DE3824669C2

DE3824669C2 - Use of trisodium phosphonoformate

Info

Publication number: DE3824669C2
Application number: DE19883824669
Authority: DE
Inventors: Ewald M Dr Wondrak; Sibylle Luise Binder
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1988-07-20
Filing date: 1988-07-20
Publication date: 1999-05-06
Anticipated expiration: 2008-07-21
Also published as: DE3824669A1

Description

Die Erfindung bezieht sich auf die Verwendung von Trinatrium-Phosphonoformat.The invention relates to the use of trisodium phosphonoformate.

Das erworbene Immundefektsyndrom (AIDS) hat sich in den letzten Jahren dramatisch ausgebreitet. Für die nächsten Jahre wird mit einer immensen Zunahme der Infektion gerechnet. Die schwerwiegende Funktionsstörung des Immunsystems ist die Basis für das Entstehen von opportunistischen Infektionen und Tumoren, die mit hohem Prozentsatz zum Tod des Patienten führen.Acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) has changed dramatically in recent years spread out. For the next few years there will be an immense increase in infection expected. The serious dysfunction of the immune system is the basis for that Occurrence of opportunistic infections and tumors that are associated with a high percentage Lead to patient death.

AIDS wird hauptsächlich bei homo- und heterosexuellen Intimkontakten über die Schleim häute der Geschlechtsorgane verbreitet. Mundschleimhäute sind an der Übertragung grund sätzlich nicht beteiligt. Als weiterer Infektionsweg kommt das Benutzen kontaminierter Spritzen und Kanülen bei intravenöser Rauschmittel-Injektion in Betracht.AIDS is mainly used in homosexual and heterosexual intimate contacts via the mucus skin of the genital organs spread. Oral mucous membranes are due to transmission not additionally involved. Another infection route is the use of contaminated ones Syringes and cannulas are considered for intravenous intoxication.

Bei einer HIV-Infektion koppeln die Viren an die T4-Rezeptoren, die hauptsächlich auf der Oberfläche von Lymphozyten (für die Immunabwehr essentielle Zellen) im menschlichen Blut vorkommen (Versuche, die T4-Rezeptoren künstlich zu blockieren, scheiterten am damit verbundenen Verlust lebenswichtiger Eigenschaften dieser Zellen). Die gekoppelten Viren dringen in die befallenen Zellen ein. Dort wird die mitgebrachte virale Erbinformation, die als einzelsträngige Ribonukleinsäure (RNS) vorliegt, von dem Enzym Reverse Transkriptase, das ebenfalls vom Virus mitgebracht wird, im Verlauf sehr komplexer Reaktionen in doppelsträngige Desoxyribonukleinsäure (DNS) umgeschrieben, die anschließend in die normale Erbinformation der Wirtszelle eingebaut wird. Nunmehr lebenslanger Bestandteil der zellulaeren Erbanlage, wird die virale Information von normalen zellulaeren Enzymen umgesetzt - Viren werden produziert. Diese verlassen die Zelle, gelangen ins Blut und infizieren andere Zellen und bei sexuellen Kontakten oder "Blutaustausch" andere Individuen.In the case of HIV infection, the viruses couple to the T4 receptors, which are mainly located on the Surface of lymphocytes (cells essential for immune defense) in human Blood occurs (attempts to artificially block the T4 receptors failed because of this associated loss of vital properties of these cells). The coupled viruses penetrate the infected cells. There the viral genetic information brought along, the is present as single-stranded ribonucleic acid (RNA), from the enzyme reverse transcriptase, which is also brought along by the virus in the course of very complex reactions in double-stranded deoxyribonucleic acid (DNA), which is then rewritten into the normal genetic information of the host cell is incorporated. Now a lifelong part of the cellular genetic makeup, the viral information from normal cellular enzymes implemented - viruses are produced. These leave the cell, get into the blood and infect other cells and other individuals through sexual contact or "blood exchange".

Das virale Enzym Reverse Transkriptase, das in normalen Zellen nicht vorkommt, ist für die Infektion von zentraler Bedeutung: Es ermöglicht der viralen Erbinformation, ein lebenslanger Bestandteil der Wirtszelle zu werden. Ohne diesen Schritt ist die Vermehrung des Virus nicht möglich. Die virale Erbinformation, die nicht von dem Enzym Reverse Transkriptase in doppelsträngige DNS umgeschrieben wird, wird in der Zelle innerhalb weniger Stunden von zellulaeren Enzymen abgebaut.The viral enzyme reverse transcriptase, which is not found in normal cells, is for the Infection of central importance: It enables viral genetic information to last a lifetime To become part of the host cell. Without this step, the virus does not multiply possible. The viral genetic information that is not contained in the reverse transcriptase enzyme double-stranded DNA is rewritten in the cell within a few hours cellular enzymes are broken down.

Ansätze zur Bekämpfung von AIDS sind wie folgt zu beschreiben. Aus der zentralen Rolle des viralen Enzyms Reverse Transkriptase im Infektionszyklus von HIV hat man einen wichtigen Ansatz zur Behandlung der Krankheit abgeleitet: die Gabe von Inhibitoren der Reverse Transkriptase. Die Wirkung der Revese Transkriptase-Inhibitoren wurden in HIV infizierten Zellkulturen bestimmt. Erfolgversprechende Substanzen, darunter Suramin (GermaninR) und HPA-23 (Ammonium-21-tungsto-9-antimonat) wurden an LAS-(lymphade nopatisches Syndrom, Vorstufe von AIDS) und AIDS-Patienten getestet. Die therapeutische Wirkung war aber oft nicht signifikant oder wurde von starken Nebenwirkungen begleitet. Under den Revese Transkriptase-Inhibitoren kristallisierte sich trotz gravierender Neben wirkungen 3'-Azido-3'-desoythimidin (AZT) als bislang einzige Substanz heraus, deren Anwendung bei AIDS-Erkrankten das Allgemeinbefinden besserte und die Lebenserwartung erhöhte.Approaches to combating AIDS can be described as follows. From the central role of the viral enzyme reverse transcriptase in the HIV infection cycle has one important approach to the treatment of the disease derived: the administration of inhibitors of the Reverse transcriptase. The effects of Revese transcriptase inhibitors have been found in HIV infected cell cultures. Promising substances, including suramin (GermaninR) and HPA-23 (ammonium-21-tungto-9-antimonate) were tested on LAS- (lymphad nopatic syndrome, pre-stage of AIDS) and AIDS patients tested. The therapeutic Effect was often not significant or was accompanied by strong side effects. Despite the serious side effect, the Revese transcriptase inhibitors crystallized effects 3'-azido-3'-desoythimidine (AZT) as the only substance so far whose Use in AIDS sufferers improved general well-being and life expectancy increased.

Der beste und wirkungsvollste Schutz vor HIV-Infektionen wäre eine geeignete Immunisie rung (Schutzimpfung). Obwohl mehrere Laboratorien seit Jahren daran arbeiten, ist wegen des komplizierten HIV-Virus die Entwicklung eines wirkungsvollen Serums noch nicht gelungen.The best and most effective protection against HIV infection would be an appropriate immunization tion (vaccination). Although several laboratories have been working on it for years, it is because of the complex HIV virus does not yet develop an effective serum succeeded.

Eine weitere Möglichkeit zum Schutz vor Infektionen mit HIV bei sexuellen Kontakten ist die Benutzung von Kondomen. Die neueste Entwicklung auf diesem Gebiet ist das "Frauen- Kondom".Another way to protect against HIV infection from sexual contact is the use of condoms. The latest development in this area is the "women's Condom".

Aus der DE 36 08 606 A1 ist es bekannt, zur Behandlung oder zur Prophylaxe von durch Retroviren bei einem menschlichen Patienten verursachten Infektionen AZT zu verwenden, wobei bei der Therapie AZT in Verbindung mit Phosphonoformat eingesetzt werden kann.From DE 36 08 606 A1 it is known for the treatment or prophylaxis of Retroviruses using infections AZT in a human patient use AZT can be used in conjunction with phosphonoformate for therapy.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, ein Mittel zur Prävention vor Infektionen mit HIV zur Verfügung zu stellen, das sicherstellt, dass bei sexuellen Kontakten der HIV-Virus nicht übertragen werden kann. Dabei soll sein sicherer Schutz gegen eine Infizierung ermöglicht werden, ohne dass hierzu aufwendige Maßnahmen erforderlich sind. Erfindungsgemäß wird das Problem durch die Verwendung von Trinatrium-Phosphonoformat zur Prävention einer HIV-Infektion während des sexuellen Kontaktes als Bestandteil eines Vaginalschaums gelöst. Dabei kann die Konzentration des Trinatrium-Phosphonoformats in dem Vaginalschaum 0,01-10%, insbesondere 0,3% betragen.The object of the present invention is to provide a means for prevention To provide HIV infection that ensures sexual contact the HIV virus cannot be transmitted. It should be safe protection against one Infection can be made possible without the need for complex measures. According to the invention, the problem is solved by using trisodium phosphonoformate to prevent HIV infection during sexual contact as part of a Vaginal foam loosened. The concentration of the trisodium phosphonoformate can be in the vaginal foam 0.01-10%, in particular 0.3%.

Durch die erfindungsgemäße Lehre ergibt sich der Vorteil, dass das Mittel die Zellen einer nicht infizierten Person gegen HIV-Viren schützt, quasi mit einem Schutzmantel gegen ein Eindringen der Viren umgibt. Dabei ergibt sich insbesondere der Vorteil, dass das Trinatri um-Phosphonoformat im Körper metabolisch nicht umgewandelt wird und eine Halbwertzeit von etwa einer Stunde aufweist. Schädliche Wirkungen des Mittels sind daher weitgehend auszuschließen. Demzufolge ist eine gute Verträglichkeit gegeben. Für die Kombination des Mittels mit einem Kontrazeptivum in Form von vorzugsweise eines Schaumovolums oder einer Vaginaltablette sprechen ferner zwei psychologische Faktoren. So ist die Anwendung eines "Anti-AIDS-Mittels" unauffällig, und die Frage des Misstrauens zum Partner wird nicht betont. Außerdem muss die richtige Anwendung nicht "erlernt" werden, da sie der des Kontrazeptivums entspricht, mit dem es angewendet wird. Schließlich ist sicher gewährleistet, dass der Infektionsweg zum Zeitpunkt des Risikos unterbrochen ist.The teaching of the invention has the advantage that the agent cells the one protects uninfected person against HIV viruses, quasi with a protective coat against one Virus intrusion surrounds. The particular advantage here is that the Trinatri um-phosphonoformate is not metabolically converted in the body and has a half-life of about an hour. Harmful effects of the agent are therefore extensive to exclude. As a result, it is well tolerated. For the combination of the By means of a contraceptive in the form of preferably a foam ovum or A vaginal tablet also speaks two psychological factors. So is the application of an "anti-AIDS drug" inconspicuous, and the question of distrust as a partner does not arise stressed. In addition, the correct application does not have to be "learned", since it is the des Contraceptive with which it is used. Finally, it is guaranteed that the route of infection is interrupted at the time of risk.

Anhand der nachstehenden Beschreibung sowie der Abb. 1 und 2 wird belegt, dass die Verwendung von Trinatrium-Phosphonoformat in einem vaginalen Schaum eine Präven tion vor Infektion mit HIV bewirkt.The description below and Figs. 1 and 2 show that the use of trisodium phosphonoformate in a vaginal foam helps prevent HIV infection.

Als Vaginalschaum wurde bei den durchgeführten Versuchen ein in den U.S.A. käuflich erhältliches Präparat der Firma Bradley Pharmaceuticals, Inc., verwendet, das unter der Bezeichnung "LUBRIN" auf dem Markt angeboten wird. Diesem Präparat wurden 30% (w/w) Trinatrium-Phosphonoformat zugesetzt. Die Tests selbst wurden von dem Unternehmen SRA Technologies, Inc., Vereinigte Staaten von Amerika, durchgeführt.A vaginal foam was used in the tests carried out in the U.S.A. available preparation from Bradley Pharmaceuticals, Inc., used under the Name "LUBRIN" is offered on the market. This preparation was 30% (W / W) trisodium phosphonoformate added. The tests themselves were done by the company SRA Technologies, Inc., United States.

Zu den durchgeführten Versuchen ist im einzelnen folgendes anzumerken.The following should be noted in detail regarding the tests carried out.

0,1 g des Vaginalschaums "LUBRIN" wurden in einem Warmwasserbad geschmolzen und mit 30 mg Trinatrium-Phosphonoformat versetzt. Die Suspension wurde durch Kühlen auf Eis wieder verfestigt. Diese Formulierung wird nachstehend "EMWo-B" genannt.0.1 g of the vaginal foam "LUBRIN" was melted in a warm water bath and mixed with 30 mg of trisodium phosphonoformate. The suspension was made by cooling on ice solidified again. This formulation is called "EMWo-B" below.

Als Testsubstanzen wurden 0,1 g EMWo-B und unbehandelter Vaginalschaum (EMWo-C) in 10 ml Kulturmedium (RPMI-1640) gelöst und Verdünnungsreihen in RPMI-1640 hergestellt.0.1 g EMWo-B and untreated vaginal foam (EMWo-C) were used as test substances 10 ml of culture medium (RPMI-1640) dissolved and serial dilutions made in RPMI-1640.

Phytohemagglutinin-(PHA)-stimulierte normale Mononukleozyten, gewonnen von peripherem Blut, wurden in Reagenzgläsern vorbereitet und für 30 Minuten mit verschiedenen Konzen trationen entsprechend der beigefügten Darstellungen der Testsubstanzen inkubiert. An schließend wurden die Zellen aus dem die Testsubstanz enthaltenden Medium entfernt und mit HIV-1 (1000 TCID₅₀per Millionen Zellen (TCID₅₀ = das 1000-fache der Dosis, die 50% der Zellkulltur infiziert)) infiziert. Die Zellen wurden in Mikrotiter Platten mit je 200 µl RPMI-1640 inkubiert. Am 4. Tag wurden den Zellen in den Mikrotiter Platten je 125 µl Medium entzogen, welches durch 150 µl frisches Medium ersetzt wurde. Die Lebensfähigkeit der Zellen und der Gehalt an HIV-1 p24 im Zellüberstand wurde am 7. Tag gemessen.Phytohemagglutinin (PHA) -stimulated normal mononucleocytes, obtained from peripheral blood, were prepared in test tubes and incubated for 30 minutes with different concentrations according to the attached illustrations of the test substances. The cells were then removed from the medium containing the test substance and infected with HIV-1 (1000 TCID ₅₀ per million cells (TCID ₅₀ = 1000 times the dose which infected 50% of the cell culture)). The cells were incubated in microtiter plates with 200 ul RPMI-1640 each. On the 4th day, 125 µl of medium was withdrawn from the cells in the microtiter plates, which was replaced by 150 µl of fresh medium. The viability of the cells and the level of HIV-1 p24 in the cell supernatant was measured on the 7th day.

Die EC₅₀ von EMWo-B wurde mit 318 µM festgestellt (Abb. 1), während der Vaginal schaum unter Testbedingungen keinen antiviralen Effekt zeigt (Abb. 2). Der antivirale Effekt ist daher auf Trinatrium-Phosphonoformat und nicht auf den Vaginalschaum zurückzu führen. Im getesteten Konzentrationsbereich war keine Zelltoxizität festzustellen.The EC ₅₀ of EMWo-B was found to be 318 µM ( Fig. 1), while the vaginal foam showed no antiviral effect under test conditions ( Fig. 2). The antiviral effect is therefore due to trisodium phosphonoformate and not to the vaginal foam. No cell toxicity was found in the tested concentration range.

Das Ergebnis zeigt, daß eine 30minütige Vorbehandlung der Zellen mit EMWo-B ausreicht, um die Zellen vor einer unmittelbaren Infektion mit HIV-1 zu schützen.The result shows that a 30-minute pretreatment of the cells with EMWo-B is sufficient to protect the cells from immediate infection with HIV-1.

Die entsprechenden Ergebnisse werden durch die beigefügten Kurven und die diesen zugrun deliegenden Messdaten gemäß Abb. 1 und 2 verdeutlicht.The corresponding results are illustrated by the attached curves and the measurement data underlying them as shown in Fig. 1 and 2.

Aufgrund der Versuchsergebnisse ergibt sich folglich, daß Trinatrium-Phosphonoformat zur Prävention vor Infektion mit HIV anwendbar ist.Based on the test results, it follows that trisodium phosphonoformate Prevention of HIV infection is applicable.

Claims

1. Use of trisodium phosphonoformate for the prevention of HIV infection tion during sexual contact as part of a vaginal foam.

2. Use of trisodium phosphonoformate according to claim 1, characterized, that the concentration of the trisodium phosphonoformate in the vagi nal foam is 0.01 to 10%.

3. Use of trisodium phosphonoformate according to claim 2, characterized, that the concentration of the trisodium phosphonoformate is 0.3%.