DE3323849A1

DE3323849A1 - Fructose 1,6-diphosphate product with normalising effect on the metabolism and the resistance to haemolysis of erythrocytes in banked blood used for transfusion purposes or for filling circuits in extracorporeal circulations.

Info

Publication number: DE3323849A1
Application number: DE19833323849
Authority: DE
Inventors: Luciano Bologna Cattani; Renato Rom/Roma Costrini
Original assignee: Biomedica Foscama Industria Chimico Farmaceutica SpA
Current assignee: Biomedica Foscama Industria Chimico Farmaceutica SpA
Priority date: 1983-07-01
Filing date: 1983-07-01
Publication date: 1985-01-03

Abstract

The invention relates to a fructose 1,6-diphosphate product with normalising effect on the metabolism and the resistance to haemolysis of erythrocytes in banked blood used for transfusion purposes or for filling circuits in extracorporeal circulations.

Description

Fruktose-1,6-Diphospat-Präparat mit normalisierender Wir-Fructose-1,6-Diphospat preparation with normalizing effect

kung auf den Metabolismus und den Widerstand der Erythrozyten in für Transfusionszwecke oder für die Befüllung von Kreisen des extrakorporalen Kreislaufes gegen Hämolyse verwendeten Blutkonserven.effect on the metabolism and resistance of erythrocytes in for Transfusion purposes or for filling circles of the extracorporeal circuit Banks of blood used against hemolysis.

Die Erfindung hat zum Gegenstand ein Fruktose-1,6-Diphosphat-präparat mit normalisierender Wirkung auf den Metabolismus und den Widerstand der Erythrozyten in für Transfusionszwecke oder für die Befüllung von Kreisen des extrakorporalen Kreislaufes gegen hämolyse verwendeten Blutkonserven.The subject of the invention is a fructose-1,6-diphosphate preparation with a normalizing effect on the metabolism and the resistance of the erythrocytes in for transfusion purposes or for filling circles of the extracorporeal Blood supplies used against hemolysis in the circulatory system.

Es ist experimentell bekannt, daß der extrakorporale Blutkreislauf, der insbesondere bei verschiedenen herzchirurgischen Eingriffen notwendig ist, bei den Erythrozyten beträchtlichen mechanischen, chemischen und metabolischen Schaden verursacht (Bernstein, E.F. et al, (1967) Am.J.Surg.114,126), der sich als intravasculare Hämolyse und post-perfusionale Anämie äußert, die auf der Verkürzung der mittleren Lebensdauer der roten Blutkörperchen beruhen. Die Spätwirkung ist größer als die sofortige Wirkung und ist aufgrund der von der extravascularen abhängigen intravascularen Hämolyse bewertbar, die bei Fehlen der letzteren völlig unterbleibt (Bernstein, E.F. et al,(1967) Circulation 45 (suppl.1), 226 e Wallace, H.W. and Coburn, R.F. (1974) J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 68,792).It is known experimentally that the extracorporeal blood circulation, which is particularly necessary for various cardiac surgical interventions considerable mechanical, chemical and metabolic damage to the erythrocytes (Bernstein, E.F. et al, (1967) Am.J.Surg.114,126), which presents itself as intravascular Hemolysis and post-perfusional anemia expresses itself on the shortening of the mean Lifespan of the red blood cells are based. The late effect is greater than that immediate effect and is due to the extravascular dependent intravascular Hemolysis can be assessed, which is completely absent in the absence of the latter (Bernstein, E.F. et al, (1967) Circulation 45 (suppl.1), 226 e Wallace, H.W. and Coburn, R.F. (1974) J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 68,792).

l Die Veränderungen der Erythrozytenmembran, die auf dem extrakorporalen Kreislauf beruhen, verbinden sich mit Veränderungen des Metabolismus und der Funktion des roten Blutkörperchens, insbesondere der oxyphoretischen (Glynn, M.F. l The changes in the erythrocyte membrane occurring on the extracorporeal Circulatory based, combine with changes in metabolism and function of red blood cells, especially oxyphoretic (Glynn, M.F.

X e Cornhill, F (1975) Can.J.Surg.18,73) mit daraus folgender Beeinträchtigung der Sauerstoffversorgung der Gewebe.X e Cornhill, F (1975) Can.J.Surg.18,73) with the consequent impairment the oxygen supply to the tissues.

Der metabolische und hämolytische Schaden aufgrund des extrakorporalen Kreislaufes ist ähnlich dem durch die Lagerung des Blutes entstehenden, bei dem insbesondere die oxyphoretische Funktion stark beeinträchtigt wird (Valtis D.J. e Kennedy A.C., Lancet 266,119,1954).The metabolic and hemolytic damage due to the extracorporeal The circulatory system is similar to that created by the storage of blood, in which in particular the oxyphoretic function is severely impaired (Valtis D.J. e Kennedy A.C., Lancet 266,119,1954).

Aus diesen Gründen ist es klar, daß die Erhöhung der Fragilität und der veränderte Metabolismus der Erythrozyten sowohl durch den extrakorporalen Kreislauf als auch durch Blutlagerung insbesondere dazu beitragen, den operatorischen und post-operatorischen Verlauf bei Patienten zu verschlimmern, die bei herzchirurgischen Eingriffen an extrakorporale Kreisläufe angeschlossen sind und gleichzeitig beträchtliche Mengen Blutkonserven erhalten.For these reasons it is clear that the fragility and increase the changed metabolism of the erythrocytes both through the extracorporeal circulation as well as through blood storage in particular contribute to the operational and post-operative course aggravate in patients undergoing cardiac surgery Interventions are connected to extracorporeal circuits and at the same time considerable Received amounts of blood.

Für das Problem, Mittel zu finden, welche geeignet sind, substantiell die derzeit aufgrund der Blutlagerung und des extrakorporalen Kreislaufes an der Membran und de Metabolismus der Erythrozyten erzeugten Schäden zu reduzieren und damit die Patienten vor der intravascularen Hämolyse, vor der post-infusionalen Anämie und vor der veränderen Oxyphorese, die sich daraus ergeben, zu schützen, bietet die Erfindung eine überraschende Lösung an, indem sie als therapeutisches Mittel das Natriumsalz des Fruktose-1,6-Diphosphates verwendet, ein auf anderen Gebieten der Pharmakologie wegen seiner Wirksamkeit bei Kardiopathie, Hepatitis, Zirrhose, Toxämie, dismetabolischen Zuständen, Diabetes wohlbekanntes Erzeugnis, das dem dem Patienten direkt transfundiertem Blut oder aber dem in der Füllflüssigkeit von extrakorporalen Kreislaufsystemen enthaltenen Blut beigegeben wird.Substantial for the problem of finding means which are suitable currently due to the blood storage and the extracorporeal circulation at the Membrane and de metabolism of erythrocytes to reduce and damage generated thus the patient before the intravascular hemolysis, before the post-infusional To protect against anemia and the altered oxyphoresis that result from it, The invention offers a surprising solution by being therapeutic Means the sodium salt of fructose-1,6-diphosphate used, one on another Areas of pharmacology because of its effectiveness in cardiopathy, hepatitis, Cirrhosis, toxemia, dismetabolic conditions, diabetes well known product, that the directly transfused blood to the patient or to the added blood contained in the filling liquid of extracorporeal circulatory systems will.

Der Vorteil der Erfindung ist offensichtlich, da er es gestattet, dem zu transfundierenden oder gelagerten Blut oder dem in den extrakorporalen Kreisläufen enthaltenen Blut die therapeutische Substanz, die aus dem Fruktose-1 ,6-Diphosphat besteht, beizugeben.The advantage of the invention is obvious since it allows the blood to be transfused or stored or that in the extracorporeal circuits contained blood the therapeutic substance, which from the fructose-1,6-diphosphate exists to be included.

Dieses Verfahren ist in der Tat sehr viel vorteilhafter als dasjenige, das auf der Verabreichung an die Patienten von therapeutischen Substanzen beruht, die in der Lage sind, den Metabolismus und dementsprechend die Hämolyseresistenz der Erythrozyten zu verbessern. In der Tat entstehen der hämolytische und der metabolische Schaden, die in ihrer Zusammenwirkung die erythrozytäre Oxyphorese verändern, hauptsächlich nach der Lagerung des Blutes und während des Fließens des Blutes durch die Systeme des extrakorporalen Kreislaufes. Dementsprechend zielt das von der Erfindung vorgeschlagene Verfahren darauf ab, die Therapie auf die geschädigten erythrozytären Zellen zu konzentrieren und zu vermeiden, daß sie den gesamten Organismus betrifft. Diese therapeutische direkte Wirkung kann erhalten werden, wenn dem zu transfundierenden konservierten Blut oder dem in den Systemen des extrakorporalen Kreislaufes enthaltenen Blut das Fruktose-1,6-Diphosphat beigegeben wird, das auf diese Weise in der Lage ist, den Metabolismus und die Hämolyseresistenz der Erythrozyten des zu behandelnden Blutes zu normalisieren. Außerdem ist es mit diesem Verfahren möglich, die Verabreichung des Fruktose-1,6-Diphosphats zum günstigsten Zeitpunkt vorzunehmen, beispielsweise a) während der Lagerung des Blutes, wenn die Lagerdauer über gewisse Grenzen hinausgeht, b) bei Ende der Lagerzeit des Blutes, c) wenn das Blut bereits dem System des extrakorporalen Kreislaufes beigegeben wurde.Indeed, this procedure is much more advantageous than the one based on the administration of therapeutic substances to patients, which are capable of metabolism and, accordingly, hemolysis resistance to improve erythrocytes. In fact, the hemolytic and the metabolic arise Mainly damage the interaction of which changes erythrocytic oxyphoresis after the blood is stored and while the blood is flowing through the systems of the extracorporeal circuit. Accordingly, that proposed by the invention aims Procedure aimed to target the therapy on the damaged erythrocyte cells focus and avoid affecting the whole organism. These direct therapeutic effect can be obtained when the transfused preserved blood or that contained in the systems of the extracorporeal circulation The fructose-1,6-diphosphate is added to the blood, which is able to do this in this way is, the metabolism and the hemolysis resistance of the erythrocytes of the to be treated Normalize blood. It is also possible with this method to administer of the fructose-1,6-diphosphate at the most favorable time to make, for example a) during the storage of the blood, if the storage period exceeds certain limits, b) at the end of the storage period of the blood, c) when the blood is already in the system of the extracorporeal Circulation was added.

Es ist dementsprechend der große Vorteil des Präparates nach der Erfindung in allen Fällen offensichtlich, in denen Blutkonserven zu transfundieren sind oder aber ein extrakorporales Kreislaufsystem zu verwenden ist, um so in wesentlicher Form die hauptsächlichen, von diesen zur normalen Herzchirurgiepraxis, den Nothilfemaßnahmen und der Intensivbehandlung gehörenden Techniken erzeugten Scliäden zu reduzieren.It is accordingly the great advantage of the preparation according to the invention obvious in all cases in which blood products are to be transfused or but the use of an extracorporeal circulatory system is all the more essential Form the primary of these to normal cardiac surgery practice, the emergency response and intensive care techniques to reduce damage generated.

Es ist dementsprechend spezifischer Gegenstand der Erfindung- ein Fruktose-1,6-Diphosphat-Präparat in Form seines Natriumsalzes, das durch diese Substanz in mikrokristallinem Pulver gebildet wird, oder in Form seiner Lösung in bide--stilliertem apyrogenem Wasser, das dem konservierten Blut in einer Dosis von 0,2 - 2,5 Gramm Fruktose-1,6-Diphosphat-Natriumsalz pro 100 ml Blut bzw. der Flüssigkeit des Systets des extrakorporalen Kreislaufes in einer Dosis von 2-30 Gramm Fruktose-1,6-Diphosphat-Natriumsalz beizu«r',cn ist.It is accordingly a specific subject matter of the invention Fructose-1,6-diphosphate preparation in the form of its sodium salt, which is produced by this substance is formed in microcrystalline powder, or in the form of its solution in bide - distilled non-pyrogenic water, which is added to the preserved blood in a dose of 0.2-2.5 grams Fructose-1,6-diphosphate sodium salt per 100 ml of blood or the fluid in the system of the extracorporeal circulation in a dose of 2-30 grams of fructose-1,6-diphosphate sodium salt to be attached to 'r', cn is.

Diese neue Verwendung des Fruktose-1,6-Diphosphat-Natriumsalzes im Falle von verändertem Metabolismus und Fragilität der Erythrozyten aufgrund des extrakorporalen Kreislaufes und der Lagerung des Blutes beruht auf einer früher nicht bekannten Wirkung, die zunächst an menschlichem r,lut in vitro bei Forschungsarbeiten ermittelt wurde, die in den Forschungslaboratorien der Firma Biomedica-Foscama, Rom, entdeckt wurde und später im klinischen Rahmen verifiziert wurde.This new use of the fructose 1,6-diphosphate sodium salt im Case of altered metabolism and fragility of the erythrocytes due to the extracorporeal circulation and the storage of the blood is based on an earlier unknown effect, initially on human r, lut in vitro during research determined in the research laboratories of Biomedica-Foscama, Rome, was discovered and later verified in a clinical setting.

Diesbezüglich werden im folgenden als Beispiel die Ergebnisse einer Reihe von Versuchen in vitro und diejenigen einer Reihe von klinischen Versuchen an Patienten, die an extrakorporale Kreislaufsysteme angeschlossen wurden, dargestellt.In this regard, the results of a Series of in vitro trials and those of a series of clinical trials on patients connected to extracorporeal circulatory systems.

IN-VITRO-VERSUCHE 1) MATERIALIEN UND METHODEN Von 4 gesunden freiwilligen und von 11 Patienten, die keinerlei patholotgischen Blutbefund aufwiesen, wurden mit häparisierten Spritzen insgesamt 96 Entnahmen von 20 - 30 ml Blut vorgenommen. IN VITRO EXPERIMENTS 1) MATERIALS AND METHODS From 4 healthy volunteers and from 11 patients who had no pathological blood findings whatsoever A total of 96 withdrawals of 20-30 ml of blood were made with dissected syringes.

Bei einigen Proben wurde ein Teil des entnommenen Blutes zentrifugiert .(3000 min/10 Minuten Dauer), um das Plasma abzutrennen.For some samples, some of the blood drawn was centrifuged . (3000 min / 10 minutes duration) to separate the plasma.

Den Blut- und Plasmaproben wurden die für jede Probe festgesetzten Substanzen hinzugefügt, wonach die behandelten Proben bei 370C mit Thermostat und Rührwerk inkubiert wurden.The blood and plasma samples were given those set for each sample Substances added, after which the treated samples at 370C with thermostat and Agitator were incubated.

Bei einigen Proben erfolgte die Inkubation bei einer Temperatur von 220 oder 4°.Some samples were incubated at a temperature of 220 or 4 °.

Es wurden die folgenden Behandlungen vorgenommen: 1) FDP = Fruktose-1,6-Diphosphat-Natriumsalz in der für die verschiedenen Untersuchungen festgesetzten Menge. Der Natriumgehalt ist so, daß eine 10%ige Lösung von FDP in H2O ein pH = 5,5 hat; 2) F + P = Fruktose in molaren Mengen gleich dem bei der gleichen Probe verwendeten FDP + Natrium (in gleichen Menge entsprechend dem''Natrium des entsprechenden FDP)-Phosphat (in 2 molaren Mengen bezogen auf die entsprechende FDP-Substanz); 3) SAL. = Volumen der physiologischen Lösung gleich demjenigen, in dem die entsprechende FDP-Substanz verdünnt wird. Die FDP- und F + P-Behandlungen werden bis auf ein Volumen gleich 1/100 des Blut- oder Plasmavolumens mit apyrogenem didestilliertem Wasser und/oder physiologischer Kochsalzlösung verdünnt (wenn es notwendig ist, um zu vermeiden, daß die Lösung hypotonisch ist). Bei einigen Proben ist das Volumen, in dem die Substanzen aufgelöst werden, gleich 1/20, 1/10, 1/5 oder 1/2 bezogen auf das Blut, für das sie bestimmt sind.The following treatments were carried out: 1) FDP = fructose-1,6-diphosphate sodium salt in the amount fixed for the various examinations. The sodium content is such that a 10% solution of FDP in H2O has a pH = 5.5; 2) F + P = fructose in molar amounts equal to the FDP + sodium (in same amount corresponding to the '' sodium of the corresponding FDP) phosphate (in 2 molar amounts based on the corresponding FDP substance); 3) SAL. = Volume of physiological solution equal to that in which the corresponding FDP substance is diluted. The FDP and F + P treatments become the same except for one volume 1/100 of the blood or plasma volume with non-pyrogenic non-distilled water and / or physiological saline solution diluted (if it is necessary to avoid that the solution is hypotonic). For some samples, the volume in which the Substances are dissolved, equal to 1/20, 1/10, 1/5 or 1/2 related on the blood for which they are meant.

Bei einigen Proben wurden die Lösungen mit den FDP- und F+P-Substanzen mit NaOH auf pH 7,4 gebracht.For some samples, the solutions with the FDP and F + P substances brought to pH 7.4 with NaOH.

Geprüfte Parameter In Voruntersuchungen waren nach verschiedenen Inkubationszeiten die Veränderungen des Adenosintriphosphats und des 2,3-Diphosphats der Erythrozyten sowie des Fruktose-1,6-Diphosphats der Erythrozyten und des Plasmas geprüft worden. Die Vorergebnisse bewiesen, daß bei den gewählten Versuchsbedingungen die Abweichungen des Inhaltes an Fruktose-1,6-Diphosphat am besten den Zustand des Metabolismus und die Hämolyseresistenz der Erythrozyten kennzeichnen.Tested parameters In preliminary examinations were after different incubation times the changes in the adenosine triphosphate and the 2,3-diphosphate of the erythrocytes as well as the fructose-1,6-diphosphate of the erythrocytes and the plasma have been tested. The preliminary results proved that the deviations under the selected test conditions the content of fructose-1,6-diphosphate best the state of the metabolism and characterize the hemolysis resistance of the erythrocytes.

Aus diesen Gründen wurden bei den vorliegenden Versuchen die Konzentrationen des Fruktose-1,6-Diphospats gemessen (Verfahren von Michæl G., Beutler H.O.: In Bergmeyer H.U.-Edt Methode of Enzymatic Analysis", Band 3, Seite 1314, Acadernic Press Inc. New York 1974); und zwar sowohl in dem mit FDP inkubierten Plasma als auch in dem durch Zentrifugieren des mit FDP, F + P, sal. inkubierten Blutes und des nicht behandelten Blutes getrennten Plasma und den entsprechenden Erythrozyten.For these reasons, the concentrations in the present experiments of fructose-1,6-diphospate measured (method by Michæl G., Beutler H.O .: In Bergmeyer H.U.-Edt Method of Enzymatic Analysis ", Volume 3, page 1314, Acadernic Press Inc. New York 1974); both in the plasma incubated with FDP as also in that by centrifuging the with FDP, F + P, sal. incubated blood and of the untreated blood, separated plasma and the corresponding erythrocytes.

Bei dem mit FDP inkubierten Plasma und bei dem aus den mit FDP inkubiertem Blut abgetrennten Plasma wurde auch die Konzentration der anorganischen Phosphate gemessen (Verfahren Martin J.B., Doty O.M. (1949) Anal. Chem.In the plasma incubated with FDP and in that from the plasma incubated with FDP Blood separated plasma was also the concentration of inorganic phosphates measured (method Martin J.B., Doty O.M. (1949) Anal. Chem.

21,965) sowie des Hämoglobins (um den Hämolysegrad zu bewerten).21,965) and hemoglobin (to assess the degree of hemolysis).

II) ERGEBNISSE Es wurde bewiesen, daß die Werte des erythrozytären FDP nach der Entnahme des Blutes auch ohne Behandlung beträcht- lich zunehmen und daß sie außerdem, abgesehen von der Wirkung der Substanzen, mit denen das Blut behandelt wurde, auch durch andere Faktoren verändert werden, u.a. II) RESULTS It was proven that the values of the erythrocyte FDP after the blood has been drawn, even without treatment - lich and that they also, apart from the action of the substances with which the blood has been treated, may be changed by other factors, including

1) Temperatur und Zeit der Inkubation 2) pH und Volumina der dem zu inkubierenden Blut hinzugegebenen Substanzen 3) Hämolyseprozentsatz, der in dem zu inkubierenden Blut angetroffen wird.1) Temperature and time of incubation 2) pH and volumes of the same substances added to incubating blood 3) percentage of hemolysis present in the blood to be incubated is encountered.

Es ergab sich auch, daß mit fortschreitender Inkubationszeit der FDP-Inhalt im Plasma eine progressive Verringerung erfährt, die jedoch nicht nur auf im Plasma vorhandene Faktoren (wie z.B. der Aktivität der plasmatischen Phosphatasen) beruht, sondern auch auf Faktoren in Verbindung mit dem Vorhandensein von Erythrozyten und anderen Blutzellen im Plasma.It was also found that as the incubation period progressed, the FDP content a progressive decrease in plasma, but not only in plasma existing factors (such as the activity of plasmatic phosphatases) are based, but also on factors related to the presence of red blood cells and other blood cells in the plasma.

Hierzu werden die an 8 Blutproben erhaltenen Ergebnisse angegeben. Ein Teil jeder Entnahme wurde zur Abtrennung des Plasmas verwehdet.For this purpose, the results obtained on 8 blood samples are given. A portion of each sample was used to separate the plasma.

Es wurden so 8 Vollblutproben und 8 Proben des entprechenden Plasmas vorbereitet. Die 16 Proben wurden mit FDP in der Weise behandelt, daß eine Plasmakonzentration von 1,3 m Mol/Liter erreicht wurde. Nach 2, 20, 40 und 80 Minuten Inkubationszeit wurde das in dem direkt mit FDP inkubierten Plasma (Plasma a) vorhandene FDP und das in dem durch Zentrifugieren des mit FDP"inkubierten Blutes erhaltenen Plasma (Plasma b) vorhandene FDP analysiert; bei den vier Inkubationszeiten wurden bei dem Plasma-FDP die folgenden prozentualen Abweichungen (D%FDP) festgestellt.This resulted in 8 whole blood samples and 8 samples of the corresponding plasma prepared. The 16 samples were treated with FDP in such a way that a plasma concentration of 1.3 m mol / liter was achieved. After 2, 20, 40 and 80 minutes of incubation time the FDP and the plasma obtained by centrifuging the blood incubated with FDP " (Plasma b) analyzed existing FDP; at the four incubation times were at the plasma FDP found the following percentage deviations (D% FDP).

FDP festgestellt nach 2 20 40 80 Minuten Inkubationszeit Plasma a - 5 -13 -20 -35 Plasma b -20 -31 -40 -60 Die Veränderung der FDP-Konzentration im Plasma a (D FDP/a ausgedrückt in ßg/ml) ist signifikant mit der (in Minuten ausgedrückten) Zeit korreliert: D FDP/a = + 3.22 - 1.74 Minuten - r = - 0.96 p0.001 Die Differenz zwischen der Veränderung bei FDP, die im Plasma a gemessen wurde und derjenigen, die im Plasma b gemessen wurde drückt den Einfluß auf die Verringerung des Plasma-FDP aus, der auf Zellfaktoren beruht (insbesondere erythrozytären). FDP detected after 2 20 40 80 minutes of incubation plasma a - 5 -13 -20 -35 plasma b -20 -31 -40 -60 The change in the FDP concentration in plasma a (D FDP / a expressed in ßg / ml) is significant with the (expressed in minutes) Correlated time: D FDP / a = + 3.22 - 1.74 minutes - r = - 0.96 p0.001 The difference between the change in FDP measured in plasma a and that which was measured in plasma b expresses the influence on the reduction in plasma FDP based on cell factors (especially erythrocyte).

Diese Differenz (D FDP b-a) ändert sich nicht signifikant im Zeitablauf.This difference (D FDP b-a) does not change significantly over time.

D FDP b-a - - 62.7 - 0.5 Minuten - r = - 0.46 n.s.D FDP b-a - - 62.7 - 0.5 minutes - r = - 0.46 n.s.

und bleibt praktisch konstant.and remains practically constant.

Außerdem wurde nachgewiesen, daß die Behandlung mit FDP signifikant wirksamer ist als die Behandlungen, mit denen ein Vergleich durchgeführt wurde, was die Verbesserung des Metabolismus und die Hämolyseresistenz der Erythrozyten bei allen geprüften Inkubationszeiten betrifft.It was also shown that treatment with FDP was significant is more effective than the compared treatments, what the improvement of the metabolism and the hemolysis resistance of the erythrocytes at all incubation times tested.

Hierzu werden die Fruktose-1,6-Diphosphat-Konzentrationen in den Erythrozyten angegeben, die bei 10 Blutproben nach 80 Minuten Inkubation bei 37° festgestellt wurden. Diese Daten beweisen die Wirksamkeit der FDP-Behandlung (Eingabe in das Blut mit der zum Erhalt einer Plasmakonzentration von 1,3 m Mol/Liter notwendigen Dosis) im Vergleich zum Fehlen der Behandlung (n.t.) und der F + P-Behandlung (die in zum FDP äquivalenten Dosen erfolgte). Die Wirkstoffe wurden in einem Volumen von destilliertem Wasser (gleich 1/100 des Volumens des zu inkubierenden Blutes) aufgelöst und wurden mit NaOH auf ein pH von 7.4 gebracht.For this purpose, the fructose-1,6-diphosphate concentrations in the erythrocytes indicated that found in 10 blood samples after 80 minutes of incubation at 37 ° became. These data prove the effectiveness of the FDP treatment (entry in the Blood with what is necessary to obtain a plasma concentration of 1.3 m mol / liter Dose) compared to the lack of treatment (n.t.) and F + P treatment (the in doses equivalent to the FDP). The active ingredients were in one volume of distilled water (equal to 1/100 of the volume of the blood to be incubated) dissolved and were brought to pH 7.4 with NaOH.

SUBSTANZ Mittelwert + SE (g FDP/ml Erythrozyten) n.n. 211 + 6.60 FDP 283 + 9.85 F+P 225 + 7.69 Unterschiede zwischen den Substanzen: FDP gegenüber F + P = + 58 po 0.001 FDP " n.n. = + 72 p<0.001 F+P " n.n. = + 14 n.s.SUBSTANCE mean + SE (g FDP / ml erythrocytes) n.n. 211 + 6.60 FDP 283 + 9.85 F + P 225 + 7.69 Differences between the substances: FDP versus F + P = + 58 po 0.001 FDP "n.n. = + 72 p <0.001 F + P" n.n. = + 14 n.s.

Der Mittelwert des erythrozytären FDP war bei den 10 Blutentnahmen 10.2 (+ 0.6) ßg/ml Erythrozyten, während bei dem gleichen Blut, das während 80 Minuten bei der Temperatur von 220C gehalten wurde, dieser Wert 68 (+ 4.46) ßg/ml Erythrozyten ist.The mean value of the erythrocyte FDP was in the 10 blood samples 10.2 (+ 0.6) ßg / ml erythrocytes, while with the same blood that during 80 minutes was kept at the temperature of 220C, this value 68 (+ 4.46) μg / ml erythrocytes is.

KLINISCHE UNTERSUCHUNGEN I) MATERIALIEN UND METHODEN Fünfunddreissig erwachsene Patienten, bei denen eine Operation mit extrakbrporalem Kreislauf durchgeführt wurde, wurden durch Zufallsauswahl in zwei Gruppen unterteilt: 1) Kontrollgruppe (G-Kontrolle); 17 Fälle; 2) die andere Gruppe wurde mit 15 Gramm Fruktose-1,6-Diphosphat-Natriumsalz (FDP) behandelt, das direkt in das System des extrakorporalen Kreislaufes eingegeben wurde, 18 Fälle (G-FDP). CLINICAL INVESTIGATIONS I) MATERIALS AND METHODS Thirty-five adult patients who have undergone extracbrporeal circulation surgery were divided into two groups by random selection: 1) Control group (G control); 17 cases; 2) the other group was given 15 grams of fructose 1,6-diphosphate sodium salt (FDP), which is entered directly into the system of the extracorporeal circulation was, 18 cases (G-FDP).

In alle Fällen wurde ein Beutley-BOS-10-Sauerstoffgerät mit einer Füllung von Normosol R bei pH 7,4 und Blutkonserven in einer solchen Menge verwendet, daß ein Hämatokrit zwischen 25 und 28 % erzielt wurde. Die Füllung des Systems des extrakorporalen Kreislaufes wurde mit Heparin (25 mg/l) und mit Tris-Hydroxy-Amin-Methan (200 ml) ergänzt.In all cases a Beutley BOS-10 oxygen machine was used with a Filling of Normosol R at pH 7.4 and blood products used in such an amount, that a hematocrit between 25 and 28% was achieved. The filling of the system of the extracorporeal circulation was with heparin (25 mg / l) and with tris-hydroxy-amine-methane (200 ml) supplements.

Bei der FDP-Gruppe wurden wie gesagt 15 Gramm FDP direkt in das Sauerstoffgerät eingegeben.In the FDP group, as I said, 15 grams of FDP were put directly into the oxygen device entered.

Bei den beiden Patienten-Gruppen gab es keine signifikanten Unterschiede bezüglich des mittleren Alters, der Dauer des Funktionierens des extrakorporalen Kreislaufes oder bezüglich der während der Operation transfundierten Blutmenge. Die Globularresistenz und das im Plasma freie Hämoglobin lagen vor der Operation bei allen Patienten innerhalb der Normgrenzen.There were no significant differences between the two patient groups regarding middle age, the duration of the functioning of the extracorporeal Circulatory system or the amount of blood transfused during the operation. The globular resistance and the free hemoglobin in the plasma were before the operation in all patients within the normal limits.

Die Entnahme zur Bestimmung des freien Hb wurde zwei Stunden nach Beendigung des extrakorporalen Kreislaufes durchgeführt.The withdrawal to determine the free Hb was two hours after Completion of the extracorporeal circuit carried out.

Die mit dem Mittelwert + Standardfehler ausgedrückten Ergebnisse wurden bei nicht gepaarten Daten durch das Student'sche t analysiert.The results expressed as mean + standard error were analyzed by Student's t for unpaired data.

II) ERGEBNISSE Der Hämolysegrad wurde bei den beiden Patienten-Gruppen dadurch bewertet,'daß die Werte des im Plasma freien Hämoglobins nach der Operation gemessen wurden. II) RESULTS The degree of hemolysis was determined in the two patient groups rated by 'that the levels of free hemoglobin in plasma after the operation were measured.

Es wurde auch die extrakorporale Hämolyse pro Minute (Hb% Minute) gemessen.The extracorporeal hemolysis per minute (Hb% minute) was also measured.

Da der mechanische Schaden um so größer ist, wenn die Menge des durch den extrakorporalen Kreislauf umlaufenden Blutes zunimmt, wurden die absoluten Werte durch Umrechnung auf 1 Liter gepumptes Blut (Hb81 x 103) ) korrigiert.Since the mechanical damage is greater when the amount of through the extracorporeal circulation of circulating blood increases, the absolute values were corrected by converting to 1 liter of pumped blood (Hb81 x 103)).

Es wurde auch die Hämolyse pro Liter/Minute (Hb%/1/Minute) bewertet, die ein von der Dauer des Streß unabhängiger Streß-Intensitäts-Index ist.The hemolysis per liter / minute (Hb% / 1 / minute) was also rated, which is a stress intensity index that is independent of the duration of the stress.

Die FDP-Behandlung war in der Lage, sämtliche beobachteten Indizes signifikant zu verändern und zeigte so ihre Wirsamkeit bei der Verbesserung des Metabolismus und der Hämolyseresistenz der Erythrozyten bei konserviertem und durch extrakorporale Kreislaufsysteme laufendem Blut.The FDP treatment was able to match all of the indices observed to change significantly and thus showed its effectiveness in improving the Metabolism and hemolysis resistance of erythrocytes in preserved and by extracorporeal circulatory systems running blood.

Kontroll-Gruppe FDP-Gruppe P Hb% 46.26 + 11.97 17.02 + 6.27 0.05 Hb%/Min. 0.47 + 0.090 0.13 + 0.045 0.01 Hb%/1x103 130.95 + 24.83 42.08 + 14.63 0.01 Hb%/1/Min. 15.96 + 3.09 5.09 + 1.97 0.01 Obwohl einige bestimmte Bedingungen als Beispiel angegeben wurden, ist es klar, daß der Erfindungsrahmen sich auf jede Zugabe von Fruktose-1,6-Diphosphat und/oder Mischungen bezieht, die sie enthalten und die konserviertem Blut für Transfusionszwecke beigegeben oder aber in die Systeme des extrakorporalen Kreislaufs zusätzlich eingegeben werden. Control group FDP group P Hb% 46.26 + 11.97 17.02 + 6.27 0.05 Hb% / min. 0.47 + 0.090 0.13 + 0.045 0.01 Hb% / 1x103 130.95 + 24.83 42.08 + 14.63 0.01 Hb% / 1 / min. 15.96 + 3.09 5.09 + 1.97 0.01 Although some specific conditions as Example given, it is clear that the scope of the invention applies to every addition of fructose-1,6-diphosphate and / or mixtures which contain them and which added to preserved blood for transfusion purposes or into the systems of the extracorporeal circuit can also be entered.

Claims

PATENT CLAIMS 1> Fructose-1,6-diphosphate preparation, d a d u r c h g e -k k e n n n z e i c h n e t that it has a normalizing effect on the Metabolism and hemolysis resistance of erythrocytes in preserved blood Has.

2) Preparation according to claim 1, characterized in that it is the preserved, blood used for transfusion into patients is added.

3) Preparation according to claim 1, characterized in that it is in systems of the extracorporeal circuit is entered.

4) Preparation according to claims 1-3, characterized in that it is used in amounts of 3 to 4 grams per liter of blood.

5) Preparation according to claims 1 to 4, characterized in that it directly into the oxygen device of the systems of the extracorporeal circuit in Amounts between 10 and 30 g and in particular between 15 and 20 g is entered.