DE2656333C2 - Process for the production of liposomes which contain medicinal substances - Google Patents

Process for the production of liposomes which contain medicinal substances

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DE2656333C2 DE19762656333 DE2656333A DE2656333C2 DE 2656333 C2 DE2656333 C2 DE 2656333C2 DE 19762656333 DE19762656333 DE 19762656333 DE 2656333 A DE2656333 A DE 2656333A DE 2656333 C2 DE2656333 C2 DE 2656333C2
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Description

33

Beispiel 2Example 2

Herstellung von Präparaten zur Beeinflussung des Sekretionsmechanismus und Auslösung von Insulinsekretion. Es werden dabei in Liposome Stoffe inkapsuliert, wie z. B. Zucker (Glukose, Mannose, Ribose), Hormone (STH, ACTH, Glukagon), Enterohormone (Sekretin, Pankreozymin, Sulfonylharnstoffe u. a.). Leucin, Arginin, Aminosäuregemische, Ketonkörper, Laurinsäure, Propionsäure, Buttersäure, Zitronensäure, Zyklisches AMP Xylit unter Zusatz von Extrakten aus Pankreas oder den B-Zellen desselben in einer Konzentration von μg bis ng pro ml. Andererseits kann die Insulinsekretion gehemmt werden durch Inkapsulierung von 2-Desoxyglukose, Mannoheptulose, Diazoxid, Adrenalin und Insulin. Beispielsweise geht man bei Verwendung von Glukose vop blutisotoner 5%iger Glukose aus. Die hergestellten Liposome werden von außen mit entsprechenden Extrakten des Pankreas oder B-Zellen imprägniert, bzw. wird als Suspensionsmittel eine wäßrige Lösung aus diesen Stoffen verwendet, wobei Natriumlaurylsulfat in μg- bis ng-Konzentrationen zugesetzt sein kann. In analoger Weise können durch Zufuhr von Induktoren oder Hemmstoffen auch andere Gewebearten und Zellen beeinflußt werden.Manufacture of preparations for influencing the secretion mechanism and triggering insulin secretion. There are thereby encapsulated substances in liposomes, such as. B. Sugar (glucose, mannose, ribose), hormones (STH, ACTH, glucagon), enteric hormones (secretin, pancreozymin, sulfonylureas, etc.). Leucine, arginine, Amino acid mixtures, ketone bodies, lauric acid, propionic acid, butyric acid, citric acid, cyclicals AMP xylitol with the addition of extracts from the pancreas or the B cells of the same in a concentration of μg to ng per ml. On the other hand, insulin secretion can be inhibited by encapsulating 2-deoxyglucose, Mannoheptulose, diazoxide, adrenaline, and insulin. For example, when using glucose, one starts from 5% glucose which is isotonic in blood. The manufactured Liposomes are impregnated from the outside with appropriate extracts from the pancreas or B cells, or an aqueous solution of these substances is used as the suspension medium, sodium lauryl sulfate be added in μg to ng concentrations can. In an analogous manner, other types of tissue can also be used by adding inducers or inhibitors and cells are affected.

3030th

3535

4040

5050

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Claims (1)

1 21 2 braucht diese Suspensionslösung nicht beseitigt werden.this suspension solution does not need to be removed. Patentanspruch: Bei der oralen Applikation erleichtern die DetergentienClaim: The detergents facilitate oral application sowohl die Resorption der Liposome wie der im Sus-both the resorption of the liposomes and that in the sus- Verfahren zur Herstellung von Liposomen, wel- pensionsmtttei enthaltenen Moleküle,
ehe Arzneistoffe enthalten, mit Zelltropisraus und 5 Besondere Anwendungsmöglichkeiten bestehen in verbesserter Permeabilität bei der Applikation, wo- der Auslösung und andererseits in der Hemmung spezibei aus Zeil- und Gewebeextrakten gewonnene bzw. Fischer Zellfunktionen, wie z. B. der Insulinsekretion und daraus isolierten Membranen Enzyme, zellspezifi- der Sekretion anderer Hormondrüsen durch die inkapsche Immunoglobuline oder spezifische Faktoren, sulierung von Induktionsstoffen bzw. Hemmstoffen ggf. die den Targetzellen entsprechen, an die Liposo- io in Kombination mit entsprechenden Zeil- bzw. Organmenmembran kovafcnt oder adsorptiv angekoppelt' extrakten und Imprägnierung der Liposomenmembran werden, nach Patent P 26 50502, dadurch ge- bzw. Verwendung analogerzytotroper Fraktionen auch kennzeichnet, daß die Lipoidmischung und die von Immunglobulinen im Suspensionsmittel (vgL Beiwäßrige Lösung mit einem Turbomischer homoge- spiel 2 und 3).
nisiert werden. 15
Process for the production of liposomes, molecules contained in welfare pensions,
before containing drugs, with cell tropisraus and 5 special application possibilities consist in improved permeability during application, with triggering and, on the other hand, in the inhibition of specific cell and tissue extracts or Fischer cell functions, such as z. B. insulin secretion and membranes isolated from it, enzymes, cell-specific secretion of other hormonal glands by the encapsulated immunoglobulins or specific factors, sulphation of induction substances or inhibitors, if necessary, which correspond to the target cells, to the liposoio in combination with corresponding cell or Organmenmembrane covafcnt or adsorptively coupled 'extracts and impregnation of the liposome membrane are, according to patent P 26 50502, characterized or the use of analogous cytotropic fractions that the lipoid mixture and that of immunoglobulins in the suspension medium (see aqueous solution with a turbo mixer homogeneous game 2 and 3).
be nized. 15th
Beispiel 1example 1 Es werden Liposome hergestellt aus einer vorherigenLiposomes are made from a previous one Mischung von Ei-Lecithin, Cholesterol und Diäthyl-Mixture of egg lecithin, cholesterol and diethyl 20 phosphat in einem molekularen Mischungsverhältnis20 phosphate in a molecular mixing ratio von 10:2:1 in Chloroform. Letzteres wird im Vakuumof 10: 2: 1 in chloroform. The latter is done in a vacuum Das Verfahren des Patents P 26 50 5023 ermöglicht abgedampft Es werden nun 10 g dieser MischsubstanzThe method of the patent P 26 50 5023 enables vaporization. 10 g of this mixed substance are now es. Liposome als Vehikel zu bestimmten Targetzellen bis auf 60° C erwärmt und unter ständigem Homogeni-it. Liposomes as a vehicle for certain target cells heated up to 60 ° C and under constant homogeneity z. B. Organzellen oder Tumorzellen zu verwenden. Da- sieren mit einem Ultra-Turrax-Stab 50 ml eines wäßri-z. B. to use organ cells or tumor cells. Use an Ultra-Turrax stick to record 50 ml of an aqueous bei wird die Oberfläche der Lipoidmembran der Liposo- 25 gen Organextraktes aus dem foetalen Anteil der Rinder-at the surface of the lipoid membrane of the liposogenic organ extract from the fetal portion of the bovine me wie im Patentanspruch beschrieben ist, durch ad- pfazenta in einer Verdünnung von 10~6 in physiologi-me as described in the claim, by ad- pfazenta in a dilution of 10 ~ 6 in physiological sorptive oder kovalente Bindung mit Molekülen besetzt, scher Kochsalzlösung zugesetzt Die HomogenisierungSorptive or covalent bond occupied with molecules, shear saline solution added. Homogenization die einen selektiven Tropismus zu den entsprechenden erfolgt so lange, bis die lipoidsubstanz zu einer cremi-a selective tropism to the corresponding takes place until the lipoid substance becomes a creamy Bestandteilen der Zellmembran der Targetzellen besit- gen Konsistenz verarbeitet ist Nach Abkühlung auf et-Components of the cell membrane of the target cells have a consistency that has been processed. zen. 30 wa 10°C wird nun eine wäßrige Suspensionslösung, dieZen. 30 wa 10 ° C is now an aqueous suspension solution that Vorliegende Anmeldung betrifft den im Anspruch be- isoton oder hyperton zur inkorporierten Lösung ist vorzeichneten Gegenstand. sichtig ohne Erwärmung und mechanischem Druck ein-The present application relates to what is indicated in the claim as being isotonic or hypertonic to the incorporated solution Object. visually without heating and mechanical pressure Vorliegendes Verfahren dient der Erleichterung und gerührt Zur Spülung kann diese Lösung durch Zentrifu-Verbesserung cer Herstellung der Liposome und der gation bei 120 000 g für 3 Stunden wiederholt gewechweiteren Ausgestaltung dieses Verfahrens. Die Liposo- 35 seit werden. Die Liposome lassen sich auch durch Filme werden im Gegensatz zu den Verfahren, die im tration durch einen Filter mit einer Porengröße unter-Hauptpatent genannt worden sind, unter Verwendung halb der Größe der Liposome, wie er z. B. zur Sterilfileines Turbomischers mit Stator und Rotor nach dem tration benutzt wird, von der Spüllösung trennen. Bei Prinzip des Ultra-Turrax hergestellt indem der auf 6G1C Verwendung geeigneter Porengröße lassen sich auch erwärmten Lipoidmischung die zu inkorporierende 40 etwa noch vorhandene Lipoidklumpen, die nicht zu Liwäßrige Lösung unter ständigem Homogenisieren zu- posomen verarbeitet wurden, beseitigen. Andererseits gesetzt wird. Die nicht inkorporierte Lösung wird durch kann durch Dialyse in eine hypertone Salzlösung die Filtration oder Dialyse oder nach dem bisher geübten Suspensionsflüssigkeit entzogen, und die Spülung durch Verfahren durch Zentrifugation beseitigt und die Lipo- erneute Zufuhr des Suspensionsmittels erreicht werden, some mit wäßrigen Lösungen mit demselben oder höhe- 45 In Art dieser Spülungen lassen sich auch die Liposome rem osmotischen Druck wie die inkorporierte Lösung mit geeigneten Reagenzien für die Kopplung mit der ggf. mehrmals gespült bei jeweiliger Entfernung des zytotropen Substanz vorbereiten. Auch kann ohne oder Spülmittels Für die Therapie ist es zweckmäßig, blut- nach Spülung der Liposome, unter Verwendung von isotonische Lösungen für die innere und äußere wäßrige Detergentien z. B. von 1,5 μg Natriumlaurylsulfat pro g Phase der Liposome zu verwenden. Nach der Spülung 50 Protein- oder Peptidlösung oder wäßrigen Organexwird die Oberfläche der Liposome durch Zusatz geeig- trakten bzw. Antikörperseren, auch in höheren Verdünneter Reagenzien in wäßrigen Lösungen für die Kopp- nungen zugesetzt werden. Liposomengemische mit crelung mit den zytotropen Substanzen vorbereitet Da- me- oder lotioartiger Konsistenz, können in beliebigem nach können die Liposome erneut von den nicht zur Mischungsverhältnis suspendiert werden. Eine konzen-Bindung an ihre Oberfläche gekommenen Reagenzien 55 triertere Suspension läßt sich vor der oralen Anwenfreigespült werden, bevor man die anzukoppelnden dung mit Wasser oder isotonen Lösungen weiter verSubstanzen zusetzt Nach der Ankopplung ist der Spül- dünnen.The present method is used for relief and stirred. For rinsing, this solution can be repeated by centrifuging the preparation of the liposomes and gation at 120,000 g for 3 hours. The liposo- 35 since become. The liposomes can also be through films, in contrast to the methods that have been mentioned in the tration through a filter with a pore size under the main patent, using half the size of the liposomes, as z. B. is used to sterile a turbo mixer with stator and rotor after the tration, separate from the rinsing solution. With the principle of the Ultra-Turrax produced by using the pore size suitable for 6G 1 C, the heated lipoid mixture can also be removed from the 40 lipoid lumps to be incorporated which have not been processed into an aqueous solution with constant homogenization. On the other hand is set. The non-incorporated solution can be removed by dialysis into a hypertonic saline solution, the filtration or dialysis or according to the previously practiced suspension fluid, and the rinsing removed by methods by centrifugation and the lipo-renewed supply of the suspending agent can be achieved, some with aqueous solutions with the same In the manner of these rinses, the liposomes can also be prepared rem osmotic pressure like the incorporated solution with suitable reagents for coupling with the possibly rinsed several times with the respective removal of the cytotropic substance. For therapy, it is advisable to use blood after rinsing the liposomes, using isotonic solutions for the inner and outer aqueous detergents, e.g. B. to use 1.5 μg sodium lauryl sulfate per g phase of the liposomes. After rinsing the protein or peptide solution or aqueous Organex, the surface of the liposomes is added by adding suitable or antibody sera, also in highly diluted reagents in aqueous solutions for the couplings. Liposome mixtures with creaming with the cytotropic substances prepared dam- or lotio-like consistency, the liposomes can be resuspended in any desired way from the not to the mixing ratio. A concentrated suspension that has come onto its surface can be rinsed free before oral use, before the substances to be coupled are further added to substances with water or isotonic solutions. After coupling, the rinsing is thin. Vorgang zweckmäßig, bevor man die so präparierten Der Vorteil des angewandten Homogenisierens liegtIt is advisable to proceed before the prepared in this way. The advantage of the applied homogenization lies Liposome in einer wäßrigen Lösung resuspendiert Die darin begründet, daß; es nicht notwendig ist, die Lipoid-Liposomes resuspended in an aqueous solution The rationale is that; it is not necessary to remove the lipoid Liposome lassen sich in Lösungen von Proteinen, Oligo- 60 mischung als dünnen Film vor der Herstellung der Lipo-Liposomes can be in solutions of proteins, oligo mixture as a thin film before the production of the liposomes. und Polypeptiden sowie Sacchariden und Organextrak- some auszubreiten und es somit möglich wird, größereand polypeptides, as well as saccharides and organ extracts, making it possible to produce larger ten oder Antik*^rperseren mit gleicher oder andersarti- Mengen von Liposomen in einem Arbeitsgang herzu-or antibody sera with the same or different amounts of liposomes in one operation. ger Organspezintät als die inkorporierten Moleküle sus- stellen. Zur Suspension der Liposome mit Zeil- odersuspend organ species as the incorporated molecules. To suspend the liposomes with cell or pendieren. Der Zusatz von Detergentien, wie z. B. Na- Organtropismus können auch wäßrige Lösungen voncommute. The addition of detergents, such as. B. Na organ tropism can also be aqueous solutions of triumlaurylsulfat- oder TWEEN-Verdünnungen, der die 65 Organextrakten Verwendung finden ohne Tropismus zutrium lauryl sulfate or TWEEN dilutions, which use the 65 organ extracts without causing tropism Liposomenmembran nicht zerstört, erleichtert die Bin- den Targetzellen. Die Konzentration der wäßrigen Lö-Liposome membrane not destroyed, facilitates the binding of target cells. The concentration of the aqueous solution dung solcher Moleküle. Für die therapeutische Anwen- sungen von Organsubstanzen liegt im μg- bzw. pg-Be-formation of such molecules. For the therapeutic use of organ substances is in the μg or pg range dung, die parenteral wie auch oral erfolgen kann, reich pro g Organtrockenpulver.Dung, which can be administered parenterally or orally, is rich in per g of dry organ powder.
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