DE2645079A1 - Reversible oxygen carriers used as blood substitutes - comprise a complex of a tetra:dentate polymer with a transition metal - Google Patents

Reversible oxygen carriers used as blood substitutes - comprise a complex of a tetra:dentate polymer with a transition metal

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DE2645079A1 DE19762645079 DE2645079A DE2645079A1 DE 2645079 A1 DE2645079 A1 DE 2645079A1 DE 19762645079 DE19762645079 DE 19762645079 DE 2645079 A DE2645079 A DE 2645079A DE 2645079 A1 DE2645079 A1 DE 2645079A1
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Abstract

A soluble polymeric metal complex comprises a transition Gp. IB, VIIB or VIIIB metal ion bonded covalently to a tetra-dentate polymer ligand. The metal ion has >=1 other ligand bonded axially to it and the polymer may be natural or (semi)-synthetic. Pref. polymers are water soluble having functional NH2, OH or carboxy gps. e.g. polyethers e.g. polyethylene glycol, dextrans, chemically modified proteins, polysaccharides, polyamino acids, PVA, PVP, polyurethanes, poly(meth)acrylic acid, polyethylene imine etc. The complexes can be used as reversible oxygen carriers to improve the oxygen concn. of solns. They may be used as blood substitute, in fuel cells, oxidation reactions as catalysts and in oxygen production.

Description

Polymere Sauerstoffträger und Verfahren zu ihrer HerstellungPolymeric oxygen carriers and process for their production

Als reversible Sauerstoffträger dienen bei Säugetieren Hämoglobin und Myoglobin. Im Hämoglobin ist das niedermolekulare vierzähnige Porphyrin als Eisenkomplex (Häm) an das Eiweiß Globin fixiert, wobei der Imidazolstickstoff eines Histidinrestes als axialer Ligand and das Hämeisen komplex gebunden ist. Die reversible Oxygenierung eines niedermolekularen Porphyrin-Metallkomplexes mit einem niedermolekularen axialen, fünften Liganden ist unter physiologischen Bedingungen bisher nicht gelungen (vgl. J.P.In mammals, hemoglobin serves as a reversible oxygen carrier and myoglobin. In hemoglobin is the low molecular tetradentate porphyrin as Iron complex (heme) fixed to the protein globin, with the imidazole nitrogen being a Histidine residue is bound as an axial ligand to the heme iron complex. The reversible Oxygenation of a low-molecular porphyrin metal complex with a low-molecular one axial, fifth ligand has so far not been successful under physiological conditions (see J.P.

Collman et al. j. Am. Chem. Soc. 97, 1427 (1975); J.E. Baldwin u. J. Huff, J. Am. Chem. Soc. 96, 5600 (1974).Collman et al. j. At the. Chem. Soc. 97: 1427 (1975); J.E. Baldwin et al. J. Huff, J. Am. Chem. Soc. 96: 5600 (1974).

-Es hat nicht an Versuchen gefehlt, das Globin zp imitieren, indem an Stelle des Proteins synthetische Polymere, die z.B. aus Pyridin- oder Imidazoleinheiten aufgebaut sind, als axiale 5. Liganden an niedermolekulare Metall-Porphyrinkomplexe komplex gebunden werden. Aber auch diese Verbindungen bilden keine unter physiologischen Bedingungen reversible oxygenierbaren Komplexe und ein Oxokomplex läßt sich allenfalls als Zwischenstufe einer irreversiblen Oxidation nachweisen (vgl. z.B. J.H. Wang, A.-There has been no shortage of attempts to imitate the globin zp by instead of protein, synthetic polymers, e.g. from pyridine or imidazole units are constructed as axial 5th ligands on low molecular weight metal-porphyrin complexes be bound in a complex manner. But even these connections do not form any under physiological Conditions reversible oxygenable complexes and an oxo complex can at best as an intermediate stage of an irreversible oxidation (cf.e.g. J.H. Wang, A.

Fakahara u. E.B. Fleischer J. Am. Soc. 80, 1109 (1958); E. Tsuchida, K. Honda u. H. Sata, Inorg. Chem. 15, 352 (1976).Fakahara and E.B. Fleischer J. Am. Soc. 80: 1109 (1958); E. Tsuchida, K. Honda and H. Sata, Inorg. Chem. 15, 352 (1976).

Es wurde nun gefunden, daß unter physiologischen Bedingungen reversible oxygenierbare Komplexe erhalten werden, wenn der vierzähnige Porphyrinligand und vorzugsweise auch der axiale 5.Ligand in einem synthetischen Polymer vereinigt sind, somit vom Polymer mindestens 4 oder 5 Liganden zur Komplexbildung zur Verfügung stehen. Gemäß der Erfindung können in einem ol eines Polymers auch mehere kovalent gebundene "Aktivzentren" mit jeweils einem vierzähnigen Porphyrinliganden und einem weiteren 5. axialen Liganden enthalten sein.It has now been found that reversible under physiological conditions oxygenatable complexes are obtained when the tetradentate porphyrin ligand and preferably also the axial 5th ligand are combined in a synthetic polymer, thus at least 4 or 5 ligands from the polymer are available for complex formation stand. According to the invention, several can covalently in one ol of a polymer bound "active centers" each with a tetradentate porphyrin ligand and one further 5th axial ligands may be included.

Als Grundpolymere eignen sich wasserlösliche Polymere mit funktionellen Gruppen, wie Amino-, Hydroxy- oder Carboxygruppen.Water-soluble polymers with functional ones are suitable as base polymers Groups such as amino, hydroxy or carboxy groups.

So können erfindungsgemäß Polyäther, wie Polyäthylenglykol (PEG), Dextrane, chemisch modifizierte Proteine oder Polysaccharide, Polyaminosäuren, Polyvinylpyrrolidon, Polyvinylamin, Polyäthylenimin, Polyurethane, Polyvinylalkohol, Polyacrylsäuren, Polymethacrylsäuren oder Copolymerisate bzw. Polykondensate dieser Polymere eingesetzt werden. An die funktionellen Gruppen des Polymers werden der vierzähnige Ligand und der axiale 5. Ligand direkt kovalent gebunden. Andererseits können die funktionellen Gruppen dieser Polymere vor der Bindung der Liganden weiter verändert werden, beispielsweise durch die Umsetzung von OH-Gruppen von Polyäthylenglykol zu Aminogruppen oder Bindung von beliebigen bi- oder mehrfunktionellen Verbindungen. So haben sich erfindungsgemäß Diamine, Diisocyanate, Dialkqhole, Aminocarbonsäuren und Peptide zur weiteren Funktionalisierung von Grundpolymeren bewährt.According to the invention, polyethers such as polyethylene glycol (PEG), Dextrans, chemically modified proteins or polysaccharides, polyamino acids, polyvinylpyrrolidone, Polyvinylamine, polyethyleneimine, polyurethanes, polyvinyl alcohol, polyacrylic acids, Polymethacrylic acids or copolymers or polycondensates of these polymers are used will. The tetradentate ligand is attached to the functional groups of the polymer and the axial 5th ligand directly covalently bonded. On the other hand, the functional Groups of these polymers are further changed before the binding of the ligands, for example through the conversion of OH groups of polyethylene glycol to amino groups or bonds of any bi- or multifunctional compounds. So have according to the invention Diamines, diisocyanates, dialkholes, aminocarboxylic acids and peptides for further functionalization proven of base polymers.

Da bei der Verwendung von PEG nur die beiden endständigen Hydroxylgruppen als reaktive Zentren zur Verfügung stehend und eine höhere Beladung des löslichen Trägers im allgemeinen wünschenswert ist, wurde durch Polyaddition von Diisocyanaten and PEG ein neues Polymer dargestellt, das sowohl hochmolekular, als auch polyfunktionell ist. Die verwendeten Diisocyanate enthalten eine zusätzliche funktionelle Gruppe.Since when using PEG only the two terminal hydroxyl groups available as reactive centers and a higher loading of the soluble Generally desirable carrier has been obtained by polyaddition of diisocyanates and PEG represented a new polymer that is both high molecular weight and polyfunctional is. The diisocyanates used contain an additional functional group.

Syntheseschema: (n + 1)HO-(CH2CH2O) mH + n OCN-R-NCO x nA nB H [OCH2CH20)m-CO-NH-R-NH-CO)]n (OCH2CH2O) mH X (A-B) n Beispielsweise wurde PEG (MG 1000) mit 3-Nitro-3-azapentan-1,5-diisocyanat umgesetzt. Nach katalytischer Reduktion wurden Polymere der folgenden Struktur erhalten: (MG >> 10 000; pro 1 g PEG1000 1 NH2-Gruppe) Der vierzähnige Ligand und der 5. axiale Ligand werden an das Polymer, das Copolymer oder das funktionalisierte Polymer über Ester-, Amid-, Urethan- oder Äthergruppen gebunden. Der vierzählige Ligand und der 5. axiale Ligand können an zwei verschiedene oder gleiche funktionelle Gruppen des Polymers, des Copolymers oder des funktionalisierten Polymers gebunden werden.Synthesis scheme: (n + 1) HO- (CH2CH2O) mH + n OCN-R-NCO x nA nB H [OCH2CH20) m-CO-NH-R-NH-CO)] n (OCH2CH2O) mH X (AB) n For example, PEG (MW 1000) was mixed with 3-nitro-3-azapentane-1,5- diisocyanate implemented. After catalytic reduction, polymers of the following structure were obtained: (MW >>10,000; 1 NH2 group per 1 g PEG1000) The tetradentate ligand and the 5th axial ligand are bound to the polymer, the copolymer or the functionalized polymer via ester, amide, urethane or ether groups. The tetravalent ligand and the 5th axial ligand can be bound to two different or identical functional groups of the polymer, the copolymer or the functionalized polymer.

Andererseits können vierzähniger Ligand und axialer Ligand nacheinander angeordnet und somit über die gleichen funktionellen Gruppen des Polymers gebunden sein.On the other hand, tetradentate ligand and axial ligand can be used one after the other arranged and thus bound via the same functional groups of the polymer be.

Auch kann vorteilhaft der 5. Ligand kovalent über Amid- oder Esterbindungen an eine Seitengruppe des vierzähnigen Liganden fixiert sein.The 5th ligand can also advantageously be covalent via amide or ester bonds be fixed to a side group of the tetradentate ligand.

Als vierzähnige Liganden, die an Polymere gebunden werden, werden makrocyclische, 4 Stickstoffatome oder 2 Stickstoff- und 2 Sauerstoffatome enthaltende Systeme, beispielsweise Porphyrine, Chlorine, PhthalocyaninetSAD (Salicylaldehydathylendiimine) oder deren Derivate, verwendet. Diese Liganden enthalten Alkyl- oder Arylseitenketten, mit funktionellen Gruppen zur Fixierung an das Polymer.As tetradentate ligands that are bound to polymers macrocyclic containing 4 nitrogen atoms or 2 nitrogen and 2 oxygen atoms Systems, for example porphyrins, chlorins, phthalocyanines, SAD (salicylaldehyde-ethylene diimines) or their derivatives. These ligands contain alkyl or aryl side chains, with functional groups for fixing to the polymer.

Als axiale 5. Liganden werden Amine oder vorzugsweise Stickstoff enthaltende Heterocyclen wie Pyridin und Imidazol verwendet, die durch Alkyl- oder Arylgruppen substituiert sind. Die Heterocyclen bzw. deren Seitenketten enthalten Funktionen, wie Amino-, Hydroxy-, Carbonyl- oder Carboxygruppen, die eine kovalente Bindung an das Polymer oder den vierzähnigen Liganden erlauben.The axial 5th ligands are amines or, preferably, nitrogen-containing Heterocycles such as pyridine and imidazole are used by alkyl or aryl groups are substituted. The heterocycles or their side chains contain functions such as amino, hydroxy, carbonyl or carboxy groups that form a covalent bond to the polymer or tetradentate ligand.

Der axiale Ligand kann erfindungsgemäß auch durch 2 oder mehr funktionelle Gruppen substituiert sein, die eine kovalente Fixierung sowohl an das Polymer als auch an den vierzähnigen Liganden erlauben. Aminosäuren, wie beispielsweise Histidin, können als solche bifunktionelle Liganden verwendet werden.According to the invention, the axial ligand can also have 2 or more functional Groups that can be covalently fixed to both the polymer as a substituted also allow the tetradentate ligands. Amino acids, such as histidine, can be used as such bifunctional ligands.

Als Zentralatom eines polymeren Metallkomplexes kommen Metalle aus den Gruppen I B, VII B und VIII, beispielsweise Fe, Co, Mn und Cu in ihren verschiedenen Wertigkeitsstufen in Frage. Die Metallionen können bereits an den vierzähnigen Liganden gebunden sein oder nachträglich in den fertigen polymeren Komplexbildner eingeführt werden. Nach üblichen Verfahren werden von der Sauerstoffbindung komplex gebundene Metallionen höherer Oxidationsstufe mit Reduktionsmitteln in die für eine Oxygenierung geeignete Oxidationsstufe (beispielsweise Fe (11?, Co(II))übergeführt.Metals can be used as the central atom of a polymeric metal complex the groups I B, VII B and VIII, for example Fe, Co, Mn and Cu in their various Valence levels in question. The metal ions can already be attached to the tetradentate ligands be bound or subsequently introduced into the finished polymer complexing agent will. According to conventional methods, complexes are bound by the oxygen bond Metal ions of higher oxidation state with reducing agents in the for oxygenation suitable oxidation state (for example Fe (11 ?, Co (II)) transferred.

Nach Abtrennung des Reduktionsmittels stehen die polymeren Komplexe für die Oxygenierung zur Verfügung. Bei den so dargestellten löslichen polymeren Metallkomplexen wird die Entfernung niedermolekularer Begleitprodukten dadurch vereinfacht, daß permselektive Trennverfahren, wie Ultrafiltration und Gelchromatographie, angewendet werden können.After the reducing agent has been separated off, the polymeric complexes are standing available for oxygenation. In the case of the soluble polymers thus represented Metal complexes simplify the removal of low molecular weight by-products by that permselective separation methods such as ultrafiltration and gel chromatography are used can be.

Die so dargestellten löslichen polymeren Metallkomplexe können überall dort verwendet werden, wo die verfügbare Sauerstoffmenge einer Lösung über die normale Sauerstoffkonzentration hinaus erhöht werden soll. Dies ist für den Sauerstofftransport in Organismen als Blutersatz, für Brennstoffzellen und Oxidationsreaktionen von Interesse. Auch als feste oder homogene lösliche Katalysatoren oder zur Gewinnung von Sauerstoff aus Luft können die Verbindungen verwendet werden.The soluble polymeric metal complexes thus represented can be used anywhere used where the amount of available oxygen in a solution is above normal Oxygen concentration should also be increased. This is for oxygen transport in organisms as a blood substitute, for fuel cells and oxidation reactions of Interest. Also as solid or homogeneous soluble catalysts or for recovery the compounds can be used by oxygen from air.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung erläutern ohne sie zu begrenzen.The following examples are intended to explain the invention without illustrating it limit.

Abkürzungen AcOH ' Eisessig API Aminopropylimidazol AS Aminosäure Asp Asparaginsäure BOC- tert. Butyloxycarbonyl Bzl Benzyl DCCI Dicyclohexylcarbodiimid DiBOC-His N -BOC(Im-BOC)histidin DC-Harnstoff Dicyclohexylharnstoff DMF Dimethylformamid DMSO Dimethylsulfoxid Gly Glycin HOBt 1-Hydroxybenzotriazol i.V. im Vakuum PEG Polyäthylenglykol (bifunktionell) PEG-OMe Polyäthylenglykolmonomethyläther (monofunkt. PEG) PVP Poly- (1 -vinylpyrrolidinon- (2)) TFA . Trifluoressigsäure THF Tetrahydrofuran PEGx Polyäthylenglykol (bifunktionell) mit Molgewicht x BOC-Gly-OBt-Ester t-Butyloxycarbonyl-glycyl-benzotriazolylester Beispiel 1 Hämin-His-Gly-PEG15000 Das Polyäthylenglykol (PEG; MW 15000, Fluka) in Methylenchlorid gelöst, mit Diäthyläther bei OOC gefällt, der abfiltrierte Niederschlag mit Äther gewaschen und i.V. getrocknet (sämtliche Lösungsmittel werden vorher getrocknet und destilliert).Abbreviations AcOH 'glacial acetic acid API aminopropylimidazole AS amino acid Aspartic acid BOC- tert. Butyloxycarbonyl Bzl Benzyl DCCI dicyclohexylcarbodiimide DiBOC-His N -BOC (Im-BOC) histidine DC-urea dicyclohexylurea DMF dimethylformamide DMSO dimethyl sulfoxide Gly Glycine HOBt 1-Hydroxybenzotriazole i.V. in a vacuum PEG polyethylene glycol (bifunctional) PEG-OMe polyethylene glycol monomethyl ether (monofunctional PEG) PVP poly- (1-vinylpyrrolidinone- (2)) TFA. Trifluoroacetic acid THF tetrahydrofuran PEGx polyethylene glycol (bifunctional) with molecular weight x BOC-Gly-OBt-ester t-butyloxycarbonyl-glycyl-benzotriazolyl ester example 1 Hemin-His-Gly-PEG15000 The polyethylene glycol (PEG; MW 15000, Fluka) in methylene chloride dissolved, precipitated with diethyl ether at OOC, the filtered precipitate with ether washed and dried i.V. (all solvents are dried beforehand and distilled).

1.1 Veresterung von PEG15000 mit BOC-Glycin 15 g dieses PEG (2 mMol funktionelle Gruppen) wurden in 150 ml CH2Cl2 gelöst und 20 mMol BOC-Gly sowie 20 mMol DCCI zugegeben. Es wurde einen Tag bei Raumtemperatur stehengelassen und vom Harnstoffderivat abfiltriert. Es wurde 6 Tage am Rückfluß gekocht, die Lösung eingeengt, das Produkt mit Diäthyläther auskristallisiert, 10 Minuten bei 0°C gerührt und auf einer Glasfritte abgesaugt. Das Produkt wurde in etwa 50 ml Methylenchlorid aufgenommen, mit Äther gefällt, abgesaugt und bis zur Gewichtskonstanz getrocknet.1.1 Esterification of PEG15000 with BOC-Glycine 15 g of this PEG (2 mmol functional groups) were dissolved in 150 ml CH2Cl2 and 20 mmol BOC-Gly and 20 mmol DCCI added. It was left to stand at room temperature for one day and from Urea derivative filtered off. It was refluxed for 6 days, the solution was concentrated, the product crystallized with diethyl ether, stirred for 10 minutes at 0 ° C and on sucked off a glass frit. The product was taken up in about 50 ml of methylene chloride, precipitated with ether, suctioned off and dried to constant weight.

Ausbeute 15,0 g. Yield 15.0g.

1.2 Abspaltung der BOC-Schutzgruppe Das BOC-Gly-PEG wurde in 150 ml CH2Cl2/TFA (1:1) 20 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen, auf etwa 30 -50 ml eingeengt, mit Äther gefällt, wie oben aus CH2Cl2/ Äther umgefällt und getrocknet. Ausbeute 14,8 g TFA.H-Gly-PEG. Beladung (AS-Analyse) : 0,13 mmol/g = 100 % d. Th.1.2 Cleavage of the BOC protective group The BOC-Gly-PEG was in 150 ml Let CH2Cl2 / TFA (1: 1) stand for 20 minutes at room temperature, to about 30-50 ml concentrated, precipitated with ether, reprecipitated from CH2Cl2 / ether as above and dried. Yield 14.8 g of TFA.H-Gly-PEG. Loading (AS analysis): 0.13 mmol / g = 100% of theory. Th.

1.3 Kupplung mit Histidin 6 g H-Gly-PEG15000 wurden in 30 ml CH2Cl2 gelöst und mit N-Methylmorpholin neutralisiert. Zu dieser Lösung wurden 3 mMol Di-BOC-His in 20 ml DMF und 3 mMol DCCI gegeben.1.3 Coupling with histidine 6 g of H-Gly-PEG15000 were dissolved in 30 ml of CH2Cl2 dissolved and neutralized with N-methylmorpholine. 3 mmol of Di-BOC-His were added to this solution added to 20 ml of DMF and 3 mmol of DCCI.

Nach einer Stunde wurde das Harnstoffderivat abfiltriert, das Filtrat am Rotationsverdampfer eingeengt mit Äther gefällt, abfiltriert, in absolutem Äthanol unter Erwärmen aufgenommen, bei -1O0C zwei Stunden stehengelassen und abzentrifugiert. After one hour the urea derivative was filtered off, the filtrate concentrated on a rotary evaporator precipitated with ether, filtered off, in absolute ethanol under warming taken up, left to stand at -1O0C for two hours and centrifuged off.

Ausbeute 4,4 g DiBOC-His-Gly-PEG15000. Yield 4.4 g of DiBOC-His-Gly-PEG15000.

1.4 Di-BOC-Abspaltung vom His Analog Arbeitsweise unter 2). Beladung mit Histidin: 93 %.1.4 Di-BOC cleavage from His Analog procedure under 2). loading with histidine: 93%.

1.5 Kupplung mit Hämin 4,4 g TFA.H-His-Gly-PEG15000 wurden in 40 ml CH2Cl2 aufgenommen (ca. 0,6 mMol NH2-Gruppen) und mit N-Methylmorpholin auf pH 7 gebracht. Dann wurden 1 mMol Hämin (= 2 mMol-COOH-Gruppen) und 2 mMol DCCI zugegeben. Es wurde 48 Stunden bei Raumtemperatur gerührt vom Harnstoffderivat abgesaugt, das Filtrat zur Trockne gebracht, der Rückstand unter leichtem Erwärmen in Methyläthylketon/Methanol (1:1) gelöst und unter Kühlen mit Äther gefällt. Nach erneutem Auflösen in Methyläthylketon/Methanol und Fällen mit Äther war der Häminüberschuß entfernt.1.5 Coupling with hemin 4.4 g of TFA.H-His-Gly-PEG15000 were in 40 ml CH2Cl2 added (approx. 0.6 mmol NH2 groups) and adjusted to pH 7 with N-methylmorpholine brought. Then 1 mmol hemin (= 2 mmol COOH groups) and 2 mmol DCCI were added. It was stirred for 48 hours at room temperature and filtered off with suction from the urea derivative The filtrate was brought to dryness and the residue was dissolved in methyl ethyl ketone / methanol with gentle warming (1: 1) dissolved and precipitated while cooling with ether. After redissolving in methyl ethyl ketone / methanol and ether was used to remove the hemin excess.

Beispiel 2 2.1 0;5 mMol 3- (1-Imidazolyl) propylamindihydrochlorid (darstellbar nach J. Heterocycl. Chem. 4 (1967), 633) wurde in Äthanol gelöst und'mit Methylmorpholin auf pH 7 eingestellt.Example 2 2.1 0.5 mmoles of 3- (1-imidazolyl) propylamine dihydrochloride (can be prepared according to J. Heterocycl. Chem. 4 (1967), 633) was dissolved in ethanol and'mit Methylmorpholine adjusted to pH 7.

2.2 0,85 g (0,05 mMol) des nach Beispiel 1 erhaltenen Hämin-His-Gly-PEG15000 wurden in 5 ml CH2Cl2 gelöst und unter Eiskühlung 6,8 mg (0,05 mMol) HPBt in 8 ml THF und 10,3 mg (0,05 mMol) DCCI in 2 ml CH2Cl2 zugefügt Nach 10 Minuten Rühren bei 0°C wurde die Lösung 20 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wurde vom ausgefallenen DC-Harnstoff abfiltriert und das Filtrat mit Lösung aus 2.1 vereinigt.2.2 0.85 g (0.05 mmol) of the hemin-His-Gly-PEG15000 obtained according to Example 1 were dissolved in 5 ml of CH2Cl2 and, with ice cooling, 6.8 mg (0.05 mmol) of HPBt in 8 ml THF and 10.3 mg (0.05 mmol) DCCI in 2 ml CH2Cl2 added. After stirring for 10 minutes at 0 ° C., the solution was left to stand at room temperature for 20 minutes. Then became the precipitated TLC urea is filtered off and the filtrate is combined with the solution from 2.1.

Nach Einengen auf 10 ml wurde 1 Tag bei pH 7. gerührt. Die Lösung wurde i.V. zur Trockne eingedampft und der Rückstand in soviel warmen, absolutem Äthanol aufgenommen, daß die Lösung ca. 5-10 % Polymerprodukt enthielt. Nach 24 h bei -5°C war das Polymere auskristallisiert, worauf es 20 Minuten bei 10 000 U/min abzentrifugiert, die überstehende Lösung abdekantiert und der Niederschlag mit kaltem Äthanol gewaschen wurde. Das Kristallisieren aus Äthanol wurde zweimal wiederholt. Zum Schluß wurde das polymere Produkt nochmals in Äthanol aufgenommen und wie beschrieben mit Äther ausgefällt. After concentration to 10 ml, the mixture was stirred at pH 7 for 1 day. The solution was evaporated to dryness i.V. and the residue in so much warm, absolute ethanol added that the solution was about 5-10% polymer product contained. After 24 hours at -5 ° C., the polymer had crystallized out, whereupon it was 20 minutes centrifuged at 10,000 rpm, the supernatant solution decanted and the precipitate was washed with cold ethanol. Crystallization from ethanol was done twice repeated. Finally, the polymeric product was taken up again in ethanol and precipitated with ether as described.

Beispiel 3 Darstellung von (PEG)polyfunktional 1 polyfunktional His Hämin 3.1 Polyfunktionelles Polyäthylenglykol (Polyamin) In einem Dreihalskolben mit Rührer und Thermometer wurden zu 10 g gereinigtem PEG, MG 1000 (10 mM) 5 ml Toluol gegeben und auf 800C erhitzt. Zu der gerührten Lösung wurde als Katalysator 0,3 ml Zinnlaurat zugefügt und eine Lösung von 10 mM Diisocyanat in 3 ml Toluol langsam unter starkem Rühren zugetropft. Nach etwa 10 Minuten wurden zur zähflüssigen Lösung weitere 5 ml Toluol zugefügt und zwei Stunden bei 80"C gerührt. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels im Vakuum wurde der Rückstand zwei-mal mit Äther extrahiert, in Äthanol zu einer 10 %igen Lösung aufgenommen, mit AcOH auf pH 4 eingestellt, Raney-Nickel zugegeben und bei 100 atm hydriert. Nach Beendigung der H2-Aufnahme wurde vom Katalysatorabfiltriert, zur klaren Lösung soviel Wasser zugefügt, daß eine 70 %ige Lösung entstand, und mit einer Diaflo UM-10-Membran bis zur Gewichtskonstanz ultrafiltriert, um niedermolekulare Anteile zu entfernen. Nach Abdestillieren des Wassers und Trocknen des Retendats wurden 10,2 g (= 85 % d. Th.) Polyamin erhalten.Example 3 Representation of (PEG) polyfunctional 1 polyfunctional His Haemin 3.1 Polyfunctional polyethylene glycol (polyamine) In a three-necked flask equipped with a stirrer and thermometer, 5 ml of toluene were added to 10 g of purified PEG, MW 1000 (10 mM) and heated to 80.degree. 0.3 ml of tin laurate was added as a catalyst to the stirred solution and a solution of 10 mM diisocyanate in 3 ml of toluene was slowly added dropwise with vigorous stirring. After about 10 minutes, a further 5 ml of toluene were added to the viscous solution and the mixture was stirred for two hours at 80 ° C. After the solvent had been distilled off in vacuo, the residue was extracted twice with ether and taken up in ethanol to form a 10% solution, with AcOH adjusted to pH 4, added Raney nickel and hydrogenated at 100 atm. After the H2 uptake was complete, the catalyst was filtered off, enough water was added to the clear solution that a 70% solution was formed, and with a Diaflo UM-10 membrane up to ultrafiltered to constant weight in order to remove low molecular weight fractions After distilling off the water and drying the retendate, 10.2 g (= 85% of theory) of polyamine were obtained.

3.2 Kupplung des Polyamins mit Histidin 2 g nach 3.1 dargestelltes Polymer mit ca. 2 mMol NH2-Gruppen wurden in 20 ml CH2Cl2/DMSO (1:3) gelöst und mit N-Methylmorpholin neutralisiert. 2 mM BOC-His wurden in 30 ml DMF/DMSO (1:3) gelöst und mit 2 mM HOBt und 2 mM DCCI versetzt. Nach 30 Minuten bei 20"C wurde diese Lösung zur Polymerlösung gegeben und über Nacht gerührt. Die Lösung wurde auf ca. 20 ml eingeengt und das Polymer durch Zutropfen von Äther als öliges Produkt ausgefällt. Der Uberstand wurde abdekantiert.3.2 Coupling of the polyamine with histidine 2 g as shown in 3.1 Polymers with approx. 2 mmol NH2 groups were dissolved in 20 ml CH2Cl2 / DMSO (1: 3) and neutralized with N-methylmorpholine. 2 mM BOC-His were in 30 ml DMF / DMSO (1: 3) dissolved and mixed with 2 mM HOBt and 2 mM DCCI. After 30 minutes at 20 "C it became this solution was added to the polymer solution and stirred overnight. The solution was concentrated to about 20 ml and the polymer as an oily product by the dropwise addition of ether failed. The supernatant was decanted off.

3.3 Abspaltung der BOC-Schutzgruppe Das unter 3.2 erhaltene Produkt wurde in 20 ml TFA/CH2Cl2 (1:1) bei Raumtemperatur gelöst, nach 30 Minuten die Lösung eingeengt, das polymere Produkt mit Äther ausgefällt und der Überstand abdekantiert.3.3 Cleavage of the BOC protective group The product obtained under 3.2 was dissolved in 20 ml TFA / CH2Cl2 (1: 1) at room temperature, after 30 minutes the solution concentrated, the polymeric product precipitated with ether and the supernatant decanted off.

3.4 Kupplung mit Hämin 1,3 g (2 mM) Hämin wurden in 50 ml CH2Cl2 und 5 ml DMF gelöst. Nach Zugabe von 2 mM DCCI wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurde filtriert und die Lösung zu dem unter 3.3 erhaltenen Polymerprodukt, das in 30 ml DMSO und 20 ml CH2Cl2 gelöst wurde, hinzugefügt. Nach 3 Tagen wurde abfiltriert und das Lösungsmittel bei 600C i.V. verdampft. Der Rückstand wurde mit ca. 50 ml H20 versetzt. Nach Abfiltrieren von unlöslichen Bestandteilen wurde das Filtrat in der Ultrafiltrationszelle (Membran UM 10) konzentriert und durch Dialysieren Reste von Reaktionskomponenten entfernt. Danach wurde das Wasser durch Gefriertrocknung entfernt.3.4 Coupling with hemin 1.3 g (2 mM) hemin were dissolved in 50 ml of CH2Cl2 and 5 ml of DMF dissolved. After adding 2 mM DCCI, the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. It was then filtered and the solution to the polymer product obtained under 3.3, which was dissolved in 30 ml of DMSO and 20 ml of CH2Cl2, added. After 3 days it was filtered off and the solvent evaporated at 600C i.V. The residue was with approx. 50 ml H20 added. After filtering off insoluble components, the The filtrate is concentrated in the ultrafiltration cell (membrane UM 10) and dialyzed Remnants of reaction components removed. After that, the water was freeze-dried removed.

Häminbeladung: 100 %. Ausbeute: 1,3 g. Hemin load: 100%. Yield: 1.3 g.

Beispiel 4 Polyvinylpyrrolidinon-Hämin 4.1 Hydrolyse von Poly-(1-vinylpyrrolidinon-(2)), (PVP), MG 40 000 nach Hoppe S.Z. physiol. Chem. 354, 1659 (1973) Nach der Hydrolyse wurde auf pH 5 angesäuert und ultrafiltriert. Das Lösungsmittel wurde i.V. verdampft, der Rückstand in Dimethylformamid aufgenommen und die Lösung in Äther getropft. Der Niederschlag wurde abfiltriert und i.V. über P205 getrocknet.Example 4 polyvinylpyrrolidinone hemin 4.1 hydrolysis of poly- (1-vinylpyrrolidinone- (2)), (PVP), MG 40,000 according to Hoppe S.Z. physiol. Chem. 354, 1659 (1973) After hydrolysis was acidified to pH 5 and ultrafiltered. The solvent was evaporated i.V., the residue was taken up in dimethylformamide and the solution was added dropwise to ether. The precipitate was filtered off and dried over P205 in vacuo.

4.2 Bestimmung des Hydrolysegrades Der Hydrolysegrad von Produkt 4.1 wurde durch Titration der sekundären Aminogruppen ermittelt. Er betrug 15 %, d.h.4.2 Determination of the degree of hydrolysis The degree of hydrolysis of product 4.1 was determined by titration of the secondary amino groups. It was 15%, i.e.

1 g PVP enthält 1,25 mM funktionelle Gruppen. 1 g of PVP contains 1.25 mM functional groups.

4.3 Blockierung der sekundären Aminogruppen durch Acetylierung 5 g des so hergestellten PVP wurden in 30 ml CH2Cl2 gelöst, die Lösung mit N-Methylmorpholin auf pH 8 eingestellqt und mit 1 g Essigsäureanhydrid (etwa 10 mM) versetzt. Die Lösung wurde eine Stunde am Rückfluß gekocht, auf 20 ml eingeengt und bei OOC unter starkem Rühren in 300 ml Äther getropft.4.3 Blocking of the secondary amino groups by acetylation 5 g of the PVP produced in this way were dissolved in 30 ml of CH2Cl2, the solution with N-methylmorpholine adjusted to pH 8 and treated with 1 g of acetic anhydride (about 10 mM). the Solution was refluxed for one hour, concentrated to 20 ml and reduced at OOC vigorous stirring in 300 ml of ether added dropwise.

Der Niederschlag wurde abgesaugt und getrocknet. The precipitate was filtered off with suction and dried.

4.4 Aktivierung der Carboxylgruppen des partiell hydrolysierten PVP 5 g des unter'3.4 erhaltenen Produkts (6,25 mM) wurden in 30 ml CH2Cl2 gelöst (A). In separatem Gefäß wurden 6,25 mM HOBt in 10 ml DMF gelöst (B). B wurde zu A gegeben 6,25 mM DCCI zugefügt, 4 Stunden bei 40C gerührt, der ausgefallene DC-Harnstoff abfiltriert, die Lösung auf ca. 20 ml eingeengt und das Polymerprodukt durch Zutropfen zu 300 ml Äther ausgefällt. Ausbeute: 4,7 g.4.4 Activation of the carboxyl groups of the partially hydrolyzed PVP 5 g of the product obtained under 3.4 (6.25 mM) were dissolved in 30 ml of CH2Cl2 (A). 6.25 mM HOBt were dissolved in 10 ml DMF in a separate vessel (B). B was added to A. 6.25 mM DCCI were added, the mixture was stirred at 40 ° C. for 4 hours, the precipitated DC urea filtered off, the solution concentrated to about 20 ml and the polymer product precipitated by adding dropwise to 300 ml of ether. Yield: 4.7 g.

4.5 Umsetzung mit Äthylendiamin 4,7 g des unter 4.4 erhaltenen Produktes 4 werden in 30 ml CH2Cl2 gelöst und bei OOC mit 5 ml Äthylendiamin ( 25-facher Überschuß) versetzt. Nach 4 Stunden Reaktionszeit bei Raumtemperatur wird die Lösung eingeengt und die polymere Verbindung wie beschrieben mit Äther ausgefällt. Das Produkt wird erneut in CH2Cl2 aufgenommen und nochmals gefällt.4.5 Reaction with ethylenediamine 4.7 g of the product obtained under 4.4 4 are dissolved in 30 ml of CH2Cl2 and at OOC with 5 ml of ethylenediamine (25-fold excess) offset. After a reaction time of 4 hours at room temperature, the solution is concentrated and the polymeric compound precipitated with ether as described. The product will again taken up in CH2Cl2 and precipitated again.

Ausbeute: 4,0 g. Yield: 4.0 g.

4.6 Kupplung von Hämin an das unter 4.5 erhaltene Produkt 4 g des unter 4.5 erhaltenen Produkts ( 5 mM Aminogruppen) werden in 20 ml CH2Cl2 gelöst und mit Morpholin auf pH 7 eingestellt (A).4.6 Coupling of hemin to the product obtained under 4.5 4 g des The product obtained under 4.5 (5 mM amino groups) is dissolved in 20 ml of CH2Cl2 and adjusted to pH 7 with morpholine (A).

In separatem Gefäß werden 4 mM Hämin in 10 ml Dimethylformamid gelöst, bei OOC 4 mM HOBt und 4 mM DCCI zugegeben und 2 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen (aktiviert), (B. 4 mM hemin are dissolved in 10 ml dimethylformamide in a separate vessel, at OOC, 4 mM HOBt and 4 mM DCCI were added and the mixture was left to stand for 2 hours at room temperature (activated), (B.

Lösung B wird danach unter Abfiltrieren des DC-Harnstoffes zu Lösung Am gegeben und 16 Stunden bei O;OC gerührt. Solution B then becomes a solution with the TLC urea being filtered off Am given and stirred for 16 hours at O; OC.

Zur Entfernung von überschüssigem Hämin wird die Lösung eingeengt und das Polymer wie beschrieben mit Äther ausgefällt. The solution is concentrated to remove excess hemin and the polymer precipitated with ether as described.

Das abfiltrierte Produkt wird in einer Mischung'aus Äthylmethylketon und Äthanol (2:1) auf genommen und mit Äther ausgefällt. Nach 2 Stunden bei -100C wird das PVP-Hämin abfiltriert und getrocknet. The filtered product is in a mixture of ethyl methyl ketone and ethanol (2: 1) taken up and precipitated with ether. After 2 hours at -100C the PVP hemin is filtered off and dried.

Ausbeute: 3 g. Yield: 3 g.

Haminbeladung: 57 &. %. Hamin loading: 57 &. %.

Beispiel 5 5.1 Veresterung von Polyäthylenglykolmonomethyläther von Molekulargewicht 10 000 (monofunktionellem PEG, MeO-PEG) mit Glycin BOC-Gly-PEG-OMe 30 mM (5,25 g) BOC-Gly und 30 mM (4,1 g) HOBt werden mit 30 mM DCCI in 50 ml THF/CH2Cl2 (1:1) bei 0°C 15 Minuten stehen gelassen (voraktiviert). Der gebildete DC-Harnstoff wird abfiltriert und das Filtrat zu einer Lösung von 50 g MeO-PEG10000 (5 mM) in Methylenchlorid gegeben. Die Lösung wird eingeengt und 24 Stunden bei 400C gerührt. Dann werden abermals 30 mM BOC-Gly-OBt-Ester zur Reaktionslösung gegeben und weitere 20 Stunden bei 400C gerührt.Example 5 5.1 Esterification of polyethylene glycol monomethyl ether of molecular weight 10,000 (monofunctional PEG, MeO-PEG) with glycine BOC-Gly-PEG-OMe 30 mM (5.25 g) BOC-Gly and 30 mM (4.1 g) HOBt are at 30 mM DCCI in 50 ml THF / CH2Cl2 (1: 1) at 0 ° C for 15 minutes (preactivated). The TLC urea formed is filtered off and the filtrate is added to a solution of 50 g of MeO-PEG10000 (5 mM) in methylene chloride. The solution is concentrated and stirred at 40 ° C. for 24 hours. Then again 30 mM BOC-Gly-OBt-ester are added to the reaction solution and the mixture is stirred at 40 ° C. for a further 20 hours.

Danach wird die Lösung bis zur beginnenden leichten Trübung mit Diäthyläther versetzt und am Rotationsverdampfer im Luftbad durch Abziehen geringer Äthermengen abgekühlt, wobei der Ester gut filtrierbar auskristallisiert. Nach ca. The solution is then treated with diethyl ether until it begins to become slightly cloudy added and on the rotary evaporator in an air bath by removing small amounts of ether cooled, the ester crystallizing out in a readily filterable manner. After approx.

30-60 Minuten Stehenlassen bei OOC wird die Lösung filtriert und der Niederschlag mit Äther gewaschen. Das veresterte Polymer wird durch zweimaliges Umfällen aus Methanol gereinigt. The solution is filtered and left to stand at OOC for 30-60 minutes the precipitate washed with ether. The esterified polymer is through two times Reprecipitation purified from methanol.

5.2 Abspaltung der ol-Aminoschutzgruppe 20,3 g BOC-PEG-OMe werden in 250 ml 1,2 N HCl/Eisessig bei Raumtemperatur gelöst und 20 Minuten gerührt. Der Chlorwasserstoff wird dann rasch am Rotationsverdampfer abgezogen und die Lösung eingeengt. Die viskose Lösung wird in 200 ml abs. Äthanol aufgenommen und das Polymerprodukt mit Äther ausgefällt. Nach Stehenlassen über Nacht im Tiefkühlschrank wird der Niederschlag abfiltriert, auf einer Glasfritte gesammelt und gewaschen. Anschließend wird das Polymerprodukt noch zweimal aus Äthanol umgefällt und der Niederschlag dann getrocknet. 5.2 Cleavage of the ol amino protective group 20.3 g of BOC-PEG-OMe become dissolved in 250 ml of 1.2 N HCl / glacial acetic acid at room temperature and stirred for 20 minutes. Of the Hydrogen chloride is then drawn off quickly on a rotary evaporator and the solution constricted. The viscous solution is abs in 200 ml. Ethanol added and the polymer product precipitated with ether. After standing overnight in the freezer, the precipitate becomes filtered off, collected on a glass frit and washed. Then the The polymer product was reprecipitated twice more from ethanol and the precipitate was then dried.

Beladung mit Gycin nach Aminosäureanalyse: 72 % Ausbeute: 19,5 g. Loading with gycin according to amino acid analysis: 72% yield: 19.5 g.

5.3 Kupplung mit BOC-~-Asparaginsäure-B-benzylester 10,1 g HCl.Gly-PEG-OMe werden in 70 ml CH2Cl2 gelöst und mit Morpholin neutralisiert.5.3 Coupling with BOC- ~ -aspartic acid-B-benzyl ester 10.1 g HCl.Gly-PEG-OMe are dissolved in 70 ml of CH2Cl2 and neutralized with morpholine.

2,6 BOC-L-Asp (OBzl)-OH (8 mM) werden in 20 ml CH2Cl2 gelöst und auf OOC abgekühlt. Dazu wird eine Lösung von 0,8 g DCCI (4 mM) in 10 ml CH2Cl2, die ebenfalls auf OOC gekühlt wurde, gegeben. Die Lösung wird 15 Minuten im Tiefkühlschrank, dann 10 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen. Unter Abfiltrieren des ausgefallenen DC-Harnstoffs wird das Filtrat direkt zur Gly-PEG-OMe Lösung zugegeben. Der Niederschlag wird mit CH2Cl2 nachgewaschen. Die Lösung wird auf pH 7 eingestellt und eingeengt. Nach 1 Stunde wird der pH erneut geprüft und gegebenenfalls mit Morpholin neutralisiert. Die Isolierung (Ausfällen mit Äther) und Reinigung des Produktes wird wie beschrieben vorgenommen. 2.6 BOC-L-Asp (OBzl) -OH (8 mM) are dissolved in 20 ml of CH2Cl2 and cooled to OOC. A solution of 0.8 g DCCI (4 mM) in 10 ml CH2Cl2, which was also cooled to OOC, given. The solution is kept in the freezer for 15 minutes, then left to stand for 10 minutes at room temperature. While filtering off the precipitated DC urea, the filtrate is added directly to the Gly-PEG-OMe solution. The precipitation is washed with CH2Cl2. The solution is adjusted to pH 7 and concentrated. After 1 hour, the pH is checked again and, if necessary, neutralized with morpholine. The isolation (precipitation with ether) and purification of the product is as described performed.

Kupplungsdauer: 2,5 Stunden. Ausbeute: 8,3 g Umsatzkontrolle potentiometrisch bzw. fluorimetrisch mit Phthaldialdehyd: 99 % Umsatz. Coupling time: 2.5 hours. Yield: 8.3 g conversion control potentiometrically or fluorimetrically with phthalaldehyde: 99% conversion.

5.4 BOC-Abspaltung analog 5.2 Ausbeute: 8,1 g.5.4 BOC elimination analogously to 5.2 Yield: 8.1 g.

5.5 Kupplung mit DiBOC-Histidin Q Zu einer Lösung von 8 g des nach 5.4 erhaltenen neutralisierten Peptid-PEG-Esters in 50 ml CH2Cl2 wird das voraktivierte Di-BOC-His zugefügt (5,6 g DiBOC-His = 16 mM + 1,6 g DCCI = 8 mM).5.5 Coupling with DiBOC-Histidine Q To a solution of 8 g of the after 5.4 obtained neutralized peptide PEG ester in 50 ml CH2Cl2 is the preactivated Di-BOC-His added (5.6 g DiBOC-His = 16 mM + 1.6 g DCCI = 8 mM).

Reaktionszeit: 5,5 Stunden. Umsatz: 81 % nach Titration. Response time: 5.5 hours. Conversion: 81% after titration.

Es wurde mit 3,8 g (10,7 mM) Di-BOC-His (voraktiviert mit 1,1 g (5,35 mM) DCCI) nachgekuppelt. Isolierung und Reinigung des Produktes wie beschrieben. It was preactivated with 3.8 g (10.7 mM) Di-BOC-His (preactivated with 1.1 g (5.35 mM) DCCI) post-coupled. Isolation and purification of the product as described.

Kupplungszeit: 15 Stunden Umsatz: 90 t. Coupling time: 15 hours Conversion: 90 t.

Verhältnis Gly : Asp : His nach AS-Analyse = 1,2 : 1 : 1 (bezogen auf His) 5.6 BOC-Schutzgruppenabspaltung analog 5.2. Ratio Gly: Asp: His according to AS analysis = 1.2: 1: 1 (based on on His) 5.6 Splitting off of BOC protective groups analogous to 5.2.

Ausbeute: 5,9 g 5.7 Kupplung von H+ His-Asp-Gly-PEG-OMe OBzl an Hämatoporphyrin 2,1 g des nach 5.6 erhaltenen Polymers (= 0,1 mM His nach Beladungsprüfung) werden in 30 ml abs. CH2Cl2 und 3 ml DMF aufgelöst und mit N-Methylmorpholin neutralisiert.Yield: 5.9 g 5.7 coupling of H + His-Asp-Gly-PEG-OMe OBzl of hematoporphyrin 2.1 g of the polymer obtained according to 5.6 (= 0.1 mM His after loading test) are in 30 ml of abs. Dissolved CH2Cl2 and 3 ml DMF and neutralized with N-methylmorpholine.

Dann werden 0,1 mM Hämatoporphyrin, gelöst in 2 ml DMF, und 0,2 mM DCCI (413 mg), gelöst in wenig CH2Cl2, zur Polymerlösung gegeben. Nach ca. 1 Stunde Rühren bei Raumtemperatur wird mit N-Methylmorpholin auf pH 7 eingestellt, die Lösung am Rotationsverdampfer auf ca. 25 ml eingeengt und 14 Stunden gerührt. Then 0.1 mM hematoporphyrin, dissolved in 2 ml DMF, and 0.2 mM DCCI (413 mg), dissolved in a little CH2Cl2, added to the polymer solution. After about 1 hour Stirring at room temperature is adjusted to pH 7 with N-methylmorpholine, the solution Concentrated on a rotary evaporator to approx. 25 ml and stirred for 14 hours.

Nach Abfiltrieren des DC-Hårnstoffs wird das Lösungsmittel i.V. abgedampft, der Rückstand in 50 ml warmem Äthanol aufgenommen und das Polymer mit Diäthyläther wieder ausgefällt. Nach zwei weiteren Reinigungsschritten (Umfällen aus Äthanol) wird das Produkt getrocknet. After filtering off the TLC urea, the solvent is evaporated off i.V., the residue was taken up in 50 ml of warm ethanol and the polymer with diethyl ether failed again. After two further cleaning steps (reprecipitation from ethanol) the product is dried.

Ausbeute~ 1,75 g. Yield ~ 1.75g.

5.8 Veresterung der Hydroxygruppen des Hämatoporphyrins mit BOC-Gly 1,75 g ( 0,16 mM Polymer) von Produkt 5.7 werden in 30 ml CH2Cl2 gelöst. Separat werden 3,2 mM BOC-Gly (0,56 g) in 10 ml' CH2Cl2 gelöst und zu einer Lösung von 3,2 mM HOBt (432 mg) in 5- ml THF gegeben. Zu dieser Lösung werden 3,2 mM DCCI (66 mg) in 10 ml CH2Cl2 hinzugefügt. Nach 30 Minuten Rühren bei Raumtemperatur wird abfiltriert und das Filtrat zur Polymerlösung zugegeben. Die Reaktionslösung wird auf 25 ml eingeengt, nachdem zuvor mit 0,5 ml Pyridin und Morpholin auf pH 7 eingestellt wurde. Nach 1 Stunde Rühren bei Raumtemperatur wird 15 Stunden lang am Rückfluß gekocht.5.8 Esterification of the hydroxyl groups of the hematoporphyrin with BOC-Gly 1.75 g (0.16 mM polymer) of product 5.7 are dissolved in 30 ml of CH2Cl2. Separately 3.2 mM BOC-Gly (0.56 g) are dissolved in 10 ml of 'CH2Cl2 and a solution of 3.2 Added mM HOBt (432 mg) in 5 ml of THF. 3.2 mM DCCI (66 mg) are added to this solution added in 10 ml of CH2Cl2. After stirring for 30 minutes at room temperature, it is filtered off and the filtrate is added to the polymer solution. The reaction solution is on 25th ml, after having been adjusted to pH 7 with 0.5 ml of pyridine and morpholine became. After stirring for 1 hour at room temperature, the mixture is refluxed for 15 hours cooked.

Danach wird das Lösungsmittel i.V. abgedampft. Der Rückstand wird in 30 ml warmem Äthanol aufgenommen und das'Polymerprpdukt mit Äther ausgefällt. Nach dreimaligem Umfällen aus Äthanol wird das Produkt getrocknet. The solvent is then evaporated off in vacuo. The residue will taken up in 30 ml of warm ethanol and precipitated the polymer product with ether. After three reprecipitations from ethanol, the product is dried.

Ausbeute: 1,57 g. Yield: 1.57 g.

5.9 Kupplung mit Aminopropylimidazol Es werden folgende Lösungen hergestellt: a) 1,57 g ( 0,14 mM) von Produkt 5.8 werden in 20 ml CH2Cl2 gelöst.5.9 Coupling with aminopropylimidazole The following solutions are prepared: a) 1.57 g (0.14 mM) of product 5.8 are dissolved in 20 ml of CH2Cl2.

b) 3,5 mM 3-(1-Imidazolyl)propylamin-dihydrochlorid werden in 15 ml abs. Äthanol gelöst und mit Morpholin neutralisiert. Danach wird die Lösung auf 3-5 ml eingeengt. b) 3.5 mM 3- (1-imidazolyl) propylamine dihydrochloride are added in 15 ml abs. Dissolved ethanol and neutralized with morpholine. After that the solution will come up 3-5 ml concentrated.

c) 18,7 mg HOBt werden in 1 ml THF gelöst. c) 18.7 mg of HOBt are dissolved in 1 ml of THF.

d) 28,5 mg DCCI werden in wenigen ml CH2Clz gelöst. d) 28.5 mg DCCI are dissolved in a few ml CH2Cl2.

Lösung c) wird zu a) gegeben, dann dazu Lösung d) und zuletzt b) innerhalb einer Minute hinzugefügt. Nun wird 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Abfiltrieren des Niederschlags, der mit CH2Cl2 nachgewaschen wird, wird das Filtrat zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird in 25 ml abs. Äthanol aufgelöst und durch Abkühlen der Lösung auf 20C das Polymerprodukt auskristallisiert (24 Stunden), abzentrifugiert, die überstehende Lösung verworfen und der Niederschlag mit kaltem Äthanol gewaschen Der Rückstand wird erneut in ca. 15 ml Äthanol in der Wärme gelöst, das Polymer mit Äther aus dieser Lösung ausqefällt, abfiltriert, der Niederschlag mit Äther gewaschen und getrocknet. Solution c) is added to a), then solution d) and finally b) added within a minute. The mixture is then stirred for 16 hours at room temperature. After filtering off the precipitate, which is washed with CH2Cl2, the The filtrate was concentrated to dryness. The residue is in 25 ml of abs. Dissolved ethanol and the polymer product crystallizes out by cooling the solution to 20C (24 hours), centrifuged off, the supernatant solution discarded and the precipitate with cold Washed ethanol The residue is redissolved in approx. 15 ml of ethanol in the heat, the polymer precipitates out of this solution with ether, filtered off, the precipitate washed with ether and dried.

Der Reinigungsschritt wird zweimal wiederholt. The cleaning step is repeated twice.

5.10 Schutzgruppenabspaltung mit HF (BOC- und Benzylgruppe) 1,5 g trocknes Produkt aus 5.9 werden mit 1,5 g Anisol in eine 25 ml Polypropylenflasche gefüllt, die mit einem Aufsatz zum Einleiten von HF verschraubt wird. Bei OOC werden 12-15 ml HF kondensiert und die Mischung 30 Minuten bei 40C gerührt. Der Fluorwasserstoff wird mit Stickstoff bei 300C abgeblasen. Die letzten Reste HF und Anisol werden in einem mit KOH beschickten Exsikkator am Hochvakuum entfernt. Danach wird die Substanz in 20 ml DMF unter Erwärmen aufgelöst, das polymere Produkt mit Äther ausgefällt und wie üblich gereinigt und getrocknet. 5.10 Removal of protective groups with HF (BOC and benzyl group) 1.5 g dry product from 5.9 with 1.5 g of anisole in a 25 ml polypropylene bottle filled, which is screwed with an attachment for introducing HF. Be at OOC 12-15 ml HF condensed and the mixture stirred for 30 minutes at 40C. The hydrogen fluoride is blown off with nitrogen at 300C. The last remnants of HF and anisole are removed in a desiccator charged with KOH under a high vacuum. After that, the Substance dissolved in 20 ml of DMF with heating, the polymeric product precipitated with ether and cleaned and dried as usual.

Ausbeute: 1,33 g. Yield: 1.33 g.

5.11 Cyclisierung 1,33 g von Produkt aus 5.10 werden in 40 ml CH2Cl2 gelöst -und neutralisiert. Zu dieser Lösung werden 70ßM HOBt in 5 ml THF hinzugegeben, dann wird mit CH2Cl2 auf 90 ml verdünnt. 5.11 cyclization 1.33 g of product from 5.10 are dissolved in 40 ml of CH2Cl2 dissolved -and neutralized. 70 μM HOBt in 5 ml THF are added to this solution, then it is diluted to 90 ml with CH2Cl2.

Nach Kühlen auf OOC wird die Reaktionslösung mit einer auf OOC gekühlten Lösung von 70 ßM DCCI in 10 ml CH2C 12 versetzt. After cooling to OOC, the reaction solution is cooled to OOC with a Solution of 70 μM DCCI in 10 ml CH2C 12 added.

Nach 1 Stunde bei OOC wird drei Tage bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wird dann auf 50 ml eingeengt, filtriert und das cyclisierte Produkt mit Äther ausgefällt. Der Niederschlag wird in DMF aufgenommen und das Polymerprodukt erneut mit Äther ausgefällt, abfiltriert und getrocknet. After 1 hour at OOC, the mixture is stirred for three days at room temperature. The solution is then concentrated to 50 ml, filtered and the cyclized product precipitated with ether. The precipitate is taken up in DMF and the polymer product Reprecipitated with ether, filtered off and dried.

Ausbeute: 1,25 g Verhältnis Gly : Asp : His nach AS-Analyse = 2,9 : 1,2 : 1 (bezogen auf His). Yield: 1.25 g Gly: Asp: His ratio according to AS analysis = 2.9 : 1.2: 1 (based on His).

Beispiel 6 Metalleinbau in die polymeren Häminliganden 6.1 Kobalteinbau in nach Beispiel 5 erhaltenes Polymer: 0,2 g Polymerprodukt ( ru 0,01 mM Porphyrinderivat) werden in 20 ml Methanol unter Erwärmen aufgelöst und zum Sieden erhitzt. Innerhalb von 5 Minuten werden zur Reaktionslösung 0,2 mM Co(II)-acetat, die in 2 ml Methanol.aufgelöst werden, zugegeben. Nach 20 Minuten'Kochen unter Rückfluß läßt man abkühlen und verdünnt mit abs. Methanol auf 30 ml. Das Polymerprodukt wird dann mit Äther ausgefällt. Nach 2 Stunden Stehen bei OOC wird der Niederschlag abfiltriert und gewaschen. Das Produkt wird in Methanol unter Erwärmen aufgelöst und mit Äther wie üblich ausgefällt.Example 6 Incorporation of metal into the polymeric hemin ligands 6.1 Incorporation of cobalt in polymer obtained according to example 5: 0.2 g polymer product (ru 0.01 mM porphyrin derivative) are dissolved in 20 ml of methanol with heating and heated to boiling. Within 5 minutes, 0.2 mM Co (II) acetate, which are dissolved in 2 ml of methanol are added. After 20 minutes of refluxing allowed to cool and diluted with abs. Methanol to 30 ml. The polymer product will then precipitated with ether. After standing at OOC for 2 hours, the precipitate is filtered off and washed. The product is dissolved in methanol with heating and with ether turned out as usual.

6. Eiseneinbau in nach Beispiel 5 erhaltenes Polymer: 0,42 g von Produkt 5.11 werden mit 1 ml Pyridin versetzt, in 40 ml Eisessig (p.a.) aufgelöst und mit Stickstoff begast.6. Iron incorporation in the polymer obtained according to Example 5: 0.42 g of product 5.11 are mixed with 1 ml of pyridine, dissolved in 40 ml of glacial acetic acid (p.a.) and with Gassed with nitrogen.

Zu dieser Lösung werden 2 mM FeS04 7 7H20 in wenigen ml H20 innerhalb von 12 Minuten bei 60-7O0C unter Stickstoff und Rühren zugefügt. Danach wird 10 Minuten an der Luft weitergerührt und anschließend zur Trockne eingeengt. 2 mM FeSO4 7 7H20 in a few ml of H20 are added to this solution of 12 minutes at 60-7O0C under nitrogen and stirring. After that 10 Stirred for minutes in the air and then concentrated to dryness.

Der Rückstand wird. in dest. H20 aufgelöst und auf pH 7 eingestellt. Nach 2 Stunden wird vom Niederschlag abfiltriert, der Niederschlag gewaschen und das Filtrat an Sephadex(R) G 25 chromatographiert. The residue will. in least Dissolved H20 and adjusted to pH 7. After 2 hours, the precipitate is filtered off, the precipitate is washed and the filtrate is chromatographed on Sephadex (R) G 25.

Beispiel 7 Reduktion der polymeren Metallkomplexe: Die zu reduzierenden polymere Metallverbindung wird in wenigen ml 0,05 m Phosphatpuffer (pH 7,7) aufgelöst und mit Stickstoff begast.Dann wird unter Stickstoffbegasung Natriumdithionit in 0,05 m Phosphatpuffer hinzugefügt ( fv 50-facher Überschuß).Example 7 Reduction of the polymeric metal complexes: The ones to be reduced polymeric metal compound is dissolved in a few ml of 0.05 M phosphate buffer (pH 7.7) and gassed with nitrogen. Then sodium dithionite in 0.05 M phosphate buffer added (fv 50-fold excess).

Unter Luftausschluß wird die Lösung nach ca. 5 Minuten über eine eine Säule mit Sephadex G 25-fine chromatographiert (Elutionsmittel: 0,05 m Phosphatpuffer pH 7,7).With the exclusion of air, the solution is after about 5 minutes over a Column chromatographed with Sephadex G 25-fine (eluent: 0.05 M phosphate buffer pH 7.7).

Claims (3)

PATENTANSPRÜCHE: 1. Synthetischer polymerer löslicher Metallkonplex, dadurch gekennzeichnet, daß sein Zentralatom ein Metallion aus der Gruppe VIII, VIIb bzw. Ib ist und das das Polymer ein vierzähniger Ligand kovalent gebunden ist sowie mindestens ein weiterer axialer fünfter Ligand am Zentralatom gebunden ist, wobei das Polymer ein synthetisches, halbsynthetisches oder natürliches sein kann. PATENT CLAIMS: 1. Synthetic polymeric soluble metal complex, characterized in that its central atom is a metal ion from group VIII, VIIb or Ib and that the polymer is covalently bonded to a tetradentate ligand and at least one other axial fifth ligand is bound to the central atom, wherein the polymer can be synthetic, semi-synthetic or natural. Verfahren zur Darstellung von löslichen polymeren Metallkomplexen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein niedermolekularer, vierzähniger Ligand oder dessen Metallkomplex über funktionelle Gruppen an lösliche Polymere, Copolymere oder funktionalisierte Polymere synthetischer, halbsynthetischer oder natürlicher Herkunft gebunden und .mindestens ein axialer 5. Ligand an das Zentralatom gebunden wird.Process for the preparation of soluble polymeric metal complexes according to claim 1, characterized in that a low molecular weight, tetradentate Ligand or its metal complex via functional groups to soluble polymers, Copolymers or functionalized polymers of synthetic, semi-synthetic or of natural origin and bound at least one axial 5th ligand to the central atom is bound. 3. Verwendung eines Produktes nach Anspruch 1 als Sauerstoffüberträger. 3. Use of a product according to claim 1 as an oxygen carrier.
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