DE3730534A1 - Selective composition for the detection of group A streptococci - Google Patents

Selective composition for the detection of group A streptococci

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Abstract

For the selective detection of group A streptococci directly from the primary culture with indisputable identification and detection of the microorganism to be detected with high sensitivity, a selective composition is used which is characterised by a nutrient medium which contains a combination of pyroglutamic acid ss-naphthylamide and Crystal Violet and optionally by a second nutrient medium, present separately from the first nutrient medium, which contains aesculin.

Description

Die Erfindung betrifft ein selektives Mittel zum Nach­ weis von Gruppe A Streptokokken.The invention relates to a selective agent for after from Group A streptococci.

Eine bekannte Methode zur Identifizierung von Gruppe A Streptokokken besteht darin, daß aus Patienten­ material (z.B. Halsabstrich) eine Primärkultur angelegt wird, von der die Streptokokken isoliert werden. Dies geschieht durch Gramfärbung, wodurch Kokken erkannt werden, und durch Katalasereaktion, mit der Staphylo­ kokken (Katalase positiv) und Streptokokken (Katalase negativ) unterschieden werden.A well known method of identifying Group A streptococci consists of that from patients material (e.g. neck smear) created a primary culture from which the streptococci are isolated. This happens through Gram staining, causing cocci to be recognized and by catalase reaction with the Staphylo cocci (catalase positive) and streptococci (catalase negative).

Danach können auf einer Sekundärkultur durch Auflegen von Bacitracinblättchen, wegen ihrer Bacitracinempfind­ lichkeit, Gruppe A Streptokokken erkannt werden.After that, you can hang up on a secondary culture of bacitracin leaves, because of their bacitracin sensitivity group A streptococci can be recognized.

Bei dieser Methode kann der Nachweis nicht direkt aus der Primärkultur erfolgen, sondern es ist das Anlegen einer Sekundärkultur erforderlich, so daß mehrere Tage benötigt werden, bis die Information zur Einleitung einer angemessenen Therapie zur Verfügung steht.With this method, the proof cannot be made directly  the primary culture take place, but it is putting on a secondary culture is required so that several days are needed until the information to initiate adequate therapy is available.

Aus "Manual of Clinical Microbiology 4 thed., S. 167 (1985)" ist eine Methode zum Nachweis von Gruppe A Strepto­ kokken bekannt, bei der man Agar, Brühe oder Blättchen mit Pyroglutaminsäure-β-naphthylamid (PYR) verwendet, das durch Enzyme der Gruppe A Streptokokken zum freien β-Naphthylamin gespalten wird. Dieses wird dann mit Di­ methylaminozimtaldehyd zu einem roten Farbstoff umge­ setzt.From "Manual of Clinical Microbiology 4 thed., P. 167 (1985)" a method for the detection of group A streptococci is known, using agar, broth or leaflets with pyroglutamic acid- β- naphthylamide (PYR), which by Group A streptococcal enzymes are cleaved to free β- naphthylamine. This is then converted to a red dye with dimethylamino cinnamaldehyde.

Da Enterokokken über das gleiche Enzym verfügen und daher die gleiche Farbreaktion wie Gruppe A Strepto­ kokken ergeben, wird zur Erkennung der Enterokokken noch eine Aesculinreaktion durchgeführt. Enterokokken sind Aesculin und PYR positiv, Gruppe A Streptokokken sind Aesculin negativ und PYR positiv.Because enterococci have the same enzyme and hence the same color reaction as Group A Strepto cocci result in the detection of enterococci another Aesculin reaction carried out. Enterococci Aesculin and PYR are positive, group A streptococci Aesculin are negative and PYR are positive.

Man fand jedoch, daß PYR-Agars und PYR-Flüssigkeiten nicht zur direkten Identifizierung bei der Primärkultur (Halsabstrich auf PYR-Agar als Primärkultur abimpfen) zu verwenden sind, da Staphylokokken ebenfalls positive PYR-Reaktionen liefern.However, it was found that PYR agars and PYR liquids not for direct identification in the primary culture (Inoculate neck smear on PYR agar as primary culture) are to be used because staphylococci are also positive Deliver PYR reactions.

Dies wurde beim Seminar "Identification and Anti­ microbial Susceptibility of Streptococci" als Teil des Meeting der "American Microbiological Society, 01.-06.03.1987" in Atlanta (13 272 Teilnehmer) von Facklam vorgetragen. This was presented at the seminar "Identification and Anti microbial Susceptibility of Streptococci" as part of the meeting of the "American Microbiological Society, 01.-06.03.1987" in Atlanta ( 13 272 participants) by Facklam.

Facklam erzielte folgende Ergebnisse:Facklam achieved the following results:

Die Fachwelt folgerte daraus, daß PYR-Tests generell zur Identifizierung aus Primärkultur ungeeignet sind und nur als Bestätigungsreaktion bei isolierten Strepto­ kokken dienen können.The experts concluded that PYR tests in general are unsuitable for identification from primary culture and only as a confirmation reaction with isolated strepto cocci can serve.

Aus der DE-PS 35 05 311 ist ein Selektionsmittel für Gruppe A Streptokokken bekannt, das sich aus einer Mischung aus einem Sulfonamid, Trimethoprim, Polymyxin oder einem Aminoglycosid und Kristallviolett zusammen­ setzt. Dabei erfolgt der eigentliche Nachweis der Gruppe A Streptokokken durch Evaluierung β-hämolytischer bacitricinsensitiver Kolonien auf Blutagar.From DE-PS 35 05 311 a selection agent for group A streptococci is known which is composed of a mixture of a sulfonamide, trimethoprim, polymyxin or an aminoglycoside and crystal violet. Group A streptococci are actually detected by evaluating β- hemolytic bacitricin-sensitive colonies on blood agar.

Bei dieser Methode ist zwar ein Nachweis direkt aus der Primärkultur möglich, jedoch ist die β-Hämolyse nicht immer ein eindeutiger Nachweis, und außerdem ist der dort beschriebene Selektivagar weitgehend hemmend für viele Isolate und erlaubt den Nachweis nur bei hoher Keimdichte.With this method, detection directly from the primary culture is possible, but β- hemolysis is not always unambiguous detection and, moreover, the selective agar described there is largely inhibitory for many isolates and only allows detection with a high bacterial density.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein selektives Mittel zum Nachweis von Gruppe A Streptokokken bereit­ zustellen, mit dessen Hilfe der Nachweis rasch direkt aus der Primärkultur erfolgen kann, mit dem eine einwand­ freie Identifizierung des nachzuweisenden Keimes möglich ist und der nachzuweisende Keim mit hoher Empfindlich­ keit, d.h. bei niedrigen Keimzahlen noch problemlos zu erfassen ist.The invention has for its object a selective Prepared for detection of group A streptococci deliver, with the help of which evidence can be sent quickly can be done from the primary culture with which a perfect  free identification of the germ to be detected possible and the germ to be detected is highly sensitive speed, i.e. with low bacterial counts still without problems is to be recorded.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß mit einem gattungs­ gemäßen Mittel gelöst, das gekennzeichnet ist durch ein Nährmedium, das eine Kombination aus Pyroglutamin­ säure-β-naphthylamid und Kristallviolett enthält, und gegebenenfalls durch ein zweites, vom ersten Nährmedium getrennt vorliegendes Nährmedium, das Aesculin enthält.This object is achieved according to the invention with a generic agent which is characterized by a nutrient medium which contains a combination of pyroglutamine acid- β- naphthylamide and crystal violet, and optionally by a second nutrient medium which is separate from the first nutrient medium and contains aesculin.

Mit dem erfindungsgemäßen Mittel lassen sich Gruppe A Streptokokken auch beim Vorliegen von Staphylokokken und gegebenenfalls Enterokokken einwandfrei und problem­ los nachweisen.Group with the agent according to the invention A Streptococci also in the presence of staphylococci and if necessary enterococci perfect and problem prove it.

Die Wirkung von Kristallviolett als Mittel zur Hemmung von Staphylokokken ist an sich bekannt. Eine Kombination von Kristallviolett und PYR ist jedoch noch nirgends beschrieben. Nachdem die Fachwelt PYR-Tests generell zur Identifizierung von Gruppe A Streptokokken für unge­ eignet hielt und bei neuen Kombinationen immer Wechsel­ wirkungen von Reagentien zu erwarten sind, waren die mit der erfindungsgemäßen Kombination zu erzielenden außergewöhnlich vorteilhaften Ergebnisse überraschend.The effect of crystal violet as an inhibitor of staphylococci is known per se. A combination of crystal violet and PYR is still nowhere described. After the experts generally PYR tests for the identification of group A streptococci for unung suitable and always changing with new combinations effects from reagents were to be expected to be achieved with the combination according to the invention exceptionally beneficial results surprising.

Wie bereits vorstehend ausgeführt, wird PYR durch Enzyme der Gruppe A Streptokokken zum freien β-Naphthylamin gespalten, welches mit Dimethylaminozimtaldehyd zu einem roten Farbstoff umgesetzt wird, wodurch rote, gut sicht­ bare Kolonien festzustellen sind. As already stated above, PYR is cleaved by group A streptococcal enzymes to give free β- naphthylamine, which is reacted with dimethylaminocinnamaldehyde to give a red dye, as a result of which red, clearly visible colonies can be determined.

Das zweite, vom ersten getrennt liegende aesculinhaltige Nährmedium kommt zur Feststellung der Gegenwart von Enterokokken zum Einsatz. Dabei können die beiden Nähr­ medien beispielsweise auf einem zweiseitigen Agarträger aufgebracht sein, welcher auf der ersten Seite die erfin­ dungsgemäße PYR-Agar-Kombination und auf der zweiten Seite einen Aesculinagar mit Antibiotika oder Galle enthält. Auf dem Aesculin/Antibiotika bzw. Aesculin/Galle Agar wachsen ausschließlich Enterokokken mit schwarzem Hof.The second, containing aesculin separated from the first Culture medium comes to determine the presence of Enterococci for use. The two nutrients media, for example on a two-sided agar carrier be applied, which invented on the first page PYR-agar combination according to the invention and on the second Side an aesculin agar with antibiotics or bile contains. On the aesculin / antibiotics or aesculin / bile Only black enterococci grow agar Court.

Wenn auf dem zweiseitigen Träger auf der Aesculinseite Kolonien mit schwarzem Hof und auf der PYR-Seite nach Zugabe von Dimethylaminozimtaldehyd rote Kolonien fest­ zustellen sind, so handelt es sich um Enterokokken.If on the two-sided support on the Aesculin side Colonies with a black yard and on the PYR side Add dimethylamino cinnamaldehyde to red colonies are to be delivered, they are enterococci.

Ist keine Schwärzung auf der Aesculinseite vorhanden aber rote Kolonien nach Zugabe von Dimethylaminozimt­ aldehyd auf der PYR-Seite, so handelt es sich um Gruppe A Streptokokken.If there is no blackening on the Aesculin side but red colonies after adding dimethylamino cinnamon aldehyde on the PYR side, it is about Group A streptococci.

Sind sehr viel mehr rote Kolonien auf der PYR-Seite als Kolonien mit schwarzem Hof auf der Aesculinseite, so handelt es sich um eine Mischkultur von A Strepto­ kokken und Enterokokken.There are a lot more red colonies on the PYR side as colonies with a black court on the Aesculin side, it is a mixed culture from A Strepto cocci and enterococci.

Die gleichzeitige verwendung von PYR-Agar und Aesculin Agar ist außer auf beidseitig beschichteten Trägern z.B. auch möglich auf zweiteiligen Platten, in zwei­ teiligen Röhrchen als Schrägagar, in Multikammersystemen oder ähnlichen Systemen. Ebenfalls kann aus den Formu­ lierungen die Komponente Agar weggelassen werden, und es können die dann flüssigen Mischungen in Doppelröhrchen­ systemen oder Multikammersystemen eingesetzt werden. The simultaneous use of PYR agar and Aesculin Agar is on supports coated on both sides e.g. also possible on two-part plates, in two divided tubes as inclined agar, in multi-chamber systems or similar systems. Also from the Formu agar components are omitted, and the then liquid mixtures can be stored in double tubes systems or multi-chamber systems are used.  

Obgleich gramnegative Bakterien den eigentlichen Nach­ weis nicht unbedingt stören, werden in einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung Substanzen zugesetzt, die die gesamte gramnegative Flora hemmen, jedoch das Wachstum von Streptokokken erlauben, wodurch eine be­ quemere Auswertung erfolgen kann, was besonders für Ärzte, insbesondere Kinderärzte, zur leichteren Identi­ fizierung von Vorteil ist. Zu den geeigneten Substanzen zur Hemmung der gramnegativen Flora, die jedoch das Wachstum von Streptokokken nicht beeinträchtigen, ge­ hören beispielsweise Acide, wie z.B. Natriumazid, ge­ wisse Aminoglycoside, wie z.B. Amicacin und Monobactame, wie z.B. Aztreonam und Carumonam. Diese Substanzen können alleine oder im Gemisch eingesetzt werden. Die Hemmwirkung der vorstehend genannten Stoffe auf gram­ negative Bakterien als solche ist bekannt. Jedoch konnte man auch hier nicht voraussehen, welche Wechselwirkungen mit den übrigen Bestandteilen des erfindungsgemäßen Mittels eintreten würden. Darüberhinaus wurden die Mono­ bactame bisher noch nie in Nährmedien eingesetzt und ihre gute Wirkung und Verträglichkeit überraschte. Insbe­ sondere überraschte, daß sie nicht nur das Wachstum von gramnegativen Bakterien hemmen, sondern das Wachstum von Gruppe A Streptokokken fördern.Although gram-negative bacteria the real after white do not necessarily bother, be in a preferred Embodiment of the invention added substances that inhibit all gram-negative flora, but that Allow growth of streptococci, which causes a be quemere evaluation can be done, which is especially for Doctors, especially pediatricians, for easier identification is an advantage. To the suitable substances to inhibit the gram-negative flora, which, however, the Streptococcal growth does not affect ge hear for example acid, e.g. Sodium azide, ge white aminoglycosides, e.g. Amicacin and monobactams, such as. Aztreonam and Carumonam. These substances can be used alone or in a mixture. The Inhibitory effect of the above substances on gram negative bacteria as such is known. However, could one cannot foresee what interactions here either with the other components of the invention Would enter by means. In addition, the mono bactame has never been used in culture media and their good effects and tolerance were surprising. In particular particular surprise that it was not just growth of gram-negative bacteria but inhibit growth promote group A streptococci.

Obgleich viridans Streptokokken im PYR-Farbtest negativ sind und eigentlich nicht stören, erleichtert eine Unter­ drückung ihres Wachstums die Auswertung des Tests für Nichtfachleute. Aus diesem Grunde kann eine weitere Ausführungsform von Vorteil sein, bei der den Nährmedien ein Hemmstoff für viridans Streptokokken zugesetzt wird. Although viridans streptococci negative in the PYR color test are and do not actually bother, relieves a sub pressing their growth evaluating the test for Non-professionals. For this reason, another Embodiment may be advantageous in the case of the nutrient media an inhibitor for viridans streptococci is added.  

Zu den geeigneten Hemmstoffen gehören beispielsweise Trimethoprim und Sulfamethoxazol. Die Konzentration dieser Hemmstoffe sollte so gering sein, daß keinerlei Beeinträchtigung der Gruppe A Streptokokken erfolgt. Die Menge an Trimethoprim sollte 0,5 mg/l Nährmedium und Sulfamethoxazol 10 mg/l nicht überschreiten.Suitable inhibitors include, for example Trimethoprim and sulfamethoxazole. The concentration these inhibitors should be so low that none Impairment of group A streptococci occurs. The amount of trimethoprim should be 0.5 mg / l nutrient medium and sulfamethoxazole do not exceed 10 mg / l.

Die Mengen an PYR im Nährmedium betragen etwa 0,05-5 g/l, vorzugsweise 0,2-0,5 g/l.The amounts of PYR in the nutrient medium are about 0.05-5 g / l, preferably 0.2-0.5 g / l.

Kristallviolett kann in einer Konzentration von etwa 1-8 mg/l, vorzugsweise 1,8 bis 2,5 mg/l, eingesetzt werden.Crystal violet can be found in a concentration of approximately 1-8 mg / l, preferably 1.8 to 2.5 mg / l, used will.

Die bevorzugten Hemmstoffe für gramnegative Bakterien können in folgenden Konzentrationen eingesetzt werden. Natriumacid etwa 0,01 bis 0,3 g, vorzugsweie 0,03-0,09 g/l; Amicacin etwa 0,25-4 mg/l, vorzugsweie 1-2,5 mg/l und die Monobatame 4-30 mg/l, vorzugsweise zum optimalen Wachstum von Gruppe A Streptokokken 4-6 mg/l.The preferred inhibitors for gram-negative bacteria can be used in the following concentrations. Sodium acid about 0.01 to 0.3 g, preferably 0.03-0.09 g / l; Amicacin about 0.25-4 mg / l, preferably 1-2.5 mg / l and the Monobatame 4-30 mg / l, preferably for optimal Group A streptococcal growth 4-6 mg / l.

Als Basismedium sowohl für das PYR- als auch für das Aesculin-Nährmedium können Tryptose, Tryptic Soy Broth, Tryptone, Tryptose Phosphate, Tryptose media, Tryptose Blood Agar Base, Columbia Agar oder ähnliche Formu­ lierungen dienen, welche das Wachstum anspruchsvoller Keime unterstützen (siehe Difco Manual, Dehydrated Culture Media and Reagents for Microbiology (1984), S.1026-1033 sowie S. 237-239).Tryptose, Tryptic Soy Broth, Tryptone, Tryptose Phosphate, Tryptose media, Tryptose Blood Agar Base, Columbia Agar or similar formulations that support the growth of demanding germs can serve as the base medium for both the PYR and the aesculin nutrient medium (see Difco Manual, Dehydrated Culture Media and Reagents for Microbiology (1984), S .1026-1033 and p 237-239).

Ein bevorzugter Aesculinagar kann folgende Zusammen­ setzung haben: A preferred Aesculin agar can be one of the following have setting:  

Nachstehende Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung.The following examples serve for further explanation the invention.

Beispiel 1example 1 Herstellung eines PYR-AgarsProduction of a PYR agar

39 g Columbia Agar (Oxoid) wurden mit 0,06 g Natriumazid versetzt und mit Aqua dest auf 1000 ml aufgefüllt. Danach wurde das Medium 15 Min. bei 121°C autklaviert. Nach Abkühlung auf ca. 50°C wurden folgende Substanzen zuge­ setzt:39 g of Columbia Agar (Oxoid) was mixed with 0.06 g of sodium azide added and made up to 1000 ml with distilled water. After that the medium was autoclaved at 121 ° C for 15 min. To Cooling to about 50 ° C, the following substances were added puts:

275 mg PYR wurden in 5,5 ml Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst, sterilfiltriert und in einer Menge von 5 ml/l Medium zugesetzt (0,25 g PYR/l).275 mg of PYR were dissolved in 5.5 ml of dimethyl sulfoxide (DMSO) dissolved, sterile filtered and in an amount of 5 ml / l Medium added (0.25 g PYR / l).

18,4 mg Aztreonam wurden in 10 ml Aqua dest. gelöst, sterilfiltriert und in einer Menge von 2,5 ml/l Medium zugesetzt (4,6 mg Aztreonam/l).18.4 mg aztreonam were distilled in 10 ml aqua. solved, sterile filtered and in an amount of 2.5 ml / l medium added (4.6 mg aztreonam / l).

4 mg Kristallviolett (Merck 15 940) wurden in 10 ml Aqua dest. gelöst, sterilfiltriert und in einer Menge von 5 ml /1 Medium zugesetzt (2 mg Kristallviolett/l). 4 mg crystal violet (Merck 15 940) were dissolved in 10 ml Aqua dest. dissolved, sterile filtered and in a lot of 5 ml / 1 medium added (2 mg crystal violet / l).  

Beispiel 2Example 2

Isolate der jeweiligen Stämme wurden auf Blutagar ohne hemmende Zusätze angezüchtet. Die Kulturen wurden dann in 0,9% Kochsalzlösung auf eine Trübung entsprechend dem MacFarland Standard 0,5 (siehe Manual of Chemical Microbilogy 4th Ed. (1985) S.1095) eingestellt.Isolates of the respective strains were grown on blood agar without inhibitory additives. The cultures were then adjusted to a turbidity according to the MacFarland Standard 0.5 (see Manual of Chemical Microbilogy 4 th Ed. (1985) p.1095) in 0.9% saline.

Daraus wurden durch Verdünnen in 0,9% Kochsalzlösung Keimdichten von 107 bis 101 Keime pro ml hergestellt. Die aktuelle Keimdichte dieser Verdünnungen wurde durch Ausimpfen auf Blutagar ohne Hemmstoffe und Auszählen der entstandenen Kolonien bestimmt. Mit diesen Keim­ suspensionen wurden dann Tupfer mit jeweils 50 µl Keim­ suspension versehen. Eine normale Probennahme beim Patienten geschieht ebenfalls mit Tupfer durch Ab­ streichen der linken Mandel über den Rachenbogen zur rechten Mandel. Die Zugabe von 50 µl Keimsuspension bekannter Keimdichte stellt ein Hilfsmittel dar, um Tupfer mit bekannter Keimzahl zu erhalten.Germ densities of 10 7 to 10 1 germs per ml were produced from this by dilution in 0.9% saline solution. The current bacterial density of these dilutions was determined by inoculating on blood agar without inhibitors and counting the colonies formed. With these germ suspensions, swabs were then each provided with 50 μl of germ suspension. A normal patient sampling is also done with a swab by wiping the left tonsil over the pharynx to the right tonsil. The addition of 50 μl of germ suspension of known germ density is an aid in obtaining swabs with a known germ count.

Die so mit Keimsuspension versehenen Tupfer werden dann auf der Oberfläche von PYR-Agar und Aesculinagar bzw. auf den in Vergleichsuntersuchungen verwendeten Agar­ sorten abgestrichen. Diese so beimpften Nährböden werden dann 24 h bei 36°C bebrütet. Auf die Kolonien wird 1 Tropfen einer 0,2%igen Lösung von Dimethylaminozimt­ aldehyd in angesäuertem Methanol gegeben. Anschließend wird die Anzahl der rot gefärbten Kolonien auf dem Nährboden gezählt.The swabs thus provided with germ suspension are then on the surface of PYR agar and Aesculin agar or on the agar used in comparative studies varieties. These are inoculated with nutrient media then incubated at 36 ° C for 24 h. The colonies are 1 Drop of a 0.2% solution of dimethylamino cinnamon aldehyde in acidified methanol. Subsequently is the number of red colored colonies on the culture medium counted.

Die Nachweisgrenze im einzelnen ergibt sich dabei wie folgt:The detection limit in detail results from how follows:

Keimdichte 103/ml; aktuell bestimmt auf Blutagar 650 Keime. 50 µl=130 Keime wurden für den Tupfer verwendet. Gefunden werden auf dem PYR-Agar nach Beimpfen und Be­ brüten 42 Kolonien. Germ density 10 3 / ml; 650 germs currently determined on blood agar. 50 µl = 130 germs were used for the swab. After inoculation and incubation, 42 colonies are found on the PYR agar.

Keimdichte 5 × 102/ml; aktuell bestimmt auf Blutagar 289 Keime 50 µl=14,45 Keime wurden für den Tupfer verwendet. Gefunden werden auf dem PYR-Agar nach Be­ impfen und Bebrüten 3 Kolonien.Germ density 5 × 10 2 / ml; 289 germs currently determined on blood agar 50 µl = 14.45 germs were used for the swab. Three colonies are found on the PYR agar after inoculation and incubation.

Bei Keimdichte 1 × 102/ml werden keine Keime mehr auf PYR-Agar festgestellt.At a germ density of 1 × 10 2 / ml, no more germs are found on PYR agar.

Bei dieser Verdünnungsreihe wird als Nachweisgrenze 14,5 Keime pro Tupfer angenommen, da die nachfolgende getestete Verdünnungsstufe negativ war.This dilution series is used as the detection limit 14.5 germs per swab accepted as the following dilution level tested was negative.

Bei der Austestung von möglichen Kontaminanten wird aus der Verdünnung entsprechend McFarland 0,5 direkt aufgeimpft, um möglichst massives Wachstum dieser möglicherweise störenden Keime zu erzielen.When testing possible contaminants from the McFarland 0.5 dilution directly vaccinated to grow this as massive as possible to achieve potentially disruptive germs.

In Tab. 1 ist gezeigt, daß gramnegative Keime entweder nicht wachsen oder gehemmt (Pseud.aeruginosa), aber keine Farbreaktionen zeigen.Tab. 1 shows that gram-negative germs either not growing or inhibited (Pseud.aeruginosa), however show no color reactions.

Weiter wird gezeigt, daß bei dem erfindungsgemäßen PYR- Agar Staphylokokken nicht wachsen und damit auch keine Farbreaktion zeigen. Bei Weglassen des Kristallvioletts wachsen alle Staphylokokken stark und 4 von 5 zeigen eine positive Farbreaktion, sie wären also ohne weitere Zusatztests mit A Staphylokokken zu verwechseln. It is further shown that in the PYR- according to the invention Agar staphylococci do not grow and therefore none Show color reaction. If the crystal violet is omitted all staphylococci grow strongly and 4 out of 5 show a positive color reaction, so they would be without more Additional tests to be confused with A staphylococci.  

Tabelle I Table I

Reaktion mit PYR/Dimethylaminozimtaldehyd Reaction with PYR / dimethylamino cinnamaldehyde

Tab. 2 zeigt die Überlegenheit des erfindungsgemäßen PYR-Agars gegenüber einem bekannten Streptokokken Selektivagar (DE-PS 35 05 311). Bei dem bekannten Strepto­ kokken Selektivagar soll die Mundflora repräsentiert durch 2 sanguis und 1 mitis Streptokokkenstämme gehemmt werden, während A Streptokokken gutes Wachstum zeigen.Tab. 2 shows the superiority of the invention PYR agars against a known streptococcus Selective agar (DE-PS 35 05 311). With the well-known Strepto Kokken selective agar is said to represent the oral flora inhibited by 2 sanguis and 1 mitis streptococcal strains while A streptococci show good growth.

Wie man sieht, zeigen nur auf dem PYR-Agar A Streptokokken allgemein gutes Wachstum, gezeigt durch die Nachweisgrenze. 1,3 bis 15 A Streptokokken pro Tupfer reichen bereits für den Nachweis aus. Bei dem Streptokokken A Selektiv­ agarwaren nur bei einem Stamm 5 Keime pro Tupfer aus­ reichend, während sonst 2,5 × 104 bis 2,5 × 105 erfor­ derlich waren, d.h. der Agar ist bereits weitgehend hemmend für viele Isolate und erlaubt den Nachweis nur bei hoher Keimdichte. Weiter wird die Mundflora nur teilweise gehemmt, nur 1 Streptokokkus sanguis wurde gehemmt, der zweite und der Streptokokkus mitis zeigten starkes Wachstum. Diese Stämme zeigen zwar auch auf dem erfindungsgemäßen PYR-Agar starkes Wachstum, jedoch keine Farbreaktion. Das Ziel eines Selektivnährbodens ist einerseits eine einwandfreie Identifizierung des nachzuweisenden Keimes und andererseits den nachzuweisen­ den Keim mit hoher Empfindlichkeit, d.h. bei niedrigen Keimzahlen noch problemlos zu erfassen. Dies wird nur mit dem erfindungsgemäßen PYR-Agar erreicht. As can be seen, only PYR-Agar A streptococci generally show good growth, as shown by the detection limit. 1.3 to 15 A streptococci per swab are sufficient for the detection. With streptococcal A selective agar, 5 germs per swab were sufficient for only one strain, while 2.5 × 10 4 to 2.5 × 10 5 were otherwise required, ie the agar is already largely inhibitory to many isolates and allows detection only with high germ density. Furthermore, the oral flora is only partially inhibited, only 1 streptococcus sanguis was inhibited, the second and the streptococcus mitis showed strong growth. Although these strains also show strong growth on the PYR agar according to the invention, there is no color reaction. The aim of a selective nutrient medium is on the one hand a perfect identification of the germ to be detected and on the other hand the detection of the germ with high sensitivity, ie still easy to detect at low bacterial counts. This is only achieved with the PYR agar according to the invention.

Tabelle 2 Table 2

Claims (8)

1. Selektives Mittel zum Nachweis von Gruppe A Strepto­ kokken, gekennzeichnet durch ein Nährmedium, das eine Kombination aus Pyroglutaminsäure-β-naphthylamid und Kristallviolett enthält.1. Selective agent for the detection of group A streptococci, characterized by a nutrient medium which contains a combination of pyroglutamic acid- β- naphthylamide and crystal violet. 2. Mittel nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch ein zweites, vom ersten Nährmedium getrennt vorliegendes Nährmedium, das Aesculin enthält.2. Composition according to claim 1, characterized by a the second, separate from the first nutrient medium Culture medium containing aesculin. 3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß eines der beiden oder beide Nährmedien zusätzlich einen oder mehrere Hemmstoffe für gramnegative Bak­ terien enthalten.3. Composition according to claim 1 or 2, characterized in that one of the two or both culture media additionally one or more inhibitors for gram-negative Bak included. 4. Mittel nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Hemmstoff für gramnegative Bakterien ein Azid, Monobactam oder Aminoglycosid oder Gemische davon ist.4. Means according to claim 3, characterized in that the inhibitor for gram-negative bacteria an azide, Monobactam or aminoglycoside or mixtures thereof is. 5. Mittel nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß eines der beiden oder beide Nährmedien zusätzlich einen oder mehrere Hemm­ stoffe für viridans Streptokokken enthalten.5. Agent according to one of the preceding claims, characterized in that one of the two or both culture media additionally one or more inhibitors contains substances for viridans streptococci. 6. Mittel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Hemmstoff für viridans Streptokokken Trimethoprim oder Sulfamethoxazol oder Gemische davon ist. 6. Composition according to claim 5, characterized in that the inhibitor of viridans streptococcal trimethoprim or sulfamethoxazole or mixtures thereof.   7. Mittel nach einem der Ansprüche 2 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die beiden getrennten Nährmedien in Form von Agar auf einem zweiseitigen Agarträger aufgebracht sind.7. Composition according to one of claims 2 to 6, characterized characterized in that the two separate nutrient media in the form of agar on a two-sided agar carrier are upset. 8. Methode zum Nachweis von Gruppe A Streptokokken, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Abstrich des zu prüfenden Materials auf ein Nährmedium gemäß einem der Ansprüche 1 bis 7 aufbringt, das so beimpfte Nährmedium bebrütet, mit Dimethylaminozimtaldehyd versetzt und die, eine Rotfärbung aufweisenden Gruppe A Streptokokken-Kolonien zählt.8. Method for the detection of group A streptococci, characterized in that a smear of the material to be tested on a nutrient medium according to a of claims 1 to 7, which thus inoculated Culture medium incubated with dimethylamino cinnamaldehyde offset and those that have a red color Group A streptococcal colonies counts.
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WO2002101082A2 (en) * 2001-06-13 2002-12-19 Alain Rambach Culture medium for detecting and/or discriminating enterococcus and method therefor

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