DE3546701C2 - New peptido:glycan jomol - Google Patents
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft ein diagnostisches Mittel für Tumoren, das Jomol bzw. Jomolderivate enthält.The invention relates to a diagnostic agent for Tumors containing Jomol or Jomolderivate.
Jomol® und seine Derivate können als Arzneimittel und als diagnostische Mittel verwendet werden. Sie sind insbeson dere als Mittel zur Steigerung der zelligen Abwehr und für die Diagnose und Therapie von malignen Tumoren sowie zur Behandlung von Schwächen der zelligen und humoralen Immunabwehr geeignet. Jomol® kann als Träger für diagno stische und therapeutische Stoffe verwendet werden.Jomol® and its derivatives can be used as medicines and as diagnostic agents are used. They are in particular dere as a means of increasing cellular defense and for the diagnosis and therapy of malignant tumors as well to treat weaknesses of cellular and humoral Immune defense suitable. Jomol® can be used as a carrier for diagno Static and therapeutic substances are used.
Die Diagnose maligner Tumoren ist trotz intensiver Forschung heute noch schwierig. Es ist fast unmöglich, maligne Tumoren im Frühzustand zu erkennen, und bis heute steht kein Verfahren zur Verfügung, mit dem eine Frühdiagnose durchgeführt werden kann.The diagnosis of malignant tumors is despite intensive research still difficult today. It is almost impossible to detect malignant tumors at an early stage, and to date no method is available with An early diagnosis can be carried out.
U. Ehrenfeld (Krebsgeschehen 5, 132 ff. (1979)) berich tet über die cancertoxische Wirkung eines Gemisches aus Acetaldehyd und Ethanol. Das Gemisch enthält 3 bis 10 g Acetaldehyd pro 1000 g Ethanol. Es zeigte sich jedoch, daß die Wirkung dieses Gemisches bei der Behandlung von soliden malignen Tumoren wie auch von Metastasen nicht ausreichend ist.U. Ehrenfeld (Krebsgeschehen 5, 132 ff. (1979)) discuss the cancertoxic effect of a mixture Acetaldehyde and ethanol. The mixture contains 3 to 10 g Acetaldehyde per 1000 g of ethanol. It turned out, however, that the effect of this mixture in the treatment of solid malignant tumors as well as metastases is sufficient.
In den deutschen Patentanmeldungen P 33 34 751.4, P 33 36 583.0 und P 34 02 312.7 (entsprechend der euro päischen Patentanmeldung 84 110 118.1 und folgender wei terer Patentanmeldungen in ausländischen Staaten: Kanada (463 991), Südafrika (84/7296), Australien (33327/84) Japan (202 859/84), UdSSR (3 798 784.13), Polen (P. 249 725) Rumänien (115 800), Jugoslawien (P-1639/84), Spanien (536 085), Argentinien (297 977), Südkorea (84-5894) DDR (267 559), Dänemark (4553/84), USA (689 728)) wird ein Mittel zur Diagnose und Therapie von bösartigen Tumo ren sowie zur Therapie von Schwächen der zelligen und homoralen Immunabwehr beschrieben, das einen Immunmodu lator in und/oder auf Liposomen oder lipidiert oder einen mit einem radioaktiven Strahler, einem Farbstoff oder einem Cytostatikum markierten Immunmodulator ent hält.In the German patent applications P 33 34 751.4, P 33 36 583.0 and P 34 02 312.7 (corresponding to the euro European Patent Application 84 110 118.1 and following white patent applications in foreign countries: Canada (463 991), South Africa (84/7296), Australia (33327/84) Japan (202 859/84), USSR (3 798 784.13), Poland (P. 249 725) Romania (115 800), Yugoslavia (P-1639/84), Spain (536 085), Argentina (297 977), South Korea (84-5894) GDR (267 559), Denmark (4553/84), USA (689 728)) a means of diagnosis and therapy of malignant tumors ren and for the treatment of weaknesses of the cellular and Homoral immune defense described using an immune module in and / or on liposomes or lipidated or one with a radioactive emitter, a dye or a cytostatic labeled immunomodulator ent holds.
Es besteht jedoch weiterhin Bedarf nach derartigen Mit teln, die möglichst keinerlei Nebenwirkungen zeigen und insbesondere sehr einfach herzustellen sind. Die bekann ten Mittel besitzen weiterhin den Nachteil, daß ihre intravenöse Verabreichung mit gewissen Schwierigkeiten verbunden ist.However, there is still a need for such mit which show as few side effects as possible and in particular, are very easy to manufacture. The well-known th means have the further disadvantage that their intravenous administration with some difficulty connected is.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein Mittel und ein Erzeugnis für die Diagnose von Tumoren zur Verfügung zu stel len. Das Mittel soll hochwirksam sein und daher in gerin gerer Konzentration als die bekannten Mittel verabreicht werden können. Das erfindungsgemäße Mittel soll bewir ken, daß der Organismus des Patienten weniger stark be lastet wird, und weiterhin soll seine Verabreichung auf einfache Weise möglich sein.The present invention is based on the object a means and a product for the diagnosis of tumors available len. The agent should be highly effective and therefore in clotting gerer concentration than the known means administered can be. The agent of the invention should bewir that the organism of the patient is less severe is loaded, and should continue its administration easy way to be possible.
Das Mittel soll weiterhin intravenös verabreichbar sein und als Träger für radioaktive Strahler, Arzneimittel und Farbstoffe dienen.The agent should continue to be administered intravenously and as a carrier for radioactive sources, drugs and dyes are used.
Überraschenderweise wurde gefunden, daß eine Verbindung, die man aus dem Mikroorganismus Rhodococcus rhodochrous gewinnt, die erfindungsgemäße Aufgabe löst, wenn sie zusammen mit einem Gemisch aus einem Alkohol und Aldehyd verwen det wird.Surprisingly, it has been found that a compound which one gains from the microorganism Rhodococcus rhodochrous, solves the object of the invention, when combined with a Use a mixture of an alcohol and aldehyde it becomes.
Gegenstand der Erfindung ist ein diagnostisches Mittel, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es einen mikrobiellen Ex trakt, erhalten durchThe invention relates to a diagnostic agent which characterized in that it contains a microbial Ex tract, received by
- a) Züchtung von Nocardia opaca = Rhodococcus rhodo chrous (DSM 43 202 bzw. ATCC 21 953) auf einem Nährmedium,a) Breeding of Nocardia opaca = Rhodococcus rhodo chrous (DSM 43 202 or ATCC 21 953) on one broth
- b) Gewinnung der Zellen,b) obtaining the cells,
- c) Suspendierung der Zellen in einem Puffer und 15 Minuten bis einige Stunden Stehenlassen der Sus pension,c) suspension of the cells in a buffer and 15 Minutes to a few hours leaving the Sus pension,
- d) Behandlung der Suspension mit einem murolytischen Enzym,d) Treatment of the suspension with a murolytic Enzyme,
- e) Zerstörung der Zellen,e) destruction of cells,
- f) Trennung des erhaltenen Materials in Bodensatz und Überstand,f) Separation of the material obtained in sediment and supernatant,
- g) Trennung des Überstands an Sephadex-Säulen unter Verwendung von Puffer als Eluierungsmittel, g) Separation of the supernatant on Sephadex columns under Use of buffer as eluent,
- h) Gewinnung der aktiven Fraktionen, die im UV-Spektrum eine Absorption bei 214 nm zeigen,h) Obtaining the active fractions in the UV spectrum show an absorption at 214 nm,
- i) Umsetzung der aktiven Fraktionen mit Acetaldehyd in einem Molverhältnis von 1 mol aktiver Fraktion (angenommenes mittleres Molekulargewicht 4000) mit 1,8 bis 2,2 mol Acetaldehyd, gegebenenfalls gekoppelt mit einem Molekül, das einen radioaktiven Strahler und/oder einen Farbstoff binden kann,i) Reaction of the active fractions with acetaldehyde in a molar ratio of 1 mol of active fraction (assumed average molecular weight 4000) with 1.8 to 2.2 moles of acetaldehyde, optionally coupled with a molecule that is a radioactive Spotlight and / or can bind a dye,
enthält und es zusammen mit einem Aldehyd der allgemeinen Formel Icontains and it together with an aldehyde of general formula I.
RCHO (I)RCHO (I)
worin R ein Wasserstoffatom und eine geradkettige oder verzweigte Kohlenwasserstoffgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoff atomen bedeutet, wobei der freie Aldehyd auch direkt oder indirekt von Stoffen metabolisch freigesetzt werden kann, und gegebenenfalls einem Alkohol der allgemeinen Formel IIwherein R is a hydrogen atom and a straight or branched hydrocarbon group of 1 to 4 carbon atoms, wherein the free aldehyde also directly or indirectly metabolically released from substances, and optionally an alcohol of the general formula II
R¹CH₂OH (II)R¹CH₂OH (II)
worin R¹ die oben für R angegebene Bedeutung besitzt, sowie gegebenenfalls üblichen pharmazeutisch annehmbaren Träger stoffen und/oder Verdünnungsmitteln verwendet wird, enthält.wherein R¹ has the meaning given above for R, as well as optionally conventional pharmaceutically acceptable carrier substances and / or diluents.
Der mikrobielle Extrakt (Jomol®) ist durch folgende Eigen schaften charakterisiert:The microbial extract (Jomol®) is by the following own characterized by:
- (1) Absorptionsmaximum im UV-Spektrum bei 286,0 nm;(1) absorption maximum in the UV spectrum at 286.0 nm;
- (2) apparente Molekulargewichte bei 4500, 3000 und 900;(2) apparent molecular weights at 4500, 3000 and 900;
- (3) starke Hygroskopizität;(3) strong hygroscopicity;
- (4) elfenbeinfarbige, teils amorphe, teils kristalline Flocken nach Gefriertrocknung, abhängig von dem Restwassergehalt; (4) ivory, partly amorphous, partly crystalline Flakes after freeze-drying, depending on the Residual water content;
- (5) pH-Wert von 5,5 (1 ml der Verbindung, gelöst in 1 ml Wasser);(5) pH 5.5 (1 ml of the compound dissolved in 1 ml of water);
- (6) schwach positive, rosa Ninhydrin-Reaktion;(6) weakly positive, pink ninhydrin reaction;
- (7) anfärbbar mit Orcin-Reagens;(7) stainable with orcine reagent;
- (8) Proteingehalt 1,4% (Proteintest nach L. Thomas, J. Clin. Chem. Clin. Biochem., Bd. 19, 1981, Seite 203 bis 208, Coomassie Brilliant Blue G 250);(8) Protein content 1.4% (protein test after L. Thomas, J. Clin. Chem. Clin. Biochem., Vol. 19, 1981, pages 203 to 208, Coomassie Brilliant Blue G 250);
-
(9) folgende Rf-Werte (Lösungsmittelangabe Volumen:
Volumen)
Rf = 0,20 (Butanol : Eisessig : Wasser 4 : 1 : 1)
Rf = 0,45 (Benzol : Eisessig : Wasser 2 : 1 : 2)
Rf = 0,685 (Methanol : Eisessig : Wasser 4 : 1 : 1)
keine Wanderung (Chloroform : Methanol 96 : 4)
Rf = 0,54 (Chloroform : Methanol 1 : 1)(9) the following R f values (solvent specification volume: volume) R f = 0.20 (butanol: glacial acetic acid: water 4: 1: 1)
R f = 0.45 (benzene: glacial acetic acid: water 2: 1: 2)
R f = 0.685 (methanol: glacial acetic acid: water 4: 1: 1)
no migration (chloroform: methanol 96: 4)
R f = 0.54 (chloroform: methanol 1: 1) - (10) Löslichkeit: schlecht löslich in unpolaren Lösungs mitteln, sehr gut löslich in polaren Lösungsmitteln;(10) Solubility: poorly soluble in nonpolar solution average, very soluble in polar solvents;
-
(11) nachweisbare Bestandteile:
Substanzen Verhältnis (Näherung) Neutralzucker (Glucose, Galactose, Ribose) () 1 Aminozucker (Glucosamin, Muraminsäure) (nach Hydrolyse) 3,5 Aminosäure (Ala, Glu, DAP) @ (Ala, Glu + DAP 2,5) 4 Lipide < 1 Phosphor < 1 substances Ratio (approximation) Neutral sugar (glucose, galactose, ribose) () 1 Amino sugars (glucosamine, muramic acid) (after hydrolysis) 3.5 Amino acid (Ala, Glu, DAP) @ (Ala, Glu + DAP 2.5) 4 lipids <1 phosphorus <1 -
(12) Struktur:
Peptidoglycanstruktur, deren Glycangerüst aus 10 bis 80 Disacchariden aus N-Acetylglucosaminyl- N-acetylmuramyl besteht.(12) Structure:
Peptidoglycan structure whose Glycangerüst consists of 10 to 80 disaccharides from N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl.
Der mikrobielle Extrakt kann mit einem radioaktiven Strahler, einem Farbstoff oder einem Cyto statikum markiert sein, wobei die Markierung unter Ver wendung von Ankopplungsmitteln, wie beispielsweise DTPA, Kryptofix, Uridin, L-Thyronin, L-Tyrosin, erfolgen kann. Als Kopplungsmittel kann man alle solchen Kopplungsmit tel verwenden, die einen radioaktiven Strahler, einen Farbstoff oder ein Cytostatikum tragen oder binden kön nen. The microbial extract can with a radioactive emitter, a dye or a cyto be marked statical, the mark under Ver use of coupling means, such as DTPA, Cryptofix, uridine, L-thyronine, L-tyrosine. As a coupling agent can be all such Kopplungsmit tel use a radioactive emitter, a Dye or a cytostatic can wear or bind NEN.
Der Anmelder hat überraschenderweise gefunden, daß ein bestimmter Mikroorganismus des Genus Nocardia opaca, nämlich Rhodococcus rhodochrous eine Verbindung ergibt, die nach Umsetzung mit Acetaldehyd überraschende Eigen schaften als Träger für diagnostische Stoffe aufweist. Der Stamm Rhodococcus rhodochrous wurde bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen, Gries bachstraße 8, D-3400 Göttingen, am 16. Mai 1972 unter der Nummer DSM 43 202 (= DSM 363 = ATCC 21 953) hinter legt. Der Stamm ist frei verfügbar, und seine Lebensfähig keit wurde am 28. Februar 1985 erneut nachgewiesen.The applicant has surprisingly found that a certain microorganism of the genus Nocardia opaca, namely Rhodococcus rhodochrous gives a compound the self surprising after reaction with acetaldehyde as a carrier for diagnostic Has substances. The strain Rhodococcus rhodochrous was at the German Collection of Microorganisms, Gries bachstraße 8, D-3400 Göttingen, on May 16, 1972 under the number DSM 43 202 (= DSM 363 = ATCC 21 953) behind sets. The strain is freely available, and its viable It was again demonstrated on 28 February 1985.
Jomol® wird gemäß der DE 35 10 795 C2 (bzw. der DE 35 10 795 A) hergestellt.Jomol® is used in accordance with DE 35 10 795 C2 (or DE 35 10 795 A). manufactured.
Bei der Durchführung des Verfahrens zur Herstellung von Jomol® wird ein eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle und Mineralien enthaltendes Kulturmedium verwendet. Die ses Kulturmedium kann auch Antischaummittel und/oder ande re übliche Komponenten enthalten. Beispiele für Kohlen stoffquellen sind Kohlenhydrate, Alkohole, Kohlenwasser stoffe und Kleie. Beispiele für Stickstoffquellen sind Maisquellwasser, Hefeextrakte, Fleischextrakte, Pepton, Fischmehl, Ammoniumsalze, Nitratsalze und Harnstoff. Die Mineralquelle umfaßt anorganische Salze, wie Phosphate, Ma gnesiumsalze, Zinksalze, Calciumsalze, Mangansalze, Molyb dänsalze und Kupfersalze. In carrying out the process for the preparation of Jomol® becomes a carbon source, a nitrogen source and minerals containing culture medium used. the This culture medium may also contain antifoams and / or others re usual components. Examples of coals Sources are carbohydrates, alcohols, hydrocarbons fabrics and bran. Examples of nitrogen sources are Corn steep liquor, yeast extracts, meat extracts, peptone, Fish meal, ammonium salts, nitrate salts and urea. The Mineral source includes inorganic salts such as phosphates, Ma magnesium salts, zinc salts, calcium salts, manganese salts, molybdenum Danish salts and copper salts.
Die Zusammensetzung des Kulturmediums kann nach Bedarf geändert werden, und während der Fermentation können diese Kohlenstoff-, Stickstoff- und Mineral quellen zusätzlich zugegeben werden. Zur Herstellung eines Inokulums wird der Mikroorganismus beispielsweise auf DST-Oxoid-Nährboden, oder Traubenzucker-Agar (2%) in Plattentechnik auf drei bis vier Platten fünf bis 8 Tage kultiviert. Man erhält hierbei ein Produkt, das dann als Inokulum zur Herstellung des Materials in technischem Maßstab verwendet werden kann.The composition of the culture medium can be changed as needed, and During fermentation, these can be carbon, nitrogen and mineral be added in addition sources. For making an inoculum is the microorganism for example on DST-Oxoid medium, or dextrose agar (2%) in plate technique at three to four Plates cultivated for five to eight days. This gives a product that then as an inoculum to produce the material on an industrial scale can be used.
Die Züchtung des Mikroorganismus in technischem Maßstab kann beispiels weise in Erlenmeyer-Kolben, die 100 ml normale Nährbouillon enthalten, erfolgen. Die Züchtung erfolgt unter aeroben Bedingungen.The cultivation of the microorganism on an industrial scale, for example in Erlenmeyer flasks containing 100 ml of normal nutrient broth, respectively. Breeding takes place under aerobic conditions.
Die Züchtungstemperatur beträgt 20 bis 40°C, und der pH-Wert des Kultur mediums liegt bei 7,2 bis 7,4. Die bevorzugte Temperatur beträgt 30 bis 37°C, und die geeignete Züchtungszeit beträgt normalerweise 2 bis etwa 30 Tage und kann auf geeignete Weise, abhängig von der Auswahl der anderen Kulturbedingungen, geändert werden.The cultivation temperature is 20 to 40 ° C, and the pH of the culture mediums is 7.2 to 7.4. The preferred temperature is 30 to 37 ° C, and the suitable culture time is usually 2 to about 30 Days and may be appropriate, depending on the selection of others Culture conditions, to be changed.
Die Mikroorganismen werden dann geerntet, vorzugsweise durch Abzentrifu gieren. Man kann die Mikroorganismen jedoch auch über Glasfilter abfil trieren. Das Zentrifugieren kann beispielsweise mit 4000 Umdrehungen pro Minute während einer Zeit von 5 bis 10 Minuten in einer Kühlzentrifuge mit einem Rotor von 40 cm Durchmesser erfolgen. Die erhaltenen Mikroorganismen werden üblicherweise gewaschen, beispielsweise mit Wasser oder 0,01 M Tris-HCl-Puffer mit einem pH-Wert von beispielsweise 7,4. Der Tris-HCl-Puffer enthält vorzugsweise EDTA-Na₂, zum Beispiel 0,1 bis 0,04, vorzugsweise 0,06%. Der Waschvorgang kann einmal oder mehrere Male wiederholt werden.The microorganisms are then harvested, preferably by centrifugation yaw. However, the microorganisms can also be filtered off via glass filters trate. The centrifuging can, for example, 4000 revolutions per Minute during a time of 5 to 10 minutes in one Refrigerated centrifuge with a rotor of 40 cm diameter done. The microorganisms obtained are usually washed, for example with water or 0.01 M Tris-HCl buffer with a pH of, for example 7.4. The Tris-HCl buffer preferably contains EDTA-Na₂, for example 0.1 to 0.04, preferably 0.06%. The washing process can be one or more Repeated times.
Die Mikroorganismen werden sodann vorzugsweise nachdem sie wie oben gewaschen wurden, in Tris-HCl-Puffer (pH 7,4), beispielsweise 0,01 M, der vorzugsweise 0,1 bis 0,05% EDTA-Na₂ und 8 bis 12% vorzugsweise 10%, Glucose enthält, suspendiert.The microorganisms are then preferably washed after being washed as above in Tris-HCl buffer (pH 7.4), for example 0.01 M, which is preferably 0.1 to 0.05% EDTA-Na₂ and 8 to 12%, preferably 10%, contains glucose, suspended.
Zu der erhaltenen Suspension, die gegebenenfalls bebrütet wurde, wird dann ein murolytisches Enzym, vorzugsweise Lysozym und vorzugsweise zur Entfernung der Nucleinsäuren und zur Herabsetzung der Viskosität Desoxyribonuclease zugesetzt. Man verwendet beispielsweise für 5 g Bakterien 100 ml Tris-HCl-Puffer und gibt dann zu dieser Suspension 10 mg Lysozym und 3 mg Desoxyribonuclease.The resulting suspension, which was then incubated, is then added a murolytic enzyme, preferably lysozyme and Preferably, to remove the nucleic acids and to reduce the Viscosity deoxyribonuclease added. For example, for 5 g of bacteria, 100 ml Tris-HCl buffer and Then 10 mg of lysozyme and 3 mg of deoxyribonuclease are added to this suspension.
Die Behandlung mit Glucose und den Fermenten wird während einer Zeit von 30 Minuten bis mehreren Stunden, vorzugsweise während einer Zeit von zwei bis drei Stunden, bei einer Temperatur von 20 bis 40°C, vorzugsweise 30 bis 37°C, durchgeführt.The treatment with glucose and the enzymes is for a period of 30 Minutes to several hours, preferably for a period of two to three hours, at a temperature of 20 to 40 ° C, preferably 30 to 37 ° C, performed.
Anschließend werden die Zellen zerstört. Dies kann mit allen geeigneten Methoden geschehen, beispielsweise Ultraschall. Vorzugsweise wird Ultra schall während einer Minute, verwendet. Die mechanische Zerstörung der Zellen muß nicht durch geführt werden, sie wird jedoch vorzugsweise durchgeführt, weil dadurch die Ausbeute des gewünschten Produkts erhöht wird.Subsequently, the cells are destroyed. This can be done with any suitable Methods happen, for example ultrasound. Preferably, Ultra sound for one minute, used. The mechanical destruction of the cells does not have to However, it is preferably performed, because thereby the Yield of the desired product is increased.
Das erhaltene Material wird danach in Überstand und Bodensatz, vorzugsweise durch Zentrifugieren, getrennt. Das Zentrifugieren kann in einer normalen Zentrifuge durchgeführt werden, bevorzugt wird es jedoch in einer Kühlzen trifuge bei einer Temperatur von 4 bis 6°C bei 4000 Umdrehungen pro Minute 10 bis 15 Minuten lang durchgeführt. Der Bodensatz kann gegebenenfalls einmal oder mehrere Male mit Wasser oder dem oben erwähnten Puffer gewaschen werden, wobei die erhaltenen Waschlösungen mit dem Überstand vereinigt werden. Der Überstand wird gegebenenfalls nach Einengen im Hochvakuum bei tiefen Temperaturen an Sephadex®-G-75-Säulen chromatographiert. Wird auf ein Waschen des erhaltenen Bodensatzes verzichtet, so wird der Überstand direkt der Chromatographie unterworfen, ohne daß er eingeengt wird. Man erhält beispielsweise aus 5 g Bakterien einen Überstand, den man vorzugsweise in fünf gleiche Teile teilt und auf fünf vorbereiteten Sephadex- G-75-Säulen zu je einem Teil gibt. Die Säulen sind 80 cm lang, der Innen durchmesser beträgt 2,5 cm, die Sephadex®-Füllungshöhe beträgt 60 cm. Wird nur eine Säule verwendet, so wird der Teil, der nicht chromatogra phiert wird, bei -25°C eingefroren und bei dieser Temperatur aufbewahrt.The material obtained is then in supernatant and sediment, preferably by centrifuging, separated. The centrifuging can be done in a normal Centrifuge are carried out, but it is preferred in a Kühlzen trifuge at a temperature of 4 to 6 ° C at 4000 revolutions per minute Performed for 10 to 15 minutes. The sediment may optionally washed once or several times with water or the above-mentioned buffer be, with the resulting wash solutions combined with the supernatant become. The supernatant is optionally after concentration in a high vacuum at low temperatures on Sephadex® G-75 columns. Is omitted on a washing of the obtained sediment, so is the Supernatant directly subjected to chromatography, without being concentrated becomes. For example, from 5 g of bacteria, a supernatant is obtained preferably divided into five equal parts and split into five prepared Sephadex There are G-75 columns in each case. The columns are 80 cm long, the inside diameter is 2.5 cm, the Sephadex® filling height is 60 cm. If only one column is used, then the part that is not chromatogra is frozen at -25 ° C and stored at this temperature.
Wenn man bei einer Chromatographie auf einer der Säulen zur Charakteri sierung der JOMOL®-Substanz "Albumin aus Humanserum Markierung" benutzt, tritt der erste Peak der Rohsub stanz mit dem Albumin (MG 69 000) und die Fraktion 2b* mit dem ebenfalls zur Säuleneichung benutzten Vitamin B₁₂ (MG 1 355,4) aus (Fig. 2).When using chromatography on one of the columns to characterize the JOMOL® substance "albumin from human serum labeling", the first peak of the crude substance with the albumin (MW 69,000) and the fraction 2b * with the same for the column calibration occurs used vitamin B₁₂ (MW 1 355.4) ( Figure 2).
Als Elutionsmittel wird 0,01 M Tris-HCl-Puffer (pH 7,4), der 0,06% EDTA-Na₂ enthält, verwendet. Die Flußrate beträgt 100 µl pro Minute (= 2 Tropfen/min), wobei den auch niedrigere oder höhere Flußraten anwenden kann. Die aktive Fraktion, die als Fraktion 2b* bezeichnet wird, wird in einer Zeit von 12 bis 14 Stunden nach Beginn der Gelchromatographie gesammelt. Das Elutionsvolumen beträgt ca. 900 bis 980 ml, die Fraktionierung erfolgt unter UV-Detektion bei 214 nm Das Vorgehen zur Gewinnung der Fraktion 2b* kann vom Abernten der Zellen nach Kultivieren bis zur Säulenfraktionierung auch in Phosphatpuffer, Ammoniumacetatpuffer und anderen erfolgen. Die Verwendung vom Ammoniumacetat puffer ist insbesondere für die Präparate zur Jodierung bevorzugt. Die erhaltenen aktiven Fraktionen werden lyophilisiert und anschließend eine Stunde bei 80°C zur Zerstörung der Abbauenzyme inkubiert. Wenn nicht lyophilisiert wird, werden die verdünnten Lösungen bei -20°C, vorzugsweise -40°C, besonders bevorzugt -80°C, eingefroren und als Lösung aufbewahrt.The eluent is 0.01 M Tris-HCl buffer (pH 7.4) containing 0.06% EDTA-Na₂ contains, used. The flow rate is 100 μl per minute (= 2 drops / min), with the same can apply lower or higher flow rates. The active fraction, the as fraction 2b * is called, in a time of 12 to 14 hours collected after the onset of gel chromatography. The elution volume is about 900 to 980 ml, the fractionation is carried out under UV detection at 214 nm The procedure for obtaining fraction 2b * may be from harvesting the cells after culturing to column fractionation also in phosphate buffer, Ammonium acetate buffer and others. The use of ammonium acetate Buffer is particularly preferred for the preparations for iodination. The resulting active fractions are lyophilized and then incubated for one hour at 80 ° C to destroy the degradation enzymes. Unless is lyophilized, the dilute solutions at -20 ° C, preferably -40 ° C, more preferably -80 ° C, frozen and stored as a solution.
Vor dem Lyophilisieren bzw. Einfrieren werden die erhaltenen Lösungen bei aktiven Fraktionen vorzugsweise mit einer 1 M Acetaldehyd(reinst)-wäßrigen Lösung in u.g. M Verhältnis gemischt und 10 Minuten bis 2 Stunden, vorzugs weise z. B. 30 Minuten, bei Raumtemperatur stehengelassen.Before lyophilization or freezing, the solutions obtained are at active fractions, preferably with a 1 M acetaldehyde (pure) aqueous Solution in u.g. M ratio mixed and 10 minutes to 2 hours, preferably wise z. B. 30 minutes, allowed to stand at room temperature.
Die Umsetzung der Fraktion 2b* mit Acetaldehyd erfolgt im molaren Verhältnis Fraktion 2b*: Acetaldehyd = 1 : 1,8 bis 2, vorzugsweise im Verhältnis von 1 : 2, wobei man für die Fraktion 2b* ein mittleres Molekulargewicht von ca. 4000 annimmt.The reaction of fraction 2b * with acetaldehyde takes place in a molar ratio Fraction 2b *: acetaldehyde = 1: 1.8 to 2, preferably in the ratio of 1: 2, wherein for the fraction 2b * an average molecular weight of about 4000 assumes.
Überraschenderweise zeigte sich, daß man bei der Umsetzung der aktiven Fraktion 2b* mit Acetaldehyd eine "Fraktion 2b" erhält, die als JOMOL® bezeichnet wird, überraschende pharmakologische Eigenschaften aufweist und außerdem als Trägersubstanz verwendet werden kann.Surprisingly, it was found that in the implementation of the active Fraction 2b * with acetaldehyde a "fraction 2b" obtained as JOMOL® has, has surprising pharmacological properties and can also be used as a carrier.
Die Ausbeute aus ca. 5 g Bakterien beträgt ca. 50 bis 70 mg JOMOL® in reiner Form.The yield from about 5 g of bacteria is about 50 to 70 mg JOMOL® in pure form.
Das Produkt ist sehr hygroskopisch. Gegebenenfalls kann mit üblichen Methoden eine Wassergehaltsbestimmung des Lyophilisats durchgeführt werden. The product is very hygroscopic. Optionally, by conventional methods a water content determination of the lyophilisate be carried out.
Nach dem Trocknen ist die Substanz gelbweiß und flockig, mit etwas Wasser erscheint sie im Augenblick "kristallin", mit etwas mehr Wasser ist sie farblos, glasartig, gelatinös und zieht Fäden wie Haushaltsalleskleber. Bei steriler Lagerung ohne Lichtzutritt unter Stickstoff ist die Substanz bei einer Temperatur unter -25°C stabil. Die Substanz ist unter Lichtzutritt bei Raumtemperatur einige Stunden stabil.After drying, the substance is yellow-white and flaky, with a little water At the moment she appears "crystalline", with a little more water she is colorless, glassy, gelatinous and pulls strings like household glue. at Sterile storage without access of light under nitrogen is the substance at a temperature below -25 ° C stable. The substance is under light Stable at room temperature for a few hours.
Wie oben erläutert, werden bei dem erfindungsgemäßen Verfahren Nocardia- Bakterien verwendet. Nocardien sind grampositive Actinomyceten. Ihr mehr schichtiges Zellwandgrundgerüst weist Einlagerungen von Proteinen und Poly sacchariden auf. Ihm aufgelagert sind Deckschichten, die schwer ablösbar sind.As explained above, in the method according to the invention Nocardia Bacteria used. Nocardia are Gram-positive actinomycetes. Your more layered cell wall framework indicates protein and poly deposits saccharides on. It is superimposed on top layers, which are difficult to remove are.
Die Zellwand enthält als äußere Schicht Lipoproteine und Wachse, als mittlere Schicht Lipopolysaccharide und als innere Schicht lange Polysaccharidketten. Die Antigenität der Schichtbestandteile nimmt von außen nach innen ab.The cell wall contains as outer layer lipoproteins and waxes, as the middle Layer of lipopolysaccharides and as inner layer long polysaccharide chains. The antigenicity of the coating components decreases from outside to inside.
Das Substrat für die Herstellung ist die innere Schicht mit den langen Peptidoglykanketten. Diese sind im Glykangerüst aus Dissaccharidbausteinen gebildet. Der Disaccharidbaustein besteht aus N-Acetylglucosaminyl-N-acetyl muramyl:The substrate for the production is the inner layer with the long ones Peptidoglycan. These are in Glykangerüst from Dissaccharidbausteinen educated. The disaccharide building block consists of N-acetylglucosaminyl-N-acetyl muramyl:
An der Säuregruppe der N-Acetylmuraminsäure (N-Acetylglucosaminlactatether) sind Peptideinheiten über L-Alanin gebunden. Diese Peptideinheiten enthalten Sequenzen von L-Alanin→D-Isoglutamin→meso-α,ε-Diaminopimelinsäure (DAP), wobei die DAP amidiert sein kann. An dieser Stelle kommt selten Uridindiphosphat oder eine andere Aminosäure, häufiger Lysin vor, die ihrerseits substituiert sein kann. Anstelle der Acetylgruppe kann an der Muraminsäure eine Glycolylgruppe vorhanden sein. Außer diesen genannten Einheiten können auch bis 10% Neutralzucker vorhanden sein.On the acid group of N-acetylmuramic acid (N-acetylglucosamine lactate ether) are peptide units bound via L-alanine. Contain these peptide units Sequences of L-alanine → D-isoglutamine → meso-α, ε-diaminopimelic acid (DAP), where the DAP may be amidated. At this point comes rarely Uridine diphosphate or another amino acid, more commonly lysine, which may in turn be substituted. Instead of the acetyl group may be at the Muramic acid may be present a glycolyl group. Except these mentioned Units can also be present up to 10% neutral sugar.
Dem obengenannten Herstellungsprozeß entsprechend wird der Anteil der äußeren Wandschicht der Nocardien verworfen; Lipoproteine, Lipide und Wachse sind also weder im Gesamtpräparat noch im Präparat Fraktion 2b ent halten. Die hergestellten Präparate sind Spaltprodukte von Peptydoglykanen und Peptiden der inneren Wandschicht. Das zur Spaltung eingesetzte Lysozym hydrolysiert die Bindung zwischen N-Acetylglucosamin und N-Acetylmuramin säure des Glykangerüsts. Die Desoxyribonuclease spaltet Nucleinsäuren; sie setzt die Viskosität des Produktes herab. Die Peptidsubstituenten der Peptidoglykane gehen im obengenannten Herstellungsprozeß so weit ihrer interpeptidischen Bindungen verlustig, daß sie wasserlöslich werden und nur noch gering fettlöslich sind. Gleichzeitig verlieren die Enden der Peptido glykanketten ihre Peptidanteile. Durch den Herstellungsvorgang werden die Peptidoglykane weitestgehend von natürlichen Lipiden, mit den sie zusammen in den Zellwänden vorkommen, befreit. Die N-Acetylglucosamingruppen der Peptidoglykane können teilweise desacetyliert sein.According to the above manufacturing process, the proportion of discarded outside wall layer of the Nocardien; Lipoproteins, lipids and Waxes are therefore neither in the overall preparation nor in the preparation fraction 2b ent hold. The preparations prepared are cleavage products of peptydoglycans and peptides of the inner wall layer. The cleavage lysozyme hydrolyzes the bond between N-acetylglucosamine and N-acetylmuramine acid of the glycan backbone. The deoxyribonuclease cleaves nucleic acids; you reduces the viscosity of the product. The peptide substituents of Peptidoglycans go as far as theirs in the above manufacturing process loss of interpeptidic bonds that they become water soluble and only are still low in fat. At the same time lose the ends of peptido glycans their peptide content. Through the manufacturing process, the Peptidoglycans largely from natural lipids, with which they together occur in the cell walls, free. The N-acetylglucosamine groups of Peptidoglycans may be partially deacetylated.
JOMOL® besitzt unerwartete Eigenschaften. JOMOL® selbst findet als Immunmodu lator, Arzneimittel oder Diagnostikum Verwendung. JOMOL® und seine Kopplungs produkte mit bestimmten Kopplungsmitteln eignen sich besonders gut als Trägersubstanzen für radioaktive Verbindungen, Farbstoffe und Arzneimittel. JOMOL®, seine Kopplungsprodukte und die markierten oder beladenen JOMOL® derivate reichern sich überraschenderweise an Krebszellen an und werden von gesunden Zellen kaum oder nur in geringem Umfang gebunden. Wird beispiels weise JOMOL® mit einem radioaktiven Marker markiert und verabreicht, so reichert sich das markierte JOMOL® an den Tumorzellen an, und diese können dadurch mittels Gammakamera-Imaging leicht nachgewiesen werden.JOMOL® has unexpected properties. JOMOL® finds itself as an immune modul lator, drug or diagnostic use. JOMOL® and its coupling Products with certain coupling agents are particularly suitable as Carrier substances for radioactive compounds, dyes and pharmaceuticals. JOMOL®, its coupling products and the labeled or loaded JOMOL® Surprisingly, derivatives accumulate on cancer cells and are released by healthy cells are hardly or only to a limited extent bound. For example JOMOL® labeled with a radioactive marker and administered, so the labeled JOMOL® accumulates on the tumor cells and they can thereby easily detected by gamma camera imaging.
Beispiele für Kopplungsprodukte von JOMOL® sind Produkte, die JOMOL®, daran gekoppelt einen Kronenether, Diethylentriaminpentaessigsäure, Fluorescein isothiocyanat oder Zinn(II)-chlorid enthalten. Derartige Kopplungsprodukte werden allgemein hergestellt, indem man JOMOL® in einem geeigneten polaren Lösungsmittel oder in einer wäßrigen Lösung eines polaren Lösungsmittels löst. Beispielsweise kann man 1 bis 10 mg JOMOL® bis 20 µl eines geeigneten wäßrigen Lösungsmittels lösen. Man kann auch sehr konzentrierte Lösungen von JOMOL® erstellen. Die Lösung erfolgt bei möglichst tiefer Temperatur, wobei jedoch die Temperatur so gewählt werden muß, daß das Lösungsmittel noch nicht kristallisiert. Die mit JOMOL® umzusetzende Substanz wird in einem Verhältnis von 1 Mol JOMOL zu 0,8 bis 1,2 Mol der anzukoppeln den Verbindung umgesetzt, wobei man für das JOMOL® ein mittleres Molekular gewicht von ca. 4000 annimmt. Die Verbindung, die an JOMOL® angekoppelt wird, wird in einem wasserfreien Medium gelöst oder homogen suspendiert. Im Falle von Zinn(II)-chlorid wird eine salzsaure wäßrige Lösung verwendet. Das Reaktionsgemisch wird während einer Zeit von einigen Minuten bis 60 Minuten bei einer Temperatur im Bereich von 15 bis 40°C stehengelassen. Das Produkt kann direkt verwendet werden. Es kann auch durch Chromatographie gereinigt und isoliert werden.Examples of JOMOL® coupling products are JOMOL® products coupled a crown ether, diethylenetriaminepentaacetic acid, fluorescein isothiocyanate or stannous chloride. Such coupling products are generally prepared by placing JOMOL® in a suitable polar Solvent or in an aqueous solution of a polar solvent solves. For example, 1 to 10 mg of JOMOL® can be added to 20 μl of a Dissolve appropriate aqueous solvent. You can also be very focused Create solutions from JOMOL®. The solution takes place at the lowest possible Temperature, but the temperature must be chosen so that the Solvent not yet crystallized. The substance to be converted with JOMOL® will couple in a ratio of 1 mole of JOMOL to 0.8 to 1.2 moles of implemented the compound, wherein for the JOMOL® a medium molecular weight of about 4000 accepts. The connection coupled to JOMOL® is dissolved in an anhydrous medium or homogeneously suspended. in the In the case of stannous chloride, a hydrochloric acid aqueous solution is used. The reaction mixture is allowed to stand for a few minutes Allowed to stand for 60 minutes at a temperature in the range of 15 to 40 ° C. The product can be used directly. It can also be done by chromatography be cleaned and isolated.
Chromatographie und Reinigung erfolgen auf ähnliche Weise, wie für JOMOL® selbst beschrieben. Es werden Sephadex®-Säulen verwendet, und als Eluierungs mittel werden die oben erwähnten Puffer eingesetzt.Chromatography and purification are done in a similar manner as for JOMOL® self described. Sephadex® columns are used and as elutions medium, the above-mentioned buffers are used.
Werden die Kopplungsprodukte selbst direkt als Diagnostikum verwendet, ist es bevorzugt, möglichst reine Lösungen umzusetzen und die erhaltenen Lösungen direkt, gegebenenfalls nach Sterilisation, zu verwenden.If the coupling products themselves are used directly as a diagnostic agent, is it prefers to react as pure as possible solutions and the resulting solutions directly, if necessary after sterilization to use.
Es wurden folgende Kopplungsprodukte hergestellt:The following coupling products were prepared:
Dieses Produkt wird als "JOMOL®-DTPA" oder als "JOMO®-In" bezeichnet. Es eignet sich zur Beladung mit ¹¹¹Indium oder mit 99mTechnetium, welches mit Zinn(II)-chlorid reduziert wurde. Die mit einem radioaktiven Marker markierten Produkte sind insbesondere für die Diagnostik geeignet.This product is referred to as "JOMOL®-DTPA" or as "JOMO®-In". It is suitable for loading with 111 indium or with 99m technetium which has been reduced with tin (II) chloride. The products labeled with a radioactive marker are particularly suitable for diagnostics.
Dieses Produkt wird als "JOMOL®-Sn" oder "JOMO®-tech" bezeichnet. JOMOL®-Sn
ist insbesondere für die Beladung mit 99mTechnetium geeignet.
Das markierte Produkt ist für die Diagnose von Tumoren besonders gut
geeignet.
Das Produkt wird durch Umsetzung einer JOMOL®-Lösung mit einer salzsauren,
wäßrigen Zinn(II)-lösung hergestellt.This product is called "JOMOL®-Sn" or "JOMO®-tech". JOMOL®-Sn is particularly suitable for loading with 99m Technetium.
The labeled product is particularly well suited for the diagnosis of tumors.
The product is prepared by reacting a JOMOL® solution with a hydrochloric acid aqueous tin (II) solution.
Dieses Produkt wird als "JOMO®-J/U" bezeichnet und ist zur Markierung mit
radioaktivem Jod besonders geeignet. Das markierte Produkt kann zur
Diagnose oder Therapie verwendet werden.
Die Herstellung erfolgt durch Umsetzung von JOMOL® und Uridin-2′,
3′-dialdehyd in einem wasserfreien Lösungsmittel.
This product is referred to as "JOMO®-J / U" and is particularly suitable for labeling with radioactive iodine. The labeled product can be used for diagnosis or therapy.
The preparation is carried out by reacting JOMOL® and uridine-2 ', 3'-dialdehyde in an anhydrous solvent.
Das Produkt wird als "JOMO®-Color" bezeichnet. Es eignet sich insbesondere zur Diagnostik und/oder Therapie. Die Produkte 3 und 4 sind besonders gut für die Markierung mit radioaktivem Jod geeignet. Die Produkte werden für die Diagnostik verwendet.The product is called "JOMO®-Color". It is particularly suitable for diagnosis and / or therapy. The products 3 and 4 are special good for radioactive iodine labeling. The products are used for diagnostics.
Dieses Produkt wird als "JOMO®-Ce" und auch als "JOMO®-Ra" bezeichnet. Das Produkt wird hergestellt, indem JOMOL® mit einer Vorstufe von Krypto fix 222®, die CE bezeichnet wird, umgesetzt wird. Das CE-Molekül besitzt folgende Struktur:This product is referred to as "JOMO®-Ce" and also as "JOMO®-Ra". The Product is manufactured by JOMOL® with a preliminary stage of crypto fix 222®, the CE is implemented, is implemented. The CE molecule has the following structure:
CE enthält die komplette Amidbindung im Kronenether (im Gegensatz zum
Kryptofix 222®).
Die Verbindung ist besonders für die radioaktive Markierung mit Radium
geeignet. Es ist eine längere Inkubationszeit mit ²²⁴Ra zu dessen Auf
nahme nötig als beim Kryptofix 222®. Die Stabilitätskonstante hinsichtlich
der Radiumbindung ist für CE und Kryptofix 222® gleich: lgK = 6,64
(dieser Logarithmus ist für Radium höher als für alle in Frage kommenden
anderen Metallionen). Das angebundene Radium kann hinsichtlich seiner
Bindung nur durch ein saures Milieu abgelöst werden (im Magen instabil,
im übrigen Körper stabil) Ansäuerungen müssen nach der Bindung des
Radium an CE unterbleiben.CE contains the complete amide bond in the crown ether (in contrast to the Kryptofix 222®).
The compound is particularly suitable for radioactive labeling with radium. A longer incubation period with ²²⁴Ra is necessary for its uptake than for the Kryptofix 222®. The stability constant with respect to radium binding is the same for CE and Kryptofix 222®: IgK = 6.64 (this logarithm is higher for radium than for any other metal ions in question). The bound radium can only be detached from its binding by an acidic environment (unstable in the stomach, stable in the rest of the body). Acidification must be avoided after the binding of radium to CE.
JOMOL® und seine oben beschriebenen Kopplungsderivate werden als Trägersub stanz für Farbstoffe, Arzneimittel und radioaktive Marker verwendet. Da sich diese Substanzen, wie oben erwähnt, an Krebszellen anreichern, ist es somit möglich, die Krebszellen gezielt nachzuweisen oder gezielt zu behan deln. Es ist dadurch möglich, die Wirkstoffe, wie beispielsweise die radio aktiven Marker, die einerseits zum Nachweis der Krebszellen und anderer seits auch zur Zerstörung der Krebszellen dienen, gezielt an die Krebszellen zu bringen.JOMOL® and its coupling derivatives described above are used as vehicleub used for dyes, drugs and radioactive markers. There It is these substances, as mentioned above, that accumulate on cancer cells thus it is possible to specifically detect or specifically treat the cancer cells spindles. It is thereby possible, the active ingredients, such as the radio active marker, on the one hand to detect the cancer cells and others also serve to destroy the cancer cells, targeted to the cancer cells bring to.
Das oben genannte Kopplungsprodukt aus JOMOL® und Fluoresceinisothiocyanat ist ein besonders bevorzugtes erfindungsgemäßes Produkt, da es sowohl für die Diagnose und Therapie als auch zur Markierung mit radioaktivem Jod geeignet ist.The above-mentioned coupling product of JOMOL® and fluorescein isothiocyanate is a particularly preferred product according to the invention, as it is suitable for both the diagnosis and therapy as well as for labeling with radioactive iodine suitable is.
Die Herstellung von markiertem JOMOL® oder der markierten JOMOL®-Derivate, die mit einem Arzneimittel oder einem Farbstoff markiert sind, erfolgt, indem man eine JOMOL®-Lösung, wie oben bei der Herstellung der Kopplungs produkte angegeben, oder indem man eine Lösung oder Suspension der Kopplungs produkte in geeigneter Konzentration mit einer Lösung oder Suspension eines Arzneimittels oder eines Farbstoffes umsetzt. Im allgemeinen werden äqui molare Mengen von JOMOL® und dem Farbstoff in einem polaren Lösungsmittel zusammengebracht. Danach wird eine äquimolare Menge eines Vernetzungsmittels (Glutaraldehyd) in an sich bekannter Weise zugesetzt und zur Kopplung der Komponenten verwendet. Die Reaktionstemperatur beträgt 15 bis 40°C. Anschließend erfolgt eine chromatographische Reinigung.The preparation of labeled JOMOL® or the labeled JOMOL® derivatives, which are marked with a drug or a dye takes place, by using a JOMOL® solution as above in the manufacture of the coupling products or by adding a solution or suspension of the coupling products in a suitable concentration with a solution or suspension of a Drug or a dye. In general, equi molar amounts of JOMOL® and the dye in a polar solvent brought together. Thereafter, an equimolar amount of a crosslinking agent (Glutaraldehyde) added in a conventional manner and to Coupling of the components used. The reaction temperature is 15 to 40 ° C. This is followed by a chromatographic purification.
Die Herstellung der mit einem radioaktiven Marker markierten Produkte er folgt, indem man JOMOL® oder ein Kopplungsprodukt von JOMOL® oder eine Lösung mit einer Salzlösung des radioaktiven Markers umsetzt und das radioaktive Produkt in an sich bekannter Weise, beispielsweise durch Säulenchromato graphie, gewinnt. Die Markierung mit radioaktiven Strahlern ist in der Literatur beschrieben. Beispiele für radioaktive Strahler sind die Strahler, die man üblicherweise auf dem Gebiet der Therapie und der Diagnose von malignen Tumoren verwendet, wie beispielsweise 99mTechnetium, ¹¹¹Indium, ¹²⁵Jod, ¹³¹Jod und ²²⁴Radium. Die Radioaktivität kann beispielsweise 185 KBq bis 7.4 GBq betragen.The preparation of the products marked with a radioactive marker he follows by JOMOL® or a coupling product of JOMOL® or a solution with a salt solution of the radioactive marker and the radioactive product in a conventional manner, for example, by säulenchromato graphy wins. The labeling with radioactive radiators is described in the literature. Examples of radioactive emitters are the emitters commonly used in the field of therapy and diagnosis of malignant tumors, such as 99m technetium, 111 indium, 125 iodine, 13 iodine and 222 radium. For example, the radioactivity may be 185 KBq to 7.4 GBq.
Bei Beladung von JOMOL® einem Radionuclid zeigt der Peak von JOMOL® mit einem apparenten Molekulargewicht von 3000 in einem FPLC-Elutionsmuster die höchste Bindung des Radionuclids. Dasselbe gilt für JOMO®-tech, JOMO®-In und JOMO®-Ra. (Fig. 3) Bei JOMOL®-Sn99cTc, JOMOL®-DTPA-¹¹¹In und JOMOL®CE-²²⁴Ra wurde nach fünftägiger Lagerung in wäßriger Lösung (0,5 mg/ml bei -20°C) nach der Markierung keine Autoradiolyse festgestellt.When loaded with JOMOL® a radionuclide, the peak of JOMOL® with an apparent molecular weight of 3000 in an FPLC elution pattern shows the highest binding of the radionuclide. The same applies to JOMO®-tech, JOMO®-In and JOMO®-Ra. ( Figure 3) For JOMOL®-Sn 99c Tc, JOMOL®-DTPA-111 In and JOMOL®CE-22Ra, no autoradiolysis was observed after five days storage in aqueous solution (0.5 mg / ml at -20 ° C) after labeling detected.
Erfindungsgemäß ist es auch möglich, Gemische aus JOMOL® und seinen mit einem radioaktiven Strahler, einem Farbstoff oder einem Cytostatikum markierten Derivaten zu verwenden.According to the invention, it is also possible mixtures of JOMOL® and its with a radioactive radiator, a dye or a cytostatic to use labeled derivatives.
Gemäß der vorliegenden Erfindung können JOMOL®, seine Kopplungsprodukte und die entsprechend markierten Derivate, wie oben beschrieben, auf Liposomen oder in lipidierter Form verwendet werden. Liposomen sind kugelförmige Gebilde aus einer oder mehreren Lipiddoppelschichten mit einem Innenraum. Derartige Bläschen lassen sich durch mechanische Feinstverteilung von Phospholipiden, wie zum Beispiel Lecithin, in wäßrigen Medien herstellen. Erfindungsgemäß werden Liposomen verwendet, die einzelne unilamellare Bläschen (SUV) sind und vorzugsweise aus Phosphatidylcholin : Phosphatidyl serin : Cholesterol im molaren Verhältnis 8 : 2 : 10 bestehen und durch Sonication hergestellt werden. Die Lipide, aus denen sie hergestellt werden, sind im Handel erhältlich. Die Lipide werden in Ether gelöst, durch Säulenchromatographie gereinigt, unter N₂ mit JOMOL® bzw. seinen Derivaten vermischt, in phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS), beispielsweise bei pH 7,4 suspendiert und dann beispielsweise 25 Minuten bei +2°C mit einem pulsierenden Sonicator beschallt (sonicated). Die Sonication wird im allgemeinen unter N₂ durchgeführt. Nach der Beschallung (Soni cation) werden die Liposomen auf einer Sepharose®-4-B-Säule chromatographiert und vorzugsweise die Fraktionen der Population mit Radii unter 30 nm benutzt. (C. Huang, Biochemistry 15, 2362 1969).According to the present invention, JOMOL®, its coupling products and the appropriately labeled derivatives, as described above, on liposomes or in lipidated form. Liposomes are spherical Structure of one or more lipid bilayers with an interior. Such bubbles can be by mechanical finest distribution of Phospholipids, such as lecithin, produce in aqueous media. According to the invention liposomes are used, the single unilamellar Bubbles (SUV) are and preferably phosphatidylcholine: phosphatidyl serine: cholesterol in the molar ratio 8: 2: 10 exist and by sonication getting produced. The lipids from which they are made are in Trade available. The lipids are in Ether dissolved, purified by column chromatography, under N₂ with JOMOL® or its derivatives, in phosphate buffered saline (PBS), for example, suspended at pH 7.4 and then for example 25 minutes Sonicated at + 2 ° C with a pulsating sonicator (sonicated). The Sonication is generally carried out under N₂. After sonication (Soni cation), the liposomes are chromatographed on a Sepharose® 4-B column and preferably using the fractions of the population with radii less than 30 nm. (C. Huang, Biochemistry 15, 2362, 1969).
Diese Liposomen werden dann zur Diagnostik in an sich bekannter Weise mit vorzugsweise 99mTechnetium am JOMOL® markiert. Um die radioaktive Markierung zu prüfen, wird ein Aliquot der Liposomen auf eine Sepharose®-4-B-Säule gegeben und chromatographiert. Man stellt fest, daß die Präparation eine spezifische Aktivität von 99,2% an JOMOL® gebundener Radioaktivität und 0,8% von freiem Pertechnetat hat. Die Liposomen können mit JOMOL® bzw. seinen Derivaten beschickt sein, die mit einem radioaktiven Tracer, mit einem Farbstoff, einem Cytostatikum oder mit Gemischen dieser Verbindungen be schickt sind. Derartige Liposomen sind insbesondere für die Diagnose ge eignet. Gemäß einer erfindungsgemäßen Ausführungsform wird JOMOL® oder JOMOL-Derivat, gegebenenfalls - wie oben erläutert - beschickt, in einem Lipid dispergiert. Die Dispersion erfolgt, indem man die Substanzen zu sammenbringt und ebenfalls einer Beschallung unterwirft. Als Lipide kann man Phosphatidylcholin allein oder mit Phosphatidylserin und Cholesterol zusammen, beispielsweise im molaren Verhältnis 8 : 2 : 10, verwenden.These liposomes are then labeled for diagnosis in a conventional manner with preferably 99m technetium on JOMOL®. To test the radioactive label, an aliquot of the liposomes are placed on a Sepharose® 4-B column and chromatographed. It is noted that the preparation has a specific activity of 99.2% of JOMOL® bound radioactivity and 0.8% of free pertechnetate. The liposomes may be loaded with JOMOL® or its derivatives, which are with a radioactive tracer, with a dye, a cytostatic or with mixtures of these compounds be sent. Such liposomes are particularly suitable for the diagnosis ge. According to one embodiment of the invention, JOMOL® or JOMOL derivative, optionally charged as explained above, is dispersed in a lipid. The dispersion takes place by bringing the substances together and likewise subjecting them to a sonication. As lipids one can use phosphatidylcholine alone or with phosphatidylserine and cholesterol together, for example in a molar ratio of 8: 2: 10.
Wie oben erwähnt, ist bekannt, daß ein Gemisch aus Acetaldehyd und Ethanol eine cancerotoxische Wirkung hat. Überraschenderweise wurde jetzt gefunden, daß JOMOL® der seine Derivate eine besonders gute Wirkung entfalten, wenn sie zusammen mit einem Hilfsmittel, welches als "Cocktail" bezeichnet wird, verabreicht werden. Das Hilfsmittel enthält einen Aldehyd der allgemeinen Formel IAs mentioned above, it is known that a mixture of acetaldehyde and ethanol has a cancerotoxic effect. Surprisingly, it has now been found that JOMOL® its derivatives develop a particularly good effect, if together with an aid called a "cocktail" be administered. The adjuvant contains an aldehyde of general formula I.
RCHO (I)RCHO (I)
worin R ein Wasserstoffatom oder eine geradkettige oder verzweigte Kohlen wasserstoffgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen bedeutet, und gegebenen falls einen Alkohol der allgemeinen Formel IIwherein R is a hydrogen atom or a straight-chain or branched carbon hydrogen group having 1 to 4 carbon atoms, and given if an alcohol of the general formula II
R¹CH₂OH (II)R¹CH₂OH (II)
worin R¹ die für R gegebene Bedeutung besitzt. Das Hilfsmittel enthält gegebenenfalls übliche Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel. Es ist besonders bevorzugt, daß das Hilfsmittel zusätzlich zu dem Aldehyd einen Alkohol enthält. Überraschenderweise zeigte es sich, daß bei gleichzeitiger und bei zeitlich abgestufter Verwendung des Hilfsmittels zusammen mit JOMOL® oder JOMOL®-Derivaten der Wirkungsgrad von JOMOL® bzw. JOMOL®-Derivaten wesent lich verbessert wird. Die Erfindung betrifft somit ein diagnostisches Mittel, welches das oben beschriebene diagnostische Mittel oder Arznei mittel und das oben beschriebene Hilfsmittel enthält.wherein R¹ has the meaning given for R. The tool contains optionally conventional carriers and / or diluents. It is particularly preferred that the auxiliary in addition to the aldehyde a Contains alcohol. Surprisingly, it was found that at the same time and with gradual use of the aid together with JOMOL® or JOMOL® derivatives the efficiency of JOMOL® or JOMOL® derivatives essential is improved. The invention thus relates to a diagnostic Agent containing the above-described diagnostic agent or drug contains medium and the auxiliary described above.
Das Hilfsmittel in dem erfindungsgemäßen diagnostischen Mittel kann den Aldehyd als solchen in üblichen pharmakologisch verträglichen Trägern und/oder Verdünnungsmitteln enthalten. Besonders bevorzugt ist es, den Aldehyd in wäßriger und/oder alkoholischer Lösung einzusetzen. Erfindungsgemäß ist es dabei besonders bevorzugt, den jeweiligen Aldehyd zusammen mit seinem zugehörigen Alkohol zu verwenden.The adjuvant in the diagnostic agent of the invention can be the Aldehyde as such in conventional pharmacologically acceptable carriers and / or Contain diluents. It is particularly preferred, the aldehyde to be used in aqueous and / or alcoholic solution. According to the invention it is particularly preferred, the respective aldehyde together with his associated alcohol.
Bevorzugte Hilfsmittel setzen direkt oder indirekt frei und/oder enthalten:
Formaldehyd/Methanol, Acetaldehyd/Ethanol, n-Propionaldehyd/n-Propanol,
n-Butyraldehyd/n-Butanol, iso-Butyraldehyd/iso-Butanol, n-Valeraldehyd/n-Pen
tanol oder Gemische dieser Verbindungen. Das Stoffpaar Acetaldehyd/Etha
nol ist in der erforderlichen Konzentration und Menge praktisch ungiftig;
man kann es in geeignet hohen Dosen verabreichen. Daraus resultiert die
Möglichkeit einer Dauerbehandlung, auch in Kombination mit einer Strahlen
behandlung. Das immunbiologische System wird positiv beeinflußt, und eine
Kombination mit anderen Medikamenten sowie mit chirurgischen und radio
logischen Maßnahmen ist möglich.
Preferred tools release, directly or indirectly, and / or contain:
Formaldehyde / methanol, acetaldehyde / ethanol, n-propionaldehyde / n-propanol, n-butyraldehyde / n-butanol, iso-butyraldehyde / iso-butanol, n-valeraldehyde / n-Pen tanol or mixtures of these compounds. The substance pair acetaldehyde / Etha nol is practically non-toxic in the required concentration and amount; you can administer it in appropriately high doses. This results in the possibility of a long-term treatment, also in combination with a radiation treatment. The immunobiological system is positively influenced, and a combination with other drugs as well as with surgical and radio logical measures is possible.
Außer dieser Mischung Ethanol/Acetaldehyd sind grundsätzlich auch andere analoge Mischungen der oben genannten Art möglich. Methanol wird im mensch lichen Körper wesentlich langsamer abgebaut als Ethanol, Propanol um den Faktor 2 schneller als Ethanol. Das Mittel kann jeweils nur einen bestimmten ausgewählten. Aldehyd wie auch Aldehydmischungen enthalten. Die Anwendung der Aldehyde ist nicht zwingend mit der Anwesenheit der entsprechenden Alkohole gekoppelt. Auch wäßrige Lösungen der Aldehyde können eingesetzt werden. Anstelle der freien Aldehyde können erfindungsgemäß auch solche Aldehydderivate zum Einsatz kommen, die im Stoffwechsel des mit dem erfin dungsgemäßen pharmazeutischen Mittel Behandelten den freien Aldehyd bilden. Geeignete Aldehydderivate sind beispielsweise die Acetale oder Halbacetale Kondensationsprodukte, die ebenfalls als solche oder in gelöster Form (Wasser oder Alkohole) wie auch in Mischungen mit den Aldehyden und/oder Alkoholen Verwendung finden können. In einer bevorzugten weiteren erfindungs gemäßen Ausführungsform enthält das Hilfsmittel geringe Mengen (weniger als 0,05 Gew.-%) an Peroxiden, wobei insbesondere die hier stofflich verwandten Peroxide in Betracht kommen, insbesondere H₂O₂ und/oder das Aldehydperoxid bzw. Hydroxyhydroperoxid sowie das Peroxid der zugehörigen Carbonsäure. Durch den Gehalt an Peroxiden wird die antitumorale Wirkung noch weiter verbessert.Apart from this mixture ethanol / acetaldehyde are in principle also other analogous mixtures of the above type possible. Methanol is in man body degraded much slower than ethanol, propanol around the Factor 2 faster than ethanol. The agent can only be one specific each chosen. Aldehyde as well as aldehyde mixtures. The application the aldehydes is not necessarily associated with the presence of the corresponding Coupled alcohols. Also, aqueous solutions of aldehydes can be used become. Instead of the free aldehydes according to the invention, such Aldehyde derivatives are used, in the metabolism of the inventions Pharmaceutical agents treated according to the invention form the free aldehyde. Suitable aldehyde derivatives are, for example, the acetals or hemiacetals Condensation products, also as such or in dissolved form (Water or alcohols) as well as in mixtures with the aldehydes and / or Alcohols can be used. In a preferred further invention According to the embodiment, the auxiliary contains small amounts (less than 0.05 wt .-%) of peroxides, in particular the material related here Peroxides come into consideration, in particular H₂O₂ and / or the aldehyde peroxide or hydroxyhydroperoxide and the peroxide of the associated carboxylic acid. Due to the content of peroxides, the antitumoral effect is even further improved.
Die Konzentration des Aldehyds im erfindungsgemäßen Präparat ist einer seits durch dessen Verträglichkeit und andererseits durch die zu verab reichende Dosis bestimmt. Für das Paar Ethanol/Acetaldehyd ist eine Acet aldehydkonzentration im Alkohol unter 2 × 10-4 Mol/Liter häufig in der Wirkungs weise unbefriedigend langsam. Die Wirkung steigt mit steigender Aldehyd konzentration und ist nach oben hin in der Regel durch möglicherweise ein tretende Unverträglichkeit des Acetaldehyds im Einzelfall begrenzt. In der Praxis bewährt haben sich beispielsweise Ethanol-Aldehyd-Lösungen mit 5 × 10-2 Mol bis 1 Mol Acetaldehyd pro Liter Ethanol, wobei diese Mischungen in einer Dosis von beispielsweise 10 bis 150 cm³ pro Tag Verwendung finden können. Es ist bevorzugt, daß das Hilfsmittel 10 bis 60 g Aldehyd pro 1000 g Alkohol, besonders bevorzugt 40 g Aldehyd pro 1000 g Alkohol, enthält. Im allgemeinen wird das Hilfsmittel für die Verabreichung mit Wasser verdünnt. Die alkoholische Lösung kann mit Wasser beliebig verdünnt werden. Beispiels weise kann man ein Volumen der alkoholischen Lösung mit 1 bis 10 Volumen, vorzugsweise 2 bis 5 Volumen, Wasser verdünnen. The concentration of the aldehyde in the preparation according to the invention is determined on the one hand by its compatibility and on the other hand by the dose to be administered. For the pair of ethanol / acetaldehyde, an acetaldehyde concentration in the alcohol below 2 × 10 -4 mol / liter is often unsatisfactorily slow in effect. The effect increases with increasing concentration of aldehyde and is usually limited to the top by possibly a passing incompatibility of the acetaldehyde in each case. For example, ethanol-aldehyde solutions having 5 × 10 -2 mol to 1 mol of acetaldehyde per liter of ethanol have proven useful in practice, and these mixtures can be used at a dose of, for example, 10 to 150 cm 3 per day. It is preferred that the aid contains 10 to 60 g of aldehyde per 1000 g of alcohol, more preferably 40 g of aldehyde per 1000 g of alcohol. In general, the adjuvant for administration is diluted with water. The alcoholic solution can be diluted with water as desired. For example, it is possible to dilute a volume of the alcoholic solution having 1 to 10 volumes, preferably 2 to 5 volumes, of water.
Das Hilfsmittel wird bevorzugt oral in Form der wäßrigen Lösung verabreicht und vom Patienten getrunken. Das Hilfsmittel kann jedoch auch parenteral verabreicht werden.The adjuvant is preferably administered orally in the form of the aqueous solution and drunk by the patient. However, the aid may also be parenteral be administered.
In dem erfindungsgemäßen Erzeugnis bzw. Kit können die beiden Bestandteile jeweils auf unterschiedliche Weise kombiniert sein. Das Hilfsmittel kann in einer für die orale Verabreichung und/oder für die parenterale Verabreichung, zum Beispiel durch Infusion, geeignete Form vorliegen. Die Zubereitung von Infusionslösungen ist dem Fachmann geläufig und kann in an sich bekannter Weise erfolgen. Beispielsweise kann das Hilfsmittel in Form von Trinkam pullen vorliegen oder es kann in Form von Trinkampullen, die mit Wasser verdünnt werden, vorliegen.In the product or kit according to the invention, the two constituents be combined in different ways. The tool can be used in one for oral administration and / or for parenteral administration, For example, by infusion, suitable form. The preparation of Infusion solutions is familiar to the expert and can be known per se Done way. For example, the aid in the form of Trinkam or it may be in the form of drinking ampoules containing water be diluted present.
Für die Diagnose ist es bevorzugt, zuerst das Hilfsmittel oral als wäßrige Lösung und ca. 20 bis 30 Minuten später das Diagnostikum parenteral, bevor zugt intravenös, zu verabreichen.For diagnosis, it is preferable to first use the adjuvant as an aqueous Solution and about 20 to 30 minutes later the diagnostic agent parenteral before given intravenously, to be administered.
JOMOL® und seine Derivate (unter "JOMOL®-Derivaten" werden in der vorliegenden Anmeldung alle Kopplungsprodukte und markierten Produkte verstanden) dringen überraschenderweise leicht durch die Zellwände hindurch, insbesondere durch die Wände von Lungenalveolen, Lymph- und Blutkapillaren, und reichern sich an Krebszellen an, wo sie leicht nachgewiesen werden können. Dadurch werden eine neue Diagnostik und eine neuartige Behandlungsweise von malignen Tumoren ermöglicht, da das mit einem radioaktiven Marker markierte JOMOL® bzw. solche JOMOL®-Derivate unmittelbar zum malignen Tumor gelangen und dort zur Erkennung und Behandlung des Tumors die höchstmögliche Wirkung erbringen. Das erfindungsgemäße Diagnostikmittel kann zur Diagnostik von malignen Tumoren in vivo und vitro verwendet werden. Die malignen Tumoren können außerhalb des Körpers diagnostiziert werden. Beispielsweise kann der Chirurg bei einer Operation malignes Gewebe entfernen und dann das lebende Gewebe außerhalb des Organismus inkubieren, so daß im flachen Anschnitt des Ge webes, zum Beispiel bei Farbmarkierung mit Fluoresceinisothiocyanat im UV-Licht malignes Gewebe aufleuchtet und von dunklem gesundem Gewebe sofort unterschieden werden kann.JOMOL® and its derivatives (under "JOMOL® derivatives" are used in the present Registration all coupling products and marked products understood) penetrate surprisingly easily through the cell walls, in particular through the walls of lung alveoli, lymphatic and blood capillaries, and accumulate on cancer cells, where they can easily be detected. This will be a new diagnosis and a new type of treatment of malignant Tumors, since the labeled with a radioactive marker JOMOL® or such JOMOL® derivatives go directly to the malignant tumor and there to detect and treat the tumor most effectively. The diagnostic agent according to the invention can be used for the diagnosis of malignant Tumors are used in vivo and vitro. The malignant tumors can be diagnosed outside the body. For example, the surgeon remove malignant tissue during surgery and then remove the living tissue Incubate outside the organism, so that in the flat section of Ge webs, for example in color coding with fluorescein isothiocyanate in UV light malignant tissue will light up and dark healthy tissue immediately can be distinguished.
Wenn JOMOL® bzw. eines seiner Derivate mit einem radioaktiven Strahler mar kiert ist, erfolgt die Sichtbarmachung der radioaktiven Verteilung unter Verwendung einer externen Gamma-Kamera. Dargestellt werden mit der externen Gamma-Kamera verschiedene Melanosarkome, Plattenepithelkarzinome und Adeno karzinome der weiblichen Brust. If JOMOL® or one of its derivatives mar with a radioactive emitter kiert, the visualization of the radioactive distribution takes place under Using an external gamma camera. Shown with the external Gamma camera different melanosarcomas, squamous cell carcinomas and adeno Carcinomas of the female breast.
Fluoresceinisothiocyanat oder 99mTechnetium bleiben an der Krebszellenwand an JOMOL® bzw. dessen Derivat gebunden und sind dort fluoreszenzmikroskopisch bzw. autoradiographisch nachweisbar. Beim Abbilden mit der Gamma-Kamera ist im Modell mit der SD-Ratte an Walker-Carcinosarkom 256 die Anbindungsrate der erfindungsgemäß beanspruchten Substanz unter gleichzeitigem Einsatz der Kombination (Cocktail) aus Ethanol/Acetaldehyd/Wasser 2,5- bis 8 mal höher als am gesunden Gewebe (im Seitenvergleich). Beim Menschen ist das Anbindungs verhältnis höher. Da JOMOL® auf dem Blutwege im Körper verteilt wird und über Nieren, Leber und Lunge in Urin, Galle und abgeatmete Luft ausgeschieden wird, sind bei entsprechender Markierung des JOMOL® bzw. seiner Derivate mit radioaktiven Isotopen bei Darstellung mittels Gamma-Kamera außer Krebs und seinen Metastasen in Weichteilen und Knochen auch Funktions- bzw. Clearance- Untersuchungen bei diesen Passagen durchführbar.Fluorescein isothiocyanate or 99m technetium remain bound to JOMOL® or its derivative at the cancer cell wall, where they can be detected by fluorescence microscopy or autoradiography. When imaging with the gamma camera is in the model with the SD rat Walker Carcinosarkom 256, the attachment rate of the invention claimed substance with simultaneous use of the combination (cocktail) of ethanol / acetaldehyde / water 2.5 to 8 times higher than on healthy tissue (in comparison). In humans, the connection ratio is higher. Since JOMOL® is distributed in the bloodstream in the body and is excreted via the kidneys, liver and lungs in urine, bile and exhaled air, with appropriate labeling of JOMOL® or its derivatives with radioactive isotopes when displayed by gamma camera except cancer and its metastases in soft tissues and bones also functional and clearance studies in these passages feasible.
JOMOL® und seine Derivate sind praktisch untoxisch. Im Screening nach Robert A. Turner fanden sich für JOMOL®, JOMO®-tech, JOMO®-In und JOMO®-Color bei einer Überdosis der Humantagesdosis vom 4000- bis 5000fachen, d. h. in einer Menge von 2 mg/kg Körpergewicht, an SPF-Mäusen keine Abweichung von Normalbefunden. Die Verträglichkeit erscheint ausgezeichnet, unerwünschte Nebenwirkungen traten nicht auf.JOMOL® and its derivatives are virtually non-toxic. In the screening after Robert A. Turner found for JOMOL®, JOMO®-tech, JOMO®-In and JOMO®-Color in case of overdose of Human daily dose of 4000 to 5000 times, d. H. in an amount of 2 mg / kg Body weight, on SPF mice no deviation from normal findings. The tolerability appears excellent, unwanted side effects did not occur.
Um zu zeigen, daß JOMOL® und seine Derivate an Karzinomzellen besonders leicht gebunden werden, wurden Vergleichsversuche durchgeführt. Es wurde das Bindungsverhalten der radioaktiven Komponenten JOMOL®-DTPA-¹¹In, JOMOL®-CE-²²⁴Ra und JOMOL®-Sn-99mTc an Karzinomzellen und an gesunden, Zellen in vitro geprüft. Als Karzinomzellen wurden embryonale Mäusezellen F9 und als gesunde Zellen Mäusefibroblasten L929 verwendet.In order to show that JOMOL® and its derivatives are particularly easily bound to carcinoma cells, comparative experiments were carried out. The binding behavior of the radioactive components JOMOL®-DTPA-1 In, JOMOL®-CE-22 Ra and JOMOL®-Sn- 99m Tc was tested on carcinoma cells and on healthy cells in vitro. The carcinoma cells used were mouse F9 embryonic cells and mouse fibroblasts L929 as healthy cells.
In einem weiteren Versuch wurde gezeigt, daß die Anbindung besonders ausge prägt ist, wenn vor der Verabreichung der radioaktiven Komponenten der er findungsgemäße Cocktail verabreicht wird.In a further experiment it was shown that the connection particularly out if, prior to administration of the radioactive components he is inventive cocktail is administered.
Für die Bewertung der Bindungsergebnisse ist es erheblich, daß das Volumen einer durchschnittlichen gesunden Fibroblastenzelle L929 etwa dreimal so groß ist wie das einer malignen F9-Zelle, die Oberfläche demzufolge zweimal so groß. Zudem ist das Verhältnis der Zellwand- und Adhäsionsmatrix zur Zelle bei den gesunden L929-Zellen deutlich größer als bei den malignen F9-Zellen.For the evaluation of binding results, it is significant that the volume an average healthy fibroblast cell L929 about three times as big like a malignant F9 cell, the surface is twice so big. In addition, the ratio of the cell wall and adhesion matrix to Cell is significantly larger in healthy L929 cells than in malignant ones F9 cells.
Das Ergebnis der Bindungsexperimente ist in der folgenden Tabelle 1 zu sammengefaßt. Summarisch kann festgestellt werden, daß die embryonalen Mäusekarzinomzellen F9 JOMOL®-DTPA-¹¹¹In, JOMOL®-CE-²²⁴Ra und JOMOL®-Sn-99mTc um einen Faktor von ca. 30 bis 60 besser binden. Es ist eine tendenzielle Steigerung des Bindungsverhältnisses durch Zusatz des Cocktails aus Alkohol und Acetaldehyd erkennbar.The result of the binding experiments is summarized in the following Table 1. In summary, it can be stated that the mouse embryonic carcinoma cells F9 JOMOL®-DTPA-111 In, JOMOL®-CE-222Ra and JOMOL®-Sn- 99m Tc bind better by a factor of about 30 to 60. There is a tendency to increase the binding ratio by adding the cocktail of alcohol and acetaldehyde recognizable.
Je drei weiblichen Sprague-Dawley-Ratten wurde 4 Tage nach subkutaner Transplantation von Walker-Carcinosarkom 256 0,8 ml einer JOMOL®-DTPA-¹¹¹In- Lösung bzw. einer JOMOL®-Sn-99mTc-Lösung appliziert. Die erste Lösung enthielt ca. 80 nmol/ml JOMOL®-DTPA-¹¹¹In in einer spezifischen Markierung von ca. 175 GBq/mmol. Die zweite Lösung enthielt ca. 68 nmol/ml. JOMOL®-Sn-99mTc in einer spezifischen Markierung von ca. 925 GBq/mmol. Allen Tieren wurde 30 Minuten vor i.v. Gabe des markierten JOMOLS® 1 ml Cocktail oral verabreicht (Cocktail: 22,5 ml physiologische Kochsalzlösung, 2,4 ml Ethanol, 0,26 ml Acetaldehyd). Die Tiere wurden 24 Stunden p.a. in Chloralhydrat-Narkose aus dorsaler Sicht szintigraphiert.Four days after subcutaneous transplantation of Walker's carcinosarcoma 256, 0.8 ml of a JOMOL®-DTPA-111 In solution or a JOMOL®-Sn- 99m Tc solution was applied to three female Sprague-Dawley rats. The first solution contained about 80 nmol / ml of JOMOL®-DTPA-111 In in a specific labeling of about 175 GBq / mmol. The second solution contained about 68 nmol / ml. JOMOL®-Sn- 99m Tc in a specific labeling of ca. 925 GBq / mmol. All animals were orally administered 1 ml of cocktail 30 minutes before iv administration of the labeled JOMOLS® (cocktail: 22.5 ml physiological saline, 2.4 ml ethanol, 0.26 ml acetaldehyde). The animals were scanned 24 hours a day in chloral hydrate anesthesia from a dorsal point of view.
Der Tumor war bei allen Tieren deutlich abgrenzbar. Die Tumormarkierung, angegeben als Quotient der spezifischen Anreicherung an Tumor und Muskelge webe ergab sich für JOMOL®-DTPA-¹¹¹In zwischen 4 : 1 bis 8 : 1, für JOMOL®-Sn-99mTc zwischen 4 : 1 bis 6 : 1. In weiteren Folgeexperimenten wurden recht häufig Bindungsverhältnisse bei 8 : 1, in Einzelfällen bis zu 36 : 1 gefunden.The tumor was clearly distinguishable in all animals. The tumor mark, expressed as the quotient of the specific accumulation of tumor and muscle tissue, was found to be between 4: 1 to 8: 1 for JOMOL®-DTPA-11¹In, and between 4: 1 to 6: 1 for JOMOL®-Sn- 99m Tc In subsequent experiments binding ratios were found quite frequently at 8: 1, in individual cases up to 36: 1.
Fünf weibliche Sprague-Dawley-Ratten wurden 4 Tage nach subkutaner Trans plantation von Walker-Carcinosarkom 256 in die rechte Seitenflanke jeweils 0,5 ml einer JOMOL®-Sn-99mTc-Lösung in die Schwanzvene injiziert. Die Lösung enthielt 25 nmol/ml JOMOL®-Sn-99mTc in einer spezifischen Markierung von 925 GBq/mmol. 30 Minuten vor Applikation wurde den Tieren 2,5 ml Cocktail oral verabreicht (Cocktail: 22,5 ml physiologische Kochsalzlösung, 2,4 ml Ethanol, 0,26 ml Acetaldehyd). Zwei der Tiere ergaben im Scintigramm ein Anbindungsverhältnis (spezifische Anreicherung im Tumor zu spezifischer Anreicherung im Muskelgewebe) von 6 : 1 bei einem mittleren Tumorgewicht von ca. 1,5 g.Five female Sprague-Dawley rats were injected with 0.5 ml of JOMOL®-Sn- 99m Tc solution into the tail vein four days after subcutaneous transplantation of Walker carcinosarcoma 256 into the right lateral flank. The solution contained 25 nmol / ml JOMOL®-Sn- 99m Tc in a specific labeling of 925 GBq / mmol. Thirty minutes before application, 2.5 ml of the cocktail was orally administered to the animals (cocktail: 22.5 ml physiological saline, 2.4 ml ethanol, 0.26 ml acetaldehyde). Two of the animals showed in the scintigram a connection ratio (specific accumulation in the tumor to specific accumulation in the muscle tissue) of 6: 1 with a mean tumor weight of about 1.5 g.
Scintigraphisch konnte der Tumor bereits 30 Minuten nach Applikation abge grenzt werden. Extrapoliert auf die Verhältnisse beim Menschen kann erwartet werden, daß hier eine Tumorscintigraphie bereits 3 Stunden nach Applikation möglich ist. Zur Ermittlung der Verteilung in den Organen wurden die Tiere eine Stunde nach Injektion dekapitiert und weitgehend entblutet. Die in Tabelle II aufgeführten Organe wurden entnommen und gewogen; die enthaltene Radioaktivität, wurde in einem Gamma-Counter gemessen.Scintigraphically, the tumor was already 30 minutes after application abge be bordered. Extrapolated to the human conditions can be expected become, that here a tumor scintigraphy already 3 hours after application is possible. To determine the distribution in the organs were the animals Decapitated one hour after injection and largely bled. In the The organs listed in Table II were removed and weighed; the included Radioactivity was measured in a gamma counter.
Die folgende Tabelle II zeigt die Verteilung der Radioaktivität eine Stunde nach Applikation.The following Table II shows the distribution of radioactivity for one hour after application.
Ein nicht unbeträchtlicher Anteil der Radioaktivität wurde innerhalb einer Stunde renal ausgeschieden; die geschätzte Clearance beträgt 0,5 ml/min. A not inconsiderable proportion of the radioactivity was within a Hour renally excreted; the estimated clearance is 0.5 ml / min.
c) Am Menschen wurden verschiedene maligne Tumoren dargestellt. Mit Hilfe einer Gamma-Kamera wurden 3 Stunden nach intravenöser Gabe von JOMO®-tech (740 MBq99mTc) bzw. JOMO®-In (74 bis 111 MBq¹¹¹Indium)) in den meisten Fällen wurde eine halbe Stunde zuvor eine Dosis Cocktail - 24 ml Ethanol, 1 ml Acetaldehyd, 225 ml Wasser - oral verabreicht) die Tumoren abgebildet. Am Ort der Tumorabbildung wurde mit an deren Untersuchungen (zum Beispiel histologisch) der Tumor verifiziert. Das Ver hältnis Tumorareal/Nichttumorareal lag hinsichtlich der durch die Gamma-Kamera detektierten Strahlung über 10 : 1, in der Leber über 8 : 1.c) Various malignant tumors were presented in humans. With the aid of a gamma camera, 3 hours after intravenous administration of JOMO®-tech (740 MBq 99m Tc) or JOMO®-In (74 to 111 MBq¹¹¹¹Indium)), in most cases half an hour before a dose of cocktail - 24 ml of ethanol, 1 ml of acetaldehyde, 225 ml of water - orally administered) the tumors imaged. At the site of tumor imaging, the tumor was verified with other examinations (for example histologically). The tumor area / non-tumor area ratio was more than 10: 1 with respect to the radiation detected by the gamma camera, and 8: 1 in the liver.
Aus Versuchen mit Fitc-markierten Lymphozyten ist bekannt, daß diese in vivo in wenigen Stunden phagozytiert werden. Segmentkernige Leukozyten (Granulozyten) be sitzen proteolytische Enzyme und Lysozym. Das Lysozym dient zur Spaltung von Murein in Bakterien.Experiments with Fitc-labeled lymphocytes are known to be in vivo in vivo phagocytosed within a few hours. Segmented nuclear leukocytes (granulocytes) be sit proteolytic enzymes and lysozyme. The lysozyme serves to cleave Murein in bacteria.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß das durch Fitc "verfremdete" Murein bruchstück JOMO® (bei Cocktail-Gabe verstärkt) an Tumorzellen gebunden im Bereich der proteasenveränderten Zellwandmatrix Granulozyteninvasionen auslöst. Wenn Walker-Carcinosarkom 256-Ascites mit JOMOL®-Fitc, Ethanol/Acetaldehyd und p-Hydro xyphenil-ketopropionsäureantagonisten (die durch Konkurrenz an deren Rezeptoren wirken) oder tyrosinanaloge Moleküle und Monoaminooxidasehemmer in Sprague-Dawley- Ratten behandelt wird, so findet man nach 24 Stunden, beispielsweise nach Einsatz von JOMOL®-Fitc, Ethanol/Acetaldehyd und Cotrimoxazol im Punktat des Ascites eine sehr große Zahl von Leukozyten und eine subtotale regressive Veränderung der Ascitestumorzellen. Die Kontrollen zeigen vitale Tumorzellen und spärlich Leuko zyten. Beispiele für die obigen genannten tyrosinanalogen und Tyrosinabbauprodukt antagonisten sind Sulfamethoxazol und Isoniazid mit dem Monoaminooxidasehemmer Tranylcypromin. Dieser Effekt ist wie die selektiv auftretende Fluoresenz der Krebszellwände (fluoreszenz-)mikroskopisch bereits 10 bis 15 Minuten nach i.v.-Appli kation von JOMO®-Color festzustellen. Surprisingly, it has now been found that the Murein "alienated" by Fitc Fragment JOMO® (reinforced with cocktail) bound to tumor cells in the area the protease-altered cell wall matrix triggers granulocyte invasions. If Walker Carcinosarcoma 256 ascites with JOMOL® Fitc, ethanol / acetaldehyde, and p-hydro xyphenil-ketopropionic acid antagonists (those produced by competition at their receptors or tyrosine-analogous molecules and monoamine oxidase inhibitors in Sprague-Dawley's Rats is treated, it is found after 24 hours, for example, after use of JOMOL®-Fitc, ethanol / acetaldehyde and cotrimoxazole at the point of ascites one very large number of leukocytes and a subtotal regressive change in the Ascitestumorzellen. Controls show vital tumor cells and sparse leukemia cytes. Examples of the above-mentioned tyrosine analog and tyrosine degradation product antagonists are sulfamethoxazole and isoniazid with the monoamine oxidase inhibitor Tranylcypromine. This effect is like the selectively occurring fluorescence of the Cancer cell walls (fluorescence) microscopic already 10 to 15 minutes after i.v. Appli cation of JOMO®-Color.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.The following examples illustrate the invention.
Nocardia opaca (ATCC 21 953 DSM 202) werden auf DST-Platten oder Traubenzuckeragar, 2% in Plattentechnik auf drei bis vier Platten 5 bis 8 Tage kultiviert. Nach dem Abernten werden die Bakterien auf ca. 100 ml normale Nährbouillon verimpft und über Nacht bei 30 bis 37°C bebrütet.Nocardia opaca (ATCC 21 953 DSM 202) are grown on DST plates or dextrose agar, 2% in plate technique cultured on three to four plates for 5 to 8 days. After harvesting will be the bacteria are inoculated to about 100 ml normal nutrient broth and overnight incubated at 30 to 37 ° C.
Das Ernten der Nocardia-Bakterien erfolgt vorzugsweise durch Abzentrifu gieren, beispielsweise bei 4000 Umdrehungen/Minute, 5 bis 10 Minuten lang in einer Kühlzentrifuge mit einem Rotor von 40 cm Durchmesser. Der erhaltene Bodensatz (ca. 5 g Bakterien) wird in 100 ml beispielsweise 0,01M Tris/HCl-Puffer (pH 7,4), vorzugsweise mit EDTA-Na₂ (0,06%) suspendiert (Waschvorgang), wie oben angegeben, abzentrifugiert und in ca. 100 ml 0,01M Tris/HCl-Puffer von pH 7,4 mit vorzugsweise 0,06% EDTA-Na₂ und mit 10% Glucose suspendiert. Nach ca. 30 Minuten werden 10 mg Lysozym und vorzugsweise zur Herabsetzung der Viskosität 3 mg Desoxy ribonuclease zugesetzt.The harvesting of the Nocardia bacteria is preferably carried out by Abzentrifu For example, at 4000 rpm, for 5 to 10 minutes in a refrigerated centrifuge with a rotor of 40 cm diameter. The resulting sediment (about 5 g Bacteria) is dissolved in 100 ml, for example, 0.01 M Tris / HCl buffer (pH 7.4), preferably with EDTA-Na₂ (0.06%) suspended (washing), as above centrifuged and in about 100 ml 0.01M Tris / HCl buffer of pH 7.4 with preferably 0.06% EDTA-Na₂ and suspended with 10% glucose. After about 30 minutes, 10 mg lysozyme and preferably, for reducing the viscosity, 3 mg of deoxy Ribonuclease added.
Diese Phase mit Glucose und Fermenten dauert 2 Stunden und findet bei 30 bis 37°C statt. Dann kann, wie oben angegeben, abzentrifugiert werden. Der Bodensatz kann in 100 ml 0,01M Tris-HCl-Puffer mit 0,06% EDTA-Na₂ resuspen diert werden und erneut abzentrifugiert und im selben Medium resuspendiert werden. Dieser Waschvorgang kann unterbleiben, aber durch ihn wird mehr Wandmaterial der Bakterien und Nährmedium aus dem abschließend verwendeten Überstand entfernt.This phase with glucose and ferments lasts 2 hours and takes place at 30 to 37 ° C instead. Then, as stated above, can be centrifuged. The Lump can resuspended in 100 ml of 0.01M Tris-HCl buffer containing 0.06% EDTA-Na₂ be centrifuged again and resuspended in the same medium become. This washing process can be omitted, but through him is more Wall material of bacteria and nutrient medium from the final used Supernatant removed.
Danach werden die Zellen zerstört. Dies kann mit allen geeigneten Methoden geschehen, bevorzugt wird Ultraschall über 1 Minute.After that, the cells are destroyed. This can be done with any suitable methods done, ultrasound is preferred over 1 minute.
Danach wird bei 4 bis 6°C in der Kühlzentrifuge (wie oben beschrieben) bei 4000 Upm 10 bis 15 Minuten lang zentrifugiert. Das UV-Spektrum des Über standes ist in Fig. 1 dargestellt. Thereafter, it is centrifuged at 4 to 6 ° C in the refrigerated centrifuge (as described above) at 4000 rpm for 10 to 15 minutes. The UV spectrum of the supernatant is shown in Fig. 1.
Der Überstand wird vorzugsweise in fünf Teile geteilt und auf fünf vorbe reitete Sephadex®-G-75-Säulen zu je einem Teil gegeben. Die Säulen sind 80 cm lang, Innendurchmesser 2,5 cm, die Sephadex®-Füllhöhe beträgt 60 cm (UV-Detektion bei 214 nm). Bei Verwendung einer Säule werden die übrigen Portionen bei -25°C bis zur Verwendung eingefroren. Die Fraktion hat ca. 4500 bis 900 Dalton. Sie tritt beim Eluieren zum Beispiel mit 0,01M Tris- HCl-Puffer (pH 7,4), mit 0,06% ETDA-Na₂ bei ca. 900 bis 980 ml durch, bei einer Tropfgeschwindigkeit von etwa 2 Tropfen pro Sekunde (über Nacht) nach ca. 12 Stunden in 1 bis 2 Stunden. Diese Fraktion enthält die aktive Frak tion, d. h., das gewünschte Produkt 2b*. Es folgt eine Lyophilisation. Danach wird vorzugsweise 1 Stunde bei 80°C inkubiert.The supernatant is preferably divided into five parts and preceded by five He used to place Sephadex® G-75 columns in separate sections. The pillars are 80 cm long, inner diameter 2.5 cm, the Sephadex® filling height is 60 cm (UV detection at 214 nm). When using a column, the remaining Portions frozen at -25 ° C until use. The fraction has approx. 4500 to 900 daltons. For example, it elutes with 0.01M Tris HCl buffer (pH 7.4), with 0.06% ETDA-Na₂ at about 900 to 980 ml by, at a drip rate of about 2 drops per second (overnight) about 12 hours in 1 to 2 hours. This fraction contains the active frak tion, d. h., the desired product 2b *. This is followed by lyophilization. After that is preferably incubated for 1 hour at 80 ° C.
Wenn nicht lyophilisiert wird, dann sind die verdünnten Lösungen bei -20°C, besser bei -40°C bzw. -80°C, eingefroren aufzubewahren. JOMOL® wird durch Umsetzung von Fraktion 2b* (angenommenes mittleres Molekulargewicht 4000) mit Acetaldehyd im molaren Verhältnis 2b*: Acetaldehyd wie 1 : 2 erhalten. Danach muß erneut lyophilisiert werden, gegebenenfalls (siehe oben) einge froren werden.If not lyophilized, then the diluted solutions are at -20 ° C, better kept at -40 ° C or -80 ° C, frozen. JOMOL® is going through Reaction of fraction 2b * (assumed average molecular weight 4000) with acetaldehyde in molar ratio 2b *: acetaldehyde as 1: 2. Thereafter, must be re-lyophilized, optionally (see above) to be frozen.
Die Ausbeute für ca. 5 g Bakterien beträgt ca. 50 mg reines Produkt, d. h.
JOMOL®. Das Produkt ist sehr hygroskopisch. Es besitzt die folgenden Eigen
schaften: Absorptionsmaximum im UV-Spektrum bei 282,5 nm. Die Substanz wurde
in Wasser gelöst, Referenz Wasser 1 cm Quarzküvetten;
apparente Molekulargewichte bei 4500, 3000 und 900; je nach Restwassergehalt
elfenbeinfarbig amorph-kristallin-flockig; pH-Wert von 5,5 (1 mg der Ver
bindung, gelöst in 1 ml Wasser); schwach positive, rosa Ninhydrin-Reaktion;
anfärbbar mit Orcin Ragens;
Peptidanteil: ca. 50%, bezogen auf amorphe Substanz (Proteintest
nach L. Thomas, J. Clin. Chem. Biochem., Bd. 19, 1981, Seite 203-208,
Coomassie Brilliant Blue G ₂₅₀R), folgende Rf-Werte
(Lösungsmittelangabe Volumen : Volumen)The yield for about 5 g of bacteria is about 50 mg of pure product, ie JOMOL®. The product is very hygroscopic. It has the following properties: absorption maximum in the UV spectrum at 282.5 nm. The substance was dissolved in water, reference water 1 cm quartz cuvettes; apparent molecular weights at 4500, 3000 and 900; depending on the residual water content, ivory-colored amorphous-crystalline fluffy; pH 5.5 (1 mg of compound dissolved in 1 ml of water); weakly positive, pink ninhydrin reaction; stainable with Orcin Ragens;
Peptide content: about 50%, based on amorphous substance (protein test according to L. Thomas, J. Clin. Chem. Biochem., 19, 1981, page 203-208, Coomassie Brilliant Blue G ₂₅₀R), the following R f values (Solvent Specification Volume: Volume)
Rf = 0,20 (Butanol : Eisessig : Wasser 4 : 1 : 1)
Rf = 0,45 (Benzol : Eisessig : Wasser 2 : 1 : 2)
Rf = 0,685 (Methanol : Eisessig : Wasser 4 : 1 : 1)
keine Wanderung (Chloroform : Methanol 96 : 4)
Rf = 0,54 (Chloroform : Methanol 1 : 1)R f = 0.20 (butanol: glacial acetic acid: water 4: 1: 1)
R f = 0.45 (benzene: glacial acetic acid: water 2: 1: 2)
R f = 0.685 (methanol: glacial acetic acid: water 4: 1: 1)
no migration (chloroform: methanol 96: 4)
R f = 0.54 (chloroform: methanol 1: 1)
Löslichkeit: schlecht löslich in unpolaren Lösungsmitteln, sehr gut löslich in polaren Lösungsmitteln; nachweisbare Bestandteile:Solubility: poorly soluble in non-polar solvents, very soluble in polar solvents; detectable components:
Struktur:
Peptidoglycanstruktur, deren Glycangerüst aus 3 bis 17 Disacchariden aus
N-Acetylglucosaminyl-N-Acetylmuramyl besteht.Structure:
Peptidoglycan structure whose glycane backbone consists of 3 to 17 disaccharides of N-acetylglucosaminyl-N-acetylmuramyl.
1000 ml Ethanol 96% und 40 g Acetaldehyd puriss. werden gemischt.1000 ml of ethanol 96% and 40 g of acetaldehyde puriss. be mixed.
Eine Wirkdosis sind 25 ml davon.An effective dose is 25 ml of it.
Applikationsanleitung:
25 ml des Cocktails werden mit 225 ml Wasser gemischt und oral verabreicht.
Die Tagesdosis beträgt 2 bis 3 Wirkdosen, auf ärztliche Anordnung kann
höher dosiert werden. Der Cocktail darf bei Verdacht auf Hirnmetastasen
nicht verabreicht werden.Application Instructions:
25 ml of the cocktail are mixed with 225 ml of water and administered orally. The daily dose is 2 to 3 effective doses, on a doctor's order can be dosed higher. The cocktail should not be administered if brain metastases are suspected.
-
a) Allgemeine Arbeitsbedingungen:
Unter Stickstoff bei 0 bis 10°C arbeiten, Lösungen vor Verwendung mit Stickstoff durchblasen, Reaktionsgefäße säuregewaschen verwenden.a) General working conditions:
Work under nitrogen at 0 to 10 ° C, purging solutions with nitrogen before use, using reaction vessels acid-washed. - b) 20 mg JOMOL® werden in 100 µl 1N HCl gelöst, dann wird die Lösung 10 bis 15 Minuten stehengelassen. Danach wird 1 mg SnCl₂ × 2H₂O (fest) zugegeben und das Reaktionsgemisch ca. 20 Minuten stehengelassen. Es werden 2 ml einer 0,1N HCl, physiologischen Kochsalzlösung (0 bis 1°C) zugegeben.b) 20 mg of JOMOL® are dissolved in 100 μl of 1N HCl, then the solution becomes 10 to 15 Minutes left. Thereafter, 1 mg SnCl₂ × 2H₂O (solid) is added and The reaction mixture allowed to stand for about 20 minutes. There will be 2 ml of one 0.1N HCl, physiological saline (0 to 1 ° C) was added.
Nach kräftigem Umschütteln werden je 20 µl der Lösung bei einer Stell flächentemperatur von -10 bis -20°C in vorgekühlte Durchstechflaschen eingefüllt. Die Durchstechflaschen werden sofort zugedeckelt und bis zum Gebrauch gefroren (ca. -20°C) aufbewahrt.After vigorous shaking, each 20 ul of the solution in a Stell Area temperature from -10 to -20 ° C in pre-cooled vials filled. The vials are capped immediately and until the Use frozen (about -20 ° C) kept.
Zur Markierung mit 99mTechnetium wird in die gefrorene Durchstechflasche (Beispiel 3) 740 bis 3700 MBq99mTc in einem Volumen bis zu 5 ml zugegeben (aus einem 99mMolybdängenerator. Vor zugsweise wird das zweite Eluat des Präparationstages verwendet. Nach 10 bis 15 Minuten bei Raumtemperatur (volles Licht vermeiden) ist das Präparat zur i.v.-Injektion für einen diagnostischen Test mit der Gammakamera ver wendbar. For labeling with 99m technetium, add 740 to 3700 MBq of 99m Tc in a volume of up to 5 ml (from a 99m molybdenum generator) to the frozen vial (Example 3) Preferably, the second eluate of the preparation day is used after 10 to 15 minutes Room temperature (avoid full light), the IV injection preparation can be used with the gamma camera for a diagnostic test.
Dieses Kopplungsprodukt ist zur Beladung mit ¹¹¹Indium oder mit durch SnCl₂ reduziertem 99mPertechnetat geeignet.This coupling product is suitable for loading with ¹¹¹Indium or reduced by SnCl₂ 99m pertechnetate.
-
a) Allgemeine Arbeitsbedingungen:
Die Reaktionsgefäße werden mit Säure gewaschen verwendet, es wird bei 0 bis 10°C unter Stickstoff gearbeitet, die verwendeten Lösungen sind stickstoffdurchblasena) General working conditions:
The reaction vessels are used washed with acid, it is carried out at 0 to 10 ° C under nitrogen, the solutions used are nitrogen blown through - b) 5 mg Diethylentriaminpentaessigsäure-Anhydrid werden in 5 ml absolutem Diethylether suspendiert (diese Suspension wird als S1 bezeichnet).b) 5 mg of diethylenetriaminepentaacetic acid anhydride are dissolved in 5 ml of absolute Diethyl ether suspended (this suspension is referred to as S1).
-
c) Ca. 200 µg JOMOL® werden in 300 µl Bicarbonatpuffer (0,05M, pH 7,0) in
physiologischer Kochsalzlösung gelöst. Unter starkem Rütteln (Mixer, 30
bis 60 Sekunden) werden 25 µl der Suspension S 1 zugegeben und dann wird
1 Stunde bei 37°C inkubiert. Der Ether dunstet hierbei ab.
Es folgt eine Chromatographie:
FPLC-Chromatographie:
Säule: Superose 12, HR 10/30, Code-Nr. 17-0538-01.
Aufgetragenes Volumen: ca. 300 µl
Laufmittel: physiologische Kochsalzlösung
Flußrate: 1 ml/min
Detektion: λ = 214 nm, HPLC-Pumpe.c) Approx. 200 μg of JOMOL® are dissolved in 300 μl of bicarbonate buffer (0.05M, pH 7.0) in physiological saline. With vigorous shaking (blender, 30 to 60 seconds) 25 .mu.l of the suspension S 1 are added and then incubated at 37 ° C for 1 hour. The ether evaporates.
This is followed by chromatography:
FPLC chromatography:
Column: Superose 12, HR 10/30, code no. 17-0538-01.
Applied volume: approx. 300 μl
Eluent: physiological saline
Flow rate: 1 ml / min
Detection: λ = 214 nm, HPLC pump.
In der Produktfraktion liegt JOMOL® vollständig als JOMOL®-DTPA vor. Die Bindung des DTPA an der Aminogruppe des Lysin des JOMOLS® ist stabil, andere Anbindungen hydrolysieren.In the product fraction JOMOL® is completely available as JOMOL®-DTPA. The Binding of the DTPA to the amino group of the lysine of JOMOLS® is stable, hydrolyze other connections.
Zu ca. 220 µg JOMOL®-Diethylentriaminpentaessigsäure (im folgenden als JOMOL-DTPA bezeichnet) in 3 ml 5 mM Bicarbonatpuffer (pH 7,0) in physio logischer Kochsalzlösung werden ca. 74 MBq ¹¹¹Indium in 0,2 ml 40 mM HCl zugegeben. Nach Umschütteln und 15 Minuten Abwarten bei Raumtemperatur ist die erhaltene Lösung für eine intravenöse Injektion (i.v.) verwendbar. Die Prüfung erfolgt mit der Gammakamera.To about 220 μg of JOMOL® diethylenetriaminepentaacetic acid (hereinafter referred to as JOMOL-DTPA) in 3 ml of 5 mM bicarbonate buffer (pH 7.0) in physio logical saline solution is about 74 MBq of 111 indium in 0.2 ml of 40 mM HCl added. After shaking and waiting 15 minutes at room temperature the solution obtained can be used for intravenous injection (i.v.). The test takes place with the gamma camera.
Das mit ¹¹¹In markierte JOMOL®-DTPA führt bei FPLC-Chromatographie (214 nm, 0,1M Phosphatpuffer) zu dem in der Fig. 3 gezeigten Elutionsmuster. Im Diagramm ist die Verteilung der Radioaktivität auf drei separierbare Frak tionen angegeben.The ¹¹¹¹¹I-labeled JOMOL® DTPA results in the elution pattern shown in FIG. 3 in FPLC chromatography (214 nm, 0.1 M phosphate buffer). In the diagram the distribution of the radioactivity is indicated on three separable fractions.
Zur Markierung mit 99mTechnetium wird zu 1 ml JOMOL-DTPA-Lösung (ca. 50 µg, gefroren) 100 µl einer salzsauren (0,1N HCl) 3 mM SnCl₂ × 2H₂O, physiologischen Kochsalzlösung gegeben und 10 Minuten abgewartet. Danach werden 740 bis 1850 MBq 99mTechnetium in einem Volumen bis zu 5 ml zugegeben (vom zweiten Eluat des Präparationstages). Nach 10 bis 15 Minuten ist das Präparat zur i.v.-Injektion zum Test an der Gammakamera verwendbar.For labeling with 99m Technetium is added to 1 ml of JOMOL-DTPA solution (about 50 micrograms, frozen) 100 .mu.l of a hydrochloric acid (0.1N HCl) 3 mM SnCl₂ × 2H₂O, physiological saline and waited 10 minutes. Thereafter, 740 to 1850 MBq of 99m technetium in a volume of up to 5 ml are added (from the second eluate of the preparation day). After 10 to 15 minutes, the preparation for iv injection is suitable for testing on the gamma camera.
Die Herstellung erfolgt analog der Anbindung von Diethylentriamin pentaessigsäure, wie in Beispiel 5 beschrieben. Es werden 30 µg Uridin-2′, 3′-dialdehyd in 10 µl getrocknetem Diethylether gelöst. Das erhaltene Produkt wird, wie in Bei spiel 5 beschrieben, chromatographiert.The preparation is analogous to the connection of diethylenetriamine pentaacetic acid, as described in Example 5. There are 30 μg uridine-2 ', 3'-dialdehyde dissolved in 10 ul of dried diethyl ether. The product obtained is, as in Bei game 5 described, chromatographed.
Die Herstellung des Kopplungsproduktes erfolgt auf gleiche Weise, wie in Beispiel 5 beschrieben, wobei α-Amino-β-[p-hydroxyphenyl]-propion aldehyd in einer Menge von 30 µg in 10 µl absolutem Diethylether ver wendet werden.The preparation of the coupling product is carried out in the same way as in Example 5, wherein α-amino-β- [p-hydroxyphenyl] propion aldehyde in an amount of 30 ug in 10 ul of absolute diethyl ether ver be used.
Die Anbindung von α-Amino-β-[p-hydroxyphenyl[p-hydroxyphenylether)]- proprionaldehyd erfolgt auf gleiche Weise wie in Beispiels beschrieben.The attachment of α-amino-β- [p-hydroxyphenyl [p-hydroxyphenyl ether]] - proprionaldehyde is carried out in the same manner as described in Example.
Das gemäß Beispiel 8a) hergestellte Kopplungsprodukt aus JOMOL und Uridin wird mit einem geeigneten Radionuclid nach dem für Uridin üblichen Verfahren von entsprechenden Laboratorien durchgeführt.The coupling product of JOMOL and uridine prepared according to Example 8a) is treated with a suitable radionuclide according to the procedure customary for uridine performed by appropriate laboratories.
Die gemäß den Beispielen 8b) und 8c) hergestellten Kopplungsprodukte und JOMO®-Color (vgl. Beispiel 12) werden in an sich bekannter Weise mit radioaktivem Jod markiert.The coupling products prepared according to Examples 8b) and 8c) and JOMO®-Color (see Example 12) are prepared in a manner known per se labeled with radioactive iodine.
Zu 200 µl einer wäßrigen Lösung von 1 mg JOMOL® gibt man 1 ml 0,2M Borat puffer (pH 8,0). Getrennt wird eine Lösung von einer Vorstufe des Kryptofix hergestellt. Die Vorstufe wird als CE bezeichnet.To 200 μl of an aqueous solution of 1 mg of JOMOL® is added 1 ml of 0.2M borate buffer (pH 8.0). A solution is separated from a preliminary stage of the Kryptofix manufactured. The precursor is called CE.
Kryptofix Vorstufe (=CE); Kryptofix 222 = 4,7,13,16,21,24-Hexaoxo-1,10- diazabicyclo[8.8.8]hexacosan.Cryptofix precursor (= CE); Kryptofix 222 = 4,7,13,16,21,24-hexaoxo-1,10- diazabicyclo [8.8.8] hexacosane.
Die Lösung hat eine Konzentration von 1 mg pro ml Ethanol. 240 µl der ethanolischen CE-Lösung werden zu der obigen JOMOL®-Lösung zuge geben. Zu dem Reaktionsgemisch gibt man 160 µl Cyanoborhydridlösung (1 mg/ml 0,2M Boratpuffer, pH 8,0). Das Reaktionsgemisch wird 20 Stunden bei 37°C inkubiert und kann dann direkt zur Anbindung von radioaktivem Marker verwendet werden.The solution has a concentration of 1 mg per ml of ethanol. 240 μl of the ethanolic CE solution are added to the above JOMOL® solution give. To the reaction mixture is added 160 ul Cyanoborhydridlösung (1 mg / ml 0.2M borate buffer, pH 8.0). The reaction mixture is 20 hours incubated at 37 ° C and can then directly for binding of radioactive Markers are used.
Nach der oben genannten Inkubation wird zum Reaktionsgemisch ²²⁴Radium als ²²⁴RaCl₂-Lösung bis 7.4 MBq gegeben und bei Raumtemperatur ca. 1 Stunde abgewartet. Die erhaltene Lösung wird auf eine SuperoseTH-FPLC-Säule gegeben. Als Laufmittel wird 50 mM Kaliumphosphatpuffer von pH 6,8 in physiologischer Kochsalzlösung, 1 ml/min verwendet. Detektion bei 214 nm, und Radioakti vitätsmonitoring. Das Reaktions produkt und freies JOMOL® weisen im wesentlichen das gleiche Spektrum auf. Die fraktionierte Entnahme erlaubt die Abtrennung der niedermolekularen Komponenten des Reaktionsgemisches. Das Produkt wird in 2 Peaks eluiert. Nach Austritt von ca. 80% der aufgetragenen Radioaktivität wird am 2. Peak eine Schulter erkennbar. Die dieser Schulter zuzuordnenden Fraktionen und die nachfolgenden werden verworfen. Diese enthalten unter anderem das Cyanoborhydrid. Da JOMOL®-CE-²²⁴Ra nicht nur an Krebszelloberflächen ange reichert wird, sondern auch, wie das immunstimulierende reine Immunmodulator molekül, in Monozyten, Makrophagen, Mikrophagen und Knochenmarksstammzellen geht, muß vor der Verabreichung von JOMOL®-CE-²²⁴Ra i.v. darauf geachtet werden, daß diese Zellen das Produkt nicht aufnehmen können. Eine Be schränkung der Aufnahme von JOMOL®-CE-²²⁴Ra in immunkompetente und Knochen marksstammzellen ist mit hohen Dosen Cortisol i.v./i.m. in dem dem Fachmann geläufigen Abstand vor der Gabe der Aktivität erforderlich, weitere Maß nahmen sind durch Hinzuziehen eines Immunologen ad hoc zu ergreifen. Bei Unterlassung droht eine Leukämie. Das Medikament sollte hauptsächlich vor oder auch nach Mikroaussaat von Tumorzellen durch Operation eingesetzt werden (nicht bei Non-Hodgkin-Tumoren). After the above-mentioned incubation, ²²⁴Radium is added to the reaction mixture as ²²⁴RaCl₂ solution to 7.4 MBq and allowed to stand at room temperature for about 1 hour. The resulting solution is placed on a Superose T H FPLC column. The eluent used is 50 mM potassium phosphate buffer of pH 6.8 in physiological saline, 1 ml / min. Detection at 214 nm, and radioactivity monitoring. The reaction product and free JOMOL® have essentially the same spectrum. The fractional removal allows the separation of the low molecular weight components of the reaction mixture. The product is eluted in 2 peaks. After leaving about 80% of the applied radioactivity, a shoulder becomes visible on the 2nd peak. The fractions attributable to this shoulder and the subsequent ones are discarded. These contain, among other things, the cyanoborohydride. Since JOMOL®-CE-²²⁴Ra is not only enriched in cancer cell surfaces, but also, as the immunostimulatory pure immunomodulatory molecule, monocytes, macrophages, microphages and bone marrow stem cells, care must be taken before administering JOMOL®-CE-²²⁴Ra iv that these cells can not take up the product. Restricting the uptake of JOMOL®-CE-²²⁴Ra into immunocompetent and bone marrow stem cells is necessary with high doses of cortisol iv / im at the distance known to those skilled in the art before the administration of the activity; additional measures should be taken ad hoc by consulting an immunologist , Failure to do so threatens a leukemia. The drug should be used primarily before or after microseeding of tumor cells by surgery (not for non-Hodgkin's tumors).
Arbeitsbedingungen: Raumtemperatur
Fluoresceinisothiocyanat in gesättigter Lösung in Ethanol 96%
JOMOL® 10 mg in 200 µl H₂O gelöst.Working conditions: room temperature
Fluorescein isothiocyanate in saturated solution in ethanol 96%
JOMOL® 10 mg dissolved in 200 ul H₂O.
JOMOL® und Fluoresceinisothiocyanat werden im molaren Verhältnis 1 : 5 zusammen gegeben und 30 Sekunden im Ultraschall gemischt. Dann ca. 10 Minuten ab warten und über eine Säule 30 cm × 0,6 cm, Säulenbett 15 cm Sephadex-G-75, Laufmittel physiologische Kochsalzlösung 0,5 ml/min, fraktionieren. Fraktion 2,5 bis 9 ml enthält JOMO®-Color. Die Säule ist vorher mit 2 Läufen mit je 5 mg JOMOL®-Fitc zu aequilibrieren. Die erhaltene Fraktion wird ent weder sofort bei -20°C eingefroren, oder je 300 µg JOMOL®-Fitc proportioniert und lyophilisiert, unter Stickstoff verschlossen und bis zum Gebrauch bei -20°C aufbewahrt.JOMOL® and fluorescein isothiocyanate are combined in a molar ratio of 1: 5 given and mixed for 30 seconds in the ultrasound. Then about 10 minutes from wait and about a column 30 cm × 0.6 cm, column bed 15 cm Sephadex G-75, Eluent physiological saline 0.5 ml / min, fractionate. Fraction 2.5 to 9 ml contains JOMO®-Color. The column is previously with 2 runs to equilibrate with 5 mg JOMOL®-Fitc. The resulting fraction is ent neither immediately frozen at -20 ° C, or proportioned per 300 μg JOMOL®-Fitc and lyophilized, sealed under nitrogen and until use -20 ° C stored.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (Ethanol 96%, 50 g/Acetaldehyd puriss., 2 g) 2 × 1 Dosis, Schraubdeckelflaschea) cocktail (ethanol 96%, 50 g / acetaldehyde puriss., 2 g) 2 × 1 dose, screw cap bottle
- b) JOMO®-tech (200 µg JOMOL-Sn 20 µg Trockensubstanz, enthaltend JOMOL + 10 µg SnCl₂ × 2H₂O in 0,1N HCl, physiologischer Kochsalzlösung), Durchstechflasche, gefroren bei -20°C. b) JOMO®-tech (200 μg JOMOL-Sn 20 μg dry matter, containing JOMOL + 10 micrograms SnCl₂ × 2H₂O in 0.1N HCl, physiological Saline), vial, frozen at -20 ° C.
-
Anwendungsanweisung:
zu a) Cocktail: (nicht bei Hirnmetastasen)
1 Dosis = 25 ml aus der Schraubdeckelflasche
Cocktail mit 225 ml Wasser verdünnen und oral verab reichen, 30 Minuten warten, dann
zu b) JOMO®-tech: 740 bis 1110 MBq99mTechnetium in physiologischer Kochsalzlösung (zweites Eluat des Präparationstages aus einem 99mMolybdängenerator), in einem Volumen bis zu 5 ml, werden in die gefrorene Durchstechflasche (b) gegeben mit einer Spritze, die man darauf stecken läßt. Die Durchstechflasche (b) wird mehrmals umge schüttelt, 10 bis 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen, dann wird intravenös injiziert.Application Instructions:
to a) Cocktail: (not for brain metastases)
1 dose = 25 ml from the screw cap bottle
Dilute cocktail with 225 ml of water and give orally, wait 30 minutes, then
to b) JOMO®-tech: 740 to 1110 MBq 99m Technetium in physiological saline (second eluate of the preparation day from a 99m molybdenum generator), in a volume up to 5 ml, are placed in the frozen vial (b) with a syringe containing you put it on it. The vial (b) is shaken several times, allowed to stand at room temperature for 10 to 15 minutes, then injected intravenously.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (siehe [1a])a) Cocktail (see [1a])
-
b) JOMO®-tech lyo (1350 µg JOMOL®-Sn 813 µg Trockensubstanz,
enthaltend JOMOL®+ 30 µg SnCl₂ × 2H₂O + 8 µg Na-Acetat + 45 µg
Bernsteinsäure + 670 µg Lactose), lyophilisiert, Durchstechflasche gefroren bei -20°C b) JOMO®-tech lyo (1350 μg JOMOL®-Sn 813 μg dry matter, containing JOMOL® + 30 μg SnCl₂ × 2H₂O + 8 μg Na-acetate + 45 μg
Succinic acid + 670 μg lactose), lyophilised, vial frozen at -20 ° C -
Anwendungsanweisung:
siehe (1) JOMO®-tech.Application Instructions:
See (1) JOMO®-tech.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (siehe [1a])a) Cocktail (see [1a])
- b) JOMO®-tech (siehe [1b])b) JOMO®-tech (see [1b])
-
c) Liposomen in physiologischer Kochsalzlösung:
physiologische Kochsalzlösung, 5 ml, Durchstechflasche, ent haltend Liposomen, 5 mg, bestehend aus Phosphatidylcholin:
Phosphatidylserin : Cholesterol im molaren Verhältnis 8 : 2 : 10 c) Liposomes in physiological saline:
saline solution, 5 ml, vial, containing liposomes, 5 mg, consisting of phosphatidylcholine:
Phosphatidylserine: Cholesterol in the molar ratio 8: 2: 10 -
Anwendungsanweisung:
zu a) Cocktail (siehe [1a])
zu b) JOMO®-tech (siehe [1b]). Anstelle der intravenösen Injektion wird in die Durchstechflasche (c) instilliert.
zu c) Inhalt von (b) und (c) wird zusammengebracht, umgeschüttelt und mit einem geschlossenen Inhalationssystem inhaliert.Application Instructions:
to a) cocktail (see [1a])
to b) JOMO®-tech (see [1b]). Instead of the intravenous injection, it is instilled into the vial (c).
c) The contents of (b) and (c) are brought together, shaken and inhaled with a closed inhalation system.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (siehe [1a])a) Cocktail (see [1a])
- b) JOMO®-In (200 µg JOMOL®, trocken, +20 µg DTPA = 220 µg JOMOL-DTPA in 3 ml physiologischer Kochsalzlösung, 5 mM Na-Bicarbonatpuffer, pH 7,0), Durchstechflasche, gefroren bei -20°C. b) JOMO®-In (200 μg JOMOL®, dry, +20 μg DTPA = 220 μg JOMOL-DTPA in 3 ml of physiological saline, 5 mM Na bicarbonate buffer, pH 7.0), vial, frozen at -20 ° C.
-
Anwendungsanweisung:
zu a) Cocktail (siehe [1a])
zu b) JOMO®-In auftauen und 74 bis 111 MBq ¹¹¹Indium in 0,2 bis 0,3 ml 40 mM HCl zugeben (InCl₃). Nach Umschütteln und 15 Minuten Ab warten bei Raumtemperatur ist die erhaltene Lösung für eine intra venöse Injektion zum Test an der Gammakamera verwendbar.Application Instructions:
to a) cocktail (see [1a])
to b) thaw JOMO®-In and add 74 to 111 MBq of 111 indium in 0.2 to 0.3 ml of 40 mM HCl (InCl₃). After shaking and waiting for 15 minutes at room temperature, the resulting solution for intravenous injection is suitable for testing on the gamma camera.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (siehe [1a])a) Cocktail (see [1a])
- b) JOMO®-J, markiert mit ¹³¹Jod (ca. 250 µg JOMOL 25 µg JOMOL- Trockensubstanz + 37 MBq ¹³¹Jod) in 1 bis 2 ml PBS, 25 mM, 0,05N Essigsäure, Durchstechflasche, gefroren bei -20°C. b) JOMO®-J labeled with ¹³¹Jod (about 250 μg JOMOL 25 μg JOMOL Dry matter + 37 MBq ¹³¹Jod) in 1 to 2 ml PBS, 25 mM, 0.05N Acetic acid, vial, frozen at -20 ° C.
-
Anwendungsanweisung:
zu a) Cocktail (siehe [1a])
zu b) JOMO®-J, markiert mit ¹³¹Jod) auftauen und intravenös injizieren, danach erfolgt der Test an der Gammakamera.Application Instructions:
to a) cocktail (see [1a])
to b) thaw JOMO®-J labeled with ¹¹³ iodine and inject intravenously, followed by testing on the gamma camera.
Eine Blockierung der Schilddrüse mit Natiumperchlorat wird empfohlen. Zur Therapie werden auf Anordnung des handelnden Arztes gegebenenfalls höhere Dosen eingesetzt.Blockage of the thyroid with sodium perchlorate is recommended. For therapy, if necessary, by order of the acting physician higher doses used.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (siehe [1])a) Cocktail (see [1])
- b) JOMOL®-CE-²²⁴Ra (ca. 30 µg JOMOL®-CE-Trockensubstanz, markiert mit 7.4 MBq ²²⁴Radium) in 2 ml PBS, 25 mM, Durchstechflasche, gefroren bei -20°C. b) JOMOL®-CE-²²⁴Ra (about 30 μg JOMOL® CE dry substance, labeled with 7.4 MBq²²⁴Radium) in 2 ml PBS, 25 mM, vial, frozen at -20 ° C.
-
Anwendungsanweisung:
zu a) Cocktail (siehe [1a])
zu b) JOMOL®-CE-²²⁴Ra:
Zwei Stunden vor der Behandlung mit JOMO-Ra 250 mg Cortisol i.v., dann Cocktail oral, dann (b) auftauen und intravenös oder intra tumoral applizieren.Application Instructions:
to a) cocktail (see [1a])
to b) JOMOL®-CE-²²⁴Ra:
Two hours before treatment with JOMO-Ra 250 mg Cortisol iv, then orally, then thaw (b) and apply intravenously or intra tumoral.
- Bestandteile:ingredients:
- a) Cocktail (siehe [1a])a) Cocktail (see [1a])
- b) JOMOL®-Fluoresceinisothiocyanat im molaren Verhältnis 1 : 5) aus 5 ml physiologischer Kochsalzlösung, lyophilisiert, Durchstech flasche, gefroren bei -20°C. b) JOMOL® fluorescein isothiocyanate in a molar ratio of 1: 5) from 5 ml of physiological saline, lyophilised, piercing bottle, frozen at -20 ° C.
-
Anwendungsanweisung:
zu a) Cocktail bei Anwendung zur Therapie (siehe [1a]); bei Anwendung zur intraoperativen Diagnostik werden 5 bis 10 ml des Cocktails zur Herstellung einer Infusionslösung, die 10 bis 30 Minuten vor der i.v.-Gabe von (b) verabreicht wird, benutzt.Application Instructions:
to a) cocktail when used for therapy (see [1a]); When used for intraoperative diagnosis, 5 to 10 ml of the cocktail is used to prepare an infusion solution, administered 10 to 30 minutes before iv administration of (b).
Es ist zu beachten, daß Morphin und seine Derivate durch den Cocktail in ihrer Wirkung 30- bis 40fach gesteigert werden.It should be noted that morphine and its derivatives through the cocktail be increased in their effect 30- to 40-fold.
zu b) JOMOL®-Fluoresceinisothiocyanat wird mit 5 ml H₂O (Ampuwa⌀) gelöst und intravenös verabreicht.to b) JOMOL® fluorescein isothiocyanate is dissolved with 5 ml H₂O (Ampuwa ⌀ ) and administered intravenously.
Zur intraoperativen Diagnostik 10 bis 20 Minuten p.a. von (b) ist eine UV-Leuchte erforderlich (siehe Augenheilkunde, Zahnheilkunde)For intraoperative diagnosis 10 to 20 minutes p.a. from (b) is one UV lamp required (see Ophthalmology, Dentistry)
-
Bestandteile:
Lyophilisat in Laborreinheitsgrad, nicht zur Anwendung in vivo. 300 µg Fluoresceinisothiocyanat-JOMOL®, 45 mg NaCl, Schraubdeckelflasche, gefroren bei -20°C. ingredients:
Laboratory grade lyophilisate, not for use in vivo. 300 μg fluorescein isothiocyanate-JOMOL®, 45 mg NaCl, screw cap bottle, frozen at -20 ° C. -
Anwendungsanweisung:
In die Schraubdeckelflasche werden 5 ml H₂O gegeben, die Gewebsprobe wird dazugegeben, 5 Minuten bei Raumtemperatur abgewartet, die Gewebs probe in physiologischer Kochsalzlösung gewaschen.Application Instructions:
In the screw cap bottle 5 ml H₂O are added, the tissue sample is added, 5 minutes at room temperature, the tissue sample is washed in physiological saline.
Im Anschnitt der Gewebsprobe zeigt sich im ultravioletten Licht mit der Lupe oder im Fluoreszenzmikroskop das Tumorgewebe hell, das gesunde Gewebe dunkel. Der OP-Präparationsrand zeigt durch zellzerstörungsbe dingte Proteasenfreisetzung ebenfalls Fluoreszenz.In the section of the tissue sample shows up in the ultraviolet light with the Magnifying glass or in the fluorescence microscope, the tumor tissue bright, the healthy Fabric dark. The surgical preparation margin shows by Zellzerstörungsbe protease release also gave fluorescence.
Claims (9)
- a) Züchtung von Nocardia opaca = Rhodococcus rhodo chrous (DSM 43 202 bzw. ATCC 21 953) auf einem Nährmedium,
- b) Gewinnung der Zellen,
- c) Suspendierung der Zellen in einem Puffer und 15 Minuten bis einige Stunden Stehenlassen der Sus pension,
- d) Behandlung der Suspension mit einem murolytischen Enzym,
- e) Zerstörung der Zellen,
- f) Trennung des erhaltenen Materials in Bodensatz und Überstand,
- g) Trennung des Überstands an Sephadex-Säulen unter Verwendung von Puffer als Eluierungsmittel,
- h) Gewinnung der aktiven Fraktionen, die im UV-Spektrum eine Absorption bei 214 nm zeigen,
- i) Umsetzung der aktiven Fraktionen mit Acetaldehyd in einem Molverhältnis von 1 mol aktiver Fraktion (angenommenes mittleres Molekulargewicht 4000) mit 1,8 bis 2,2 mol Acetaldehyd, gegebenenfalls gekoppelt mit einem Molekül, das einen radioaktiven Strahler und/oder einen Farbstoff binden kann, enthält und es zusammen mit einem Aldehyd der allgemeinen Formel I RCHO (I)worin R ein Wasserstoffatom und eine geradkettige oder verzweigte Kohlenwasserstoffgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoff atomen bedeutet, wobei der freie Aldehyd auch direkt oder indirekt von Stoffen metabolisch freigesetzt werden kann, und gegebenenfalls einem Alkohol der allgemeinen Formel IIR¹CH₂OH (II)worin R die oben für R angegebene Bedeutung besitzt, sowie gegebenenfalls üblichen pharmazeutisch annehmbaren Träger stoffen und/oder Verdünnungsmitteln verwendet wird.
- a) cultivation of Nocardia opaca = Rhodococcus rhodo chrous (DSM 43 202 or ATCC 21 953) on a nutrient medium,
- b) obtaining the cells,
- c) suspending the cells in a buffer and allowing them to stand for 15 minutes to a few hours,
- d) treatment of the suspension with a murolytic enzyme,
- e) destruction of cells,
- f) separation of the material obtained in sediment and supernatant,
- g) separation of the supernatant on Sephadex columns using buffer as eluent,
- h) recovery of the active fractions showing absorption at 214 nm in the UV spectrum,
- i) reacting the active fractions with acetaldehyde in a molar ratio of 1 mol of active fraction (assumed MW 4000) with 1.8 to 2.2 moles of acetaldehyde, optionally coupled with a molecule capable of binding a radioactive source and / or dye and containing it together with an aldehyde of the general formula I RCHO (I) where R is a hydrogen atom and a straight-chain or branched hydrocarbon group having 1 to 4 carbon atoms, wherein the free aldehyde can also be metabolically released directly or indirectly from substances, and optionally an alcohol of the general formula IIR¹CH₂OH (II) wherein R has the meaning given above for R, and optionally customary pharmaceutically acceptable carriers and / or diluents is used.
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Citations (4)
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DE3402312A1 (en) * | 1984-01-24 | 1985-07-25 | Udo Dr. 8400 Regensburg Ehrenfeld | Composition for the diagnosis and therapy of malignant tumours and for the therapy of impairment of cellular and humoral immune defences |
DE3510795A1 (en) * | 1985-03-25 | 1986-09-25 | Udo Dr.med. 8400 Regensburg Ehrenfeld | MICROBIAL EXTRACT (JOMOL), ITS PRODUCTION AND USE AS A DIAGNOSTIC AND MEDICINAL PRODUCT. DERIVATIVES OF JOMOL |
-
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3334751A1 (en) * | 1983-09-26 | 1985-04-11 | Udo Dr. 8400 Regensburg Ehrenfeld | Composition for the diagnosis and therapy of malignant tumours, a process for its preparation and its use, and the use of loaded liposomes for the diagnosis and therapy of malignant tumours |
DE3336583A1 (en) * | 1983-09-26 | 1985-04-25 | Udo Dr. 8400 Regensburg Ehrenfeld | PRODUCT FOR DIAGNOSIS AND THERAPY OF MALIGNAL TUMORS |
DE3402312A1 (en) * | 1984-01-24 | 1985-07-25 | Udo Dr. 8400 Regensburg Ehrenfeld | Composition for the diagnosis and therapy of malignant tumours and for the therapy of impairment of cellular and humoral immune defences |
DE3510795A1 (en) * | 1985-03-25 | 1986-09-25 | Udo Dr.med. 8400 Regensburg Ehrenfeld | MICROBIAL EXTRACT (JOMOL), ITS PRODUCTION AND USE AS A DIAGNOSTIC AND MEDICINAL PRODUCT. DERIVATIVES OF JOMOL |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MUANG, C.: Biochemistry, 15, 2362(1969) * |
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