DE2531539A1

DE2531539A1 - Diazonium salt indicators - for detecting coupling components in liqs. for diagnostic purposes

Info

Publication number: DE2531539A1
Application number: DE19752531539
Authority: DE
Inventors: Wolfgang Dipl Chem Dr Hirsch; Helmut Dipl Chem Dr Kohl
Original assignee: Riedel de Haen AG
Current assignee: Honeywell Riedel de Haen AG
Priority date: 1975-07-15
Filing date: 1975-07-15
Publication date: 1977-01-20

Abstract

The salts of formulae (I) and (II) are of formula In the formula X is a stabilising anion; R1-R7 are H, halogen, lower alkyl, lower alkoxy, COOH or SO3H; with the proviso that (i) R1 and R5 are not both alkyl; (ii) one of R1 and R5 and one of R6 and R7 are substd. by a 2-sulphatoethyl-sulphonyl gp., (iii) the ortho posn. 1 or 2 to the diazonium gp. in (II) is unsubstd and (iv) the naphthalene system in (II) is opt. further substd Cpds. (I) and (II) can be used e.g. for the detection of urobilinogen, bilirubin or indoxyl sulphate in serum or urine samples. When used in combination with a porous carrier (e.g. in the form of test papers), the cpds. do not tend to "bleed out" since they react with the carrier via. the 2-sulphatoethylsulphonyl gp. A typical cpd. (I) is 2,6-dichloro-4-(2-sulphatoethylsulphonyl)benzene-diazonium tetrafluoroborate.

Description

Indikatorsubstanz zum Nachweis von kuppelnden Flüssigkeits-Inhaltsstoffen, diese enthaltende dianostische Mittel und Verfahren zu deren Herstellung Die vorliegende Erfindung betrifft Indikatorsubstanzen zum achweis von Kuppelnden Flüsslgkeits-Inhaltsstoffen, diese enthaltende diagnostische Mittel und Verfahren zu deren Herstellung.Indicator substance for the detection of coupling fluid contents, Dianostic agents containing them and processes for their preparation The present The invention relates to indicator substances for the detection of coupling liquid ingredients, diagnostic agents containing them and processes for their preparation.

Unter Flüssigkeits-Inhaltsstoffen, die mit Diazoverbindungen kuppeln, werden insbesondere Urobilinogen, Bilirubin und Indoxylsulfat, aber auch Harnindikan und Sulfonamide verstanden. Als Flüssigkeiten Kommen vorzugsweise Körperflüssigkeiten, insbesondere Serum und Harn in Betracht.Among liquid ingredients that couple with diazo compounds, especially urobilinogen, bilirubin and indoxyl sulfate, but also urinary indican and sulfonamides understood. Body fluids are preferred as fluids, especially serum and urine.

Indikatorsubstanzen zum Nachweis kunplnder Inhaltsstoffe von Flüssigkeiten, insbesondere in Urin2 sind bereits bekannt.Indicator substances for the detection of unknown components of liquids, in particular in Urine2 are already known.

So kann man beispielsweise Urobilinogén, Harnindikan und Sulfonamide mit einer Lösung von p-Dimethylaminobenzaldehyd in Salzsäure nachweisen. Dieser in der Literatur als Ehrlich-Reaktion bekannte Nachweis von Urobilinogen gilt mittlerweile als Standard-Methode zur Diagnose von aber und Gallenerkrankungen.For example, urobilinogén, urinary indikan and sulfonamides can be used with a solution of p-dimethylaminobenzaldehyde in hydrochloric acid. This Evidence of urobilinogen known in the literature as the Ehrlich reaction is now valid as a standard method for diagnosing but and biliary diseases.

Auch der Nachweis von Bilirubin in Serum bzw. Urin wird seit langer Zeit zur Diagnostik der Leber- und Gallenerkrankurgen verwendet. In zaun der alten Form des Nachweises hut die ReaKtion der Diazobenzolsulfonsäure mit Bilirubin zu einem je nach pH-Wert roten bis blauen Azobilirubin ausgenutzt. In neueren Veröffentlichungen werden als Reagenzien aber auch verschieden substituerte Benzoldiazoniursalzc, z.B. diazotierte 2,4- oder 2,5-Dichloraniline verwendet (DT-PS 2 110 658), die entweder einen höheren molaren Extinktionskoeffizienten oder eine größere Farbstabilität als Diazobenzolsulfonsäure aufweisen.The detection of bilirubin in serum or urine has also been used for a long time Time used to diagnose liver and biliary surgeons. In fence The old form of evidence is the reaction of diazobenzenesulfonic acid with bilirubin used to produce a red to blue azobilirubin, depending on the pH value. In more recent publications However, variously substituted benzene diazoniur salts are also used as reagents, e.g. diazotized 2,4- or 2,5-dichloroanilines used (DT-PS 2 110 658), which either a higher molar extinction coefficient or greater color stability as diazobenzenesulfonic acid.

Als diagnostische Mittel haben Schnelltests eine immer größere Bedeutung in der medizinischen Diagnostik gewonnen. Es ist ein Test beschrieben worden (DT-PS 1 102 444), bei dem eine Tablette, die die für die Reaktion nötigen Reagenzien enthält, auf einer Spezialunterlage mit der zu untersuchenden Flüssigkeit versetzt wird. Das Vorliegen von Bilirubin wird dann durch Erscheinen eines blauen Fleckes oder Ringes angezeigt.Rapid tests are becoming more and more important as a diagnostic tool gained in medical diagnostics. A test has been described (DT-PS 1 102 444), in which a tablet containing the reagents required for the reaction The liquid to be examined is mixed on a special pad. The presence of bilirubin is then indicated by the appearance of a bruise or Ring displayed.

Vor einiger Zeit sind auch Testpapiere beschrieben worden (DT-AS 2 007 013, DT-OS 2 240 471, DT-OS 2 364 844, DT-OS 2 240 357}, die es gestatten, durch Eintauchen des Papiers in die Untersuchungsflüssigkeit und anschließenden Vergleich des Farbumschlages mit einer Farbskala den Gehalt an Bilirubin in Serum oder Urin qualitativ abzulesen.Some time ago test papers were also written (DT-AS 2 007 013, DT-OS 2 240 471, DT-OS 2 364 844, DT-OS 2 240 357}, which allow through Immersing the paper in the test liquid and then comparing it of the color change with a color scale the content of bilirubin in serum or urine read qualitatively.

Auch zum Nachweis von Urobilinogen sind Testpapiere entwickelt worden, die entweder auf der recht unspezifischen Ehrlichprobe beruhen oder die, wie kErzlichbeschrieben (DT-PS 2 130 559, DT-OS 2 229 611), die im allgemeinen spezifische Reaktion des Urobilinogens mit bestimmten Diazoniumsalzen ausnutzen.Test papers have also been developed for the detection of urobilinogen, which are either based on the rather unspecific honesty test or those, as recently described (DT-PS 2 130 559, DT-OS 2 229 611), the generally specific reaction of the Take advantage of urobilinogens with certain diazonium salts.

Diese Testpapiere stellen gegenüber danKüvettentests bei Serum-und Urinuntersuchungen eine erhebliche Vereinfachung dar, weil häufig die semiquantitativen Angaben, die man mit den Teststreifen erhält, für eine Diagnose bzw. eine Screening-Untersuchung genügen.These test papers compare the cuvette tests with serum and Urine tests represent a considerable simplification because they are often semi-quantitative Information that you receive with the test strips for a diagnosis or a screening examination suffice.

Erst mit Hilfe der Teststreifen ist die Untersuchung breiter Bevölkerungsschichten möglich geworden, da die Untersuchungen entweder mit Hilfe nicht ausgebildeter Kräfte oder auch von den Untersuchungspersonen selbst durchgeführt werden können.Broad sections of the population can only be examined with the help of test strips has become possible because the examinations are carried out either with the help of untrained personnel or can be carried out by the investigators themselves.

Ful- di ze Art der Untersuchungen weisen aber die herkömmlichen Teststreifen Nachteile auf, die sich unter Umständen schwerwiegend auswirken. Die herkömmlichen Teststreifen sind mit der Indikatorsubstanz nur imprägniert, d.h. getränkt und getrocknet, so daß diese auf dem Teststreifen nicht fest haften. Sie "bluten aus insbesondere bei Anwendung von viel Probelösung oder bei längerer Einwirkung. So zeigen diese Teststreifen bei Anwendung im Urinstrahl unter Umständen zu niedrige Werte. Bei Anwesenheit nur geringer Mengen der nachzuweisenden Stoffe erhält man bei derartiger Anwendung eventuell sogar einen negativen Befund.Conventional test strips, however, have a full type of examinations Disadvantages that can have serious consequences. The conventional Test strips are only impregnated with the indicator substance, i.e. soaked and dried, so that they do not adhere firmly to the test strip. They are "bleeding out" in particular when using a large amount of sample solution or after prolonged exposure. So show this Test strips may have too low values when used in the urine stream. at The presence of only small amounts of the substances to be detected is obtained with such Application may even produce a negative result.

Nun ist es bereits bekannt (DT-PS 1 256 445), Indikatorfarbstoffe für die Bestirmung des pH-Wertes chemisch an die als Trägermaterial verwendete Cellulose zu binden und so ein Ausbluten zu verhindern.Now it is already known (DT-PS 1 256 445), indicator dyes for the determination of the pH value chemically to the cellulose used as carrier material to bind and thus prevent bleeding.

Bisher ist es aber nicht bekannt, Diazoniurnsalze für die Bestimmung von kuppelnden Inhaltsstoffen in Flüssigkeiten an einen Träger zu binden. Dem stand die Erfahrung entgegen, daß Diazoniumverbindungen nicht sehr stabil sind. Deswegen stand zu vermuten, daß sie bei einer Bindungsreaktion zerstört würden.So far, however, it is not known to use diazonium salts for the determination of coupling ingredients in liquids to bind to a carrier. That stood contrary to the experience that diazonium compounds are not very stable. Because of this suggested that they would be destroyed in a binding reaction.

Weiterhin war die Lehre der DT-PS 2 130 559 zu berücksichtigen, wonach die Wirkung der elektronenliefernden Substituenten in einem Diazoniumsalz durch elektronenanziehende Substituenten nur bis zum Hammetttschen Sigmawert von + 0,4 gemindert werden daS, damit die Indikatorsubstanz noch für den Nachweis von Urobilinogen brauchbar ist. Von daher war zu erwarten, daß Substituenten, mit denen eine Bindung an einem Träger bewirkt werden könnte, die Elektrophilie des Diazoniumsalzes derartig verändern, daß diese als Indikatorsubstanzen für kuppelnde FlüssigkeibrInhaltsstoffe nicht in Betracht kommen.Furthermore, the teaching of DT-PS 2 130 559 had to be taken into account, according to which the effect of the electron donating substituents in a diazonium salt through electron-attracting substituents only up to Hammettt's sigma value of + 0.4 This is reduced, so that the indicator substance is still used for the detection of urobilinogen is useful. It was therefore to be expected that substituents with which a bond on a support, the electrophilicity of the diazonium salt could be such change that these are used as indicator substances for coupling liquid ingredients out of the question.

Der Erfindung lag mithin die Aufgabe zugrunde, Indikatorsubstanzen zur Verfügung zu stellen, mit denen diagnostische mittel zum Nachweis von kuppelnden Inhaltsstoffen hergestellt werden können, welche nicht ausbluten und für die Durchführung von Schnelltests hinreichend empSindlich, genau und reaktionsschnell sind.The invention was therefore based on the object of providing indicator substances to make available with which diagnostic means for the detection of coupling Ingredients can be produced which do not bleed out and for the implementation are sufficiently sensitive, accurate and responsive to rapid tests.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß DiP.zoniunsalze der allgemeinen Formeln I bzw. II verwendet werden; also worin Xein stabilisierendes Anion bedeutet und R1 bis R5 Wasserstoff, Halogen, niedere Alkyl- bzw. niedere Alkoxygruppen, Carboxyl-oder Sulfoxylgruppen sein können, wobei R1 und R5 nicht gleichzeitig Alkyl sein dürfen und einer der Reste R1 bis R5 durch eine ß-Sulfatoäthylsulfonl-Gruppe substituiert ist; oder worin Xein stabilisierendes Anion bedeutet und das Naphthalinsystem einfach oder mehrfach substituiert sein kann, wobei die Orthostellungen 1 bzw. 2 zur Diazoniumgruppe nicht substituiert sein solltenund einer der Reste R1 bzw. R durch eine ß-Sulfato-1 2 Sthylsulfonyl-Gruppe substituiert ist.According to the invention, this object is achieved in that DiP.zoniunsalze of the general formulas I and II are used; so where X is a stabilizing anion and R1 to R5 can be hydrogen, halogen, lower alkyl or lower alkoxy groups, carboxyl or sulfoxyl groups, where R1 and R5 must not be alkyl at the same time and one of the radicals R1 to R5 is replaced by a ß-sulfatoethylsulfonyl Group is substituted; or where X is a stabilizing anion and the naphthalene system can be mono- or polysubstituted, the ortho positions 1 or 2 to the diazonium group should not be substituted and one of the radicals R1 or R is substituted by a β-sulfato-1 2 -sthylsulfonyl group.

Diese erfindungsgemäßen Diazoniumsalze können - in Verbindung mit einer festen Säure, mit Netzmitteln, Stabilisatoren und/oder einem optischen Aufheller - zum Nachweis kupplungsfähiger Flüssigkeits-Inhaltsstoffe, insbesondere zum gegebenenfalls gemeinsamen Nachweis von Urobilinogen, Bilirubin bzw. Indoxylsulfat auf einem saugfähigen Träger als diagnostisches Mittel verwendet werden.These diazonium salts according to the invention can - in connection with a solid acid, with wetting agents, stabilizers and / or an optical brightener - for the detection of coupling-capable liquid ingredients, in particular for if necessary joint detection of urobilinogen, bilirubin or indoxyl sulfate on an absorbent Carriers can be used as a diagnostic tool.

Als saugfähige Träger kommen Filterpapiere,aber auch Vliese aus Cellulose bzw. aus Polyamid oder aus Mischungen von beiden in Betracht.Filter papers, but also cellulose nonwovens, are used as absorbent carriers or from polyamide or from mixtures of the two.

Wird der saugfähige Träger mit der erfindungsgemäßen Indikatorsubstanz lediglich imprägniert, d.h. getränkt und getrocknet, so erhält man ein diagnostisches T51teel, in dem die Diazoniwaverbinlung durch die ß-Sulfatoäthylsulfonylgruppe stabilisiert ist. Es blutet allerdings aus.If the absorbent carrier with the indicator substance according to the invention only impregnated, i.e. soaked and dried, see above you get a diagnostic T51teel, in which the Diazoniwaerbinlung through the ß-sulfatoethylsulfonylgruppe is stabilized. It does bleed out, however.

Wird dagegen die erfindungsgemäße Indikatorsubstanz mit dem saugfähigen Träger über die ß-Sulfatoäthylsulfonylgruppe chemisch verbunden, so erhält man diagnostische Mittel, die gegen das Ausbluten geschützt sind. Je nach Wahl der Substituenten des Diazoniumsalzes ergeben sich dabei diagnostische Mittel zum Nachweis von Urobilinogen bzw. Bilirubin bzw. Indoxylsulfat, einzeln oder nebeneinander. Sie reagieren mit diesen Flüssigkeits-Inhaltsstoffen unter Bildung von roten bis blauen Farbstoffen, wobei die Reaktionszeiten zwischen wenigen Sekunden und einigen Minuten betragen können.If, however, the indicator substance according to the invention with the absorbent Carriers chemically linked via the ß-sulfatoethylsulfonyl group, so one obtains diagnostic Means that are protected against bleeding. Depending on the choice of the substituents Diazonium salt results in diagnostic means for the detection of urobilinogen or bilirubin or indoxyl sulfate, individually or next to each other. You react with these liquid ingredients with the formation of red to blue colorings, the reaction times being between a few seconds and a few minutes can.

Besonders gut gegen das Ausbluten geschützte Testpapie erhalt man, wenn man Verbindungen der allgemeinen Formeln I bzw. II, in denen die Diazoniumgruppe durch eine Aminogruppe ersetzt ist, nach in der Textilchemie bekannten Verfahren an das Trägermaterial bindet, anschließend nach in der Diazochemie bekannten Verfahren diazotiert und den so behandelten Trager mit einer Lösung tränkt, die feste Säure, gegebenenfalls einen oder mehrere Stabilisatoren, Netzmittel und/od-r optische Aufheller enthält, und anschließend trocknet.Test paper, which is particularly well protected against bleeding, is obtained if you have compounds of the general formulas I or II, in which the diazonium group is replaced by an amino group, according to methods known in textile chemistry binds to the carrier material, then by methods known in diazochemistry diazotized and soaked the carrier treated in this way with a solution, the solid acid, optionally one or more stabilizers, wetting agents and / or optical brighteners contains, and then dries.

Im folgenden werden die einzelnen Zusätze näher beschrieben.The individual additions are described in more detail below.

1. Die Diazoniumverbindung der Formeln I bzw. II, die in Mengen von 0,02 bis 2 g, vorzugsweise 0,1 bis 0,5 g/ 100 ml der Tränklösung zugesetzt wird, kann nach den üblichen Verfahren der Diazochemie hergestellt werden, oder wird in der Tränklösung bzw. auf dem Träger aus dem entsprechenden aromatischen Amin nach in der Diazochemie bekannten Verfahren erzeugt.1. The diazonium compound of the formulas I and II, which are in amounts of 0.02 to 2 g, preferably 0.1 to 0.5 g / 100 ml of the impregnation solution is added, can be prepared by the usual methods of diazochemistry, or is in the impregnation solution or on the carrier from the corresponding aromatic amine processes known in diazochemistry.

2. Als feste Spuren, die in Mengen von 1 bis 30 g, vorzugsweise 5 bis 15 g / 100 ml der Tränklösung zugesetzt werden, kommen organische aromatische oder aliphatische Carbon- bzw. Sulfonsäuren allein oder in Mischung miteinander in Betracht.2. As solid traces, in amounts of 1 to 30 g, preferably 5 up to 15 g / 100 ml of the impregnation solution are added, organic aromatic or aliphatic carboxylic or sulfonic acids alone or as a mixture with one another into consideration.

3. Stabilisatoren, wie Naph .aAir. '1,5)disulfonsäure-Dinatriumsalz bzw. Natriumlaurylsulfat können in Mengen von 1 bis 10 g, vorzugsweise 1 bis 7 g/ 100 ml Tränklösung zugesetzt werden.3. Stabilizers, such as Naph .aAir. '1,5) disulfonic acid disodium salt or sodium lauryl sulfate can be used in amounts of 1 to 10 g, preferably 1 to 7 g / 100 ml of impregnation solution are added.

4. Netzmittel, wie Dodecylbenzolsulfonsäure oder Natriumlaurylsulfat, können in Mengen von 0,1 bis 5 g, vorzugsweise 0,5 bis 1 g / 100 ml in der Tränklösung verwendet werden.4. Wetting agents, such as dodecylbenzenesulfonic acid or sodium lauryl sulfate, can in amounts of 0.1 to 5 g, preferably 0.5 to 1 g / 100 ml in the soaking solution be used.

5. Optische Aufheller, wie z.B. Stilben-Derivate, die eine Verbesserung der Ablesbarkeit ergeben, können in Mengen von 0,01 bis 5 g, vorzugsweise 0,1 bis 2 g/ 100 ml der Tränklösung zugegeben werden.5. Optical brighteners, such as stilbene derivatives, which are an improvement the readability can be used in amounts of 0.01 to 5 g, preferably 0.1 to 2 g / 100 ml of the impregnation solution are added.

6. Als Lösungsmittel kommt Wasser in Verbindung mit einem wassermischbaren organischen Lösungsmittel, vorzugsweise einem niederen Alkohol, z.B: Methanol, in Betracht, wobei das Verhältnis Wasser zu Lösungsmittel nicht kritisch ist, sondern lediglich von der Löslichkeit der Komponenten bestimmt wird.6. Water is used as a solvent in combination with a water-miscible solvent organic solvent, preferably a lower alcohol, e.g. methanol, in Consider, where the ratio of water to solvent is not critical, but rather is only determined by the solubility of the components.

7. Als saugfähige Träger können Filterpapiere, aber auch Vliese aus Polyamid bzw. Polyester oder anderen säurebeständigen Kunststoffen in,Frage kommen. Das Material des saugfähigen Trägers ist aber nicht kritisch. Auch andere Materialien, die in der Lage sind,die Tränklösung aufzunehmen und mit der Indikatorsubstanz eine chemische Bindung einzugehen,können verwendet werden.7. Filter papers, but also fleeces, can be used as absorbent carriers Polyamide or polyester or other acid-resistant plastics come into question. However, the material of the absorbent carrier is not critical. Also other materials, which are able to absorb the impregnation solution and one with the indicator substance chemical bonding can be used.

Die einzelen Bestandteile der Rezeptur können selbstverständlich auch nacheinander auf den Träger aufgebracht werden, wenn die Löslichkeit oder besondere Umstände es erfordern sollten. The individual components of the recipe can of course can also be applied sequentially to the support if the solubility or particular Circumstances should require it.

Grundsätzlich können die erfindungsgemäßen Indikatorsubstanzen auch für einen Nachweis in Lösung eingesetzt werden. Man stellt sich dann eine Reaktionslösung aus den beschriebenen Zusatzstoffen her (wobei hierfür der optische Aufheller entfallen kann) und tropft diese in die Untersuchungslösung ein. Es ist aber auch möglich, die Untersuchungslösung in die Reaktionslösung einzutropfen. Die Ablesung wird entweder im Vergleich mit einer Farbtafel oder mit einem Spektralphotometer durchgeführt. Falls erforderlich, kann der Farbstoff für die photometrische Auswertung mit einem Gemisch von Methanol und Chloroform ausgeschüttelt werden.In principle, the indicator substances according to the invention can also can be used for detection in solution. A reaction solution is then prepared from the additives described here (whereby the optical brightener is not required for this can) and drips it into the test solution. But it is also possible to drop the test solution into the reaction solution. The reading will be either compared with a color chart or with a spectrophotometer. If necessary, the dye can be used for photometric evaluation with a Mixture of methanol and chloroform to be extracted.

Es ist auch möglich, die erfindungsgemäßen Indikatorsubstanzen zum Imprägnieren eines saugfähigen Trägers zu verwenden. Man stellt sich dann eine Tränklösung aus den beschriebenen Zusatzstoffen her, tränkt damit den saugfähigen Träger und trocknet diesen anschliessend in bewegter Luft bei Temperaturen zwischen 0 und 800C In der bevorzugten Ausführungsform werden die erfindungsgemäßen Indikatorsubstanzen chemisch an das Trägermaterial gebunden zur Herstellung von Teststreifen verwendet. Zu diesem Zweck werden die erfindungsgenäßen Verbindungen, bei denen die Diazoniumgruppe durch eine Aminogruppe ersetzt ist, an das Trägermaterial gebunden, anschließend diazotiert und der so vorbereitete Trägmit einer festen Säure und gegebenenfalls mit Zusatzstoffen, wie Stabilisatoren, Netzmittel und Aufheller, imprägniert.It is also possible to use the indicator substances according to the invention Use impregnation of an absorbent carrier. A soaking solution is then created from the additives described, soaks the absorbent carrier and then dries it in moving air at temperatures between 0 and 800C In the preferred embodiment, the indicator substances according to the invention are used chemically bound to the carrier material used to manufacture test strips. For this purpose, the compounds according to the invention in which the diazonium group is replaced by an amino group, bonded to the carrier material, then diazotized and the carrier prepared in this way with a solid acid and optionally impregnated with additives such as stabilizers, wetting agents and brighteners.

Zur Herstellung wird ein saugfähiger Träger, vorzugsweise Papier mit einer wäßrigen Lösung des erfindungsgemäßen Amins getränkt, in bewegter Luft getrocknet und das Amin nach bekannten Verfahren (siehe elliand Textilberichte 1959, Seite 539 und 1965, Seite 286) an den Träger gebunden. Zur chemischen Fixierung wird der getrocknete Träger in wäßrige-alkalischer Lösung gehalten. Anschließend wird er gründlich ges!>ssert, um die Rest ungebundenen Indikators zu entfernen, und dann nach den in der Diazochemie üblichen Methoden diazotiert. Der so behandelte Träger wird gründlich mit Wasser gewaschen und in einer Lösung der bei der Beschreibung der einzelnen Zusätze genannten Reagenzien 2 bis 5 in einem Gemisch aus einem organischen mit Wasser mischbaren Lösungsmittel und Wasser imprägniert und anschließend getrocknet.An absorbent carrier, preferably paper, is used for production soaked in an aqueous solution of the amine according to the invention, dried in moving air and the amine according to known processes (see elliand Textile Reports 1959, p 539 and 1965, page 286) bound to the carrier. For chemical fixation the dried carrier kept in aqueous-alkaline solution. Then he will thoroughly cleaned to remove the remaining unbound indicator, and then diazotized by the methods customary in diazochemistry. The carrier so treated is washed thoroughly with water and in a solution of the description of the individual additives mentioned reagents 2 to 5 in a mixture of an organic impregnated with water-miscible solvents and water and then dried.

Ein Verfahren zur Bindung der Indikatoren an Polyamid ist in Beispiel 9 beschrieben.One method of attaching the indicators to polyamide is in Example 9 described.

Selbstverständlich können bereits die Papierfasern vor der Herstellung des eigentlichen Papiers mit Aminen, die den erfindangsgemaßen Indikatorsubstanzen entsprchen, behandelt werden.Of course, the paper fibers can already be used before production the actual paper with amines, the indicator substances according to the invention correspond to, be treated.

Diese Amine werden in einer Menge von 0,1 bis 15 g/ 100 ml Lösung in Wasser gelöst und mit Natriumhydrogencarbonat (NaHC0 ) neutral-3 gestellt angewandt. Für di? Fixierung an Papier wird eine Lösung aus 10 bis 30 g, vorzugsweise 15 bis 25 g Natriumchlorid (NaCl)/ 100 ml, 1 bis 5 g, vorzugsweise 1,5 bis 3,5 g Natriumcarbonat (Na2C03)/100 ml und 0,01 bis 0,1 g, vorzugsweise 0>05 bis 0,07 g Natriumhydroxid (Na0H)/ 100 ml in Wasser verwendet.These amines are used in an amount of 0.1 to 15 g / 100 ml of solution dissolved in water and made neutral with sodium hydrogen carbonate (NaHC0) applied. For you? Fixing to paper is a solution of 10 to 30 g, preferably 15 to 25 g sodium chloride (NaCl) / 100 ml, 1 to 5 g, preferably 1.5 to 3.5 g sodium carbonate (Na2CO3) / 100 ml and 0.01 to 0.1 g, preferably 0> 05 to 0.07 g sodium hydroxide (NaOH) / 100 ml in water used.

Die Fixierung wird dann bei 50 bis 950cm vorzugsweise 800C, während 1 bis 10 Minuten, vorzugsweise 5 Minuten, durchgeführt.The fixation is then at 50 to 950cm, preferably 800C, while 1 to 10 minutes, preferably 5 minutes.

Man kann die Fixierung auch in einer Lösung von 2 bis 10 g, vorzugsweise 4 g, NaOH in 100 ml Wasser während 2 bis 18 Stunden, vorzugsweise 4 bis 8 Stunden, bei Raumtemperatur durchführen.You can also fix in a solution of 2 to 10 g, preferably 4 g, NaOH in 100 ml of water for 2 to 18 hours, preferably 4 to 8 hours, perform at room temperature.

Der das Amin enthaltende Trager kann in einer Lösung, die 1 bis 20 g, vorzugsweise 2 bis 5 g, Isoamylnitrit und 1 bis 10 g, vorzugsweise 2 bis 5 g, einer Säure, insbesondere Tetrafluoroborsäure, in 100 ml organischen Lösungsmittels, vorzugsweise Diätyhäther, enthält, während 5 bis 60 Minuten, vorzugsweise 10 bis 20 Minuten, bei Temperaturen um 0 0C diazotiert werden. Die Reaktionstemperatur ist aber nicht kritisch, sondern hängt von der Stabilität des Diazoniumsalzes ab.The carrier containing the amine can be in a solution containing 1 to 20 g, preferably 2 to 5 g, isoamyl nitrite and 1 to 10 g, preferably 2 to 5 g, an acid, especially tetrafluoroboric acid, in 100 ml of organic solvent, preferably diet ether, for 5 to 60 minutes, preferably 10 to 20 minutes, are diazotized at temperatures around 0 0C. The reaction temperature but is not critical, but depends on the stability of the diazonium salt.

Für die Tränkung des das Diazoniumsalz enthaltenden Trägers kommen die bei der Beschreibung der einzelnen Zusätze unter 2 bis 6 genannten Reagenzien in den dort angegebenen Mengen in Frage, die gemeinsam oder, wenn besondere Umstände es erfordern sollten, auch nacheinander auf den Träger aufgebracht werden können.For the impregnation of the carrier containing the diazonium salt come the reagents mentioned in the description of the individual additives under 2 to 6 in the quantities specified there in question, jointly or, if special circumstances it should be able to be applied to the carrier one after the other.

Zur Verwendung der erfindungsgemäßen Indikatiorsubstanzen werden die nach der oben beschriebenen Methode hergestellten diagnostischen Mittel kurz in die zu untersuchende Flüssigkeit eingetaucht. Nach wenigen Sekunden kann man den Farbumschlag gegebenenfalls durch Vergleich mit einer.Farbskala ablesen.To use the indicator substances according to the invention, the diagnostic agents prepared according to the method described above briefly in immersed the liquid to be examined. After a few seconds you can If necessary, read off the color change by comparing it with a color scale.

Die Verwendung der erfindungsgemäßen Indikatorsubstanzen wird in den folgenden Beispielen näher erläutert: Beispiel 1 Filterpapier (Schleicher und Schüll 2316) wird mit einer Lösung A getränkt und nach Trocknung in einer Lösung E 5 Minuten bei 800C gehalten. Danach wird das so behandelte Papier in einer Lösung C 15 Minuten bei OOC diazotiert und anschließend 10 Minuten bei Raumtemperatur mit einer Lösung D behandelt und bei 400C getrocknet.The use of the indicator substances according to the invention is described in explained in more detail in the following examples: Example 1 filter paper (Schleicher and Schüll 2316) is soaked in a solution A and, after drying, in a solution E held at 800C for 5 minutes. Then the paper treated in this way is in a solution C for 15 minutes at OOC and then for 10 minutes at room temperature with treated with a solution D and dried at 40.degree.

Die Lösungen haben folgende Zusammensetzung: Lösung A 2,6-Dichlor-4-(R-sulfatoäthyl)-sulfonylanilin 10 g dest. Wasser ad 100 ml Diese Lösung wird mit NaHC03 neutral gestellt.The solutions have the following composition: Solution A 2,6-dichloro-4- (R-sulfatoethyl) sulfonylaniline 10 g dist. Water ad 100 ml. This solution is made neutral with NaHCO3.

Lösung B Natriumchlorid 20 g Natriumcarbonat 2,5 g Natriumhydroxid 0,07 g dest. Wasser ad 100 ml Lösung C o Isoamylnitrit 10 g Tetrafluoroborsäure 50 % 5g Diäthyläther ad 300 ml Lösung D Sulfosalicylsäure 40 g Dodecylnatriumsulfat 1g dest. Wasser ad 100 ml Ein nach dieser Methode hergestelltes Papier zeigt nach Eintauchen in bilirubinhaltigen Urin eine rote Färbung, die durch die Untersuchungslösung auch nach längerem Schwenken nicht ausgewaschen wird.Solution B sodium chloride 20 g sodium carbonate 2.5 g sodium hydroxide 0.07 g dist. Water to 100 ml of solution C o isoamyl nitrite 10 g of tetrafluoroboric acid 50% 5g diethyl ether to 300 ml solution D sulfosalicylic acid 40 g dodecyl sodium sulfate 1g dist. Water ad 100 ml. A paper produced according to this method shows Immersion in urine containing bilirubin gives a red colouration caused by the test solution is not washed out even after long swirling.

Beispiel 2 Filterpapier S und S 2316 wird wie im Beispiel 1 beschrieben mit den Lösungen A, B, C behandelt und anschließend mit folgender Lösung D imprägniert und getrocknet: Metaphosphorsäure 10 g Zitronensäure 3g Dodecylbenzolsulfonsäure 0,5 g Blankophor PSL +) 0,5 g +) Blankophor PSL ist ein optischer Aufheller der Firma Bayer AG und stellt ein Derivat der 4,4'-Diaminostilben-2,2'-disulfosäure dar.Example 2 Filter paper S and S 2316 is described as in Example 1 treated with solutions A, B, C and then impregnated with the following solution D. and dried: metaphosphoric acid 10 g citric acid 3 g dodecylbenzenesulfonic acid 0.5 g Blankophor PSL +) 0.5 g +) Blankophor PSL is an optical brightener of the Bayer AG and produces a derivative of 4,4'-diaminostilbene-2,2'-disulfonic acid represent.

Ein so hergestelltes Papier zeigt bereits eine Konzentration von 0,5 mg Bilirubin / 100 ml Wasser an und blutet nicht aus.A paper produced in this way already shows a concentration of 0.5 mg bilirubin / 100 ml water and does not bleed.

Beispiel 3 Filterpapier S und S 2316 wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und anschließend in bewegter Luft bei 40°C getroc-cnet: 2,6-Dichlor-4-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonylbenzoldiazoniumtetrafluoroborat 0,1 g Metaphosphorsäure 10 g Zitronensäure 3 g Dodecylbenzolsulfonsäure 0,5 g optischer Aufheller 0,1 g Methanol 10 ml Naphthalin-(1>5)-disulfonsäure-Dinatriumsalz' 2 g dest. Wasser ad 100 ml Ein so hergestelltes Testpapier reagiert mit biliburinhaltigen Lösungen wie die nach Beispielen 1 und 2 hergestellten Testpapiere, blutet aber aus.Example 3 Filter paper S and S 2316 is made with a solution of the following Composition impregnated and then getroc-cnet in moving air at 40 ° C: 2,6-dichloro-4- (ß-sulfatoethyl) -sulfonylbenzenediazonium tetrafluoroborate 0.1 g metaphosphoric acid 10 g citric acid 3 g dodecylbenzenesulfonic acid 0.5 g optical brightener 0.1 g Methanol 10 ml naphthalene (1> 5) disulfonic acid disodium salt '2 g dist. water ad 100 ml A test paper produced in this way reacts with biliburin-containing solutions like the test papers produced according to Examples 1 and 2, but bleeds out.

jBeispiel 11 Beispiel 4 Filterpapier S und S 2316 wird wie in Beispiel 1 beschrieben nacheinander mit folgenden 4 Lösungen behandelt: Lösung A 2,4-Dimethoxy-5-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonylanilin 10 g dest. Wasser ad 100 ml Diese Lösung wird mit NaHC03 neutral gestellt.jExample 11 Example 4 Filter paper S and S 2316 is as in Example 1 described in succession with the following 4 solutions: Solution A 2,4-dimethoxy-5- (ß-sulfatoethyl) sulfonylaniline 10 g dist. Water ad 100 ml. This solution is made neutral with NaHCO3.

Lösungen B, C, D wie Beispiel 1.Solutions B, C, D as in Example 1.

Ein so hergestelltes Testpapier nimmt beim Eintauchen in normalen Urin eine leicht rötliche Färbung an.A test paper produced in this way decreases when immersed in normal Urine turns slightly reddish in color.

Stark urobilinogenhaltiger Urin wird durch eine starke Rot färbung angezeigt.Urine containing a lot of urobilinogen is colored strongly red displayed.

Beispiel 5 Papier S und S 2316 wird wie im Beispiel 1 beschrieben mit folgenden Lösunge behandelt: Lösung A aus Beispiel 4 Lösung B aus Beispiel 1 Lösung C aus Beispiel 1 Lösung D aus Beispiel 2 Ein so hergestelltes Papier liefert ähnliche Ergebnisse wie ein nach Beispiel 4 hergestelltes Papier.Example 5 Paper S and S 2316 is described as in Example 1 treated with the following solutions: Solution A from Example 4 Solution B from Example 1 Solution C from Example 1 Solution D from Example 2 A paper produced in this way provides results similar to those of a paper produced according to Example 4.

Beispiel 6 Papier S und S 2316 wird mit folgender Lösung A behandelt: 2-MethOxy-5-methyl-4-(ß-sulfatoRthyl)-sulfonylanilin 5 ml dest. Wasser ad 100 ml Die Lösung wird mit NaHC03 neutral gestellt.Example 6 Paper S and S 2316 is treated with the following solution A: 2-Methoxy-5-methyl-4- (ß-sulfatoRthyl) -sulfonylaniline 5 ml dist. Water to 100 ml the Solution is rendered neutral with NaHCO3.

Das so behandelte Papier wird anschließend wie im Beispiel 1 beschrieben mit den dort angegebenen Lösungen B, C, D behandelt und getrocknet. The paper treated in this way is then described as in Example 1 treated with the solutions B, C, D given there and dried.

Dieses Testpapier gibt mit Indoxylsulfat eine Rotfärbung. Auch Urobilinogen in größeren Mengen wird durch Rotfärbung angezeigt. This test paper turns red with indoxyl sulfate. Also urobilinogen in larger quantities is indicated by a red color.

Das Testpapier blutet auch bei längerem Verbleib in der Probelösung nicht aus. The test paper will bleed even if it remains in the sample solution for a long time not from.

Beispiel 7 a - h Filterpapier S und S 2316 wird jeweils mit einer Lösung A folgender Zusammensetzung getränkt: Aromatisches Amin a - h (Tabelle I) 5'g dest. Wasser ad 100 ml Die Lösungen werden jeweils mit NaHC03 neutral gestellt. Example 7 a - h filter paper S and S 2316 is each with a Solution A impregnated with the following composition: Aromatic amine a - h (Table I) 5'g least. Water to 100 ml. The solutions are made neutral with NaHCO3.

Die so behandelten Papiere werden wie im Beispiel 1 beschrieben mit den dort angegebenen Lösungen B, C, D behandelt. Diese Testpapiere geben mit bilirubin- bzw. urobilinogenhaltigen Lösungen - die in Tabelle I angegebenen Färbungen, wobei die Nachweisempfindlichkeit zwischen 0,5 und 3 mg / 100 ml Probelösung schwankt. The papers treated in this way are as described in Example 1 with the solutions B, C, D given there. These test papers give with bilirubin- or urobilinogen-containing solutions - the colorations given in Table I, where the detection sensitivity fluctuates between 0.5 and 3 mg / 100 ml sample solution.

Die verschiedenen Papier bluten nicht aus. The different papers do not bleed.

Tabelle 1 Amin Reaktionsfarbe mit Bilirubin Urobilinogen a. 3-(ß-Sulfatoäthyl)-sulfonylanilin blau -b. 4-(ß-Sulfatoäthyl)-sulfonylanilin blau -c. 2-Methoxy-5-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonylanilin blau rot d. 4-Methoxy--(ß-sulfatoäthyl) sulfonylanilin - rötlich e. 6-Methoxy-2-methyl-3-(ß-sulfatäthyl)-sulfonylanilin - rötlich f. 2,4-Dichlor-6-(ß-sulfatoäthyl)- blausulfonylanilin violett -g. 2-Amino-6-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonylnaphthalin - rot h. 2-Amino-7-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonylnaphthalin - rot Beispiel 8 Folgende Lösung kann zum Nachweis von Bilirubin verwendet werden: 2,6-Dichlor-I4-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonyl- 2 g benzoldiazoniumtetrafluoroborat Sulfosalicylsäure 10 g Methanol 15 ml Wasser ad 100 ml Dodecylbenzolsulfonsäure 1 g Tropft man diese Lösung zu einer bilirubinhaltigen Untersuchungslösung, so erhält man rote Lösung die mit einer Farbtafel verglichen werden können. Man kann auch den Farbstoff mit Chloroform ausschütteln und photometrieren. Table 1 Amine reaction color with bilirubin urobilinogen a. 3- (ß-sulfatoethyl) sulfonylaniline blue -b. 4- (ß-sulfatoethyl) -sulfonylaniline blue -c. 2-methoxy-5- (ß-sulfatoethyl) sulfonylaniline blue red d. 4-methoxy - (ß-sulfatoethyl) sulfonylaniline - reddish e. 6-methoxy-2-methyl-3- (β-sulfatethyl) sulfonylaniline - reddish f. 2,4-dichloro-6- (ß-sulfatoethyl) - blue sulfonylaniline violet -g. 2-Amino-6- (ß-sulfatoethyl) sulfonylnaphthalene - red h. 2-Amino-7- (ß-sulfatoethyl) -sulfonylnaphthalene - red Example 8 The following Solution can be used to detect bilirubin: 2,6-dichloro-I4- (ß-sulfatoethyl) -sulfonyl- 2 g benzene diazonium tetrafluoroborate sulfosalicylic acid 10 g methanol 15 ml water ad 100 ml dodecylbenzenesulfonic acid 1 g this solution is added dropwise to a bilirubin-containing one Examination solution, this gives a red solution that is compared with a color chart can be. The dye can also be shaken out with chloroform and photometry.

Beispiel 9 Folgende Lösung A wird 10 Min. bei 4OOC gehalten, anschließend mit Essigsäure auf pH 5 angesäuert und gegebenenfalls filtriert: 2,6-Dichlor-4-(ß-sulfatoäthyl)-sulfonylanilin 15 g Trinatriumphosphat 7,5 g Wasser ad 100 ml In dieser Lösung wird ein Polyamidvlies der Firma Freudenberg T 978W 1 Stunde bei 1000 gehalten.Example 9 The following solution A is kept at 40OC for 10 min, then acidified to pH 5 with acetic acid and, if necessary, filtered: 2,6-dichloro-4- (ß-sulfatoethyl) sulfonylaniline 15 g trisodium phosphate 7.5 g water to 100 ml A polyamide fleece is made in this solution from Freudenberg T 978W held at 1000 for 1 hour.

Anschließend wird das Vlies gut ausgewaschen und nacheinander mit den Lösungen B, C, D aus Beispiel 2 behandelt. Das resultierende Reagenzpapier reagiert mit Bilirubin wie das im Beispiel 2 erhaltene Testpapier.Then the fleece is washed out well and successively with it the solutions B, C, D from Example 2 treated. The resulting reagent paper reacts with bilirubin like the test paper obtained in Example 2.

Claims

Patent claims

M%. Use of diazonium salts of the general formula I. where X is a stabilizing anion and R1 to R hydrogen, halogen, lower alkyl or lower alkoxy groups, carboxyl or sulfoxyl groups, where R1 or R5 may not be alkyl at the same time and one of the radicals R1 to R5 is replaced by a ß- Sulfatoathylsulfonyl group is substituted, or of the formula II where X is a stabilizing anion and the naphthalene system can be substituted one or more times, the ortho positions 1 or 2 to the diazonium group should not be substituted and one of the radicals R1 or R2 is substituted by a ß-sulfatoethylsulfonyl group for the detection of coupling fluid ingredients.

2. Use of indicator substances according to claim 1} characterized in that that the indicator substance is attached to a carrier via a ß-sulfatoethylsulfonyl group, in particular on cellulose or polyamide or mixtures of cellulose and polyamide is bound.

-3. Process for the preparation of a diagnostic agent for detection of coupling fluid ingredients using from Indicator substances according to claim 2, characterized in that a corresponding Amine is first connected to the carrier and then diazotized in situ.

4. Diagnostic means for the detection of coupling fluid contents containing indicator substances according to claims 1.

5. Diagnostic means for the detection of coupling fluid contents consisting of a carrier to which the indicator substance is chemically bound.