DE2548480C3

DE2548480C3 - ility test for the detection of the hemoglobin S reagent to be used

Info

Publication number: DE2548480C3
Application number: DE19752548480
Authority: DE
Inventors: Luis Heredero Baute; Hilda Granda Ibarra; Jose Alberto Suarez
Original assignee: EMPRESA CUBANA EXPORTADORA E IMPORTADORA DE PRODUCTOS MEDICOS MEDICUBA HAVANNA
Current assignee: EMPRESA CUBANA EXPORTADORA E IMPORTADORA DE PRODUCTOS MEDICOS MEDICUBA HAVANNA
Priority date: 1974-11-20
Filing date: 1975-10-29
Publication date: 1979-04-26
Also published as: DE2548480B2; DE2548480A1

Description

Der Nachweis von Hämoglobin S zur Diagnose von Hämoglobinopathie S unter Anwendung des Löslichkeitstests ist aj sich bekannt; vgl. beispielsweise die US-PS 34 92 095. Dieses Verfahren beruht auf der Unlöslichkeit des Hämoglobins S, wenn es in reduziertem Zustand und in einer Phosphatlösung hoher Molarität vorliegt. Einige Autoren empfehlen 2:ur Ausführung des erwähnten Nachweises die folgenden Reagenzkonzentrationen:The detection of hemoglobin S to diagnose hemoglobinopathy S using the solubility test aj is known to himself; See, for example, US-PS 34 92 095. This method is based on the Insolubility of hemoglobin S when it is in a reduced state and higher in a phosphate solution Molarity is present. Some authors recommend 2: ur Execution of the mentioned verification the following reagent concentrations:

selc Kaliumphosphat (wasserfrei) 22,55 gselc potassium phosphate (anhydrous) 22.55 g

prim. Kaliumphosphat (wasserfrei) 13,00 gprim. Potassium phosphate (anhydrous) 13.00 g

Sodium dithionite 2 g ^M White saponin 2 g Deionized V.isser ad. 100 ml

Für die routinemäßige Ausführung des Nachweises sind beispielsweise folgende Verfahrensvarianten bekannt: For example, the following process variants are known for routine verification:

Nalbadian, R.M., et al, Clin. Chem,

Bd. 17(1971). S. 1028 bis 1032:Vol. 17 (1971). P. 1028 to 1032:

Dieses Verfahren wird in Reagenzgläsern ausgeführt und beruht auf der Unlöslichkeit des desoxydierten Hämoglobins. Saponin, Phosphat und Dithionit werden als alleinige Reagentien verwendet, wobei darauf hingewiesen wird, daß die einmal hergestellte Lösung bei 4°C 1 Monat haltbar ist. Dabei gibt man 2 ml der Lösung in ein Reagenzglas bestimmter Abmessungen und setzt anschließend 20 μΙ Vollblut zu. Hierauf wird die Transparenz des Reagenzglasinhaltes bestimmt, wobei ein bedrucktes Material als Hintergrund „ dient.This procedure is carried out in test tubes and relies on the insolubility of the deoxidized hemoglobin. Saponin, phosphate and dithionite are used as the sole reagents used, it being noted that the solution once prepared at 4 ° C for 1 month is durable. To do this, 2 ml of the solution are placed in a test tube of certain dimensions and set then add 20 μΙ whole blood. The transparency of the test tube contents is then determined, with a printed material serving as a background.

R. M. Nalbadian, F. R. Camp, N. F. Conte
und W B. P r ο t h ο. Health Service Reports,
Bd. 88 (1973), S. 165:RM Nalbadian, FR Camp, NF Conte
and W B. P r ο th ο. Health Service Reports,
Vol. 88 (1973), p. 165:

In diesem Artikel wird die Verwendung eines automatisierten Anylsengeräts beschrieben, das die Durchführung von 960 bis 1200 Tests pro Tag erlaubt. Dabei liegen die Kosten für den Einzeltest zwar relativ nieder, jedoch ist die erwähnte automatische Ausrüstung außerordentlich teuer, eo Außerdem kann die Kapazität dieses Geräts in der Regel nicht voll ausgenützt werden.This article explains how to use a automated anylsenic device that can carry out 960 to 1200 tests per day permitted. The costs for the individual test are relatively low, but the one mentioned is automatic equipment extremely expensive, eo In addition, the capacity of this device can usually not be fully used.

R. M. Schmidt and S. M. Wilson, J.A.M.A.,

Bd. 225 (1973), S. 1225 bis 1230:Vol. 225 (1973), pp. 1225 to 1230:

This article discusses about 7 commercially available Solubility Tests for Detection of Hemoglobin S.

referiert, die alle auf der Unlöslichkeit von reduziertem Hämoglobin S basieren. Bei diesen 7 Tests geht man von trockenen, handelsüblichen Substanzen aus. Dabei wird die Genauigkeit der Versuchsergebnisse beispielsweise durch den Reinheitsgrad des Saponins und den Hydratationsgrad der Phosphate beeinflußt Auch dabei sind die Lösungen nur etwa 1 Monat bei 4° C haltbar, so daß sie im allgemeinen unmittelbar vor der Anwendung in kleinen Mengen hergestellt werden.all based on the insolubility of reduced hemoglobin S. With these 7 Tests are based on dry, commercially available substances. The accuracy of the Test results, for example, through the degree of purity of the saponin and the degree of hydration the phosphate influences Here, too, the solutions can only be kept for about 1 month at 4 ° C, so that they are generally prepared in small quantities immediately prior to use.

Eines der in der vorstehend erwähnten Literaturstelle genannten Verfahren besteht darin, 2 oder 3 ml der zu diesem Zweck hergestellten Lösung in ein Reagenzglas angemessener Größe zu geben und 20 oder 30 μΙ Vollblut zuzusetzen. Nach Schütteln von Hand wird das Reagenzglas vor einem einen genügenden Kontrast bietenden bedruckten Material betrachtet Die Lösung, die mit dem das Hämoglobin S enthaltenden Blut versetzt worden ist, ist undurchsichtig, während die Lösung die Hämoglobin A enthält, durchsichtig geblieben ist Dazu werden jeweils trockene, gegebenenfalls in den entsprechenden Mengenverhältnissen vorgemischte Reagentien verwendet, die wie erwähnt unmittelbar vor der Verwendung gelöst werdeaOne of those in the aforementioned reference The procedure mentioned consists in placing 2 or 3 ml of the solution prepared for this purpose in a test tube appropriate size and add 20 or 30 μΙ whole blood. After shaking it by hand, it becomes Test tube viewed in front of a printed material offering sufficient contrast The solution, which has been mixed with the blood containing hemoglobin S is opaque, while the Solution that contains hemoglobin A has remained transparent. Dry, if necessary reagents premixed in the appropriate proportions are used, as mentioned solved immediately before use a

Aufgabe der Erfindung ist es, für einen Test der vorbeschriebenen Art fertige Testlösungen zur Verfügung zu stellen, die mindestens 1 Jahr ha'tbar sind.The object of the invention is to provide ready-made test solutions for a test of the type described above must be submitted, which can be held for at least 1 year.

Der Gegenstand cer Erfindung ist im Patentanspruch definiertThe subject of the invention is in the claim Are defined

Die Stabilität der erfindungsgemäß hergestellten Lösungen wird durch Qualitätskontrollen bestätigt die mit Hilfe von Blut bekannter Hämoglobinzusammensetzung in regelmäßigen Abständen während eines (ahres ausgeführt werden. Der Einsatz der Ampulle als Verpackung bzw. Transportgefäß macht die Verwendung von Reagenzgläsern unnötig, da der Test in der Ampulle durchgeführt werden kann.The stability of the solutions prepared according to the invention is confirmed by quality controls with the help of blood of known hemoglobin composition at regular intervals during one year are executed. The use of the ampoule as packaging or transport container makes use of it of test tubes unnecessary as the test can be carried out in the ampoule.

Es ist zwar aus F. G s t i r η e r, Einführung in die Verfahrenstechnik der Arzneiformung, Stuttgart 1973. S. 275 bis 276 bekannt oxidat:onsen.p^rmdliche Substanzen unter Luftabschluß abzufüllen und aufzubewahren, jedoch beruht die Instabilität der genannten Testlösungen nicht allein auf der Einwirkung von Sauerstoff. Vielmehr geht aus der US-PS 34 92 095, Spalte 4. Zeilen 55 bis 60 hervor, daß derartige Reagentien erst durch das Vermischen des Hämolysierungsmittels mit dem Reduktionsmittel unbeständig werden, während sie bei getrennter Aufbewahrung längere Zeit beständig bleiben. Es wurde überraschenderweise festgestellt daß auch Lösungen, die Hämolysierungsmittel, Reduktionsmittel und Phosphatpuffer gleichzeitig enthalten, über längere Zeit hinweg stabil bleiben, wenn sie nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellt sind.Although it is from F. G stir it η, 1973. S. oxidate introduction to the process technology of the drug forming, Stuttgart 275-276 known: onsen.p ^r mdliche substances bottling the absence of air and stored, however, the instability is not based solely of the above test solutions on the action of oxygen. Rather, US Pat. No. 3,492,095, column 4, lines 55 to 60 shows that such reagents only become unstable when the hemolyzing agent is mixed with the reducing agent, while they remain stable for a long time when stored separately. It has surprisingly been found that solutions which contain hemolyzing agent, reducing agent and phosphate buffer at the same time remain stable over a long period of time if they are prepared by the process according to the invention.

Nachstehend wird das erfindungsgemäße Verfahren anhand der Zeichnung näher erläutert. Die für den Löslichkeitstest verwendete lösung wird in Glasampullen mit geeignetem Volumen eingefüllt (vgl. F- ig. I A). Vor dem endgültigen Verschließen der Ampulle wird die verbleibende Luftmenge durch Injektion von Stickstoff verdrängt (vgl. Fig. I-B). Vorzugsweise werden Glasampullen mit einem Volumen von 03 bis 5 ml verwendet, die mechanisch oder automatisch mit einer Lösung gefüllt werden, die die Reagentien in den geeigneten Mengenverhältnissen enthält. Bei der Ausführung des Tests im Laboratorium wird das dem Volumen der Ampulle angepaßte Volumen an Vollblut mit dem Inhalt der Ampulle vermischt. Hierauf wird die Ampulle in ein Gefäß mit abgestuften EichprobenThe method according to the invention is explained in more detail below with reference to the drawing. The for the Solubility test solution used is in glass ampoules filled in with a suitable volume (see Fig. I A). Before the ampoule is finally closed, the remaining amount of air is injected into Displaced nitrogen (see. Fig. I-B). Preferably are glass ampoules with a volume from 03 to 5 ml are used, which are filled mechanically or automatically with a solution that contains the reagents in the Contains suitable proportions. When the test is carried out in the laboratory, this will be dem Volume of the ampoule adjusted volume of whole blood mixed with the contents of the ampoule. Then the Ampoule in a vessel with graduated calibration samples

gestellt. Transparenz oder Undurchsichtigkeit der erhaltenen Lösung (vgl. F i g. 2-A und 2-B) werden in angemessenem Abstand vor einem Hintergrund aus bedrucktem Material von genügendem Kontrast festgestellt, so daß die Art des Hämoglobins diagnostiziert werden kann.posed. Transparency or opacity of the solution obtained (cf. FIGS. 2-A and 2-B) are shown in detected at a reasonable distance against a background of printed material of sufficient contrast, so that the type of hemoglobin can be diagnosed.

For this I blue drawings

Claims

Claim:

Method for preparing a solubility test A reagent to be used for detecting the hemoglobin S comprising a mixture of at least one phosphate buffer, a hemolyzing agent! and a reducing agent, characterized in that the mixture in glass ampoules one for the implementation of a single test fills a suitable volume, the space above the liquid with displacement fills the air with nitrogen and melts the ampoule

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