DE2617493A1

DE2617493A1 - Medicaments contg. haptoglobin or its haemoglobin complex - for treating cerebral vasospasms

Info

Publication number: DE2617493A1
Application number: DE19762617493
Authority: DE
Inventors: Shozo Ishii
Original assignee: GREEN CROSS CORP; Green Cross Corp Japan
Current assignee: GREEN CROSS CORP; Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1976-04-22
Filing date: 1976-04-22
Publication date: 1977-11-03
Also published as: DE2617493B2; DE2617493C3

Abstract

Medicaments for the prophylaxis and therapy of cerebral vasospasms contain haptoglobin (Hp) or a haemoglobin-haptoglobin (Hb-Hp) complex. The Hp or Hb-Hp complex is pref. used in the form of an isotonic soln. This can be applied locally by periodically rinsing the spastic artery during surgery, or can be administered by intraventricular or intrathecal infusion. Suitable Hp prepns. can be prepd. by purification of alpha2-globulin. The medicaments can be used to control oxyhaemoglobin-induced vasospasms during surgical aneurismectomy in cases of subarachnoid haemorrhage.

Description

"Arzneimlittel zur Prophylaxe und Therapie von zerebralen"Medicines for prophylaxis and therapy of cerebral

Vasospasmen" Die Erfindung betrifft Arzneimittel zur Prophylaxe und Therapie von zerebralen Vasospasmen, die durch intrakranielle Hämorrhagie, insbesondere durch subarachnoldale Hämorrhagie mit Aneurysmaruptur, verursacht werden. Vasospasm "The invention relates to medicaments for prophylaxis and Therapy of cerebral vasospasm caused by intracranial hemorrhage, in particular caused by sub-arachnoid hemorrhage with aneurysm rupture.

Unter subarachnoidaler .ä,morrhagie ist eine Blutung im Subarachnoidalraum zwischen Arachnoidea und Pa mater zu verstehen.Subarachnoid morrhage is bleeding in the subarachnoid space between arachnoid and pa mater.

Diese Blutung kann eine Apoplexie hervorrufen. Die Hauptursache für die subarachnoidale Hänorrhagie besteht in einer Aneurysmaruptur. Im Fall von Gehirnschlägen treten. bei Personen jungeren oder mittleren Alters relativ häufig Aneurysmaruptsuren auf. Bei einer entsprechenden Behandlung läßt sich hufig eine erfolgreiche Rehabilitation ohne merkliche Symptome von ne.rologischen Störungen erreichen. Neurochirurgische Eingriffe bei Aneurysmarupturen spielen bei zerebrovaskulären Störungen eine wichtige Rolle.This bleeding can cause apoplexy. The main cause of subarachnoid cranial arrhagia consists of an aneurysm rupture. In the case of a stroke step. aneurysm ruptures are relatively common in young or middle-aged people on. With appropriate treatment, rehabilitation is often successful without noticeable symptoms of neurological Achieve disruptions. Neurosurgical interventions for aneurysm ruptures play at cerebrovascular Disturbances play an important role.

-Zur Behandlung von Aneurysmarupturen ist eine möglichst frühzeitige Radikaloperation, d.h. eine Aneurysmaektomie, wünschenswert, um ein Wiederauftreten der Blutungen zu verhindern. Bei der Beurteilung der Aussichten einer derartigen Operation muß jedoch das Auftreten von zerebralen Vasospasmen, d.h. zerebralen Gefäßkrämpfen, in Betracht gezogen werden. Zerebrale Vasospasmen treten angeblich bei 30 bis 60 Prozent der Patienten mit subarachnoidaler Hämorrhagie auf. Die Symptome entwickeln sich in etwa 3 oder 4 Tagen und spätestens innerhalb von etwa 2 Wochen nach dem Auftreten der Blutung. Die Operation eines Patienten mit zerebralen Vasospasmen bringt im allgemeinen ein hohes Risiko mit sich. Üblicherweise wird die Operation so lange hinausgezögert, bis eine Remission der zerebralen Vasospasmen durch konservative Behandlung erreicht ist. Somit ist es zur Zeit üblich, eine Operation bei subarachnoidalen Hämorrhagien absichtlich zu verschieben. Selbstverständlich ist aber die Gefahr von erneuten Blutungen um so geringer, je früher die Operation durchgeführt wird. Man hat festgestellt, daß bei einem hohen Prozentsatz der Patienten vor der Operation erhebliche Verschlechterungen eintreten, die auf erneute Blutungen während der konservativen Behandlung oder auf ernsthafte zerebrovaskuläre Störungen anschließend an die subarachnoidale ffämorrhagie zurückzuführen sind. Es besteht somit ein Bedarf an einem Arzneimittel zur Prophylaxe und Therapie von zerebralen Vasospasmen, so daß erneute Blutungen durch eine frühe Operation verhindert werden können. -The treatment of aneurysm ruptures is as early as possible Radical surgery, i.e. an aneurysmectomy, is desirable to prevent recurrence to prevent bleeding. When assessing the prospects of such However, surgery must prevent the occurrence of cerebral vasospasm, i.e. cerebral vascular spasms, be considered. Cerebral vasospasm reportedly occurs in 30 to 60 Percent of patients with subarachnoid hemorrhage. The symptoms develop in about 3 or 4 days and at the latest within about 2 weeks after the Occurrence of bleeding. The operation of a patient with cerebral vasospasm generally involves high risk. Usually the surgery Delayed until a remission of the cerebral vasospasm by conservative Treatment is achieved. Thus, it is now common to have surgery on subarachnoid Deliberately postponing hemorrhages. But the danger is natural The earlier the operation, the less of rebleeding. It has been found that in a high percentage of patients before surgery significant worsening occur, leading to rebleeding during conservative Treatment or for serious cerebrovascular disorders subsequent to the subarachnoid ffemorrhage are due. There is thus a need for a drug for prophylaxis and therapy of cerebral Vasospasm so that renewed Bleeding can be prevented with early surgery.

Es wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß zerebrale Vasospasmen durch Verabfolgung von Haptoglobin oder Hämoglobin-Haptoglobin-Komplexen verhindert werden können.It was found according to the invention that cerebral vasospasms are caused by Administration of haptoglobin or hemoglobin-haptoglobin complexes can be prevented can.

Gegenstand der Erfindung sind somit Arzneimittel zur Prophylaxe und Therapie von zerebralen Vasospasmen, die durch einen Gehalt an einem Serum- oder Plasma-Haptoglobin oder einem Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex gekennzeichnet sind.The invention thus relates to drugs for prophylaxis and Therapy of cerebral vasospasm caused by a content of a serum or Plasma haptoglobin or a hemoglobin-haptoglobin complex are labeled.

Der Mechanismus der Entstehung von zerebralen Vasospasmen ist noch weitgehend ungeklärt. Durch photographische bzw. angiographisehe Verfahren wurde kürzlich im Tierversuch festgestellt, daß zerebrale Vasospasmen künstlich hervorgerufen werden können, indem man Blutbestandteile direkt auf die Arteria basilaris einwirken läßt oder Blut direkt in den Subarachnoidalraum infixiert. Aufgrund dieser Befunde kann angenommen werden, daß Blut, das aus einem Blutgefäß ausgetreten ist, eine wichtige Rolle bei der Entstehung von zerebralen Vasospasmen spielt.The mechanism of the development of cerebral vasospasm is still largely unexplained. By photographic or angiographic methods recently found in animal experiments that cerebral vasospasms are artificially induced by exposing blood components directly to the basilar artery leaves or infuses blood directly into the subarachnoid space. Based on these findings it can be assumed that blood which has leaked from a blood vessel is a plays an important role in the development of cerebral vasospasm.

Bisher gibt es praktisch keine wirksamen Mittel zur Behandlung von zerebralen Vasospasmen. Zu Forschungszwecken wurde versucht, gefäßerweiternde Mittel, wie Papaverin, Procain und Lidocain, Sympathikusmittel, wie Phenoxybenzamin, Phentolamin und Isoproterenol, Serotonin-Antagonisten, Antihistaminika, Dibutyryl-cyclo-AMP und Äthanol, örtlich oder systemisch zu verabfolgen. Perner wurde versucht, die Fibrinolyse durch Verabfolgung von fibrinolytischen Inhibitoren und durch Inhalation von Kohlendioxid zu verhindern. Jedoch zeigten alle diese Arzneistoffe nur eine unzureichende oder vorübergehende Wirkung.So far there are practically no effective means of treating cerebral vasospasm. For research purposes, attempts have been made to use vasodilators, such as papaverine, procaine and lidocaine, sympathetic agents such as phenoxybenzamine, phentolamine and isoproterenol, serotonin antagonists, antihistamines, dibutyryl-cyclo-AMP and ethanol, to be administered topically or systemically. Perner was trying that Fibrinolysis Administration of fibrinolytic inhibitors and prevent by inhalation of carbon dioxide. However, all of these showed drugs only an insufficient or temporary effect.

Bisher wurde angenommen, daß mechanische Reize, vasoaktive Substanzen, Reize auf die vasomotorischen Nerven und die Veränderung von vaskulären, glatten Muskelzellen die Hauptursachen für zerebrale Vasospasmen sind. Davon ausgehend wurden unter besonderer Berücksichtigung von vasoaktiven Substanzen biochemische Analysen von Gemischen aus Blut und zerebrospinaler -Flüssigkeit (Blut-CSF-Gemisch) durchgeführt, um festzustellen, welche Rolle dieses Gemisch bei zerebralen Vasospasmen spielt.So far it has been assumed that mechanical stimuli, vasoactive substances, Stimuli on the vasomotor nerves and the change of vascular, smooth Muscle cells are the main causes of cerebral vasospasm. Assuming that were Biochemical analyzes with special consideration of vasoactive substances carried out on mixtures of blood and cerebrospinal fluid (blood-CSF mixture), to determine what role this mixture plays in cerebral vasospasm.

Dabei wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß Serotonin oder serotoninanaloge Verbindungen für den frühen Spasmus verantwortlich sind und daß auf diese Substanzen zurückzuführende zerebrale Vasospasmen vollständig durch Serotonin-Antagonisten kontrclliert werden. Xerner wurde festgestellt, daß späte Spasmen, d.h. zerebrale Vasospasmen, durch Oxyhämoglobin oder ein Polypeptid mit biochemischen Eigenschaften, die denen von Oxyhämoglobin sehr nahekommen, welches durch Hämolyse von roten Blutkörperchen freigesetzt wird, verursacht werden. Wie bereits erwähnt, lassen sich diese zerebralen Vasospasmen durch lokale Verabfolgung von Haptoglobin oder eines Hämoglobin-Haptoglobin-Komplexes wirksam behandeln. Es wurde festgestellt, -daß die Vasospasmuswirkung von Oxyhämoglobin nur auf die zerebrale Arterie und beispielsweise überhaupt nicht auf die mesenteriale Arterie auftritt.It was found according to the invention that serotonin or serotonin analogs Compounds responsible for the early spasm and that on these substances cerebral vasospasm attributable entirely to serotonin antagonists be controlled. Xerner was found to have late spasms, i.e. cerebral Vasospasm, due to oxyhemoglobin or a polypeptide with biochemical properties, very close to those of oxyhemoglobin, which is produced by hemolysis of red blood cells released are caused. As mentioned earlier, these can be cerebral Vasospasm from local administration of haptoglobin or a hemoglobin-haptoglobin complex treat effectively. It was found -that the vasospasm effect of oxyhemoglobin only to the cerebral artery and, for example, not to the mesenteric at all artery occurs.

Zur Therapie von zerebralen Vasospasmen werden Haptoglobin oder Hämoglobin-Haptoglobin-Komplexe folgendermaßen angewendet; 1. Verschobene operative Eingriffe bei Aneurysmarupturen Die lokale Anwendung von Haptoglobin auf die spastische, zerebrale Arterie stellt das wirksamste Verfahren zur Lösung des anhaltenden Vasospasmus dar. Jede lokale Dosis besteht aus 2 oder 3 ml einer Haptoglobinlösung (20 mg hBC/nil). Dabei müssen die spastischen Arterien mit der Hämoglobinlösung getränkt und anschließend mit normaler Kochsalzlösung gewaschen werden.Haptoglobin or hemoglobin-haptoglobin complexes are used to treat cerebral vasospasms applied as follows; 1. Postponed surgical interventions in the event of aneurysm rupture The local application of haptoglobin to the spastic, cerebral artery provides represent the most effective method of resolving persistent vasospasm. Any local The dose consists of 2 or 3 ml of a haptoglobin solution (20 mg hBC / nil). Have to the spastic arteries soaked with the hemoglobin solution and then with normal saline solution.

Dieses Verfahren wird während der Operation mehrfach wie der holt. Vor dem Schließen der Dura mater wird die gleiche Haptoglobindosis auf die spastische, zerebrale Arterie aufgebracht.This procedure is repeated several times during the operation like that. Before the dura mater is closed, the same dose of haptoglobin is applied to the spastic, cerebral artery applied.

Nach der Operation werden an den beiden folgenden Tagen durch einen Katheter in der Basalzisterne wiederholt Haptoglobininfusionen (2 ml Iiösung-10 mg IIbXC/ml) vorgenomfaen.After the operation, on the following two days, a Catheter in the basal cistern repeated haptoglobin infusions (2 ml of solution-10 mg IIbXC / ml).

2. Früher operativer Eingriff bei Aneuwsaruptur 100 ml Haptoglobinlösung (20 mg Eb30/ml) werden mit 500 ml normaler Kochsalzlösung verdünnt. Nach dem Abtrennen des Aneurysmahalses werden die zum Aneurysma proximalen und distalen Arterien mit dieser verdünnten Haptoglobinlösung gespült.2. Early surgical intervention for aneuws rupture 100 ml haptoglobin solution (20 mg Eb30 / ml) are diluted with 500 ml normal saline solution. After detaching of the neck of the aneurysm are the arteries proximal and distal to the aneurysm this diluted haptoglobin solution rinsed.

3. Andere Verwendungszwecke I) Intraventrikuläre Anwendung Durch ein Shuntingrohr oder ein externes Drainagerohr wird mehrfach eine Infusion einer Ifaptoglobinlösung (2 ml Lösung- 10 mg HbBU/ml) durchgeführt.3. Other Uses I) Intraventricular Use By a Shunting tube or an external drainage tube is used multiple times to infuse an ifaptoglobin solution (2 ml solution 10 mg HbBU / ml).

II) Intrathekale Anwendung In den spinalen Subarachnoidraum wird eine Haptoglobinlösung (2 ml Lösung-10 mg HbBCYml) injiziert.II) Intrathecal application In the spinal subarachnoid space a Haptoglobin solution (2 ml solution-10 mg HbBCYml) is injected.

III)Haptoglobin eignet sich auch zur Verhinderung eines andauernden Spasmus nach starker Hämorrhagie in der Basalzisterne bei beliebigen Operationen.III) Haptoglobin is also useful for preventing persistent Spasm after severe hemorrhage in the basal cistern during any operation.

Die einzelnen Figuren, auf die auch in den Beispielen Bezug genommen wird, haben folgende Bedeutungen: Pig. 1: A. Vorrichtung zur Herstellung von Arterienstreifen. Unter Drehung der Nadel wird von der Arterie ein spiralenförmiger Streifen geschnitten.The individual figures also referred to in the examples will have the following meanings: Pig. 1: A. Apparatus for making arterial strips. While rotating the needle, a spiral strip is cut from the artery.

B. Der Arterienstreifen wird in einer Kunststoffkammer, die mit Sauerstoçff gesättigte, künstliche CSF-Lösung, sättigt zu enthält ,-bei 3700 suspendiert. Das Reagenz wird in diese Kammer gegeben und mit Hilfeeines Magnetrührers vermischt. B. The artery strip is placed in a plastic chamber filled with oxygen saturated, artificial CSF solution, containing saturated, -suspended at 3700. That Reagent is added to this chamber and mixed using a magnetic stirrer.

Fig. 2: Typische Reaktion der Arteria basilaris auf gealteres Serum (0, 1, 4 und 7 Tage bei 370C).Fig. 2: Typical reaction of the basilar artery to older serum (0, 1, 4 and 7 days at 370C).

bei Die Vasoaktivität von Serum nimmt/zunehmender Alterung rasch ab. 4 Tage lang inkubierte Proben sind im wesentlichen nicht vasoaktiv. Die deutlichste Kontraktion wird durch frisches Serum verursacht. Sie entspricht nahezu der Kontraktion bei Verabfolgung von 5 Sug/ml Serotonin. The vasoactivity of serum decreases / increases rapidly with aging away. Samples incubated for 4 days are essentially non-vasoactive. The clearest Contraction is caused by fresh serum. It almost corresponds to the contraction when given 5 sug / ml serotonin.

B. Durch Methysergid (Serotonin-Antagonist) wird die durch Serum hervorgerufene Kontraktion vollständig verhindert. B. By methysergide (serotonin antagonist) the by serum induced contraction completely prevented.

Der Antagonist wird dem Bad 3 Minuten vor dem Agonisten zugesetzt. The antagonist is added to the bath 3 minutes before the agonist.

Fig. 3:Typische Reaktion der Arteria basilaris auf den Überstand eines Blut-OSP-Gemisches.Fig. 3: Typical reaction of the basilar artery to the supernatant of a Blood-OSP mixture.

A. Die Vasoaktivität eines Blut-CSF-Gemisches nimmt mit zunehmender Alterung fortschreitend zu. Die durch eine 7 Tage lang inkubierte Probe hervorgerufene Kontraktion ist am deutlichsten und entspricht nahezu der durch Serotonin hervorgerufenen Kontraktion. A. The vasoactivity of a blood-CSF mixture increases as it increases Aging progresses too. The one evoked by a sample incubated for 7 days Contraction is most pronounced and is close to that produced by serotonin Contraction.

B. Die durch den Überstand eines gealterten Blut-OSP-Gemisches hervorgerufene Kontraktion wird durch Methysergid nicht antagonistisch verhindert. Der Antagonist wird dem Bad 3 Minuten vor dem Agonisten zugesetzt. B. Those evoked by the supernatant of an aged blood-OSP mixture Methysergide does not antagonistically prevent contraction. The antagonist is added to the bath 3 minutes before the agonist.

Fig-.-4:Kontraktion der Artria basilaris durch den Überstand eines gealterten Blut-CSF-Gemisches.Fig -.- 4: Contraction of the basilar artery by the supernatant of a aged blood-CSF mixture.

A. Es tritt eine besonders charakteristische Kontraktion ein.A. A particularly distinctive contraction occurs.

Eine tonische Tension ist der phasischen Kontraktion überlagert. Die Dauer beträgt im allgemeinen mehrere Stunden. A tonic tension is superimposed on the phasic contraction. The duration is generally several hours.

B. Die Kontraktion läßt sich nicht einfach durch Waschen des Arterienstreifens mit künstlicher CSF-Lösung zum Abklingen bringen.B. The contraction cannot be achieved simply by washing the artery strip to subside with an artificial CSF solution.

O. Die Kontraktion wird deutlich durch den hypoxischen Zustand verstärkt, der durch Unterbrechung der kontinuierlichen Sauerstoffzufuhr in das Bad hervorgerufen wird.O. The contraction is markedly increased by the hypoxic state, caused by interrupting the continuous supply of oxygen to the bath will.

Bei erneuter Sättigung mit Sauerstoff tritt der vorherige Zustand rasch wieder ein. With renewed saturation with oxygen, the previous state occurs quickly on again.

Fig. 5: A. Säulenchromatographie eines Blut-OSF-Gemisches an Sephadex G-100. Links: Frische Probe; rechts: 7 Tage lang inkubierte Probe. Das dritte Maximum nimmt mit der Alterung deutlich zu. Fig. 5: A. Column chromatography of a blood-OSF mixture on Sephadex G-100. Left: fresh sample; right: sample incubated for 7 days. The third maximum increases significantly with aging.

B. Vasoaktivität der drei Maxima bei einer 7 Tage lang inkubierten Probe: Das dritte Maximum weist eine starke Vasoaktivität auf. B. Vasoactivity of the three maxima in one incubated for 7 days Sample: The third maximum shows strong vasoactivity.

Fig. 6: Durch das inkubierte Blut-CS-Gemisch hervorgerufener Vasospasmus: Linkes vertebrales Angiogramm.Fig. 6: Vasospasm caused by the incubated blood-CS mixture: Left vertebral angiogram.

Links: Kontrollangiogramm. Left: control angiogram.

Mitte: 10 Tage nach Injektion einer konzentrierten Fraktion des dritten Maximums an Sephadex G-10O in die Båsb stRrtë. Middle: 10 days after injection of a concentrated fraction of the third Maximum of Sephadex G-10O in the Båsb stRrtë.

Rechts: 16 Tage nach der Injektion in die Basalzisterne. Right: 16 days after injection into the basal cistern.

In der Arteria basilaris und dem Willis-Kreis hat sich ein ausgeprägter diffuser, später Spasmus entwickelt. In the basilar artery and the Willis circle there is a pronounced one diffuse, later developed spasm.

Fig. 7: Eine durch Hb oder dessen verwandtes Polypeptid hervorgerufene Kontraktion wird durch Anwendung von Haptoglobin gehemmt.Figure 7: One elicited by Hb or its related polypeptide Contraction is inhibited by the application of haptoglobin.

A. Bei Kombination von Hb mit Hp läßt sich deutlich feststellen, daß die Vasoaktivität von Hb verschwindet-. A. The combination of Hb and Hp clearly shows that that the vasoactivity of Hb disappears-.

B. buroh Zusatz von Hb oder von dessem verwandten Polypeptid wird nach Anwendung des Hb-Hp-Komplexes keine weitere Kontraktion hervorgerufen. B. buroh addition of Hb or its related polypeptide no further contraction caused after application of the Hb-Hp complex.

C. Wenn Haptoglobin oder Hp-Hb auf den Arterienstreifen, der durch freies Hämoglobin maximal kontrahiert ist, aufgebracht wird, wird die Kontraktion in gewissen Umfang verringert. C. If haptoglobin or Hp-Hb on the arterial strip passing through If free hemoglobin is maximally contracted, the contraction becomes reduced to some extent.

Fig. 8: Spasmolytische Wirkung von Hp.Fig. 8: Spasmolytic effect of Hp.

Links: Vertebrales Kontrollangiogre Mitte: 2 Tage nach der Injektion von Hb in die Basalzisterne entwickelt sich ein diffuser Vasospasmus. Left: Vertebral control angiography Middle: 2 days after injection A diffuse vasospasm develops from Hb into the basal cistern.

Rechis: Nachdem die Entwicklung des Spasmus bestätigt ist, wird Hp in die Basalzisterne injiziert. Nach 5 Stunden tritt eine deutliche Verringerung des Vasospasmus ein. Rechis: After confirming the development of the spasm, Hp injected into the basal cistern. After 5 hours there is a significant decrease of vasospasm.

Pig. 9: links: 1 Tag vor der Operation tritt bei M1 und 1M2 ein ausgeprägter-Vasospasmus au.Pig. 9: left: 1 day before the operation, M1 and 1M2 show pronounced vasospasm ouch

Mitte: Angiogramm unmittelbar nach der Operation: Nach Behandlung mit Haptoglobin ergibt sich eine Senkung in diesem Bereich. Middle: Angiogram immediately after the operation: After treatment with haptoglobin there is a decrease in this area.

Rechts: 3 Tage nach der Operation. Right: 3 days after the operation.

Es wird ein Haptoglobinpräparat der Firma The Green Oross Corporation, Japan, verwendet. Es handelt sich dabei um eine bräunliche Plüssigkeit, die gemäß den JA-OSen 77 516/75 und 77 527/50 bzw. gemäß der DT-OS 2 409 650 durch Reinigung von 2-Globulin hergestellt ist. Das rz2-Globulin ist durch Fraktionierung der Cohn-Fraktion IV aus Humanplasma hergestellt. Zusammensetzung: 2000 Einheiten Haptoglobin aus Humanplasma (1 Einheit Haptoglobin verbindet sich mit 1 mg Hämoglobin) und 0,90 g Natriumchlorid in einer Ampulle von 100 ml. Reinheit: Mindestens 90 Prozent Haptoglobin (a2-Globulin) mit einer geringen Menge an ß-Globulin (elektrophoretisch bestimmt).A haptoglobin preparation from The Green Oross Corporation, Japan, used. It is a brownish liquid, which according to the JA-OSen 77 516/75 and 77 527/50 or according to the DT-OS 2 409 650 by cleaning is made of 2-globulin. The rz2 globulin is by fractionation the Cohn fraction IV prepared from human plasma. Composition: 2000 units of haptoglobin from human plasma (1 unit of haptoglobin combines with 1 mg of hemoglobin) and 0.90 g sodium chloride in a 100 ml ampoule. Purity: At least 90 percent haptoglobin (a2-globulin) with a small amount of ß-globulin (determined electrophoretically).

Das Beispiel und die klinischen Versuche erläutern die Erfindung.The example and the clinical trials illustrate the invention.

Beisp iel Erwachsene Hunde mit 10 bis 15 kg Körpergewicht werden getötet. For example adult dogs with a body weight of 10 to 15 kg killed.

Unmittelbar danach wird jeweils die Arteria basilaris entfernt und gemäß R.N.Speden, J. Physiol. Bd. 154 (1960), S. 15 bis 25, zu einem spiralenförmigen Streifen geschnitten; vgl. Fig. 1 A.Immediately thereafter, the basilar artery is removed and according to R.N.Speden, J. Physiol. Vol. 154 (1960), pp. 15 to 25, to a spiral-shaped Cut strips; see Fig. 1 A.

Dieser Streifen wird in einer Kunststoffkammer befestigt, die 5 ml künstliches CSF enthält (Konzentrationen (millimolar): NaCl 128, NaHCO3 15, KCl1,8, KH2PO4, MgSO4 1,3, CaCl2 1,3, Glucose 1,5). Ein Ende des Arterienstreifens wird fixiert, während das andere Ende an eine mit einem Dehnungsmesser verbundene Gleitskala befestigt wird. Die isometrische Spannung des Arterienstreifens wird mit einem elektronischen Schreiber aufgezeichnet; vgl. Pig. 1 B. Während des ganzen Versuchs wird die Lösung mit einem Gemisch aus 95 Prozent 02 und 5 Prozent C°2 mit Sauerstoff versetzt. Der pH-Wert wird auf 7,4 und die Temperatur der Flüssigkeit auf 370C gehalten. Die Vasoaktivität von frischen oder gealterten Serumproben, Vollblut oder Blut CSP-Gemischen (1:1, 1:4) auf die isolierte Arterie wird durch Zusatz von jeweils 0,1 bis 6,5 ml Probe zu dem Medium untersucht. Die Alterung der Proben wird durch eine Inkubation von 0 bis 7 Tagen unter aseptischen Bedingungen bei 370Q vorgenommen.This strip is placed in a plastic chamber that holds 5 ml contains artificial CSF (concentrations (millimolar): NaCl 128, NaHCO3 15, KCl1.8, KH2PO4, MgSO4 1.3, CaCl2 1.3, glucose 1.5). One end of the artery strip becomes while the other end is attached to a sliding scale connected to a strain gauge is attached. The isometric tension of the arterial strip is measured using an electronic Scribe recorded; see Pig. 1 B. During the whole experiment the solution with a mixture of 95 percent 02 and 5 percent C ° 2 with oxygen. Of the The pH is maintained at 7.4 and the temperature of the liquid at 370C. The vasoactivity of fresh or aged serum samples, whole blood or blood CSP mixtures (1: 1, 1: 4) on the isolated artery is through Addition of 0.1 each up to 6.5 ml of sample to the medium examined. The aging of the samples is caused by a Incubation performed for 0 to 7 days under aseptic conditions at 370Q.

Zur Reinigung der vasoaktiven Substanzen werden die Proben zuerst einer Gelfiltration unter Verwendung einer mit Sephadex G-100 beschickten Säule der Abmessungen 2,5 x 90 cm unterworfen.To purify the vasoactive substances, the samples are first gel filtration using a column loaded with Sephadex G-100 subject to the dimensions 2.5 x 90 cm.

Dabei wird mit 0,1 m Tris-HOl-Puffer vom pH-Wert 8,0, der 1 m an NaCl ist, eluiert. Nach Durchführung der Ninhydrinreaktion wird die Absorption bei 280 und 415 mu gemessen. Die vasoaktiven Fraktionen werden an einer mit Carboxymethylcellulose-Ionenaustauscherharz beschickten Säule der Abmessungen 2,5 x 40 cm weiter gereinigt. Die Elution wird mit 0,01 m Phosphatpuffer vom pH-Wert 7,0 der 0,5 m an NaOl ist, durchgeführt. Die Analyse des in der vasoaktiven Fraktion enthaltenen Polypeptids wird elektrophoretisch an Polyacrylamidgel gemäß L. Orstein, Ann.This is done with 0.1 M Tris-HCl buffer of pH 8.0, the 1 M NaCl is eluted. After performing the ninhydrin reaction, the absorbance is at 280 and 415 mu measured. The vasoactive fractions are attached to a carboxymethyl cellulose ion exchange resin charged column of dimensions 2.5 x 40 cm further purified. The elution will with 0.01 M phosphate buffer of pH 7.0, which is 0.5 M NaOl, carried out. the Analysis of the polypeptide contained in the vasoactive fraction is electrophoretic on polyacrylamide gel according to L. Orstein, Ann.

N.Y. Acad. cäd; Sciences, Bd.121 t19Ug) 21 bis 349 dür-cNhgeSurt; Die durch Serum hervorgerufene Kontraktion ist bei einer frischen Probe am deutlichsten und nimmt mit einer Alterung der Probe rasch ab. 7 Tage lang gealtertes Serum ist im wesentlichen nicht vasoaktiv; vgl. Fig. 2 A. Ferner wird die durch Serum hervorgerufene Kontraktion durch Methysergid, einen Serotonin-Antagonisten, praktisch vollständig beseitigt; vgl. Fig. 2 B.N.Y. Acad. cäd; Sciences, Vol. 121 t19Ug) 21 to 349 dür-cNhgeSurt; The contraction caused by serum is most pronounced with a fresh sample and decreases rapidly as the sample ages. Serum is aged for 7 days essentially not vasoactive; See Fig. 2A. Furthermore, the serum induced Contraction by methysergide, a serotonin antagonist, practically complete eliminated; see. Fig. 2 B.

Die durch Serum oder Serotonin hervorgerufene Kontraktion sinkt sofort ab, wenn das ursprüngliche Medium aus künstlichem 0SF in der Umgebung des Arterienstreifens wieder hergestellt wird.The contraction caused by serum or serotonin decreases immediately from when the original medium of artificial OSF in the vicinity of the arterial strip is restored.

Somit ergibt sich, daß Serotonin bzw. eine mit Serotonin verwandte Verbindung im Serum praktisch allein für die Entwicklung des frühen Spasmus verantwortlich ist.Thus, it is found that serotonin or one related to serotonin Compound in the serum practically solely responsible for the development of early spasm is.

Andererseits nimmt die Vasoaktivität im Überstand von inkubiertem Vollblut und von Blut-GSF-Gemischen mit einer Alterung der Proben-fortlauSend zu und erreicht nach etwa 7 tägiger Inkubation das I-iaximum; vgl. Pig. 3 A. Außerdem bleibt die Vasoaktivität im Überstand von gealterten Blut-CSF-Gemischen oder von gealtertem Vollblut nach Zugabe von Methysergid unverändert; vgl. Fig. 3B. Die durch Zugabe eines gealterten Blut-CSF-Gemisches hervorgerufene Arterienkontraktion ist wesentlich größer als die durch gealtertes Blut allein hervorgerufene Konzentration. Diese Konzentration ist gekennzeichnet durch eine mit der phasischen Kontraktion der isolierten Arteria basilaris überlagerten tonischen Tension. Die Kontraktion dauert im allgemeinen mehrere Stunden, vgl. Pig. 4A. Nach dem Eintreten einer durch diese -gemiterten rohen' hervorgerufenen Kontraktion läßt sich durch Waschen der Arterie mit künstlicher 0SF (vgl. Fig. 4 B) die Kontraktion nicht einfach vermindern.On the other hand, the vasoactivity decreases in the supernatant of the incubated Whole blood and blood-GSF mixtures continue to increase with aging of the samples and reaches the I-iaximum after about 7 days of incubation; see Pig. 3 A. Also vasoactivity remains in the supernatant of aged blood-CSF mixtures or of aged whole blood unchanged after addition of methysergide; see Figure 3B. By Addition of an aged blood-CSF mixture induces arterial contraction much greater than the concentration produced by aged blood alone. This concentration is characterized by one with the phasic contraction tonic tension superimposed on the isolated basilar artery. The contraction generally takes several hours, see Pig. 4A. After entering a through this "middled raw" contraction can be removed by washing the Artery with artificial OSF (see Fig. 4B) does not simply decrease the contraction.

Diese Kontraktion wird ferner unter hypoxischen Bedingungen, die durch Beendigung der kontunuierlichen 02-ZuSuhr in das Reaktionsmedium hervorgerufen werden, deutlich steigern; vgl.This contraction is also caused by hypoxic conditions Termination of the continuous O2 supply into the reaction medium can be brought about, increase significantly; see.

Fig. 4 C.Fig. 4 C.

Zur Isolation der vasoaktiven Substanz wird der Überstand eines Blut-GSF-Gemisches (1:1) das 7 Tage bei 37°C inkubiert worden ist, über eine mit Sephadex G-100 beschickte Säule gegeben.The supernatant of a blood-GSF mixture is used to isolate the vasoactive substance (1: 1) which has been incubated for 7 days at 37 ° C, loaded with Sephadex G-100 Given column.

Die Vasoaktivität läßt sich nur in den Fraktionen feststellen, die dem dritten Maximum des Chromatogramms entsprechen; vgl.The vasoactivity can only be determined in the fractions that correspond to the third maximum of the chromatogram; see.

Fig. 5. Diese vasoaktive Fraktion (Maximum III) wird gesammelt und durch Diafiltration eingeengt. Die eingeengte vasoaktive Substanz wird mit einer entsprechenden Menge an Fibrinogen und Thrombin versetzt. Wird eine dünne Scheibe des auf diese Weise erhaltenen Klumpen auf die kaudale -Pons eines erwachsenen Hundes durch die an der Mittellinie des Glivus angeordnete Trephineöffnung aufgebracht, so entsteht an der Arteria basilaris und am Willis-Kreis ein ausgeprägter Yasospasmus. Dieser hält im allgemeinen 2 Wochen an; vgl. Fig. 6.Fig. 5. This vasoactive fraction (maximum III) is collected and concentrated by diafiltration. The concentrated vasoactive substance is treated with a corresponding amount of fibrinogen and thrombin added. Becomes a thin slice of the lump obtained in this way onto the caudal pons of an adult dog applied through the trephine opening located on the midline of the glivus, this creates a pronounced yasospasm on the basilar artery and on the Willis circle. This generally lasts for 2 weeks; see Fig. 6.

Zur weiteren Reinigung der vasoaktiven Substanz wird das Material des IGaximums III über eine mit OM-Gellulose-lonenaustauscherharz beschickte Säule gegeben. Die Vasoaktivität der einzelnen Fraktionen wird durch einen in vitro-Versuch bestimmt. Die Vasoaktivität findet sich im dritten Maximum (Maximum TTI CM-C) TTI CN-C . Bei -Beil de?rÄflfnshme ''SPelt-Tu-m-. 'ie S : d e-sm Maximum III entsprechenden Materials ergeben sich ausgeprägte Absorptionsbanden bei 415, 540 und 575 m. Diese Banden sind für Oxyhämoglobln typisch. Auch bei der Elektrophorese an Polyacrylamidgel zeigt dieses Siiaterial Eigenschaften wie Oxyhämoglobin. Es kann also mit großer Wahrscheinlichkeit angenommen werden, daß die aus dem Blut-CSF-Gemisch isolierte vasoaktive Substanz entweder Oxyhämoglobin selbst oder ein damit nah verwandtes Polypeptid ist.The material is used to further purify the vasoactive substance of the I maximum III via a column charged with OM-gelulose ion exchange resin given. The vasoactivity of the individual fractions is determined by an in vitro experiment certainly. The vasoactivity is found in the third maximum (maximum TTI CM-C) TTI CN-C. At -Beil de? RÄflfnshme '' SPelt-Tu-m-. 'ie S: d e-sm maximum III corresponding Material there are pronounced absorption bands at 415, 540 and 575 m Bands are typical of oxyhemoglobulins. Even with electrophoresis on polyacrylamide gel this material exhibits properties like oxyhemoglobin. So it can with great Probability can be assumed that the isolated from the blood-CSF mixture vasoactive substance either oxyhemoglobin itself or a closely related one Is a polypeptide.

Haptoglobin, a2-Globulin ist ein normaler Serumbestandteil.Haptoglobin, a2-globulin, is a normal component of serum.

Es ist bekannt daß Haptoglobin sich leicht stöchiometrisch mit Hämoglobin unter Bildung eines stabilen Haptoglobin-Hämoglobin-Komplexes verbindet.It is known that haptoglobin is slightly stoichiometric with hemoglobin connects to form a stable haptoglobin-hemoglobin complex.

Für die weiteren Versuche werden Haptoglobin und Haptoglobin-Hämoglobin-Komplexe (Hp-Hb) verwendet. Hp-Hb wird hergestellt, indem man Haptoglobin entweder zu dem chromatographisch eluierten Material, das dem Maximum III OM-C entspricht, oder zu Hämoglobin, das nach dem Drabkin-Verfahren hergestellt ist, gibt und anschließend eine Isolierung durch Gelfiltration vornimmt.For further experiments, haptoglobin and haptoglobin-hemoglobin complexes are used (Hp-Hb) used. Hp-Hb is made by adding haptoglobin to either the chromatographically eluted material which corresponds to the maximum III OM-C, or to hemoglobin, which is produced by the Drabkin process, and then isolation by gel filtration.

Die nachstehend beschriebenen in vitro-Versuche, die gemäß dem vorstehend erläuterten Verfahren durchgeführt werden, bestätigen folgendes: 1) Die durch Hp-Hb hervorgerufene Kontraktion ist im Vergleich zür Kontraktion durch Hämolo'bin' al ein wesentlich geringe; vgl. Fig. 7A. Ferner tritt bei weiterer Zugabe von freiem Hämoglobin keine Kontraktion ein, wenn der Arterienstreifen zuerst mit Hp-Hb behandelt worden ist.The in vitro experiments described below, carried out according to the above procedures outlined are carried out confirm the following: 1) The Hp-Hb induced contraction is compared to the contraction caused by haemolo'bin 'al a much minor one; see Figure 7A. Furthermore occurs with further addition of free Hemoglobin does not contract when the artery strip is first treated with Hp-Hb has been.

2) Läßt man Haptoglobin oder Hp-Hb auf einen Arterienstreifen einwirken, der durch Behandlung mit freiem Hämoglobin seine maximale Kontraktion erreicht hat, wird die Kontraktion etwas verringert; vgl. Fig. 7 C.2) Let haptoglobin or Hp-Hb act on a strip of arteries, who has reached its maximum contraction after treatment with free hemoglobin, the contraction is decreased somewhat; see Fig. 7 C.

Somit kann angenommen werden, daß bei einer Freisetzung von Hämoglobin oder verwandten Polypeptiden durch die spontane Hämolyse von aus den Gefäßen ausgetretenen Erythrozyten eine Kombination des Hämoglobins oder der Polypeptide mit Haptoglobin so lange eintritt, bis die Bindefähigkeit des Haptoglobins verbraucht ist. Auch wenn die Hämoglobinmenge die Bindekapazität des zur Verfügung stehenden Haptoglobins übersteigt und sich Hämoglobin in einem bestimmten Ausmaß ansammelt, wird die Vasoaktivität des Hämoglobins durch die Gegenwart von Hp-Hb blockiert. Dies ist möglicherweise die Erklärung für die Tatsache, daß die Vasoaktivität von gealtertem Vollblut wesentlich geringer in Erscheinung tritt als die eines Blut-GSF-Gemisches von gleichem Volumen. Diese Wirkung tritt ungeachtet der Tatsache ein, daß der Hämoglobingehalt im Vollblut größer als im Blut-CSF-Gemisch ist. Es wird ferner angenommen, daß bei einer Aneurysmaruptur extravasiertes Blut, das zunächst mit CSF und anschließend mit Serum verdünnt wird, durch die CST-Zirkulation ausgewaschen wird und ein vergleichsweise großer Anteil der Blutkörperchen in der Basalzisterne oder in der sylvischen Purche zurückbleibt. Diese Bedingungen sind für das Entstehen von Vasospasmen günstig, da die Menge an freiem Hämoglobin durch Hämolyse fortwährend zunimmt, während die Gesamtmenge an Haptoglobin stark zurückgeht.Thus it can be assumed that upon release of hemoglobin or related polypeptides by the spontaneous hemolysis of leaked from the vessels Erythrocytes a combination of hemoglobin or polypeptides with haptoglobin occurs until the binding capacity of the haptoglobin is used up. Even if the amount of hemoglobin exceeds the binding capacity of the available haptoglobin exceeds and hemoglobin accumulates to a certain extent, the vasoactivity becomes of hemoglobin blocked by the presence of Hp-Hb. This is possibly the explanation for the fact that the vasoactivity of aged whole blood is essential appears less than that of a blood-GSF mixture of the same volume. This effect occurs regardless of the fact that the hemoglobin content in whole blood is greater than in the blood-CSF mixture. It is also believed that in the event of an aneurysm rupture extravasated blood that is first diluted with CSF and then with serum, is washed out by the CST circulation and a comparatively large proportion the corpuscles remain in the basal cistern or in the Sylvian purche. These conditions are favorable for the onset of vasospasm, as the amount of it free hemoglobin from hemolysis continually increases, while the total amount increases Haptoglobin drops sharply.

Beim in vivo-Versuch wird eine geeignete Menge Hämoglobin in die Cisterna magna injiziert. Es ergibt sich ein ausgeprägter Vasospasmus der Arteria basilaris und des Willis-Kreises.In the in vivo experiment, a suitable amount of hemoglobin is deposited in the cisterna magna injected. There is pronounced vasospasm of the basilar artery and the Willis Circle.

Im Vergleich zu Kontrolltieren läßt sich dieser Vasospasmus 4 oder 5 Tage lang feststellen. Am dritten Tag nach der Injektion von freiem Hämoglobin wird nach angiographischer Bestätigung eines diffusen Vasospasmus 1 ml einer Haptoglobinlösung (20 mg HbBO/ml) in die Basalzisterne injiziert. Etwa 5 Stunden nach der Haptoglobininjektion geht das Ausmaß des Vasospasmus zurück und der Arteriendurchmesser geht auf den Normalwert zurück; vgl. Pig. 8.Compared to control animals, this vasospasm can be 4 or Detect for 5 days. On the third day after the injection of free hemoglobin after angiographic confirmation of a diffuse vasospasm, 1 ml of a haptoglobin solution (20 mg HbBO / ml) is injected into the basal cistern. About 5 hours after the haptoglobin injection the extent of the vasospasm decreases and the arterial diameter decreases Normal value back; see Pig. 8th.

Bei mehreren Patienten werden Vasospasmen mit Haptoglobin behandelt.In several patients, vasospasm is treated with haptoglobin.

Klinischer Versuch 1 Ein 60 jähriger, männlicher Patient wird 7 Tage nach einer subarachnoidalen Hämorrhagie ins Krankenhaus eingeliefert.Clinical Trial 1 A 60 year old male patient is 7 days hospitalized after a subarachnoid hemorrhage.

Am nächsten Tag wird durch Angiographie ein sackartiges Aneurysma an der vorderen Verbindungsarterie und ein ausgeprägter Vasospasmus an C1 A1 Ai und M1 festgesteilt. 2 Tage nach der Einlieferung des Patienten wird der Aneurysmahals abgetrennt. Die spastischen Arterien werden mit 3 ml einer Lösung mit einem Gehalt an 20 mg HbBO/ml gespült. In den beiden Tagen nach der Operation werden durch einen Katheter in der Basalzisterne wiederholt Haptoglobininfusionen vorgenommen. Ein am dritten Tag nach der Operation aufgenommenes Angiogramm zeigt eine Entspannung des Vasospasmus am Willis-Kreis.The next day, angiography reveals a sac-like aneurysm on the anterior connecting artery and pronounced vasospasm on C1 A1 Ai and M1 fixed. 2 days after the patient's admission, the aneurysm neck becomes severed. The spastic arteries are mixed with 3 ml of a solution containing rinsed at 20 mg HbBO / ml. In the two days after the operation, a Catheter in the basal cistern made repeated haptoglobin infusions. A Angiogram taken on the third day after surgery shows relaxation of vasospasm in the Willis circle.

Klinischer Versuch 2 Versuchsperson ist eine 46 jährige, weibliche Patientin, bei der an der mittleren zerebralen Arterie zwei aufeinanderfolgende Aneurysmarupturen aufgetreten sind. Ein 14 Tage nach der zweiten Blutung aufgenommenes zerebrales Angiogramm zeigt ein sackartiges Aneurysma an der rechten mittleren zerebralen Arterie und einen ausgeprägten Vasospasmus, insbesondere an der mittleren zerebralen Arterie. Am folgenden Tag wird die Patientin operier-t. Nach dem Abtrennen des Aneurysmahalses wird entlang der sylvischen Furche den Ar" len Haptoglobin zugeführt. Die einen ausgeprägten Spasmus aufweisenden Arterien entspannen sich unmittelbar nach der Operation und bleiben mehrere Tage entspannt, wie sich aus dem am dritten Tag nach der Operation aufgenommenen Angiogramm ergibt; vgl. Pig. 9. LeerseiteClinical trial 2 The test subject is a 46 year old female Patient in whom the middle cerebral artery has two consecutive Aneurysm ruptures have occurred. One recorded 14 days after the second bleeding cerebral angiogram shows a sac-like aneurysm on the right central cerebral Artery and pronounced vasospasm, especially on the middle cerebral Artery. The patient is operated on the following day. After severing the neck of the aneurysm haptoglobin is supplied to the ar "len along the Sylvian furrow. The one Pronounced spasmodic arteries relax immediately after the Surgery and stay relaxed for several days, as evidenced by the third day results of the surgery recorded angiogram; see Pig. 9. Blank page

Claims

Patent claim 1 medicament for the prophylaxis and therapy of cerebral Vasospasm, not indicated by a content of haptoglobin or Hemoglobin-haptoglobin complexes.

2; Medicament according to claim 1, d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t that the haptoglobin or the hemoglobin laptoglobin complex in the form is an isotonic solution.