DE3921702A1

DE3921702A1 - New dye resins for affinity chromatography - prepd. from reactive dye and macroporous acrylic resin

Info

Publication number: DE3921702A1
Application number: DE19893921702
Authority: DE
Inventors: Reinhold Dipl Chem Dr Klipper; Joachim Dipl Chem Dr Wolff; Harold Dipl Chem Dr Heller; Peter Dipl Chem Dr Lange; Alfred Dipl Chem Dr Mitschker; Rudolf Dipl Chem Dr Wagner
Original assignee: Bayer AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 1989-07-01
Filing date: 1989-07-01
Publication date: 1991-01-10

Abstract

New dye resins (I) are prepd. by reacting a reactive dye (II) with beads of a macroporous resin (III) selected from (a) poly(meth)acrylate esters opt. substd. by epoxy, OH and/or NH gps. and (b) poly(meth)acrylamides, opt. substd. by NH or OH gps. (II) is a dye contg. a halogenated N-heterocyclic gp., e.g. dichlorotriazine, trifluoro-chloropyrimidine or 2,3-dichloroquinoxaline. USE/ADVANTAGE - (I) are useful as adsorbents for affinity chromatography, e.g. for sepn. of amino acids or proteins. They have high ligand specificity and good chemical, thermal and mechanical stability.

Description

Die Erfindung betrifft neue Farbstoffharze, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Adsorbentien für die Affinitätschromatographie.The invention relates to new dye resins, processes for their preparation and their use as adsorbents for affinity chromatography.

Unter Farbstoffharzen werden auf dem Gebiet der Affinitätschromatographie Kondensationsprodukte aus natürlichen oder synthetischen hochmolekularen Verbindungen (Harzen) und Reaktivfarbstoffen verstanden. Diese Farbstoffharze haben in den letzten Jahren zunehmend an Bedeutung als Adsorbentien für die Affinitätschromatographie erlangt, z. B. für die Auftrennung von Protein-Gemischen in die verschiedenen Proteine oder die Isolierung einzelner Proteine aus Proteingemischen (siehe z. B. Laborpraxis, Nov. 1983, S. 1106 ff). Dye resins are in the field of affinity chromatography Condensation products from natural or synthetic high molecular compounds (Resins) and reactive dyes understood. These dye resins have become increasingly important in recent years as adsorbents for affinity chromatography acquired, e.g. B. for the separation of protein mixtures into the different proteins or the isolation individual proteins from protein mixtures (see e.g. Laborpraxis, Nov. 1983, p. 1106 ff).

Die Harze dienen als feste Träger für die als Liganden wirkenden Farbstoffmoleküle. Als feste Träger wurden bislang für die Farbstoffharze vorgeschlagen: Dextrane [siehe J. Chromatogr. 69, 209 (1972)], ferner Agarose, Sepharose, Polyacrylamide und Aminogruppen aufweisende Ionenaustauscher auf Acrylharz-Basis (siehe DE-OS 24 43 119) und auf Basis von Polystyrol (siehe DE-OS 26 19 451 und 26 19 521).The resins serve as solid carriers for the dye molecules acting as ligands. So far, the following have been proposed as solid supports for the dye resins: dextrans [see J. Chromatogr. 69, 209 (1972) ], also agarose, sepharose, polyacrylamides and amino groups-containing ion exchangers based on acrylic resin (see DE-OS 24 43 119) and based on polystyrene (see DE-OS 26 19 451 and 26 19 521).

Die unter Verwendung der hochmolekularen Verbindungen auf Basis von Cellulose-Derivaten wie Dextranen, Agarose oder Sepharose oder aber vernetzten Polyacrylamidgelen hergestellten Farbstoffharze haben den Nachteil zu geringer chemischer, thermischer und mechanischer Stabilität (siehe z. B. die Angaben in Protides of Biological Fluids, 27th Colloquium 1979, Pergamon Press, Oxford and New York, 1979, Seite 809). Die Stabilität dieser Harze reicht für eine Verwendung im Labormaßstab, z. B. in Forschung und Analytik, aus. Für Trennungen im technischen Maßstab, wo von den Harzen in den Trennkolonnen Standzeiten von mehreren Jahren verlangt werden und wo die Harze mehrere hundert Regenerationen aushalten müssen, kommen diese Farbstoffharze nicht in Betracht.That using the high molecular weight compounds based on cellulose derivatives such as dextrans, agarose or Sepharose or cross-linked polyacrylamide gels Dye resins produced have the disadvantage of being less chemical, thermal and mechanical stability (see e.g. the information in Protides of Biological Fluids, 27th Colloquium 1979, Pergamon Press, Oxford and New York, 1979, page 809). The stability of these resins sufficient for use on a laboratory scale, e.g. B. in research and analytics. For separations in technical Benchmark where the resin lives in the separation columns of several years and where the Resins have to endure hundreds of regenerations these dye resins are out of the question.

Die in der DE-OS 24 43 119 genannten Farbstoffharze, die als feste Träger Aminogruppen aufweisende Anionenaustauscher auf Acrylharz-Basis enthalten, weisen zwar eine verbesserte chemische und mechanische Stabilität auf. Nachteilig an diesen durch Umsetzung von Reaktivfarbstoffen mit handelsüblichen Anionenaustauschern auf Polyacrylharz-Basis erhaltenen Farbstoffharzen ist jedoch, daß ihre Spezifität, zumindest für bestimmte Trennungen, nur gering ist. The dye resins mentioned in DE-OS 24 43 119, the anion carriers having solid amino groups contain on an acrylic resin basis, have a improved chemical and mechanical stability. A disadvantage of these by reacting reactive dyes with commercially available anion exchangers Polyacrylic resin-based dye resins, however, is that their specificity, at least for certain separations, is only minor.

In den DE-OS 26 19 451 und 26 19 521 werden außer Agarose, quervernetztem Dextran, Zellulose und Polyacrylamid aminomethylierte Styrole als polymere Träger für Farbstoffharze vorgeschlagen, z. B. die makroporösen Harze NKZ 2 und NKZ 4, der schwachbasische gelförmige Anionenaustauscher Amberlite IR 45 und der starkbasische makroporöse Anionenaustauscher Lewatit MP 600. Bei diesen Styrolharzen handelt es sich um relativ schwach, mit etwa 5 bis 8 Gew.-% Divinylbenzol vernetzte Anionenaustauscher. Außerdem verleiht die Styrol-Divinylbenzol- Matrix den Farbstoffharzen einen ausgeprägt hydrophoben Charakter. Auch diese, sich von aminomethylierten vernetzten Polystyrolen ableitenden Farbstoffharze haben den Nachteil, daß sie für viele Trennungen eine unzureichende Spezifität aufweisen.In DE-OS 26 19 451 and 26 19 521 in addition to agarose, cross-linked dextran, cellulose and polyacrylamide aminomethylated styrenes as polymeric carriers for Dye resins suggested, e.g. B. the macroporous Resins NKZ 2 and NKZ 4, the weakly basic gel-like Anion exchanger Amberlite IR 45 and the strongly basic macroporous anion exchanger Lewatit MP 600. bei these styrenic resins are relatively weak, anion exchangers crosslinked with about 5 to 8% by weight of divinylbenzene. In addition, the styrene-divinylbenzene Matrix gives the dye resins a distinctly hydrophobic Character. These too, crosslinked from aminomethylated Polystyrene-derived dye resins the disadvantage that they are insufficient for many separations Show specificity.

Es wurde nun gefunden, daß man Farbstoffharze hoher chemischer thermischer und mechanischer Stabilität und mit wesentlich verbesserten Trenneigenschaften erhält, wenn man als feste Träger für die Reaktivfarbstoffe statt der üblichen aminogruppenhaltigen Anionenaustauscher auf Acrylharz-Basis makroporöse Perlpolymerisate von gegebenenfalls Epoxy-, OH- und/oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylsäureestern oder OH- oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylamiden verwendet.It has now been found that high chemical dye resins thermal and mechanical stability and with receives significantly improved separation properties if one as a solid support for the reactive dyes instead of usual anion group-containing anion exchanger Acrylic resin-based macroporous polymer beads from where appropriate Epoxy, OH and / or basic -NH groups Poly (meth) acrylic acid esters or OH or basic -NH groups containing poly (meth) acrylamides used.

Die Spezifität der Farbstoffharze wird zwar in hohem Maße von den als Liganden verwendeten Reaktivfarbstoffen bestimmt. Es wurde jedoch gefunden, daß diese durch den Farbstoff-Liganden bestimmte Spezifität erheblich durch die Struktur beeinflußt wird. The specificity of the dye resins is high Dimensions of the reactive dyes used as ligands certainly. However, it has been found that this by the Dye ligands determined by specificity significantly the structure is affected.

Es wurde gefunden, daß die Spezifität der Farbstoffharze merklich erhöht wird, wenn der Farbstoff an eine makroporöse Matrix aus vernetzten perlpolymerisierten Poly- (meth-)acrylsäureestern oder Poly-(meth-)acrylamiden gebunden ist. Diese makroporösen Farbstoffharze zeichnen sich gegenüber den bekannten Farbstoffharzen mit festen Trägern auf Acrylharz- oder Polystyrolharz-Basis durch eine wesentlich verbesserte Trennleistung aus. Mit Hilfe der erfindungsgemäßen, eine makroporöse Polyacrylharz- Matrix aufweisenden Farbstoffharzen lassen sich noch Gemische von Aminosäuren in einzelne Aminosäuren zerlegen, die mit bekannten Farbstoffharzen nicht mehr trennbar sind.It has been found that the specificity of the dye resins is noticeably increased when the dye is close to a macroporous Crosslinked, bead-polymerized polymer matrix (meth) acrylic acid esters or poly (meth) acrylamides is. Draw these macroporous dye resins compared to the known dye resins with solid Carriers based on acrylic resin or polystyrene resin a significantly improved separation performance. With help the macroporous polyacrylic resin Mixtures containing matrix resins can still be mixed break down from amino acids into individual amino acids, which can no longer be separated with known dye resins are.

Die Erfindung betrifft daher Farbstoffharze auf Basis von Kondensationsprodukten von Reaktivfarbstoffen mit festen Trägern auf Acrylharzbasis; die Farbstoffharze sind dadurch gekennzeichnet, daß sie Kondensationsprodukte von Reaktivfarbstoffen mit makroporösen Perlpolymerisaten von gegebenenfalls Epoxy-, OH- und/oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylsäureestern oder OH- oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylamiden sind.The invention therefore relates to dye resins based of condensation products with reactive dyes solid supports based on acrylic resin; the dye resins are characterized in that they are condensation products of reactive dyes with macroporous polymer beads of optionally epoxy, OH and / or basic -NH groups having poly (meth) acrylic acid esters or having OH or basic -NH groups Are poly (meth) acrylamides.

Bei der Kondensation der Reaktivfarbstoffe mit den makroporösen Perlpolymerisaten von Epoxy-, OH- und/oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylsäureestern oder OH- oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylamiden reagieren die Abgangsgruppen der Reaktivfarbstoffe mit den Epoxiden, OH-, den basischen -NH- und überraschenderweise bei Poly-(meth-) acrylsäurealkylestern, die weder eine OH- noch eine basische -NH-Gruppe aufweisen, auch mit den Alkylester- Gruppen der Perlpolymerisate unter Abspaltung der Abgangsgruppe des Reaktivfarbstoffes und der Ausbildung einer covalenten Bindung zwischen Harz und Reaktivfarbstoff- Rest (Reaktivfarbstoff-Rest=der nach Abspaltung der Abgangsgruppe verbleibende Rest des Reaktivfarbstoffmoleküls, nämlich Chromophor+elektrophile Gruppe).In the condensation of the reactive dyes with the macroporous polymer beads of epoxy, OH and / or basic -NH groups poly- (meth-) acrylic acid esters or having OH or basic -NH groups Poly- (meth-) acrylamides react the leaving groups of reactive dyes with the epoxides, OH, basic -NH- and surprisingly with poly- (meth-) acrylic acid alkyl esters which are neither OH nor have basic -NH group, also with the alkyl ester Groups of the bead polymers with the leaving group being split off of the reactive dye and the formation of a covalent bond between resin and reactive dye Remainder (reactive dye remainder = that after the Leaving group remaining residue of the reactive dye molecule, namely chromophore + electrophilic group).

Die erfindungsgemäßen Farbstoffharze kann man daher auch als makroporöse, durch Reste von Reaktivfarbstoffen substituierte, perlpolymerisierte, gegebenenfalls Epoxy-, OH- und/oder basische -NH-Gruppen aufweisende Poly- (meth-)acrylsäureester oder OH- oder basische -NH-Gruppen aufweisende Poly-(meth-)acrylamide beschreiben. Die basischen -NH-Gruppen können primäre oder sekundäre Aminogruppen sein.The dye resins according to the invention can therefore also be used as macroporous, substituted by residues of reactive dyes, bead polymerized, optionally epoxy, OH and / or basic -NH groups poly- (meth) acrylic acid ester or OH or basic -NH groups describe having poly (meth) acrylamides. The basic -NH groups can be primary or secondary amino groups be.

Die erfindungsgemäß als feste Träger für die Reaktionsfarbstoffe zu verwendenden makroporösen Poly-(meth-) acrylamid-Matrices könen gegebenenfalls zusätzlich zu Epoxy-, OH- und/oder basischen -NH-Gruppen noch Carboxylgruppen aufweisen. Diese Carboxylgruppen entstehen bei der Aminolyse der Poly-(meth-)acrylsäureester und -nitrile. Der Gehalt an Carboxylgruppen ist gering und beträgt allgemein nur etwa 0,2 Mol pro Liter Harz.According to the invention as solid carriers for the reaction dyes macroporous poly (meth) to be used acrylamide matrices can optionally be added Epoxy, OH and / or basic -NH groups or carboxyl groups exhibit. These carboxyl groups arise in the aminolysis of the poly (meth) acrylic acid esters and -nitrile. The content of carboxyl groups is low and is generally only about 0.2 moles per liter of resin.

Die für die besondere Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Farbstoffharze geltend gemachte Makroporosität der Poly- (meth-)acryl-Harze wird dadurch erzeugt, daß man die für die Herstellung der gegebenenfalls Epoxy-, OH- und/oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylamide erforderlichen monomeren (Meth-)Acrylsäureester oder (Meth-)Acrylnitrile mit 10 bis 88 Gew.-%, vorzugsweise 10 bis 50 Gew.-%, besonders bevorzugt 10 bis 35 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Monomeren, einer Polyvinylverbindung in Gegenwart von 30 bis 180 Gew.-%, vorzugsweise 30 bis 150 Gew.-%, besonders bevorzugt 40 bis 120 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Monomeren eines Porösmachers, perlpolymerisiert.The for the particular effectiveness of the invention Dye resins claimed macroporosity of poly (Meth) acrylic resins is produced by the the preparation of the optionally epoxy, OH and / or basic -NH groups poly- (meth-) acrylamides required monomeric (meth) acrylic acid ester or (Meth) acrylonitrile with 10 to 88 wt .-%, preferably 10 to 50% by weight, particularly preferably 10 to 35% by weight, based on the total weight of the monomers, a polyvinyl compound in the presence of 30 to 180% by weight, preferably 30 to 150 wt .-%, particularly preferably 40 to 120 wt .-%, based on the total weight of the monomers of a porosity maker, bead polymerized.

Durch die Verwendung der relativ großen Menge Polyvinylverbindung, für die Herstellung der handelsüblichen Anionenaustauscher auf Acrylharz-Basis werden die Polyvinylverbindungen nur in Mengen unter 10 Gew.-% eingesetzt, in Kombination mit den angegebenen Mengen an Porösmachern erhalten die erfindungsgemäß zu verwendenden Perlpolymerisate eine innere Struktur, die ihre besondere Eignung als feste Träger für Farbstoffharze bedingt.By using the relatively large amount of polyvinyl compound, for the production of commercially available anion exchangers The polyvinyl compounds are based on acrylic resin only used in amounts below 10% by weight, in combination with the specified amounts of porosity receive those to be used according to the invention Pearl polymers have an internal structure that is special Limited suitability as a solid support for dye resins.

Der Gehalt der erfindungsgemäßen Farbstoffharze an Reaktivfarbstoff beträgt mindestens 0,000001 Mol, vorzugsweise 0,000015 bis 0,15 Mol, besonders bevorzugt 0,00001 bis 0,12 Mol Reaktivfarbstoff je 100 g Farbstoffharz.The content of reactive dye in the dye resins according to the invention is at least 0.000001 moles, preferably 0.000015 to 0.15 mol, particularly preferably 0.00001 up to 0.12 mol of reactive dye per 100 g of dye resin.

Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Farbstoffharze. Die erfindungsgemäßen Farbstoffharze werden hergestellt, indem man das den Farbstoffharzen zugrundeliegende makroporöse Perlpolymerisat mit der wäßrigen Lösung des gewünschten Reaktivfarbstoffes bei erhöhter Temperatur, z. B. bei Temperaturen von 35 bis 100°C, vorzugsweise 45 bis 80°C, behandelt und dabei in der Farbstofflösung durch Zugabe von Basen, z. B. Alkalihydroxiden oder -carbonaten, einen pH-Wert <7, vorzugsweise einen pH-Wert von 8 bis 12, besonders bevorzugt einen pH-Wert von 9 bis 11, einstellt.The invention also relates to a method of manufacture the dye resins of the invention. The invention Dye resins are made by the macroporous bead polymer on which the dye resins are based with the aqueous solution of the desired reactive dye at elevated temperature, e.g. B. at temperatures from 35 to 100 ° C, preferably 45 to 80 ° C, treated and in the dye solution by adding of bases, e.g. B. alkali metal hydroxides or carbonates, one pH <7, preferably a pH of 8 to 12, particularly preferably sets a pH of 9 to 11.

Das makroporöse Perlpolymerisat wird dabei mit einem Überschuß an Farbstoff, bezogen auf die Farbstoffmenge (in Mol), die je Mol (Meth-)Acryl-(Ester oder Amid)- Einheit aufziehen sollen, behandelt.The macroporous bead polymer is with a Excess dye based on the amount of dye (in moles) per mole of (meth) acrylic (ester or amide) - Unity are treated.

Das Verhältnis Menge makroporöses Poly-(meth-)acryl-Harz (in Litern) zur Menge an Farbstoff-Lösung (in Litern) sollte, damit sich die Suspension des makroporösen Perlpolymerisats in der Farbstoff-Lösung gut rühren läßt, mindestens 1 : 1, vorzugsweise 1 : 2 bis 1 : 6, betragen.The ratio of the amount of macroporous poly (meth) acrylic resin (in liters) to the amount of dye solution (in liters) should, so that the suspension of the macroporous polymer beads can stir well in the dye solution, at least 1: 1, preferably 1: 2 to 1: 6.

Die Konzentration des Reaktivfarbstoffes in der Farbstoff- Lösung beträgt vorteilhaft 0,1 bis 300 g/l, vorzugsweise 1 bis 250 g/l, besonders bevorzugt 5 bis 200 g/l. Die vom Harz gebundene Menge an Reaktivfarbstoff wird durch Elementaranalyse bestimmt, z. B. bei Verwendung SO₃H-Gruppen-haltiger Reaktivfarbstoffe durch Bestimmung des Schwefelgehaltes des Harzes.The concentration of the reactive dye in the dye Solution is advantageously 0.1 to 300 g / l, preferably 1 to 250 g / l, particularly preferably 5 to 200 g / l. The amount of reactive dye bound by the resin is determined by elemental analysis, e.g. B. at Use of reactive dyes containing SO₃H groups by Determination of the sulfur content of the resin.

Die in den erfindungsgemäßen Farbstoffharzen als feste Träger verwendeten makroporösen Perlpolymerisate von gegebenenfalls Epoxy, OH- und/oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylsäureestern oder OH- oder basische -NH-Gruppen aufweisenden Poly-(meth-)acrylamiden sind wie folgt erhältlich: The solid in the dye resins of the invention Carriers used macroporous polymer beads from optionally epoxy, OH and / or basic -NH groups having poly (meth) acrylic acid esters or OH or basic -NH groups poly- (meth-) acrylamides are available as follows:

Zunächst wird durch radikalische Copolymerisation von (Meth-)Acrylsäureestern, z. B. (Meth-)Acrylsäurealkylestern, wie (Meth-)Acrylsäure-methyl-, -ethyl-, -n- propyl-, -sec.-butyl-, -n-hexyl- oder -glycidylester oder von (Meth-)Acrylnitril mit den angegebenen Mengen an Polyolefinen in Gegenwart der ebenfalls angegebenen Mengen Porösmacher ein Perlpolymerisat mit der gewünschten makroporösen Struktur hergestellt. Diese Copolymerisation wird in an sich bekannter Weise ausgeführt, indem man die den Suspensionsstabilisator enthaltende wäßrige Phase vorlegt und unter Rühren bei Raumtemperatur die organische Phase, bestehend aus Monovinylverbindung, Polyvinylverbindung, Porösmacher und Radikalbildner, zusetzt [siehe z. B. Seide, Malinsky, Dusetz, Heitz in "Advances of Polymer Sciences, Vol. 5, Seiten 113 ff. (1963)]. Das Polymerisationsgemisch wird 1 Stunde bei Raumtempertur gerührt, dann auf 60°C erwärmt, mehrere Stunden (etwa 10 bis 15 Stunden) bei dieser Temperatur gerührt, auf 80°C erwärmt und noch einmal einige Stunden (5 bis 6 Stunden) auch bei dieser Temperatur gerührt. Die bei der Polymerisation entstandene Suspension wird auf Raumtempratur abgekühlt und der Perlpolymerisat mechanisch abgetrennt und gründlich mit Wasser gewaschen.First, by radical copolymerization of (meth) acrylic acid esters, e.g. B. (meth) acrylic acid alkyl esters, such as (meth) acrylic acid methyl, ethyl, n-propyl, sec-butyl, n-hexyl or glycidyl ester or of (meth) acrylonitrile with the stated amounts of polyolefins in the presence of the stated amounts of porosity, a bead polymer with the desired macroporous structure. This copolymerization is carried out in a manner known per se by introducing the aqueous phase containing the suspension stabilizer and adding the organic phase, consisting of monovinyl compound, polyvinyl compound, porosifier and radical generator, with stirring at room temperature [see, for. B. Seide, Malinsky, Dusetz, Heitz in "Advances of Polymer Sciences, Vol. 5, pages 113 ff. (1963) ]. The polymerization mixture is stirred for 1 hour at room temperature, then heated to 60 ° C., stirred for several hours (about 10 to 15 hours) at this temperature, heated to 80 ° C. and again for a few hours (5 to 6 hours) at this temperature touched. The suspension formed during the polymerization is cooled to room temperature and the bead polymer is mechanically separated and washed thoroughly with water.

Die so erhaltenen makroporösen Poly-(meth-)acrylsäureester- Perlpolymerisate können gegebenenfalls durch Hydrolyse oder Aminolyse funktionalisiert werden. Die makroporösen Poly-(meth-)acrylnitril-Perlpolymerisate werden durch Aminolyse funktionalisiert. The macroporous poly (meth) acrylic acid ester Bead polymers can optionally by Hydrolysis or aminolysis can be functionalized. The macroporous poly (meth) acrylonitrile bead polymers are functionalized by aminolysis.

Durch Hydrolyse der Poly-(meth-)acrylsäureglycidylester werden zwei OH-Gruppen aufweisende Poly-(meth-)acrylsäureester, nämlich Poly-(meth-)acrylsäure-2,3-dihydroxypropylester, erhalten. Die Hydrolyse wird allgemein in der Weise ausgeführt, daß man die Perlpolymerisate in wäßriger Lösung entweder sauer, z. B. mit Schwefelsäure oder Salzsäure, oder alkalisch, mit Natronlauge, bei höherer Temperatur (etwa 60 bis 95°C) mehrere Stunden lang rührt.By hydrolysis of the poly (meth) acrylic acid glycidyl ester are two OH groups containing poly (meth) acrylic acid esters, namely 2,3- dihydroxypropyl poly (meth) acrylic acid, receive. The hydrolysis becomes general carried out in such a way that the bead polymers either acidic in aqueous solution, e.g. B. with sulfuric acid or hydrochloric acid, or alkaline, with sodium hydroxide solution, at a higher temperature (about 60 to 95 ° C) for several hours long stirring.

Durch Aminolyse der Poly-(meth-)acrylsäureglycidylester werden OH- und basische -NH-Gruppen aufweisende Poly- (meht-)acrylsäureester, nämlich Poly-(meth-)acrylsäure- vic-hydroxyamino-propylester, erhalten. Die Aminolyse kann mit Ammoniak, Mono- oder Polyaminen vorgenommen werden. Die Aminolyse wird in der Weise ausgeführt, daß man das Perlpolymerisat in wäßrige Ammoniak- oder Amin- Lösung einträgt und das Gemisch mehrere Stunden bei Temperaturen von 70 bis 220°C rührt.By aminolysis of the poly (meth) acrylic acid glycidyl ester are OH- and basic -NH groups poly- (poly) acrylic acid esters, namely poly (meth) acrylic acid vic-hydroxyamino-propyl ester, obtained. Aminolysis can be made with ammonia, mono- or polyamines will. The aminolysis is carried out in such a way that the bead polymer in aqueous ammonia or amine Solution enters and the mixture for several hours Temperatures from 70 to 220 ° C stirred.

Für die Aminolyse der Poly-(meth-)acrylnitrile werden vorzugsweise Polyamine vewendet, und es werden basische -NH-Gruppen aufweisende Poly-(meth-)acrylamide erhalten. Die Aminolyse der Poly-(meth-)acrylnitrile wird allgemein in der Weise ausgeführt, daß man das Perlpolymerisat in die wäßrige Lösung des Polyamins einträgt und das Gemisch etwa 15 bis 20 Stunden bei Temperaturen von 70 bis 220°C rührt.For the aminolysis of the poly (meth) acrylonitriles preferably polyamines are used and they become basic -NH groups containing poly (meth) acrylamides. The aminolysis of poly (meth) acrylonitriles becomes general carried out in such a way that the bead polymer enters in the aqueous solution of the polyamine and the mixture for about 15 to 20 hours at temperatures of 70 to 220 ° C stirs.

Als bevorzugter Vertreter der für die Aminolyse zu verwendenden Polyamine seien besipielsweise genannt: Alkylendiamine wie Ethylendiamin, Propylendiamin-1,3, N,N- Bis-(2-hydroxyethyl)-propylendiamin-1,3, Hexamethylendiamin und Polyalkylenpolyamine wie Diethylentriamin, N-Methyl-di-(3-aminopropyl)-amin und Triethyltetramin.As a preferred representative of those to be used for aminolysis Examples include polyamines: alkylenediamines such as ethylenediamine, 1,3-propylenediamine, N, N- Bis (2-hydroxyethyl) propylenediamine-1,3, hexamethylene diamine and polyalkylene polyamines such as diethylene triamine, N-methyl-di- (3-aminopropyl) amine and triethyltetramine.

Als bevorzugter Vertreter der für die Aminolyse zu verwendenden Monoamine seien vor allem Aminoalkohole wie Aminoethanol, Glukosamin und N-Methylglucamin genannt.As a preferred representative of those to be used for aminolysis Monoamines are primarily amino alcohols such as Aminoethanol, glucosamine and N-methylglucamine called.

Zum Aufbau der in den erfindungsgemäßen Farbstoffharzen verwendeten makroporösen Poly-(meth-)acrylharze werden als Polyvinylverbindungen vor allem Dinvinylverbindungen, und zwar aromatische Divinylverbindungen wie Divinylbenzol, Divinyltoluol, Divinylnaphthalin und Diallylphthalat, aliphatische Divinylverbindungen wie Hexadien-1,5, 2-Methyl-hexadien-1,5, 2,5-Dimethyl-hexadien-1,5, Heptadien- 1,6, Octadien-1,7, Glykoldivinylether, Diethylenglykol- divinylether, N,N′-Methylendiacrylamid, N,N′-Methylendimethacrylamid, N,N′-Ethylendiacrylamid, Diallylmaleat, Divinylethylenharnstoff und Divinylpropylenharnstoff, Trivinylverbindungen wie Trivinylbenzol und Glycerintrivinylether, verwendet. Vorzugsweise werden Divinylbenzol, Heptadien-1,6 und Octadien-1,7 oder Kombinationen dieser drei Verbindungen eingesetzt.To build up the dye resins in the invention macroporous poly (meth) acrylic resins used as polyvinyl compounds, especially dinvinyl compounds, namely aromatic divinyl compounds such as divinylbenzene, Divinyltoluene, divinylnaphthalene and diallyl phthalate, aliphatic divinyl compounds such as hexadiene-1,5, 2-methyl-hexadiene-1,5, 2,5-dimethyl-hexadiene-1,5, heptadiene- 1,6, octadiene-1,7, glycol divinyl ether, diethylene glycol divinyl ether, N, N'-methylenediacrylamide, N, N'-methylenedimethacrylamide, N, N′-ethylenediacrylamide, diallyl maleate, Divinylethylene urea and divinyl propylene urea, Trivinyl compounds such as trivinylbenzene and Glycerol trivinyl ether used. Preferably be Divinylbenzene, heptadiene-1,6 and octadiene-1,7 or Combinations of these three connections are used.

Als Porösmacher werden die aus der Herstellung makroporöser Ionenaustauscher-Matrices bekannten Porösmacher verwendet. Es sind dies organische Verbindungen, die sich im Monomeren lösen, aber das Polymere ausfällen und gegebenenfalls anquellen (Fällmittel bzw. Quellmittel für das Polymere), z. B. aliphatische Kohlenwassertoffe wie Isododecan, Octan, Decan, Dodecan, Cyclohexan; alkylsubstituierte aromatische Kohlenwasserstoffe wie Toluol; C₄-C₁₄-Alkohole wie Hexanol, Cyclohexanol, Octanol, Decanol und Methylisobutylcarbinol, aliphatische und aromatische Chlorkohlenwasserstoffe wie 1,1,1-Trichlorethan, Ethylenchlorid, Chlorbenzol und o-Dichlorbenzol oder C₁-C₈-Carbonsäureester wie Essigsäureethylester, Essigsäurebutylester und Stearinsäusreamylester.As porosity makers, those from the manufacture become more macroporous Ion exchange matrices known porosity used. These are organic compounds that dissolve in the monomer, but the polymer precipitates and if necessary swell (precipitant or swelling agent for the polymer), e.g. B. aliphatic hydrocarbons such as isododecane, octane, decane, dodecane, cyclohexane; alkyl substituted aromatic hydrocarbons such as Toluene; C₄-C₁₄ alcohols such as hexanol, cyclohexanol, octanol, Decanol and methylisobutylcarbinol, aliphatic and aromatic chlorinated hydrocarbons such as 1,1,1-trichloroethane, Ethylene chloride, chlorobenzene and o-dichlorobenzene or C₁-C₈ carboxylic acid esters such as ethyl acetate, Butyl acetate and stearic acid methyl ester.

Die Porösmacher werden nach der Herstellung des Perlpolymerisats durch Verdampfen oder Elution wieder aus diesen entfernt.The porosizers are after the production of the bead polymer by evaporation or elution removed this.

Die Umsetzung der Reaktivfarbstoffe mit den erfindungsgemäß zu verwendenden makroporösen Perlpolymerisaten erfordert kerine besonders reaktionsfähigen Reaktivgruppen, sondern verläuft ohne Schwierigkeiten mit beliebigen Reaktivgruppen. Bewährt hat sich die Verwendung von Reaktivfarbstoffen, die als Reaktivgruppe halogenierte, vorzugsweise 6gliedrige N-Heterocyclen, z. B. eine Dichlortriazin- eine Trifluor-chlor-pyrimidin- oder eine 2,3- Dichlorchinoxalin-Gruppe aufweisen.The reaction of the reactive dyes with the invention macroporous polymer beads to be used kerine particularly reactive reactive groups, but runs without difficulty with any reactive groups. The use of reactive dyes has proven itself halogenated as a reactive group, preferably 6-membered N-heterocycles, e.g. B. a dichlorotriazine a trifluoro-chloropyrimidine or a 2,3- Have dichloroquinoxaline group.

Aber auch Reaktivfarbstoffen mit nicht heterocyclischen Reaktivgruppen, z. B. der β-Chlorethylsulfonyl-Gruppe, sind erfolgreich verwendbar.But also reactive dyes with non-heterocyclic Reactive groups, e.g. B. the β-chloroethylsulfonyl group, can be used successfully.

Voraussetzung für die Verwendbarkeit der Reaktivfarbstoffe für die Herstellung der erfindungsgemäßen Farbstoffharze ist lediglich, daß die Farbstoffe wasserlöslich sind, d. h., wasserlöslich machende Gruppen wie Sulfogruppen, Carboxylgruppen oder Phosphonsäuregruppen aufweisen. Vorzugsweise werden Farbstoffe mit Sulfonsäuregruppen verwendet.Prerequisite for the usability of the reactive dyes for the production of the dye resins according to the invention is only that the dyes are water soluble are, d. i.e. water-solubilizing groups such as sulfo groups, Carboxyl groups or phosphonic acid groups exhibit. Dyes with sulfonic acid groups are preferred used.

Die chromophoren Gruppen der Reaktivfarbstoffe können den verschiedenartigsten Klassen angehören, z. B. der Reihe der metallfreien oder metallhaltigen Mono- oder Polyazofarbstoffe, metallfreien oder metallhaltigen Azaporphinfarbstoffe wie Kupfer-, Kobalt- oder Nickelphthalocyaninfarbstoffe, der Anthrachinon-, Oxazin-, Dioxazin-, Triphenylmethan-, Nitro- oder Azomethin- Farbstoffe oder der Reihe der metallfreien oder metallhaltigen Formazanfarbstoffe.The chromophoric groups of the reactive dyes can belong to the most diverse classes, e.g. B. the Series of metal-free or metal-containing mono- or Polyazo dyes, metal-free or metal-containing azaporphine dyes such as copper, cobalt or nickel phthalocyanine dyes, the anthraquinone, oxazine, Dioxazine, triphenylmethane, nitro or azomethine Dyes or the series of metal-free or metal-containing Formazan dyes.

Die Erfindung betrifft ferner die Verwendung der erfindungsgemäßen Farbstoffharze für die Affinitätschromatographie. Für die affinitätschromatographische Trennung eines Proteingemisches wird z. B. eine übliche Chromatographiesäule mit der Suspension eines der erfindungsgemäßen Farbstoffharze in einer Pufferlösung aus Trishydroxyethylaminhydrochlorid/HCl beschickt. Die Lösung des zu trennenden Proteingemisches wird auf die Säule gegeben; anschließend wird die Säule mit Pufferlösung eluiert. Das Eluat wird fraktionsweise aufgefangen und die einzelnen Fraktionen analytisch untersucht.The invention further relates to the use of the invention Dye resins for affinity chromatography. For the affinity chromatographic separation a protein mixture is e.g. B. a conventional chromatography column with the suspension of one of the invention Dye resins in a buffer solution made from trishydroxyethylamine hydrochloride / HCl loaded. The solution of the protein mixture to be separated is placed on the column; then the column is eluted with buffer solution. The eluate is collected in fractions and the individual groups analyzed analytically.

Example 1

a) 100 ml eines makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat- Divinylbenzol-Copolymerisats, das durch Perlpolymerisation von 2,057 g Glycidylmethacrylat, 94,3 g technischem (=63,6%igem) Divinylbenzol in Gegenwart von 450 g Methylisobutylketon erhalten worden war, werden in 500 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 20 g einer wäßrigen 15gew.-%igen Lösung des Farbstoffes Levafix Brillantblau EBRA zu, rührt 30 Minuten nach, stellt den pH-Wert mit 5gew.-%iger Natronlauge auf 9,0 ein und erwärmt auf 50°C. Die Suspension wird bei pH 9 zwei Stunden bei 50°C, 2 Stunden bei 65°C und 2 Stunden bei 75°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser gründlich gewaschen. Man erhält 96 ml eines blauen Perlpolymerisats.a) 100 ml of a macroporous, pearl-shaped glycidyl methacrylate Divinylbenzene copolymer, the by bead polymerization of 2.057 g glycidyl methacrylate, 94.3 g technical (= 63.6%) divinylbenzene in the presence of 450 g of methyl isobutyl ketone had been obtained, desalted in 500 ml Water entered and 30 minutes at room temperature touched. Then give 20 g of an aqueous 15% by weight solution of the Levafix dye Brilliant blue EBRA, stir for 30 minutes, provide the pH with 5% by weight sodium hydroxide solution to 9.0 and heated to 50 ° C. The suspension is at pH 9 two hours at 50 ° C, 2 hours at 65 ° C and Stirred at 75 ° C for 2 hours. After cooling down the resin thoroughly washed with water. You get 96 ml of a blue bead polymer.

Example 2

a) 500 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1250 ml 10gew.- %iger Schwefelsäure eingetragen. Der Ansatz wird auf 80°C erhitzt und weitere 6 Stunden bei 80°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz auf einer Nutsche mit entsalztem Wasser ausgewaschen. Nach spektroskopischen Untersuchungen (FTIR) wurde die Epoxidgruppe zu -CH(OH)-CH₂(OH)-Gruppen umgesetzt. a) 500 ml of the in Example 1 (a) The macroporous, pearl-like glycidyl methacrylate-divinylbenzene copolymer used is introduced into 1250 ml of 10% by weight sulfuric acid. The mixture is heated to 80 ° C. and stirred at 80 ° C. for a further 6 hours. After cooling, the resin is washed out on a suction filter with deionized water. After spectroscopic investigations (FTIR) the epoxy group became -CH (OH) -CH₂ (OH) groups implemented.

b) 50 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 400 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Der pH-Wert wird mit 20gew.-%iger Natronlauge auf pH 8 eingestellt.b) 50 ml of the resin obtained in (a) are in 400 ml of demineralized water entered and 30 minutes stirred at room temperature. The pH is with 20 wt .-% sodium hydroxide solution adjusted to pH 8.

Dann gibt man 100 g Farbstofflösung Levafix Brillantblau PNRL fl., 40gew.-%ig, zu und rührt 1 Stunde bei Raumtemperatur und pH 8 nach. Anschließend wird der pH-Wert der Suspension mit 20gew.- %iger Natronlauge auf 10 eingestellt, die Suspension auf 45°C erwärmt und weitere 3 Stunden bei pH 10 und 45°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz gründlich mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 52 ml eines blau gefärbten Perlpolymerisats.Then 100 g of Levafix dye solution are added Brilliant blue PNRL fl., 40 wt .-%, and stir 1 hour at room temperature and pH 8. Subsequently the pH of the suspension is 20 wt. % sodium hydroxide solution set to 10, the suspension heated to 45 ° C and a further 3 hours at pH 10 and 45 ° C stirred. After cooling, it will Wash resin thoroughly with deionized water. Man receives 52 ml of a blue colored bead polymer.

Example 3

a) 1000 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1400 ml einer wäßrigen Lösung, die 20 Gew.-% Hexamethylendiamin enthält, eingetragen. Die Suspension wird im Autoklaven innerhalb von 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden lang bei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser gewaschen. Man erhält 1050 ml Harz mit einem Stickstoffgehalt von 8,15 Gew.-%. Nach spektroskopischen Untersuchungen (FTIR) wurde die Epoxidgruppe im Ausgangsharz zu einem hohen Anteil zu 2-Hydroxy-3- aminohexamethylenaminpropyl-Gruppen umgesetzt. a) 1000 ml of the in Example 1 (a) The macroporous, pearl-shaped glycidyl methacrylate-divinylbenzene copolymer used is introduced into 1400 ml of an aqueous solution which contains 20% by weight of hexamethylene diamine. The suspension is heated in an autoclave to 200 ° C. in the course of 2 hours and stirred at 200 ° C. for a further 20 hours. After cooling, the resin is washed with water. 1050 ml of resin with a nitrogen content of 8.15% by weight are obtained. According to spectroscopic investigations (FTIR), the epoxy group in the starting resin was converted to a high proportion to 2-hydroxy-3-aminohexamethylene amine propyl groups.

b) 220 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 500 ml entsalztes Wasser eingetragen und 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 150 g einer wäßrigen 15gew.-%igen Lösung des Farbstoffes Levafix Brillantblau EBRA zu, rührt 30 Minuten bei Raumtemperatur, stellt den pH-Wert der Suspension mit 5gew.-%iger Natronlauge auf 10 ein und erwärmt dann auf 45°C. Es wird eine weitere Stunde bei 45°C gerührt, dann auf 71°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 71°C und pH 10 gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser gewaschen. Man erhält 220 ml eines blau gefärbten Perlpolymerisats mit einem Stickstoffgehalt von 7,88 Gew.-% und einem Schwefelgehalt von 1,10 Gew.-%.b) 220 ml of the resin obtained in (a) are in 500 ml of demineralized water entered and 1 hour stirred at room temperature. Then you give 150 g an aqueous 15% by weight solution of the dye Levafix Brilliant Blue EBRA, stir in for 30 minutes Room temperature, sets the pH of the suspension to 5 with 5% by weight sodium hydroxide solution and heated then to 45 ° C. It gets another hour at 45 ° C stirred, then heated to 71 ° C and another 2 hours stirred at 71 ° C and pH 10. After cooling the resin is washed with water. 220 ml are obtained of a blue colored polymer with one Nitrogen content of 7.88% by weight and a sulfur content of 1.10% by weight.

Example 4

a) 1000 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1400 ml einer wäßrigen Lösung, die 25 Gew.-% Diethylentriamin enthält, eingetragen. Die Suspension wird im Autoklaven innerhalb von 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden dabei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser gewaschen. Man erhält 1140 ml Perlpolymerisat mit einem Stickstoffgehalt von 8,03 Gew.-%. Nach spektroskopischen Untersuchungen (FTIR) wurde die Epoxidgruppe in die 3-Diethylentriamino-2-hydroxypropyl- Gruppe überführt. a) 1000 ml of the in Example 1 (a) macroporous, pearl-shaped glycidyl methacrylate-divinylbenzene copolymer used are introduced into 1400 ml of an aqueous solution which contains 25% by weight of diethylene triamine. The suspension is heated in an autoclave to 200 ° C. in the course of 2 hours and stirred at 200 ° C. for a further 20 hours. After cooling, the resin is washed with water. 1140 ml of bead polymer with a nitrogen content of 8.03% by weight are obtained. After spectroscopic investigations (FTIR) the epoxy group was transferred to the 3-diethylenetriamino-2-hydroxypropyl group.

b) 50 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 1000 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 125 g wäßrige Levafix Brillantblau PN-RL 40gew.-%ige Lösung zu, rührt eine weitere Stunde bei Raumtemperatur und stellt dann den pH-Wert mit 5 Gew.- %iger Natronlauge auf pH 10 ein.b) 50 ml of the resin obtained in (a) are in 1000 ml of demineralized water entered and 30 minutes stirred at room temperature. Then you give 125 g aqueous Levafix brilliant blue PN-RL 40% by weight Solution, stir for another hour at room temperature and then adjust the pH with 5 wt. % sodium hydroxide solution to pH 10.

Die Suspension wird anschließend auf 50°C erwärmt, weitere 2 Stunden bei 50°C gerührt, dann auf 70°C erwärmt, weitere 2 Stunden bei 70°C gerührt und anschließend 1 Stunde bei 85°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 350 ml eines blau gefärbten Perlpolymerisats.The suspension is then heated to 50 ° C. stirred for a further 2 hours at 50 ° C, then to 70 ° C warmed, stirred at 70 ° C for a further 2 hours and then stirred at 85 ° C for 1 hour. After this The resin is cooled with deionized water washed. 350 ml of a blue colored are obtained Bead polymer.

Example 5

a) 1000 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1400 ml einer wäßrigen Lösung, die 20 Gew.-% Ehtylendiamin enthält, eingetragen. Die Suspension wird im Autoklaven in 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden bei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Perlpolymerisat mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 1180 ml Perlpolymerisat. Nach spektroskopischen Untersuchungen (FTIR) enthält das Harz 2-Hydroxy-3-(β-aminoethyl)-amino-propyl- Gruppen. a) 1000 ml of the in Example 1 (a) macroporous, pearl-shaped glycidyl methacrylate-divinylbenzene copolymer used are introduced into 1400 ml of an aqueous solution which contains 20% by weight of ethylenediamine. The suspension is heated in an autoclave to 200 ° C. in 2 hours and stirred at 200 ° C. for a further 20 hours. After cooling, the bead polymer is washed with deionized water. 1180 ml of bead polymer are obtained. According to spectroscopic investigations (FTIR), the resin contains 2-hydroxy-3- (β-aminoethyl) -amino-propyl groups.

b) 220 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 500 ml entsalztes Wasser eingetragen und 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 40 g einer 25gew.-%igen wäßrigen Levafix-Brillantrot- E-Ba-fl.-Lösung zu und stellt den pH-Wert mit 20 gew.-%iger Natronlauge auf pH 10 ein. Die Suspension wird dann auf 45°C erwärmt, eine weitere Stunde bei 45°C gerührt, auf 60°C erwärmt, eine weitere Stunde bei 60°C gerührt, auf 75°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 75°C und pH 10 gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser ausgewaschen. Man erhält 215 ml rotes Perlpolymerisat.b) 220 ml of the resin obtained in (a) are in 500 ml of demineralized water entered and 1 hour stirred at room temperature. Then you give 40 g a 25% by weight aqueous Levafix brilliant red E-Ba-fl. Solution and sets the pH at 20 % by weight sodium hydroxide solution to pH 10. The suspension is then heated to 45 ° C, another Hour at 45 ° C, heated to 60 ° C, one stirred for a further hour at 60 ° C., heated to 75 ° C. and stirred for a further 2 hours at 75 ° C. and pH 10. After cooling, the resin is desalinated Washed out water. 215 ml of red bead polymer are obtained.

Example 6

a) 700 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glydicylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1700 ml einer wäßrigen Lösung, die 17 Gew.-% Hexamethylendiamin enthält, eingetragen. Die Suspension wird im Autoklaven in 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden bei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser ausgewaschen. Man erhält 810 ml Perlpolymerisat mit einem Stickstoffgehalt von 5,72 Gew.-%.a) 700 ml of that in Example 1 (a) The macroporous, pearl-like glydicyl methacrylate-divinylbenzene copolymer is introduced into 1700 ml of an aqueous solution which contains 17% by weight of hexamethylene diamine. The suspension is heated in an autoclave to 200 ° C. in 2 hours and stirred at 200 ° C. for a further 20 hours. After cooling, the resin is washed out with water. 810 ml of bead polymer with a nitrogen content of 5.72% by weight are obtained.

b) 250 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 1200 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 50 g einer 40%igen wäßrigen Levafix-Brillantblau- PN-RL-Lösung zu und rührt 1 Stunde bei Raumtemperatur nach. Dann wird der pH-Wert mit 20gew.-%iger Natronlauge auf pH 10 eingestellt. Die Suspension wird auf 50°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 50°C gerührt. Anschließend erhitzt man auf 70°C und rührt weitere 2 Stunden bei 70°C und pH 10. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser gewaschen. Man erhält 245 ml eines blau gefärbten Perlpolymerisates.b) 250 ml of the resin obtained in (a) are in 1200 ml of demineralized water entered and 30 minutes stirred at room temperature. Then you give 50 g of a 40% aqueous Levafix brilliant blue PN-RL solution and stir for 1 hour at room temperature to. Then the pH becomes 20% by weight Sodium hydroxide solution adjusted to pH 10. The suspension is heated to 50 ° C and a further 2 hours 50 ° C stirred. Then heated to 70 ° C and stirred for a further 2 hours at 70 ° C and pH 10. Nach after cooling, the resin is washed with water. 245 ml of a blue-colored bead polymer are obtained.

Example 7

a) 700 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1700 ml einer wäßrigen Lösung, die 17 Gew.-% Hexamethylendiamin enthält, eingetragen.a) 700 ml of that in Example 1 (a) The macroporous, pearl-like glycidyl methacrylate-divinylbenzene copolymer used is introduced into 1700 ml of an aqueous solution which contains 17% by weight of hexamethylene diamine.

Die Suspension wird in 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden bei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit Wasser gewaschen. Man erhält 780 ml Perlpolymerisat mit einem Stickstoffgehalt von 5,80 Gew.-%.The suspension is heated to 200 ° C. in 2 hours and stirred for a further 20 hours at 200 ° C. After this After cooling, the resin is washed with water. Man receives 780 ml of bead polymer with a nitrogen content of 5.80% by weight.

b) 250 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 1200 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 200 g einer 40%igen wäßrigen Levafix-Brillantblau-PN-RL- Lösung zu und rührt eine Stunde bei Raumtemperatur. Dann wird der pH-Wert mit 20gew.-%iger Natronlauge auf pH 10 eingestellt. Die Suspension wird auf 50°C erwärmt und weitere 2 Stunden bei 50°C mit pH 10 gerührt. Anschließend erhitzt man auf 70°C und rührt weitere 2 Stunden bei 70°C und pH 10. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 245 ml eines blau gefärbten Perlpolymerisats mit einem Schwefelgehalt von 1,25 Gew.-%.b) 250 ml of the resin obtained in (a) are in 1200 ml of demineralized water entered and 30 minutes stirred at room temperature. Then you give 200 g a 40% aqueous Levafix Brilliant Blue PN RL Solution and stir for one hour at room temperature. Then the pH value with 20 wt .-% sodium hydroxide solution adjusted to pH 10. The suspension is at 50 ° C warmed and a further 2 hours at 50 ° C with pH 10 touched. Then heated to 70 ° C and stirred for a further 2 hours at 70 ° C and pH 10. Nach the resin is cooled with deionized water washed. 245 ml of a blue colored are obtained Pearl polymer with a sulfur content of 1.25 % By weight.

Example 8

a) 500 ml eines makroporösen, perlförmigen Acrylsäuremethylester- Divinylbenzol-Copolymerisats, das durch Perlpolymerisation von 1500 g Acrylsäuremethylester, 151,5 g technischem (=63%igem) Divinylbenzol in Gegenwart von 450 g Methylisobutylketon erhalten worden war, werden in 1400 ml einer wäßrigen Lösung eingetragen, die 28 Gew.-% N-Methylglucamin enthält. Die Suspension wird in 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden bei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Perlpolymerisat mit entsalztem Wasser gewaschen. Das Harz besitzt folghende elementaranalytische Zusammensetzung:a) 500 ml of a macroporous, pearl-shaped acrylic acid methyl ester Divinylbenzene copolymer, the by bead polymerization of 1500 g of methyl acrylate, 151.5 g technical (= 63%) divinylbenzene in the presence of 450 g of methyl isobutyl ketone had been obtained in 1400 ml entered aqueous solution, the 28 wt .-% N-methylglucamine contains. The suspension is in 2 Heated to 200 ° C for hours and another 20 hours stirred at 200 ° C. After cooling, it will Bead polymer washed with deionized water. The resin has the following elemental analysis Composition:

C: 70,65 Gew.-%; H: 7,75%; N: 2,50%; O: 17,7%.C: 70.65% by weight; H: 7.75%; N: 2.50%; O: 17.7%.

b) 100 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 500 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 200 ml einer 10gew.-%igen wäßrigen Levafix-Türkis-Lösung zu, rührt 30 Minuten nach und stellt dann den pH-Wert mit 20gew.-%iger Natronlauge auf 10 ein. Die Suspension wird auf 45°C erhitzt, eine Stunde bei 45°C erhitzt, eine Stunde bei 45°C gerührt, auf 60°C erhitzt, 2 Stunden bei 60°C gerührt, anschließend auf 75°C erhitzt, 2 Stunden bei 60°C gerührt, anschließend auf 75°C erhitzt und eine weitere Stunde bei 75°C und pH 10 gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 265 ml eines türkis gefärbten Perlpolymerisats.b) 100 ml of the resin obtained in (a) are dissolved in 500 ml desalinated water and added 30 minutes Room temperature stirred. Then you give 200 ml of one 10% by weight aqueous Levafix turquoise solution, stir for 30 minutes and then adjust the pH to 20 with 20% by weight sodium hydroxide solution. The suspension is heated to 45 ° C, one hour at 45 ° C heated, stirred at 45 ° C for one hour, heated to 60 ° C, Stirred at 60 ° C for 2 hours, then on Heated at 75 ° C, stirred at 60 ° C for 2 hours, then heated to 75 ° C and another hour at 75 ° C and pH 10 stirred. After cooling, it will Resin washed with demineralized water. You get 265 ml of a turquoise-colored bead polymer.

Example 9

a) 500 ml eines makroporösen, perlförmigen Acrylnitril- Divinylbenzol-Copolymerisats, das durch Perlpolymerisation von 204,6 g Acrylnitril, 71,4 g technischem (=63%igem) Divinylbenzol in Gegenwart von 150 g Isododecan erhalten worden war, werden in 1400 ml einer wäßrigen Lösung eingetragen, die 30 Gew.-% Diethylentriamin enthält. Die Suspension wird im Autoklaven in 2 Stunden auf 200°C erhitzt und weitere 20 Stunden bei 200°C gerührt. Nach dem Abkühlen wird das Perlpolymerisat mit entsalztem Wasser gewaschen.a) 500 ml of a macroporous, pearl-shaped acrylonitrile Divinylbenzene copolymer by bead polymerization of 204.6 g acrylonitrile, 71.4 g technical (= 63%) divinylbenzene in the presence of 150 g of isododecane had been obtained entered in 1400 ml of an aqueous solution, which contains 30% by weight of diethylenetriamine. The suspension is in an autoclave at 200 ° C in 2 hours heated and stirred for a further 20 hours at 200 ° C. After cooling, the bead polymer is added desalinated water.

b) 250 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 1200 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 20 g einer 40%igen wäßrigen Levafix-Brillantblau-PN-LR- Lösung zu, stellt den pH-Wert mit 5 Gew.-% Natronlauge auf 10 ein und rührt eine Stunde bei Raumtemperatur nach. Anschließend wird die Suspension auf 50°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 50°C gerührt. Die Suspension wird dann auf 70°C erhitzt und eine weitere Stunde bei 70°C und pH 10 gerührt. Anschließend erhitzt man auf 85°C und rührt eine weitere Stunde bei 85°C und pH 10. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 260 ml eines blau gefärbten Perlpolymerisats.b) 250 ml of the resin obtained in (a) are in 1200 ml of demineralized water entered and 30 minutes stirred at room temperature. Then you give 20 g a 40% aqueous Levafix brilliant blue PN LR Solution, sets the pH with 5 wt .-% sodium hydroxide solution to 10 and stir for one hour at room temperature to. Then the suspension is on Heated 50 ° C and stirred at 50 ° C for a further 2 hours. The suspension is then heated to 70 ° C and stirred for another hour at 70 ° C and pH 10. Then heated to 85 ° C and stirred another hour at 85 ° C and pH 10. After cooling the resin is washed with deionized water. 260 ml of a blue-colored bead polymer are obtained.

c) 70 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 300 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 100 g einer 25%igen wäßrigen Levafix-Brillantrot-E-Ba-fl.-Lösung zu, stellt den pH-Wert mit 20gew.-%iger Natronlauge auf pH 10 ein und rührt 30 Minuten bei Raumtemperatur. Der Ansatz wrid auf 45°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 45°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 45°C und pH 10 gerührt. Anschließend erwärmt man auf 60°C, rührt eine weitere Stunde bei pH 10 und 60°C, erhitzt dann auf 75°C und rührt eine weitere Stunde bei 75°C und pH 10. Nach dem Abkühlen wird das Perlpolymerisat mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 74 ml eines rot gefärbten Perlpolymerisats.c) 70 ml of the resin obtained in (a) are in 300 ml desalinated water and added 30 minutes Room temperature stirred. Then you give 100 g one 25% aqueous Levafix Brillantrot-E-Ba-fl. Solution to, adjust the pH with 20 wt .-% sodium hydroxide solution to pH 10 and stir in for 30 minutes Room temperature. The mixture is heated to 45 ° C and heated for a further 2 hours at 45 ° C and others Stirred for 2 hours at 45 ° C and pH 10. Subsequently heated to 60 ° C, stirred for another hour pH 10 and 60 ° C, then heated to 75 ° C and stirred another hour at 75 ° C and pH 10. After The bead polymer is cooled with desalted Washed water. 74 ml of a red are obtained colored bead polymer.

Example 10

a) 100 ml eines makroporösen, perlförmigen Acrylsäuremethylester- Divinylbenzol-Copolymerisats, das durch Perlpolymerisation von 176 g Acrylsäuremethylester, 124 g technischem (=63%igem) Divinylbenzol in Gegenwart von 390 g Methylisobutylketon erhalten worden war, werden in 300 ml einer wäßrigen, 0,1gew.-%igen Levafix-Brillantblau-EBRA-Lösung eingetragen und 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wird der pH-Wert der Suspension mit 5gew.-%iger Natronlauge auf pH 10 eingestellt. Der Ansatz wird auf 50°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 50°C gerührt, anschließend wird auf 70°C erhitzt und weitere 2 Stunden bei 70°C gerührt. Dann erhitzt man auf 80°C und rührt eine weitere Stunde bei 80°C und pH 10. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 92 ml eines hellblau gefärbten Perlpolymerisats.a) 100 ml of a macroporous, pearl-shaped acrylic acid methyl ester Divinylbenzene copolymer, the by bead polymerization of 176 g of methyl acrylate, 124 g technical (= 63%) divinylbenzene in the presence of 390 g of methyl isobutyl ketone obtained, are in 300 ml of an aqueous, 0.1% by weight Levafix brilliant blue EBRA solution entered and 1 hour at room temperature touched. Then the pH of the suspension adjusted to pH 10 with 5% strength by weight sodium hydroxide solution. The batch is heated to 50 ° C. and others Stirred at 50 ° C for 2 hours, then heated to 70 ° C and another 2 hours at 70 ° C touched. Then you heat to 80 ° C and stir one another hour at 80 ° C and pH 10. After cooling the resin is washed with deionized water. 92 ml of a light blue colored bead polymer are obtained.

Example 11

a) 500 ml des in Beispiel 1(a) verwendeten makroporösen, perlförmigen Glycidylmethacrylat-Divinylbenzol- Copolymerisats werden in 1400 ml einer Lösung eingetragen, die 28 Gew.-% N-Methylglucamin enthält. Der Ansatz wird in 2 Stunden auf 180°C erhitzt und weitere 10 Stunden bei 180°C gewaschen. Folgende elementaranalytische Zusammensetzung wurde bestimmt:a) 500 ml of the in Example 1 (a) macroporous, pearl-shaped glycidyl methacrylate-divinylbenzene copolymer used are introduced into 1400 ml of a solution which contains 28% by weight of N-methylglucamine. The mixture is heated to 180 ° C. in 2 hours and washed at 180 ° C. for a further 10 hours. The following elemental analysis composition was determined:

C: 63,95 Gew.-%; H: 7,8 Gew.-%; N: 1,9 Gew.-%; O: 24,4 Gew.-%.C: 63.95% by weight; H: 7.8% by weight; N: 1.9% by weight; O: 24.4% by weight.

b) 100 ml des nach (a) erhaltenen Harzes werden in 500 ml entsalztes Wasser eingetragen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann gibt man 200 ml einer wäßrigen, 15gew.-%igen Levafix-Brillantblau- EBRA-Lösung zu, rührt 30 Minuten bei Raumtemperatur und stellt den pH-Wert der Suspension mit 20gew.- %iger Natronlauge auf pH 10 ein. Der Ansatz wird auf 50°C erhitzt und weitere 90 Minuten bei 50°C und pH 10 gerührt. Anschließend erhitzt man auf 70°C, rührt weitere 2 Stunden bei 70°C und pH 10, erhitzt auf 85°C und rührt eine weitere Stunde bei 85°C und pH 10. Nach dem Abkühlen wird das Harz mit entsalztem Wasser gewaschen. Man erhält 110 ml blau gefärbtes Perlpolymerisat.b) 100 ml of the resin obtained in (a) are in 500 ml of demineralized water entered and 30 minutes stirred at room temperature. Then you give 200 ml an aqueous, 15% by weight Levafix brilliant blue EBRA solution, stir for 30 minutes at room temperature and sets the pH of the suspension at 20% by weight. % sodium hydroxide solution to pH 10. The approach is going heated to 50 ° C and at 90 ° C for a further 90 minutes and stirred pH 10. Then heat up 70 ° C, stirring for a further 2 hours at 70 ° C and pH 10, heated to 85 ° C and stirred for another hour 85 ° C and pH 10. After cooling, the resin with desalinated water. 110 ml of blue are obtained colored bead polymer.

Example 12

In eine Glassäule (Durchmesser 2,5 cm; Länge 50 cm) füllt man 90 ml des nach Beispiel 1 hergestellten Harzes. Verunreinigte Glycerokinase mit einer Aktivität von 20 Einheiten pro mg Protein wurden in einer Konzentration von 10 mg/ml bei pH 8 in 10 mM Kaliumphosphatpuffer gelöst. Die Lösung wurde in 60 Minuten über die Säule gegeben. Das Harz wurde anschließend mit Pufferlösung gewaschen. Das gebundene Enzym wurde dann mit einer Lösung von 10 mM MgCL₂ und 10 mM ATP in wäßriger Kaliumphosphatlösung eluiert. Das eluierte Enzym zeigte eine Aktivität von 140 U/mg und eine Bande auf der Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese bei 65 000 Dalton. In a glass column (diameter 2.5 cm; length 50 cm) 90 ml of the product prepared according to Example 1 are filled Resin. Contaminated glycerokinase with activity of 20 units per mg protein were at a concentration of 10 mg / ml at pH 8 in 10 mM potassium phosphate buffer solved. The solution was over in 60 minutes Column. The resin was then mixed with buffer solution washed. The bound enzyme was then included a solution of 10 mM MgCL₂ and 10 mM ATP in aqueous potassium phosphate solution eluted. The eluted Enzyme showed an activity of 140 U / mg and a band on polyacrylamide gel electrophoresis at 65,000 Dalton.

Example 13

In eine Glassäule (Durchmesser 2,5 cm; Länge 50 cm) füllt man 100 ml des nach Beispiel 2(b) hergestellten Harzes. Einzelextrakt, der 30 Einheiten pro mg Protein Carboxylpeptidase G enthält, wurde in 25-mM-Trisacetat- Puffer bei pH 7,5 zu 15 mg/ml gelöst. Die Lösung wird in 60 Minuten über die Säule gegeben, die anschließend mit Trisacetatpufferlösung gewaschen wird. Das Enzym wird mit 1 m KCl-Lösung eluiert. Man findet eine Aktivität von 130 Einheiten pro mg.A glass column (diameter 2.5 cm; length 50 cm) is filled with 100 ml of that according to Example 2 (b) resin produced. Single extract containing 30 units per mg protein carboxylpeptidase G was dissolved in 25 mM trisacetate buffer at pH 7.5 to 15 mg / ml. The solution is passed over the column in 60 minutes, which is then washed with trisacetate buffer solution. The enzyme is eluted with 1 M KCl solution. An activity of 130 units per mg is found.

Claims

1. dye resins based on condensation products of reactive dyes with synthetic carrier resins, characterized in that they contain condensation products of reactive dyes with macroporous bead polymers of epoxy, OH and / or NH groups optionally containing poly (meth) acrylic acid esters or NH or OH -Groups of poly (meth) acrylamides are.

2. dye resins according to claim 1, characterized in that they are condensation products of reactive dyes with such macroporous polymer beads, optionally epoxy, OH and / or NH Groups containing poly (meth) acrylic acid esters or poly (meth) groups containing NH or OH groups are acrylamides, which are obtained by copolymerization of monomeric (meth) acrylic acid esters or (meth) Acrylonitriles with 10 to 50 wt .-%, based on the Total weight of the monomers, a polyvinyl compound in the presence of 30 to 180% by weight on the total weight of the monomers, a porosity were obtained.

3. dye resins according to claim 1, characterized in that they are condensation products of reactive dyes with such macroporous polymer beads, optionally epoxy, OH and / or NH Groups containing poly (meth) acrylic acid esters or poly (meth) groups containing NH or OH groups are acrylamides, which are obtained by copolymerization of monomeric (meth) acrylic acid esters or (meth) Acrylonitriles with 10 to 50 wt .-%, based on the total weight of the monomers, a polyvinyl compound in the presence of 30 to 150% by weight, based on the total weight of the monomers, one Porosity can be obtained.

4. dye resins according to claim 1, characterized in that they are condensation products of reactive dyes with such macroporous polymer beads, optionally epoxy, OH and / or NH Grouped poly (meth) acrylic esters or NH (OH) groups containing poly (meth) are acrylamides, which are obtained by copolymerization of monomeric (meth) acrylic acid esters or (meth) Acrylonitriles with 10 to 35 wt .-%, based on the Total weight of the monomers, a polyvinyl compound in the presence of 40 to 120 wt .-%, based on the total weight of the monomers, a porosity were obtained.

5. dye resins according to claims 1, 2, 3 or 4, characterized characterized in that it may be the Epoxy, OH and / or NH groups Poly (meth) acrylic acid esters around poly (meth) acrylic acid alkyl ester.

6. Process for the preparation of dye resins Basis of condensation products of reactive dyes with macroporous polymer beads, optionally epoxy, OH and / or NH groups containing poly (meth) acrylic acid ester or NH or poly (meth) acrylamides containing OH groups, characterized in that the macroporous Bead polymers with the aqueous solution of the desired reactive dye at elevated Treated temperature and in the dye solution by adding bases a pH <7 sets.

7. The method according to claim 6, characterized in that that in the dye solution a pH of 8 to 12.

8. Use of dye resins based on condensation products of reactive dyes with macroporous polymer beads, if appropriate Poly- having epoxy, OH and / or NH groups (meth) acrylic acid ester or NH or OH groups containing poly (meth) acrylamides as adsorbents for affinity chromatography.