DE2531136A1 - Adapter for samples for testing microgels - with cuvette holder movable transverse to light beam and has screw adjustment device - Google Patents

Adapter for samples for testing microgels - with cuvette holder movable transverse to light beam and has screw adjustment device

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Abstract

The adapter comprises a miniature cuvette (10) with elongated sample space (26) limited by two glass plates (14, 16) and two strip-like components (18, 20) glued between them, whose narrow sides (22, 24) face the sample space. It is held by a holder (12) fitting into the cuvette fastening device, with a device (28) for the cuvette fastening. It has a long slot (30) and a screw attachment (32, 34) for the sample space (26) position adjustment relative to the slot (30). The two strips are typically 36 x 11.5 x 1 mm and the glass plates 24 x 36 mm in size.

Description

Probenadapter zur photometrischen Untersuchung von Mikrogelen. Sample adapter for the photometric analysis of microgels.

Mikrogele aus Polyacrylamid werden in Kapillaren mit z.B. Polyacrylamide microgels are placed in capillaries with e.g.

5,ul oder 10,um Volumen hergestellt und für die Elektrophorese, Disk-Elektrophorese, isoelektrische Fokussierung im Mikromaßstab und damit verwandte Techniken verwendet (siehe z.B.5, ul or 10 to volume prepared and used for electrophoresis, disk electrophoresis, microscale isoelectric focusing and related techniques are used (see e.g.

H.R. Maurer: Disk-Elektrophorese, Verlag W. de Gruyter, Berlin 1968; H.R. Maurer: Disc-Electrophoresis, Verlag W. de Gruyter, Berlin, New York 1971; R.C. Allen, H.R. Maurer: Electrophoresis and Isoelectric Focusing in Polyacrylamide Gel, Verlag W. de Gruyter, Berlin, New York 1974).MR. Maurer: Disk electrophoresis, Verlag W. de Gruyter, Berlin 1968; MR. Maurer: Disc-Electrophoresis, Verlag W. de Gruyter, Berlin, New York 1971; R.C. Allen, H.R. Maurer: Electrophoresis and Isoelectric Focusing in Polyacrylamide Gel, Verlag W. de Gruyter, Berlin, New York 1974).

Für die qualitative Auswertung genügt oft die Feststellung, wie viele Banden vorhanden sind und wo sie liegen. Eine wirklich quantitative Bestimmung der die Banden bildenden Substanzmengen ist normalerweise nicht möglich. Als Gründe hierfür seien die Probleme des stöchiometrischen Färbens, die inhomogene Verteilung der Substanzen im Gel, das Überlappen benachbarter Banden und Lichtbrechungen an der Oberfläche des Gels genannt. For the qualitative evaluation, it is often sufficient to determine how many Gangs are in place and where they are. A really quantitative determination of the the amount of substance that forms bands is normally not possible. As reasons for this the problems of stoichiometric dyeing, the inhomogeneous distribution of the substances in the gel, the overlapping of neighboring bands and light refractions called the surface of the gel.

Für die praktische Arbeit genügen aber in der Regel quantitative Vergleiche. Auch dafür ist eine reproduzierbare Messung der Transmission oder optischen Dichte längs des Gels erforderlich.However, quantitative comparisons are usually sufficient for practical work. A reproducible measurement of the transmission or optical density is also required for this required along the gel.

Es ist bereits ein Photometerzusatz zur Auswertung von 5 mm dicken Gelsäulen bekannt, mit dem bei geeigneter Wahl der Küvette auch Mikrogele photometriert werden können (P. Koch: Disk-Elektrophorese: Ein Photometerzusatz zur Auswertung von Gelsäulen. Zeiss Mitteilungen 4, 397-403, 1968). Nähere Angaben, wie solche Küvetten für Mikrogele beschaffen sein sollen, werden nicht gemacht. There is already a photometer attachment for evaluating 5 mm thick Gel columns known with which, with a suitable selection of the cuvette, also microgels photometry (P. Koch: Disk electrophoresis: A photometer add-on for evaluation of gel columns. Zeiss Mitteilungen 4, 397-403, 1968). Details like such Cuvettes for microgels are not made.

Der vorliegenden Erfindung liegt dementsprechend die Aufgabe zugrunde, einen Adapter zur photometrischen Untersuchung von Mikrogelen in einem Photometer mit verschiebbarer Küvettenhalterung anzugeben, der eine exakte und reproduzierbare photometrische Auswertung von Mikrogelen, insbesondere Mikrogelen unterschiedlicher Durchmesser ermöglicht. The present invention is accordingly based on the object an adapter for the photometric examination of microgels in a photometer with a sliding cuvette holder to specify an exact and reproducible photometric evaluation of microgels, in particular microgels of different types Diameter allows.

Diese Aufgabe wird durch den im Anspruch 1 angegebenen Probenadapter gelöst. This object is achieved by the sample adapter specified in claim 1 solved.

Die Unteransprüche betreffen Weiterbildungen und vorteilhafte Ausgestaltungen des Probenadapters gemäß der Erfindung. The subclaims relate to further developments and advantageous configurations of the sample adapter according to the invention.

Der vorliegende Probenadapter ermöglicht eine einwandfrei reproduzierbare photometrische Auswertung von Mikrogelen. Die in ihm enthaltenen Küvetten sind einfach in der Herstellung und können als Verbrauchsmaterial ausgebildet sein. The present sample adapter enables a perfectly reproducible photometric evaluation of microgels. The cuvettes it contains are simple in production and can be designed as consumables.

Im folgenden wird ein Ausführungsbeispiel der Erfindung unter Bezugnahme auf die Zeichnung näher erläutert, dabei werden auch weitere Merkmale und Vorteile des Erfindungsgegenstandes zur Sprache kommen. In the following, an embodiment of the invention is referred to Explained in more detail on the drawing, with further features and advantages of the subject matter of the invention.

Der in der einzigen Figur der Zeichnung teilweise dargestellte Probenadapter besteht aus einer Mikroküvette 10 und einem Halter 12 für diese, der in eine verschiebbare Küvettenhalterung eines Photometers paßt, mit dem die Mikrogele photometrisch ausgewertet werden sollen. Photometer und Küvette halterung können in bekannter Weise ausgebildet sein (siehe z.B. die obenerwähnte Veröffentlichung von Koch) und werden daher weder erläutert noch dargestellt. The sample adapter partially shown in the single figure of the drawing consists of a micro-cuvette 10 and a holder 12 for this, which is in a sliding Cuvette holder of a photometer fits with which the microgels are evaluated photometrically should be. Photometer and cuvette holder can be designed in a known manner (see e.g. the publication by Koch mentioned above) and will therefore neither explained still shown.

Die Mikroküvette 10 besteht aus zwei mikroskopischen Deckgläsern 14, 16 zwischen die zwei jeweils 1 mm dicke, 11,5 mm breite und 36 mm lange Glasplatten 18, 20 mit Epoxyharz so geklebt sind, daß sie sich mit den einen schmalen Seitenflächen 22 bzw. 24 im Abstand von 1 mm gegenüberliegen. The micro-cuvette 10 consists of two microscopic cover glasses 14, 16 between the two 1 mm thick, 11.5 mm wide and 36 mm long glass plates 18, 20 are glued with epoxy resin so that they are with one of the narrow side surfaces 22 and 24 are opposite each other at a distance of 1 mm.

Die schmalen Seitenflächen 22 und 24 sind feingeschliffen oder optisch poliert. Die beiden Deckgläser 14 und 16 bilden mit den Glasstreifen 18 und 20 also einen Probenraum 26, der einen quadratischen Querschnitt mit 1 mm Kantenlänge hat und 36 mm lang ist.The narrow side surfaces 22 and 24 are finely ground or optically polished. The two cover glasses 14 and 16 thus form with the glass strips 18 and 20 a sample space 26 which has a square cross-section with an edge length of 1 mm and is 36 mm long.

Die Halterung 12 ist im Querschnitt etwa L-förmig und hat einen plattenförmigen senkrechten Teil 12a sowie einen relativ kurzen waagerechten Schenkel 12b. Am Schenkel 12b ist eine geschwungene Blattfeder 28 angeschraubt, die die Mikroküvette 10 gegen die Rückseite des plattenförmigen senkrechten Teiles 12a des Halters 12 drückt. Der plattenförmige Teil 12a hat einen waagerecht verlaufenden Spalt 30 mit parallelen geraden Backen, deren Abstand in bekannter, nichtdargestellter Weise verstellbar sein kann (wie z.B. der Spalt eines Spektrographen). Der waagerechte Schenkel 12b hat zwei Gewindebohrungen, die jeweils eine Justierschraube aufnehmen. In der Zeichnung ist nur die eine Gewindebohrung 32 mit der zugehörigen Justierschraube 33 zu sehen, die andere Gewindebohrung und Justierschraube befinden sich im Abstand hinter der dargestellten Gewindebohrung und Justierschraube. The holder 12 is approximately L-shaped in cross section and has a plate-shaped one vertical part 12a and a relatively short horizontal leg 12b. On the thigh 12b, a curved leaf spring 28 is screwed on, which the micro-cuvette 10 against the back of the plate-shaped vertical part 12a of the holder 12 presses. The plate-shaped part 12a has a horizontally extending gap 30 with parallel straight jaws, the distance between which can be adjusted in a known manner, not shown can be (such as the slit of a spectrograph). The horizontal leg 12b has two threaded holes, each of which accepts an adjusting screw. In the drawing is only one threaded hole 32 with the associated adjusting screw 33, the other threaded hole and adjusting screw are at a distance behind the threaded hole and adjusting screw shown.

Die Justierschrauben dienen zur Einjustierung des Probenraumes 26 bezüglich des Spaltes 30.The adjusting screws are used to adjust the sample space 26 with respect to the gap 30.

Ein Mikrogel ist maximal 30 mm lang. Es quillt in 7,5%iger Essigsäure und hat schließlich einen Durchmesser von 0,5 mm bis 0,6 mm (5/ul-Gel) bzw. 0,8 mm bis 0,9 mm (10/ul-Gel). A microgel is a maximum of 30 mm long. It swells in 7.5% acetic acid and finally has a diameter of 0.5 mm to 0.6 mm (5 / ul gel) and 0.8, respectively mm to 0.9 mm (10 / ul gel).

Bei der Messung muß das Gel genau parallel zur Bewegungsrichtung der Küvettenhalterung liegen und das Lichtbündel des Photometers darf nur die mittlere Zone des Gels beleuchten, auf keinen Fall jedoch seitlich über oder unter das Gel hinausreichen.When measuring, the gel must be exactly parallel to the direction of movement of the Cuvette holder and the light beam of the photometer should only be the middle one Illuminate the area of the gel, but never to the side above or below the gel reach out.

Diese Forderungen werden bei dem vorliegenden Probenadapter dadurch erfüllt, daß die Breite des Spaltes 30 kleiner als der Durchmesser des auszuwertenden Gels gewählt wird (z.B. These requirements are thereby met in the case of the present sample adapter fulfilled that the width of the gap 30 is smaller than the diameter of the to be evaluated Gels is chosen (e.g.

0,3 mm), daß man den Halter 12 so ausbildet, daß der Spalt 30 genau parallel zur Bewegungsrichtung der Probenhalterung des Photometers verläuft, wenn der vorliegende Adapter in diese eingesetzt ist, und daß die durch die eine Seitenfläche 24 gebildete untere Begrenzung des Probenraumes 26 mittels der Justierschrauben 34 in ihrer Lage so einjustiert wird, daß das sich aufgrund der Schwerkraft auf den Boden der Küvette legende Mikrogel 36 parallel zum Spalt 30 verläuft und die richtige Höhenlage bezüglich des Spaltes hat.0.3 mm) that the holder 12 is formed so that the gap 30 is exactly runs parallel to the direction of movement of the sample holder of the photometer, if the present adapter is inserted into this, and that through the one side surface 24 formed lower limit of the sample space 26 by means of the adjusting screws 34 is adjusted in their position so that it is due to gravity The microgel 36 laying the bottom of the cuvette runs parallel to the gap 30 and the has the correct height in relation to the gap.

Der Halter 12 kann z.B. 156 mm lang und 15 mm breit sein, so daß er sich anstelle einer normalen, für Rundgele bestimmten Küvette in das obenerwähnte Photometer einsetzen läßt. Der Spalt 30 kann z.B. 0,3 mm hoch und 30 mm lang sein und 16 mm über der Grundfläche des Halters 12 liegen. Die Küvette wird so einjustiert, daß die Seitenfläche 24, auf der das Gel liegt, bei S/ul-Gelen um 0,1 mm, bei 10/ul-Gelen um 0,25 mm unter dem unteren Rand des Spaltes 30 liegt. The holder 12 can be, for example, 156 mm long and 15 mm wide, so that instead of a normal cuvette intended for round gels in the above-mentioned cuvette Can use photometer. The gap 30 can be, for example, 0.3 mm high and 30 mm long and 16 mm above the base of the holder 12. The cuvette is adjusted so that that the side surface 24 on which the gel lies is 0.1 mm in the case of S / μl gels and by 10 / μl gels 0.25 mm below the lower edge of the gap 30.

Die beschriebenen Mikroküvetten lassen sich dadurch einfach herstellen, daß man auf ein 24 x 36 mm großes mikroskopisches Deckglas zwei 1 mm dicke, 11,5 mm breite und 36 mm lange Glasstreifen aufklebt. Nach dem Aushärten des Klebers wird oben auf die Glasstreifen ein zweites Deckglas aufgeklebt. The described microcuvettes can be easily produced that on a 24 x 36 mm microscopic cover slip two 1 mm thick, 11.5 mm wide and 36 mm long glass strips are glued on. After the glue has hardened a second cover slip is stuck on top of the glass strips.

Wichtig ist, daß der Kleber nicht in den Küvettenraum läuft.It is important that the adhesive does not run into the cuvette space.

Die Küvette läßt sich mit Hilfe einer Mikropipette leicht mit Essigsäure füllen, wenn sie senkrecht gehalten und die untere öffnung mit einer Fingerkuppe verschlossen wird. Die Mikrogele werden wie üblich mit einer weichen Pinzette gefaßt und in die gefüllte Küvette eingeführt.The cuvette can easily be filled with acetic acid using a micropipette fill when held vertically and open the lower opening with a fingertip is closed. As usual, the microgels are grasped with soft tweezers and inserted into the filled cuvette.

Unter Umständen kann bei selbstgeklebten Küvetten die Verdunstung der Essigsäure durch verbliebene Kapillarspalte zwischen den Glasstreifen und den Deckgläsern an den Enden des Probenraumes stören. Diese Stellen werden daher vorzugsweise mit etwas Hartwachs abgedichtet. Die Verdunstung an den Öffnungen der Küvette ist so gering, daß sie im Normalfall die Messung nicht stört. Under certain circumstances, the evaporation of self-adhesive cuvettes the acetic acid through the remaining capillary gaps between the glass strips and the Interfere with cover glasses at the ends of the sample space. These posts are therefore preferred sealed with some hard wax. The evaporation at the openings of the cuvette is so small that it does not normally interfere with the measurement.

Claims (6)

Anspritche Claims ? Probenadapter zur photometrischen Untersuchung von Mikrogelen in einem Photometer mit quer zu einem Meßlichtbündel verschiebbarer Küvettenhalterung, g e k e n n z e i c h n e t d u r c h eine Mikroküvette (10) mit einem länglichen Probenraum (26), der durch zwei Glasplatten (14, 16) sowie zwei zwischen diese geklebte streifenförmige Bauteile (18, 20), die mit jeweils einer schmalen Seitenfläche (22, 24) an den Probenraum angrenzen, begrenzt ist, und mit einem in die Küvettenhalterung passenden Halter (12) für die Mikroküvette (10), welcher eine Vorrichtung (28) zur Befestigung der Mikroküvette, einen länglichen Spalt (30) sowie eine Vorrichtung (32, 34) zum Einstellen der Lage des Probenraumes (26) der Mikroküvette (10) bezüglich des Spaltes (30) aufweist.? Sample adapter for the photometric analysis of microgels in a photometer with a cuvette holder that can be moved transversely to a measuring light beam, a microcuvette (10) with an elongated one Sample space (26) through two glass plates (14, 16) and two glued between them strip-shaped components (18, 20), each with a narrow side surface (22, 24) are adjacent to the sample space, and with one in the cuvette holder Matching holder (12) for the micro-cuvette (10), which has a device (28) for Attachment of the micro-cuvette, an elongated gap (30) and a device (32, 34) for adjusting the position of the sample space (26) of the micro-cuvette (10) with respect to of the gap (30). 2.) Probenadapter nach Anspruch 1, d a d u r c h g e -k e n n z e i c h n e t , daß die streifenförmigen Bauteile (18, 20) aus dünnen, länglichen Glasstreifen mit relativ breiten Vorder- und Rückseiten sowie ihrer Dicke entsprechenden schmalen Seitenflächen (24, 30) bestehen, mit den Vorder- und Rückseiten mit den Glasplatten (14, 16) verklebt sind und sich mit ihren einen Seitenflächen (22, 24) in einem Abstand, der wenigstens annähernd ihrer Dicke entspricht, gegenüberliegen. 2.) sample adapter according to claim 1, d a d u r c h g e -k e n n z e i c h n e t that the strip-shaped components (18, 20) consist of thin, elongated Glass strips with relatively wide front and back sides as well as their thickness corresponding narrow side surfaces (24, 30) exist, with the front and back sides with the Glass plates (14, 16) are glued and one side faces (22, 24) at a distance that corresponds at least approximately to their thickness opposite. 3.) Probenadapter nach Anspruch 2, d a d u r c h g e -k e n n z e i c h n e t , daß die an den Probenraum (26) angrenzenden Seitenflächen (22, 24) zumindest feingeschliffen, vorzugsweise poliert sind. 3.) sample adapter according to claim 2, d a d u r c h g e -k e n n z e i c h n e t that the side surfaces (22, 24) adjoining the sample space (26) are at least finely ground, preferably polished. 4.) Probenadapter nach Anspruch 1, 2 oder 3, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , daß die an den Probenraum angrenzenden Fugen zwischen den streifenförmigen Bauteilen (18, 20) und den sie einschließenden Glasplatten (14, 16) außen mit einer Dichtmasse, wie Hartwachs, abgedichtet sind. 4.) sample adapter according to claim 1, 2 or 3, d a d u r c h g e k It is noted that the joints adjoining the sample space between the strip-shaped components (18, 20) and the glass plates (14, 16) are sealed on the outside with a sealing compound such as hard wax. 5.) Probenadapter nach einem der vorhergehenden Ansprüche, d a d u r c h g e.k e n n z e i c h n e t , daß die streifenförmigen Bauteile (18, 20) jeweils aus etwa 36 x 11,5 x 1 mm großen Glasstreifen und die Glasplatten aus 24 x 36 mm großen mikroskopischen Deckgläsern bestehen, und daß der Abstand der an den Probenraum angrenzenden Seitenflächen (22, 24) etwa 1 mm beträgt.5.) sample adapter according to one of the preceding claims, d a d u r c h g e.k e n n n z e i c h n e t that the strip-shaped components (18, 20) each made of approximately 36 x 11.5 x 1 mm glass strips and the glass plates made of 24 x 36 mm large microscopic cover glasses are made, and that the distance of the to the sample space adjacent side surfaces (22, 24) is about 1 mm. 6.) Probenadapter nach einem der vorhergehenden Ansprüche, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , daß der Halter (12) im Querschnitt etwa L-förmig ist, einen hochstehenden, plattenförmigen Teil (12a) sowie einen kurzen waagerechten Schenkel (12b) hat; daß der plattenförmige Teil (12a) einen länglichen Spalt (30) aufweist; daß am waagerechten Schenkel (12b) eine geschwungene Blattfeder (28) zur Halterung einer Mikroküvette (10) befestigt ist, und daß der waagerechte Schenkel (12b) zwei Gewindelöcher (32) aufweist, die jeweils eine Justierschraube (34) zur Einjustierung der Lage der Mikroküvette (10) bezüglich des Spaltes (30) aufnehmen. Leerseite6.) sample adapter according to one of the preceding claims, d a d u It is noted that the holder (12) is approximately L-shaped in cross section is, an upstanding, plate-shaped part (12a) and a short horizontal one Leg (12b) has; that the plate-shaped part (12a) has an elongated gap (30) having; that on the horizontal leg (12b) a curved leaf spring (28) for Holder of a micro-cuvette (10) is attached, and that the horizontal leg (12b) has two threaded holes (32), each with an adjusting screw (34) for Adjustment of the position of the micro-cuvette (10) with respect to the gap (30). Blank page
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