DE3708490C1 - Use of a test kit for control measurement of instruments for determining the blood coagulation time - Google Patents

Use of a test kit for control measurement of instruments for determining the blood coagulation time

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DE3708490C1 DE19873708490 DE3708490A DE3708490C1 DE 3708490 C1 DE3708490 C1 DE 3708490C1 DE 19873708490 DE19873708490 DE 19873708490 DE 3708490 A DE3708490 A DE 3708490A DE 3708490 C1 DE3708490 C1 DE 3708490C1
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Abstract

Instruments for determining the blood coagulation time have to date been standardised using reference plasmas in order to set a plurality of instruments to an identical baseline value. Available to date for carrying out this standardisation are reference plasmas obtained from human blood, and reagents. Besides the high costs resulting from this, the use of reference plasmas is also associated with risks because of the possible infections of the human plasma. Used according to the invention is a test kit composed of an aqueous solution based on acrylamide enriched with bisacrylamide, of an aqueous solution based on tetramethylethylenediamine and of an aqueous solution based on ammonium persulphate in order to be able to carry out a control measurement on instruments for determining the blood coagulation time. The solution components according to the invention bring about, when they are mixed together, based on the synthetic polymerisation, a correlation with one another, which passes from the original liquid state into a gelling, and subsequently into a solid, substance so that in practice simulation of human plasma is achieved, with which comparable values are obtained with identical test conditions. Besides the process technology advantages, a particularly low-cost measurement is possible due to the invention.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Test­ satzes zur Kontrollmessung von Geräten zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit.The present invention relates to the use of a test set for the control measurement of devices for determining the Blood clotting time.

Zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit finden Geräte Ver­ wendung, die durch Aktivierung der Gerinnungsfaktoren das sich bildende Fibrinfasergerüst mechanisch erfassen.To determine the blood clotting time, devices Ver by activating the coagulation factors Mechanically capture the fibrin fiber structure that forms.

Bekannt sind beispielsweise solche Geräte, die nach dem Prinzip der Häkchen- und Kugelmethode manuell oder auto­ matisch arbeiten. Dabei können sie mit einer oder mehreren Meßstellen aufgebaut sein, so daß gleichzeitig entsprechend viele Blutgerinnungszeiten gemessen werden können.Such devices are known, for example, according to the Principle of the tick and ball method manually or auto work matically. You can use one or more Measuring points must be set up so that at the same time accordingly many blood clotting times can be measured.

Damit eine einwandfreie Funktion der Geräte gewährleistet ist, ist eine Justierung erforderlich, mittels derer alle Geräte auf den gleichen Basiswert eingestellt werden. Zur Durchführung der Justierung stehen bislang Eichplasmen, die aus menschlichem Blut gewonnen werden, und Reagenzien zur Verfügung.This ensures that the devices function properly an adjustment is required by means of which all Devices can be set to the same base value. So far, calibration plasmas have been used to carry out the adjustment, derived from human blood and reagents to disposal.

Insbesondere hinsichtlich einer wünschenswerten und er­ forderlichen häufigen Justierung der Geräte, die teilweise sogar täglich erfolgen muß, sind die hohen Kosten der Eichplasmen und Reagenzien als sehr nachteilig anzusehen. Dies gilt auch bei einer Endkontrolle von Geräteserien, bei der jedes Gerät auf den gleichen Basiswert eingestellt werden muß.Especially regarding a desirable and he  required frequent adjustment of the devices, some of them even must be done daily are the high cost of Calibration plasmas and reagents to be regarded as very disadvantageous. This also applies to a final inspection of device series, where each device is set to the same base value must become.

Darüber hinaus birgt die Arbeit mit Eichplasmen aufgrund möglicher Infektionen des menschlichen Plasmas Gefahren in sich.In addition, working with calibration plasmas harbors possible infections of human plasma hazards in itself.

Der vorliegenden Erfindung liegt demgegenüber die Aufgabe zugrunde, einen Testsatz zur Kontrollmessung von Geräten zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit zu entwickeln, der kostengünstig herstellbar ist, bei seiner Verwendung eine Infektionsgefahr ausschließt und gleichbleibende Basiswerte bei der Justie­ rung der Geräte garantiert.In contrast, the present invention has the object to develop a test set for the control measurement of devices for determining the blood clotting time, which is inexpensive is producible, a risk of infection when used excludes and constant basic values in the Justie guaranteed equipment.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch die Verwendung eines Testsatzes aus einer wäßrigen Lösung auf Basis Acrylamid, angereichert mit Bis­ acrylamid, einer wäßrigen Lösung auf Basis Tetramethylethylendiamin und einer wäßrigen Lösung auf Basis Ammoniumpersulfat gelöst.This object is achieved according to the invention by using a test set from an aqueous solution based on acrylamide, enriched with bis acrylamide, an aqueous solution based on tetramethylethylenediamine and an aqueous solution based on ammonium persulfate.

Nunmehr besteht eine äußerst preiswerte Möglichkeit, die Justierung von Geräten zur Bestimmung der Blutgerinnungs­ zeit mit gleichbleibendem Basiswert vorzunehmen.Now there is an extremely inexpensive way that Adjustment of devices for determining blood coagulation time with a constant base value.

Erhebliche Vorteile gegenüber den bekannten Möglichkeiten ergeben sich auch im Ausbildungsbereich, wo die Erfindung in ausgezeichneter Weise eingesetzt werden kann, um die Ge­ rinnung, deren Umfeld und die Gerätehandhabung zu ver­ mitteln. Da insbesondere im Ausbildungsbereich aufgrund mangelnder Erfahrung im Umgang mit Plasmen bisher auch ein hohes Risiko bezüglich einer Infektionsgefahr bestand, bietet sich die Erfindung zu Lernzwecken in idealer Weise an. Dabei kann der Auszubildende sich infolge der Tests in geräte- und pipettiertechnische Vorgänge einarbeiten. Da beim Pipettieren durchaus Volumenfehler vorkommen, die das Resultat beeinflussen, kann eine Aussage über die Qualität der Pipettierung selbst vorgenommen werden, ohne daß außer­ gewöhnlich hohe Kosten entstehen.Significant advantages over the known possibilities arise also in the training area where the invention can be used in an excellent way to the Ge coagulation, their environment and device handling average. Because especially in the field of training lack of experience in dealing with plasmas there was a high risk of an infection, the invention is ideal for learning purposes at. As a result of the tests, the trainee can Incorporate device and pipetting processes. There Volume errors that occur during pipetting can occur  The result can make a statement about the quality of the Pipetting can be carried out without the exception usually high costs arise.

Ein weiterer Vorteil der Erfindung ist darin zu sehen, daß die einzelnen Komponenten sehr lagerstabil sind, so daß in sinnvoller Weise eine optimale Bevorratung erfolgen kann.Another advantage of the invention is that the individual components are very stable in storage, so that in an optimal stocking can be sensible.

Die erfindungsgemäßen Lösungsteile bewirken, wenn sie zu­ sammengemischt werden, auf der Basis der Kunststoffpolymeri­ sation eine Wechselbeziehung zueinander, die aus dem ur­ sprünglich flüssigen Zustand in eine gelierende und an­ schließend in eine feste Substanz übergeht. Dadurch wird praktisch die Simulation des Humanplasmas erreicht, mit der vergleichbare Werte bei gleichen Versuchsbedingungen erzielt werden.The solution parts according to the invention bring about when they are too are mixed together on the basis of plastic polymers sation an interrelation to each other, which originates from the original originally liquid state in a gelling and on finally turns into a solid substance. This will practically achieved the simulation of human plasma with the comparable values under the same test conditions be achieved.

Das Eichverfahren basiert auf der Eigenschaft der Modell­ ösungen von Monomeren, stabile Elastizitätswerte der bei der Polymerisation der Monomere in der Küvette des Gerätes zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit gebildeten Gele zu geben, wobei diese Elastizitätswerte der Elastizität des Blutkoagulats entsprechen. Die Polymerisationsdynamik der Monomere simuliert hierbei völlig den Blutgerinnungspro­ zeß.The calibration method is based on the property of the model solutions of monomers, stable elasticity values of the the polymerization of the monomers in the cuvette of the device gels formed to determine the blood clotting time give, these elasticity values of the elasticity of the Correspond to blood coagulum. The polymerization dynamics of the Monomers completely simulates the blood coagulation process zeze.

Durch Änderung der Zusammensetzung von Modellösungen können Gerinnungszeiten gewonnen werden, die den beliebigen Zu­ ständen des Blutkoagulationssystems einschließlich der Grenz­ werte der Hypo- und Hyperkoagulation entsprechen.By changing the composition of model solutions Coagulation times are obtained, which the arbitrary Zu levels of the blood coagulation system including the limits values correspond to hypo- and hypercoagulation.

Den Grundstein der Umwandlung der Lösung in einen Feststoff bildet das mit Bisacrylamid angereicherte Acrylamid, das nach einer vorteilhaften Ausge­ staltung der Erfindung 30%ig mit 0,5%-2% Bisacrylamid in Lösung geht, während dann die zweite Lösung, das Tetra­ methylethylendiamin in 5%iger Lösung vorliegt und prak­ tisch die Bereitschaft des Acrylamids zur Umwandlung in festen Kunststoff einleitet. Das Ammoniumpersulfat liegt bei dieser Modellösung in einer Lösung, die kleiner als 1% ist vor und bildet den Aktivator für die Umwandlung der Modell­ ösung. Mit der Konzentration des Ammoniumpersulfats lassen sich die Zeilen des Momentes der Verfestigung variieren. Tetramethylethylendiamin und Acrylamid allein zeigen diese Verfestigungswirkung nur in geringem Maße.The cornerstone of converting the solution into a solid forms the acrylamide enriched with bisacrylamide, the after an advantageous Ausge  staltung of the invention 30% with 0.5% -2% bisacrylamide goes into solution, then the second solution, the tetra methyl ethylenediamine is in a 5% solution and is practical the willingness of the acrylamide to convert to introduces solid plastic. The ammonium persulfate is included this model solution in a solution that is less than 1% before and forms the activator for the conversion of the model solution. Leave with the concentration of ammonium persulfate the lines of the moment of consolidation vary. Tetramethylethylenediamine and acrylamide alone show this Strengthening effect only to a small extent.

Eine Simulation der partiellen Thromboplastinzeit läßt sich erreichen, indem 0,1 ml wäßrige Lösung auf Basis Acrylamid angereichert mit Bisacrylamid und 0,1 ml wäßrige Lösung auf Basis Tetramethylethylendiamin in eine auf 37°C vorgewärmte Küvette pipettiert und anschließend zwei Minuten bei 37°C inkubiert werden. Sodann werden 0,1 ml einer auf 37°C tempe­ rierten wäßrigen Lösung auf Basis Ammoniumpersulfat zuge­ geben und gleichzeitig die Meßstelle am Gerät zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit gestartet, so daß die Gerinnungszeit gemessen werden kann.A simulation of the partial thromboplastin time can be done achieve by 0.1 ml aqueous solution based on acrylamide enriched with bisacrylamide and 0.1 ml aqueous solution Base tetramethylethylenediamine in a preheated to 37 ° C Pipette the cuvette and then two minutes at 37 ° C be incubated. Then 0.1 ml one at 37 ° C tempe Rated aqueous solution based on ammonium persulfate added give and at the same time the measuring point on the device for determination the blood clotting time started, so the clotting time can be measured.

Zur Simulation der Prothrombinzeit werden zunächst zu gleichen Teilen die wäßrige Lösung auf Basis Acrylamid ange­ reichert mit Bisacrylamid und die wäßrige Lösung auf Basis Ammoniumpersulfat gemischt und auf 37°C temperiert. An­ schließend werden 0,1 ml der wäßrigen Lösung auf Basis Tetra­ methylethylendiamins in eine auf 37°C vorgewärmte Küvette pipettiert und zwei Minuten bei 37°C inkubiert. Danach werden 0,2 ml der angesetzten Mischung aus Acrylamid und Ammoniumper­ sulfat der wäßrigen Lösung auf Basis Tetramethylethylen­ diamin zugegeben und gleichzeitig die Meßstelle am Gerät zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit gestartet und die Gerinnungszeit gemessen.To simulate the prothrombin time, first go to equal parts of the aqueous solution based on acrylamide enriched with bisacrylamide and the aqueous solution based Ammonium persulfate mixed and heated to 37 ° C. On finally 0.1 ml of the aqueous solution based on tetra methyl ethylenediamines in a cell preheated to 37 ° C pipetted and incubated at 37 ° C for two minutes. After that 0.2 ml of the mixture of acrylamide and ammonium per sulfate of the aqueous solution based on tetramethylethylene added diamine and at the same time the measuring point on the device  started to determine the blood clotting time and the Coagulation time measured.

Beide Simulationen unterscheiden sich in ihren optisch wahrnehmbaren Eigenschaften innerhalb der Geräte zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit nicht von den Eigen­ schaften der Humangerinnung. Da auch die mengenmäßige Zusammenstellung der Lösungen den Mengenverhältnissen dem bekannten Humanplasma entspricht, ergibt sich für das die Kontrollmessung durchführende Personal, daß eine Umstellung der bisherigen Arbeitsweise im wesentlichen nicht erforder­ lich ist.Both simulations differ optically perceptible properties within the devices Determination of the blood clotting time not by the Eigen of human coagulation. Since also the quantitative Compilation of the solutions to the proportions known human plasma corresponds to that for Control measurement personnel performing a switch the previous way of working is essentially not required is.

Der grundsätzliche Reaktionsbereich des erfindungsgemäßen Testsatzes ist jedoch nicht auf das zuvor beschriebene Mischungsverhältnis der Lösungsanteile festgeschrieben, sondern ergibt sich auch, wenn das Acrylamid in einem Be­ reich von 20%-60%, angereichert mit 0,5% bis 2% Bisacrylamid, das Tetramethylethylendiamin zu 1%-5% und das Ammoniumpersulfat zu 0,15%- 2% in destilliertem Wasser gelöst sind und in den beschriebenen Mengenver­ hältnissen untereinander gemischt werden, wobei die vor­ genannten absoluten Mengen nicht bindend sind, sondern frei gewählt werden können. Einzig die Mengenverhältnisse in den beschriebenen Größen sind wesentlich.The basic reaction area of the invention However, the test set is not based on the one previously described The mixing ratio of the proportions of the solution is fixed, but also arises when the acrylamide in a Be rich from 20% -60%, enriched with 0.5% to 2% Bisacrylamide, the tetramethylethylenediamine at 1% -5% and the ammonium persulfate at 0.15% - 2% in distilled Water are dissolved and in the quantitative ver ratios are mixed with each other, the above absolute amounts mentioned are not binding, but free can be chosen. Only the proportions in the sizes described are essential.

Claims (5)

1. Verwendung eines Testsatzes aus einer wäßrigen Lösung auf Basis Acrylamid, angereichert mit Bisacrylamid, einer wäßrigen Lösung auf Basis Tetramethylethylendiamin und einer wäßrigen Lösung auf Basis Ammoniumpersulfat zur Kontrollmessung von Geräten zur Bestimmung der Blut­ gerinnungszeit.1. Use a test kit from an aqueous solution based on acrylamide, enriched with bisacrylamide, an aqueous solution based on tetramethylethylenediamine and an aqueous solution based on ammonium persulfate for the control measurement of devices for determining blood clotting time. 2. Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Acrylamid zu 20%-60%, angereichert mit 0,5%-2% Bisacrylamid, das Tetramethylethylendiamin zu 1%-5% und das Ammoniumpersulfat zu 0,15%- 2% in destil­ liertem Wasser gelöst sind.2. Use according to claim 1, characterized in that the Acrylamide 20% -60%, enriched with 0.5% -2% Bisacrylamide, the tetramethylethylenediamine at 1% -5% and the ammonium persulfate at 0.15% - 2% in distile water are dissolved. 3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Acrylamid zu 30%, angereichert mit Bisacrylamid zu 0,1%- 2%, das Tetramethylethylendiamin zu 5% und das Ammoniumpersulfat zu kleiner als 1% in destilliertem Wasser gelöst sind.3. Use according to claim 1 or 2, characterized in that that the acrylamide to 30%, enriched with bisacrylamide to 0.1% - 2%, the tetramethylethylenediamine to 5% and the ammonium persulfate to less than 1% in distilled Water are dissolved. 4. Verfahren zur Simulation einer partiellen Thromboplastin­ zeit für eine Kontrollmessung von Geräten zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit, dadurch gekennzeichnet, daß zunächst 0,1 ml wäßrige Lösung auf Basis Acrylamid, angereichert mit Bisacrylamid, und 0,1 ml wäßrige Lösung auf Basis Tetramethylethylendiamin in eine auf 37°C vorgewärmte Küvette pipettiert und zwei Minuten bei 37°C inkubiert werden und danach 0,1 ml auf 37°C inku­ bierte wäßrige Lösung auf Basis Ammoniumpersulfat zugegeben wird.4. Procedure for simulating a partial thromboplastin time for a control measurement of devices for determination the blood clotting time, characterized in that initially 0.1 ml aqueous solution based on acrylamide, enriched with bisacrylamide, and 0.1 ml aqueous solution based on tetramethylethylenediamine at 37 ° C pipetted preheated cuvette and add two minutes Incubate 37 ° C and then 0.1 ml to 37 ° C Beer-based aqueous solution based on ammonium persulfate is added. 5. Vefahren zur Simulation einer Prothrombinzeit für eine Kontrollmessung von Geräten zur Bestimmung der Blutgerinnungszeit, dadurch gekennzeichnet, daß 0,1 ml wäßrige Lösung Tetramethylethylendiamin in eine auf 37°C vorgewärmte Küvette pipettiert und zwei Minuten bei 37°C inkubiert und anschließend mit 0,2 ml einer auf 37°C temperierten Mischung aus gleichen Teilen wäßriger Lösung auf Basis Acrylamid, angereichert mit Bisacrylamid, und wäßriger Lösung auf Basis Ammonium­ persulfat gemischt wird.5. Procedure for simulating a prothrombin time for a control measurement of devices to determine the Blood clotting time, characterized in that 0.1 ml aqueous solution of tetramethylethylenediamine in a Pipette preheated to 37 ° C and pipette for two minutes incubated at 37 ° C and then with 0.2 ml of one mixture of equal parts tempered to 37 ° C aqueous solution based on acrylamide, enriched with Bisacrylamide, and aqueous solution based on ammonium persulfate is mixed.
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