DE3803021A1 - ATP derivatives - Google Patents

ATP derivatives

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Abstract

The invention relates to ATP derivatives of the general formula I <IMAGE> in which R<1> and R<2> are, independently of one another, -PO4H2, -OH, -SO4H or O-acetyl, with the proviso that the R<1> and R<2> radicals cannot both be -OH simultaneously. ATP can be liberated from the ATP derivatives according to the invention with the aid of various enzymes and can be detected with the aid of the bioluminescence reaction with the use of luciferin and with determination of the light pulses released thereby. Enzymes can be detected on the basis of the data obtained in this way.

Description

Die Erfindung betrifft ATP-Derivate, ihre Verwendung zum Nachweis von Enzymen oder zur Bestimmung von Enzymaktivi­ täten und diese Derivate enthaltende Zusammensetzungen.The invention relates to ATP derivatives, their use for Detection of enzymes or for the determination of enzyme activi and compositions containing these derivatives.

Bei den herkömmlichen analytischen Bestimmungen von Enzym­ aktivitäten, beispielsweise in biologischem Material, bedient man sich fluorogener oder chomogener Substrate, aus denen dann mit Hilfe der Enzyme eine "austretende Gruppe" freigesetzt werden kann.With the conventional analytical determinations of enzyme activities, for example in biological material, if fluorogenic or chomogenic substrates are used, from which, with the help of the enzymes, a "leaking Group "can be released.

Bei dieser austretenden Gruppe kann es sich beispiels­ weise um Farbstoffe handeln. Die bei dieser "Indikator­ reaktion" entstehenden Farbstoffe sind der Fotometrie zugänglich. Daher ist es möglich, ihre Konzentration zu bestimmen und aus den gewonnenen Daten Rückschlüsse auf die enzymatische Aktivität zu ziehen; "Methods of Enzy­ matic Analysis", Verlag Chemie, Vol. 1-11, Weinheim, Bergstraße (1984), Hrsg. H. U. Bergmeyer.This leaving group can be, for example act wisely about dyes. The at this "indicator reaction "resulting dyes are photometry accessible. Therefore, it is possible to concentrate determine and draw conclusions from the data obtained  to pull the enzymatic activity; "Methods of Enzy matic Analysis ", Verlag Chemie, Vol. 1-11, Weinheim, Bergstrasse (1984), ed. H. U. Bergmeyer.

Mit den bisher bekannten Substraten können Enzym-Konzentra­ tionen bis ca. 5 ng pro Test gemessen werden. Es handelt sich hier um die enzymatische Aktivität (U). Aus der spezifischen Aktivität (U/mg) kann auf die Menge an Enzym geschlossen werden.With the substrates known so far, enzyme concentrates ions up to approx. 5 ng per test. It deals the enzymatic activity (U). From the specific activity (U / mg) can depend on the amount of enzyme getting closed.

Die enzymatische Aktivität (U) ist definiert als µmol/min.; meist bei 25°C gemessen. Diese enzymatische Aktivitäten, die auch katalytische Aktivität genannt wird, wird in SI- einheiten in Katal (kat=mol/s) angegeben. Die katalytische Konzentration (katalytische Aktivität pro Volumen) wird in kat/l angegeben.The enzymatic activity (U) is defined as µmol / min .; mostly measured at 25 ° C. These enzymatic activities, which is also called catalytic activity, is described in SI units given in catal (kat = mol / s). The catalytic Concentration (catalytic activity per volume) is in Kat / l specified.

Erfindungsgemäß werden Derivate des Adenosin-5′-triphosphats (ATP) bereitgestellt, mit denen Enzyme wesentlich empfind­ licher detektiert werden können als mit den eingangs genann­ ten analytischen Bestimmungsmethoden. Die Enzyme setzen aus den erfindungsgemäßen Derivaten "reines" ATP frei, das mit der Biolumineszenz-Reaktion detektiert wird.According to the invention, derivatives of adenosine 5'-triphosphate (ATP) provided with which enzymes are sensitive can be detected more reliably than with the above analytical methods of determination. The enzymes are suspended the derivatives "pure" ATP according to the invention, which with the bioluminescence reaction is detected.

ATP ist für die Biolumineszenz-Reaktion von essentieller Bedeutung. Bei dieser Biolumineszenz-Reaktion wird ATP mit D-Luciferin oder mit D-Aminoluciferin und mit dem Enzym Luci­ ferase des Leuchtkäfers Photinus pyralis oder des Leucht­ käfers Photinus plathiophthalamus oder mit der Luciferase anderer Spezies oder mit chemisch oder genetisch modifi­ zierten Luciferasen in Gegenwart von MgCl₂ umgesetzt. Diese Biolumineszenz-Reaktion unter Verwendung von D- Luciferin ist im nachstehend gezeigten Schema erläutert. ATP is essential for the bioluminescence reaction Importance. In this bioluminescence reaction, ATP is used D-luciferin or with D-aminoluciferin and with the enzyme Luci ferase of the firefly Photinus pyralis or the glow beetle Photinus plathiophthalamus or with luciferase other species or with chemically or genetically modified graced luciferases in the presence of MgCl₂ implemented. This bioluminescence reaction using D- Luciferin is illustrated in the scheme shown below.  

Bei dieser unter Verbrauch von ATP ablaufenden Reaktion werden Photonen emittiert; und zwar bei der Umsetzung mit Enzym des Leuchtkäfers Photinus pyralis bei 605 nm und bei der Umsetzung mit dem Enzym des Leuchtkäfers Photinus plathiophthalamus bei 549 bzw. 570 nm oder bei der dem eingesetzten Luciferin/Luciferase-System ent­ sprechenden Wellenlänge. Das emittierte Licht bestimmt man dann luminometrisch.In this reaction, which takes place using ATP photons are emitted; in the implementation with enzyme of the firefly Photinus pyralis at 605 nm and in the reaction with the enzyme of the firefly Photinus plathiophthalamus at 549 or 570 nm or at ent of the luciferin / luciferase system used speaking wavelength. The light emitted determines one then luminometrically.

Für weitere Einzelheiten wird auf folgende Literatur­ stellen verwiesen:
"Luminometry" von K. Wulff in "Methods of Enzymatic Analysis", Vol. 1 (Hrsg. H. U. Bergmeyer), Seiten 340-368, Verlag Chemie, Weinheim, Bergstraße (1983) und Journal of the American Chemical Society 88, 2015-2018 (1966) von E. H. White et al. For further details, please refer to the following literature:
"Luminometry" by K. Wulff in "Methods of Enzymatic Analysis", Vol. 1 (Ed. HU Bergmeyer), pages 340-368, Verlag Chemie, Weinheim, Bergstrasse (1983) and Journal of the American Chemical Society 88, 2015- 2018 (1966) by EH White et al.

Eine Änderung der ATP-Konzentration bedingt bei der oben beschriebenen Biolumineszenz-Reaktion eine Änderung der Lichtfreisetzung. Somit kann die ATP-Konzentration über die Zahl der gemessenen Lichtimpulse ermittelt werden.A change in the ATP concentration results in the above described a change in the bioluminescence reaction Light release. Thus the ATP concentration can be over the number of measured light pulses can be determined.

Gegenstand der Erfindung sind die im Anspruch 1 beschrie­ benen ATP-Derivate. Diese erfindungsgemäßen ATP-Derivate werden von hydrolytischen Enzymen wie Phosphatasen, Sul­ fatasen und Esterasen gspalten. Dabei wird ATP freigesetzt, welches mit Luciferin oder Aminoluciferin, Magnesium-Ionen und Luciferase entsprechend der oben beschriebenen Bio­ lumineszenz-Reaktion zur Freisetzung von Photonen führt. Die dabei ausgesandte Lichtmenge ist abhängig von der Menge an freigesetztem ATP und ist somit ein Maß für die enzyma­ tische Aktivität der hydrolytischen Enzyme.The invention relates to those described in claim 1 ATP derivatives. These ATP derivatives according to the invention are from hydrolytic enzymes such as phosphatases, Sul cleave fatases and esterases. ATP is released, which with luciferin or aminoluciferin, magnesium ions and luciferase according to the bio described above luminescence reaction leads to the release of photons. The amount of light emitted depends on the amount of released ATP and is therefore a measure of enzyma table activity of the hydrolytic enzymes.

Mit Hilfe der erfindungsgemäßen ATP-Derivate ist es möglich, Enzyme noch in geringsten Mengen nachzuweisen. So können von dem Enzym alkalische Phosphatase mit Hilfe der erfin­ dungsgemäßen Verbindung 3′-Phospho-Adenosin-5′-triphosphat noch 100 fg detektiert werden.With the help of the ATP derivatives according to the invention it is possible to Detect even the smallest amount of enzymes. So can of the enzyme alkaline phosphatase with the help of the inventions inventive compound 3'-phospho-adenosine-5'-triphosphate 100 fg are still detected.

Mit den erfindungsgemäßen ATP-Derivaten können Phosphatasen (saure, neutrale und alkalische), Sulfatasen und Esterasen von den verschiedensten Spezies und unterschiedlichen Orga­ nen und Geweben sehr empfindlich nachgewiesen werden.With the ATP derivatives according to the invention, phosphatases (acidic, neutral and alkaline), sulfatases and esterases of different species and different organization and tissues can be detected very sensitively.

Diese erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Immuno­ assays, Histoimmunlumineszenz-Verfahren, bei Protein- Blotting, DNA-Hybridisierung und RNA-Hybridisierung einge­ setzt werden. Dazu wird das hydrolytisch wirksame Enzym an Antigen/Antikörper oder Ligand/Rezeptor gekoppelt. Man inkubiert das Enzym-Konjugat mit dem entsprechenden Anti­ körper/Antigen oder Rezeptor/Ligand, entfernt überschüssi­ ges Enzym-Konjugat und detektiert das gebundene Konjugat mit dem entsprechenden ATP-Derivat. These compounds according to the invention can also be used in immuno assays, histoimmunumuminescence methods, for protein Blotting, DNA hybridization and RNA hybridization turned on be set. For this, the hydrolytically active enzyme coupled to antigen / antibody or ligand / receptor. Man incubate the enzyme conjugate with the corresponding anti body / antigen or receptor / ligand, removes excess enzyme conjugate and detects the bound conjugate with the corresponding ATP derivative.  

Ebenso können diese erfindungsgemäßen ATP-Derivate bei der Messung von Marker-Genen in transfektierten Zellen (d. h. Messung von Enzymen, die nach erfolgter Transfektion (Über­ tragung von Fremd-DNA/RNA in einen Organismus/Virus) mit dem entsprechenden Marker-Gen vom Gen exprimiert werden) angewandt werden.These ATP derivatives according to the invention can also be used in the Measurement of marker genes in transfected cells (i.e. Enzyme measurement after transfection (Via transfer of foreign DNA / RNA into an organism / virus) the corresponding marker gene are expressed by the gene) be applied.

Zur Durchführung der oben beschriebenen Biolumineszenz- Reaktion und somit zur Durchführung eines luminometrischen Tests verwendet man einen "Biolumineszenz-Cocktail" fol­ gender Zusammensetzung:To perform the bioluminescence described above Reaction and thus to carry out a luminometric Tests use a "bioluminescent cocktail" fol gender composition:

30 mmol/l HEPES (N-2-Hydroxyethyl-piperazin-N′-2-ethansulfonsäure)
 6 mmol/l Magnesiumchlorid
 0,3 mmol/l Luciferin bzw. Aminoluciferin
 0,5 mmol/l EDTA
80 µmol/l DTT (Dithiothreitol)
 2,5 µg/ml Luciferase (des Leuchtkäfers Photinus pyralis oder plathiophthalamus oder einer anderen Spezies)30 mmol / l HEPES (N-2-hydroxyethyl-piperazine-N'-2-ethanesulfonic acid)
6 mmol / l magnesium chloride
0.3 mmol / l luciferin or aminoluciferin
0.5 mmol / l EDTA
80 µmol / l DTT (dithiothreitol)
2.5 µg / ml luciferase (the beetle Photinus pyralis or plathiophthalamus or another species)

Gesamtvolumen: 0,4 ml; pH 7,75Total volume: 0.4 ml; pH 7.75

Obige Biolumineszenz-Reaktion sowie obiger luminometrischer Test sind nachfolgend an Hand des Nachweises der enzymatischen Aktivität am Beispiel der alkalischen Phosphatase aus Rinder Intestinal Mucosa erläutert:
0,95 ml einer 1 mmol/l Lösung von Adenosin-5′-triphosphat- 3′-phosphat in 0,05 mol/l Diethanolamin-Puffer mit 0,5 mmol/l Magnesiumchlorid pH 9,5 versetzt man mit 0,05 ml der zu testenden Lösung und inkubiert 30 min bei 25°C. Anschlie­ ßend entnimmt man 0,1 ml und gibt zu 0,4 ml des oben be­ schriebenen Biolumineszenz-Cocktails. Anschließend be­ stimmt man die Lichtimpulse in einem Lumineszenz-Meßgerät.The above bioluminescence reaction and the above luminometric test are explained below on the basis of the detection of the enzymatic activity using the example of the alkaline phosphatase from bovine intestinal mucosa:
0.95 ml of a 1 mmol / l solution of adenosine-5'-triphosphate-3'-phosphate in 0.05 mol / l diethanolamine buffer with 0.5 mmol / l magnesium chloride pH 9.5 is mixed with 0.05 ml of the solution to be tested and incubated for 30 min at 25 ° C. Then take 0.1 ml and add to 0.4 ml of the bioluminescence cocktail described above. Then one determines the light pulses in a luminescence measuring device.

BeispsieleExamples Beispiel 1Example 1 Herstellung von Adenosin-5′-triphosphat-3′-phosphatProduction of adenosine-5'-triphosphate-3'-phosphate

51 mg (0,1 mmol) ATP und 350 mg Magnesiumoxid suspendiert man in 3 ml Wasser und kühlt auf 0°C. Anschließend tropft man 45 mg (0,3 mmol) Phosphoroxychlorid in 1 ml Tetrachlor­ kohlenstoff zu. Nach 1 h bei Raumtemperatur filtriert man die Suspension, neutralisiert mit Essigsäure und engt im Vakuum ein. Den Rückstand nimmt man in wenig Wasser auf und reinigt mittels HPLC (MG: 587,16).51 mg (0.1 mmol) ATP and 350 mg magnesium oxide suspended in 3 ml of water and cooled to 0 ° C. Then drips 45 mg (0.3 mmol) of phosphorus oxychloride in 1 ml of tetrachlor carbon too. After 1 h at room temperature, filter the suspension, neutralized with acetic acid and concentrated in Vacuum on. The residue is taken up in a little water and cleans by means of HPLC (MW: 587.16).

Elementaranalyse:
berechnet:
C 20,46; H 2,92; N 11,93; P 21,00%;
gefunden:
C 20,34; H 2,78; N 12,07; P 21,84%.Elemental analysis:
calculated:
C 20.46; H 2.92; N 11.93; P 21.00%;
found:
C 20.34; H 2.78; N 12.07; P 21.84%.

Beispiel 2Example 2 Herstellung von Adenosin-5′-triphosphat-2′-phosphatPreparation of adenosine 5'-triphosphate-2'-phosphate

Man suspendiert 26 mg (0,05 mmol) ATP und 350 mg Magnesium­ oxid in 3 ml Wasser und kühlt auf 0°C. Anschließend tropft man 45 m (0,3 mol) Phosphoroxychlorid in 1 ml Tetrachlor­ kohlenstoff zu. Man filtriert die Suspension nach 2 h bei 0°C, neutralisiert mit Essigsäure und engt im Vakuum ein. Den Rückstand nimmt man in wenig Wasser auf und reinigt mittels HPLC (MG: 587,16). 26 mg (0.05 mmol) of ATP and 350 mg of magnesium are suspended oxide in 3 ml of water and cool to 0 ° C. Then drips 45 m (0.3 mol) of phosphorus oxychloride in 1 ml of tetrachlor carbon too. The suspension is filtered after 2 h 0 ° C, neutralized with acetic acid and concentrated in vacuo. The residue is taken up in a little water and cleaned by means of HPLC (MW: 587.16).  

Beispiel 3Example 3 Herstellung von Adenosin-5′-triphosphat-2′-sulfatProduction of adenosine-5'-triphosphate-2'-sulfate

Man löst 35,5 g (0,07 mmol) ATP in 1 ml Pyridin, gibt 16 mg (0,1 mmol) SO₃/Pyridin-Komplex zu und inkubiert unter Stickstoff 2 h bei Raumtemperatur. Anschließend engt man die Lösung in einem Rotations-Verdampfer im Ölpumpen­ vakuum ein, nimmt in wenig Wasser auf und reinigt mittels HPLC (MG: 587,24).35.5 g (0.07 mmol) of ATP are dissolved in 1 ml of pyridine 16 mg (0.1 mmol) SO₃ / pyridine complex and incubated under nitrogen for 2 h at room temperature. Then tight the solution in a rotary evaporator in oil pumps vacuum, absorbs in a little water and cleans with HPLC (MW: 587.24).

Elementaranalyse:
berechnet:
C 20,45; H 2,74; N 11,93; P 15,82; S 5,46%;
gefunden:
C 21,06; H 2,68; N 12,40; P 15,70; S 5,22%.Elemental analysis:
calculated:
C 20.45; H 2.74; N 11.93; P 15.82; S 5.46%;
found:
C 21.06; H 2.68; N 12.40; P 15.70; S 5.22%.

Beispiel 4Example 4 Herstellung von Adenosin-5′-triphosphat-3′-sulfatProduction of adenosine-5'-triphosphate-3'-sulfate

Man löst 35,5 g (0,07 mmol) ATP in 1 ml Pyridin, gibt 16 mg (0,1 mmol) SO₃/Pyridin-Komplex zu und inkubiert unter Stickstoff 2 h bei 50°C. Anschließend engt man die Lösung im Rotations-Verdampfer im Ölpumpenvakuum ein, nimmt in wenig Wasser auf und reinigt mittels HPLC (MG: 587,24).35.5 g (0.07 mmol) of ATP are dissolved in 1 ml of pyridine 16 mg (0.1 mmol) SO₃ / pyridine complex and incubated under Nitrogen for 2 h at 50 ° C. The solution is then concentrated in a rotary evaporator in an oil pump vacuum, takes in a little water and clean using HPLC (MW: 587.24).

HPLC-System für die Reinigung:
Säule RP-18 (5 um)
Lösung A: 0,02 mol/l Natriumphosphat ph 6,5+1% Methanol
Lösung B: Methanol
Gradient: 2,5 min A; in 4,5 min von 100% A auf 10% A
Detektion bei 254 nm.HPLC system for cleaning:
RP-18 Column (5 µm)
Solution A: 0.02 mol / l sodium phosphate pH 6.5 + 1% methanol
Solution B: methanol
Gradient: 2.5 min A; from 100% A to 10% A in 4.5 min
Detection at 254 nm.

Claims (5)

1. ATP-Derivate der allgemeinen Formel I worin R¹ und R² unabhängig voneinander für -PO₄H₂,-OH, -SO₄H oder -O-Acetyl stehen, mit der Maßgabe, daß nicht beide Reste R¹ und R² gleichzeitig für -OH stehen können.1. ATP derivatives of the general formula I wherein R¹ and R² are independently -PO₄H₂, -OH, -SO₄H or -O-acetyl, with the proviso that both R¹ and R² cannot simultaneously represent -OH. 2. ATP-Derivate nach Anspruch 1 der Formel I, worin R¹ oder R² für -OH steht.2. ATP derivatives according to claim 1 of formula I, wherein R¹ or R² is -OH. 3. ATP-Derivate nach Anspruch 1, nämlich:
Adenosin-5′-triphosphat-3′-phosphat,
Adenosin-5′-triphosphat-2′-phosphat,
Adenosin-5′-triphosphat-2′-sulfat und
Adenosin-5′-triphosphat-3′-sulfat.3. ATP derivatives according to claim 1, namely:
Adenosine 5′-triphosphate-3′-phosphate,
Adenosine 5′-triphosphate-2′-phosphate,
Adenosine-5'-triphosphate-2'-sulfate and
Adenosine 5'-triphosphate-3'-sulfate. 4. Verwendungen der ATP-Derivate nach den Ansprüchen 1 bis 3 zum Nachweis von Enzymen oder zur Bestimmung von Enzymaktivitäten.4. Uses of the ATP derivatives according to the claims 1 to 3 for the detection of enzymes or for determination of enzyme activities. 5. Zusammensetzungen zum Nachweis von Enzymen oder zur Bestimmung von Enzymaktivitäten, dadurch gekennzeichnet, daß sie mindestens ein ATP-Derivat nach den Ansprüchen 1 bis 3 enthalten.5. Compositions for the detection of enzymes or Determination of enzyme activities, characterized, that they have at least one ATP derivative according to claims 1 to 3 included.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005026184A2 (en) * 2003-06-30 2005-03-24 Roche Diagnostics Gmbh Synthesis and compositions of 2'-terminator nucleotides
US7745125B2 (en) 2004-06-28 2010-06-29 Roche Molecular Systems, Inc. 2′-terminator related pyrophosphorolysis activated polymerization

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005026184A2 (en) * 2003-06-30 2005-03-24 Roche Diagnostics Gmbh Synthesis and compositions of 2'-terminator nucleotides
WO2005026184A3 (en) * 2003-06-30 2007-02-01 Roche Diagnostics Gmbh Synthesis and compositions of 2'-terminator nucleotides
US7947817B2 (en) 2003-06-30 2011-05-24 Roche Molecular Systems, Inc. Synthesis and compositions of 2'-terminator nucleotides
US7745125B2 (en) 2004-06-28 2010-06-29 Roche Molecular Systems, Inc. 2′-terminator related pyrophosphorolysis activated polymerization

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