DE2638089C2 - Lipase preparations with improved effects - Google Patents
Lipase preparations with improved effectsInfo
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Description
3 43 4
zae, Rhizopus delemar, Aspergillusarten wie Aspergillus 545/546, und Band 13, Seite 356). Insbesondere handeltzae, Rhizopus delemar, Aspergillus species such as Aspergillus 545/546, and Volume 13, page 356). In particular, acts
niger, Aspergillus oryzae oder Welchia perfringens, My- es sich um ein Aluminiumhydroxyd-Gel, welches durchniger, Aspergillus oryzae or Welchia perfringens, My- it is an aluminum hydroxide gel, which by
cotorula npolyrica, Candida cyclindracea, Geotrichum Fällung von Aluminiumsalz-Lösungen (zum Beispielcotorula npolyrica, Candida cyclindracea, Geotrichum Precipitation of aluminum salt solutions (for example
candidum. Vorzugsweise handelt es sich um Lipase Sulfat-Lösungen) mit Ammoniumcarbonat oder Natri-candidum. They are preferably lipase sulfate solutions with ammonium carbonate or sodium
nicht-tierischen Ursprungs. 5 umcarbonat und Trocknen des Filterkuchens erhaltenof non-animal origin. 5 umcarbonate and drying of the filter cake obtained
Die Gewinnung der in Betracht kommenden Lipasen wird (Gehalt an Al2Oj nicht weniger als 47%, yorzugserfolgt
in der hierfür bekannten Weise und ist beispiels- weise 50—60%). Der pH einer 4%igen (Gewicht/Voluweise
angegeben in Ulimanns Encyclopädie der techni- men) Suspension in COy-freiem Wasser soll nicht über
sehen Chemie, Band 7 (1956), Seite 391—397,406—411 10,0 liegen. Solche Aluminiumhydroxid-Gele sind zum
oder in Bulletin de la Societe de Chimie Biologique 1966, io Beispiel unter der Bezeichnung »Teg« im Handel
48 Nr. 6, Seiten 747—770 und 1968, 50 Nr. 11, Seiten Bei der hochdispersen Kieselsäure handelt es sich um
2179—2182. Beispielsweise wird eine Püzlipase entspre- eine Kieselsäure, die durch Hydrolyse von Siliciumtetrachend
Bulletin de la Societ6 de Chiime Biologique 1966, chferid in der Wasserstoff-Flamme erhalten wird (Aero-48
Nr. 6, Seite 747 ff. wie folgt erhalten: Das nach Ab- sil). beispielsweise hat eine solche Kieselsäure folgende
trennung des Myzels aus Kulturen yon Pilzsporenerhai- is Kenngrößen: Oberfläche (m2/g) nach BET: 50—225,
teneFfltrat wird im Vakuum bei 30&C konzentriert, zen- vorzugsweise 120—225 beziehungsweise 170—225;
trifugiert und aus der oberen Schicht nach Verdünnung mittlere Größe der Primärteilchen in Millimikron:
das Enzym mit Aceton bei 0°C gefällt und im Vakuum 12—30, vorzugsweise 12—16; Schüttgewicht (normale
getrocknet. Zur weiteren Reinigung wird in Wasser su- Ware) in g/Liter: ca. 60; Stampfvolumen (normale Ware
spendiert, zentrifugiert, SO4-Ionen durch Zusatz von 20 nach DiN 53 194) in ml/IÜö g: 15ÖÖ—20ÖÖ, vorzugswei-Bariumchlorid
ausgefällt, das Enzym wiederum mit Ace- se 1700—2000; pH-Wert (nach DIN 53 200) in 4%iger
ton ausgefällt und der so erhaltene Rückstand nach Auf- wässeriger Dispersion: 34—4,3, vorzugsweise 3,6—4,3.
lösen in destilliertem Wasser über eine mit Calcium be- Die Dialkylpolysiloxane sind bekannt und im Handel
ladene Austauschsäule XE64 bei pH 4,7 aufgebracht erhältlich und werden nach den üblichen Verfahren er-
und durch eine CalciumacetatlösungJbei pH 5,7 eluiert 25 halten, beispielsweise durch Polymerisation von Silico-Aus
dem Eluat wird nach Einstellen auf pH 6 mit ver- nen oder durch Hydrolyse und chemische Kondensation
dünntem Ammoniak das Enzym mit Aceton gefällt und von einer oder mehreren hydrolisierbaren Siliconverdas
so erhaltene Produkt durch Suspension in deminera- bindungen der allgemeinen Formel R2S1X2, wobei R ei-Iisiertem
Wasser nochmals über eine Sephadexsäule ne niedere Alkylgruppe mit 1—3 Kohlenstoffatomen,
G25 Chromatographen. Aus dem so erhaltenen Eluat 30 vorzugsweise 1 —3 C-Atomen ist und X ein Halogenwird
durch Gefriertrocknung (-700C) die Lipase als atom (beispielsweise Chlor) oder eine niedere Alkoxy-Pulver
erhalten. gruppe darstellt Beispiele für solche Ausgangsverbin-The lipases in question are obtained (Al 2 Oi content not less than 47%, preference is given in the manner known for this and is, for example, 50-60%). The pH of a 4% strength (weight / volume indicated in Ulimann's Encyclopadie der technical) suspension in COy-free water should not be overlooked Chemie, Volume 7 (1956), pages 391-397, 406-411, 10.0. Such aluminum hydroxide gels are commercially available at or in Bulletin de la Societe de Chimie Biologique 1966, io example under the name "Teg"
48 No. 6, pages 747-770 and 1968, 50 No. 11, pages The highly disperse silica is 2179-2182. For example, a Püzlipase corresponds to a silica which is obtained by hydrolysis of Siliciumtetrachend Bulletin de la Societ6 de Chiime Biologique 1966, chferid in the hydrogen flame (Aero-48 No. 6, page 747 ff. As follows: The according to Ab - sil). For example, such silica has the following separation of the mycelium from cultures yon is Pilzsporenerhai- characteristics: surface area (m 2 / g) according to BET: 50-225, teneFfltrat in vacuo at 30 C concentrated cen- preferably 120-225 or 170- 225; centrifuged and from the upper layer after dilution mean size of the primary particles in millimicrons: the enzyme precipitated with acetone at 0 ° C and in a vacuum 12-30, preferably 12-16; Bulk weight (normal dry. For further cleaning, water is used for su- ware) in g / liter: approx. 60; Tamped volume (normal goods donated, centrifuged, SO4 ions by adding 20 according to DIN 53 194) in ml / 10 g: 15 – 20, preferably barium chloride precipitated, the enzyme again with acetate 1700-2000; pH value (according to DIN 53 200) precipitated in 4% clay and the residue thus obtained after aqueous dispersion: 34-4.3, preferably 3.6-4.3.
The dialkylpolysiloxanes are known and commercially available exchange column XE64 applied at pH 4.7 and are obtained by the usual methods and eluted by a calcium acetate solution at pH 5.7, for example by polymerization After adjusting to pH 6 with ammonia or thin ammonia through hydrolysis and chemical condensation, the enzyme is precipitated from the eluate with acetone and one or more hydrolyzable silicones are converted into the product obtained by suspension in demineral compounds of the general formula R2S1X2, with purified water again over a Sephadex column ne lower alkyl group with 1-3 carbon atoms, G25 chromatograph. Preferably from the thus obtained eluate 30 1 -3 carbon atoms and a halogen is by freeze-drying (-70 0 C) obtained as X, the lipase atom (e.g., chlorine) or a lower alkoxy powder. group represents examples of such output compounds
Besonders auffällig ist die stabilisierende Wirkung bei düngen sind Dimethyldichlorsilan, Diäthyldichlorsilan,The stabilizing effect of fertilizers is particularly noticeable: dimethyldichlorosilane, diethyldichlorosilane,
einer Lipase aus Rhizopusarten, insbesondere Rhizopus Dimethyldiäthoxysilan, Methyläthyldichlorsiian, Dibu-a lipase from Rhizopus species, in particular Rhizopus dimethyl diethoxysilane, methyl ethyl dichloride, dibu-
arrhizus. Gemäß dem oben angegebenen Verfahren aus 35 tyldichlorsilan, Dihexylchlorsilan, Äthylbutyldiäthoxysi-arrhizus. According to the method given above from 35 tyldichlorosilane, dihexylchlorosilane, Äthylbutyldiäthoxysi-
BuIL Soc Chim. BioL 1966, Seite 747 ff. wird beispiels- lan und ähnliche.BuIL Soc Chim. BioL 1966, page 747 ff. Is exemplified and the like.
weise eine Lipase mit einer Aktivität von 8 800 000 Ein- Hierbei wird beispielsweise das hydrolysierbare SiIiheiten/g (Bestimmung mittels einer Olivenemulsion) er- con unter definierten Bedingungen mit Wasser umgehalten. Diese Lipase stellt ein reines Produkt dar und ist setzt und so ein Polysiloxan mit der gewünschten Viskohauptsächlich dadurch gekennzeichnet, daß sie zwei 40 sität erhaltea Das bevorzugte Polysiloxan ist Dimethyl-Optimum-pH besitzt, das eine um pH 7, das andere um polysiloxan.wise a lipase with an activity of 8,800,000 units. Here, for example, the hydrolyzable solids / g (Determination using an olive emulsion) ercon held in water under defined conditions. This lipase is a pure product and is mainly a polysiloxane with the desired viscosity characterized in that it maintains two 40 sity. The preferred polysiloxane is dimethyl optimum pH one around pH 7, the other around polysiloxane.
pH 3,5. Sie verhält sich sowohl in der Papierelektropho- Beispielsweise handelt es sich um ein Material mitpH 3.5. It behaves in the paper electropho- For example it concerns a material with
rese, in der Polyacrylamidgelelektrophorese als auch in dem Freinamen Simethicon. Dieses Material besteht imrese, in polyacrylamide gel electrophoresis as well as in the generic name Simethicon. This material consists of
der Chromatographie an Sephadexsäulen wie ein einzi- wesentlichen aus Dimethylpolysiloxan und 4 bis 4V2 Ge-the chromatography on Sephadex columns like a single essential one made of dimethylpolysiloxane and 4 to 4V2
ges Protein und nähert sich in ihrer Wirkungsweise ins- 45 wichtsprozent eines Siliciumdioxid-Aerogels. So besitzttotal protein and its mode of action approximates 45 percent by weight of a silicon dioxide airgel. So owns
besondere auf Triglyceride der Pankreas-Lipase (weite- beispielsweise das Silicon-Fließmittel dieser Mischung,special on triglycerides of pancreatic lipase (for example the silicone superplasticizer of this mixture,
re Eigenschaften siehe Bull. Soc. Chim. Biol. 1966, 48 welche von der Dow Corning Chemical Company her-For properties see Bull. Soc. Chim. Biol. 1966, 48 which are made by the Dow Corning Chemical Company
Nr. 6, Seiten 756—766). Eine Aktivitätssteigerung dieser gestellt wird, ein Molekulargewicht zwischen 14 000No. 6, pages 756-766). An increase in activity of this is made, a molecular weight between 14,000
Lipase kann durch eine weitere Reinigung über eine und 21 000, einen Siliciumgehalt von 37,3 bis 38,5%, eineLipase can by further purification over one and 21,000, a silicon content of 37.3 to 38.5%, one
Sephadexkolonne G 100 (in destilliertem Wasser) erhal- 50 Viskosität bei 25° C von 300 bis 600 centistokes (es), eineSephadex column G 100 (in distilled water) obtained 50 viscosity at 25 ° C from 300 to 600 centistokes (es), a
ten werden, wonach man ein Produkt erhält mit einer Dichte bei 25°C von 0,965 bis 0,970 und einen Bre-th, after which a product is obtained with a density at 25 ° C of 0.965 to 0.970 and a Bre-
Aktivität von 11000000 Einheiten/g (siehe Bull. Soc. chungsindex n? von 1403 ±0,002.Activity of 11000000 units / g (see Bull. Soc. Chung index n? Of 1403 ± 0.002.
Chim. Biol. 1968,50Nr. 11, Seiten 2179—2182). Das mittlere Molgewicht der DialkylpolysiloxaneChim. Biol. 1968,50 No. 11, pages 2179-2182). The average molecular weight of the dialkylpolysiloxanes
Das erfindungsgemäße Stabilisierungsmittel bewirkt liegt vorzugsweise zwischen 14 000 und 30 0G0, beieine Verbesserung der Haltbarkeit von Lipase beim Zu- 55 spielsweise bei ca. 24 000. Die Viskosität der Dialkylposammenbringen und/oder Mischen mit Zusätzen, wie sie lysiloxane kann beispielsweise zwischen 900—1100 cp für Enzym-Handelspräparate üblich sind, insbesondere (25°C) liegen: vorzugsweise „liegt sie zwischen solchen mit oberflächenaktiven Eigenschaften wie akti- 950—1050 cp. Der Anteil an Niederpolymeren (bis zu ve Tonerde, Aluminiumhydroxyd, Aluminiumoxyd, einem Molgewicht von 700) soll gering sein und unter hochdisperse Kieselsäure (Aerosil), Magnesiumcarbo- 60 0,5% liegen.The stabilizing agent effect of the invention is preferably between 14,000 and 30 ° G0, one Improvement of the shelf life of lipase at, for example, approx. 24,000. Bringing the viscosity of the dialkylposam and / or mixing with additives, such as lysiloxane, for example between 900-1100 cp are customary for commercial enzyme preparations, in particular (25 ° C.): preferably “it is between those with surface-active properties such as active 950-1050 cp. The proportion of low polymers (up to ve alumina, aluminum hydroxide, aluminum oxide, a molecular weight of 700) should be low and below highly disperse silica (Aerosil), magnesium carbonate 60 0.5%.
nat, Aluminiumsalzen (Aluminiumtrisilikate, Alumini- Silica-Gel ist eine aktive Kieselsäure, die zum Beispielnat, aluminum salts (aluminum trisilicates, aluminum-silica gel is an active silica which, for example
umphosphat), Dialkylpolysiloxane, SilicageL Kieselgur aus 5 ΐημ—4 mm großen Körnern besteht Die innereumphosphat), Dialkylpolysiloxane, SilicageL Kieselguhr consists of 5 ΐημ — 4 mm large grains The inner
und ähnliche. Gesamtoberfläche von 1 g Silical-Gel kann zum Beispieland similar. Total surface area of 1 g of silica gel can for example
Unter dem Begriff »aktive Tonerde« werden pulver- 400—800 m3 groß sein (siehe Römpp, Chemie-Lexikon,Under the term "active alumina" powder 400-800 m 3 will be large (see Römpp, Chemie-Lexikon,
förmige Oxyde, Oxydhydrate, Hydroxyde und basische 65 1966, Band IV, 5915—5916; Ulimanns Encyclopädie dershaped oxides, hydrated oxides, hydroxides and basic 65 1966, Volume IV, 5915-5916; Ulimann's Encyclopedia of the
Salze des Aluminiums verstanden, die nicht weniger als technischen Chemie, Band 15 (1964), Seiten 716—732).Salts of aluminum understood, the no less than technical chemistry, Volume 15 (1964), pages 716-732).
40% AI3O3 enthalten (siehe Ulimanns Encyclopädie der Vorzugsweise liegt die Korngröße zwischen 5—100 πιμ,40% AI3O3 contain (see Ulimann's Encyclopedia of Preferably the grain size is between 5-100 πιμ,
technischen Chemie, dritte Auflage, Band 4, Seiten vorzugsweise 10—50 mu. Das verwendete Siliciumdio-technical chemistry, third edition, volume 4, pages preferably 10-50 mu. The silicon dioxide used
xid hat -beispielsweise eine Oberfläche von 100—250 m2/g, vorzugsweise 150—200 m2/g. Der Wassergehalt liegt beispielsweise bei 0,5—2%, vorzugsweise zwischen 0,7—1,5%. Die Herstellung des Süiciumdioxids kann nach bekannten Verfahren erfolgen, wie durch Einwirkung von Schwefelsäure auf Wasserglas oder durch Hydrolyse von SiCU (siehe beispielsweise US-Patent 30 86 851, DE-AS 1163 784, DE-AS 12 10 421, DE-AS 11 50 955).xid has a surface area of 100-250 m 2 / g, preferably 150-200 m 2 / g, for example. The water content is, for example, 0.5-2%, preferably between 0.7-1.5%. The silicon dioxide can be produced by known processes, such as by the action of sulfuric acid on water glass or by hydrolysis of SiCU (see, for example, US Pat. No. 3,086,851, DE-AS 1163 784, DE-AS 12 10 421, DE-AS 11 50 955).
Die lipasehaltigen Präparate können darüber hinaus to noch weitere Enzyme enthalten, zum Beispiel proteolytisch wirksame Enzyme und Amylasen (zum Beispiel Proteasen und Amylasen, wie sie beispielsweise in Enzymkonzentrationen aus Aspergillus-Arten wie Aspergillusparasiticus vorliegen). . ·The preparations containing lipase can also be used to contain other enzymes, for example proteolytically active enzymes and amylases (for example Proteases and amylases, such as those present, for example, in enzyme concentrations from Aspergillus species such as Aspergillus parasiticus). . ·
Die Herstellung der Präparate erfolgt durch Vermischen der Lipase mit dem erfindungsgemäßen Stabilisierungsmittel sowie gegebenenfalls weiteren üblichen Zusätzen in hierfür üblichen Mischern und Homogenisienaigsgeräten (zum Beispiel Taumelmischer, Zwangs- mischer).The preparations are produced by mixing the lipase with the stabilizing agent according to the invention and, if appropriate, other customary ones Additions to the usual mixers and homogenization devices (for example tumble mixers, forced mixer).
Ein Gewichtsteil Lipase wird mit 20 Gewichtsteilen Aluminiumhydroxyd-Gel (getrocknet) und 30 Teilen Süßmolkenpulver in einem Mörser fein zerrieben und vermischt (Temperatur 200C). Hierbei tritt ein Aktivitätsverlust der Lipase von 15—20% ein.One part by weight of lipase is finely ground in a mortar and mixed with 20 parts by weight of aluminum hydroxide gel (dried) and 30 parts of sweet whey powder (temperature 20 ° C.). This results in a loss of activity of the lipase of 15-20%.
Wird das Süßmolkenpulver weggelassen und durch 30 Gewichtsteile Lactose ersetzt, dann zeigt sich, daß nach dem Vermischen gegenüber der Mischung mit dem Süßmolkenpulver hingegen ein Aktivitätsverlust von rund 40% eingetreten istIf the sweet whey powder is omitted and replaced by 30 parts by weight of lactose, it is found that after mixing, however, a loss of activity compared to the mixture with the sweet whey powder of around 40% has occurred
Wird ein Gewichtsteil Lipase mit 20 Gewichtsteilen Aluminiumhydroxyd-Gel (getrocknet) ohne einen weiteren Zusatz bei 200C in einem Mörser zerrieben und vermischt, so tritt ebenfalls ein Aktivitätsverlust von rund 40Vi ein.If a part by weight of lipase triturated with 20 parts by weight aluminum hydroxide gel (dried) without a further additive at 20 0 C in a mortar and mixed, so also a loss of activity occurs approximately 40Vi.
4545
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MY142014A (en) * | 2004-04-08 | 2010-08-16 | Nisshin Oillio Group Ltd | A lipase powder, methods for producing the same and use thereof |
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1976
- 1976-08-24 DE DE19762638089 patent/DE2638089C2/en not_active Expired
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NICHTS-ERMITTELT |
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