DE3534983A1 - COMPLEX IMMOBILIZED BIOCATALYSTS AND THEIR PRODUCTION AND USE - Google Patents

COMPLEX IMMOBILIZED BIOCATALYSTS AND THEIR PRODUCTION AND USE

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DE3534983A1 DE19853534983 DE3534983A DE3534983A1 DE 3534983 A1 DE3534983 A1 DE 3534983A1 DE 19853534983 DE19853534983 DE 19853534983 DE 3534983 A DE3534983 A DE 3534983A DE 3534983 A1 DE3534983 A1 DE 3534983A1
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Description

Grundsätzlich ist die Immobilisierung von Biokatalysatoren seit langem bekannt und oft in der Fach- und Patentliteratur beschrieben. Unter Biokatalysatoren versteht man dabei sowohl einzelne Enzyme als auch Enzymkombinationen bis hin zu ganzen lebenden Zellen. Während zunächst immer nur Biokatalysatoren der gleichen Art, z. B. nur Enzyme eines Typs oder nur Mikroorganismen einer Art immobilisiert wurden, sind inzwischen auch sogenannte Coimmobilisierungen durchgeführt worden. Dabei entstehen Coimmobilisate, in denen die biokatalytischen Fähigkeiten eines Biokatalysators bis zum gewissen Grade durch die eines weiteren Biokatalysators ergänzt sind. Der grundsätzliche Vorteil solcher komplexer immobilisierter Biokatalysatoren ist ihre Einsetzbarkeit auch für komplizierte vielstufige Reaktionsfolgen. Verschiedenartige Biokatalysatoren können so zum Beispiel nach folgendem Schema einander zuarbeiten:Basically, the immobilization of biocatalysts known for a long time and often in the specialist and patent literature described. Biocatalysts mean both single enzymes as well as enzyme combinations up to whole living cells. While initially only biocatalysts the same type, e.g. B. only enzymes of one type or only microorganisms of a kind have been immobilized in the meantime so-called co-immobilizations have also been carried out. Here arise coimmobilisates in which the biocatalytic abilities of a biocatalyst to a certain extent through the of another biocatalyst are added. The basic one Advantage of such complex immobilized biocatalysts is their applicability even for complicated multi-stage Consequences of reaction. Different types of biocatalysts can work together for example according to the following scheme:

Auf diese Weise ist es möglich, ein Substrat, das unverändert für den Biokatalysator 2 nicht umsetzbar ist, in eine für diesen Biokatalysator 2 umsetzbare Form, die hier Produkt 1 heißt, zu bringen. Biokatalysator 1 katalysiert die Umwandlung des ursprünglichen Substrates in Produkt 1, das dann von Biokatalysator 2 zum gewünschten Endprodukt (Produkt 2) umgesetzt werden kann.In this way it is possible to make a substrate that is unchanged for the biocatalyst 2 is not feasible, in one for this biocatalyst 2 form, which is product 1 here means to bring. Biocatalyst 1 catalyzes the conversion of the original substrate in product 1, which is then from Biocatalyst 2 converted to the desired end product (product 2) can be.

Ein konkretes Beispiel ist die Umwandlung von Lactose zu Ethanol durch die klassische Brennereihefe der Art Saccharomyces cerevisiae. Diese Umwandlung ist mangels β-Galactosidase (=Lactase) der Brennereihefe nicht möglich. Sie wird aber dann möglich, wenn die Hefe mit ß-Galactosidase zu einem Coimmobilisat zusammengefaßt wird.A concrete example is the conversion of lactose to Ethanol from classic Saccharomyces distillery yeast cerevisiae. This conversion is due to a lack of β-galactosidase (= Lactase) of the distillery yeast not possible. But then it will possible if the yeast with ß-galactosidase to a coimmobilisate is summarized.

Die Co-Immobilisierung von ganzen lebenden Zellen und zusätzlichen Enzymen und damit die Herstellung komplexer immobilisierter Biokatalysatoren ist von B. Hägerdal und K. Mosbach vorgeschlagen worden (Eur. Pat. Nr. 00 34 609). Gemäß diesem Patent werden die Enzyme zunächst kovalent an polymeres Matrixmaterial gebunden und die Zellen anschließend in dieses Matrixmaterial mit angebundenen Enzymen eingehüllt. Dieses Verfahren hat jedoch beträchtliche Nachteile. Es verlangt, wie alle Methoden der kovalenten Bindung, relativ rauhe und damit enzyminaktivierende Prozeduren. Weiterhin ist die in die Matrix einzubringende Enzymmenge stark beschränkt, weil nur maximal soviele Enzymmoleküle gebunden werden können, wie reaktive Gruppen am Träger verfügbar sind. Ein weiterer Nachteil ist die durch die kovalente Bindung stark eingeschränkte Beweglichkeit der Enzyme innerhalb der Matrix.The co-immobilization of whole living cells and additional ones  Enzymes and thus the production of complex immobilized Biocatalysts are from B. Hägerdal and K. Mosbach have been proposed (Eur. Pat. No. 00 34 609). According to this The enzymes are first patented covalently on polymer Matrix material bound and then the cells in this Enveloped matrix material with attached enzymes. This However, the process has considerable disadvantages. It asks how all methods of covalent bonding, relatively rough and therefore enzyme inactivating procedures. Furthermore, that is in the matrix The amount of enzyme to be introduced is very limited because only maximally as many enzyme molecules can be bound as reactive groups on the support are available. Another disadvantage is the one that is severely restricted by the covalent bond Mobility of the enzymes within the matrix.

In dem von C. H. Boehringer Sohn, Ingelheim, gehaltenen Eur. Pat. Nr. 00 41 610 wird eine direkte Ankoppelung der Enzyme an Hefezellen vorgeschlagen. Bei dieser Methode wird die an die Hefezellen ankoppelbare Enzymmenge zwar wesentlich erhöht, weil auch eine Quervernetzung der Enzyme in dickerer Schicht um die Zellen herum vorgesehen ist. Die Methode ist jedoch nur mit relativ robusten Zellen, wie Hefezellen, zufriedenstellend durchführbar. Empfindlichere Zellarten werden inaktiviert. Zudem ist ein wesentlicher Nachteil dieser Coimmobilisierungsmethode, daß sie mit sehr kleinen Bakterienzellen nicht praktizierbar ist.In the Eur. Held by C. H. Boehringer Sohn, Ingelheim. Pat. No. 00 41 610 is a direct coupling of the enzymes Yeast cells suggested. With this method, the to the Although the amount of enzyme that can be coupled to yeast cells is significantly increased, because cross-linking of the enzymes in a thicker layer is provided around the cells. However, the method is only with relatively robust cells such as yeast cells, satisfactory feasible. More sensitive cell types are deactivated. Another major disadvantage of this co-immobilization method is that they have very small bacterial cells is not practicable.

Eine wesentlich größere Effektivität der in Coimmobilisate eingebundenen Enzyme könnte erreicht werden, wenn diese im Gegensatz zu den Verhältnissen in den beiden oben genannten Patenten innerhalb der Matrix frei beweglich wären. Grundsätzlich sind jedoch die polymeren Matrices zu grobmaschig, um molekulardispers verteilte Enzyme zurückzuhalten. Eine Verringerung der Maschenweite im Inneren der Matrix, wie es durch entsprechende Vernetzung möglich ist, hat den Nachteil, dann die freie Beweglichkeit der Enzyme dort einzuschränken. Eine weitere wünschenswerte Verbesserung zum Stand der Technik wäre die Vermeidung enzyminaktivierender Schritte.A much greater effectiveness of the in Coimmobilisate embedded enzymes could be achieved if these in the Contrary to the situation in the two above Patents would be freely movable within the matrix. Basically however, the polymeric matrices are too coarse-meshed to withhold molecularly dispersed enzymes. A decrease the mesh inside the matrix as it passes through appropriate networking is possible has the disadvantage then restrict the free mobility of the enzymes there. A  would be another desirable improvement to the prior art avoiding enzyme-inactivating steps.

Die der Erfindung zugrundeliegende Aufgabe war es, komplexe immobilisierte Biokatalysatoren zu schaffen, die die oben angeführten Nachteile nicht aufweisen. Es sollte eine große Maschenweite der die Biokatalysatoren einhüllenden Matrix in ihrem Inneren aufrechterhalten und dennoch eine Zurückhaltung molekulardispers verteilter Enzyme neben anderen Biokatalysatoren ermöglicht werden. Aktivitätseinbußen durch enzyminaktivierende oder zellabtötende Schritte sollten vermieden werden. Dies schien besonders schwierig, weil bisher bekannte Methoden, etwa der Membranumhüllung bei der Mikroverkapselung von Enzymen zu den besonders stark inaktivierenden Immobilisierungsmethoden zählen, bei denen nur wenige Prozent der eingesetzten Enzyme aktiv bleiben.The object underlying the invention was complex to create immobilized biocatalysts that match the above not have the disadvantages mentioned. It should be a big one Mesh size of the matrix enveloping the biocatalysts in maintain their interior and yet a reluctance molecularly dispersed distributed enzymes in addition to other biocatalysts be made possible. Loss of activity due to enzyme inactivating or cell killing steps should be avoided. This seemed particularly difficult because previously known methods such as the membrane envelope in the microencapsulation of Enzymes for the particularly strongly inactivating immobilization methods count in which only a few percent of used enzymes remain active.

Überraschend wurde nun gefunden, daß eine sehr enzym- und zellschonende Membranumhüllung von in polymere Matrices eingehüllten Biokatalysatoren möglich ist, wenn man einen dispergierbaren Membranhüllstoff mit zu dem Matrixmaterial entgegengesetzter Ladung mit diesem Matrixmaterial in Kontakt bringt. Die Matrix überzieht sich dann mit diesem Membranhüllstoff und verhindert das "Ausbluten" auch von molekulardispers verteilten Enzymen in der Matrix. Es entsteht ein erfindungsgemäßer komplexer Biokatalysator, der zumindest ein molekulardispers verteiltes Enzym neben mindestens einem weiteren Biokatalysator enthält. Der oder die weiteren Biokatalysatoren sind in einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ganze lebende Zellen, z. B. Bakterien, Hefen oder Schimmelpilze. Es können aber auch weitere molekulardispers verteilte oder durch Quervernetzung oder Trägerbindung vorimmobilisierte Biokatalysatoren sein.Surprisingly, it has now been found that a very enzyme and Cell-protecting membrane covering of enveloped in polymer matrices Biocatalysts is possible if you have a dispersible Membrane envelope with the opposite of the matrix material Brings charge into contact with this matrix material. The matrix then coats with this membrane covering and prevents "bleeding" even of molecularly dispersed ones Enzymes in the matrix. An inventive one is created complex biocatalyst that has at least one molecular disperse distributed enzyme in addition to at least one other biocatalyst contains. The other biocatalyst (s) are in a preferred embodiment of the invention whole living Cells, e.g. B. bacteria, yeasts or molds. It can but also other molecularly dispersed or cross-linked or carrier binding pre-immobilized biocatalysts be.

Abb. 1 veranschaulicht das erfindungsgemäße Coimmobilisat beispielhaft. Sie zeigt unter 1 den Matrixkern. 2 stellen molekulardisper verteilte Enzymmoleküle dar. 3 sind ganze lebende Mikroorganismen und 4 ist die Membranhülle. Fig. 1 illustrates the coimmobilisate according to the invention as an example. It shows the matrix core under 1 . 2 represent enzyme molecules which are distributed in a molecularly disparate manner. 3 are whole living microorganisms and 4 is the membrane shell.

Als besonders geeignete dispergierbare Membranhüllstoffe kommen Polymere auf Acrylat und Methacrylatbasis in Betracht. Ein geeignetes verestertes Acrylat-Methacrylat-Copolymer, das noch eine geringe Menge quaternärer Ammoniumgruppen enthält, ist zum Beispiel das unter dem Handelsnamen Eudragit von der Röhm Pharma GmbH, Darmstadt, vertriebene Produkt. Dieses Produkt hat in der in Wasser emulgierten Form positive Ladung. Die Dispersion dieses Materials kann durch Kochung unter leichtem Überdruck z. B. bei 121°C in Wasser, Puffer oder Salzlösung erfolgen.Coming as particularly suitable dispersible membrane envelopes Polymers based on acrylate and methacrylate. A suitable esterified acrylate-methacrylate copolymer that still contains a small amount of quaternary ammonium groups for example under the trade name Eudragit von der Röhm Pharma GmbH, Darmstadt, distributed product. This product has a positive charge in the form emulsified in water. The Dispersion of this material can be done by light cooking Overpressure z. B. at 121 ° C in water, buffer or saline respectively.

Als polymere Matrices kommen insbesondere Alginate, Pectinate und Carrageenane infrage, die mit geeigneten Ionen zur ionotropen Gelbildung gebracht werden können. Eine übliche Vorgehensweise ist dabei, die Matrix zunächst in einer wasserlöslichen Form mit den Biokatalysatoren zu vermischen und sie dann in die zur Gelbildung führende Salzlösung eintropfen zu lassen oder einzusprühen. Bei Alginat geschieht das z. B., indem wasserlösliches Natriumalginat in eine Calciumchloridlösung eingebracht wird.Alginates, pectinates in particular come as polymer matrices and carrageenans in question, with suitable ions for ionotropic Gel formation can be brought. A common practice is going to start the matrix in a water soluble Form to mix with the biocatalysts and them then drip into the saline solution leading to gel formation leave or spray. With alginate this happens e.g. B., by adding water-soluble sodium alginate to a calcium chloride solution is introduced.

In einer besonderen Ausführungsform der Erfindung wird Katalase, z. B. aus Rinderleber oder aus Aspergillus niger, als molekulardispers verteiltes Enzym eingesetzt. Zusammen mit lebenden aeroben Zellen hat ein solcher komplexer Biokatalysator den Vorteil, daß seine Sauerstoffversorgung über flüssiges Wasserstoffperoxid vorgenommen werden kann. Auf diese Weise wird Sauerstoff als limitierender Faktor vieler oxidativer Biokonversionen und aerober Fermentationen ausgeschaltet.In a special embodiment of the invention, catalase, e.g. B. from beef liver or from Aspergillus niger, as molecularly dispersed enzyme used. Along with living aerobic cells has such a complex biocatalyst the advantage that its oxygen supply via liquid Hydrogen peroxide can be made. To this Oxygen is thus becoming the limiting factor in many oxidative processes Bioconversions and aerobic fermentations switched off.

Durch die Konzentration des Matrixmaterials und der zur ionotropen Gelbildung verwendeten CaCl2-Konzentration sowie der eingesetzten Konzentration Acrylat-Methacrylat-Copolymer läßt sich die Dichtigkeit der Hüllmembran beeinflussen. Die Tabellen 1 und 2 zeigen den Einfluß der angewandten CaCl2-Konzentration und der Alginatkonzentration auf die Rückhaltung molekulardispers verteilter Katalase in gemäß dem Beispiel 1 hergestellten Präparaten. Dabei wurden 0,5% Acrylat-Methacrylat- Copolymer (Eudragit RL 100 von Röhm Pharma GmbH) eingesetzt.The tightness of the envelope membrane can be influenced by the concentration of the matrix material and the CaCl 2 concentration used for ionotropic gel formation and the concentration of acrylate-methacrylate copolymer used. Tables 1 and 2 show the influence of the CaCl 2 concentration and the alginate concentration used on the retention of molecularly disperse distributed catalase in preparations prepared according to Example 1. 0.5% acrylate-methacrylate copolymer (Eudragit RL 100 from Röhm Pharma GmbH) was used.

Tabelle 1. Katalase-Rückhaltung bei 3% Alginatkonzentration Table 1. Catalase retention at 3% alginate concentration

Tabelle 2. Katalase-Rückhaltung bei 0,05 molarer CaCl2-Lösung Table 2. Catalase retention with 0.05 molar CaCl 2 solution

Neben der bereits erwähnten Ergänzung der biokatalytischen Fähigkeiten eines Biokatalysators durch einen oder mehrere weitere Biokatalysatoren, kann Hauptzweck der erfindungsgemäßen Coimmobilisierung auch die Schaffung einer veränderten Mikroumgebung für einen oder mehrere der in der Matrix mit Membranhülle eingeschlossenen Biokatalysatoren sein. So kann z. B. durch eine Sauerstoff-freisetzende Reaktion eine O2- reiche Mikroumgebung für z. B. eine zweite, in derselben Matrix ablaufende Sauerstoff-verbrauchende Oxidationsreaktion geschaffen werden.In addition to the already mentioned supplementation of the biocatalytic capabilities of a biocatalyst by one or more other biocatalysts, the main purpose of the co-immobilization according to the invention can also be to create a changed microenvironment for one or more of the biocatalysts enclosed in the matrix with a membrane shell. So z. B. by an oxygen-releasing reaction an O 2 -rich microenvironment for z. B. a second oxygen-consuming oxidation reaction taking place in the same matrix.

Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfingung erläutern, ohne sie zu beschränken.The following examples are intended to explain the invention, without restricting them.

Beispiel 1example 1

Lebende Zellen des Bakteriums Gluconobacter oxydans subspecies suboxydans ATCC 621 H wurden in einem flüssigen Kulturmedium mit 5% Glucose und 3% Hefeextrakt 24 h in Schüttelkultur kultiviert. Durch Zentrifugieren wurden die Bakterien dann abgetrennt und zweimal gewaschen. Von den abzentrifugierten Bakterien wurde eine 1 g Trockensubstanz entsprechende Menge zusammen mit 9 mg gereinigter Katalase aus Aspergillus niger (158 Baker-Einheiten pro mg; Produkt von John & E. Sturge Ltd, Selby, GB) und 2,1 g Natriumalginat (Manugel DLB von Kelco AIL, Hamburg) auf 70 ml gelöst bzw. suspendiert. Diese Mischung wurde in eine gerührte Emulsion von 0,5% Acrylat- Methacrylat-Copolymer in 0,05 molarer Calciumchloridlösung eintropfen gelassen and 60 min darin belassen.Living cells of the bacterium Gluconobacter oxydans subspecies suboxydans ATCC 621 H were in a liquid culture medium with 5% glucose and 3% yeast extract for 24 h in shake culture cultured. The bacteria were then removed by centrifugation separated and washed twice. Of the centrifuged Bacteria became an amount corresponding to 1 g dry substance together with 9 mg of purified catalase from Aspergillus niger (158 Baker units per mg; product of John & E. Sturge Ltd, Selby, GB) and 2.1 g sodium alginate (Manugel DLB from Kelco AIL, Hamburg) dissolved or suspended to 70 ml. This mix was poured into a stirred emulsion of 0.5% acrylate Methacrylate copolymer in 0.05 molar calcium chloride solution Allow to drip in and leave in for 60 minutes.

Die Herstellung der Emulsion erfolgte durch Zugabe von 5 g Acrylat-Methacrylat-Copolymer (Handelsprodukt Eudragit RL 100 von der Röhm Pharma GmbH, Darmstadt) zu 95 ml dest. Wasser. In einem Autoklaven wurde 30 min bei 121°C erhitzt. Es resultierte eine Copolymer-in-Wasser-Emulsion, der 900 ml einer 0,055 molaren Calciumchloridlösung zugemischt wurden.The emulsion was prepared by adding 5 g Acrylate-methacrylate copolymer (commercial product Eudragit RL 100 from Röhm Pharma GmbH, Darmstadt) to 95 ml dist. Water. In an autoclave was heated at 121 ° C for 30 min. It resulted a copolymer-in-water emulsion containing 900 ml of a 0.055 molar calcium chloride solution were added.

Die Analyse der eingesetzten und der im komplexen immobilisierten Biokatalysator gebundenen Katalyse zeigte keine Aktivitätsabnahme bei der Immobilisierung. Weiterhin zeigte sich, daß die Hüllmembran nicht von der Katalase passiert wurde. Nach 24-stündiger Waschung waren noch 97% der ursprünglichen Katalaseaktivität in den komplexen immobilisierten Biokatalysatoren vorhanden. Im Vergleich dazu ohne Hüllmembran hergestellte Präparate zeigten einen Aktivitätsabfall innerhalb von 24-stündiger Aufbewahrung in Wasser durch Ausbluten auf unter 10% der Ausgangsaktivität.The analysis of the used and the immobilized in complex  Biocatalyst-bound catalysis showed no decrease in activity in immobilization. It also showed that the envelope membrane was not passed through by the catalase. After 24 hours of washing, 97% were still the original Catalase activity in the complex immobilized biocatalysts available. In comparison, manufactured without an envelope membrane Preparations showed a drop in activity within 24-hour storage in water by bleeding on under 10% of the initial activity.

Mit den komplexen immobilisierten Biokatalysatoren wurde unter Zugabe von Wasserstoffperoxid Gluconsäure hergestellt. Dabei war die Gluconsäure-Bildungsrate mehr als 5-fach höher als bei sehr leistungsfähiger konventioneller Belüftung.With the complex immobilized biocatalysts under Addition of hydrogen peroxide made gluconic acid. Here the gluconic acid formation rate was more than 5 times higher than in very powerful conventional ventilation.

Beispiel 2Example 2

1 g Natriumalginat (Manugel DJX von Alginate Industrie GmbH, Hamburg 11) wurden mit 35 ml dest Wasser gelöst und mit 10 g frischer Bäckerhefe und 0,2 g Hefelactase (Hydrolact S250 von John & E. Sturge Ltd., Selby, GB) verrührt. Die Mischung wurde durch einen Trichter mit engem Auslauf in 200 ml einer gerührten 0,05 molaren CaCl2-Lösung, die 0,5% Acrylat-Methacrylat- Copolymer in dispergierter Form enthielt, eintropfen gelassen. Es wurde noch 2 h lang aushärten gelassen.1 g of sodium alginate (Manugel DJX from Alginate Industrie GmbH, Hamburg 11) was dissolved with 35 ml of distilled water and mixed with 10 g of fresh baker's yeast and 0.2 g of yeast lactase (Hydrolact S250 from John & E. Sturge Ltd., Selby, GB) . The mixture was dripped through a narrow-flow funnel into 200 ml of a stirred 0.05 molar CaCl 2 solution containing 0.5% dispersed acrylate-methacrylate copolymer. It was left to harden for a further 2 hours.

Zur Prüfung der Gärfähigkeit des Coimmobilisates wurde dieses in 100 ml einer 8-%igen Lactoselösung überführt und die CO2- Entwicklung gemessen. Sie betrug 110 ml nach 1 h und 230 ml nach 2 h. Die starke CO2-Entwicklung zeigt die gute Gärfähigkeit des erfindungsgemäßen Coimmobilisates gegenüber Lactosesubstrat, das sonst von Bäckerhefe überhaupt nicht vergoren wird.To test the fermentability of the coimmobilisate, it was transferred to 100 ml of an 8% lactose solution and the CO 2 evolution was measured. It was 110 ml after 1 h and 230 ml after 2 h. The strong CO 2 development shows the good fermentability of the coimmobilisate according to the invention compared to lactose substrate, which is otherwise not fermented by baker's yeast.

Claims (14)

1. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren bestehend aus mindestens zwei verschiedenartigen, in einer polymeren Matrix eingehüllten Biokatalysatoren, von denen mindestens einer ein molekulardispers verteiltes Enzym ist, dadurch gekennzeichnet, daß die die Biokatalysatoren einschließende Matrix von einer semipermeablen Membran umhüllt ist, die das molekulardispers verteilte Enzym in der Matrix zurückhält.1. Complex immobilized biocatalysts consisting of at least two different types of biocatalysts encased in a polymeric matrix, at least one of which is a molecularly dispersed enzyme, characterized in that the matrix enclosing the biocatalysts is encased by a semipermeable membrane which contains the molecularly dispersed enzyme the matrix holds back. 2. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß neben mindestens einem molekulardispers verteilten Enzym lebende Zellen in dem komplexen Biokatalysator enthalten sind.2. Complex immobilized biocatalysts according to claim 1, characterized in that in addition to at least one molecular disperse distributed enzyme living cells in the complex biocatalyst are included. 3. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als molekulardispers verteiltes Enzym Katalase und als lebende Zellen aerobe Mikroorganismenzellen in der Membran-umschlossenen Matrix enthalten sind.3. Complex immobilized biocatalysts according to claim 2, characterized in that as a molecularly disperse Enzyme catalase and as living cells aerobic microorganism cells are contained in the membrane-enclosed matrix. 4. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als molekulardispers verteiltes Enzym ein hydrolytisches Enzym und als lebende Zellen gärfähige Mikroorganismen in der Membran-umschlossenen Matrix enthalten sind.4. Complex immobilized biocatalysts according to claim 2, characterized in that as a molecularly disperse Enzyme a hydrolytic enzyme and fermentable as living cells Microorganisms in the membrane-enclosed matrix are included. 5. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren nach einem der Ansprüche 1 bis 4 dadurch gekennzeichnet, daß die polymere Matrix anionischen Charakter und die umhüllende Membran kationischen Charakter hat.5. Complex immobilized biocatalysts according to one of the Claims 1 to 4, characterized in that the polymers Matrix anionic in character and the enveloping membrane cationic Has character. 6. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß die polymere Matrix aus Alginat, Pectinat oder Carrageenan besteht und in kugelige Form gebracht wurde. 6. Complex immobilized biocatalysts according to one of the Claims 1 to 5, characterized in that the polymers Matrix consists of alginate, pectinate or carrageenan and in spherical shape was brought.   7. Komplexe immobilisierte Biokatalysatoren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die semipermeable Membran aus einem Acrylat-Methacrylat-Copolymer besteht.7. Complex immobilized biocatalysts according to one of claims 1 to 6, characterized in that the semipermeable Membrane consists of an acrylate-methacrylate copolymer. 8. Verfahren zur Herstellung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens zwei verschiedenartige Biokatalysatoren, wovon mindestens einer ein molekulardispers verteiltes Enzym ist, mit einem zur ionotropen Gelbildung befähigten löslichen Polymer vermischt, in eine zur Gelbildung führende Salzlösung eingebracht wird, in der ein zur Membranbildung befähigtes Polymer dispergiert oder emulgiert ist.8. Process for producing complex immobilized Biocatalysts according to one or more of claims 1 to 7, characterized in that at least two different types Biocatalysts, at least one of which is a molecular disperse is distributed enzyme, with one for ionotropic gel formation qualified soluble polymer mixed in a for Gel formation leading saline solution is introduced in the polymer capable of membrane formation disperses or emulsifies is. 9. Verfahren zur Herstellung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens zwei verschiedenartige Biokatalysatoren, von denen mindestens einer ein molekulardispers verteiltes Enzym ist, mit einem zur ionotropen Gelbildung befähigten löslichen Polymer vermischt, in eine zur Gelbildung führende Salzlösung eingebracht und anschließend in eine Polymer-Wasser-Emulsion eines zur Membranbildung befähigten Polymers eingebracht wird.9. Process for the production of complex immobilized Biocatalysts according to one or more of claims 1 to 7, characterized in that at least two different types Biocatalysts, at least one of which is a molecular disperse is distributed enzyme, with one for ionotropic Gel-enabled capable polymer mixed, mixed in a for Introduced saline solution and then in a polymer-water emulsion capable of membrane formation Polymer is introduced. 10. Verfahren zur Herstellung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, daß das zur Membranbildung befähigte Polymer ein Acrylat- Methacrylat-Copolymer ist.10. Process for the production of complex immobilized Biocatalysts according to claim 8 or 9, characterized in that the polymer capable of membrane formation is an acrylate Is methacrylate copolymer. 11. Verfahren zur Herstellung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach einem der Ansprüche 8 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß Alginat, Carrageenan oder Pectinat als zur ionotropen Gelbildung befähigtes Polymer eingesetzt wird. 11. Process for producing complex immobilized Biocatalysts according to one of claims 8 to 10, characterized characterized in that alginate, carrageenan or pectinate as for polymer capable of ionotropic gel formation is used.   12. Verfahren zur Herstellung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach einem der Ansprüche 8 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß als Biokatalysatoren lösliche Katalase und aerobe Zellen eingesetzt werden.12. Process for the production of complex immobilized Biocatalysts according to one of claims 8 to 11, characterized characterized in that soluble biocatalysts catalase and aerobic cells are used. 13. Anwendung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in der Biotechnologie.13. Application of complex immobilized biocatalysts according to one of claims 1 to 7 in biotechnology. 14. Anwendung von komplexen immobilisierten Biokatalysatoren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß die Sauerstoffversorgung durch Zugabe von Wasserstoffperoxid erfolgt.14. Application of complex immobilized biocatalysts according to claim 13, characterized in that the oxygen supply by adding hydrogen peroxide.
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