DE2923957A1

DE2923957A1 - REFERENCE CONTROL REAGENT FOR THE HEMATOLOGICAL MULTIPLE ANALYSIS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF

Info

Publication number: DE2923957A1
Application number: DE19792923957
Authority: DE
Inventors: Douglas Armstrong; James T Hutchisson; Alan H Runck
Original assignee: Coulter Electronics Inc
Current assignee: Coulter Electronics Inc
Priority date: 1978-06-15
Filing date: 1979-06-13
Publication date: 1980-01-03
Also published as: AU525932B2; DK248679A; SE7905238L; FR2432172A1; GB2023287A; CA1120835A; IT1117245B; GB2023287B; AU4806779A; ES481548A1; IT7949424A0; NL7904656A; IL57562A0

Description

PatentanwältePatent attorneys

Dlpl.-ing. E. Eder -6 -Dlpl.-ing. E. Eder -6 -

Dipl.- Ing. K. Schieschke
»Mönchen 40, Eli8üae;lutraBe34 Dipl.-Ing.K. Schieschke
»Monks 40, Eli8üae; lutraBe34

COULTER ELECTRONICS, INC, Hi a 1eah/FloridaCOULTER ELECTRONICS, INC, Hi a 1eah / Florida

Bezugskontrollreagenz für die hämatologische Mehr fachanalyse und Verfahren zu dessen HerstellungReference control reagent for the haematological process technical analysis and process for its production

Die Erfindung betrifft ein Bezugskontroi 1reagenz und ein Verfahren zu dessen Herstellung nach dem Oberbegriff des Patentanspruches 1 bzw. 15.The invention relates to a reference control reagent and a method for its production according to the preamble of claim 1 or 15.

Die Erfindung betrifft insbesondere ein stabiles hämatologisches Bezugskontrollreagenz für die üblichen medizinischen diagnostischen Verfahren zur Analyse und zum Testen einer Blutprobe eines Patienten zur Durchführung der üblichen Bestimmungen bezüglich der Blutprobe. Die Erfindung schafft im einzelnen ein Diagnosetest-Kontrollreagenz mit Zusätzen, die dem Kontrollreagenz die Fähigkeit verleihen, die gewünschten Blutplättchen-Parameter der Blutprobe des Patienten und auch die sieben üblichen Bestimmungen oder Parameter bezüglich der Blutprobe zu überwachen. Die Erfindung schafft mit anderen Worten ein einziges hämatologisches Bezugskontrollreagenz, das anwendbar ist zur Überwachung der Genauigkeit und Fehl er frei heit der üblichen hämatologischen Messungen oder Bestimmungen, d.h. der Zahl der roten Blutkörperchen (RBZ),der Zahl der weißen Blutkörperchen (WBZ), des Hämatokrits (HKT), des Hämoglobins (HGB), des mittleren korpuskularen Hämoglobins (MKH), des mittleren korpuskularen Volumens (MKV) und der mittleren korpuskularen Hämoglobinkonzentration (MKHC), und das auch als Kontrollreagenz verwendbar ist zur überwachung der Fehlerfreiheit und Genauigkeit der Messung und Bestimmung der Blutplättchenparameter, etwa der Blutplättchenzählung, des mittleren Blutplättchenvol umens,der Blutplättchenvolumenfraktion (Thrombozytenwert) und der Blutplättchenverteilungsbreite unter VerwendungIn particular, the invention relates to a stable reference hematological control reagent for common medical applications diagnostic method for analyzing and testing a blood sample from a patient to make normal determinations regarding the blood sample. The invention specifically provides a diagnostic test control reagent with additives that give the control reagent the ability to determine the desired platelet parameters of the patient's blood sample and also Monitor the seven common determinations or parameters related to the blood sample. In other words, the invention creates a single reference hematological control reagent that is applicable is used to monitor accuracy and freedom from errors the usual hematological measurements or determinations, i.e. the number of red blood cells (RBC), the number of white blood cells (WBZ), hematocrit (HKT), hemoglobin (HGB), mean corpuscular hemoglobin (MKH), mean corpuscular volume (MKV) and mean corpuscular hemoglobin concentration (MKHC), and that as Control reagent can be used to monitor freedom from errors and accuracy of measurement and determination of platelet parameters such as platelet count, mean platelet volume umens, the platelet volume fraction (platelet count) and the platelet distribution width using

909881/0716 _ _η 909881/0716 _ _η

desselben gesamten Blutprodukts, das für gewöhnlich zur Kontrolle der vorher genannten, üblichen hämatologischen Parame-' ter verwendet wird.of the same total blood product that is usually used as a control the usual hematological parameters mentioned above is used.

Es ist ein übliches medizinisches diagnostisches Vorgehen, eine Blutprobe eines Patienten zu analysieren und zu testen, um bezüglich der Blutprobe gewisse übliche Bestimmungen zu machen. Dieses Vorgehen ist ein wichtiges diagnostisches Werkzeug für den Arzt. Als Ergebnis des modernen technologischen Fortschritts wurden automatisierte Instrumente entwickelt, die eine Blutprobe eines Patienten aufnehmen und diese automatisch und kontinuierlich verarbeiten zur Lieferung der oben als die sieben üblichen Parameter einer Blutprobe beschriebenen Parameter oder Bestimmungen. Ein Instrument, das eine Blutprobe eines Patienten aufnimmt, und diese automatisch und kontinuierlich verarbeitet zur Lieferung dieser sieben angegebenen üblichen Parameter oder Bestimmungen ist in der US-PS 3 549 994 beschrieben. Diese Patentschrift liefert annehmbare Definitionen dieser Paramler und untersucht die bei der Handhabung der Blutprobe zu lösenden Probleme, wenn diese Probe durch das Fluidsystem der Vorrichtung nach dieser Patentschrift gezogen wird.It's a common medical diagnostic practice, one Analyze and test a patient's blood sample to make certain common determinations regarding the blood sample. This approach is an important diagnostic tool for the doctor. As a result of modern technological progress Automated instruments have been developed that take a patient's blood sample and do it automatically and continuously process to provide the parameters or determinations described above as the seven common parameters of a blood sample. An instrument that takes a patient's blood sample and automatically and continuously processes it for use Delivery of these seven noted common parameters or determinations is described in U.S. Patent 3,549,994. This patent specification provides acceptable definitions of these parameters and examines them the problems to be solved in the handling of the blood sample when this sample is passed through the fluid system of the device this patent is drawn.

Die Inhaberin, die Coulter Electronics, Inc., aus Hialeah/Florida, U.S.A., produziert und verkauft andere Blutkörperchenzähl- und -analysierinstrumente, die weniger ausgeklügelt als die Vorrichtung nach der US-PS 3 549 994 sind, die aber so betrieben werden, daß die Zahl der roten und weißen Blutkörperchen, die Hämoglobinkonzentration und deren zusammengestellte Indizes, wie HKT, MKV, MKH und MKHK, bestimmt werden.The owner, Coulter Electronics, Inc., from Hialeah / Florida, U.S.A., manufactures and sells other blood cell counting and analyzing instruments that are less sophisticated than the device according to US-PS 3,549,994, but which are operated so that the number of red and white blood cells, the hemoglobin concentration and their composite indices such as HKT, MKV, MKH and MKHK are determined.

Beim Gebrauch eines derartigen Instruments, auf das gelegentlich unter dem Warenzeichen "COULTER COUNTER" der Firma Coulter Electronics, Inc. Bezug genommen wird, muß ein Mehrzweck-Verdünnungsmittel mit einem Elektrolyt verwendet werden, das die Ausführung der elektronischen Messungen durch das COIiLTER-COUNTER v-i-Instrument ermöglicht. Ein geeignetes Mehrzweck-Verdünnungsmittel für die Blutanalyse durch ein elektronisches Instrument, wie den COULTER-COUNTER®, ist in der US-PS 3 962 125 beschrieben.When using such an instrument, it is sometimes referred to under the trademark "COULTER COUNTER" from Coulter Electronics, Inc. referenced must be a multipurpose diluent be used with an electrolyte that enables the COIiLTER-COUNTER v-i instrument to carry out the electronic measurements enables. A suitable multipurpose diluent for blood analysis by an electronic instrument such as the COULTER-COUNTER® is described in U.S. Patent 3,962,125.

909881/0716909881/0716

Ein geeignetes Reagenz zur Bestimmung der weißen Blutkörperchen und des Hämoglobins in der Blutprobe durch ein schnell arbeitendes automatisches hämatologisches Instrument, etwa den Coulter-Counter ^» ist in der US-PS 3 874 852 beschrieben. Das in dieser Patentschrift beschriebene Reagenz ist ein lysierendes Reagenz zur Umwandlung von Hämoglobin in ein Chromogen zur Durchführung der gewünschten Bestimmungen.A suitable reagent for the determination of white blood cells and hemoglobin in the blood sample by a fast working one automatic haematological instrument such as the Coulter counter Is described in US Pat. No. 3,874,852. That in this The reagent described in the patent is a lysing reagent to convert hemoglobin into a chromogen to make the desired determinations.

Die Coulter Electronics, Inc., hat bisher ein hämatologisches Bezugskontrollreagenz für die Genauigkeit der elektronischen Schätzung der Blutkörperchenwerte geliefert, das zusammen mit den o.a. verdünnenden und lysierenden Reagenzien arbeitet. Ein derartiges Bezugskontroilreaqenz wurde von der Coulter Electronics unter deren Warenzeichen 4C^ geliefert und besteht aus einem aus frischem menschlichem Blut bereiteten hämatologisehen Gesamtblut-BezugskontrolIreagenz. Zur Simulierung von weißen Blutkörperchen wurden fixierte rote Blutkörperchen zugesetzt. Dieses Bezugskontrollreagenz hatte sieben bekannte Blutwerte, die während einer gewünschten Zeitdauer stabil waren. Das Bezugskontrollreagenz wurde bereitet zur Verwendung mit dem COULTER COUNTER^- mit zugehörigen Rechnern für den Hämatokrit für mittleres korpuskulares Volumen und mit Hämoglobinominatoren. Bei Verwendung mit dem oben definierten Blutverdünnungsmittel diente es zur Prüfung der Fehlerfreiheit der Verdünnung, der Zahl der roten Blutkörperchen und der MKV-Hämatokrit-Rechnereichung. Nach dem Zusetzen eines lysierenden Reagenz diente das Bezugskontrollreagenz zur Prüfung der Zahl der weißen Blutkörperchen. Auf diese Weise wurde das hämatologische 4C^- Bezugskontroi 1 reagenz im COULTER-COUNTER ^ verwendet zur elektronischen Schätzung der roten und weißen Blutkörperchen, des Hämatokrits, des mittleren korpuskularen Volumens, des Hämoglobins, des mittleren korpuskularen Hämoglobins und der mittleren korpuskularen Hämoglobinkonzentration. Zur Verwendung mit dem COULTER COUNTER ^/standen auch andere hämatologischen Bezugskontrollreagenzien zur Verfügung, die stabilisierte Suspensionen aus menschlichen roten Blutkörperchen enthielten, etwa das Produkt Baker Haern-C vJder J.P. Baker Chemical Corporation oder das Produkt CH-60^der Dade Reagent Company of Hialeah/Florida, U.S.A. Jedoch konnte keines dieser genannten hämatologischen Kontrol1reagenzien zum Testen der Genauigkeit derCoulter Electronics, Inc., previously had a hematology Reference control reagent for the accuracy of the electronic Estimation of blood cell counts supplied, which works in conjunction with the above-mentioned diluting and lysing reagents. A such reference control agent was made by Coulter Electronics supplied under their trademark 4C ^ and consists of a Reference whole blood hematological control reagent prepared from fresh human blood. Fixed red blood cells were added to simulate white blood cells. This The reference control reagent had seven known blood counts taken during were stable for a desired period of time. The reference control reagent was prepared for use with the COULTER COUNTER ^ - with associated calculators for the hematocrit for medium corpuscular tissue Volume and with hemoglobinominators. When used with the blood thinning agent defined above, it was used for testing the accuracy of the dilution, the number of red blood cells and the MKV hematocrit calculation. After adding the reference control reagent was used for a lysing reagent Checking the number of white blood cells. That way it was the haematological 4C ^ reference control 1 reagent in the COULTER-COUNTER ^ used for electronic estimation of the red and white blood cells, hematocrit, mean corpuscular Volume, hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin, and mean corpuscular hemoglobin concentration. Other haematological ones were available for use with the COULTER COUNTER ^ / Reference control reagents are available containing stabilized human red blood cell suspensions, for example the product Baker Haern-C vJder J.P. Baker Chemical Corporation or the product CH-60 ^ of the Dade Reagent Company of Hialeah / Florida, U.S.A. However, none of these could be named haematological control reagents for testing the accuracy of the

99ββ1/071ΰ99ββ1 / 071ΰ

Messungen der Blutplättchenparameter verwendet werden. Folglich mußte zur Durchführung derartiger Bestimmungen eine gesonderte' Kontrolle zur überwachung der Blutplättchenparameter durchgeführt werden. Mit anderen Worten, es mußte eine gesonderte Kontrolle für die Blutplättchenbestimmungen durchgeführt werden, wobei die hämatologischen Kontrollreagenzien zur Durchführung der sieben üblichen Messungen oder Parameterbestimmungen nicht bei Blutplättchenkontrol1 funktionen angewendet werden konnten.Measurements of platelet parameters can be used. Consequently In order to carry out such determinations, a separate control had to be carried out to monitor the platelet parameters will. In other words, a separate control had to be carried out for the platelet determinations, the hematological control reagents for performing of the seven common measurements or parameter determinations could not be applied to platelet control functions.

Ferner war die bisherige Blutplättchenzählung unangemessen aufgrund des Mangels an stabilen Blutplättchenkontrollreagenzien mit anderen Blutkomponenten, nämlich roten Blutkörperchen. Somit erzeugte die zunehmende Verfügbarkeit von Instrumenten zur Unterscheidung von Blutplättchen von roten Blutkörperchen und zur automatischen Durchführung von Blutplättchenzählungen einen großen Bedarf an stabilen Kontroll produkten mit Blutplättchen und roten Blutkörperchen.Furthermore, the previous platelet count was inadequate due to the lack of stable platelet control reagents with other blood components, namely red blood cells. Consequently generated the increasing availability of tools for differentiation of platelets from red blood cells and for automatic Performing a large platelet count Need for stable control products with platelets and red blood cells.

Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung eines Bezugskontroi 1reagenz für die hämatologische Mehrfachanalyse und ein Verfahren zu dessen Herstellung, insbesondere unter Vermeidung der oben angegebenen Nachteile des Standes der Technik.The object of the invention is to create a reference control reagent for multiple hematological analysis and a method for its preparation, in particular avoiding the above specified disadvantages of the prior art.

Die Lösung dieser Aufgabe erfolgt erfindungsgemäß durch den Gegenstand des Patentanspruches 1, 8 bzw. 15.According to the invention, this object is achieved by the object of claim 1, 8 or 15.

Vorteilhafte Weiterbildungen der Erfindung sind Gegenstand der Unteransprüche.Advantageous further developments of the invention are the subject of the subclaims.

Das einzige hämatologische Kontrollreagenz der Erfindung hat die Fähigkeit zur Überwachung der Blutplättchenparameter und auch der sieben üblichen Parameter für hämatologische Messungen. Dieses hämatologische Kontrollreagenz hat den Vorteil, daß es das Erfordernis für ein gesondertes Kontrollmaterial zur überwachung der Blutplättchenparameter beseitigt und eine bedeutungsvollere Bestimmung der Blutplättchenparameter dadurch ergibt, daß die möglicherweise störenden roten Blutkörperchen und derenThe only hematological control reagent of the invention has the ability to monitor platelet parameters and also the seven common parameters for hematological measurements. This hematological control reagent has the advantage that there is a need for separate control material for monitoring the platelet parameter eliminated and a more meaningful one Determination of the platelet parameters results in that the possibly troublesome red blood cells and their

909881/0716909881/0716

Metabolite , die normalerweise in Blutproben von Patienten beobachtet werden, im Kontrollmaterial der Erfindung vorliegen. Dies ist insbesondere für Blutplättchenzählungen wichtig, die mit manuellen Methoden unter Verwendung der Licht- oder Phasenmikroskopie durchgeführt werden, wo seitens der Labortechniker höchste Geschicklichkeit erforderlich ist, um die Blutplättchen angemessen von den roten Blutkörperchen und anderen Zellenmaterialien zu unterscheiden. Die Erfindung liefert auch eine Einrichtung zur überwachung dieser Messungen unter Verwendung der Handmethode oder von automatisierten oder halbautomatisierten hämatologisehen Instrumenten für hämatologisehe Messungen zusammen mit einer Einrichtung zum Testen der Genauigkeit der Blutplättchenzählung, des mittleren Blutplättchenvolumens, der Blutplättchenvolumenfraktion (Thrombozytwert) und der Blutplättchenverteilung, wobei dem Bezugskontroi 1reagenz der Erfindung das gesamte Blutprodukt zugrundegelegt wird, das für gewöhnlich zur Kontrolle der üblichen sieben hämatologisehen Parameter verwendet wird.Metabolites normally observed in blood samples from patients will be present in the control material of the invention. This is especially important for platelet counts that with manual methods using light or phase microscopy be carried out where the highest level of skill is required on the part of the laboratory technician to remove the platelets appropriately from red blood cells and other cellular materials to distinguish. The invention also provides a means of monitoring these measurements using them the manual method or by automated or semi-automated hematological instruments for hematological measurements together with a device for testing the accuracy of the platelet count, the mean platelet volume, the Platelet volume fraction (platelet count) and platelet distribution, wherein the reference control 1 reagent of the invention is based on the entire blood product, which for usually to check the usual seven haematological eyes Parameter is used.

Die Erfindung besteht aus einem stabilen Gesamtblut-Kontrol1 reagenz mit Blutplättchen, bereitet durch Zusetzen von frisch gelieferten menschlichen oder tierischen Blutplättchen, die entweder natürlich entnommen oder durch chemische oder physikalische Fixierung konserviert wurden meinem herkömmlichen, im Handel erhältlichen hämatologisehen Kontrol1reagenz für das gesamte Blut, etwa wie das 4C^, Baker Haem-C® oder Dade CH-60 ~ Solche her komm! ichen, im Handel erhältlichen hämatol ogi schei Kontrol 1 reagenzien flir das gesamte Blut werden gemäß der Erfindung durch Hinzufügen von Natriumchlorid und Harnstoff aufbereitet. Das Natriumchlorid und der Harnstoff können dem Gesamtblut-Kontrollreagenz unmittelbar zugesetzt oder zuerst in Wasser aufgelöst und danach dem Gesamtblut-Kontrollreagenz zugesetzt werden. Die Bestandteile liegen vor und/oder werden in einem solchen Anteil zugesetzt, daß die Werte für WBZ, RBZ, HGB, HKT, MKV, MKH, MKHK, Verteilungsbreite für rote Blutkörperchen, Blutplättchenzahl, mittleres Blutplättchenvolumen, Thrombozytenwert und Blutplättchenvolumenvertei1ungsbreite denen angenähert sind, die normalerweise in mensch/liehen Blutproben auftreten und die durch Anwen-The invention consists of a stable whole blood control reagent with platelets, prepared by adding fresh delivered human or animal platelets that are either naturally taken or preserved by chemical or physical fixation my conventional, im Commercially available hematological control reagent for the whole blood, such as the 4C ^, Baker Haem-C® or Dade CH-60 ~ Come like that! ichen, commercially available hematol ogi schei Kontrol 1 reagents for the whole blood are prepared according to the invention by adding sodium chloride and urea. The sodium chloride and the urea can be added to the whole blood control reagent added immediately or first dissolved in water and then added to the whole blood control reagent. The parts are available and / or are added in such a proportion that the values for WBZ, RBZ, HGB, HKT, MKV, MKH, MKHK, Distribution range for red blood cells, platelet count, mean platelet volume, platelet count and platelet volume distribution width are approximated to those which normally occur in human / borrowed blood samples and which are

909881/0716909881/0716

- li -- li -

£#2^957£ # 2 ^ 957

dung einer Vielzahl von bekannten, manuellen oder automatischen Instrumentationsverfahren gemessen werden können. Das Suspensions medium kann ein künstliches Medium, menschliches oder tierisches Plasma oder tierische Proteinlösungen umfassen,A variety of known, manual or automatic instrumentation methods can be measured. The suspensions medium can comprise an artificial medium, human or animal plasma or animal protein solutions,

Das 4C ^-J -Produkt der Coulter Electronics, Inc. ist ein stabiles Bezugskontrollreagenz, das sich besonders zur Verwendung mit dem COULTER-COUNTER ^ - Instrument eignet, wenn die Normen der Qualitätskontrolle für die Funktion des Instruments aufgestellt werden. Bei Verwendung des 4C ^-' wird ein vorschriftsmäßig geeichtes und funktionierendes Instrument zur LieferungThe 4C ^ -J product from Coulter Electronics, Inc. is a stable reference control reagent that is particularly suitable for use with the COULTER-COUNTER ^ instrument in establishing quality control standards for the function of the instrument. When using the 4C ^ - 'a properly calibrated and functioning instrument will be delivered

jeden gemessenen oder berechneten Parameters innerhalb eines Bereichs von erwarteten Ergebnissen verwendet.every measured or calculated parameter within a Range of expected results used.

Die Erfindung umfaßt auch das angegebene Verfahren zur Herstellung des stabilen Bezugskontrollreagenz.The invention also includes the specified method of manufacture of the stable reference control reagent.

Die Erfindung betrifft, kurz zusammengefaßt, ein einziges diagnostisches. Testreagenz zur Verwendung als Bezugskontrollreagenz für die hämatologische Mehrfachanalyse zur überwachung der Genauigkeit und Fehl erfrei heit von Messungen und Bestimmungen der Zählung für die roten Blutkörperchen, die weißen Blutkörperchen und die Blutplättchen, des Hämoglobingehalts, des Hämatokrits, des mittleren Blutkörperchenvolumens, des mittleren BlutplättchenvoTumens, der Verteilungsbreite für die roten Blutkörperchen und die Blutplättchen, des mittleren korpuskularen Hämoglobins, der mittleren korpuskularen Hämoglobinkonzentration und des Thrombozytenwerts. Das Kontrollreagenz enthält auch Zusätze zur Überwachung der Blutplättchenparameter, obgleich in Blutproben beobachtete mögliche störende Wirkungen von roten Blutkörperchen ebenfalls im Kontrollreagenz vorliegen. Das Kontrollreagenz eignet sich zur Verwendung in automatischen oder halbautomatischen hämatologischen Instrumenten und durch Benutzer von manuellen Methoden. Briefly summarized, the invention relates to a single diagnostic. Test reagent for use as a reference control reagent for multiple hematological analysis to monitor accuracy and freedom from errors in measurements and count determinations for red blood cells, white blood cells and blood cells Platelets, hemoglobin content, hematocrit, mean blood cell volume, mean blood platelet volume, the distribution width for the red blood cells and the platelets, mean corpuscular hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin concentration, and platelet count. The control reagent also contains additives for monitoring platelet parameters, although possible adverse effects of red blood cells observed in blood samples are also in the control reagent are present. The control reagent is suitable for use in automatic or semi-automatic hematological instruments and by users of manual methods.

Die Erfindung umfaßt ein Verfahren zur Herstellung des Kontrollreagenz. The invention includes a method of making the control reagent.

909881/071$$ 909881/071

Die Erfindung wird nun im einzelnen beschrieben.The invention will now be described in detail.

Die Erfindung verwendet eine Kombination von Harnstoff und Natriumchlorid als: (1) ein Stabilisierungsmittel zur Verwendung mit Blutplättchen enthaltenden Gesamtblut-KontrolIreagenzien und (2) einen Hemmstoff für die schädlichen Wirkungen von tierischen und menschlichen Metaboliten der roten Blutkörperchen, von Nebenprodukten und von Chemikalien der roten und weißen Blutkörperchen, auf tierische und menschliche Blutplättchen.The invention uses a combination of urea and sodium chloride as: (1) a stabilizer for use with whole blood control reagents containing platelets and (2) an inhibitor of the deleterious effects of animal and human red blood cell metabolites, of by-products and chemicals of red and white blood cells, on animal and human platelets.

Harnstoff allein wurde früher als Stabilisierungsmittel in reinen Suspensionen von menschlichen Blutplättchen verwendet, die als Kontrollmaterial bereitet wurden zur Verwendung in Verbindung mit der Durchführung von Blutplättchenzählungen. Die auf diese Weise bereiteten menschlichen Blutplättchen waren im wesentlichen reine Suspensionen. Restliche rote und weiße Blutkörperchen wurden bei derartigen Kontrol1reagenzien nicht zugelassen. Die Funktion des zugesetzten Harnstoffs in derartigen Kontrol1suspensionen bestand lediglich in der Verhinderung der allmählichen Zersetzung der Blutkörperchen während der nachfolgenden Lagerung während einer einige Monate langen Zeitdauer. Der Gesamteffekt bestand in der Lieferung einer Suspension von Blutplättchen mit verhältnismäßig konstanter (- 20%) Anzahl der Blutplättchen je Volumeneinheit. Wenn Harnstoff nicht zugesetzt werden würde, würde die Anzahl der Teilchen je Volumeneinheit allmählich ansteigen, wenn die Blutplättchen sich für gewöhnlich innerhalb einiger Tage zu zersetzen beginnen.Urea alone was previously used as a stabilizer in pure Suspensions of human platelets used the as control material were prepared for use in conjunction with performing platelet counts. The on human platelets prepared in this way were essentially pure suspensions. Remaining red and white blood cells were not allowed with such control reagents. The function of the added urea in such control suspensions was only to prevent the gradual breakdown of blood cells during subsequent Storage for a period of several months. The overall effect was to provide a suspension of Platelets with a relatively constant (- 20%) number of Platelets per unit volume. If urea is not added would be the number of particles per unit volume gradually increase when the platelets are normal begin to decompose within a few days.

Bisher wurden rote und weiße Blutkörperchen in BlutplättchenkontrolIreagenzien nicht zugelassen, und zwar vermutlich deshalb, weil diese Blutkörperchen beinahe unmittelbar die Blutplättchen zum Zusammenballen und Zersetzen veranlassen, wodurch die Wirksamkeit des gemischten Kontrollmaterials zerstört wird. Zusätzlich war Harnstoff in hohen Konzentrationen als schädlich für die Stabilität und Unversehrtheit der roten Blutkörperchen bekannt, wodurch seine Verwendung als Konservierungsmittel in rote Blutkörperchen enthaltenden Suspensionen offensichtlich ausgeschlossen war. Als Ergebnis bestanden die bisher bekannten Blut-Heretofore, red and white blood cells have been used in platelet control reagents not allowed, presumably because these blood cells are almost immediately the platelets cause it to agglomerate and decompose, thereby reducing its effectiveness of the mixed control material is destroyed. Additionally urea was known in high concentrations to be harmful to the stability and integrity of red blood cells, thus apparently excluding its use as a preservative in suspensions containing red blood cells was. As a result, the previously known blood

909881/0716 - 13 -909881/0716 - 13 -

plättchenkontrollreagenzien ledig!ich aus reinen Suspensionen von menschlichen Blutplättchen, bei Anwesenheit von Harnstoff als · Konservierungsmittel, wobei keine roten Blutkörperchen oder andere aus Blut gebildeten Elemente zugelassen wurden, wodurch deren Wirksamkeit als Kontrollmaterialien vermindert wurde.platelet control reagents made from pure suspensions of human platelets, in the presence of urea as Preservatives, whereby no red blood cells or other elements formed from blood are allowed, whereby whose effectiveness as control materials was reduced.

Bis zum Vorliegen der Erfindung waren keine erfolgreichen Kombinationen von Gesamtblut-Bezugskontrollreagenzien bekannt, die mit zwei-zmolarem Harnstoff konservierte menschliche Blutplättchen enthalten. Tatsächlich lehrt der Stand der Technik, daß bei Zusatz des bei der Erfindung verwendeten zweimolaren Harnstoffs zu menschlichen Blutkörperchen die roten Blutkörperchen zerstört werden (Owen, J.D., "Computer Simulated Urea Reflection Coefficients in Human Red Blood Cells", Bioehem. et Biophys. Ac ta 443, 306-310, 1976; Saunders, A.M., Scott, F. "Hematologic Automation by Use of Continuous Flow Systems", J.Histochem, Cytochem. 22, 707-710, 1974).Prior to the present invention, no successful combinations of reference whole blood control reagents were known which human platelets preserved with two zmolar urea contain. Indeed, the prior art teaches that when the two molar urea used in the invention is added to human blood cells the red blood cells are destroyed (Owen, J.D., "Computer Simulated Urea Reflection Coefficients in Human Red Blood Cells, "Bioehem. Et Biophys. Acta 443, 306-310, 1976; Saunders, A.M., Scott, F." Hematologic Automation by Use of Continuous Flow Systems ", J. Histochem, Cytochem. 22, 707-710, 1974).

Es wurde erfindungsgemäß gefunden, daß Harnstoff in Anwesenheit von Natriumchlorid zur Verhinderung der schädlichen Wirkung von autologen roten und weißen Blutkörperchen auf die in Suspension befindlichen Blutplättchen. Es wird folglich eine stabile Blutplättchensuspension geliefert, die rote Blutkörperchen enthält und der Zusammensetzung von menschlichem Blut nahekommt. Es ist eine einzige stabile Suspension mit Blutplättchen und roten Blutkörperchen vorgesehen, was durch die Anwendung einer Kombination von Harnstoff und Natriumchlorid möglich gemacht ist, die vorher stabilisierten Suspensionen von mensch^ liehen roten Blutkörperchen, etwa Coulter 4C^H Bake Haem-C^ oder Da de CH-60^,zugesetzt wird, die die sonst schädlichen Wirkungen des Harnstoffs leicht tolerieren können. Die Kombination von Harnstoff, Salz und der vorher konservierten Suspension aus roten Blutkörperchen ist ihrerseits eindeutig stabil und liefert ein verträgliches Medium., indem entweder natürliche Blutplättchen oder unter Verwendung von Formaldehyd, Glutaraldehyd, Osmiumsäure oder anderen chemischen Fixierungsmitteln fixierte rote Blutkörperchen in stabiler Form koexistieren können.According to the invention, it has been found that urea is present in the presence of sodium chloride to prevent the harmful effects of autologous red and white blood cells on the in Platelets in the suspension. A stable suspension of platelets, the red blood cells, is thus delivered and comes close to the composition of human blood. It is a single stable suspension containing platelets and red blood cells provided by what is applied made possible by a combination of urea and sodium chloride is, the previously stabilized suspensions of human ^ borrowed red blood cells, about Coulter 4C ^ H Bake Haem-C ^ or since de CH-60 ^, is added which would otherwise be harmful Can easily tolerate the effects of urea. The combination of urea, salt and the previously preserved suspension from red blood cells is in turn clearly stable and provides an acceptable medium. by using either natural platelets or using formaldehyde, glutaraldehyde, Osmic acid or other chemical fixatives allow fixed red blood cells to coexist in a stable form.

- 14 -- 14 -

30SS81/0716 _30SS81 / 0716 _

Ein weiterer, abgeleiteter Nutzen der Erfindung besteht daß die Kombination von Harnstoff, Salz und vorher fixierten · Suspensionen aus roten Blutkörperchen eine Umgebung liefern, in der das Zellenvolumen der einzelnen Bl utpl a'ttchen unverändert bleibt. Durch die Anwendung der aus Blutplättchen und Kontrollsuspension von roten Blutkörperchen bestehenden Kombination können nun Laboratorien die Genauigkeit der Blutplättchenzählung sowie der Messung des mittleren Blutplättchenvolumens (MBPV) und der Blutplättchenvolumenverteilung (BPVV) überwachen, so daß wirksame Patientenmessungen routinemäßig durchgeführtAnother, derived benefit of the invention is that the combination of urea, salt and previously fixed · Red blood cell suspensions provide an environment in which the cell volume of the individual blood platelets remains unchanged remain. By applying the platelet and control suspension combination of red blood cells now laboratories check the accuracy of platelet counts as well as the measurement of the mean platelet volume (MBPV) and the platelet volume distribution (BPVV), see above that effective patient measurements are routinely performed

werden können.can be.

Ein Blutplättchen enthaltendes GesamtblutkontrolIreagenz nach der Erfindung wurde bereitet durch Mischen von herkömmlichen, im Handel erhältlichen Gesamtblut-Kontrol1 produkten, etwa Coulter 4C ^, Baker Haem-C®oder Dade CH-6O^, mit frisch gesammelten oder chemisch konservierten menschlichen oder tierischen Blutplättchen und einem Gemisch von Harnstoff und Natrium-Chlorid. Nach dem Stabilisieren während einiger Tage hatte die Suspension stabile Werte für die hämatol ogisehen Parameter WBZ, RBZ, HGB, MKV, HKT, MKH, MKHK, die Verteilungsbreite der roten Blutkörperchen, die Blutplättchenzahl, das mittlere Blutplättchenvolumen, den Thrombozytenwert und die Verteilungsbreite für das Blutplättchenvolumen. Die schädlichen Wirkungen der roten und weißen Blutkörperchen in den als Substrat verwendeten Gesamtblut-Kontrollreagenzien wurde durch den Zusatz von Natriumchlorid und Harnstoff verhindert. Das Material konnte während einiger Monate als stabiles Kontrollreagenz verwendet werden.A whole blood control reagent containing platelets the invention was prepared by mixing conventional, commercially available whole blood control products such as Coulter 4C ^, Baker Haem-C® or Dade CH-6O ^, with freshly collected or chemically preserved human or animal Platelets and a mixture of urea and sodium chloride. After stabilizing for a few days the suspension stable values for the hematological parameters WBZ, RBZ, HGB, MKV, HKT, MKH, MKHK, the distribution range of the red blood cells, platelet count, mean platelet volume, the platelet count and the range of distribution for the platelet volume. The harmful effects of the red and white blood cells in those used as the substrate Whole blood control reagents were made by the addition of sodium chloride and urea prevents. The material could be used as a stable control reagent for several months.

Es folgt nun eine Beschreibung des Verfahrens zur Herstellung des Kontrollreagenz.A description will now be given of the method for preparing the control reagent.

Der erste Schritt bei einer Art der Bereitung eines BlutplättchenkontrolIreagenz für das Gesamtblut nach der Erfindung besteht in der Lieferung eines Volumens an in herkömmlicher Weise hergestelltem hämatologischem Bezugskontrollmaterial für dasGesamtblut, etwa Coulter 4C^, Baker Haem-C^oder Dade CH-60 oder in der Lieferung irgendeines anderen handelsüblich hergestellten oder sonst geeigneten hämatol ogisehen KontrollmaterialsThe first step in some type of platelet control reagent preparation for whole blood according to the invention consists in supplying a volume of it in a conventional manner manufactured hematological reference control material for the whole blood, e.g. Coulter 4C ^, Baker Haem-C ^ or Dade CH-60 or in the delivery of any other commercially manufactured or other suitable hematological control material

909801/0716909801/0716

für das Gesamtblut einschließlich behandelten roten Blutkörperchen in einem künstlichen Medium. Danach werden menschliche oder tierische Blutplättchen durch Venenpunktierung oder ein anderes Blutentnahmeverfahren des menschlichen oder tierischen Spenders geliefert. Die menschlichen oder tierischen Blutplättchen können dann in beliebiger Weise verwendet werden, und zwar entweder frisch oder nach dem an den Blutplättchen einige der chemischen oder physikalischen Fixierungsverfahren angewendet wurden.for whole blood including treated red blood cells in an artificial medium. After that, human or animal platelets are obtained by venipuncture or another Method of taking blood from the human or animal donor delivered. The human or animal platelets can then used in any way, either fresh or after having applied some of the chemical to the platelets or physical fixation methods were used.

Der nächste Schritt besteht im Bereiten einer Lösung von Harnstoff und Natriumchlorid in Wasser oder einem anderen Lösungsmittel zur nachfolgenden Mischung mit dem Gesamtblut-KontrolIreagenz und den Blutplättchen. In der Lösung werden Harnstoff und Natriumchlorid im folgenden Verhältnis im allgemeinen auf looo ml des Mediums, z.B. Wasser, zugesetzt:The next step is to prepare a solution of urea and sodium chloride in water or other solvent for subsequent admixture with the whole blood control reagent and the platelets. In the solution are urea and sodium chloride In general, added to 100 ml of the medium, e.g. water, in the following ratio:

Harnstoff 120 g
Natriumchlorid 9 gUrea 120 g
Sodium chloride 9 g

Der in 1 1 Medium verwendete Harnstoff variiert zwischen 100 und 140 g, während das Natriumchlorid zwischen 8 und 10 g variiert. Der Harnstoff und das Natriumchlorid wurden entweder miteinander gemischt, und dann der Kontrol!suspension zugesetzt, oder wurden in etwa 1 1 Medium, z.B. Wasser, gelöst. Die resultierende Lösung wurde in diesem Augenblick in noch zu erläuternden Mengen dem Kontrollmatertal zugesetzt. Es kann ein Salzäquivalent zu Natriumchlorid verwendet werden.The urea used in 1 liter of medium varies between 100 and 140 g, while the sodium chloride varies between 8 and 10 g. The urea and the sodium chloride were either mixed together and then added to the control suspension, or were dissolved in about 1 liter of medium, e.g. water. The resulting solution was at this point in yet to be explained Amounts added to the control material. It can be a salt equivalent to be used to sodium chloride.

Der letzte Schritt besteht lediglich in einer gemeinsamen Mischung des kommerziell oder industriell bereiteten hämatologischen Gesamtblut-Bezugskontrollreagenz, der unbehandelten, nicht stabilisierten oder vorher stabilisierten Blutplättchensuspension und der Lösung von Harnstoff und Natriumchlorid. Nach einem etwa 30 Minuten langen Mischen und einem etwa 48 Stunden langen Stabi-The last step is simply a joint mix the commercially or industrially prepared whole blood reference hematological control reagent, the untreated one, does not stabilized or previously stabilized platelet suspension and the solution of urea and sodium chloride. After mixing for about 30 minutes and stabilizing for about 48 hours

909881/!DTI 6909881 /! DTI 6

1isierentlassen der Blutkörperchensuspension war, wie festgestellt, das Kontrollmaterial stabil für vollständige hämatologische Parameter. Es wird eine selektrive Suspension von roten Blutkörperchen und Blutplättchen hergestellt. Das Suspensionsmedium kann künstlich sein, aus menschlichem oder tierischem Plasma oder aus menschlichen oder tierischen Proteinlösungen bestehen.1izing discharge of the blood cell suspension was determined to be the control material stable for complete hematological Parameter. A selective suspension of red blood cells and platelets is made. The suspension medium can be artificial, from human or animal plasma or from human or animal protein solutions exist.

Die folgenden Beispiele zeigen, wie zur Erzeugung des Gesamtblut-KontrolIreagenz der Erfindung Suspensionen von behandelten roten Blutkörperchen, Blutplättchen und Lösungen von Natriumchlorid und Harnstoff, wie beschrieben, miteinander gemischt werden können.The following examples show how to generate the whole blood control reagent of the invention, suspensions of treated red blood cells, platelets and solutions of sodium chloride and urea, as described, can be mixed with one another.

1. Eine Lösung mit 25 g Harnstoff und 1,8 g Natriumchlorid1. A solution containing 25 g urea and 1.8 g sodium chloride

in 200 ml destilliertem Wasser wird 1000 ml einer behandelte ten Gesamtblut-Suspension, etwa Coulter 4C^v-' zugesetzt.1000 ml of a treated whole blood suspension, such as Coulter 4C ^v - ', is added to 200 ml of distilled water.

Eine Lösung mit 2,4g Harnstoff und 0,18 g Natriumchlorid in 20 ml Wasser wird 100 ml Suspension von menschlichen Blutplättchen zugesetzt.A solution with 2.4 g urea and 0.18 g sodium chloride 100 ml of human platelet suspension is added to 20 ml of water.

Jede resultierende Suspension wird einige Minuten lange gemischt wonach die behandelte Suspension aus roten Blutkörperchen und die Blutplättchensuspension, von denen beide Harnstoff enthalten, etwa 30 Minuten lange gründlich gemischt und dann etwa 48 Stunden lang stabilisieren gelassen^zur Erzeugung des BlutkontrolIreagenz der Erfindung. wirdEach resulting suspension is mixed for a few minutes after which the treated red blood cell suspension and the platelet suspension, both of which contain urea, Mix thoroughly for about 30 minutes and then allow to stabilize for about 48 hours to produce the blood control reagent the invention. will

2. 20,0 g Harnstoff und 1,5 g Natriumchlorid werden unmittelbar 1000ml einer behandelten Gesamtblutsuspension, etwa Coulter 4C ^ zugesetzt. 100 ml einer Suspension von menschlichen Blutplättchen werden dann unmittelbar der Harnstoff und Natriumchlorid enthaltenden behandelten Gesamtblutkontrol1-Suspension zugesetzt. Die Suspension wird etwa 30 Minuten lang gemischt und 48 Stunden stabilisieren gelassen zur Erzeugung des Bezugskontrollreagenz der Erfindung. Aus dieser Ausfüh-2. 20.0 g of urea and 1.5 g of sodium chloride are added immediately 1000ml of a treated whole blood suspension, about Coulter 4C ^ added. 100 ml of a suspension of human Platelets are then immediately the urea and Treated whole blood control suspension containing sodium chloride added. The suspension is mixed for about 30 minutes and allowed to stabilize for 48 hours to generate of the reference control reagent of the invention. From this execution

- 17 ■9ID 9 8 81 / ΕΠ) 71B - 17 ■ 9ID 9 8 81 / ΕΠ) 71B

rungsform'ist ersichtlich, daß eine Auflösung des Harnstoffs und des Natriumchlorids vor dem Mischen mit der behandelten. Gesamtblut-Suspension nicht erforderlich ist.rungsform'ist that a dissolution of the urea and the sodium chloride before mixing with the treated. Whole blood suspension is not required.

3. Eine Lösung mit 26,6 g Harnstoff und 1,98 g Natriumchlorid in 220 ml destilliertem Wasser wird unmittelbar 1000 ml einer behandelten Gesamtblut-Kontrol1 suspension, etwa Coulter3. A solution containing 26.6 g urea and 1.98 g sodium chloride 1000 ml of a treated whole blood control suspension, such as Coulter, is immediately added to 220 ml of distilled water

4C zugesetzt. Dann werden 100 ml einer Suspension aus menschlichen Blutplättchen zugesetzt. Die resultierende Suspension wird etwa 30 Minuten lang gemischt und 48 Stunden Tang stabilisieren gelassen zur Erzeugung des Bezugskontrollreagenz der Erfindung.4C added. Then 100 ml of a suspension of human Added platelets. The resulting suspension is mixed for approximately 30 minutes and allowed to stabilize for 48 hours to produce the reference control reagent Invention.

Beim Bezugskontrollreagenz der Erfindung liegt Harnstoff in einem Verhältnis von etwa 16,7 bis etwa 23,3 g in etwa 1 1 des Bezugskontrollreagenz der Erfindung vor.In the reference control reagent of the invention, urea is in a ratio of about 16.7 to about 23.3 g in about 11 of the reference control reagent of the invention.

Beim Bezugskontrollreagenz der Erfindung wird Natriumchlorid im Verhältnis zur Harnstoffkonzentration zugesetzt, d.h. 1,33 bis 1,67 g Natriumchlorid je Liter des die obenangegebenen 16,7 bis 23,3 g Harnstoff enthaltenden Bezugskontrollreagenz.The reference control reagent of the invention is sodium chloride added in proportion to the urea concentration, i.e. 1.33 to 1.67 g of sodium chloride per liter of the above Reference control reagent containing 16.7 to 23.3 g of urea.

Es ist ersichtlich, daß diese Gesamtmenge an Natriumchlorid zusätzlich ist zum restlichen Salzgehalt der behandelten Gesamtblutsuspension oder Blutplättchensuspension, der diese Gesamtmenge zugesetzt wird. Es ist ferner ersichtlich, daß ein bedeutender Faktor der Erfindung die Beziehung zwischen dem Harnstoff und dem zugesetzten Natriumchlorid und nicht der gesamte Salzgehalt des Bezugskontrollreagenz ist.It can be seen that this total amount of sodium chloride is in addition to the residual salt content of the treated whole blood suspension or platelet suspension to which this total amount is added. It can also be seen that an important The factor of the invention is the relationship between the urea and the sodium chloride added, rather than all of it Is the salt content of the reference control reagent.

Diese Beziehung zwischen dem Harnstoff und dem zugesetzten Natriumchlorid ermöglicht die Herstellung eines stabilen Bezugskontrollreagenz, das wenigstens rote Blutkörperchen und Blutplättchen enthält.This relationship between the urea and the added sodium chloride enables the production of a stable reference control reagent, the least of red blood cells and platelets contains.

Das Folgende wird im Hinblick auf die Wirkung und Bedeutung des zugesetzten Natriumchlorids angegeben. Die meisten bei der Erfindung verwendeten Äusgangsmaterialien, stabilisierte Blutkontrol 1-The following is given in terms of the effect and importance of the sodium chloride added. Most of the invention used starting materials, stabilized blood control 1-

iOSi-S^#'ö'7 1S ■ - 18 -iOSi-S ^ # 'ö'7 1S ■ - 18 -

reagenzien und Blutplättchensuspensionen, enthalten vorher zugesetztes Natriumchlorid. Die Erfindung beschreibt den Zusatz' eines Gemischs von Harnstoff und Natriumchlorid zu diesen Materialien in der Weise, daß diese koexistieren können. Der Zweck des zugesetzten Natriumchlorids besteht in der Aufrechterhaltung des osmotischen und ionischen Gleichgewichts bei einem Zusatz von Harnstoff.reagents and platelet suspensions contain previously added Sodium chloride. The invention describes the addition ' a mixture of urea and sodium chloride to these materials in such a way that they can coexist. The purpose of the sodium chloride added is to maintain it osmotic and ionic equilibrium in one Addition of urea.

Es ist zu beachten, daß eine Unabhängigkeit der Blutkörperchenzahl (Blutplättchen, rote und weiße Blutkörperchen) und der Blutkörpercheneigenschaften (mittleres Blutkörperchenvolumen, Blutkörperchenmorphologie) von der chemischen Zusammensetzung des Bezugskontrollreagenz der Erfindung besteht. Die chemische Zusammensetzung des Bezugskontrollreagenz der Erfindung, bestehend aus vorher stabilisierten roten Blutkörperchen und fixierten roten Blutkörperchen, Blutplättchen und zugesetztem Harnstoff und Natriumchlorid ist unabhängig von der gewünsch ten Blutkörperchenzählung und den Blutkörpercheneigenschaften. Zum Beispiel ermöglicht die Erfindung den Zusatz von etwa 100 ml einer Suspension mit entweder sehr vielen oder sehr wenigen Blutplättchen zu etwa 1000 ml eines vorhandenen Bezugskontroi 1-reagenz, etwa Coulter 4C^, mit einem hohen oder niedrigen zahlenmäßigen Anteil roter Blutkörperchen im Zahlenwert der weißen Blutkörperchen, im hohen oder niedrigen Wertniveau des mittleren Korpuskular Volumens, so daß das resultierende ungefähre Volumen von 1100 ml Blutkörperchensuspension je nach den gewünschten Niveaus verhältnismäßig wenige oder viele Blutplättchen sowie rote und weiße Blutkörperchen hat.It should be noted that the blood cell count is independent (Platelets, red and white blood cells) and blood cell properties (mean blood cell volume, Blood cell morphology) on chemical composition of the reference control reagent of the invention. The chemical composition of the reference control reagent of the invention, consisting of previously stabilized red blood cells and fixed red blood cells, platelets and added Urea and sodium chloride is whatever you want th blood cell count and blood cell properties. For example, the invention allows about 100 ml of a suspension to be added with either a very many or a very few Platelets to approximately 1000 ml of an available reference control reagent, about Coulter 4C ^, with a high or low numerical value Percentage of red blood cells in the numerical value of the white ones Blood cells, in the high or low level of the middle Corpuscular volume, so the resulting approximate volume from 1100 ml of blood cell suspension, depending on the desired levels, relatively few or many platelets and red platelets and has white blood cells.

Wie beim Stand der Technik und der vorliegenden Beschreibung verwendet, sind die auf Blutkörperchen angewendeten Ausdrücke "stabilisiert" und "behandelt" synonym und stehen im Gegensatz zum Ausdruck "fixierte Blutkörperchen". Beide im vorliegenden beschriebenen anfänglichen Ausgangsmaterialien (das vorher beschriebene stabilisierte Blutkörperchenkontrollreagenz und die Blutplättchen) können entweder aus stabilisierten oder behandelten Blutkörperchen (chemisch fixierten Blutkörperchen oder natürlichen unbehandelten Blutkörperchen) bestehen.As used in the prior art and this specification are the terms applied to blood cells "stabilizes" and "treats" synonymously and contrasts with the expression "fixed blood cells". Both in the present initial starting materials described (that previously described stabilized blood cell control reagent and the platelets) can either be stabilized or treated Blood cells (chemically fused blood cells or natural untreated blood cells).

9 0988 U©'7 16 - l& -9 0988 U © '7 16 - l & -

(R)(R)

Zum Beispiel besteht das Coulter 4C^v-^/aus stabilisierten (behandelten) roten Blutkörperchen und chemisch fixierten roten Blutkörperchen.For example, the Coulter 4C ^v - ^/ consists of stabilized (treated) red blood cells and chemically fixed red blood cells.

Stabilisierte (behandelte) Blutkörperchen bestehen aus menschlichen oder nicht menschlichen Blutkörperchen, denen zur Verlängerung der Lebensdauer verschiedene Konservierungsmittel zugesetzt wurden.Stabilized (treated) blood cells are made up of human or non-human blood cells to which various preservatives have been added to extend their life became.

Chemisch fixierte Blutkörperchen bestehen aus menschlichen oder nicht menschlichen Blutkörperchen, die chemisch gehärtet, d.h. gegerbt wurden, und zwar für gewöhnlich durch Chemikalien, wie Glutaraldehyd, Formaldehyd, Osmiumsäure und Uranylacetat.Chemically fixed blood cells consist of human or non-human blood cells that are chemically hardened, i.e. tanned, usually by chemicals such as glutaraldehyde, formaldehyde, osmic acid, and uranyl acetate.

Stabilisierte Blutkörperchen sind bei Anwesenheit von Tensiden oder bei geringer Osmolalität anfällig gegen Hämolyse und Zerreißen, während chemisch fixierte Blutkörperchen bei derartigen Umgebungen ihre Morphologie beibehalten.Stabilized blood cells are in the presence of surfactants or prone to hemolysis and disruption in the case of low osmolality, while chemically fixed blood cells in such environments retain their morphology.

Wie erläutert, eignet sich das hämatologische Bezugskontrollreagenz nach der Erfindung auch zur Durchführung von manuellen Bestimmungen. Dem Fachmann sind die manuellen Methoden bekannt, die für die derartige Kontrollreagenzien verwendenden manuellen Bestimmungen von RBZ, WBZ, HGB und HKT angewendet werden, Eine detaillierte Erläuterung dieser manuellen Methoden kann entfallen. Es genügt die Angabe, daß das Bezugskontrollreagenz der Erfindung, wie hier beschrieben, bei instrumentellen und manuellen Methoden anwendbar ist.As explained, the reference hematological control reagent is suitable according to the invention also for carrying out manual determinations. The skilled person is familiar with the manual methods the manual determinations of RBZ, WBZ, HGB and HKT used for such control reagents are used, a detailed explanation of these manual methods can be omitted. It is sufficient to state that the reference control reagent is the Invention, as described here, in both instrumental and manual Methods is applicable.

PatentanwältePatent attorneys

Dipl.-ing. E. Eder Dipl.-Ing. K. ScÄieschke 8 Mflndien 40, Elis4Wift3traBe34Dipl.-ing. E. Eder Dipl.-Ing. K. Scäieschke 8 Mflndien 40, Elis4Wift3traBe34

Claims

Dipl.-ing. E. Eder Dipl.-Ing. K. Schieschke B Mflnchen 40, Eligaoeiriotraße 34Dipl.-ing. E. Eder Dipl.-Ing. K. Schieschke B Munich 40, Eligaoeiriotraße 34

COULTER ELECTRONICS, INC.

Hialeah / Florida
United States

Reference control reagent for multiple hematological analysis and method of making it

Claims

Reference control reagent for multiple hematological analysis, characterized by a suspension of red blood cells and blood platelets in a urea-containing, saline medium, the urea at least is present at a concentration that is normally required for the stability and integrity of red blood cells is harmful, the urea concentration has no harmful effects, so that the parameters are stable for red blood cells and platelets in general and those in mammalian blood samples present, the reference control reagent for testing the accuracy and accuracy of the conventional Parameters for the red blood cells and the platelets is applied.

2. Reference control reagent according to claim 1, characterized in that the medium is artificial.

909881/0718

ORlGfNAt INSPECTED

3. Reference control reagent according to claim 1, characterized in that that the medium is human or animal blood plasma.

4. reference control reagent according to claim 1, characterized in that that the medium is a human or animal protein solution.

5. reference control reagent according to claim 1, characterized in that that the platelets are of human or animal origin.

6. reference control reagent according to claim 1, characterized in that that the urea is present in a ratio of about 16.7 to 23.3 g to about 1 liter of the reference control reagent.

7. reference control reagent according to claim 6, characterized in that sodium chloride in a ratio of 1.33 to 1.67 g to about 1 liter of the reference control reagent is added.

8. Reference control reagent for multiple hematological analysis,

characterized by a single suspension of red blood cells and platelets, the suspension being urea and sodium chloride in a selected suspension medium contains the application of the control reagent for monitoring the accuracy and accuracy of the measurements or the determination of the usual haematological parameters and the platelet parameter of a blood sample enables the urea to be present in at least one concentration which is normally detrimental to the stability and integrity of red blood cells, reducing the urea concentration has no harmful effects, so the parameters for the red blood cells and the platelets are generally stable and approximate to those found in mammalian blood samples, the reference control reagent for testing the accuracy and accuracy of the conventional parameters for red blood cells and platelets is applied.

909881/0716 _ ₃ _

9. reference control reagent according to claim 8, characterized in that that the medium is artificial.

10. Reference control reagent according to claim 8, characterized in that that the medium is human or animal blood plasma.

11. Reference control reagent according to claim 8, characterized in that that the medium is a human or animal protein solution.

12. Reference control reagent according to claim 8, characterized in that that the platelets are of human or animal origin.

13. Reference control reagent according to claim 8, characterized in that that the urea is present in a ratio of about 16.7 to 23.3 g to about 1 liter of the reference control reagent.

14. Reference control reagent according to claim 13, characterized in that that sodium chloride is added in a ratio of 1.33 to 1.67 g to about 1 liter of the reference control reagent.

15. Method of preparing a single hematological

Reference control reagent for monitoring the accuracy of the Measurements of common hematological parameters and of platelet parameters characterized by

A) Prepare a stabilized suspension of human or animal platelets,

B) Obtain a conventional hematological reference control whole blood reagent including red blood cells in a suspension medium,

C) Mixing the stabilized platelet suspension and the reference control reagent with a mixture of urea and sodium chloride or similar salt selected to be with the hematological components of the mixture is compatible for a preselected period of time, and

909881/0716 -A-

D) Allow the resulting suspension to stabilize during about 48 hours,

| «R-where the urea at least in one concentration is present, which is normally detrimental to the stability and integrity of red blood cells, the urea concentration has no deleterious effects, so that the parameters for the red blood cells and the platelets are generally stable and approximate to those found in mammalian blood samples.

1G. Processor: according to Claim 15, characterized in that the Urea and the chloi idsftlz mixed together and partly; Beginning to be added to the reference control reagent of section B).

17. The method according to claim 15, characterized in that the urea and the chloride salt are in an appropriate volume dissolved in water and then the reference control reagent of the section B) can be added.

18. The method according to claim 15, characterized in that a suspension medium is used which is artificial or is of a natural biological nature.

19. The method according to claim 15, characterized in that the urea and chloride salt dissolved in an appropriate volume of water and then the reference control reagent of the section. B) are added, after which the platelet suspension of section A) is added.

20. The method according to claim 15, characterized in that the urea and the chloride salt to the reference control reagent of section B) or the platelet suspension of section. A) is added, and that the resulting suspensions be mixed.

909881/0716

21. The method according to claim 20, characterized in that the urea and the chloride salt prior to adding to the Reference control reagent of section B) and for the platelet suspension of section A) are made soluble.

DfpF.-lng. JL Eder
DipL-Ing. KJ & hieschke

9098SU0716 - ■. '--6