der Serotypen 2 und 89 isolieren.Just like acid-resistant mutants of the HRV14 serotype corresponding mutants of the other can also be found Serotypes of the HRV, in particular mutants of the serotypes Insulate 2 and 89.

Die Mutationen der so isolierten säureresistenten Mutanten können nach Präparation und Reinigung der viralen RNA sowie Synthese und Klonierung der doppelsträngigen DNA durch Analyse und Sequenzierung der cDNA Klone ermittelt werden. Danach ist es möglich, alternativ zur beschriebenen Vorgehensweise säureresistente Mutanten der Rhinoviren mit speziellen Mutationen mit Hilfe bekannter Methoden, beispielsweise mit Hilfe des "site directed mutagenesis" Kits von Amersham herzustellen. Die zunächst erhaltenen DNA-Klone der säureresistenten Mutanten lassen sich beispielsweise durch die in der EPA 03 56 695 beschriebenen Verfahrensweisen in infektiöse virale RNA transkribieren und damit infektiöse Viren herstellen.The mutations of the acid-resistant thus isolated After preparation and purification of the mutants viral RNA and synthesis and cloning of the double stranded DNA by analysis and sequencing of the cDNA clones can be determined. After that it is possible alternative to the procedure described acid-resistant mutants of rhinoviruses with special Mutations using known methods, for example with the help of the "site directed mutagenesis" kit from To manufacture Amersham. The initially received DNA clones of the acid-resistant mutants can be for example by the in EPA 03 56 695 procedures described in infectious viral RNA transcribe and thus create infectious viruses.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind daher auch sowohl die vollständige, der gesamten viralen RNA der erfindungsgemäßen säureresistenten Mutanten entsprechenden DNA, als auch die DNA, die Teilen dieser RNA, insbesondere den Teilen der viralen RNA, die die Mutationen beinhalten, entspricht.The present invention therefore also relates to both the complete, the total viral RNA of the acid-resistant mutants according to the invention corresponding DNA, as well as the DNA, the parts of this RNA, especially the parts of the viral RNA that make up the Include mutations.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind auch die durch die säureresistenten, erfindungsgemäßen Mutanten erzeugten Oligopeptide sowie deren Verwendung. The present invention also relates to by the acid-resistant mutants according to the invention generated oligopeptides and their use.

Verwendet werden können die erfindungsgemäßen, säureresistenten humanen Rhinoviren beispielsweise als Arzneimittel, indem sie kompetitiv zur Behandlung rhinoviraler Infektionen eingesetzt werden.The inventive, acid-resistant human rhinoviruses, for example as Drug by being competitive for treatment rhinoviral infections.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind auch Arzneimittel, die die erfindungsgemäßen Viren enthalten, gegebenenfalls zusammen mit Hilfs- und/oder Trägerstoffen. The present invention also relates to Medicaments containing the viruses according to the invention included, optionally together with auxiliary and / or Carriers.

LEGENDS TO THE FIGURES

Fig. 1 Inaktivierung von HRV14 durch Inkubation bei verschiedenen pH Werten. 10⁷ PFU HRV14-wt (-○-), HRV14-ar1 (-∆-), HRV14-ar2 (-∇-) und HRV14-ar3 (--) wurden 15 Minuten lang bei Raumtemperatur bei verschiedenen pH-Werten inkubiert. Nach Neutralisation wurde der Anteil der aktiven Viren mittels Plaquetests bestimmt. Fig. 1 inactivation of HRV14 by incubation at different pH values. 10 ⁷ PFU HRV14-wt (- ○ -), HRV14-ar1 (-∆-), HRV14-ar2 (-∇-) and HRV14-ar3 (-) were incubated for 15 minutes at room temperature at different pH values. After neutralization, the proportion of active viruses was determined using plaque tests.

Fig. 2 Verteilung von HRV14 zwischen hydrophober (Triton X-114) und wäßriger Phase. 10000 cpm von 35S-markierten HRV14-wt (-○-), HRV14-ar1 (-∆-) und HRV14-ar2 (-∇-) wurden 15 Minuten lang bei Raumtemperatur bei den angegebenen pH- Werten inkubiert. Nach der Neutralisation wurde Triton X-114 zugesetzt und die Verteilung des 35S-markierten Virus zwischen Triton- und wäßriger Phase gemessen. Der % Anteil von 35S-Virus in der Triton X-114 Phase ist dargestellt. Fig. 2 Distribution of HRV14 between hydrophobic (Triton X-114) and aqueous phase. 10000 cpm of 35S-labeled HRV14-wt (- ○ -), HRV14-ar1 (-∆-) and HRV14-ar2 (-∇-) were incubated for 15 minutes at room temperature at the specified pH values. After neutralization, Triton X-114 was added and the distribution of the 35S-labeled virus between the Triton and aqueous phases was measured. The percentage of 35S virus in the Triton X-114 phase is shown.

MATERIAL AND METHODS Selection of acid-resistant mutants

10⁶ PFU HRV14 (z. B. ATCC VR-1124) in 2 ml Minimal Essential Medium (MEM) mit 2% Pferdeserum wurden mittels 100 µl 0,5M Na-Azetat auf pH 4,5 gebracht. Nach 15 Min. Inkubation bei Raumtemperatur wurde mit 300 µl eiskaltem 0,5M Tris der pH auf 7,4 eingestellt. Die darauffolgende Virusvermehrung erfolgte in HeLa-OHIO Zellen in 150 cm² Gewebekulturflaschen, die 3 Tage bei 34°C inkubiert wurden. Die Zellen wurden durch zweimaliges Einfrieren und Auftauen aufgebrochen. Nach Entfernung der verbleibenden Zellbestandteile durch niedrigtourige Zentrifugation wurde das Virus mittels PEG präzipitiert (Skern et al., 1984). Die Titerbestimmung der so gewonnenen Virussuspension erfolgte im Plaquetest nach einer Inkubation bei pH 4,5. Nach dreimaliger Wiederholung dieser Selektion wurden 3 verschiedene Mutanten aus Plaques isoliert und sodann in 1 l Suspensionskulturen vermehrt.10 ⁶ PFU HRV14 (e.g. ATCC VR-1124) in 2 ml Minimal Essential Medium (MEM) with 2% horse serum were brought to pH 4.5 using 100 µl 0.5M Na acetate. After 15 minutes of incubation at room temperature, the pH was adjusted to 7.4 with 300 μl of ice-cold 0.5M Tris. The subsequent virus replication took place in HeLa-OHIO cells in 150 cm ² tissue culture flasks, which were incubated at 34 ° C. for 3 days. The cells were broken up by freezing and thawing twice. After removal of the remaining cell components by low-speed centrifugation, the virus was precipitated using PEG (Skern et al., 1984). The titer determination of the virus suspension obtained in this way was carried out in the plaque test after an incubation at pH 4.5. After repeating this selection three times, 3 different mutants were isolated from plaques and then propagated in 1 l suspension cultures.

Neutralization assays

Für die Neutralisationsassays kann ein Hyperimmunserum gegen Wildtyp-HRV14 verwendet werden (z. B. ATCC VR-1124 AS/GP). Die Methode des Plaque-Neutralisations- Assays wurde bereits früher beschrieben (Skern et al., 1984). A hyperimmune serum can be used for the neutralization assays against wild-type HRV14 (e.g. ATCC VR-1124 AS / GP). The method of plaque neutralization Assays have been described previously (Skern et al., 1984).

Phase separation of HRV14

Säureresistente HRV14 Mutanten (HRV14-ar) und Wildtyp HRV14 (HRV14-wt) wurden in vivo mit 35S-Methionin markiert und gereinigt (Neubauer et al., 1987). Etwa 10 000 cpm 35S-markiertes Virus wurden bei verschiedenen pH-Werten zwischen 3,2 und 7,5 20 Min. bei 0°C in 300 µl PBS inkubiert (pH-Einstellung mittels 0,5M Na-Azetat Puffer). Sodann wurde mit 0,5M kaltem Tris neutralisiert und mit 100 µl mit Puffer gesättigtem Triton X-114 bei 0°C gemischt (Bordier, 1981). Die Phasentrennung erfolgte bei 37°C (Madshus et al., 1984). Die wäßrige und die Tritonphase wurden in einem Flüssigszintillationszähler ausgezählt.Acid-resistant HRV14 mutants (HRV14-ar) and wild type HRV14 (HRV14-wt) were in vivo with 35S methionine marked and cleaned (Neubauer et al., 1987). Approximately 10,000 cpm of 35S-labeled virus were found in different pH values between 3.2 and 7.5 20 min. incubated at 0 ° C in 300 µl PBS (pH adjustment using 0.5M Na acetate buffer). Then with 0.5M neutralized cold Tris and with 100 µl with buffer saturated Triton X-114 mixed at 0 ° C (Bordier, 1981). The phases were separated at 37 ° C (Madshus et al., 1984). The aqueous and the triton phase were counted in a liquid scintillation counter.

Synthesis and cloning of the HRV14 cDNA

Die Präparation der viralen RNA aus gereinigtem Virus erfolgte wie schon früher beschrieben (Skern et al., 1984). Synthese und Klonierung der doppelsträngigen DNA wurde wie bei Düchler et al. (1989) beschrieben durchgeführt, außer daß PstI-Linker an die cDNA ligiert wurden. Nach einem Verdau mit PstI wurde die cDNA in die PstI Stelle von pSP72 (Promega, Wisconsin) kloniert. Die PstI Schnittstelle des Vektors wurde vorher mit intestinaler Kalbsphosphatase behandelt. Als E.coli Stamm wurde JM 109 verwendet. The preparation of viral RNA from purified virus was carried out as previously described (Skern et al., 1984). Synthesis and cloning of the double-stranded DNA was, as in Düchler et al. (1989) performed, except that PstI linker to the cDNA were ligated. After digestion with PstI, the cDNA in the PstI site of pSP72 (Promega, Wisconsin) cloned. The PstI interface of the vector was previously treated with intestinal calf phosphatase. JM 109 was used as the E. coli strain.

Analysis and sequencing of the cDNA clones

Die Sequenzierung der präparierten rekombinanten DNA erfolgte nach der Didesoxymethode (Sanger et al., 1977) mit T7 DNA Polymerase (Pharmacia). Mit Hilfe der Programme von Staden (1980) und eines modifizierten Programmes von Isono (1982) wurden die ermittelten DNA Sequenzen analysiert. Sequencing of the prepared recombinant DNA was carried out according to the dideoxy method (Sanger et al., 1977) with T7 DNA polymerase (Pharmacia). With the help of Programs by Staden (1980) and a modified one Programs of Isono (1982) were the determined DNA Sequences analyzed.

CREDENTIALS

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Claims

1. Human rhinovirus, characterized in that it is acid-resistant and infectious.

2. Human rhinovirus according to claim 1, characterized characterized as being a mutant of the serotype 14 is.

3. Human rhinovirus according to one of claims 1 or 2, characterized in that a Mutation in the area of the VP1 region (Asn 100 → Ile) and / or one in the area of the VP2 region (Thr 17 → Ile) is localized.

4. Human rhinovirus according to one of claims 1 or 2, characterized in that a Mutation in the area of the VP1 region (Asn 101 → Glu) and / or one in the area of the VP2 region (Thr 17 → Ile) is localized.

5. DNA, all or part of the viral RNA viral RNA of human rhinovirus after a of claims 1 to 4 accordingly.

6. oligopeptide, characterized in that it is of the DNA is encoded according to claim 5.

7. Process for making a human Rhinovirus according to one of claims 1 to 4, characterized in that wild type HRV at pH <5, preferably incubated at pH 4.5, then adjusted to pH approx. 7 and is increased, this cycle several times, preferably repeated three times and so generated mutants are isolated.

8. Human rhinovirus according to one of claims 1 to 4 for use as a medicine.