DE2708047A1 - BETA-HYDROXYPROPIONYLCLAVULANIC ACID DERIVATIVES, THE PROCESS FOR THEIR MANUFACTURING AND MEDICINAL PREPARATIONS CONTAINING THESE COMPOUNDS - Google Patents
BETA-HYDROXYPROPIONYLCLAVULANIC ACID DERIVATIVES, THE PROCESS FOR THEIR MANUFACTURING AND MEDICINAL PREPARATIONS CONTAINING THESE COMPOUNDSInfo
- Publication number
- DE2708047A1 DE2708047A1 DE19772708047 DE2708047A DE2708047A1 DE 2708047 A1 DE2708047 A1 DE 2708047A1 DE 19772708047 DE19772708047 DE 19772708047 DE 2708047 A DE2708047 A DE 2708047A DE 2708047 A1 DE2708047 A1 DE 2708047A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- ester
- compound
- formula
- hydroxypropionylclavulanic
- salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D503/00—Heterocyclic compounds containing 4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxapenicillins, clavulanic acid derivatives; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Description
Brentford, Middlesex, GroscbritannienBrentford, Middlesex, UK
"ß-Hydroxypropionylclavulansäure-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneipräparate""β-Hydroxypropionylclavulanic acid derivatives, process for their Manufacture and medicinal preparations containing these compounds "
beanspruchte Priorität:claimed priority:
26. Februar 1976 - Grossbritannien - Nr. Ο75Ί5/76Feb. 26, 1976 - Great Britain - No. Ο75Ί5 / 76
Die Erfindung betrifft Verbindungen, die einen ß-Lactamring enthalten und antibakteriell wirken, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneipärparate.The invention relates to compounds which contain a β-lactam ring and have an antibacterial effect, a method for their Manufacture and medicinal preparations containing these compounds.
Gemäss der BE-PS 827 926 kann man die Clavulansäure der Formel 1According to BE-PS 827 926, the clavulanic acid can be used formula 1
CH2OHCH 2 OH
(ι)(ι)
70983B/093870983B / 0938
durch Bebrüten von Streptomyces clavuligerus erhalten. Gemäss der BE-PS 834 6^5 kann man Acylderivate der Clavulansäure durch herkömmliche Acylierung von Clavulansäure herstellen. obtained by incubating Streptomyces clavuligerus. According to BE-PS 834 6 ^ 5 acyl derivatives of clavulanic acid can be used prepared by conventional acylation of clavulanic acid.
Es wurde nun festgestellt, dass man ein spezielles Acylderivat der Clavulansäure durch Bebrüten von Streptomyces clavuligerus erhalten kann.It has now been found that one is a special acyl derivative of clavulanic acid can be obtained by incubating Streptomyces clavuligerus.
Die Erfindung betrifft daher die Verbindung der Formel II, deren Salze und Ester.The invention therefore relates to the compound of the formula II, their salts and esters.
CH2-O-CO-CH2-CH2-OHCH 2 -O-CO-CH 2 -CH 2 -OH
(H)(H)
Zweckmässigerweise liegt die Verbindung der Formel II in Form eines pharmakologisch verträglichen Salzes vor, z.B. als Natrium-, Kalium-, Lithium-, Calcium-, Magnesium-, Aluminium-, Ammonium- und herkömmlich substituiertes Ammoniumsalz sowie als Benzathin-, Procain-, 1-Ephenamin-, Trimethylamin- und Triäthylaminsalz.The compound of the formula II is expediently in the form of a pharmacologically acceptable salt, e.g. as sodium, potassium, lithium, calcium, magnesium, aluminum, Ammonium and conventionally substituted ammonium salt as well as benzathine, procaine, 1-ephenamine, trimethylamine and Triethylamine salt.
Vorzugsweise liegt die erfindungsgemässe Verbindung der Formel Il in Fora eines Esters vor, z.B. als leicht verseif-The compound according to the invention is preferably the Formula II in the form of an ester, e.g. as a slightly saponified
709835/0938709835/0938
barer Ester, wie durch milde basische Hydrolyse, durchfree esters, such as by mild basic hydrolysis
verseifbarer Ester. Hydrierung oder enzymatische Hydrolyse /TTeeignete Ester sind in den BE-PSen 827 926 und 834 6H5 beschrieben. Besonders geeignet ist der Benzylester, der durch katalytische Hydrierung zur Verbindung der Formel II oder deren Salz gespalten werden kann.saponifiable ester. Hydrogenation or enzymatic hydrolysis / T are suitable esters in BE-PSs 827 926 and 834 6H5. Particularly the benzyl ester, which is produced by catalytic hydrogenation, is suitable can be cleaved to the compound of formula II or its salt.
Die Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung der Formel II, deren Salz oder Ester, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man einen Stamm von Streptomyces clavuligerus bebrütet, aus dem Kulturmedium die Verbindung der Formel II oder deren Salz isoliert und gegebenenfalls .in herkömmlicher Weise in einen Ester umwandelt.The invention also relates to a process for the preparation of the compound of the formula II, its salt or ester, the characterized in that a strain of Streptomyces clavuligerus is incubated, the compound from the culture medium of the formula II or its salt isolated and, if necessary, converted into an ester in a conventional manner.
Das Bebrüten von Streptomyces clavuligerus erfolgt gemäss der BE-PS 827 926. Dem Kulturmedium kann man gegebenenfalls ß-Hydroxypropionsäure zusetzen.The incubation of Streptomyces clavuligerus takes place according to the BE-PS 827 926. The culture medium can optionally be added ß-hydroxypropionic acid.
Die erste Extraktion und die Konzentration der MetabolitenThe first extraction and the concentration of the metabolites
Kulturbrühe
aus dem Fiitrat der /""erfolgt gemäss BE-PS 827 926.Culture broth
the / "" is made from the fiitrate in accordance with BE-PS 827 926.
Einen Ester, z. B. den Benzylester, der Verbindung der Formel II erhält man durch Behandeln des teilweise gereinigten Präparats mit einem reaktiven Bromid und anschliessendem chromatographischem Abtrennen des gewünschten Esters aus dem Gemisch. Geeignete chromatographische Systeme sind vernetztes Dextran und Kieselgel und als Lösungsmittel Cyclohexan, Chloroform, Xthylacetat oder Gemische dieser Verbindungen.An ester, e.g. B. the benzyl ester, the compound of formula II is obtained by treating the partially purified Preparation with a reactive bromide and subsequent chromatographic separation of the desired ester from the Mixture. Suitable chromatographic systems are crosslinked dextran and silica gel and, as solvents, cyclohexane, chloroform, Ethyl acetate or mixtures of these compounds.
709835/0938709835/0938
Das Fortschreiten der Verbindung der Formel II oder deren Derivate durch das Trennsystem kann durch Dünnschichtchromatographie oder mit dem KAG-System gemäss der BE-PS 827 926 verfolgt werden. (Das KAG-System besteht aus mit Klebsieila aerogenes NCTC 418 beimpften und Penicillin G enthaltenden Agarplatten).The progress of the compound of the formula II or its derivatives through the separation system can be determined by thin layer chromatography or with the KAG system in accordance with BE-PS 827 926 to be tracked. (The KAG system consists of NCTC 418 inoculated with Klebsieila aerogenic and containing penicillin G. Agar plates).
Man kann aber auch einen praktisch reinen Ester der Verbindung der Formel II durch Chromatographie eines Gemisches dieses Esters und des entsprechenden Clavulansäure-Esters der Formel I isolieren.But you can also a practically pure ester of the compound of formula II by chromatography of a mixture of these Isolate the ester and the corresponding clavulanic acid ester of the formula I.
Für diesen Zweck besonders geeignet ist der Benzylester, ebenfalls geeignet ist der p-Methoxybenzylester.The benzyl ester is particularly suitable for this purpose, too the p-methoxybenzyl ester is suitable.
Die Verbindung der Formel II oder deren Salz kann durch katalytische Hydrierung des Benzylesters der Verbindung der Formel II gegebenenfalls in Gegenwart eines basischen Salzes hergestellt werden. Diese Reaktion erfolgt unter den in der BE-PS 831» 6l»5 beschriebenen Bedingungen.The compound of the formula II or its salt can be prepared by catalytic hydrogenation of the benzyl ester of the compound of the formula II, if appropriate in the presence of a basic salt. This reaction takes place under the conditions described in BE-PS 83 1 »6l» 5.
Die Erfindung betrifft ferner Arzneipräparate, die durch einen Gehalt an einer Verbindung der Formel II, deren Salz oder Ester in Kombination mit üblichen pharmakologisch verträglichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln gekennzeichnet sind.The invention also relates to medicinal preparations which contain a compound of the formula II, the salt thereof or esters in combination with customary pharmacologically acceptable carriers and / or diluents are.
709835/0938709835/0938
Die erfindungsgemässen Arzneipräparate können zusätzlich noch ein Penicillin- oder Cephalosporinderivat enthalten.The medicinal preparations according to the invention can additionally also contain a penicillin or cephalosporin derivative.
Die erfindungsgemässen Arzneipräparate werden gemäss den BE-PSen 827 926 und 83^4 615 konfektioniert.The pharmaceutical preparations according to the invention are according to the BE-PSs 827 926 and 83 ^ 4 615 assembled.
Die Beispiele erläutern die Erfindung.The examples illustrate the invention.
Streptomyces clavuligerus ATCC 27O61» werden in einer Roux-Plasche 10 Tage bei 26°C auf einem Bennett-Agar gezüchtet. Das Gemisch wird mit 100 ml sterilem Wasser versetzt und zum Inokulieren von 75 Litern mit Dampf sterilisiertem Medium der folgenden Zusammensetzung verwendet. Das Medium hat einen pH-Wert von 7,0.Streptomyces clavuligerus ATCC 27O6 1 »are grown in a Roux plate for 10 days at 26 ° C. on Bennett agar. To the mixture is added 100 ml of sterile water and used to inoculate 75 liters of steam-sterilized medium of the following composition. The medium has a pH of 7.0.
Dextrin 2Dextrin 2
Sojabohnenmehl 1Soybean meal 1
10 % Antischaummittel10 % antifoam agent
in Sojabohnenöl 0,03in soybean oil 0.03
Leitungswassertap water
X10prozentige Dispersion von Polyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Polyoxyäthylen-Folymerisat. X 10 percent dispersion of polyoxyethylene-polyoxypropylene-polyoxyethylene film.
Das Medium befindet sich in einem 100 Liter fassenden Fermentator aus rostfreiem Stahl, der mit Leitblechen ausgerüstet ist. Das Gemisch viird bei I1IO UpM mit einem Leitschaufe!rührer mit einem Durchmesser von 1.9,05 cm gerührt undThe medium is located in a 100 liter stainless steel fermenter equipped with baffles. The mixture viird at I 1 IO rpm with a Leitschaufe! Stirred stirrer cm with a diameter of 1.9,05, and
709835/0938709835/0938
mit steriler Luft mit einer Geschwindigkeit von 75 Liter/Minute versorgt. Dieses Nährmedium wird 72 Stunden bei 26°C inkubiert, dann zum Inokulieren von 3000 Litern mit Dampf sterilisiertem Medium der folgenden Zusammensetzung verwendet. Das Medium hat einen pH-Wert von 7,0.supplied with sterile air at a rate of 75 liters / minute. This nutrient medium is incubated for 72 hours at 26 ° C, then used to inoculate 3000 liters of steam sterilized medium of the following composition. The medium has a pH of 7.0.
Fettsäure-triglyceride 1Fatty acid triglycerides 1
Sojabohnenmehl 1,5Soybean meal 1.5
KH2PO1J 0,1KH 2 PO 1 J 0.1
Leitungswassertap water
^Gemisch mit 63 % Glycerin-trioleat, welches aus Talg erhalten worden ist.^ Mixture with 63 % glycerine trioleate, which has been obtained from tallow.
Das Medium befindet sich in einem 5000 Liter fassenden Fermentator aus rostfreiem Stahl, der mit Leitblechen ausgerüstet ist, und wird mit zwei Leitschaufelrührern mit einem Durchmesser von je 55,88 cm bei 118 UpM gerührt, mit 1500 Litern/ Minute steriler Luft versorgt und nach Bedarf mit Antischaummittel (lOprozentige Dispersion von Polyoxyäthylen-Polyoxypropylen-Polyoxyäthylen-Polymerisat in Sojabohnenöl) versetzt. Das Gemisch wird bei 26°C 96 Stunden bebrütet j nach dieser Zeit erhält man eine maximale Ausbeute an Clavulansäure.The medium is located in a 5000 liter stainless steel fermenter equipped with baffles is, and is stirred with two vane stirrers with a diameter of 55.88 cm each at 118 rpm, with 1500 liters / Minute sterile air and if necessary with antifoam (10 percent dispersion of polyoxyethylene-polyoxypropylene-polyoxyethylene polymer in soybean oil). The mixture is incubated at 26 ° C. for 96 hours after this time a maximum yield of clavulanic acid is obtained.
709835/09 3 8709835/09 3 8
Beispiel 2Example 2
Das Filtrat der Kulturbrühe von Beispiel 1 wird mit Lösungsmittel extrahiert und gemäss Beispiel 16 der BE-PS 827 926 sprühgetrocknet. Dieser sprühgetrocknete Feststoff (2,2 kg) enthält etwa 150 bis 160 g Clavulansäure-natriumsalz.The filtrate of the culture broth from Example 1 is solvent extracted and according to Example 16 of BE-PS 827 926 spray dried. This spray-dried solid (2.2 kg) contains about 150 to 160 g of clavulanic acid sodium salt.
60 g des Rückstands der Extraktion werden in 100 ml destilliertem Wasser aufgenommen und auf eine Säule, die 7,62 cm im Durchmesser hat und ^5*72 cm lang ist und mit Ionenaustauscherharz in der Chloridform gefüllt ist, aufgegeben. Die Kolonne wird mit einem Natriumchlorid-Gradienten eluiert. Der Gradient wird dadurch hergestellt, dass man die Lösung aus einem H Liter 0,6 m Natriumchlorid enthaltenden Behälter auf die Kolonne aufgibt und diesen Behälter aus einem anderen Vorratsgefäss nachfüllt, das 1,2 m Natriumchloridlösung enthält.60 g of the residue from the extraction are taken up in 100 ml of distilled water and placed on a column that is 7.62 cm in diameter and ^ 5 * 72 cm long and filled with ion exchange resin in the chloride form. The column is eluted with a sodium chloride gradient. The gradient is prepared by giving up the solution of a H liter 0.6 M sodium chloride-containing vessel to the column and this vessel from a different storage vessel refills containing 1.2 M sodium chloride solution.
Es werden 25-rnl-Fraktionen gesammelt und auf ihre Fähigkeit untersucht, die ß-Lactamase von Citrobacter freundii Mantio (zellfreier Extrakt) und von Escherichda coli JT'I (R ) zu hemmen.25-rnl fractions are collected and checked for their ability investigated the ß-lactamase from Citrobacter freundii Mantio (cell-free extract) and from Escherichda coli JT'I (R) too inhibit.
Der Hemmversuch für die Cephalosporinase wird geringfügig verändert gemäss der BE-PS 827 926 durchgeführt, und zwarThe attempt to inhibit the cephalosporinase becomes insignificant changed according to BE-PS 827 926 carried out, namely
Zellextrakt
mit einem zertrümmerten / "" von Citrobacter freundii Mantio anstelle eines Enzyms aus Eschcrichia coli in einer
solchen Menge, dass man bei 1 mg/ml 75 % liydrolyse von
Cephaloridin erhält. Die Fraktionen mit der höchsten Hemmwirkung für Cephalosporinace treten innerhalb einer breiterenZ elle xtrakt
with a smashed / "" from Citrobacter freundii Mantio instead of an enzyme from Eschcrichia coli in such an amount that at 1 mg / ml 75 % hydrolysis of cephaloridin is obtained. The fractions with the highest inhibitory effects for Cephalosporinace occur within a broader range
709835/0938709835/0938
/IO/ IO
Bande der Hemmwirkung für Escherichia coli JT4 auf. Die Fraktionen mit der Hemmwirkung für Cephalosporinase Zierden zu einer Fraktion vereinigt, die viel ß-Hydroxypropionylcalvulansäure-natriumsalz , aber auch Clavulansäure-natriumsalz enthält. Diese Fraktion wird'unter vermindertem Druck eingeengt und gefriergetrocknet. Der Feststoff wird in Dimethylformamid aufgeschlämmt und gemäss BE-PS 827 926 mit Benzylbromid verestert.Band of inhibitory activity for Escherichia coli JT4. the Fractions with the inhibitory effect for cephalosporinase ornaments too pooled a fraction containing a lot of ß-hydroxypropionylcalvulanic acid sodium salt , but also contains clavulanic acid sodium salt. This fraction is concentrated under reduced pressure and freeze-dried. The solid is suspended in dimethylformamide and esterified with benzyl bromide in accordance with BE-PS 827 926.
Der Äthylacetatextrakt der Veresterungsreaktion wird eingeengt,The ethyl acetate extract of the esterification reaction is concentrated,
(Durchmesser: 2,5*» cm) man erhält ein öl (5 g) , das auf eine Kolonne / mit(Diameter : 2.5 * »cm) an oil (5 g) is obtained, which on a column / with
Kieselgel in Cyclohexan aufgegeben wird. Die Kolonne wird mit Cyclohexan gewaschen , auf diese Weise wird Benzylbromid entfernt. Die Säule wird dann mit Äthylacetat/Cyclohexan im Verhältnis 1:1 eluiert, es werden ή-ml-Fraktionen gesammelt. Die Fraktionen werden auf Kieselgel-Dünnschichtplatten aufgebracht, mit Äthylacetat/Cyclohexan im Verhältnis 1:1 entwickelt und mit Triphenyltetrazoliumchlorid-Reagens besprüht. Die Fraktionen v/erden auch noch mit den KAG-Platten gemäss der BE-PS 827 926 untersucht. (Die KAG-Platten sind Agarplatten, die mit Klebsieila aerogenes NCTC in8 beimpft sind und Penicillin G enthalten): 6 mm Antibiotikumversuchsscheiben (Whatman AA) werden in die Fraktionen eingetaucht, getrocknet und auf den Agar aufgebracht. Die Platten werden bei 300C über Nacht inkubiert, die Hemmzonen werden gemessen. Auf diese Weise erhält man eine Bande mit synergistischer Aktivität (KAG), die nach dem Hauptgipfel von Clavulansäurebenzylester eluiert. Diese aktive Fläche enthält gemäss der Dünnschichtchromatographie eine Komponente, die langsamer eluiert als Clavulansäure-benzylester (sie wurde später als der Benzylester der Verbindung der Formel II identifiziert). Diese langsamer laufenden Fraktionen werden vereinigt, eingeengt und auf einemSilica gel is applied in cyclohexane. The column is washed with cyclohexane, in this way benzyl bromide is removed. The column is then eluted with ethyl acetate / cyclohexane in a ratio of 1: 1, ή ml fractions are collected. The fractions are applied to thin-layer silica gel plates, developed with ethyl acetate / cyclohexane in a ratio of 1: 1 and sprayed with triphenyltetrazolium chloride reagent. The fractions are also examined with the KAG plates according to BE-PS 827 926. (The KAG plates are agar plates inoculated with Klebsieila aerogenic NCTC in8 and contain penicillin G): 6 mm antibiotic test discs (Whatman AA) are immersed in the fractions, dried and applied to the agar. The plates are incubated at 30 ° C. overnight, and the zones of inhibition are measured. In this way a band with synergistic activity (KAG) is obtained which elutes after the main peak of benzyl clavulanate. According to thin-layer chromatography, this active area contains a component which elutes more slowly than benzyl clavulanate (it was later identified as the benzyl ester of the compound of formula II). These slower running fractions are pooled, concentrated and on one
709835/0938709835/0938
Bett mit den Abmessungen 1,27 x ^5,72 cm von vernetzten Dextran (Sephadex LH2O) mit Cyclohexan/Chloroform im Verhältnis 1:1 chromatographiert. Es werden 2-ml-Fraktionen gesammelt, die sowohl dünnschichtchromatographisch wie auch mit KAG-Platten untersucht werden. Auf diese Weise kann man wirkungsvoll den Benzylester von ß-Hydroxypropionylclavulansäure (Fraktionen bis 105) von dem restlichen Clavulansäure-benzylester (Fraktionen 125 bis 150) trennen. Von der Kolonne mit vernetztcm Dextran erfolgt die Elution in umgekehrter Reihenfolge wie von den Kieselgelsäulen und den Dünnschichtplatten. Clavulansäurebenzylester und ß-Hydroxypropionylcalvulansäure-benzylester wei-den sowohl durch Dünnschichtchromatographie mit Triphenyltetrazoliumehlorid als auch durch KAG-Aktivität bestimmt. Die den ß-llydroxypropionylclavulansäure-benzylester enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und schliesslich auf einerBed measuring 1.27 x ^ 5.72 cm of cross-linked dextran (Sephadex LH2O) with cyclohexane / chloroform in a ratio of 1: 1. 2 ml fractions are collected which both by thin layer chromatography and with KAG plates to be examined. In this way one can effectively use the benzyl ester of ß-hydroxypropionylclavulanic acid (fractions to 105) from the remaining benzyl clavulanate (fractions 125 to 150). From the column with crosslinked dextran the elution takes place in the reverse order as from the silica gel columns and the thin-layer plates. Clavulanic acid benzyl ester and ß-hydroxypropionylcalvulanic acid benzyl ester both by thin-layer chromatography with triphenyltetrazolium chloride as well as determined by KAG activity. Those containing the ß-llydroxypropionylclavulanic acid benzyl ester Fractions are combined and finally on one
(Durchmesser: 1.27 cm)
Kieselgelsäule/mit fithylacetat/Cyclohexan im Verhältnis 6:'l
chromatographiert. Die die gewünschten Verbindungen enthaltenden Fraktionen werden zu einem öl (12 mg) getrocknet, das aus
praktisch reinem ß-Hydroxypropionylclavulansäure-benzylester
besteht.(Diameter: 1.27 cm)
Silica gel column / chromatographed with ethyl acetate / cyclohexane in the ratio 6: 'l. The fractions containing the desired compounds are dried to an oil (12 mg) which consists of practically pure ß-hydroxypropionylclavulanic acid benzyl ester.
Die Hemmwirkung für ß-Lactamase dieses ß-Hydroxypropionylcalvulansäure-benzy.Testers wird gemäss der BE-PS 827 926 bestimmt;The inhibitory effect for ß-lactamase of this ß-hydroxypropionylcalvulanic acid benzy.Tester is determined in accordance with BE-PS 827 926;
7 0 9 8 3 b / 0 9 3 87 0 9 8 3 b / 0 9 3 8
ß-Lactamase ausß-lactamase
Pseudomonas aeruginosa A
Citrobacter freundii Mantio Escherichia coli JTi
Staphylococcus aureus Russell Pseudomonas aeruginosa Dalgleish Klebsiella aeruginosa E 70
Proteus mirabilis C889Pseudomonas aeruginosa A.
Citrobacter freundii Mantio Escherichia coli JTi
Staphylococcus aureus Russell Pseudomonas aeruginosa Dalgleish Klebsiella aeruginosa E 70
Proteus mirabilis C889
Das Filtrat der Kulturbrühe aus Beispiel 1 wird durch eine Kolonne mit einem stark basischen Ionenaustauscherharz in der Acetatform filtriert,bis die ß-Lactamase-Hemmwirkung in dem Filtrat auftritt. Die Kolonne v/ird dann mit Wasser, anschliessend mit 1,0 m Natriumchlorid eluiert. Die Fraktionen, die in dem Hemmversuch mit dem Enzym aus E. coli JT*) eine Hemmwirkung auf ß-Lactamase haben, werden vereinigt und sprühgetrocknet. Der Feststoff v/ird gemäss der BE-PS 827 926 mit Benzylbromid verestert. Der benzylbromidfreie Extrakt v/ird zu einem öl eingeengt, das durch eine Kolonne mit verr.etztem Dextran mit Cyclohexan/ Chloroform im Verhältnis 1:1 chromatographiert wird. Die Fraktionen werden geruäss Beispiel 2 durch Dünnschichtchroniato·- graphie und Besprühen mit Triphenyl-tetrazoliumchlorid untersucht. Alle Fraktionen vor dor Elution des Clavulansäurebenzylcsters werden vereinigt und zu einem öl eingeengt(400 ml). JüO ml diese« üls werden auf einer Kieselgelsäule mit einem Durchmesser von 7,62 cm und einer Länge von '15,72 cm mit Äthylacotat/Cyclohox^n im Verhältnis; 6: H Chromatograph:) crt. Die 2$-ml-The filtrate of the culture broth from Example 1 is filtered through a column with a strongly basic ion exchange resin in the acetate form until the β-lactamase inhibitory effect occurs in the filtrate. The column is then eluted with water, then with 1.0 M sodium chloride. The fractions which have an inhibitory effect on ß-lactamase in the inhibition test with the enzyme from E. coli JT *) are combined and spray-dried. The solid is esterified with benzyl bromide according to BE-PS 827 926. The benzyl bromide-free extract is concentrated to an oil, which is chromatographed through a column containing carbonized dextran with cyclohexane / chloroform in a ratio of 1: 1. The fractions are examined according to Example 2 by thin-layer chronography and spraying with triphenyl-tetrazolium chloride. All fractions before the elution of the clavulanic acid benzyl ester are combined and concentrated to an oil (400 ml). JüO ml of this oil are placed on a silica gel column with a diameter of 7.62 cm and a length of 15.72 cm with ethyl acotate / cyclooxene in the ratio; 6: H chromatograph :) crt. The $ 2 -ml-
709835/0938709835/0938
Fraktionen werden mittels KAG-Platten und Dünnschichtchromatographie mit Triphenyl-tetrazoliumchlorid verfolgt. Die gemäss der KAG-Platten unmittelbar nach dem restlichen Clavulansäure-benKylester eluierenden Fraktionen enthalten gemäss der Dünnschichtchromatographie ß-Hydroxypropionylclavulansäui-e-benzylester. Diese Fraktionen werden vereinigt,Fractions are determined using KAG plates and thin layer chromatography followed with triphenyl-tetrazolium chloride. According to the KAG plates immediately after the rest Clavulanic acid benzyl ester containing eluting fractions according to thin layer chromatography ß-hydroxypropionylclavulansäui-e-benzyl ester. These factions will be united,
(Durchmesser: 2,5^ cm) zu einem öl eingeengt und auf einer Säule/ mit vernetztem Dextran mit Cyclohexan/Chloroform im Verhältnis 1:1 chromatogrpahiert. Man erhält den gewünschten ß-Hydroxypropionyl-( Diameter : 2.5 ^ cm) concentrated to an oil and chromatographed on a column / with crosslinked dextran with cyclohexane / chloroform in a ratio of 1: 1. The desired ß-hydroxypropionyl-
clavulansäure-benzylester, der durch Chromatographie über kloine Kieselgelkolonnen mit Kthylacetat/Cyclohexan im Verhältnis 6:'| gereinigt wird. Ausbeute: 100 mg. IR (Film) v> : 31350 (breit), 1800, 1740 (breit), 1695 cm"1. NMR /ppm (CDCl7): 2,53 (2H, t, J=5,8Hz, 0 , 2,55 (IH, breit,clavulanic acid benzyl ester, which is obtained by chromatography over kloine silica gel columns with ethyl acetate / cyclohexane in a ratio of 6: '| is cleaned. Yield: 100 mg. IR (film) v>: 31350 (broad), 1800, 1740 (broad), 1695 cm " 1. NMR / ppm (CDCl 7 ): 2.53 (2H, t, J = 5.8Hz, 0.2, 55 (IH, wide,
-CCH2) austauschbar mit DO, Oil), 3,05 (IH, d, J = 17,5Hz, 6ß-CH), 3,'»7-CCH 2 ) interchangeable with DO, Oil), 3.05 (IH, d, J = 17.5Hz, 6ß-CH), 3, '»7
(UI, dd, J=17,5Hz, J=2,5Hz, 6o<-CH), 3,82 (2H, t, J=5,8Hz, CH0OH), — — —c (UI, dd, J = 17.5Hz, J = 2.5Hz, 6o <-CH), 3.82 (2H, t, J = 5.8Hz, CH 0 OH), - - - c
1J,75 (3H, m, =CH.CH2O), 5,09 (IH, s, 3-C«),.5,l8 (2H, 3,.CH2C6H5), 5,70 (IH, d, Jr2,5Hz, 5-CH), 7,35 (5H, s, CgH5). Massenspektrum (F.D.): 362 (M+i) + , 36I (M) + , 272 (M-O2CCH2CH 1 J, 75 (3H, m, = CH.CH 2 O), 5.09 (IH, s, 3-C «),. 5, 18 (2H, 3, .CH 2 C 6 H 5 ), 5 .70 (IH, d, Jr 2.5Hz, 5-CH), 7.35 (5H, s, CgH 5 ). Mass spectrum (FD): 362 (M + i) + , 36I (M) + , 272 (MO 2 CCH 2 CH
709835/0938709835/0938
Claims (8)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB7545/76A GB1547222A (en) | 1976-02-26 | 1976-02-26 | Clafulanic acid derivatives |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2708047A1 true DE2708047A1 (en) | 1977-09-01 |
Family
ID=9835190
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19772708047 Withdrawn DE2708047A1 (en) | 1976-02-26 | 1977-02-24 | BETA-HYDROXYPROPIONYLCLAVULANIC ACID DERIVATIVES, THE PROCESS FOR THEIR MANUFACTURING AND MEDICINAL PREPARATIONS CONTAINING THESE COMPOUNDS |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS52125192A (en) |
| DE (1) | DE2708047A1 (en) |
| GB (1) | GB1547222A (en) |
-
1976
- 1976-02-26 GB GB7545/76A patent/GB1547222A/en not_active Expired
-
1977
- 1977-02-24 DE DE19772708047 patent/DE2708047A1/en not_active Withdrawn
- 1977-02-25 JP JP2079477A patent/JPS52125192A/en active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS52125192A (en) | 1977-10-20 |
| GB1547222A (en) | 1979-06-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3122499A1 (en) | NEW DERIVATIVES OF ML-236B, METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF AND MEDICAMENT PREPARATIONS CONTAINING THESE DERIVATIVES | |
| CH638194A5 (en) | ESTERASTIN, A NEW PHYSIOLOGICALLY EFFECTIVE SUBSTANCE AND THEIR PRODUCTION. | |
| AT399155B (en) | NEW ALKYLENE DIAMMONIUM DICLAVULANATE DERIVATIVES, METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF | |
| EP0435152B1 (en) | Process for the enantioselective preparation of (omega-1)-hydroxyalkylxanthines | |
| DE2920890C2 (en) | Esterastine derivatives and processes for their preparation | |
| DE3051038C2 (en) | ||
| CH627475A5 (en) | Process for preparing cephem compounds as intermediates for the synthesis of cephalosporins | |
| DE3784853T2 (en) | METHOD FOR PRODUCING CARBONIC ACID ESTERS. | |
| CH640270A5 (en) | METHOD FOR PRODUCING THE ANTIBIOTIC C-15003 P-3. | |
| DE2514185A1 (en) | HALOGENATED ANTIBIOTICS AND METHOD FOR MANUFACTURING THEREOF | |
| EP0214569A2 (en) | Process for the production of optically active alphaphenoxy propionic acids and their derivatives | |
| DE2708047A1 (en) | BETA-HYDROXYPROPIONYLCLAVULANIC ACID DERIVATIVES, THE PROCESS FOR THEIR MANUFACTURING AND MEDICINAL PREPARATIONS CONTAINING THESE COMPOUNDS | |
| AT398081B (en) | METHOD FOR ENZYMATIC HYDROLYSIS OF A CARBONIC ACID DERIVATIVE | |
| DE3721119A1 (en) | FERMENTATIVE PRODUCTION OF DICARBONIC ACIDS | |
| DE2327990A1 (en) | BIOLOGICAL TRANSFER OF ANHYDROTETRACYCLINES INTO 6-DESOXYTETRACYCLINE | |
| DE3523082C2 (en) | Process for the preparation of 2- (4-isobutylphenyl) propionic acid | |
| CH620243A5 (en) | ||
| DE3041130C2 (en) | ||
| DE3142400A1 (en) | "NEW SS-GALACTOSIDASE INHIBITOR GT-2558, ITS DERIVATIVES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF" | |
| DE2746209C2 (en) | ||
| DE2652677A1 (en) | ANTIBIOTICA 890A LOW 1 AND 890A LOW 3 | |
| EP0019148A1 (en) | Antibiotic suppressing the growth of microorganisms and its manufacture by fermentation | |
| DE2805408A1 (en) | EVERINOMIC IN DERIVATIVES, METHOD FOR THEIR PRODUCTION AND MEDICINAL PRODUCTS CONTAINING THE SAME | |
| DE69123402T2 (en) | Process for the production of optically active alpha-hydroxyalkene derivatives | |
| DE2039184C3 (en) | 7- (5-Amino-5-carboxyvaleramido) -7methoxycephalosporanic acid (antibiotic A 16884) and process for its preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8139 | Disposal/non-payment of the annual fee |