DE3524426C1

DE3524426C1 - Process for the preparation of generally usable affinity adsorbents for the isolation of lectins

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Publication number: DE3524426C1
Application number: DE19853524426
Authority: DE
Inventors: Thomas Freier; Harold Prof. Dr. 8700 Würzburg Rüdiger
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1985-07-09
Filing date: 1985-07-09
Publication date: 1986-12-18

Abstract

A generally applicable process for the purification of lectins is indicated. The process comprises partial removal of sialic acid residues from mucin from pig stomach by a mild acid treatment, covalent bonding of the product obtained in this way to an insoluble matrix, and using this material as affinity adsorbent for purifying lectins.

Description

Beschreibung description

Die Erfindung betrifft ein universelles Verfahren zur Isolierung von Lectinen durch Affinitätschromatographie mit den Merkmalen der im Oberbegriff des Patentanspruchs 1 beschriebenen Gattung. The invention relates to a universal method for isolation of lectins by affinity chromatography with the features of the generic term of claim 1 described genus.

Allgemeines Unter Lectinen versteht man Proteine, die Bindungsstellen für Kohlenhydratstrukturen besitzen. Sie werden in der Regel durch einen Agglutinationstest qualitativ und quantitativ bestimmt, wobei in den meisten Fällen Erythrozyten als Testzellen verwendet werden. Im Gegensatz zu kohlenhydratbindenden menschlichen oder tierischen Antikörpern entstehen Lectine nicht auf einen antigenen Reiz hin, sondern sind konstitutiv, d. h. General Lectins are proteins, the binding sites for carbohydrate structures own. You will usually get an agglutination test determined qualitatively and quantitatively, with erythrocytes in most cases as Test cells are used. Unlike carbohydrate-binding human or animal antibodies, lectins do not arise in response to an antigenic stimulus, but are constitutive, i.e. H.

ständig vorhanden. Von kohlenhydratverarbeitenden Enzymen wie den Giycosidasen und den Glycosyltransferasen grenzt man Lectine dadurch ab, daß sie keine chemischen Veränderungen an den von ihnen gebundenen Kohlenhydraten ausüben.always present. From carbohydrate-processing enzymes like the Glycosidases and glycosyltransferases are differentiated from lectins by the fact that they do not cause chemical changes to the carbohydrates they bind.

Lectine können sehr verschiedenartige Kohlenhydrate binden; man kennt solche, die Gruppen verwandter Monosaccharide binden, andere weisen eine hohe Spezifität für nur ein Monosaccharid auf, wobei oft sogar zwischen a- und ß-Formen unterschieden werden, wiederum andere binden keine Monosaccharide, sondern nur Oligosaccharide komplexerer Zusammensetzungen, deren Struktur noch nicht in allen Fällen aufgeklärt ist. Lectins can bind a wide variety of carbohydrates; one knows those that bind groups of related monosaccharides, others show a high specificity for only one monosaccharide, often even distinguishing between a- and ß-forms others do not bind monosaccharides but only oligosaccharides more complex compositions, the structure of which has not yet been clarified in all cases is.

Lectine finden sich in der gesamten Biosphäre. Angefangen von den Bakterien, deren Oberflächen Lectine tragen, über niedrige und höhere Pflanzen bis hin zu Tieren und Menschen lassen sich Lectine nachweisen. Meist sind die gefundenen Mengen allerdings gering, besonders wenn es sich um oberflächen- oder membranständige Moleküle handelt. Der Schwerpunkt des Vorkommens von Lectinen sind die höheren Pflanzen, und hier wiederum die Samen der Leguminosen, die, sofern ein Lectin vorhanden ist, dieses in einer Menge von 0,1% bis zu 3% des Samengewichts enthalten. Wenn Lectine im Handel angeboten und praktisch angewendet werden, so handelt es sich fast durchweg um diese pflanzlichen Samenlectine. Lectins can be found throughout the biosphere. Starting with the Bacteria, the surfaces of which carry lectins, from lower and higher plants up to Lectins can be detected in animals and humans. Most of them are found However, the quantities are small, especially if they are surface or membrane-based Molecules. The main focus of the occurrence of lectins are the higher plants, and here again the seeds of the legumes, which, if a lectin is present, contain this in an amount of 0.1% up to 3% of the weight of the seed. When lectins are offered in the trade and used in practice, so it is almost always to these vegetable seed lectins.

Stand der Technik Verfahren zur Isolierung von Lectinen sind bekannt. Bei den meisten der bisher bekannten Verfahren bleibt die Isolierung der Lectine jedoch auf den Einzelfall beschränkt. Das bedeutet, daß man für jedes Lectin oder auch für jede Gruppe von Lectinen ähnlicher Zuckerspezifität ein eigenes Affinitätsmedium synthetisieren muß. State of the art Methods for isolating lectins are known. In most of the previously known methods, the isolation of the lectins remains however limited to the individual case. That means that for each lectin or also a separate affinity medium for each group of lectins of similar sugar specificity must synthesize.

Affinitätsmedien, für die der Anspruch auf Universalität erhoben wird, wurden entweder durch Immobilisierung von sehr teuren Glycoproteinen oder Glycopeptiden gewonnen, die eine vorherige aufwendige Präparation und Reinigung erfordern, oder durch Vernetzung von leichter zu gewinnenden Glycoproteinen. Gemeinsam ist allen bisher beschriebenen Methoden, daß sie verhältnismäßig ineffiziente lmmobilisierungsverfahren verwenden, wodurch die Kapazität der Affinitätsgele, die zudem meist nicht dokumentiert wird, sehr niedrig bleibt, und daß nur wenige Pflanzenspezies untersucht wurden. In der Arbeit von M.-F. Maylie-Pfenninger und J. D. Jamieson (J.Affinity media for which the claim to universality is made, were either by immobilizing very expensive glycoproteins or glycopeptides obtained that require extensive preparation and cleaning beforehand, or by crosslinking glycoproteins that are easier to obtain. Is common to all previously described methods that they are relatively inefficient immobilization procedures use, which increases the capacity of the affinity gels, which are also mostly not documented remains very low and that only a few plant species have been studied. In the work of M.-F. Maylie-Pfenninger and J. D. Jamieson (J.

Cell Biol., 80,69-76 [1979D wird die Reinigung von 9 Lectinen beschrieben. Die Autoren stellen aus Schweinemagen-Mucin durch Proteolyse mit Papain und nachfolgende Fällung mit Ethanol und Cetylpyridiniumchlorid (T. Pamer, G. B. J. Glass und MI. Horowitz, Biochemistry, 7,3821-3829 [1968J) Glycopeptide her. Die Ausbeute bei diesem Schritt liegt bei nur 1,5 g Glycopeptid-Gemisch pro 100 g Ausgangsmaterial. Das Glycopeptidgemisch wird dann an Sepharose 4B immobilisiert (Methode nach P. Cuatrecasas und C. B. Anfinsen, Methods Enzymol., 22345-378 [1971]) unter Verwendung von 600 mg des aggressiven und hochgiftigen Bromcyan pro ml Gel. Die Qualität der Säulenpackung scheint problematisch zu sein, da das Material nach jedem Lauf aus den Säulen entnommen, gewaschen und anschließend wieder eingefüllt wird. Über Kapazitäten der Gele sagt die Arbeit nichts aus, ebensowenig finden sich Reinheitskriterien der gewonnenen Präparate.Cell Biol., 80, 69-76 [1979D describes the purification of 9 lectins. The authors prepare from pig stomach mucin by proteolysis with papain and subsequent Precipitation with ethanol and cetylpyridinium chloride (T. Pamer, G. B. J. Glass and MI. Horowitz, Biochemistry, 7,3821-3829 [1968J) Glycopeptide. The yield on this Step is only 1.5 g of glycopeptide mixture per 100 g of starting material. That Glycopeptide mixture is then immobilized on Sepharose 4B (method according to P. Cuatrecasas and Anfinsen, C. B., Methods Enzymol., 22345-378 [1971]) using 600 mg of the aggressive and highly toxic cyanogen bromide per ml of gel. The quality of the column packing seems to be problematic as the material is removed from the columns after each run, washed and then refilled. About capacities of the gels says the work does nothing, just as there are no purity criteria of the won Preparations.

Der Erfindung liegt deshalb die Aufgabe zugrunde, ein einfaches und billiges Affinitätsadsorbens mit einer hohen Kapazität zur universellen Trennung von Lectinen bereitzustellen. Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch die in dem kennzeichnenden Teil des Patentanspruchs 1 angegebenen Merkmale gelöst. Vorteilhafte Weitcrbildungen sind in den Unteransprüchen 2-4 gekennzeichnct. The invention is therefore based on the object of a simple and cheap affinity adsorbent with a high capacity for universal separation of lectins to be provided. This object is achieved according to the invention by the features specified in the characterizing part of claim 1 solved. Advantageous further developments are characterized in subclaims 2-4.

Eigene Neuentwicklung Überraschenderweise wurde gefunden, daß durch die Verwendung des leicht zugänglichen und preiswerten Glycoproteingemisches Schweinemagen-Mucin (Preis 0,45 DM pro g) ein universell anwendbares Affinitätsgel hergestellt werden kann. Die einzige Vorbereitung dieses-Materials besteht in einer milden Säurebehandlung, die spezifisch terminale Sialinsäuren entfernt (L. Svennerholm, Acta Chem. Scand., 12, 547 - 554 [1968]), wodurch die Kapazität der damit hergestellten Gele auf das 2,2-2,7fache steigt. Die Immobilisierung wird mit Bromcyan nach einer neuen Methode (J. Kohn und M. Wilchek, Biochem. Biophys. Res. Commun., 107, 878-884 [1982]) durchgeführt. Es wird dabei mit nur 8-20 mg des Reagenzes pro ml Gel gearbeitet. Dabei erzielt man hohe Kapazitäten (je nach Pflanzenspezies zwischen 0,2 und 1,7 mg Lectin pro ml Gel). Als Matrix kann sowohl käufliche perlförmige Agarose (Sepharose 4B von Deutsche Pharmacia, Freiburg) als auch selbst hergestelltes mit Divinylsulfon vernetztes Dextran verwendet werden, mit dem man die Isolierung von Lectinen entweder an einer Säule oder auch im "batch"-Verfahren vornehmen kann. Own new development Surprisingly, it was found that through the use of the easily accessible and inexpensive glycoprotein mixture pig stomach-mucin (Price 0.45 DM per g) a universally applicable affinity gel can be produced can. The only preparation of this material is a mild acid treatment, which removes specifically terminal sialic acids (L. Svennerholm, Acta Chem. Scand., 12, 547 - 554 [1968]), whereby the capacity of the gels produced with it on the 2.2-2.7 fold increases. The immobilization is done with cyanogen bromide according to a new method (J. Kohn and M. Wilchek, Biochem. Biophys. Res. Commun., 107, 878-884 [1982]). Only 8-20 mg of the reagent per ml of gel are used. Achieved thereby one has high capacities (depending on the plant species between 0.2 and 1.7 mg lectin per ml gel). Commercially available pearl-shaped agarose (Sepharose 4B from Deutsche Pharmacia, Freiburg) as well as self-made with divinyl sulfone Dextran can be used, with which one can isolate lectins at either one Column or in the "batch" process can make.

Nachfolgende Beispiele erläutern die Erfindung: a. Herstellung des Affinitätsadsorbens 1 Teil Mucin-Pulver wird mit 3 bis 5 Teilen 0,075 M Schwefelsäure mit einem Dispergierstab (Ultraturrax, IKA-Werk, Staufen) fein zerteilt, danach für 80 min unter Rühren in einem Wasserbad bei 90"C (Temperatur innerhalb des Gefäßes gemessen) gehalten. Danach wird auf Raumtemperatur abgekühlt, sofort mit 2 M NaOH auf pH 8,9 eingestellt und 20 min bei 18 000 Upm zentrifugiert. Der viskose Überstand wird abgegossen, der Niederschlag verworfen. Sepharose 4B wird, wie oben angegeben, nach Kohn und Wilchek mit BrCN aktiviert; pro ml Gel werden dann 0,3 bis 0,5 ml des Überstands aus der Desialylierung des Mucins, entsprechend 100-200 mg Ausgangsmaterial, dazugegeben. Unter Rühren wird 20-40 h bei 4"C inkubiert, danach mehrfach mit 0,05 M Tris/HCI-Puffer pH 8,0 gewaschen, in Säulen gefüllt und für die Chromatographie verwendet. The following examples explain the invention: a. Manufacture of the Affinity adsorbent 1 part mucin powder is mixed with 3 to 5 parts 0.075 M sulfuric acid Finely divided with a dispersion stick (Ultraturrax, IKA-Werk, Staufen), then for 80 min with stirring in a water bath at 90 "C (temperature inside the vessel measured) held. It is then cooled to room temperature, immediately with 2 M NaOH adjusted to pH 8.9 and centrifuged at 18,000 rpm for 20 min. The viscous supernatant is poured off, the precipitate discarded. Sepharose 4B is, as stated above, activated with BrCN according to Kohn and Wilchek; 0.3 to 0.5 ml are then per ml of gel the supernatant from the desialylation of the mucin, corresponding to 100-200 mg of starting material, added. The mixture is incubated for 20-40 hours at 4 ° C. with stirring, then several times at 0.05 Washed M Tris / HCl buffer pH 8.0, filled into columns and used for chromatography used.

b. Isolierungder Lectine 1 Teil Samen wird in destilliertem Wasser über Nacht quellen gelassen, bei größeren Samen wird die Samenhülle und das Endosperm entfernt, der Rest (Kotyledonen und Embryonen) werden mit einem Dispergierstab in 10 Teilen Puffer wie oben fein zerteilt. Einige Samen (Arachis h., Griffonia s., Robinia p.) werden in trockenem Zustand gemahlen und vor der Extraktion mit Methanol und Dichlormethan entfettet. Der Extrakt wird mit 1 M Eisessig auf pH 5,0 eingestellt, wodurch der größte Teil der Reserveproteine ausfällt, während die Leetine in Lösung bleiben. Bei einem Extrakt aus Lens culinaris wird bei pH 4 gefällt, bei einigen Samen (Caragana arborescens, Dolichos biflorus) wird wegen der schlechten Löslichkeit des Lectins bei schwach saurem pH-Wert auf die Säurefällung verzichtet. Die Wurzeln von Phytolacca americana werden zerhackt, mit 3 Teilen des Puffers extrahiert und ohne Säurefällung weiterverarbeitet. b. Isolation of the lectins 1 part of the seeds is dissolved in distilled water Allowed to swell overnight, with larger seeds the seed coat and the endosperm removed, the rest (cotyledons and embryos) are in 10 parts of buffer finely divided as above. Some seeds (Arachis h., Griffonia s., Robinia p.) Are ground in the dry state and before extraction with methanol and dichloromethane degreased. The extract is adjusted to pH 5.0 with 1 M glacial acetic acid, whereby most of the reserve proteins precipitate while the leetins are in solution stay. An extract from Lens culinaris is precipitated at pH 4, with some Seeds (Caragana arborescens, Dolichos biflorus) are used because of poor solubility of the lectin dispenses with acid precipitation at a weakly acidic pH value. The roots of Phytolacca americana are minced, extracted with 3 parts of the buffer and further processed without acid precipitation.

Die vorbereiteten Extrakte werden auf die Säulen aufgetragen, wobei in Vorversuchen die Kapazität für jedes Lectin bestimmt wurde, mit 0,05 M Tris/HC1 pH 8,0 so lange gewaschen, bis das Eluat proteinfrei ist und danach mit den in Tabelle 1 angeführten Elutionsmitteln das Lectin von der Säule desorbiert. Die in Tabelle 2 angegebenen Molekulargewichte der Untereinheiten wurden nach U. K. Laemmli (Nature, 227, 680-685 [1970]) durch Elektrophorese in Polyacrylamid in Gegenwart von Natriumdodecylsulfat bestimmt. The prepared extracts are applied to the columns, whereby in preliminary tests the capacity for each lectin was determined to be 0.05 M Tris / HC1 pH 8.0 until the eluate is free of protein and then with the values in the table 1 listed eluents that desorb lectin from the column. The one in table 2 indicated molecular weights of the subunits were according to U. K. Laemmli (Nature, 227, 680-685 [1970]) by electrophoresis in polyacrylamide in the presence of sodium dodecyl sulfate certainly.

Tabelle 1 Kapazität von immobilisiertem desialyliertem Mucin (6 mg immobilisiertes Protein pro ml Gel) für verschiedene Leetine Kapazität Elution*) mit mg Lectin/ (mg Lectin/ 100 g Ausg.-ml Gel) Material Arachis hypogaea (Erdnuß) 1,5 a>g 190 Bauhinia purpurea 1,1 g>a 28 Canavalia ensiformis (Schnabelbohne) 2,3 c=g>h 2100 Caragana arborescens (Erbsenstrauch) 0,8 g> a 35 Cytisus scoparius (Besenginster) 0,65 d > g 82 Dolichos biflorus 0,95 b>g 110 Euonymus europaeus (Pfaffenhütchen) 0,4 g> a 75 Glycine max (Sojabohne) 1,6 a=b=g 300 Griffonia simplicifolia I 1,9 a>g 700 Griffonia simplicifolia II 1,9 g 300 Laburnum alpinum (Goldregen) 0,6 g> a 55 Laburnum vulgare (Goldregen) 0,2 g>a 15 Lens culinaris (Linse) 0,8 c=g>h 60 Lotus tetragonolobus 0,4 e=g 65 Maclura pomifera 0,4 g=f>a 24 Phaseolus lunatus limensis (Limabohne) 1,8 b>g 170 Phaseolus vulgaris (Gartenbohne) 0,5 g 1200 Phytolacca americana (Kermesbeere) 1,5 g> a 125 Pisum sativum (Erbse) 0,4 c=g>h 140 Ricinus communis 2,4 a=g 1400 Robinia pseudoacacia (Robinie) 0,5 g> a 300 Sophora japonica (Schnurbaum) 1,65 b > g> a 170 Triticum vulgare (Weizen) 0,8 g>d 45 Ulex europaeus 1 (Stechginster) 0,2 e 9 Ulex europaeus 11 (Stechginster) 0,4 g 16 Vicia cracca 1 (Vogelwicke) 2,1 a>g 1400 Vicia cracca 11 (Vogelwicke) 0,3 c=g 150 Vicia faba (Pferde-, Saubohne) 0,6 c=g>h 30 Wisteria floribunda (Glyzinie) 1,65 a=b=g 160 Wisteria sinensis (Glyzinie) 1,65 a=b=g 160 *) alle Zucker 0,2 M a: Galactose b: N-Acetylgalactosamin c: Glucose d: N-Acetylglucosamin e: L-Fucose f: Melibiose g: 0,05 M Borat pH 8,0 h: 1 M NaCI im Puffer >: Elution besser (z. B. a > g: a eluiert bessert als g) =: Elution gleich gut Alle Leetine werden durch 0,05 M Formiat desorbiert. Die Leetine aus Canavalia e., Lens c., Pisum s., Ricinus c., Vicia faba und V. cracca II wurden der Vollständigkeit halber in die Tabelle aufgenommen. Sie lassen sich einfacher an vernetzten Polysacchariden reinigen. Table 1 Capacity of immobilized desialylated mucin (6 mg immobilized protein per ml gel) for different leetine capacity elution *) with mg lectin / (mg lectin / 100 g output ml gel) material Arachis hypogaea (peanut) 1.5 a> g 190 Bauhinia purpurea 1.1 g> a 28 Canavalia ensiformis (beak bean) 2.3 c = g> h 2100 Caragana arborescens (pea bush) 0.8 g> a 35 Cytisus scoparius (Broom) 0.65 d> g 82 Dolichos biflorus 0.95 b> g 110 Euonymus europaeus (Pfaffenhütchen) 0.4 g> a 75 Glycine max (soybean) 1.6 a = b = g 300 Griffonia simplicifolia I 1.9 a> g 700 Griffonia simplicifolia II 1.9 g 300 Laburnum alpinum (Laburnum) 0.6 g> a 55 Laburnum vulgare (laburnum) 0.2 g> a 15 Lens culinaris (Lens) 0.8 c = g> h 60 Lotus tetragonolobus 0.4 e = g 65 Maclura pomifera 0.4 g = f> a 24 Phaseolus lunatus limensis (Lima bean) 1.8 b> g 170 Phaseolus vulgaris (common bean) 0.5 g 1200 Phytolacca americana (pokeweed) 1.5 g> a 125 Pisum sativum (pea) 0.4 c = g> h 140 Ricinus communis 2.4 a = g 1400 Robinia pseudoacacia (black locust) 0.5 g> a 300 Sophora japonica (pagoda tree) 1.65 b> g> a 170 Triticum vulgare (Wheat) 0.8 g> d 45 Ulex europaeus 1 (gorse) 0.2 e 9 Ulex europaeus 11 (Gorse) 0.4 g 16 Vicia cracca 1 (bird vetch) 2.1 a> g 1400 Vicia cracca 11 (bird vetch) 0.3 c = g 150 Vicia faba (horse, broad bean) 0.6 c = g> h 30 Wisteria floribunda (wisteria) 1.65 a = b = g 160 Wisteria sinensis (wisteria) 1.65 a = b = g 160 *) all sugars 0.2 M a: galactose b: N-acetylgalactosamine c: glucose d: N-acetylglucosamine e: L-fucose f: melibiose g: 0.05 M borate pH 8.0 h: 1 M NaCl in the buffer>: elution better (e.g. a> g: a elutes better than g) =: elution equally good All Leetins are desorbed by 0.05 M formate. The leetine from Canavalia e., Lens c., Pisum s., Ricinus c., Vicia faba and V. cracca II have been included in added the table. They can be more easily linked to cross-linked polysaccharides clean.

Tabelle 2 Eigenschaften aller isolierten Leetine Molekulargewichte Blutgruppenspezifität spez. Table 2 Properties of all isolated Leetine molecular weights Blood group specificity spec.

der Untereinheiten Aktivität*) (kD) Arachis hypogaea 28 A, B,0**) 1800 Bauhinia purpurea 36,38 A>B,0 512 Canavalia ensiformis 26 A, B, 0 128 Caragana arborescens 31 A> B,0 1024 Cytisus scoparius 28,30 0>(B,A) 256 Dolichos biflorus 27,5 Al 1024 Euonymus europaeus 20 A> B, 0 1024 Glycine max 30 Kaninchen 5000 Griffonia simpl. I 30,32 B, (A1)>0 1024 Griffonia simpl. II 28 A, B,0**) 64 Laburnum alpinum 28,30,32,40 B > A,0 1024 Laburnum vulgare 28,30,32,40 B > A, 0 256 Lens culinaris 8,18,5 A,B,0 128 Lotus tetragonolobus 28,30 0>A 256 Maclura pomifera 12,48 A, B, 0 512 Phaseolus lunatus 1. 31 A1 2048 Phaseolus vulgaris 31,34 A, B, 0 128 Phytolacca am. 18,5,21,22,25,32 A, B, 0 256 Pisum sativum 8,18 A,B,0 512 Ricinus com. (Aggl.) 29,5,32,33 AB, 0 512 Ricinus com. (Toxin) 29,33 keine Agglut. of the subunits activity *) (kD) Arachis hypogaea 28 A, B, 0 **) 1800 Bauhinia purpurea 36.38 A> B, 0 512 Canavalia ensiformis 26 A, B, 0 128 Caragana arborescens 31 A> B, 0 1024 Cytisus scoparius 28.30 0> (B, A) 256 Dolichos biflorus 27.5 Al 1024 Euonymus europaeus 20 A> B, 0 1024 Glycine max 30 rabbits 5000 Griffonia simpl. I 30.32 B, (A1)> 0 1024 Griffonia simpl. II 28 A, B, 0 **) 64 Laburnum alpinum 28,30,32,40 B> A, 0 1024 Laburnum vulgare 28,30,32,40 B> A, 0 256 Lens culinaris 8,18,5 A, B, 0 128 Lotus tetragonolobus 28.30 0> A 256 Maclura pomifera 12.48 A, B, 0 512 Phaseolus lunatus 1. 31 A1 2048 Phaseolus vulgaris 31.34 A, B, 0 128 Phytolacca am. 18,5,21,22,25,32 A, B, 0 256 Pisum sativum 8,18 A, B, 0 512 Ricinus com. (Aggl.) 29,5,32,33 AB, 0 512 Ricinus com. (Toxin) 29.33 no agglutin.

Robinia pseudoacacia 27,29,34 A, B, 0 55 Sophora japonica 31 A>B,0 1024 Triticum vulgare 21 A, B, 0 512 Ulex europaeus I 33,5,35 0>B 512 Ulex europaeus II 44 0> B > A 256 Vicia cracca 1 31 A>B,0 1024 Vicia cracca II 7,5,18 A,B,0 256 Vicia faba 8,18 A,B,0 128 Wisteria floribunda 29 A > B, 0 1024 Wisteria sinensis 29 A > B,0 1024 *) spezif. Aktivität: Titer mit optimalen Humanerythrozyten (wenn nicht anders angegeben), geteilt durch die Absorption bei 280 nm **) Neuraminidase-behandelte Erythrozyten >: mit höherem Titer - Leerseite -Robinia pseudoacacia 27,29,34 A, B, 0 55 Sophora japonica 31 A> B, 0 1024 Triticum vulgare 21 A, B, 0 512 Ulex europaeus I 33,5,35 0> B 512 Ulex europaeus II 44 0> B> A 256 Vicia cracca 1 31 A> B, 0 1024 Vicia cracca II 7,5,18 A, B, 0 256 Vicia faba 8.18 A, B, 0 128 Wisteria floribunda 29 A> B, 0 1024 Wisteria sinensis 29 A> B, 0 1024 *) specif. Activity: titer with optimal human erythrocytes (unless otherwise stated) divided by the absorbance at 280 nm **) neuraminidase-treated Erythrocytes>: with a higher titer - blank page -

Claims

Claims 1. A process for the production of affinity adsorbents for Leetine, with a matrix of agaroses or cross-linked polysaccharides and hydrolyzed Pig stomach mucin as a ligand, characterized in that the ligand is unpurified Pig stomach mucin that has undergone acid treatment is used is, and that the immobilization on the matrix gel with 8 to 20 mg of cyanogen bromide per ml of gel and an equivalent amount of triethylamine is carried out.

2. The method according to claim 1, characterized in that the acids dilute (0.1-0.3 N) mineral acids can be used.

3. Use of the affinity adsorbent prepared according to claim 1 for the separation of lectins.

4. Use according to claim 3 for separating the lectins from the seeds from Arachis hypogaea (peanut), Bauhinia purpurea, Canavalia ensiformis (beak bean), Caragana arborescens (pea bush), Cytisus scoparius (broom broom), Dolichos biflorus, Euonymus europaeus (euonymus), Glycine max (soybean), Griffonia simplicifolia, Laburnum alpinum (laburnum), Laburnum vulgare (laburnum), Lens culinaris (lentil), Lotus tetragonolobus, Maclura pomifera, Phaseolus lunatus limensis (Lima bean), Phaseolus vulgaris (common bean), Phytolacca americana (pokeweed), Pisum sativum (pea), Ricinus communis, Robinia pseudoacacia (black locust), Sophora japonica (pagoda tree), Triticum vulgare (wheat), Ulex europaeus (gorse), Vicia cracca (bird vetch), Vicia faba (horse bean, broad bean), Wisteria floribunda (wisteria) and Wisteria sinensis (wisteria).