DE3134585A1 - Test unit for detecting occult blood - Google Patents

Test unit for detecting occult blood

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DE3134585A1 DE19813134585 DE3134585A DE3134585A1 DE 3134585 A1 DE3134585 A1 DE 3134585A1 DE 19813134585 DE19813134585 DE 19813134585 DE 3134585 A DE3134585 A DE 3134585A DE 3134585 A1 DE3134585 A1 DE 3134585A1
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Abstract

A test unit for detecting occult blood is described and is produced by impregnation of a substrate with an organic peroxide, a chromogen, a buffer and a stabiliser in the form of at least one compound of the general formula: <IMAGE> in which m is an integer from 1 to 5, R<1> is a methyl radical, a short-chain alkoxy radical, a halogen atom or a hydrogen atom and X is a radical of the formulae <IMAGE> with R<2> and R<3> each equalling an alkyl radical with 1 or 2 carbon atom(s), <IMAGE> in which m, R<1>, R<2> and R<3> have the stated meaning, R<4> is an alkylene radical with 1 to 6 carbon atom(s) and n = 0 or 1, <IMAGE> in which m, R<1> and R<4> have the stated meaning, or <IMAGE> in which R<2> and R<3> have the stated meaning.a

Description

Testeinheit-zum Nachweis von okkultemTest unit-for the detection of occult

Blut Beschreibung Die Erfindung betrifft eine Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut, insbesondere eine stabile Testeinheit zum einfachen Nachweis von Blut und sonstigen peroxidaseaktiven Substanzen in Körperfluiden. blood Description The invention relates to a test unit for the detection of occult blood, especially a stable test unit for easy Detection of blood and other peroxidase-active substances in body fluids.

Die Anwesenheit von Blut oder peroxidaseaktivem Hämoglobin in Körperfluiden, wie Urin, Kot oder Erbrochenem, kann als Anzeichen für bestimmte Erkrankungen, z. B.The presence of blood or peroxidase-active hemoglobin in body fluids, such as urine, feces, or vomit, may be signs of certain medical conditions, e.g. B.

entzündliche Geschwüre oder Tumore des Magens, der Nieren, des Darms oder sonstiger Harnorgane angesehen werden. In diesen Fällen ist es aus klinischen Gesichtspunkten von wesentlicher Bedeutung, in der kürzest möglichen Zeit eine Diagnose zu stellen oder eine Therapie einzuleiten, weswegen ein genauer Nachweis von in Körperfluiden vorhandenem Blut oder vorhandenen peroxidaseaktiven Substanzen erforderlich ist.inflammatory ulcers or tumors of the stomach, kidneys, intestines or other urinary organs. In these cases it is out of clinical It is essential to make a diagnosis in the shortest possible time to ask or to initiate therapy, which is why precise evidence of in Body fluids, blood or peroxidase-active substances present is.

Nahezu sämtliche bisherigen Maßnahmen zum Nachweis von okkultem Blut in gegebenen Körperfluiden nutzen die Peroxidaseaktivität von okkultem Blut aus. So gibt es beispielsweise eine Testeinheit, die durch Imprägnieren eines Trägers, wie Filterpapier, mit einem organischen Hydroperoxid und einem organischen, farbbildenden Indikator als Chromogen hergestellt wurde. Wenn peroxidaseaktives Blut oder freies Hämoglobin mit dieser Testeinheit in Berührung gelangt, zersetzt es das darin enthaltene Hydroperoxid unter Freisetzung von Sauerstoff. Der freigesetzte Sauerstoff oxidiert den organischen, farbbildenden Indikator unter Bildung eines farbigen Oxidationsprodukts.Almost all previous measures for the detection of occult blood in given body fluids exploit the peroxidase activity of occult blood. For example, there is a test unit that, by impregnating a carrier, like filter paper, with an organic hydroperoxide and an organic, color-forming one Indicator was produced as a chromogen. If peroxidase active blood or free If hemoglobin comes into contact with this test unit, it will break down the contained therein Hydroperoxide with the release of oxygen. The released oxygen oxidizes the organic, color-forming indicator with the formation of a colored oxidation product.

Der in der Testeinheit enthaltene organische, farbbildende Indikator ist oxidationsfähig. Auch bei dem in der Testeinheit enthaltenen organischen Hydroperoxid handelt es sich um eine reaktionsfähige Substanz, die möglicherweise mit dem Indikator unverträglich ist.The organic, color-forming indicator contained in the test unit is oxidizable. Even with the organic hydroperoxide contained in the test unit it is a reactive substance that may interact with the indicator is incompatible.

Da diese (möglicherweise) unverträglichen Bestandteile gemeinsam in der Testeinheit enthalten sind, können sie ohne weiteres miteinander reagieren, so daß die Testeinheit nicht über längere Zeit hinweg haltbar ist.Since these (possibly) incompatible components are combined in are included in the test unit, they can easily react with one another, so that the test unit is not durable for a long time.

Zur Hemmung dieser unerwünschten Reaktion der beiden Bestandteile während der Lagerung der Testeinheit wurde der Testeinheit bereits ein Stabilisator einverleibt. Beispiele für zu diesem Zweck verwendete Stabilisatoren sind Di- oder Trimorpholidphosphate (vgl.To inhibit this undesirable reaction of the two components during storage of the test unit, the test unit already became a stabilizer incorporated. Examples of stabilizers used for this purpose are di- or Trimorpholide phosphates (cf.

US-PS 3 853 471), Aminsalze organischer Hydroperoxide (vgl. US-PS 4 017 261) und Borsäureester (vgl. US-PS 4 071 321). Eine bekannte Stabilisiermaßnahme besteht auch darin, von dem organischen Hydroperoxid mit Hilfe leimartiger Substanzen, wie Gelatine, Mikrokapseln herzustellen.U.S. Pat. No. 3,853,471), amine salts of organic hydroperoxides (see U.S. Pat 4,017,261) and boric acid esters (see U.S. Patent 4,071,321). A well-known stabilization measure also consists in removing the organic hydroperoxide with the help of glue-like substances, like gelatin to make microcapsules.

Die bisherige Mitverwendung von Stabilisatoren hatte zum Ziel, die möglicherweise miteinander unverträglichen Reagentien (organisches Hydroperoxid und organischer, farbbildender Indikator) dadurch zu stabilisieren, daß man sie an einer raschen Vermischung miteinander hindert. Di- und Trimorpholidphosphate sind vornehmlich Mittel zur Verhinderung der Fortpflanzung von Insekten. Wegen ihrer großen Reaktionsfähigkeit ist ihre Herstellung gefährlich und bedarf ihre Handhabung größter Sorgfalt. Die Aminsalze organischer Hydroperoxide sind hochflüchtig, so daß solche Verbindungen enthaltende Testeinheiten ohne weiteres in ihrer Nachbarschaft gelagerte andere Testeinheiten beeinträchtigen können. Da Borsäureester in Kombination mit Dimethylsulfoxid verwendet werden, können diese beiden Verbindungen enthaltende Testeinheiten in ähnlicher Weise in ihrer Nachbarschaft gelagerte andere Testeinheiten beeinträchtigen. Somit lassen die bisher verwendeten Stabilisatoren noch erheblich zu wünschen übrig. Im Falle der Mikroeinkapselung organischer Hydroperoxide ist von Nachteil, daß die Mikrokapseln bei der Alterung so starr werden, daß die Reaktionsfähigkeit beeinträchtigt und die Reaktion in der Testeinheit ungleichmäßig wird, was dazu führt, daß eine ungleichmäßige Farbbildung erfolgt.The previous use of stabilizers was aimed at the possibly incompatible reagents (organic hydroperoxide and organic, color-forming indicator) by stabilizing them prevent rapid mixing with one another. Di- and trimorpholide phosphates are primarily means to prevent the reproduction of insects. Because of her Their production is dangerous and requires handling with great responsiveness utmost care. The amine salts of organic hydroperoxides are highly volatile, so that test units containing such compounds are readily available in may affect other test units located in their vicinity. Since boric acid ester can be used in combination with dimethyl sulfoxide, these two compounds containing test units similarly stored in their vicinity Affect test units. Thus, the stabilizers used so far leave still much to be desired. In the case of microencapsulation of organic hydroperoxides is disadvantageous that the microcapsules are so rigid with aging that the Reactivity impaired and the reaction in the test unit uneven which causes uneven color formation to occur.

Da, wie bereits ausgeführt, die üblichen Reagentien und Testeinheiten instabil sind, kam es bei ihrer Verwendung häufig vor, daß die in den Testeinheiten gebildeten Farben nicht mehr genau unterscheidbar sind.There, as already mentioned, the usual reagents and test units are unstable, it often happened when using them that in the test units formed colors are no longer exactly distinguishable.

Der Erfindung lag die Aufgabe zugrunde, eine neuartige und stabile Testeinheit zum einfachen Nachweis von okkultem Blut in Körperfluiden, die sich durch eine verbesserte Farbempfindlichkeit auszeichnet, zu entwikkeln.The invention was based on the object of a novel and stable Test unit for the simple detection of occult blood in body fluids that are characterized by improved color sensitivity.

Gegenstand der Erfindung ist somit eine Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut, d. h. einer peroxidaseaktiven Substanz, in Körperfluiden, die durch Imprägnieren eines Substrats mit einem organischen Hydroperoxid, einem Chromogen, einem Puffer und einem Stabilisator hergestellt wurde und welche dadurch gekennzeichnet ist, daß sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel: worin bedeuten: m eine ganze Zahl von 1 bis 5; R1 einen Methylrest, einen kurzkettigen Alkoxyrest, ein Halogenatom oder ein Wasserstoffatom und X einen Rest der Formeln mit R2 und jeweils gleich einem Alkylrest mit soder 2 Kohlenstoffatom(en), worin m, R1, R2 und R3 die angegebene Bedeutung besitzen, R4 für einen Alkylenrest mit 1 bis 6 Kohenstoffatom(en) steht und n = 0 oder 1, worin m, R1 und R4 die angegebene Bedeutung besitzen, oder worin R2 und R3 die angegebene Bedeutungen besitzen, enthält.The invention thus provides a test unit for the detection of occult blood, ie a peroxidase-active substance, in body fluids, which was produced by impregnating a substrate with an organic hydroperoxide, a chromogen, a buffer and a stabilizer and which is characterized in that it is used as a Stabilizer at least one compound of the general formula: wherein: m is an integer from 1 to 5; R1 is a methyl radical, a short-chain alkoxy radical, a halogen atom or a hydrogen atom and X is a radical of the formulas with R2 and each equal to an alkyl radical with s or 2 carbon atom (s), where m, R1, R2 and R3 have the meaning given, R4 is an alkylene radical with 1 to 6 carbon atom (s) and n = 0 or 1, wherein m, R1 and R4 have the meaning given, or in which R2 and R3 have the meanings given.

Bei den erfindungsgemäß verwendbaren Stabilisatoren der Formel (I) stehen vorzugsweise m für 1, R1 für einen Methylrest, einen Alkoxyrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatom(en), insbesondere einen Methoxyrest, oder ein Brom-, Chlor-oder Wasserstoffatom und X für einen Rest der angegebenen Formeln, wobei R4 vorzugsweise einen Alkylenrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen darstellt. Die betreffenden Stabilisatoren sind wasser- oder alkohollöslich. Zweckmäßigerweise sollten sie einen Fp von mindestens 450C aufweisen, um thermisch beständig zu sein.In the case of the stabilizers of the formula (I) which can be used according to the invention are preferably m for 1, R1 for a methyl radical, an alkoxy radical with 1 to 6 carbon atom (s), in particular a methoxy radical, or a bromine, chlorine or Hydrogen atom and X for a radical of the formulas given, where R4 is preferably represents an alkylene radical having 2 to 6 carbon atoms. The stabilizers in question are soluble in water or alcohol. Appropriately, they should have an Fp of at least 450C in order to be thermally resistant.

Wenn in der angegebenen Formel (I) X für einen Rest der Formel steht, kommt dem betreffenden Stabilisator die allgemeine Formel (II) worin in, R1, R2 und R3 die angegebene Bedeutung besitzen, zu.If in the given formula (I) X is a radical of the formula the stabilizer in question has the general formula (II) wherein in, R1, R2 and R3 have the meaning given, to.

Wenn in der angegebenen Formel (1) X für einen Rest der Formel steht, kommt dem betreffenden Stabilisator die allgemeine Formel (III) worin m und n, R1, R2, R3 und R4 die angegebene Bedeutung besitzen, zu.If in the given formula (1) X is a radical of the formula the stabilizer in question has the general formula (III) wherein m and n, R1, R2, R3 and R4 have the meaning given, to.

Wenn in der angegebenen Formel (I) X für einen Rest der Formel steht, kommt dem betreffenden Stabilisator die allgemeine Formel (IV) worin m, R1 und R4 die angegebene Bedeutung besitzen, zu.If in the given formula (I) X is a radical of the formula the stabilizer in question has the general formula (IV) wherein m, R1 and R4 have the meaning given, to.

Wenn in der angegenben Formel (I) X für einen Rest der Formel steht, kommt dem betreffenden Stabilisator die allgemeine Formel (V) worin m, R1, R2 und R3 die angegebene Bedeutung besitzen, zu.If in the given formula (I) X is a radical of the formula the stabilizer in question is given the general formula (V) wherein m, R1, R2 and R3 have the meaning given, to.

Tpyische Beispiele für Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sind p-Brombenzyldimethylamid, p-Chlorbenzoyldimethylamid, Benzoyldimethylamid, Anisoyldimethylamid, p-Brombenzoyldiethylamid, p-Chlorbenzoylethylamid, N,N'-Dibenzyl-N,N'-dimethylhydrazin, N,N'-Dibenzyl-N,N'-diethylhydrazin, N,N' -Ditoluoyl-N,N' -dimethylhydrazin, N,N'-Ditoluoyl-N,N'-diethylhydrazin, N,N' -Dibrombenzoyl-N,N'-dimethylhydrazin, N,N'-Dichlorbenzoyl-N,N'-dimethylhydrazon, N,N'-Dibrombenzoyl-N,N'-diethylhydrazin, N,N'-Dianisoyl-N,N'-dimethylhydrazin, N,N'-Dianisoyl-N,N'-diethylhydrazin, N,N' -Dibenzoyl-N,N' -diethylethylendiamin, N,N'-Dibenzoyl-N,N'-dimethylethylendiamin, N,N'-Dibenzoyl-N,N'-diethylhexamethylendiamin, N,N'-Dibenzoyl-N,N'-dimethylhexamethylendiamin, N ,N' -Dichlorbenzoyl-N ,N' - diethylhexamethylendiamin, N ,N' -Dibrombenzoyl-N ,N'-diethylhexamethylendiamin, N,N'-Dianisoyl-NN'-diethylhexamethylendiamin, N,N'-Ditoluoyl-N,N'-diethylhexamethr lendiamin N,N'-Dibenzoyldiethylendiamin, N,N'-Dibrombenzoyl-N,N' -diethylendiamin, N,N' -Ditoluoyl-N,N' -diethylendiamin, N,N-Dianisoyl-N,N'-diethylendiamin, p-Toluolsulfonyl-N-diethylamid, p-Brombenzolsulfonyl-N-dimethylamid p-Methoxybenzolsulfonyl-N-diethylamid und N,N' -Dimethylbenzolsulfonamid.Typical examples of compounds of general formula (I) are p-bromobenzyldimethylamide, p-chlorobenzoyldimethylamide, benzoyldimethylamide, anisoyldimethylamide, p-bromobenzoyldiethylamide, p-chlorobenzoylethylamide, N, N'-dibenzyl-N, N'-dimethylhydrazine, N, N'-dibenzyl-N, N'-diethylhydrazine, N, N '-ditoluoyl-N, N'-dimethylhydrazine, N, N'-ditoluoyl-N, N'-diethylhydrazine, N, N'-dibromobenzoyl-N, N'-dimethylhydrazine, N, N'-dichlorobenzoyl-N, N'-dimethylhydrazone, N, N'-dibromobenzoyl-N, N'-diethylhydrazine, N, N'-dianisoyl-N, N'-dimethylhydrazine, N, N'-dianisoyl-N, N'-diethylhydrazine, N, N'-dibenzoyl-N, N'-diethylethylenediamine, N, N'-dibenzoyl-N, N'-dimethylethylenediamine, N, N'-dibenzoyl-N, N'-diethylhexamethylenediamine, N, N'-dibenzoyl-N, N'-dimethylhexamethylenediamine, N, N '-Dichlorobenzoyl-N, N' - diethylhexamethylenediamine, N, N ' -Dibromobenzoyl-N, N'-diethylhexamethylenediamine, N, N'-dianisoyl-NN'-diethylhexamethylenediamine, N, N'-ditoluoyl-N, N'-diethylhexamethrlenediamine N, N'-dibenzoyldiethylenediamine, N, N'-dibromobenzoyl-N, N ' -diethylenediamine, N, N '-ditoluoyl-N, N' -diethylenediamine, N, N-dianisoyl-N, N'-diethylenediamine, p-toluenesulfonyl-N-diethylamide, p-bromobenzenesulfonyl-N-dimethylamide, p-methoxybenzenesulfonyl-N-diethylamide and N, N '-dimethylbenzenesulfonamide.

Im folgenden wird die Herstellung des erfindungsgeinäß als Stabilisator in einer Testeinheit der fraglichen Art verwendbaren N,N'-Dibenzoyl-N,N'-diethylethylendiamins näher erläutert: Herstellungsbeispiel 11,5 ml Benzoylchlorid werden in 50 ml Chloroform gelöst. Ferner wird eine Lösung von 7,1 ml N,N'-Diethylethylendiamin in 50 ml Chloroform zubereitet. Danach werden die beiden Lösungen unter Kühlen und schwachem Mischen miteinander vereinigt. Das erhaltene Gemisch wird mit 25 ml einer wäßrigen 20 %igen Natriumcarbonatlösung versetzt, worauf das Ganze 1 h lang auf eine Temperatur von 600C erwärmt und danach mit Hilfe einer Verdampfungsvorrichtung vakuumgetrocknet wird. Zur Entfernung des vorhandenen Salzes wird das Reaktionsprodukt erneut in Chloroform gelöst, worauf die hierbei erhaltene Lösung mit Hilfe einer Verdampfungsvorrichtung getrocknet wird. Letztlich erhält man 14,2 g N,N'-Dibenzoyl-N,N'-diethylethylendiamin.In the following, the production of the erfindungsgeinäß is used as a stabilizer N, N'-dibenzoyl-N, N'-diethylethylenediamine which can be used in a test unit of the type in question Explained in more detail: Preparation example 11.5 ml of benzoyl chloride are in 50 ml of chloroform solved. A solution of 7.1 ml of N, N'-diethylethylenediamine in 50 ml of chloroform is also used prepared. Thereafter, the two solutions are added with cooling and gentle mixing united with each other. The mixture obtained is with 25 ml of an aqueous 20% Sodium carbonate solution added, whereupon the whole thing for 1 hour to a temperature of 600C and then vacuum-dried using an evaporation device will. To remove the salt present, the reaction product is again in Dissolved chloroform, whereupon the resulting solution with the help of an evaporator is dried. Ultimately, 14.2 g of N, N'-dibenzoyl-N, N'-diethylethylenediamine are obtained.

Beispiele erfindungsgemäß verwendbarer organischer Hydroperoxide sind 2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid, Cumolhydroperoxid, 2,5-Dimethylhexanon-2,5-dihydroperoxid, Diisopropylbenzolhydroperoxid, 6-Butylhydroperoxid, p-Menthanhydroperoxid und 4-Methylphenylisopropylhydroperoxid, vorzugsweise (wegen ihrer relativ niedrigen Zersetzungsgeschwindigkeit) 2, 5-Dimethylhexanon-2,5-dihydroperoxid, Cumolhydroperoxid und 2,5-Dimethylhexanon-2,5-dihydroperoxid.Examples of organic hydroperoxides which can be used according to the invention are 2,5-dimethylhexane-2,5-dihydroperoxide, cumene hydroperoxide, 2,5-dimethylhexanone-2,5-dihydroperoxide, Diisopropylbenzene hydroperoxide, 6-butyl hydroperoxide, p-menthane hydroperoxide and 4-methylphenylisopropyl hydroperoxide, preferably (because of their relatively low rate of decomposition) 2,5-dimethylhexanone-2,5-dihydroperoxide, Cumene hydroperoxide and 2,5-dimethylhexanone-2,5-dihydroperoxide.

Erfindungsgemäß verwendbare Chromogene, d. h. Verbindungen, die bei der Oxidation Farbstoffe bilden und als sog. 1'Oxidationsindikatoren11 bezeichnet werden, sind beispielsweise o-Toluidin, Benzidin, 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin, 2,7-Diaminofluoren, Mischungen der genannten Verbindungen in wechselnden Mengen, Guaiakole, verschieden substituierte Phenylendiamine, Pyridinderivate, substituierte Azine und Leucomalachitgrün.Chromogens which can be used according to the invention, d. H. Connections at form dyes during oxidation and are referred to as so-called 1'Oxidationsindikatoren11 are, for example, o-toluidine, benzidine, 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine, 2,7-diaminofluorene, mixtures of the compounds mentioned in varying amounts, Guaiacols, variously substituted phenylenediamines, pyridine derivatives, substituted Azines and leucomalachite green.

Wenn die Testeinheit in ein Körperfluidum eingetaucht wird, muß deren pH-Wert im Bereich von 4 bis 8, vorzugsweise von 5 bis 7, gehalten werden. Um einen solchen PH-Wert in der Testeinheit aufrecht zu erhalten, wird ihr ein Puffer einverleibt. Beispiele für erfindungsgemäß verwendbare Puffer sind Zitronensäure/Natriuncitrat-, Weinsäure/Natriumtartrat-, Xpfelsäure/Borax-, Kaliumhydrogenphthalat/Dikaliumphthalat- und Natriumhydrogensuccinat/Dinatriumsuccinat-Puffer.If the test unit is immersed in a body fluid, its pH in the range from 4 to 8, preferably from 5 to 7, are maintained. To one To maintain such a pH in the test unit, a buffer is incorporated into it. Examples of buffers that can be used according to the invention are citric acid / sodium citrate, Tartaric acid / sodium tartrate, malic acid / borax, potassium hydrogen phthalate / dipotassium phthalate and sodium hydrogen succinate / disodium succinate buffer.

Damit das Körperfluidum gleichmäßig in die Testeinheit eindringen kann, ist es zweckmäßig, der Testeinheit ein Netzmittel einzuverleiben. Typische verwendbare Netzmittel sind oberflächenaktive Mittel, wie Alkylsulfate, z.So that the body fluid penetrates evenly into the test unit it is useful to incorporate a wetting agent into the test unit. Typical useful wetting agents are surface active agents such as alkyl sulfates, e.g.

B. Natriumlaurylsulfat, Natriumdodecylsulfat und Natrium tetradecylsulfat, Alkylbenzolsulfonate, wie Natrium- dodecylbenzolsulfonat, und die Alkylsulfosuccinate, wie Natriumdioctylsulfosuccinat und Natriumdiheptylsulfosuccinat.B. sodium lauryl sulfate, sodium dodecyl sulfate and sodium tetradecyl sulfate, Alkylbenzenesulfonates, such as sodium dodecylbenzenesulfonate, and the Alkyl sulfosuccinates such as sodium dioctyl sulfosuccinate and sodium diheptyl sulfosuccinate.

Gegebenenfalls kann eine erfindungsgemäße Testeinheit auch ein Mittel zur Steigerung der Peroxidaseaktivität von Hämoglobin enthalten. Typische derartige Mittel sind Chinoline und dessen Derivate, z. B. Chinin, Cinchonin, 6-Methoxychinolin, Chinaldin, 8-Amino-6-methoxychinolin, 2-Chinolinol, Isochinolin, Benzofchinolin und 3-Aminochinolin. Infolge der Anwesenheit eines solchen Peroxidaseverstärkungsmittels in der Testeinheit wird in der Regel die Reaktionsgeschwindigkeit der Oxidation beschleunigt und die Empfindlichkeit der Testeinheit erhöht.Optionally, a test unit according to the invention can also be an agent to increase the peroxidase activity of hemoglobin. Typical such Means are quinolines and their derivatives, z. B. quinine, cinchonine, 6-methoxyquinoline, Quinaldine, 8-amino-6-methoxyquinoline, 2-quinolinol, isoquinoline, benzofquinoline and 3-aminoquinoline. Due to the presence of such a peroxidase enhancing agent in the test unit is usually the reaction rate of the oxidation accelerated and the sensitivity of the test unit increased.

Damit die Reagentien nicht aus der Testeinheit aus schwitzen", kann ihr ein Haftmittel einverleibt werden.So that the reagents do not sweat out of the test unit an adhesive can be incorporated into it.

Geeignete derartige Mittel sind beispielsweise Polymerisate, wie Polyvinylalkohol, Polyvinylpyrrolidon, Polyethylenglykol, Polyacrylate, Polyacrylamid, Poly(hydroxyethylmethacrylat), Poly (hydroxyethylacrylat) und Carboxymethylcellulose sowie Gelatine und Gummiarabikum.Suitable such agents are, for example, polymers such as polyvinyl alcohol, Polyvinylpyrrolidone, polyethylene glycol, polyacrylates, polyacrylamide, poly (hydroxyethyl methacrylate), Poly (hydroxyethyl acrylate) and carboxymethyl cellulose, as well as gelatin and gum arabic.

Jeweils bezogen auf 100 Gew.-Teile des organischen Hydroperoxids enthält eine erfindungsgema'ße Testeinheit 1 bis 10000, vorzugsweise 100 bis 1000 Gew.-Teil(e) Chromogen, 10 bis 10000, vorzugsweise 100 bis 1000 Gew.-Teile Puffer, 10 bis 10000, vorzugsweise 100 bis 1000 Gew.-Teile Stabilisator, 0 bis 1000, vorzugsweise 10 bis 100 Gew.-Teil(e) Netzmittel, 0 bis 10000, vorzugsweise 100 bis 1000 Gew.-Teil (e) Peroxidaseaktivitätverstärkungsmittel und 0 bis 10000, vorzugsweise 100 bis 1000 Gew.-Teil(e) Haftmittel. Die Gesamtmenge der Reagentien kann bis zu 50, vorzugsweise bis zu 10 Gew.-%, bezogen auf das Substrat, ausmachen.In each case based on 100 parts by weight of the organic hydroperoxide contains a test unit according to the invention 1 to 10000, preferably 100 to 1000 part (s) by weight Chromogenic, 10 to 10,000, preferably 100 to 1000 parts by weight of buffer, 10 to 10,000, preferably 100 to 1000 parts by weight of stabilizer, 0 to 1000, preferably 10 to 100 part (s) by weight of wetting agent, 0 to 10,000, preferably 100 to 1000 part (s) by weight Peroxidase activity enhancer and 0 to 10,000, preferably 100 to 1,000 Part (s) by weight of adhesive. The total amount of reagents can be up to 50, preferably up to 10% by weight, based on the substrate.

Die verschiedenen Reagentien werden zunächst in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Benzol, Toluol, Methanol, Ethanol, Chloroform oder Wasser, gelöst, worauf die erhaltene Lösung zum Tränken des Substrats verwendet wird.The various reagents are first dissolved in a suitable solvent, such as benzene, toluene, methanol, ethanol, chloroform or water, dissolved, whereupon the obtained solution is used for impregnating the substrate.

So werden beispielsweise ein organischens Hydroperoxid und ein Stabilisator in einem Lösungsmittel gelöst, worauf das Substrat mit der erhaltenen Lösung durchtränkt wird. Danach wird das feuchte Substrat getrocknet. Nun werden in einem Lösungsmittel ein Haftmittel und ein Puffer gelöst, worauf das getrocknete Substrat mit der Lösung gründlich durchfeuchtet und anschließend getrocknet wird. -Schließlich werden in einem geeigneten Lösungsmittel ein Chromogen und ein Peroxidaseaktivitätverstärkungsmittel gelöst. Mit dieser Lösung wird das trockene Substrat durchfeuchtet und schließlich getrocknet, wobei letztlich eine zum Nachweis von okkultem Blut geeignete Testeinheit erhalten wird.For example, an organic hydroperoxide and a stabilizer are used dissolved in a solvent, whereupon the substrate is impregnated with the resulting solution will. The moist substrate is then dried. Well be in a solvent an adhesive and a buffer dissolved, followed by the dried substrate with the solution is thoroughly moistened and then dried. -Finally be in a suitable solvent, a chromogen and a peroxidase activity enhancer solved. With this solution the dry substrate is moistened and finally dried, with ultimately a test unit suitable for the detection of occult blood is obtained.

Als Substrat eignen sich Filterpapier, Glasfasern oder aus Kunststoffen hergestellte Gewirke oder Gestricke.Filter paper, glass fibers or plastics are suitable as a substrate manufactured knitted or crocheted fabrics.

Selbstverständlich eignen sich auch noch andere Substrate, sofern sie nicht mit den Reagentien reagieren oder sich in diesen lösen und absorptionsfähig sind.Of course, other substrates are also suitable, provided that they do not react with or dissolve in the reagents and are absorbent are.

Eine erfindungsgemäße Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut wird etwa 1 s lang in das Körperfluidum getaucht, danach herausgenommen und an der Luft 60 s lang liegen gelassen. Danach kann die Testeinheit ausgewertet werden. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich der auf der Testeinheit gebildeten Farbe mit einer Standardfarbtabelle zur Auffindung der jeweils passenden Farbe.A test unit according to the invention for the detection of occult blood is immersed in the body fluid for about 1 second, then removed and allowed to air Left for 60 seconds. The test unit can then be evaluated. The evaluation is done by comparing the color formed on the test unit with a standard color table to find the matching color.

Die Konzentration an okkultem Blut in dem jeweiligen Körperfluidum ergibt sich aus der Farbtiefe im Vergleich mit der Standardfarbtabelle.The concentration of occult blood in the respective body fluid results from the color depth compared with the standard color table.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher veranschaulichen.The following examples are intended to illustrate the invention in more detail.

Beispiel 1 Durch Vermischen der folgenden Bestandteile: 2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid 1,5 g Natriumdioctylsulfosuccinat 1,0 g p-Brombenzoyldimethylamin 10 g Methanol 100 ml wird eine Lösung A zubereitet. Mit der erhaltenen Lösung A wird durch Eintauchen ein Filterpapier gründlich durchfeuchtet. Nach dem Herausnehmen des Filterpapiers aus der Lösung A wird es 20 min lang in einem Ofen bei einer Temperatur von 400C getrocknet.Example 1 By mixing the following ingredients: 2,5-dimethylhexane-2,5-dihydroperoxide 1.5 g sodium dioctyl sulfosuccinate 1.0 g p-bromobenzoyldimethylamine 10 g methanol A solution A is prepared for 100 ml. The obtained solution A is made by immersion thoroughly moistened a filter paper. After removing the filter paper from solution A it becomes in an oven at a temperature of 400C for 20 minutes dried.

Durch Vermischen der folgenden Bestandteile: Gelatine 2,0 g Zitronensäure 2,5 g Natriumcitrat 7,5 g Wasser 100 ml wird eine Lösung B zubereitet. Das mit der Lösung A imprägnierte und getrocknete Filterpapier wird nun in die Lösung B getaucht, danach aus der Lösung t herausgenommen und schließlich 50 min lang in einem Ofen bei einer Temperatur von 400C getrocknet.By mixing the following ingredients: gelatin 2.0 g citric acid 2.5 g sodium citrate 7.5 g water 100 ml a solution B is prepared. That with the Solution A impregnated and dried filter paper is now immersed in solution B, then taken out of solution t and finally in an oven for 50 minutes dried at a temperature of 400C.

Schließlich wird durch Vermischen der folgenden Bestandteile: o-Toluidin 0,3 g 3-Aminochinolin 0,3 g Benzol 100 ml eine Lösung C zubereitet. Das mit den Lösungen A und B imprägnierte und getrocknete Filterpapier wird nun noch mit der Lösung C getränkt. Nach dem Herausnehmen aus der Lösung C wird das Filterpapier 10 min lang in einem Ofen bei einer Temperatur von 500C getrocknet. Hierbei erhält man eine Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut.Finally, by mixing the following ingredients: o-Toluidine 0.3 g 3-aminoquinoline 0.3 g benzene 100 ml a solution C prepared. The filter paper impregnated with solutions A and B and dried is now still soaked with the solution C. After taking it out of solution C, that becomes Filter paper dried for 10 minutes in an oven at a temperature of 500C. A test unit for the detection of occult blood is obtained here.

Beispiel 2 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch in der Lösung A als Stabilisator anstelle des p-Brombenzoyldimethylamids N,N'-Dibenzoyl-N,N'-dimethylhydrazin verwendet wird.Example 2 Example 1 is repeated, but in the solution A as a stabilizer instead of the p-bromobenzoyldimethylamide N, N'-dibenzoyl-N, N'-dimethylhydrazine is used.

Hierbei erhält man eine Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut.A test unit for the detection of occult blood is obtained here.

Beispiel 3 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch in der Lösung A als Stabilisator anstelle des p-Brombenzoyldimethylamids N,N'-Dibenzoyl-N,N'-diethylethylendiamin verwendet wird.Example 3 Example 1 is repeated, but in the solution A as a stabilizer instead of the p-bromobenzoyldimethylamide N, N'-dibenzoyl-N, N'-diethylethylenediamine is used.

Beispiel 4 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch in der Lösung A als Stabilisator anstelle des p-Brombenzoyldimethylamids p-Toluolsulfonyl-N-diethylamin verwendet wird.Example 4 Example 1 is repeated, but in the solution A as a stabilizer instead of the p-bromobenzoyldimethylamide p-toluenesulfonyl-N-diethylamine is used.

Beispiel 5 Beispiel 1 wird wiederholt, wobei jedoch in der Lösung A als Stabilisator anstelle des p-Brombenzoyldimethylamids N,N'-Ditoluoyl-N,N'-diethylendiamin verwendet wird.Example 5 Example 1 is repeated, but in the solution A as a stabilizer instead of the p-bromobenzoyldimethylamide N, N'-ditoluoyl-N, N'-diethylenediamine is used.

Beispiel 6 Ein Mörser wird in der angegebenen Reihenfolge mit 100 ml Gummiarabikumschleim (hergestellt durch Zugabe von 200 g Gummiarabikum zu 500 ml siedendem Wasser) und 2 ml einer 5 Gew.-gigen Lösung von Natriumdioctylsulfosuccinat und schließlich mit 5 ml Cumolhydroperoxid beschickt. Danach wird das Gemisch.5 min lang in dem Mörser vermahlen, wobei eine grobe Emulsion erhalten wird.Example 6 A mortar is given 100 in the order given ml gum arabic slime (made by adding 200 g gum arabic to 500 ml of boiling water) and 2 ml of a 5% strength by weight solution of sodium dioctyl sulfosuccinate and finally charged with 5 ml of cumene hydroperoxide. Then the mixture is 5 Mill for minutes in the mortar to obtain a coarse emulsion.

Durch Eintragen von 163 g Natriumcitrat und 37 g Zitronensäure in 1500 ml siedenden Wasserswird eine Citratpufferlösung zubereitet. Diese wird mit 0,7 g Gelatine gemischt.By adding 163 g of sodium citrate and 37 g of citric acid in A citrate buffer solution is prepared 1500 ml of boiling water. This is with 0.7 g gelatin mixed.

50 ml der erhaltenen Puffer/Gelatine-Mischung werden nun gründlich mit der groben Emulsion verrührt, worauf unter kräftigem Rühren 1 ml einer 1 %igen Dialdehydstärkedispersion zugegeben wird. Schließlich werden noch 12 ml einer wäßrigen 5 %igen Natriumlauratlösung zugesetzt, worauf das Ganze in einem von Hand betätigten Homogenisator homogenisiert wird.50 ml of the buffer / gelatin mixture obtained are now thoroughly stirred with the coarse emulsion, whereupon 1 ml of a 1% strength while stirring vigorously Dialdehyde starch dispersion is added. Finally, 12 ml of an aqueous 5% sodium laurate solution added, whereupon the whole thing operated in one by hand Homogenizer is homogenized.

Unter Rühren werden 50 ml einer in der geschilderten Weise unter Verwendung von 500 ml Wasser, 163 g Natriumcitrat und 37 g Zitronensäure zubereiteten Pufferlösung zu der homogenisierten Masse zugegeben. In die hierbei erhaltene Emulsion wird zum Imprägnieren ein dünnes Blatt Papier eingetaucht. Das nasse Stück Papier wird 24 h lang in einem Ofen bei einer Temperatur von 75° bis 800C getrocknet. Schließlich wird das dünne Stück Papier in eine Lösung von 320 mg o-Toluidin in 16 ml Chloroform eingetaucht. Zum Verdunsten des überschüssigen Chloroforms wird das nasse Papier schwach er- wärmt. Auf diese Weise erhält man eine bekannte Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut.With stirring, 50 ml are used in the manner described buffer solution prepared from 500 ml of water, 163 g of sodium citrate and 37 g of citric acid added to the homogenized mass. In the emulsion obtained here is for Impregnate a thin sheet of dipped paper. The wet piece of paper turns 24 dried for hours in an oven at a temperature of 75 ° to 800C. In the end is the thin piece of paper in a solution of 320 mg of o-toluidine in 16 ml of chloroform immersed. The wet paper is used to evaporate the excess chloroform weaker- warms. In this way a known test unit is obtained for the detection of occult blood.

Beispiel 7 Die gemäß den Beispielen 1 bis 5 erhaltenen erfindungsgemäßen Testeinheiten und die gemäß Beispiel 6 hergestellte Vergleichstesteinheit werden bei 370C liegen gelassen und auf etwaige Veränderungen durch Alterung hin überwacht. Die Ergebnisse finden sich in der folgenden Tabelle. Die Ergebnisse ermöglichen eine Bewertung der verschiedenen Testeinheiten hinsichtlich ihrer Stabilität gegenüber Veränderungen durch Alterung.Example 7 The obtained according to Examples 1 to 5 according to the invention Test units and the comparative test unit produced according to Example 6 are used left at 370C and monitored for any changes due to aging. The results can be found in the following table. Make the results possible an evaluation of the various test units with regard to their stability Changes due to aging.

Tabelle Änderung des Aussehens infolge Alterung nach nach nach nach Testeinheit 1 Woche 2 Wochen 3 Wochen 4 Wochen des Bei- keine An- keine An- keine An- schwache Änderung spiels 1 derung derung derung nach Braun des Bei- " " " keine Anderung spiels 2 eine erung des Bei- " " " 1 spiels 3 des Bei- " " " Il schwache Änderung spiels 4 nach Braun des Bei- " ist " keine Änderung spiels 5 des Vergleichs- " wird wird wird beispiels 6 schwarz schwarz schwarz Aus der Tabelle geht hervor, daß die erfindungsgemäßen Testeinheiten der Beispiele 1 bis 5 während des 3-wöchigen Liegenlassens überhaupt keine änderung erfahren. Im Gegensatz dazu wird die Vergleichstesteinheit des Vergleichsbeispiels 6 bereits nach 2-wöchigem Liegenlassen schwarz. Dies zeigt, daß lediglich die erfindungsgemäßen Testeinheiten eine hervorragende Stabilität besitzen. Table change in appearance due to aging after after after after Test unit 1 week 2 weeks 3 weeks 4 weeks of no no no no no Slight change in game 1 change change according to Braun's example "" "none Change in game 2 a change in example "" "1 in game 3 in example" "" Il weak Change game 4 according to Braun the example "is" no change game 5 of the comparison "is will is for example 6 black black black The table shows that the test units according to the invention of Examples 1 to 5 during the 3-week Not having experienced any change at all. In contrast, the comparative test unit of Comparative Example 6 black after just 2 weeks of lying there. This shows, that only the invention Test units an excellent Have stability.

Wenn die erfindungsgemäßen Testeinheiten zum Testen von Fluiden, z. B. von Urinproben mit okkultem Blut, verwendet werden, zeigen sie eine stabile Farbbildung.When the test units according to the invention for testing fluids, e.g. B. urine samples with occult blood are used, they show a stable color formation.

Durch die erfindungsgemäße Verwendung mindestens einer Verbindung der allgemeinen Formel (I) als Stabilisator in Kombination mit einem Hydroperoxid, einem Chromogen und einem Puffer, in einer Testeinheit zum Nachweis von okkultem Blut läßt sich deren Stabilität gegen Abbau infolge Alterung merklich verbessern und deren Empfindlichlceit beim Nachweis von okkultem Blut in Körperfluiden erheblich steigern. Beim Inberührunggelangen mit okkultem Blut erfolgt mit Hilfe einer erfindungsgemäßen Testeinheit eine saubere und genaue Farbbildung. Mit Hilfe einer erfindungsgemäßen Testeinheit läßt sich somit ein empfindlicher und genauer Nachweis von okkultem Blut in Körperfluiden führen.By using at least one compound according to the invention of the general formula (I) as a stabilizer in combination with a hydroperoxide, a chromogen and a buffer, in a test unit for the detection of occult The stability of blood against degradation due to aging can be markedly improved and their sensitivity to the detection of occult blood in body fluids is considerable increase. When coming into contact with occult blood is carried out with the aid of a device according to the invention Test unit a clean and accurate color formation. With the help of an inventive Test unit can thus be used for a sensitive and accurate detection of occult Carry blood in body fluids.

Claims (11)

Patentansprüche 1. Testeimheit zum Nachweis von okkultem Blut, d. h. Claims 1. Test unit for the detection of occult blood, d. H. einer peroxidativ wirksamen Substanz, in Körperfluiden , die durch Imprägnieren eines Substrats mit einem organischen Hydroperoxid, einem Chromogen, einem Puffer und einem Stabilisator hergestellt wurde, dadurch gekennzeichnet, daB sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel: worin bedeuten: m eine ganze Zahl von 1 bis 5; R1 einen Methylrest, einen kurzkettigen Alkoxyrest, ein Halogenatom oder ein Wasserstoffatom und X einen Rest der Formeln mit R2 und R3 jeweils gleich einem Alkylrest mit 1 oder 2 Kohlenstoffatom(en), worin m, R11 R2 und R3 die angegebene Bedeutung besitzen, R4 für einen Alkylenrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatom(en) steht und n = 0 oder 1, worin m, R1 und R4 die angegebene Bedeutung besitzen, oder worin R2 und R3 die angegebene Bedeutungen besitzen7 enthält.a peroxidatively active substance in body fluids which was produced by impregnating a substrate with an organic hydroperoxide, a chromogen, a buffer and a stabilizer, characterized in that it contains at least one compound of the general formula as a stabilizer: wherein: m is an integer from 1 to 5; R1 is a methyl radical, a short-chain alkoxy radical, a halogen atom or a hydrogen atom and X is a radical of the formulas with R2 and R3 each equal to an alkyl radical with 1 or 2 carbon atom (s), in which m, R11, R2 and R3 have the meaning given, R4 is an alkylene radical with 1 to 6 carbon atom (s) and n = 0 or 1, wherein m, R1 and R4 have the meaning given, or in which R2 and R3 have the meanings given7. 2. Testeinheit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der angegebenen Formel enthält, worin bedeuten: m = 1, R2 einen Methylrest, einen Methoxyrest, ein Bromatom, ein Chloratom oder ein Wasserstoffatom und R4 einen Alkylenrest mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen.2. Test unit according to claim 1, characterized in that it is as Stabilizer contains at least one compound of the formula given, in which: m = 1, R2 is a methyl radical, a methoxy radical, a bromine atom, a chlorine atom or represents a hydrogen atom and R4 represents an alkylene radical having 2 to 6 carbon atoms. 3. Testeinheit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der angegebenen Formel enthält, worin X für einen Rest der Formel mit R2 und R3 in der angegebenen Bedeutung steht.3. Test unit according to claim 1, characterized in that it contains at least one compound of the formula given as stabilizer, in which X is a radical of the formula with R2 and R3 has the meaning given. 4. Testeinheit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der angegebenen Formel enthält, worin X für einen Rest der Formel mit m, R1, R2, R3 und R4 in der angegebenen Bedeutung steht.4. Test unit according to claim 1, characterized in that it contains at least one compound of the formula given as stabilizer, in which X is a radical of the formula with m, R1, R2, R3 and R4 in the meaning given. 5. Testeinheit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der angegebenen Formel enthält, worin X für einen Rest der Formel mit m, R1 und R4 in der angegebenen Bedeutung steht.5. Test unit according to claim 1, characterized in that it contains at least one compound of the formula given as stabilizer, in which X is a radical of the formula with m, R1 and R4 in the meaning given. 6. Testeinheit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator mindestens eine Verbindung der angegebenen Formel enthält, worin X für einen Rest der Formel mit R2 und R3 in der angegebenen Bedeutung steht.6. Test unit according to claim 1, characterized in that it contains at least one compound of the formula given as stabilizer, in which X is a radical of the formula with R2 and R3 has the meaning given. 7. Testeinheit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie zusätzlich ein Netzmittei und ein Verstärkungsmittel für die Peroxidaseaktivität enthält 7. Test unit according to claim 1, characterized in that it additionally contains a wetting agent and an enhancing agent for peroxidase activity 8. Testeinheit nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß sie zusätzlich ein Haftmittel enthält.8th. Test unit according to claim 7, characterized in that it additionally contains an adhesive contains. 9. Testeinheit nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator p-Brombenzoyldimethylamid, N,N'-Dibenzoyl-N,N'-diethylethylendiamin, p-Toluolsulfonyl-N-diethylamid oder N,N'-Ditoluoyl-N,N'-diethylendiamin enthält. 9. Test unit according to claim 2, characterized in that it is used as Stabilizer p-bromobenzoyldimethylamide, N, N'-dibenzoyl-N, N'-diethylethylenediamine, contains p-toluenesulfonyl-N-diethylamide or N, N'-ditoluoyl-N, N'-diethylenediamine. 10. Testeinheit nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß sie als organisches Hydroperoxid 2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid, Cumolhydroperoxid und/oder 2,5-Dimethylhexanon-2,5-dihydroperoxid enthält.10. Test unit according to claim 9, characterized in that it is as organic hydroperoxide 2,5-dimethylhexane-2,5-dihydroperoxide, cumene hydroperoxide and / or 2,5-dimethylhexanone-2,5-dihydroperoxide. 11. Testeinheit nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß sie als organisches Hydroperoxid 2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid enthält.11. Test unit according to claim 10, characterized in that it contains 2,5-dimethylhexane-2,5-dihydroperoxide as organic hydroperoxide.
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