DE3807756A1 - Dry analytical element for an immunoassay - Google Patents

Dry analytical element for an immunoassay

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Abstract

A dry-type analytical element for an immunoassay contains at least one porous layer and a reagent layer and contains a labelled antigen and an antibody for the labelled antigen and the unlabelled antigen. It is characterised in that the antibody is incorporated into the porous layer and is separate from the labelled antigen, which is incorporated in the reagent layer. To achieve the above separation, the antibody is dissolved or suspended in an organic solvent which does not swell the reagent layer, and is applied to the porous layer. The sensitivity of this analytical element is very good.

Description

Die Erfindung betrifft ein analytisches Element des Trockentyps, welches im folgenden der Einfachheit halber als Analysentrockenelement bezeichnet wird, das für einen Immunoassay geeignet ist, bei dem eine Antigen-Antikörper- Reaktion verwendet wird.The invention relates to an analytical element of Dry type, which for the sake of simplicity is referred to as an analysis dry element that for a Immunoassay is suitable in which an antigen-antibody Reaction is used.

In der Vergangenheit wurde ein analytisches Verfahren ent­ wickelt, bei dem ein Analysentrockenelement verwendet wird (beispielsweise US-PS 42 92 272, japanische Patente KOKAI 49-53 888 und 59-1 02 388). Im allgemeinen wird bei einem Analysentrockenelement ein Analyt, wie eine in einer Körperflüssigkeit enthaltene biochemische Substanz, mit einem Reagens bzw. mit Reagentien, die in das Analysenele­ ment eingearbeitet sind, umgesetzt. Die Menge eines beson­ deren Reaktionsproduktes oder der nichtumgesetzten Komponen­ te wird durch Messung der Färbung, Verfärbung, Flureszenz, Emission oder einer ähnlichen Eigenschaft optisch, wie durch Spektrophotometrie, bestimmt, wobei der Analytgehalt festgestellt wird. unter Verwendung eines Analysentrocken­ elements kann eine besondere Komponente, wie eine bioche­ misch-aktive Substanz, in einer Flüssigkeitsprobe einfach, schnell und genau analysiert werden.An analytical method has been developed in the past wraps using an analytical dry element (e.g., U.S. Patent 4,292,272, Japanese Patents KOKAI 49-53 888 and 59-1 02 388). In general, at an analyte dry element an analyte, like one in a Body fluid containing biochemical substance, with a reagent or with reagents that are in the Analytele are incorporated, implemented. The amount of one particular their reaction product or the unreacted components is measured by measuring the color, discoloration, fluorescence, Emission or similar property optically, such as determined by spectrophotometry, the analyte content is detected. using an analytical dry elements can be a special component, like a bioche mixed active substance, simple in a liquid sample, be analyzed quickly and accurately.

In der US-PS 44 59 358 und den japanischen Patenten KOKAI 49-53 888 und 59-1 02 388 wird ein Immunoassay beschrieben, bei dem ein Analysentrockenelement verwendet wird.In U.S. Patent 4,459,358 and Japanese Patents KOKAI 49-53 888 and 59-1 02 388 an immunoassay is described using an analytical dry element.

Die Antigen-Antikörper-Reaktion auf dem Gebiet der Immuno­ logie ist eine, bei der ein Antikörper oder Antigen spe­ zifisch mit dem entsprechenden Antigen oder Antikörper reagiert, und sie wird vielfach für die Diagnose einer Autoimmunkrankheit, dem Nachweis einer Spurenkomponente in einem lebenden Körper und ähnlichen Verfahren verwendet. Da jedoch das Verfahren, bei dem eine Antigen-Antikörper- Reaktion verwendet wird, Geschicklichkeit bei den Durch­ führungen verlangt, besteht ein Bedarf für die Entwicklung eines Verfahrens, bei dem die Messung durch einfache Maß­ nahmen erfolgen kann und wo ein genaues Ergebnis beim klinischen Test erhalten wird.The antigen-antibody response in the field of immuno logic is one in which an antibody or antigen is present  specifically with the corresponding antigen or antibody responds, and it is often used to diagnose one Autoimmune disease, the detection of a trace component used in a living body and similar processes. However, since the process in which an antigen-antibody Reaction is used in dexterity requires leadership, there is a need for development a method in which the measurement by simple measure can take place and where an exact result with the clinical test is obtained.

Das Verfahren zur Bestimmung eines Antigens, das in dem japanischen Patent KOKAI 59-77 356 (1984) beschrieben wird, ist ein typisches Verfahren, bei dem ein Mehrschichten- Analysenelement verwendet wird. Dieses Analysenelement be­ steht aus einer Ausbreitungsschicht, die ein mit einem fluoreszierenden Material markiertes Antigen enthält, einer Trennschicht, die aus einem porösen Medium besteht, und einer Reaktionsschicht, welche einen immobilisierten Anti­ körper enthält. Die Menge an Antigen wird in diesem Element durch Messung der Abnahme der Fluoreszenzintensität unter Verwendung der konkurrierenden Antigen-Antikörper-Reaktio­ nen zwischen dem Antigen in der Probenlösung und dem mar­ kierten Antigen bestimmt.The method for determining an antigen, which in the Japanese Patent KOKAI 59-77 356 (1984) is described is a typical process in which a multi-layer Analysis element is used. This analysis element be stands out of a spreading layer, the one with one fluorescent material contains labeled antigen, one Separation layer consisting of a porous medium, and a reaction layer which contains an immobilized anti body contains. The amount of antigen is in this element by measuring the decrease in fluorescence intensity under Use of the competing antigen-antibody reaction between the antigen in the sample solution and the mar antigen.

Es ist ein weiteres Immunoassayverfahren mit relativ hoher Empfindlichkeit, nämlich Enzymimmunoassay (EIA), bekannt. Ein typischer EIA ist die konkurrierende Reaktion in fester Phase, bei dem das Antigen, das gemessen werden soll, und ein enzymmarkiertes Antigen oder sein Derivat konkurrie­ rend mit dem immobilisierten Antikörper reagieren kann und wo eine bindungsfreie (B/F) Trennung durchgeführt wird und die Aktivität entweder des an den Antikörper gebunde­ nen Enzyms oder des freien Enzyms gemessen wird, um die Menge an Antigen zu bestimmen, die gemessen werden soll. Zur Beseitigung der B/F-Trennung ist ein Enzym erforder­ lich, dessen Aktivität durch Bindung an den Antikörper er­ höht oder erniedrigt wird.It is another relatively high immunoassay procedure Sensitivity, namely enzyme immunoassay (EIA), is known. A typical EIA is the competing reaction in solid Phase at which the antigen to be measured and an enzyme-labeled antigen or its derivative competes can react with the immobilized antibody and where a bond-free (B / F) separation is performed and the activity of either bound to the antibody NEN enzyme or the free enzyme is measured to the  Determine the amount of antigen to be measured. An enzyme is required to remove the B / F separation Lich, whose activity he binds to the antibody is raised or lowered.

Damit diese Meßsysteme wirksam arbeiten, sind zwei Kompo­ nenten, das mit Enzym markierte Antigen oder sein Derivat und der immobilisierte Antikörper in einem Fall oder der mit dem Enzym markierte Antikörper oder sein Derivat und ein immobilisiertes Antigen im anderen Fall, erforderlich. Bei beiden Fällen müssen diese beiden Komponenten getrennt werden, so daß sie vor der Messung nicht miteinander rea­ gieren. Bei den meisten bekannten Analysentrockenelemen­ ten konnte keine zufriedenstellende analytische Empfind­ lichkeit wegen dem niedrigen Signal/Hintergrundverhältnis, das durch ungenügende Trennung der beiden Komponenten auf­ trat, erhalten werden.So that these measuring systems work effectively, there are two compos nenten, the antigen labeled with enzyme or its derivative and the immobilized antibody in one case or the antibodies labeled with the enzyme or its derivative and an immobilized antigen is required in the other case. In both cases, these two components must be separated so that they do not react with each other before the measurement yaw. For most known dry analysis elements could not have a satisfactory analytical sensibility due to the low signal / background ratio, due to insufficient separation of the two components stepped, be preserved.

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Analysentrockenelement für den Immunoassay zur Verfügung zu stellen, welches eine hohe analytische Empfindlichkeit und Genauigkeit aufweist.The present invention is based on the object Analytical dry element available for the immunoassay to provide which has a high analytical sensitivity and has accuracy.

Gegenstand der Erfindung ist ein Analysentrockenelement für den Immunoassay, das integriert mindestens zwei wasser­ permeable Schichten, die die Komponenten, welche bei der Antigen-Antikörper-Reaktion teilnehmen, enthalten und wo­ von eine der Schichten eine poröse Schicht ist und die andere der Schichten eine Reagensschicht ist, wobei die Reagensschicht an der gegenüberliegenden Seite der Proben­ empfangsseite der porösen Schicht angebracht ist, wobei eine der Komponenten, die an der Antigen-Antikörper-Reak­ tion teilnimmt, ein markiertes Antigen ist, die andere der Komponenten ein Antikörper für das markierte Antigen und das nichtmarkierte Antigen ist, wobei der Antikörper in die poröse Schicht und das markierte Antigen in die Reagensschicht eingearbeitet sind.The invention relates to an analysis drying element for the immunoassay, which integrates at least two water permeable layers that contain the components used in the Antigen-antibody response participate, contain and where one of the layers is a porous layer and the another of the layers is a reagent layer, the Reagent layer on the opposite side of the samples receiving side of the porous layer is attached, wherein one of the components involved in the antigen-antibody reak tion, one labeled antigen is the other of the components an antibody for the labeled antigen  and the unlabeled antigen is the antibody into the porous layer and the labeled antigen into the Reagent layer are incorporated.

Der Erfindung liegt weiterhin die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Herstellung eines Analysentrockenelements für den Immunoassay mit hoher analytischer Empfindlichkeit zur Verfügung zu stellen.The invention is also based on the object Method of making an analytical dry element for immunoassay with high analytical sensitivity to provide.

Gegenstand der Erfindung ist auch ein Verfahren zur Her­ stellung eines Analysentrockenelements, das integriert min­ destens zwei wasserpermeable Schichten aufweist, die die Komponenten, die bei der Antigen-Antikörper-Reaktion teil­ nehmen, enthält, wobei eine der Schichten eine poröse Schicht ist, die andere eine poröse oder nichtporöse Rea­ gensschicht ist, die Reagensschicht an der gegenüberliegen­ den Seite der Probenaufnahmeseite der porösen Schicht an­ geordnet ist, eine der Komponenten, die bei der Antigen- Antikörper-Reaktion teilnimmt, ein markiertes Antigen ist, die andere der Komponenten ein Antikörper für das markier­ te Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen ist, das dadurch gekennzeichnet ist, daß manThe invention also relates to a method for the production Position of an analysis dry element that integrates min at least two water-permeable layers, which the Components that participate in the antigen-antibody reaction take, containing one of the layers being porous Layer is, the other is a porous or non-porous rea layer, the reagent layer on the opposite side the side of the sample receiving side of the porous layer is one of the components used in antigen Participates in antibody response, is a labeled antigen, the other of the components is an antibody for the marker te antigen and an unlabeled antigen is the result is characterized in that one

  • (1) eine Reagensschicht, die das markierte Antigen enthält, bildet,(1) a reagent layer containing the labeled antigen contains, forms,
  • (2) eine poröse Schicht auf die Reagensschicht auf­ bringt und(2) a porous layer on the reagent layer brings and
  • (3) auf die poröse Schicht eine Masse aufbringt, wel­ che den Antikörper enthält und das markierte Antigen in der Reagensschicht nicht wesentlich auflöst oder solubili­ siert, wobei die Aufbringung durch Beschichtung oder Im­ bibition bzw. Imprägnierung erfolgt.(3) applies a mass to the porous layer, wel che contains the antibody and the labeled antigen in the reagent layer does not dissolve significantly or solubili siert, the application by coating or Im bibition or impregnation takes place.

Die obige Aufgabe der Erfindung wurde bevorzugt durch ein Verfahren zur Herstellung des Elements gelöst, welches folgende Stufen umfaßt:The above object of the invention has been preferred by a Process for producing the element solved, which comprises the following stages:

  • (1′) Herstellung einer Reagensschicht, welche ein markier­ tes Antigen und als Bindemittel (Matrix) ein hydro­ philes Polymeres enthält;(1 ′) Preparation of a reagent layer, which a mark antigen and as a binder (matrix) a hydro contains philes polymer;
  • (2′) Anwendung der porösen Schicht auf die Reagensschicht; und(2 ′) applying the porous layer to the reagent layer; and
  • (3′) Anwendung auf die poröse Schicht einer Masse, welche den Antikörper und ein Lösungsmittel enthält, welches die Reagensschicht nicht im wesentlichen anquillt.(3 ′) application to the porous layer of a mass, which contains the antibody and a solvent which the reagent layer does not substantially swell.

Die obige Aufgabe kann alternativ gemäß einem Verfahren zur Herstellung des Elements gelöst werden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß manThe above task can alternatively be according to a method be solved to manufacture the element that thereby is characterized in that one

  • (1′′) eine das markierte Antigen enthaltende Reagensschicht bildet;,(1 ′ ′) a reagent layer containing the labeled antigen forms ;,
  • (2′′) auf einen porösen Film eine flüssige Masse aufbringt, die den Antikörper, gelöst oder solubilisiert in einem Lösungsmittel, welches verdampft werden kann, enthält; und(2 ′ ′) applies a liquid mass to a porous film, which the antibody, dissolved or solubilized in a solvent that can be evaporated, contains; and
  • (3′′) den porösen Film, der den Antikörper enthält, auf die Reagensschicht laminiert.(3 ′ ′) the porous film containing the antibody the reagent layer is laminated.

Die Stufe (3′′) wird bevorzugt nach dem Trocknen des porösen Films durchgeführt.The stage (3 '') is preferred after drying the porous Films performed.

Anhand der beigefügten Zeichnung wird die Erfindung erläu­ tert.The invention will be explained with reference to the accompanying drawing tert.

Fig. 1 zeigt die Eichkurven für T4 (Thyroxin), die man unter Verwendung des erfindungsgemäßen Elements und eines Vergleichsanalysenelements erhält. Fig. 1 shows the calibration curves for T 4 (thyroxine), which are obtained using the element according to the invention and a comparative analysis element.

Die Komponenten, die an einer Antigen-Antikörper-Reaktion teilnehmen, sind das markierte Antigen, der Antikörper für das markierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen. Das markierte Antigen kann mit dem Antikörper reagieren und ihn binden und ist im allgemeinen das gleiche Antigen wie das nichtmarkierte Antigen.The components involved in an antigen-antibody reaction participate are the labeled antigen, the antibody for the labeled antigen and an unlabeled antigen. The labeled antigen can react with the antibody and bind it and is generally the same antigen as the unlabeled antigen.

Die Markierungssubstanz kann ein fluoreszierendes Material, lumineszierendes Material, Enzym sein, oder man kann ande­ re Markierungen verwenden, wie man sie für Immunoassays einsetzt.The labeling substance can be a fluorescent material, luminescent material, enzyme, or other re use labels as used for immunoassays starts.

Beispiele für fluoreszierende Materialien sind die fluores­ zierenden Materialien mit einer Aminogruppe, wie 1-Amino­ stilben, 2-Aminonaphthalin, p,p′-Diaminostilben, 2-Amino­ acridin, p,p′-Diaminobenzophenonimine, Bis-3-aminpyridinium­ salze und Indole,und fluoreszierende Phenole, wie 7-Hydroxy­ coumaline, 3,6-Dihydroxyxanthene, Tetracyclin und Salicyl­ säureester. Ein Beispiel für ein fluoreszierendes Material is Fluorescein.Examples of fluorescent materials are the fluores decorative materials with an amino group, such as 1-amino stilbene, 2-aminonaphthalene, p, p′-diaminostilbene, 2-amino acridine, p, p'-diaminobenzophenone imines, bis-3-amine pyridinium salts and indoles, and fluorescent phenols, such as 7-hydroxy coumaline, 3,6-dihydroxyxanthenes, tetracycline and salicyl acid ester. An example of a fluorescent material is fluorescein.

Beispiele für lumineszierende Materialien sind chemilumi­ neszierende Materialien, wie 2,3-Dihydro-1,4-phthalazin­ dione, beispielsweise Luminol und 2,4,5-Triphenylimidazole.Examples of luminescent materials are chemilumi nescent materials such as 2,3-dihydro-1,4-phthalazine diones, for example luminol and 2,4,5-triphenylimidazoles.

Als Markierung bzw. Label können verschiedene Enzyme ver­ wendet werden. Geeignete Enzyme werden unter Beachtung der Aktivität, der Stabilität, dem Einfluß der Bindungsaktivi­ tät, der Anwesenheit eines einfachen Meßverfahrens für die Enzymaktivität ausgewählt. Beispiele für Enzyme werden in Tabelle 1 und Tabelle 2 des japanischen Patents KOHYO 56-5 00 901 beschrieben, und repräsentative Enzyme sind Glucoseoxidase (GOD), β-D-Galactosidase, Peroxidase (POD), alkalische Phosphatase (ALP), α-Amylase, Luciferase etc.Various enzymes can be used as a label. Suitable enzymes are selected taking into account the activity, the stability, the influence of the binding activity, the presence of a simple measuring method for the enzyme activity. Examples of enzymes are described in Table 1 and Table 2 of Japanese Patent KOHYO 56-5 00 901, and representative enzymes are glucose oxidase (GOD), β- D-galactosidase, peroxidase (POD), alkaline phosphatase (ALP), α- amylase , Luciferase etc.

Das Bindungsverfahren der Markierungssubstanz an das Anti­ gen kann ein an sich bekanntes Verfahren sein, und die Einzelheiten werden beispielsweise in "Koso-Meneki Sokutei- Ho (Enzyme Immunoassay) (2. Aufl.)" (Ishikawa et al., 1982), "Rinsho Kensa Gÿutsu Zensho 4, Meneki Kassei Kensa (Clinical Assay Technique Complete Book 4 Immune Serum Assay)", Seite 97 bis 102 (Herausg. Kawai, Igaku-Shorin, 1977), Biochem. Biophys. Res. Commun., 74, 538 (1977), Clinica Chimica Acta, 83, 161 (1973) etc. beschrieben.The method of binding the labeling substance to the anti gene can be a known method, and the Details are given, for example, in "Koso-Meneki Sokutei- Ho (Enzyme Immunoassay) (2nd ed.) "(Ishikawa et al., 1982), "Rinsho Kensa Gÿutsu Zensho 4, Meneki Checkouti Kensa (Clinical Assay Technique Complete Book 4 Immune Serum Assay) ", pages 97 to 102 (Ed. Kawai, Igaku-Shorin, 1977), Biochem. Biophys. Res. Commun., 74, 538 (1977), Clinica Chimica Acta, 83, 161 (1973) etc.

Die Beispiele für die markierten Antigene werden ebenfalls in den obigen Literaturstellen beschrieben. Spezifische Beispiele sind fluorescein-isocyanatgebundenes Thyroxin (FITC-T4). GOD-gebundenes humanes lmmunoglobulin (IgG), ALP-gebundenes IgG, POD-markiertes α-Fetoprotein und ähn­ liche.The examples of the labeled antigens are also described in the references above. Specific examples are fluorescein-isocyanate-bound thyroxine (FITC-T 4 ). GOD-bound human immunoglobulin (IgG), ALP-bound IgG, POD-labeled α- fetoprotein and the like.

Der Antikörper reagiert und bindet das oben erwähnte mar­ kierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen. Das nicht­ markierte Antigen ist normalerweise das Antigen, das be­ stimmt werden soll und welches in einer Probe enthalten ist. Die reaktive Stelle des Antikörpers für die obigen beiden Antigene kann gleich oder voneinander unterschied­ lich sein. Das bedeutet, wenn mindestens eines der obigen Antigene zwei oder mehrere antigene Determinanten auf­ weist, kann der Antikörper an verschiedenen Stellen reagie­ ren. Der Antikörper kann ein monoklonaler Antikörper sein. Er kann ebenfalls ein Pepsin-Digestionsprodukt eines Anti­ körpers, wie F (ab′)2 oder Fab′ sein. The antibody reacts and binds the above-mentioned labeled antigen and an unlabeled antigen. The unlabeled antigen is usually the antigen to be determined and which is contained in a sample. The reactive site of the antibody for the above two antigens can be the same or different. This means that if at least one of the above antigens has two or more antigenic determinants, the antibody can react at different sites. The antibody can be a monoclonal antibody. It can also be a pepsin digestion product of an antibody, such as F (ab ') 2 or Fab'.

Das erfindungsgemäße analytische Element kann andere Rea­ gentien für den Fluoroimmunoassay, EIA oder ähnliche ent­ halten. Solche Reagentien sind Farbstoffe, Puffer etc.The analytical element according to the invention can other Rea genes for the fluoroimmunoassay, EIA or similar hold. Such reagents are dyes, buffers, etc.

Die Puffer, die für das erfindungsgemäße analytische Ele­ ment geeignet sind, sind Carbonatpuffer, Boratpuffer und Phosphatpuffer, Good′s Puffer (Biochemistry, Bd. 5, Nr. 2, S. 467 bis 477, 1966) und ähnliche. Ein solcher Puffer kann unter Bezugnahme auf "Tanpakushitsu Koso no Kiso-Jikken- Ho (Fundamental Experimental Method of Proteins, Enzymes)" (Horio et al., Nanko-Do, 1981), die obige Biochemistry- Literaturstelle oder nach ähnlichen Gesichtspunkten aus­ gewählt werden.The buffers for the analytical el suitable are carbonate buffers, borate buffers and Phosphate buffer, Good's buffer (Biochemistry, Vol. 5, No. 2, pp. 467 to 477, 1966) and the like. Such a buffer with reference to "Tanpakushitsu Koso no Kiso-Jikken- Ho (Fundamental Experimental Method of Proteins, Enzymes) " (Horio et al., Nanko-Do, 1981), the above biochemistry Literature or from similar points of view to get voted.

Das analytische Element kann ebenfalls übliche Zusatzstoffe für bekannte analytische Elemente, wie oberflächenaktive Mittel und Teilchen, welche das Licht reflektieren, ent­ halten.The analytical element can also be conventional additives for known analytical elements such as surface-active Means and particles reflecting the light hold.

Das erfindungsgemäße analytische Element enthält mindestens zwei wasserpermeable Schichten, die miteinander integriert sind und wovon eine eine poröse Schicht und die andere eine Reagensschicht ist.The analytical element according to the invention contains at least two water permeable layers that are integrated with each other are and of which one is a porous layer and the other is a reagent layer.

Die poröse Schicht enthält den zuvor erwähnten Antikörper für das markierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen, und sie enthält im wesentlichen nicht das zuvor erwähnte markierte Antigen. Im allgemeinen enthält die Schicht im wesentlichen die gesamte Menge des obigen Antikörpers. Die poröse Schicht kann als alleroberste Schicht vorhanden sein, oder sie kann zwischen der allerobersten wasserper­ meablen Schicht und der Reagensschicht angeordnet sein. Die poröse Schicht kann eine Ausbreitungsschicht mit einer Meßwirkung oder andere Schichten sein. Die Meßwirkung ist die, daß eine Flüssigkeitsprobe, die auf die Ausbreitungs­ schicht als Fleck aufgetragen wurde, sich in einer be­ stimmten Menge pro Einheitsfläche ohne ungleiche Vertei­ lung von irgendeiner der Komponenten in Seitenrichtungen verteilt. Die poröse Schicht kann aus einem faserförmigen Material oder einem nichtfaserförmigen Material bestehen und umfaßt gewebte Flächengebilde, wie einfache gewebte Materialien, und gestrickte bzw. gewirkte Flächengebilde bzw. Textilmaterialien, wie Trikotmaterial, hergestellt aus natürlichen, synthetischen oder semisynthetischen Fa­ sern, nichtgewebte Textilmaterialien bzw. Flächengebilde, Filterpapiere, Glasfaser-Filterpapiere, Membranfilter, die aus Celluloseacetat oder ähnlichen Materialien bestehen, verbundene Materialien aus anorganischen oder organischen Teilchen etc. Geeignete poröse Schichten einschließlich der faserförmigen Schichten werden in der US-PS 42 92 272 und EP-01 62 302 A beschrieben, und die porösen Schichten werden in den japanischen Patenten KOKAI 49-53 888, 58­ 70 163, 61-4 959, 62-1 16 258, 62-1 38 756, 62-1 38 757 und 62­ 1 38 758 beschrieben, und die gewebten bzw. gewirkten Textil­ materialien und die gestrickten Textilmaterialien sind besonders bevorzugt. Die gewebten bzw. gewirkten Textilma­ terialien können mit Glühentladung, wie in der britischen Patentschrift 20 87 074 A beschrieben, behandelt werden. Außerdem kann die Ausbreitungsschicht ein hydrophi­ les Polymeres oder ein oberflächenaktives Mittel enthalten, wie es in der EP-01 62 302 A und den japanischen Patentan­ meldungen 61-1 22 875, 61-1 22 876 und 61-1 43 754 beschrieben wird, damit die Ausbreitungsfläche, die Ausbreitungsge­ schwindigkeit und ähnliche Faktoren reguliert werden.The porous layer contains the aforementioned antibody for the labeled antigen and an unlabeled antigen, and it essentially does not contain the above labeled antigen. Generally the layer contains essentially the entire amount of the above antibody. The porous layer can be present as the topmost layer or it can be between the top waterper meablen layer and the reagent layer. The porous layer can be a spreading layer with a Measuring effect or other layers. The measuring effect is  the that a liquid sample that is on the spread layer when stain was applied, in a be agreed quantity per unit area without unequal distribution development of any of the components in the lateral directions distributed. The porous layer can be made of a fibrous Material or a non-fibrous material and includes woven fabrics such as simple woven fabrics Materials, and knitted or knitted fabrics or textile materials, such as jersey material from natural, synthetic or semi-synthetic Fa star, non-woven textile materials or fabrics, Filter papers, glass fiber filter papers, membrane filters, the consist of cellulose acetate or similar materials, combined materials from inorganic or organic Particles etc. Suitable porous layers including the fibrous layers are described in U.S. Patent 4,292,272 and EP-01 62 302 A and the porous layers are disclosed in Japanese Patents KOKAI 49-53 888, 58 70 163, 61-4 959, 62-1 16 258, 62-1 38 756, 62-1 38 757 and 62 1 38 758 described, and the woven or knitted textile materials and the knitted textile materials are particularly preferred. The woven or knitted textile material materials can be glow discharge, as in the British patent specification 20 87 074 A described will. In addition, the spreading layer can be hydrophilic contain polymer or a surfactant, as in EP-01 62 302 A and Japanese Patentan Messages 61-1 22 875, 61-1 22 876 and 61-1 43 754 are described so that the spreading area, the spreading area speed and similar factors are regulated.

Die Reagensschicht enthält das zuvor erwähnte markierte Antigen, und sie enthält im wesentlichen nicht den Anti­ körper für das markierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen. Im allgemeinen enthält diese Schicht im wesent­ lichen die Gesamtmenge des markierten Antigens, welche in das analytische Element eingearbeitet ist. Die Reagens­ schicht ist an der entgegengesetzten Seite zu der Proben­ empfangsseite der porösen Schicht angebracht, und sie ist mit der porösen Schicht direkt oder über eine oder mehre­ re Schichten integriert. Die Reagensschicht kann eine einheitliche Schicht sein, welche ein hydrophiles Polyme­ res als Bindemittel, wie Gelatine, ihre Derivate, phthala­ tisierte Gelatine, Cellulosederivate, wie Hydroxyethyl­ cellulose, Agarose, Polyacrylamid, Polymethacrylamid, und Copolymere von Acrylamid oder Methacrylamid und verschiede­ ne Vinylmonomere enthält. Die Reagensschicht kann ebenfalls aus einem porösen Material, wie in den japanischen Patenten KOKAI 58-70 163, 61-4 959, 62-1 16 258, 62-1 38 756, 62-1 38 757 und 62-1 38 758 beschrieben, bestehen. Wenn die Markierungs­ substanz bzw. die Labelsubstanz ein Enzym ist, können in die Reagensschicht ein Substrat des Enzyms, ein Oxidations­ mittel, ein Kupplungsmittel, ein Puffer etc. eingearbeitet sein. Unter den obigen ist das Substrat wesentlich.The reagent layer contains the previously mentioned labeled Antigen, and it essentially does not contain the anti body for the labeled antigen and an unlabeled  Antigen. Generally this layer essentially contains lichen the total amount of labeled antigen, which in the analytical element is incorporated. The reagent layer is on the opposite side to the samples attached to the receiving side of the porous layer, and it is with the porous layer directly or over one or more re layers integrated. The reagent layer can be one be uniform layer, which is a hydrophilic polymer res as binders, such as gelatin, their derivatives, phthala tized gelatin, cellulose derivatives such as hydroxyethyl cellulose, agarose, polyacrylamide, polymethacrylamide, and Copolymers of acrylamide or methacrylamide and various contains vinyl monomers. The reagent layer can also made of a porous material, as in the Japanese patents KOKAI 58-70 163, 61-4 959, 62-1 16 258, 62-1 38 756, 62-1 38 757 and 62-1 38 758. If the marker substance or the label substance is an enzyme can in the reagent layer is a substrate of the enzyme, an oxidation medium, a coupling agent, a buffer etc. incorporated be. Among the above, the substrate is essential.

Eine oder mehrere Schichten können zwischen der porösen Schicht und der Reagensschicht vorhanden sein. Beispiele einer solchen Zwischenschicht sind eine Bindungsschicht, eine Lichtabschirmungsschicht und eine Filterschicht. Weiterhin kann jede der zuvor erwähnten porösen Schichten der Reagensschicht aus zwei oder mehr Schichten bestehen.One or more layers can be between the porous Layer and the reagent layer may be present. Examples such an intermediate layer is a bond layer, a light shielding layer and a filter layer. Furthermore, any of the aforementioned porous layers the reagent layer consists of two or more layers.

Die Bindungsschicht ist vorgesehen, damit die poröse Schicht an ihr haftet, und sie besteht bevorzugt aus einem hydrophilen Polymer, welches die poröse Schicht festklebt, während sie in einem nassen bzw. gequollenen Zustand des Polymeren ist. Beispiele für ein solches hydrophiles Poly­ meres sind Gelatine, Gelatinederivate, Polyacrylamid und Stärke. Die Bindungsschicht kann ebenfalls auf der zuvor erwähnten Reagensschicht, einer anderen Reagensschicht, einer Lichtabschirmungsschicht, einer Filterschicht, einer Wasserabsorptionsschicht, einer Registrierschicht oder einer ähnlichen Schicht vorhanden sein.The binding layer is provided so that the porous Layer adheres to it, and it preferably consists of one hydrophilic polymer, which sticks the porous layer, while in a wet or swollen state of the Polymers. Examples of such a hydrophilic poly meres are gelatin, gelatin derivatives, polyacrylamide and  Strength. The tie layer can also be on top of that mentioned reagent layer, another reagent layer, a light shielding layer, a filter layer, one Water absorption layer, a registration layer or a similar layer.

Die Lichtabschirmungs- bzw. Blockierungsschicht schirmt die Farbe der Probe, die auf die Ausbreitungsschicht aufge­ tragen wird, insbesondere die rote Farbe des Hämoglobins, wenn die Probe Gesamtblut ist, ab, wenn eine optisch nach­ weisbare Änderung, wie eine Verfärbung oder Entfärbung, die in der Reagensschicht, einer anderen Reagensschicht, einer Registrierschicht oder ähnlichen Schicht auftritt, durch Reflexionsphotometrie von der lichtdurchlässigen Trägerseite aus gemessen wird. Zusätzlich wirkt sie eben­ falls als Lichtreflexionsschicht oder als Hintergrund­ schicht. Die Lichtabschirmungsschicht ist bevorzugt die wasserpermeable Schicht, die aus einem hydrophilen Polyme­ ren als Bindemittel (Matrix) besteht, worin die Lichtre­ flexionsteilchen, wie Titandioxid oder Bariumsulfat, di­ spergiert sind. Bevorzugte hydrophile Polymere sind Gela­ tine, Gelatinederivate, Polyacrylamid und ähnliche. Die Lichtreflexionsteilchen können in die Ausbreitungsschicht, die Reagensschicht, eine Regristrierschicht oder ähnliche Schicht eingearbeitet werden, zusätzlich oder anstatt sie in die Lichtabschirmungsschicht einzuarbeiten.The light shielding or blocking layer shields the color of the sample applied to the spreading layer wear, especially the red color of hemoglobin, if the sample is whole blood, if an optically after noticeable change, such as discoloration or discoloration, that in the reagent layer, another reagent layer, a registration layer or similar layer occurs, by reflection photometry of the translucent Carrier side is measured from. In addition, it works if as a light reflection layer or as a background layer. The light shielding layer is preferably that water permeable layer made of a hydrophilic polymer ren as a binder (matrix), in which the Lichtre flexion particles, such as titanium dioxide or barium sulfate, di are merged. Preferred hydrophilic polymers are gela tine, gelatin derivatives, polyacrylamide and the like. The Light reflection particles can enter the spreading layer, the reagent layer, a registration layer or the like Layer can be incorporated, in addition to or instead of them to work into the light shielding layer.

Die folgenden Ausführungsformen sind für das erfindungsge­ mäße Analysenelement, welches einen lichtdurchlässigen wasserimpermeablen Träger enthält, besonders geeignet:The following embodiments are for the fiction moderate analysis element, which has a translucent contains water impermeable carrier, particularly suitable:

  • (1) Die poröse Ausbreitungsschicht, die Reagensschicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge überein­ ander angeordnet. (1) The porous spreading layer, the reagent layer and the carrier are in that order arranged differently.  
  • (2) Die poröse Ausbreitungsschicht, die Reagensschicht, eine Registrierschicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet.(2) The porous spreading layer, the reagent layer, a registration layer and the carrier are in this Sequence arranged one above the other.
  • (3) Die Ausbreitungsschicht, eine Lichtreflexionsschicht, die Reagensschicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet.(3) the spreading layer, a light reflecting layer, the reagent layer and the support are in it Sequence arranged one above the other.
  • (4) Die Ausbreitungsschicht, eine Lichtreflexionsschicht, die Reagensschicht, eine Registrierschicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge übereinander an­ geordnet.(4) The spreading layer, a light reflecting layer, the reagent layer, a registration layer and the Carriers are on top of each other in this order orderly.
  • (5) Die poröse Ausbreitungsschicht, die Reagensschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine Registrierschicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge überein­ ander angeordnet.(5) The porous spreading layer, the reagent layer, a light reflection layer, a registration layer and the carrier are in that order arranged differently.
  • (6) Die Ausbreitungsschicht, eine erste Reagensschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine zweite Reagens­ schicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet. Eine oder beide der obigen Reagensschichten enthalten das markierte Antigen.(6) the spreading layer, a first reagent layer, a light reflection layer, a second reagent layer and the carrier are in that order arranged one above the other. One or both of the above Reagent layers contain the labeled antigen.
  • (7) Die Ausbreitungsschicht, eine erste Reagensschicht, eine Lichtreflexionsschicht, eine zweite Reagens­ schicht, eine Registrierschicht und der Träger sind in dieser Reihenfolge übereinander angeordnet. Eine oder beide der obigen Reagensschichten enthalten das markierte Antigen.(7) the spreading layer, a first reagent layer, a light reflection layer, a second reagent layer, a registration layer and the carrier arranged one above the other in this order. A or both of the above reagent layers contain this labeled antigen.

Bei den obigen Ausführungsformen (1) bis (5) kann die Rea­ gensschicht aus zwei oder mehreren Schichten bestehen. Eine Wasserabsorptionsschicht kann zwischen der Reagens­ schicht oder der Registrierschicht und dem Träger vorge­ sehen sein. Bei den Ausführungsformen (1) bis (3) und (6) kann eine Filterschicht zwischen der Reagensschicht und der Registrierschicht oder der Ausbreitungsschicht vorge­ sehen sein. Bei den obigen Ausführungsformen (3) bis (7) kann eine Filterschicht ebenfalls zwischen der Lichtre­ flexionsschicht und der Registrierschicht, der Ausbreitungs­ schicht und der Reagensschicht, der Reagensschicht und der Registrierschicht oder der Ausbreitungsschicht und der Reagensschicht vorgesehen sein. Wenn die Reagensschicht aus zwei oder mehreren Schichten besteht, kann eine Filter­ schicht ebenfalls zwischen ihnen vorhanden sein.In the above embodiments (1) to (5), the rea opposite layer consist of two or more layers. A water absorption layer can be placed between the reagent  layer or the registration layer and the carrier to be seen. In the embodiments (1) to (3) and (6) can have a filter layer between the reagent layer and the registration layer or the spreading layer to be seen. In the above embodiments (3) to (7) can a filter layer between the Lichtre flexion layer and the registration layer, the spread layer and the reagent layer, the reagent layer and the registration layer or the spreading layer and the Reagent layer may be provided. If the reagent layer A filter can consist of two or more layers layer also exist between them.

Bei dem Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen Analysenelements kann das markierte Antigen in der Beschich­ tungslösung gelöst oder suspendiert sein, wobei diese Lösung unter Bildung der Reagensschicht aufgebracht wird.In the process for producing the invention The labeled antigen can be analyzed in the coating solution or be suspended, these Solution is applied to form the reagent layer.

Damit andererseits die Effusion des Antikörpers in die Reagensschicht verhindert wird, hat die Anmelderin verschie­ dene Möglichkeiten untersucht und gefunden, daß eine wirk­ same Möglichkeit die Anwendung einer Lösung oder Suspension des Antikörpers, gelöst oder suspendiert in einem organi­ schen Lösungsmittel, welches das markierte Antigen nicht löst und nicht solubilisiert, auf die poröse Schicht ist. Bevorzugte organische Lösungsmittel, welche die Reagens­ schicht, die aus hydrophilen Polymeren, wie Gelatine, Aga­ rose usw. besteht, nicht quellen, sind Alkohole, wie Ethanol und Methanol, Ketone, wie Aceton, und Ether, wie Ethylcellosolve. Die Lösung oder Suspension enthält bevor­ zugt alle Komponenten, die in die poröse Schicht eingear­ beitet werden, und die Beschichtungsmenge jeder Komponente kann gleich sein wie bei den bekannten integralen multi­ schichtigen Analysenelementen. Der Antikörper kann zuerst in die poröse Schicht eingearbeitet werden, gegebenenfalls zusammen mit anderen Komponenten, und die poröse Schicht kann dann an die Schicht unter ihr, wie an die Reagens­ schicht, laminiert werden. In diesem Fall kann das Lösungs­ mittel der Beschichtungslösung Wasser sein. Das obige or­ ganische Lösungsmittel oder die wäßrige Lösung oder Sus­ pension kann auf dem porösen Träger nach an sich bekannten Verfahren angewendet werden, oder dieser kann damit im­ prägniert werden, wie durch Eintauchbeschichtung, Beschich­ tung mit einem Rakel, Beschichtung mit einem Speisetrich­ ter oder Vorhangbeschichtung.On the other hand, the effusion of the antibody into the The reagent layer has been prevented investigated their possibilities and found that an effective same possibility of using a solution or suspension of the antibody, dissolved or suspended in an organi solvent that the labeled antigen does not dissolves and is not solubilized on the porous layer. Preferred organic solvents which are the reagent layer made of hydrophilic polymers such as gelatin, Aga rose, etc., do not swell, are alcohols, such as Ethanol and methanol, ketones such as acetone, and ethers such as Ethyl cellosolve. The solution or suspension contains before attracts all components that are incorporated into the porous layer be processed, and the coating amount of each component can be the same as the well-known integral multi  layered analysis elements. The antibody can go first be incorporated into the porous layer, if necessary along with other components, and the porous layer can then be attached to the layer below it, as to the reagent layer to be laminated. In this case, the solution be water by means of the coating solution. The above or ganic solvents or the aqueous solution or Sus Pension can on the porous support according to known Procedures are used, or this can be used in be characterized, such as by immersion coating, coating with a doctor blade, coating with a screed ter or curtain coating.

Beispielexample (1) Synthese von Thyroxin, welches mit Fluorescein mar­ kiert ist(1) Synthesis of thyroxine, which with fluorescein mar is

Das mit Fluorescein markierte Thyroxin (FITC-T4) wurde ent­ sprechend dem Verfahren, wie es in dem japanischen Patent KOKAI 59-1 70 768 beschrieben wird, synthetisiert.The fluorescein-labeled thyroxine (FITC-T 4 ) was synthesized in accordance with the process as described in Japanese Patent KOKAI 59-1 70 768.

(2) Herstellung einer Antithyroxin-Antiserum-Suspension(2) Preparation of an antithyroxine antiserum suspension

Das folgende Gemisch wird in einer Homogenisierungsvorrich­ tung während 1 Stunde unter Bildung einer Antithyroxin- Antiserum-Suspension homogenisiert.The following mixture is placed in a homogenizer for 1 hour to form an antithyroxine Homogenized antiserum suspension.

Antithyroxin-Antiserum
(als lyophilisiertes Pulver)1 ml Nonylphenoxypolyethoxyethanol
(n = 15)0,2 ml Aceton100 g Antithyroxine antiserum
(as a lyophilized powder) 1 ml of nonylphenoxypolyethoxyethanol
(n = 15) 0.2 ml acetone 100 g

(3) Herstellung eines vielschichtigen Blattes(3) Production of a multi-layer sheet

Als Träger wird ein farbloser transparenter glatter Film aus Polyethylenterephthalat (PET), der 180 µm dick ist, verwendet, auf den eine Gelatine-Unterschicht aufgebracht ist. Die folgende wäßrige Lösung wird auf den Träger auf­ gebracht, so daß seine Trockendicke 2 µm beträgt, und getrocknet, wobei man eine Reagensschicht erhält.A colorless, transparent, smooth film is used as the carrier made of polyethylene terephthalate (PET), which is 180 µm thick, used, on which a gelatin sub-layer was applied is. The following aqueous solution is applied to the support brought so that its dry thickness is 2 microns, and dried, giving a reagent layer.

Gelatine10 g FITC-T₄120 µg Formalin0,2 g Wasser190 gGelatin 10 g FITC-T₄120 µg Formalin 0.2 g Water 190 g

Die Gelatine wird auf die obige Reagensschicht bis zu ei­ ner Trockendicke von etwa 2 µm unter Bildung einer Bin­ dungsschicht aufgebracht.The gelatin is applied to the above reagent layer ner dry thickness of about 2 microns to form a bin application layer applied.

Die obige Bindungsschicht wird mit 30 g/m2 Wasser befeuch­ tet. Ein Trikottextiltuch, welches durch Verstricken von 50D PET-gesponnenem Garn unter Verwendung von 36 Gauge her­ gestellt wurde, wird aufgepreßt, so daß es laminiert, und anschließend wird getrocknet, wobei man die Ausbreitungs­ schicht erhält.The above binding layer is moistened with 30 g / m 2 of water. A tricot fabric made by knitting 50D PET-spun yarn using 36 gauge is pressed on so that it is laminated, and then dried to obtain the spreading layer.

Danach wird die folgende Beschichtungslösung auf die Aus­ breitungsschicht in einer Menge von 120 ml/m2 aufgetragen, und nach dem Trocknen erhält man ein integrales vielschich­ tiges analytisches Element für die Messung von Thyroxin.Thereafter, the following coating solution is applied to the spreading layer in an amount of 120 ml / m 2 , and after drying, an integral multi-layer analytical element for the measurement of thyroxine is obtained.

Antithyroxin-Antiserum-Suspension5 ml Polyvinylpyrrolidon25 g Nonylphenoxypolyethoxyethanol
(n = 15)0,2 mg Methylalkohol500 mlAntithyroxine antiserum suspension 5 ml polyvinylpyrrolidone 25 g nonylphenoxypolyethoxyethanol
(n = 15) 0.2 mg methyl alcohol 500 ml

Andererseits wird ein integrales vielschichtiges Ver­ gleichs-Analysenelement für die Messung von T4 auf gleiche Weise wie oben beschrieben hergestellt, ausgenommen, daß in der obigen Beschichtungslösung 500 ml Methylalkohol durch 500 ml Wasser ersetzt wurden.On the other hand, an integral multilayer comparative analysis element for measuring T 4 is prepared in the same manner as described above, except that 500 ml of methyl alcohol was replaced by 500 ml of water in the above coating solution.

(4) Messung von Thyroxin(4) Measurement of thyroxine

Ein Serum wird mit Aktivkohle behandelt, wobei ein thyroxin(T4)freies Serum erhalten wird. T4 wird zu diesem T4-freien Serum unter Herstellung der Sera für die Eichung zugegeben, wobei diese T4 in unterschiedlichen Konzentra­ tionen enthalten. Je 5 µl von wäßrigem 0,1M Blocker′s-Rea­ gens-(Natriumdodecylnaphthalinsulfonat)-Lösung und 5 µl von 0,3M Glucin-NaCl-NaOH-Pufferlösung werden zu jedem Serum für die Eichung zugegeben. Das Gemisch wird auf die ent­ sprechenden analytischen Elemente getropft und bei 25°C während 30 Minuten gehalten. Das analytische Element wird mit einer Lichtquelle mit einer Erregungswellenlänge von 495 nm bestrahlt, und die reflektierte Fluoreszenz bei der Wellenlänge von 525 nm wird von der PET-Filmseite aus unter Verwendung eines Fluorophotometers ("Fluorophotometer 650-10(s)", Hitachi Ltd.) gemessen. Die so erhaltenen Eich­ kurven sind in Fig. 1 dargestellt. In der Zeichnung bedeu­ tet die ausgezogene Linie die Ergebnisse, die man unter Verwendung des erfindungsgemäßen analytischen Elements er­ hält, und die gestrichelte Linie zeigt die Ergebnisse an, die man unter Verwendung des Vergleichs-Analysenelements erhält. Wie aus der Zeichnung folgt, ist das erfindungsge­ mäße Analysenelement wesentlich empfindlicher als das Vergleichs-Analysenelement.A serum is treated with activated carbon, whereby a thyroxine (T 4 ) free serum is obtained. T 4 is added to this T 4 -free serum to produce the sera for calibration, these containing T 4 in different concentrations. 5 µl each of aqueous 0.1M Blocker's reagent (sodium dodecylnaphthalenesulfonate) solution and 5 µl of 0.3M glucin-NaCl-NaOH buffer solution are added to each serum for calibration. The mixture is dropped onto the corresponding analytical elements and kept at 25 ° C. for 30 minutes. The analytical element is irradiated with a light source with an excitation wavelength of 495 nm, and the reflected fluorescence at the wavelength of 525 nm is measured from the PET film side using a fluorophotometer ("Fluorophotometer 650-10 (s)", Hitachi Ltd. ) measured. The calibration curves thus obtained are shown in Fig. 1. In the drawing, the solid line means the results obtained using the analytical element of the present invention, and the broken line indicates the results obtained using the comparative analysis element. As follows from the drawing, the analytical element according to the invention is considerably more sensitive than the comparative analytical element.

Claims (11)

1. Analysentrockenelement für einen Immunoassay mit mindestens zwei integrierten wasserpermeablen Schichten, wovon eine der Schichten eine poröse Schicht und die an­ dere der Schichten eine Reagensschicht ist, die Reagens­ schicht an der gegenüberliegenden Seite der Proben­ empfangsseite der porösen Schicht angebracht ist, die wasserpermeablen Schichten die Komponenten enthalten, die an einer Antigen-Antikörper-Reaktion teilnehmen, wobei eine der Komponenten, die an der Antigen-Antikörper-Reak­ tion teilnimmt, ein markiertes Antigen ist und die andere der Komponenten ein Antikörper für das markierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen ist, dadurch ge­ kennzeichnet, daß die poröse Schicht den Antikörper, aber nicht das markierte Antigen enthält und daß die Reagensschicht das markierte Antigen, aber nicht den Antikörper enthält.1. Analysis drying element for an immunoassay with at least two integrated water-permeable layers, one of which is a porous layer and the other of which is a reagent layer, the reagent layer is attached to the opposite side of the sample receiving side of the porous layer, the water-permeable layers Contain components which take part in an antigen-antibody reaction, one of the components participating in the antigen-antibody reaction being a labeled antigen and the other of the components being an antibody for the labeled antigen and an unlabeled antigen, characterized in that the porous layer contains the antibody but not the labeled antigen and that the reagent layer contains the labeled antigen but not the antibody. 2. Analytisches Element nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das nichtmarkierte An­ tigen das Antigen ist, welches bestimmt werden soll. 2. Analytical element according to claim 1, characterized characterized that the unmarked An is the antigen to be determined.   3. Analytisches Element nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die poröse Schicht eine Ausbreitungsschicht ist.3. Analytical element according to claim 1, characterized characterized in that the porous layer is a Is spreading layer. 4. Analytisches Element nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Markierungs- bzw. Labelsubstanz für das markierte Antigen eine Verbindung aus der Gruppe fluoreszierendes Material, lumines­ zierendes Material, ein Enzym, Enzymaktivator, Enzymin­ hibitor und Coenzym ist.4. Analytical element according to claim 1, characterized characterized in that the marking or Label substance for the labeled antigen a compound from the group fluorescent material, lumines ornamental material, an enzyme, enzyme activator, enzyme hibitor and coenzyme is. 5. Verfahren zur Herstellung eines Analysentrockenele­ ments für einen Immunoassay mit mindestens zwei integrier­ ten wasserpermeablen Schichten, wovon eine der Schichten eine poröse Schicht ist, die andere der Schichten eine Reagensschicht ist, die Reagensschicht an der gegenüber­ liegenden Seite der Probenaufnahmeseite der porösen Schicht angebracht ist, die wasserpermeablen Schichten die Komponenten enthalten, die an einer Antigen-Antikörper- Reaktion teilnehmen, wobei eine der Komponenten, die in der Antigen-Antikörper-Reaktion teilnimmt, ein markiertes Antigen ist und die andere der Komponenten ein Antikörper für das markierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen ist, dadurch gekennzeichnet, daß
eine Reagensschicht, welche das markierte Antigen enthält, gebildet wird,
eine poröse Schicht auf die Reagensschicht aufge­ bracht wird und
auf die poröse Schicht eine Masse durch Beschichten oder Eintauchen aufgebracht wird, die den Antikörper ent­ hält und das markierte Antigen in der Reagensschicht nicht wesentlich auflöst oder solubilisiert. 5. A method for producing an analytical drying element for an immunoassay with at least two integrated water-permeable layers, one of which is a porous layer, the other of the layers is a reagent layer, the reagent layer is attached to the opposite side of the sample-receiving side of the porous layer the water-permeable layers contain the components that participate in an antigen-antibody reaction, wherein one of the components that participates in the antigen-antibody reaction is a labeled antigen and the other of the components is an antibody for the labeled antigen and a is unlabelled antigen, characterized in that
a reagent layer containing the labeled antigen is formed,
a porous layer is placed on the reagent layer and
a mass is applied to the porous layer by coating or immersion, which contains the antibody and does not substantially dissolve or solubilize the labeled antigen in the reagent layer. 6. Verfahren zur Herstellung eines Analysentrockenele­ ments für einen Immunoassay mit mindestens zwei integrier­ ten wasserpermeablen Schichten, wobei eine der Schichten eine poröse Schicht ist und die andere der Schichten eine Reagensschicht ist, die Reagensschicht an der entgegen­ gesetzten Seite der Probenempfangsseite der porösen Schicht angebracht ist, die wasserpermeablen Schichten die Komponenten enthalten, welche an der Antigen-Antikör­ per-Reaktion teilnehmen, wobei eine der Komponenten, die an der Antigen-Antikörper-Reaktion teilnimmt, ein mar­ kiertes Antigen ist und die andere der Komponenten ein Antikörper für das markierte Antigen und ein nichtmarkier­ tes Antigen ist, dadurch gekennzeichnet, daß
eine Reagensschicht gebildet wird, welche ein mar­ kiertes Antigen und als Bindemittel (Matrix) ein hydrophi­ les Polymeres enthält,
auf die Reagensschicht eine poröse Schicht angewendet wird und
auf die poröse Schicht eine Masse aufgebracht wird, welche den Antikörper und ein Lösungsmittel, welches im wesentlichen die Reagensschicht nicht quillt, enthält.6. A method for producing an analytical drying element for an immunoassay with at least two integrated water-permeable layers, one of the layers being a porous layer and the other of the layers being a reagent layer, the reagent layer being attached to the opposite side of the sample receiving side of the porous layer , the water-permeable layers contain the components which participate in the antigen-antibody reaction, one of the components which participates in the antigen-antibody reaction being a labeled antigen and the other of the components being an antibody for the labeled antigen and is an unlabelled antigen, characterized in that
a reagent layer is formed, which contains a marked antigen and, as a binder (matrix), a hydrophilic polymer,
a porous layer is applied to the reagent layer and
a mass is applied to the porous layer which contains the antibody and a solvent which essentially does not swell the reagent layer. 7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekenn­ zeichnet, daß die poröse Schicht eine Ausbrei­ tungsschicht ist.7. The method according to claim 6, characterized records that the porous layer is a slurry is layer. 8. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekenn­ zeichnet, daß das Lösungsmittel ein Lösungsmittel aus der Gruppe Alkohol, Keton und Ether ist.8. The method according to claim 6, characterized records that the solvent is a solvent from the group of alcohol, ketone and ether. 9. Verfahren zur Herstellung eines Analysentrockenele­ ments für einen Immunoassay mit mindestens zwei integrier­ ten wasserpermeablen Schichten, wovon eine der Schichten eine poröse Schicht ist, die andere der Schichten eine Reagensschicht ist, die Reagensschicht an der gegenüber­ liegenden Seite der Probenempfangsseite der porösen Schicht angebracht ist, die wasserpermeablen Schichten die Komponenten enthalten, die an der Antigen-Antikörper- Reaktion teilnehmen, wobei eine der Komponenten, die an der Antigen-Antikörper-Reaktion teilnimmt, ein markiertes Antigen ist und die andere der Komponenten ein Antikörper für das markierte Antigen und ein nichtmarkiertes Antigen ist, dadurch gekennzeichnet, daß
eine Reagensschicht gebildet wird, die das markierte Antigen enthält,
auf einen porösen Film eine flüssige Masse aufge­ bracht wird, die den Antikörper, gelöst oder solubilisiert in einem Lösungsmittel, welches verdampft werden kann, ent­ hält und
der poröse Film, der den Antikörper enthält, auf die Reagensschicht laminiert wird.9. A method for producing an analytical drying element for an immunoassay with at least two integrated water-permeable layers, one of which is a porous layer, the other of the layers is a reagent layer, the reagent layer is attached to the opposite side of the sample receiving side of the porous layer the water permeable layers contain the components that participate in the antigen-antibody reaction, wherein one of the components that participates in the antigen-antibody reaction is a labeled antigen and the other of the components is an antibody to the labeled antigen and a is unlabelled antigen, characterized in that
a reagent layer is formed which contains the labeled antigen,
on a porous film a liquid mass is brought up, the antibody, dissolved or solubilized in a solvent that can be evaporated, ent and
the porous film containing the antibody is laminated on the reagent layer. 10. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekenn­ zeichnet, daß die poröse Schicht eine Ausbrei­ tungsschicht ist.10. The method according to claim 9, characterized records that the porous layer is a slurry is layer. 11. Verfahren nach Anspruch 9, dadurch gekenn­ zeichnet, daß das Lösungsmittel ausgewählt wird aus der Gruppe Alkohol, Keton und Ether.11. The method according to claim 9, characterized indicates that the solvent is selected from the group alcohol, ketone and ether.
DE19883807756 1987-03-10 1988-03-09 Dry analytical element for an immunoassay Withdrawn DE3807756A1 (en)

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