DE2849342A1

DE2849342A1 - Stable blood platelet reference sample - obtd. by addition of a solid polyethylene glycol to the suspension of platelets or to a diluent for platelets

Info

Publication number: DE2849342A1
Application number: DE19782849342
Authority: DE
Inventors: Wayne Leo Ryan
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1978-11-14
Filing date: 1978-11-14
Publication date: 1980-05-29

Abstract

Stabilised reference sample for the counting of blood platelets, is obtd. by addn. of a solid polyethylene glycol to a suspension of the platelets and then adding the other constituent to the mixture resulting from the first addn. to give a sample which is stable with time and upon shaking. When the polyethylene-glycol is added to the suspension pref. 10-20 g. of polyethylene-glycol are added per 100 ml of suspension. When the polyethylene-glycol is added to the diluent, 0.1-0.5 g of polyethylene-glycol are used per litre of diluent. The polyethylene glycol reduces surface tension and avoids the adsorption of the platelets, preferred PEGs are those with mol. wt. 4000, 6000 or 20000.

Description

"Verfahren zur Herstellung einer Blutplättchenkontroll-"Process for the production of a platelet control

flüssigkeit" Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer Blutplättchenkontrollflüssigkeit sowie die gemäss diesem Verfahren erhältliche Blutplättchenkontrollflüssigkeit. liquid "The invention relates to a method of manufacture a platelet control fluid as well as that obtainable according to this method Platelet control fluid.

Die Entwicklung von automatischen Zählvorrichtungen zum Zählen von roten Blutkörperchen, weissen Blutkörperchen und Blutplättchen hat zusammen mit den gestiegenen Anforderungen an die Qualitätskontrolle in klinischen Laboratorien zu einem Bedarf nach stabilisierten Zellbestandteilen des Bluts geführt, um die Reproduzierbarkeit und Genauigkeit der Zählungen zu gewährleisten. Es wurden eine große Anzahl von Verbindungen eingesetzt, um die Festigkeit der Zellmembranen dieser Zellbestandteile zu erhöhen, so dass die Zellen bei der Lagerung keiner Lysis unterliegen.The development of automatic counting devices for counting has red blood cells, white blood cells and platelets along with the increased demands on quality control in clinical laboratories has led to a need for stabilized cellular components of the blood to protect the Ensure reproducibility and accuracy of the counts. It became one Large numbers of compounds used to strengthen the cell membranes of this To increase cell components so that the cells are not subject to lysis during storage.

Beispiele für derartige Verbindungen sind Formaldehyd, Tannin, Glutaraldehyd und Pyruvaldehyd.Examples of such compounds are formaldehyde, tannin, and glutaraldehyde and pyruvaldehyde.

Im Handel sind Eich- bzw. Kontrollflüssigkeiten erhältlich, die aus Human- oder Pferdeblutplättchen hergestellt sind.Calibration and control liquids are commercially available which consist of Human or horse blood platelets are made.

Die Blutplättchen werden vom Blut abzentrifugiert, mit gepufferter Kqchsalzlösung gewaschen und sodann mit Glutaraldehyd "fixiert". Das endgültige Blutplättchen-Eontrollprodukt hat eine Lagerbeständigkeit bei Raumtemperatur von mindestens 6 Monaten. Diese Kontrollprodukte werden folgendermassen verwendet: 1. Zur Gewährleistung einer gleichmässigen Verteilung wird gründlich gemischt.The platelets are centrifuged from the blood, with buffered Washed with brine and then "fixed" with glutaraldehyde. The final one Platelet control product has a shelf life of at least 6 months. These control products are used as follows: 1. Mix thoroughly to ensure even distribution.

2. Zur Entfernung von 5 5,al Blutplättchen wird eine Mikropipette verwendet. Diese 5 Xi Blutplättchen werden in 15,0 ml eines isotonen Verdünnungsmittels gegeben.2. A micropipette is used to remove 5 5, al platelets used. These 5 xi platelets are dissolved in 15.0 ml of an isotonic diluent given.

Die genaue Zusammensetzung des Verdünnungsmittels ist von Hersteller zu Hersteller verschieden. Im allgemeinen enthält es Natriumchlorid, Kaliumchlorid und einen Phosphatpuffer zur Einstellung eines pH-Werts von 7,3. The exact composition of the diluent depends on the manufacturer different to manufacturer. In general, it contains sodium chloride, potassium chloride and a phosphate buffer to adjust the pH to 7.3.

3. Der Verdünnungsbehälter besteht im allgemeinen aus Einweg-Polystyrol und weist einen t'Schnappdeckel" (snap-on lid) aus Polyäthylen auf. Nach Zusatz der Blutplättchen zum Verdünnungsmittel wird der Behälter vorsichtig 2 bis 3 mal gestürzt. Sodann wird das Blutplättchengemisch gezählt. Das Zählergebnis unter diesen Umständen ist gut reproduzierbar (+ 2%).3. The dilution container is generally made of single-use polystyrene and has a snap-on lid made of polyethylene The platelet diluent is gently added to the container 2 to 3 times overturned. The platelet mixture is then counted. The count result among these Circumstances is easily reproducible (+ 2%).

Wird jedoch der Behälter heftig bewegt oder 30 Minuten lang stehengelassen, so ergibt sich eine Abnahme des Zählergebnisses. Beispielsweise ergibt sich eine Zählung von 8400 bis 8900 bei vorsichtigem Stürzen, während man nach heftiger Bewegung ein Ergebnis von 5600 bis 6homo erhält. Blosses 30-minütiges Stehenlassen ergibt eine Verringerung eines Zählergebnisses von 11 200 bis 11 500 auf 10 000 bis 10 100.However, if the container is shaken vigorously or left for 30 minutes, this results in a decrease in the counting result. For example, there is one Counting from 8400 to 8900 when falling carefully while walking after vigorous movement gets a score of 5600 to 6homo. Just let it stand for 30 minutes a decrease in a count from 11,200 to 11,500 to 10,000 to 10 100.

Aufgabe der Erfindung ist es, eine Blutplättchenkontrollflüssigkeit zur Verfügung zu stellen, die lagerstabil und gegen Bewegung unempfindlich ist.The object of the invention is to provide a blood platelet control fluid to make available that are storage-stable and insensitive to movement is.

Im Verlauf der Untersuchungen, die zur vorliegenden Erfindung führten, wurde festgestellt, dass die vorstehend genannten Werte für Proben, die stehengelassen oder heftiges geschüttelt worden sind, typisch sind. Dabei stellte sich jedoch heraus, dass die Abnahme der Blutplättchenzählung insbesondere bei den geschüttelten Proben einer grossen Variationsbreite unterliegt, da es schwierig ist, den Schüttelvorgang einer Eichung zu unterziehen.In the course of the investigations that led to the present invention, it was found that the above values for samples that were left to stand or violent shaking are typical. It turned out, however, that the decrease in platelet counts especially in the shaken samples subject to a wide range of variation, since it is difficult to control the shaking process to be subjected to a calibration.

Zunächst wurde angenommen, dass die Abnahme der Blutplättchenzählung beim Schütteln oder Stehenlassen auf eine Adsorption der Blutplättchen an der Polystyroloberfläche zurückzuführen ist. Deshalb wurden Behälter aus Glas und aus mit Silicon beschichtetem Glas auf die gleiche Weise wie Polystyrol behälter getestet. Aber auch in diesen Fällen ergab sich eine von der Zeit des Stehenlassens und dem Schüttelvorgang abhängige Abnahme der Blutplättchenzählung.Initially it was believed that the decrease in platelet counts when shaken or left to stand for adsorption of the blood platelets on the polystyrene surface is due. That is why containers made of glass and those coated with silicone were made Glass tested the same way as polystyrene containers. But also in these Cases arose depending on the time of standing and the shaking process Decrease in platelet count.

Sodann wurde in Erwägung gezogen, die Kunststoffbehälter mit organischen Lösungsmitteln, wie Chloroform, Aceton oder Methylenchlorid,zu behandeln. Diese Behandlung muss rasch erfolgen, da diese Lösungsmittel bei längerem Kontakt den Styrolbehälter auflösen. Es stellte sich jedoch heraus, dass diese Behandlung zu einer erhöhten Adsorption von Blutplättchen bzw. zu einer Abnahme der Zählergebnisse führt.Then it was considered that the plastic containers with organic Solvents such as chloroform, acetone or methylene chloride to treat. These Treatment must be carried out quickly as these solvents cause prolonged contact Dissolve the styrene container. However, it turned out that this treatment too increased adsorption of blood platelets or a decrease in counting results leads.

Die erhöhte Adsorption nach der Behandlung mit den vorgeschlagenen Lösungsmitteln lässt darauf schliessen, dass das organische Lösungsmittel das Formentrennmittel, das sich auf der Oberfläche des Polystyrolbehälters befindet, entfernt. Formentrennmittel werden von Zeit zu Zeit auf die Form gesprüht, um ein Herausgehen de s des Kunststoffbehälters aus der Form zu erleichtern. Auf den Kunststoffbehältern sind unterschiedliche Mengen dieser Formentrennmittel vorhanden. Um diese Hypothese weiter zu untersuchen, wurden verschiedene Formentrenumittel auf das Innere von zum Zählen von Blutplättchen verwendeten Polystyrolbehältern gesprüht.The increased adsorption after treatment with the proposed Solvents suggests that the organic solvent is the mold release agent, that is on the surface of the polystyrene container is removed. Mold release agents are sprayed onto the mold from time to time to prevent the plastic container from coming out the end to ease the shape. There are different amounts on the plastic containers this mold release agent is present. To investigate this hypothesis further, were various mold remedies on the inside of used for counting blood platelets Sprayed polystyrene containers.

Anschliessend wurden die Behälter mit Verdünnungsmittel und Blutplättchen gefüllt und sodann geschüttelt. Es wurde angenommen, dass das Formentreimmittel für die Variationsbreite der Zählergebnisse bei den verschiedenen Behältern und für die raschere Abnahme der Zählungen nach Behandlung mit organischen Lösungsmitteln verantwortlich ist.Then the containers were filled with diluent and platelets filled and then shaken. It was assumed that the mold trimming means for the range of variation in the counting results for the various containers and for the faster decrease of the counts after treatment with organic solvents responsible for.

Somit sollte sich nach Aufsprühen des Formentrennmittels auf den Behälter keine Abnahme der Blutplättchenzählung ergeben. Es wurde festgestellt, dass ein einmal mit Trichlormethan gespülter und anschliessend getrockneter Behälter nicht die gewünschte Stabilität ergibt. Das Zählergebnis fiel von einem Wert von 9900 nach mässigem Stürzen auf 6300 bei 6-maligem heftigem Schütteln. Jedoch ergab das Formentrennmittel MS-122, das aus einem Fluorkohlenwasserstoff-Telomeren (Miller-Stephenson Chemical Co., Inc., Danbury, Conn.) besteht, eine Zählung von 10 239 nach vorsichtigem Stürzen und von 10 182 nach 6-maligem heftigem Schütteln.Thus, after spraying the mold release agent on the container do not show a decrease in platelet counts. It was found that a Containers that have been rinsed once with trichloromethane and then dried will not gives the desired stability. The count fell from a value of 9900 after a moderate fall to 6300 with 6 vigorous shaking. However, that resulted Mold release agent MS-122, which is composed of a fluorocarbon telomer (Miller-Stephenson Chemical Co., Inc., Danbury, Conn.), A count of 10,239 on cautious Falling and from 10 182 after vigorous shaking 6 times.

Hierauf wurde angenommen, dass die grenzflächenaktiven Eigenschaften der Bormentrennmittel dafür verantwortlich sind, dass die Adsorption der Blutplättchen an der Polystyroloberfläche verhindert wird. Aus diesem Grund wurden erfindungsgemäss verschiedene kationische, anionische und nicht-ionogene grenzflächenaktive Mittel untersucht. Die kationischen grenzflächenaktiven Mittel verursachten unterschiedslos eine Blutplättchenaggregation. Die meisten der nicht-ionogenen und anionischen grenzflächenaktiven Mittel verhinderten die Abnahme des Zählergebnisses, die beim Stehenlassen oder Bewegen der Blutplättchen auftritt. Obgleich somit die Lösung der erfindungsgemässen Aufgabe gegeben schien, ergab eine Untersuchung der Grösse von mit grenzflächenaktiven Mitteln behandelten Blutplättchen in einem Coulter ZBI, einer Vorrichtung zur Größenanalyse von Teilchen, wie Blutplättchen und weissen Blutkörperchen, dass hierbei eine starke Abnahme der Grösse von Blutplättchen eintritt. Bei der Untersuchung der Blutplättchen unter dem Mikroskop mit einem Okularmikrometer liess sich jedoch keine Grössenveränderung der Blutplättchen feststellen. Das Prinzip des Coulter-Counters besteht darin, dass die Veränderungen der Beitfähigkeit gemessen werden. Die grenzflächenaktiven Mittel verändern die Beitfähigkeit und lassen somit die Blutpiättchen für die Vorrichtung kleiner erscheinen. Sämtliche der untersuchten grenzflächenaktiven Mittel verursachten diese scheinbare Grössenänderung. Diese scheinbare Grössenabnahme kann aber nicht hingenommen werden, da die meisten zum Zählen von Blutplättchen verwendeten Vorrichtungen zu ungenauen Zählergebnissen führen.It was then assumed that the surface-active properties The boron release agents are responsible for the adsorption of the platelets on the polystyrene surface is prevented. For this reason, according to the invention various cationic, anionic and nonionic surfactants examined. The cationic surfactants caused indiscriminately a platelet aggregation. Most of the non-ionic and anionic surfactants Means prevented the counting result from decreasing when left standing or Moving the platelets occurs. Although thus the solution of the invention Given task appeared, an examination of the size of mit Surfactants treated platelets in a Coulter ZBI, a Device for the size analysis of particles such as platelets and white blood cells, that there is a sharp decrease in the size of blood platelets. In the Examination of the platelets under the microscope with an ocular micrometer left however, no change in the size of the platelets is found. The principle The Coulter Counter is that the changes in the ability to work are measured will. The surface-active agents change the capacity and thus leave the platelets appear smaller to the device. All of the examined surfactants caused this apparent change in size. These Apparent decrease in size can not be accepted, since most of the Platelet counting devices used to produce inaccurate counting results to lead.

Hierauf wurde erfindungsgemäss die Wirkung von verschiedenen Polyäthylenglykolen, beispielsweise Polyäthylenglykol 400, 4000, 6000 und 20 000 untersucht. Die angegebenen Zahlenwerte stellen das ungefähre Molekulargewicht des Polyäthylenglykols dar. Bei den Polyäthylenglykolen handelt es sich um Xthylenoxidpolymerisate der allgemeinen Formel HOC-(CH20CF )n-CFOH in der n die durchschnittliche Anzahl der Oxyäthyleneinheiten bedeutet. Alle diese Polyäthylenglykole bewirken eine Verringerung der Oberflächenspannung. Der Zusatz von flüssigen Polyäthylenglykolen (200, 300, 400) zu Blutplättohensuspensionen kann die Adsorption von Blutplätt chen nicht verhindern, so dass weiterhin eine Verringerung des Zählergebnisses resultiert. Polyäthylenglykol 4000, 6000 und 20 000 sind in der Lage, die Abnahme des Zahlergebnisses nach dem Schiitteln zu verhindern. Dies ist überraschend, da die Wirkung auf die Oberflächenspannung für alle Polyäthylenglykolprodukte ähnlich ist. Sowohl flüssige als auch feste Polyäthylenglykole weisen in wässriger Lösung eine Oberflächenspannung von etwa 70 dyn pro cm bei 250C bei niedrigen Konzentrationen auf und ergeben einen Abfall auf 45 bis 50 dyn/cm bei 30 bis 70 Prozent.Then according to the invention the effect of various polyethylene glycols, for example polyethylene glycol 400, 4000, 6000 and 20,000 investigated. The specified Numerical values represent the approximate molecular weight of the polyethylene glycol the polyethylene glycols are ethylene oxide polymers of the general type Formula HOC- (CH20CF) n-CFOH in which n is the average number of oxyethylene units means. All of these polyethylene glycols reduce the surface tension. The addition of liquid polyethylene glycols (200, 300, 400) to platelet suspensions cannot prevent the adsorption of platelets, so continue to have a Reduction of the count results. Polyethylene glycol 4000, 6000 and 20 000 are able to prevent the decrease in the payment result after skittling. This is surprising as the effect on surface tension is for all polyethylene glycol products is similar. Both liquid as well as solid polyethylene glycols in aqueous solution a surface tension of about 70 dynes per cm at 250C low concentrations and result in a decrease to 45 to 50 dynes / cm at 30 to 70 percent.

Durch Verwendung einer untergeordneten Menge an festem Polyäthylenglykol, vorzugsweise 0,1 bis 0,5 g pro Liter, zur Blutplättchenkontrollverdünnung ist es möglich, die gontrollflüssigkeit gegen eine Abnahme des Zählergebnisses beim Stehenlassen oder nach heftigem Schütteln zu stabilisieren. Dabei tritt keine scheinbare Grössenverminderung ein, die zu falschen Zählergebnissen in den Zählvorrichtungen führen würde.By using a minor amount of solid polyethylene glycol, preferably 0.1 to 0.5 g per liter, for platelet control dilution it is possible to control the liquid against a decrease in the count when left standing or stabilize after vigorous shaking. There is no apparent reduction in size which would lead to incorrect counting results in the counting devices.

Aufgrund des erfindungsgemässen Befundes, dass der Zusatz von untergeordneten Mengen an Polyäthylenglykol eine Stabilisierung von Blutplättchen-ontrollflüssigkeiten ergibt, wurde in der Literatur recherchiert, ob Polyäthylenglykole bisher im Zusammenhang mit Blut im allgemeinen und mit Blutplättchen im besonderen eingesetzt wurden. Dabei wurden verschiedene grenzflächenaktive Substanzen, wie "Pluronics", ermittelt. Hierbei handelt es sich um Poly-(oxypropylen) poly-(oxyäthylen)-Eondensate mit Molekulargewichten im Bereich von 1000 bis 15 000. Derartige Produkte werden von der BASF, Wyandotte, hergestellt. Die Verwendung von derartigen Produkten ist in Bibliothica Anatomica, Er. 12 (1973), 5. 208 bis 212, beschrieben. Obgleich der Zusatz von Pluronics eine Aggregation, ein Gefrieren oder eine Adsorption am Behälter von Blutplättchenkontrollflüssigkeiten verhindert, lässt sich bei Verwendung dieser Mittel 10 Minuten nach ihrer Zugabe eine Verringerung der scheinbaren Grösse feststellen. Dies ist überraschend, da diese unter der Bezeichnung Pluronics vertriebenen Mittel und Polyäthylenglykol so nahe verwandt sind, dass anzunehmen war, dass auch diese herkömmlichen Mittel zu zufriedenstellenden Ergebnissen führen würden.On the basis of the finding according to the invention that the addition of subordinate Amounts of polyethylene glycol stabilize platelet control fluids results, research has been carried out in the literature to determine whether polyethylene glycols have so far been related with blood in general and with platelets in particular. Included various surface-active substances such as "Pluronics" were determined. Here it is poly (oxypropylene) poly (oxyethylene) -Eondensate with molecular weights in the range from 1000 to 15,000. Such products are manufactured by BASF, Wyandotte, manufactured. The use of such products is in Bibliothica Anatomica, He. 12 (1973), pp. 208-212. Although the addition of Pluronics one Aggregation, freezing, or adsorption to the reservoir of platelet control fluids can be prevented when using these agents 10 minutes after their addition notice a decrease in apparent size. This is surprising since these agents sold under the name Pluronics and polyethylene glycol are so closely related that it could be assumed that they were also conventional means would lead to satisfactory results.

Ferner wurde festgestellt, dass in Cryopreservation Techniques, Transfusion, Bd. 15, Nr. 3 (1975), 5. 219 bis 225 auf die Verwendung von Zusätzen zu Blutplättchen für Gefrierzwecke hingewiesen wird. Als Beispiele für Zusätze werden Dimethylsulfoxid und Polyäthylenglykol genannt, wobei Dimethylsulfoxid überlegen sein soll. Jedoch ergibt Dimethylsulfoxid keine Stabilisierung von Blutplättchen.It was also found that in cryopreservation techniques, transfusion, Vol. 15, No. 3 (1975), pp. 219 to 225 on the use of additives to platelets for freezing purposes is indicated. Examples of additives are dimethyl sulfoxide and polyethylene glycol called, whereby dimethyl sulfoxide is said to be superior. However Dimethyl sulfoxide does not stabilize platelets.

Nachstehend wird die Erfindung anhand der Zeichnungen näher erläutert.The invention is explained in more detail below with reference to the drawings.

Fig. 1 stellt zwei im Abstand von etwa 3 Wochen aufgenommene Coulter- Zählergebnisse von mit Polyäthylenglykol 6000 behandelten Blutplättchen dar.Fig. 1 shows two Coulter- Represents count results of platelets treated with polyethylene glycol 6000.

Fig. 2 zeigt zwei im Abstand von etwa 4 Tagen aufgenommene Coulter-Zählergebnisse von Blutplättchen, die mit einem handelsüblichen grenzflächenaktiven Mittel behandelt worden sind sdarv Ein typisches erfindungsgemässes Präparat, bei dem festes Polyäthylenglykol zur Blutplättchensuspension gegeben wird, enthält pro 100 ml Blutplättchensuspension folgende Bestandteile: 2,0 ml 25% Glutaraldehyd, 1,5 g Na2HP04- und 10 bis 20 g Polyäthylenglykol 6000 oder Polyäthylenglykol 4000.Figure 2 shows two Coulter counting results taken about 4 days apart of platelets treated with a commercially available surfactant sdarv A typical preparation according to the invention, in which solid polyethylene glycol is added to the platelet suspension, contains per 100 ml of platelet suspension the following ingredients: 2.0 ml 25% glutaraldehyde, 1.5 g Na2HP04- and 10 to 20 g Polyethylene glycol 6000 or polyethylene glycol 4000.

Der pH-Wert wird auf 7,4 eingestellt. 3,3 kl der Blutplättchensuspension werden zu 20 ml Verdünnungsmittel gegeben und ausgezahlt. Bei einem heftigen Schütteln dieses Präparats ergibt sich keine Veränderung des Zählergebnisses.The pH is adjusted to 7.4. 3.3 kl of the platelet suspension are added to 20 ml of diluent and paid out. With a violent shaking there is no change in the counting result for this preparation.

Die gleichen Ergebnisse werden erhalten, wenn 6,6 kl zu 20 ml Verdünnungsmittel gegeben werden.The same results are obtained when 6.6 kl to 20th ml of diluent are added.

Eine andere Möglichkeit besteht darin, das Polyäthylenglykol direkt zu einem Verdünnungsmittel der folgenden Zu- t sammensetzung zu geben: 0,3 gAiiter Kaliumchlorid, 7,8 gALiter Natriumchlorid, 2,4 gititer dibasisches Natriumphosphat (pH-Wert 7,4) und 0,1 bis 0,5 gitter Polyäthylenglykol 4000 oder Polyäthylenglykol 6000.Another option is to use the polyethylene glycol directly to be added to a diluent of the following composition: 0.3 gAiiter Potassium chloride, 7.8 gALiter sodium chloride, 2.4 gititer dibasic sodium phosphate (pH 7.4) and 0.1 to 0.5 grids of polyethylene glycol 4000 or polyethylene glycol 6000.

Zu diesem Verdünnungsmittel gegebene Blutplättchen werden beim Stehenlassen nicht an den Behältern adsorbiert und zeigen dabei keine Verringerung des Zahlergebnisses. Besonders wichtig ist der Befund, dass bei Zusatz von Polyäthylenglykol 6000 zu den Blutplättchen im vorerwähnten Präparat keine Verringerung der scheinbaren Teilchengrösse der Blutplättchen eintritt. Im Diagramm von Fig. 1 ist die Zählung von mit Polyäthylenglykol 6000 behandelten Blutplättchen am Anfang und nach 3-wöchiger Lagerung bei 400C dargestellt. Hieraus ergibt sich, dass eine Veränderung der scheinbaren Grösse nicht feststellbar ist.Platelets added to this diluent will become upon standing not adsorbed on the containers and show no reduction in the number result. Particularly important is the finding that when polyethylene glycol 6000 is added the platelets in the above-mentioned preparation did not reduce the apparent particle size the platelets enter. In the diagram of Fig. 1 is the count of with polyethylene glycol 6000 treated platelets at the beginning and after 3 weeks of storage at 400C. This means that a change in the apparent size cannot be determined is.

Die Erfindung ist mit Vorteil auf frische Blutplättchen, d.h. auf solche die nicht fixiert worden sind, anwendbar.The invention is advantageous on fresh platelets, i.e. on those that have not been fixed are applicable.

Frische menschliche Blutplättchen, die mit festem Polyäthylenglykol stabilisiert worden sind, ergeben eine Zahlung von 22 564 und von 22 258 nach heftigem Schütteln. Demgegeniiber zeigen die gleichen Blutplättchen ohne Zusatz von Polyäthylenglykol ein Zählergebnis von 22 565 vor dem Schütteln und von 16 817 nach dem Schütteln.Fresh human platelets made with solid polyethylene glycol have stabilized results in a payment of 22,564 and 22,258 after violent Shake. In contrast, the same blood platelets show without the addition of polyethylene glycol a count of 22,565 before shaking and 16,817 after shaking.

Um die Wirkung des erfindungsgemässen Zusatzes von Polyäthylenglykol zu erläutern, werden nachstehend Ergebnisse widergegeben, die bei Verwendung der nachstehend angegebenen grenzflächenaktiven Mittel erhalten werden Fluorochemical Surfactants FC-128, FC-134 und FC-170 (3M Company), EL-620 und EL-71 9, nicht-ionogene grenzflächenaktive Mittel auf der Basis von polyoxylierten pflanzlichen Ölen (GAF Corporation), DOW Corning 190, grenzflächenaktives Silicon-Glykol-Polymerisat, DOW Corning 193 Surfactant-Silicon-Profoamer, ein Silicon-Polyoxyalkylen-Copo'.ymerisat.To the effect of the inventive addition of polyethylene glycol to explain, results are given below reflected that at Can be obtained using the surfactants given below Fluorochemical Surfactants FC-128, FC-134 and FC-170 (3M Company), EL-620 and EL-71 9, non-ionic surfactants based on polyoxylated vegetable Oils (GAF Corporation), DOW Corning 190, surface-active silicone glycol polymer, DOW Corning 193 Surfactant-Silicon-Profoamer, a silicone-polyoxyalkylene copolymer.

(Die nachstehenden Produkte werden von der GAF Corporation, Linden, New Jersey, vertrieben) Gafac RP-710 Säureester Gafac RE-610 Säureester Gafco LO-529 Partielles Natriumsalz von Phosphatestern Antarox BL-225 Modifizierter,linearer aliphatischer Polyäther Antarox BL-240 Modifizierter, linearer aliphatischer Polyäther Emulphor EN-620 Polyoxyäthyliertes pflanzliches öl Emulphor EL-719 Polyoxyäthyliertes pflanzliches öl (Bei den nachstehenden Produkten handelt es sich um fluorhaltige grenzflächenaktive Mittel der Firma Dupont) Zonyl FSB amphoter Zonyl FSN nicht-ionogen Zonyl FSC kationisch Zonyl FSV anionisch Zonyl FSP anionisch Zonyl FSA anionisch Mit Ausnahme von Zonyl FSC verhindern sämtliche grenzflächenaktive Mittel eine Verringerung der Blutplättchenzahlung beim Schütteln. Die einzelnen grenzflächenaktiven Mittel werden untersucht, indem sie zu der Blutplättchensuspension gegeben werden. 6,6 6,6,kl Blutplättchensuspension werden sodann zu 20 ml Kochsalzverdünnungsmittel für die Zellzählung pipettiert. Die Menge die zu einer Verhinderung der Abnahme der Blutplättchenzählung erforderlich ist liegt bei 0,1 bis 0,5 ml pro 20 ml Blutplättchensuspension. Von sämtlichen grenzflächenaktiven Mitteln ruft Zonyl FSN, ein nicht-ionogenes Mittel, die geringste Veränderung der Blutplättchenleitfähigkeit bzw. der scheinbaren Grösse hervor.(The products below are made by GAF Corporation, Linden, New Jersey, distributed) Gafac RP-710 acid ester Gafac RE-610 acid ester Gafco LO-529 Partial sodium salt of phosphate esters Antarox BL-225 Modified, linear aliphatic polyether Antarox BL-240 Modified, linear aliphatic polyether Emulphor EN-620 Polyoxyethylated vegetable oil Emulphor EL-719 Polyoxyethylated vegetable oil (The following products contain fluorine surface-active agents from Dupont) Zonyl FSB amphoteric Zonyl FSN non-ionic Zonyl FSC cationic Zonyl FSV anionic Zonyl FSP anionic Zonyl FSA anionic With With the exception of Zonyl FSC, all surfactants prevent degradation the platelet count when shaken. The individual surfactants are examined by adding them to the platelet suspension. 6.6 6.6, kl platelet suspension are then added to 20 ml of saline diluent pipetted for cell counting. The amount used to prevent the decrease the platelet count required is 0.1 to 0.5 ml per 20 ml of platelet suspension. Of all surfactants, Zonyl FSN, a non-ionic agent, the slightest change in platelet conductivity or its apparent size emerged.

Nachstehend ist ein Beispiel für die Verwendung von FSN in einer Blutplättchensuspension näher erläutert: Es werden 0,1 ml FSN pro 20 ml Blutplättchensuspension verwendet. 6,6 Xl der Blutplättchensuspension mit einem Gehalt an dem grenzflächenaktiven Mittel werden zu 20 ml Verdünnungsmittel pipettiert. Das Blutplättchen enthaltende Verdünnungsmittel wird sodann gezählt. Das ursprüngliche Zählergebnis beträgt 9358. Nach heftigem 6-maligem Schütteln nimmt die Zählung auf 7526 ab. Sodann werden 0,5 ml Zonyl FSN zu 20 ml Blutplättchensuspension gegeben. Nach vorsichtigem Stürzen ergibt sich eine Zählung von 7622. Nach 30-minütigem Schütteln in einem Polystyrolbehälter beträgt die Zählung 7670. Hieraus ergibt sich, dass bei Verwendung einer entsprechenden Menge an FSN die Ädsorptionserschei nungen verschwinden. Zur Kontrolle wird die nicht-behandelte Blutplättchensuspension (6,6 zl pro 20 ml Verdünnungsmittel) nach vorsichtigem Stürzen ausgezählt. Es ergibt sich ein Wert von 10 643. Nach 6-maligem heftigem Schütteln sinkt der Wert auf 5800. Das Zonyl-Präparat wird in einer Feststoffkonzentration von 50 Prozent in IsopropanolAlasser verwendet. Sodann werden Stabilitätsuntersuchungen durchge- führt, bei denen 0,5 ml Zonyl FSN zu 20 ml Blutplättchensuspension gegeben werden. Anschliessend werden die Gemische in verschlossene Behälter von 40, 25 bzw. 50C gegeben. Die ursprünglichen Untersuchungen der Blutplättchen mit dem Coulter ZBI dienen neben der Aus zählung auch der Messung der Grösse der Blutplättchen. Diese Messung wird in Abständen von 3 Tagen wiederholt, um während dieser Zeit aufgetretene Veränderungen des Zählergebnisses und der Grösse festzustellen. Nach 3 Tagen zeigt der Coulter ZBI an, dass sich die Blutplättchengrösse verändert hat.Below is an example of the use of FSN in a platelet suspension explained in more detail: 0.1 ml FSN per 20 ml platelet suspension are used. 6.6 xl of the platelet suspension containing the surfactant are pipetted into 20 ml of diluent. Diluent containing the platelet is then counted. The original count is 9358. After violent Shaking 6 times will decrease the count to 7526. Then 0.5 ml of Zonyl FSN added to 20 ml of platelet suspension. After carefully falling, it arises a count of 7622. After 30 minutes of shaking in a polystyrene container, is the count is 7670. This means that when using a corresponding Amount of FSN the adsorption symptoms disappear. The untreated platelet suspension (6.6 zl per 20 ml of diluent) after careful falling. The result is a value of 10 643. After 6 times violent shaking the value drops to 5800. The Zonyl preparation is in a solid concentration 50 percent used in isopropanol / water. Then stability tests are carried out through where 0.5 ml of Zonyl FSN leads to 20 ml of platelet suspension are given. Then the mixtures are in sealed containers of 40, 25 and 50C respectively. The original studies of the platelets with In addition to counting, the Coulter ZBI also measures the size of the blood platelets. This measurement is repeated at intervals of 3 days for any occurrence during this time Determine changes in the counting result and the size. After 3 days shows the Coulter ZBI indicates that the platelet size has changed.

Wie vorstehend erläutert, ist diese änderung nicht tatsäch7ic.h eingetreten, sondern auf eine änderung von physikalischen Werten der Blutplättchen zurückzuführen, wie sich unter dem Mikroskop feststellen lässt.As explained above, this change has not actually occurred, but due to a change in physical values of the blood platelets, as can be seen under the microscope.

Aus Fig. 2 ergibt sich, dass die Zählergebnisse stark unterschiedlich sind. Dieser Unterschied ist noch ausgeprägter, wenn erhöhte FSN-Konzentrationen verwendet werden.It can be seen from FIG. 2 that the counting results differ greatly are. This difference is even more pronounced when increased FSN concentrations be used.

Die Verwendung von Glas und mit Silicon beschichtetem Glas führt, wie vorstehend erwähnt, nicht zu den Vorteilen, die sich erfindungsgemäss erzielen lassen. Dies wird nachstehend erläutert: Mit Silicon beschichtetes Glas Glas 9800 vorsichtiges Stürzen 10 100 3-maliges vorsichtiges Mischen 7780 6-maliges heftiges 7719 6-maliges heftiges Schütteln Schütteln 7300 6-maliges heftiges 7401 6-maliges heftiges Schütteln Schütteln.The use of glass and glass coated with silicone leads to as mentioned above, not to the advantages that are achieved according to the invention permit. This is explained below: Silicone Coated Glass Glas 9800 careful falling 10 100 3 times careful mixing 7780 6 times violent 7719 6 vigorous shaking times. Shaking 7300 6 vigorous shaking times 7401 6 times violent shaking shaking.

Claims

"Process for the preparation of a platelet control fluid" A method for producing a stabilized platelet control fluid, d u r c h e k e n n nz e i c h n e t that one is solid polyethylene glycol either to a platelet suspension or to a diluent for a platelet suspension and then the mixture obtained with the other of the aforementioned components added, whereby a control liquid is obtained which is essentially oil-resistant and is insensitive to movement.

2. The method according to claim 1, d a d u r c h g e k e n n -z e i c n e t that the polyethylene glycol is added to the platelet suspension.

3. The method according to claim 2, d a d u r c h g e k e n nz e i c h n e t that 100 ml of the suspension are mixed with about 10 to 20 g of polyethylene glycol.

4. The method according to claim 1, d a d u r c h g e k e n nz e i c h n e t that you add the polyethylene glycol to the diluent.

5. The method according to claim 4, d a d u r c h g e k e n nz e i c h n e t that one liter of diluent with about 0.1 to about 0.5 g of polyethylene glycol offset.