DE2460469A1

DE2460469A1 - Cyclic peptides inhibiting hormone release - prepd by cyclisation of linear undecapeptides contg a terminal omega- amino acid gp

Info

Publication number: DE2460469A1
Application number: DE19742460469
Authority: DE
Inventors: Rolf Dr Geiger; Karl Dr Geisen; Rainer Dr Obermeier; Rainer Dr Uhmann
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1974-12-20
Filing date: 1974-12-20
Publication date: 1976-07-01

Abstract

(A) Peptides of formula (I) are new: (where W is Trp, Tyr, Phe or pentamethylphenylalanine; X is Lys, Orn or Arg; Y is Asp(NH2), Ala or Gly; n = 1-3). (B) Intermediates of formulae (II) and (III) are new: A-U-X(B)-Y-Phe-Phe-W-X(B)-Thr(V)-Phe-Thr(V)-Ser(V)-R (II) C-U-X(D)-Y-Phe-Phe-W-X(D)-Thr(But)-Phe-Thr(But) Ser(But)-R (III) (where A is H, t-butyloxycarbonyl(Boc), t-amyloxycarbonyl(Amc), isobornyloxycarbonyl (Ibc), 2-(p-biphenylyl)isopropyloxycarbonyl (Bpoc), adamantyloxycarbonyl(Adoc), 4-methoxybenzyloxycarbonyl or alpha, alpha-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl(Ddz); U is a linear 6-8C w-amino acid; B is benzyloxycarbonyl (Z) opt. substd. by Cl, NO2 or p-phenylazo, or B can also be H when X = Arg; V is H or benzyl (Bzl) opt. substd. by MeO or NO2; R is H, an active ester residue, OH or NHNH2; C is H, Z, Ddz or Bpoc; D is Boc or can also be H when X = Arg). Cpds. (I) inhibit the release of hormones, e.g. glucagone and growth hormone, and can thus be used to treat diabetes mellitus and acromegaly; they can be administered parenterally or intranasally.

Description

Neue Peptide mit biologischer Wirkung und Verfahren zu ihrer Herstellung Gegenstand der Erfindung sind Peptide der allgemeinen Formel I CH2-CO-X-Y-Phe-Phe-W-X-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (I) CH2 ( CH2)n CH2 in der W für Tryptophan, Tyrosin, Phenylalanin oder Pentamethylphenylalanin, X für Lysin, Ornithin oder Arginin und Y für Asparagin, Alanin oder Glycin steht und n 1-3 ist.New peptides with biological activity and processes for their production The invention relates to peptides of the general formula I. CH2-CO-XY-Phe-Phe-WX-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (I) CH2 (CH2) n CH2 in which W stands for tryptophan, tyrosine, phenylalanine or pentamethylphenylalanine, X stands for lysine, ornithine or arginine and Y stands for asparagine, alanine or glycine and n is 1-3.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Peptide der allgemeinen Formel I das dadurch gekennzeichnet ist, daß man a) Peptide der allgemeinen Formel II a H-U-X(B)-Y-Phe-Phe-W-X(B)-Thr(V)-Phe-Thr(V)-Ser(V)-R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (II a) in der U eine geraSçettigeX -Aminosäure mit 6-8 C-Atomen bedeutet und W, X, und Y die oben genannte Bedeutung besitzen, B für den ggf. durch Chlor, Nitro oder p-Phenylazo substituierten Benzyloxycarbonylrest oder - falls X Arginin ist - für Wasserstoff steht, V Wasserstoff oder einen ggf. durch Methoxy oder Nitro substituierten Benzylrest und R den Rest eines aktivierten Esters bedeutet oder Peptide der allgemeinen Formel III a H-U-X(D)-Y-Phe-Phe-W-X(D)-Thr(Bu )-Phe-Thr(Bu )-Ser(Bú )-R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (IIIa) in der U, W, X, Y und R die oben genannte Bedeutung besitzen, D für den tert.-Butyloxycarbonylrest oder - falls X Arginin ist für Wasserstoff steht, und But den tert.-Butylrest bedeutet, in einem organischen Lösungsmittel bei einer Peptidkonzentration von etwa 0,001 bis etwa 3%, ggf. in Anwesenheit eines 1-4 fachen molaren Übersclnisses einer tertiären oder quaternären organischen Base bei etwa 0-60°C rührt oder b) Peptide der allgemeinen Formel II a oder III a in denen R für die Hydroxygruppe steht, in einem organischen Lösungsmittel in den genannten Konzentrationen mittels Dicyclohexylcarbodi imid, ggf. in Anwesenheit einer N-Hydroxyverbindung rührt oder c) Peptide der allgemeinen Formel II a oder III a in denen R für die Hydrazidgruppe steht, in einem organischen Lösungsmittel unter spuren Bedingungen mit etwa 1 Äquivalent tert.-Butylnitrit bei tiefer Temperatur in das entsprechende Azid umwandelt, dieses in Gegenvart überschüssiger tertiärer organischer Base auf die genannte Verdünnung bringt, bei Temperaturen von 0-300C rührt und aus dem gemäß a) bis c) erhaltenen Produkten die Schutzgruppen in üblicher Weise abspaltet.The invention also relates to a method for production of the peptides of the general formula I, which is characterized in that a) Peptides of the general formula II a H-U-X (B) -Y-Phe-Phe-W-X (B) -Thr (V) -Phe-Thr (V) -Ser (V) -R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (II a) in the U a straight-chain X -amino acid with 6-8 carbon atoms and W, X, and Y have the meaning given above, B for the benzyloxycarbonyl radical which is optionally substituted by chlorine, nitro or p-phenylazo or - if X is arginine - is hydrogen, V is hydrogen or an optionally benzyl radical substituted by methoxy or nitro and R is the radical of an activated one Esters means or peptides of the general formula III a H-U-X (D) -Y-Phe-Phe-W-X (D) -Thr (Bu ) -Phe-Thr (Bu) -Ser (Bú) -R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (IIIa) in the U, W, X, Y and R have the meaning given above, D for the tert-butyloxycarbonyl radical or - if X is arginine is hydrogen and But is the tert-butyl radical, in an organic solvent at a peptide concentration of about 0.001 up to about 3%, possibly in the presence of a 1-4 times molar excess of a tertiary or quaternary organic base at about 0-60 ° C or b) peptides of the general Formula II a or III a in which R represents the hydroxyl group, in an organic Solvent in the stated concentrations using dicyclohexylcarbodi imide, optionally in the presence of an N-hydroxy compound, or c) peptides of the general Formula II a or III a in which R represents the hydrazide group, in an organic Solvent under trace conditions with about 1 equivalent of tert-butyl nitrite converts it into the corresponding azide at a lower temperature, this in the presence of excess brings tertiary organic base to the above-mentioned dilution, at temperatures Stirring from 0-300C and the protective groups from the products obtained according to a) to c) splits off in the usual way.

Die erfindungsgemäßen Peptide hemmen überraschenderweise die Freisetzung von Glukagon sowie die Ausschüttung anderer Hormone, z.B. des Wachstumshormons. The peptides according to the invention surprisingly inhibit the release of glucagon and the release of other hormones, e.g. growth hormone.

Zur Herstellung des Ausgangsstoffes II a, worin R einen Aktivester bedeutet, geht man beispielsweise so vor, daß man ein Peptid der allgemeinen Formel II A-U-X(B)-YrPhe-Phe-W-X(B)-Thr(V)-Phe-TIir(V)-Ser(V)-R (11) in der A teine protonensolvolytisch leicht spaltbare Schutzgruppe wie beispielsweise den tert.-Butyl-oxycarbonyl-(Boc), tert.-Amyl-oxycarbonyl-(Amc), Isobornyl-oxyearbon-l-(Ibc), 2-(p-Biphenylyl)-isopropyl-oxycarbonyl-(Bpoc), Adamantyl-oxycarbonyl-(Adoc),-4-Methoxybenzyl-oxycarbonyl oder s Z & -Dimethyl-3,5-dimethoxybenzyl-(Ddz)-oxycarbonyl-rest und B, U, V, W, X,Y die oben genannte Bedeutung besitzen und R die Hydroxylgruppe bedeutet, in einen aktiven Ester, wie z.B. den Hydroxy-succinimid-(ONSu), 1-Hydroxybenzotriazol-(OBt), 2.4.5-Trichlorphenyl-(OTcp), 2-oder 4-Nitrophenyl-(ONp), Pentachlor- oder Pentafluorphenylester oder einen anderen aus der Peptidchemie bekannten aktivierten Ester (vgl. Jakubke, Jeschkeit: Aminosäuren, Peptide, Proteine, Akademieverlag, Berlin 1973, 5. 138-145) überführt, und die N-Schutzgruppe A des Restes U durch Behandeln mit einer Säure, wie z.B. Trifluoressigsäure oder 2-6 N HCl in Dioxan, abspaltet (maximal 1 h bei Raumtemperatur). For the preparation of the starting material II a, wherein R is an active ester means, one proceeds, for example, that a peptide of the general formula II A-U-X (B) -YrPhe-Phe-W-X (B) -Thr (V) -Phe-TIir (V) -Ser (V) -R (11) in the A teine proton solvolytic easily cleavable protective group such as the tert-butyloxycarbonyl (Boc), tert-amyl-oxycarbonyl- (Amc), isobornyl-oxyearbon-l- (Ibc), 2- (p-biphenylyl) -isopropyl-oxycarbonyl- (Bpoc), Adamantyl-oxycarbonyl- (Adoc), -4-methoxybenzyl-oxycarbonyl or s Z & -Dimethyl-3,5-dimethoxybenzyl- (Ddz) -oxycarbonyl radical and B, U, V, W, X, Y are as defined above and R is the hydroxyl group means, in an active ester, such as the hydroxysuccinimide (ONSu), 1-hydroxybenzotriazole (OBt), 2.4.5-Trichlorophenyl (OTcp), 2- or 4-nitrophenyl (ONp), pentachloro or pentafluorophenyl ester or another activated ester known from peptide chemistry (see Jakubke, Jeschkeit: Amino acids, peptides, proteins, Akademieverlag, Berlin 1973, pp. 138-145) transferred, and the N-protecting group A of the radical U by treatment with an acid, such as trifluoroacetic acid or 2-6 N HCl in dioxane, split off (maximum 1 h at Room temperature).

Zur erfindungsgemäßen Cyclisierung wird dann das so erhaltene Produkt in einem Lösungsmittel, wie z.B. Dioxan, Tetrahydrofuran, Acetonitril, Pyridin, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, N-Methylpyrrolidon, Hexamethylphosphor-säuretrisamid, Methylenchlorid oder Chloroform auf etwa 0,001 - 3* Peptidgehalt verdünnt und durch Zusatz von 1 bis etwa 5 Äquivalenten. einer tert. organischen Base wie z.B. N-Äthylmorpholin oder Triäthylamin neutralisiert oder alkalisch stellt. Die Reaktionszeit beträgt in Abhängigkeit vom Aktivierungsgrad des Aktivesters weniger als 1 h bis zu etwa 7 Tagen. Sie hängt selbstverständlich auch von der Reaktionstemperatur ab. Vorzugsweise arbeitet man bei 10-300C Die angegebenen Reaktionszeiten beziehen sich auf eine Temperatur von etwa 20°C. Die notwendige Verdünnung kann auch durch langsames Eintropfen der genannten Peptidderivate und ggf. The product thus obtained is then used for the cyclization according to the invention in a solvent such as dioxane, tetrahydrofuran, acetonitrile, pyridine, Dimethylformamide, dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, hexamethylphosphoric acid trisamide, Dilute methylene chloride or chloroform to about 0.001-3 * peptide content and thoroughly Addition of 1 to about 5 equivalents. a tert. organic base such as N-ethylmorpholine or triethylamine neutralized or made alkaline. The reaction time is less depending on the degree of activation of the active ester than 1 hour to about 7 days. Of course, it also depends on the reaction temperature away. It is preferred to work at 10-300 ° C. The stated reaction times relate to to a temperature of around 20 ° C. The necessary dilution can also be done by slow dropping in of the peptide derivatives mentioned and, if necessary,

der organischen Base in eines der genannten Lösungsmittel her gestellt werden. Unter diesen Reaktionsbedingungen reagiert der aktivierte Ester bevorzugt intramolekular unter Cyclisierung.the organic base made in one of the solvents mentioned ago will. The activated ester reacts preferentially under these reaction conditions intramolecular with cyclization.

Die Beendigung der Cyclisierungsreaktion wird dünnschichtchromatographisch festgestellt.The completion of the cyclization reaction is indicated by thin-layer chromatography established.

Cyclische Peptide der allgemeinen Formel I, in denen die Drittfunktionen noch geschützt sind, können gemäß Verfahrensweise b) aus Verbindungen der Formel II a, worin R die Hydroxylgruppe bedeutet, direkt durch Zugabe von Dicyclohexylcarbodiimid und einer entsprechenden Hydroxyverbindung, wie z.B. Hydroxysuccinimid, 1-Hydroxybenzotriazol, 2,4,5-Trichlorphenol, 2- oder 4-Nitrophenol, Pentachlorphenol oder Pentafluorphenol oder einer anderen in der Peptidchemie üblichen Aktivesterkomponente erhalten werden, wenn man die erwähnte Verdünnung einhält. Dabei wird intermediär ebenfalls die Stufe des Aktivesters durchlaufen.Cyclic peptides of the general formula I, in which the third functions are still protected, according to procedure b) from compounds of the formula II a, where R is the hydroxyl group, directly by adding dicyclohexylcarbodiimide and a corresponding hydroxy compound such as hydroxysuccinimide, 1-hydroxybenzotriazole, 2,4,5-trichlorophenol, 2- or 4-nitrophenol, pentachlorophenol or pentafluorophenol or another active ester component customary in peptide chemistry can be obtained, if one adheres to the mentioned dilution. The stage is also intermediate of the active ester.

Dicyclohexylcarbodiimid kann auch in Abwesenheit der genannten Hydroxyverbindungen die Cyclisierung von Verbindungen der Formel II a, worin R die Hydroxylgruppe bedeutet, herbeiführen, da diese zunächst ebenfalls in aktivierte Ester des Dicyclohexylisoharnstoffes übergehen.Dicyclohexylcarbodiimide can also be used in the absence of the hydroxy compounds mentioned the cyclization of compounds of the formula II a, in which R is the hydroxyl group, bring about, as this also initially in activated esters of dicyclohexylisourea pass over.

Gemäß Verfahrensweise c) werden Peptide der Formel II, worin R Hydrazid bedeutet, durch Hydrazinolyse eines üblichen Peptid esters, wie z.B. eines Methyl-, Äthyl-, Benzyl- oder eines Polyäthylenglykolesters erhalten. Hydrazide der Formel II werden durch Acidolyse wie beschrieben in Verbindungen der Formel II a überführt. Die erfindungsgemäße Cyclisierung erfolgt dann, indem man aus dem Hydrazid der Formel II a in einem organischen Lösungsmittel unter sauren Bedingungen mit etwa 1 Äquivalent tert.-Butylnitrit das entsprechende Azid herstellt.According to procedure c) peptides of the formula II in which R is hydrazide means by hydrazinolysis of a common peptide ester, such as a methyl, Obtain ethyl, benzyl or a polyethylene glycol ester. Hydrazides of the formula II are converted into compounds of the formula II a by acidolysis as described. The cyclization according to the invention then takes place by one from the Hydrazide of the formula II a in an organic solvent under acidic conditions produces the corresponding azide with about 1 equivalent of tert-butyl nitrite.

Man arbeitet zweckmäßig mit äquivalenten Mengen tert.-Butylnitrit, ein geringer Überschuß kann jedoch verwendet werden. Die Reaktionstemperatur liegt bei ca -15 bis -300C, vorzugsweise bei -200C.It is advisable to work with equivalent amounts of tert-butyl nitrite, however, a slight excess can be used. The reaction temperature is at about -15 to -300C, preferably at -200C.

Die Lösung dieses Azids wird in Gegenwart überschüssiger tertiärer organischer Base auf die notwendige Verdünnung gebracht Zur Herstellung des Ausgangsstoffes III a geht man von Peptiden der Formel III aus, worin R entweder Aktivester, Hydroxyl oder Hydrazid bedeuten kann C-U-X(D)-Y-Phe-Phe-W-X(D)-Thr(Bu )-Phe-Thr(Bu )-Ser(Bu )- R (III) und in der C für die Aminoschutzgruppe Benzyloxycarbonyl-(Z) oder æ , di α-Dimethyl-3,5-Dimethoxybenzyloxycarbonyl-(Ddz) oder 2-(Biphenylyl)-isopropyloxycarbonyl-(Bpoc) steht und Bus, D, U, W, X, Y die oben genannte Bedeutung besitzen und entfernt die Aminoschutzgruppe C des Restes U durch katalytische Hydrierung, falls C als eine Benzyloxycarbonylschutzgruppe vorliegt. Handelt es sich dagegen um den G , i-Dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl oder den 2-(p-Biphenylyl)-isopropyloxycarbonyloxyrest, so genügt eine schwache Säure, wie z.B. ziege Essigsäure zur Abspaltung der Schutzgruppe.The solution of this azide becomes tertiary in the presence of excess organic base brought to the necessary dilution for the production of the starting material III a one starts from peptides of the formula III in which R is either active ester or hydroxyl or hydrazide can mean C-U-X (D) -Y-Phe-Phe-W-X (D) -Thr (Bu) -Phe-Thr (Bu) -Ser (Bu ) - R (III) and in the C for the amino protecting group benzyloxycarbonyl- (Z) or æ, di α-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl- (Ddz) or 2- (biphenylyl) -isopropyloxycarbonyl- (Bpoc) stands and Bus, D, U, W, X, Y have the meaning given above and removes the Amino protecting group C of residue U by catalytic hydrogenation, if C as a Benzyloxycarbonyl protecting group is present. If, however, it is the G, i-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyloxycarbonyl or the 2- (p-biphenylyl) -isopropyloxycarbonyloxy radical, a weak acid is sufficient, such as goat acetic acid to split off the protective group.

Dann nimmt man die Cyclisierung der Verbindungen der Formel III wie oben beschrieben vor und spaltet die Schutzgruppen der Drittfunktionen durch Behandeln mit Tritluoressigsäure oder HOl in Dioxan, Methanol, Essigsäure oder einem ähnlichen organischen Lösungsmittel ab.Then you take the cyclization of the compounds of formula III as described above and splits the protective groups of the third functions by treatment with tritluoroacetic acid or HOl in dioxane, methanol, acetic acid or the like organic solvents.

Die Schutzgruppen A und C des Restes U der Verbindungen der Formel II und III müssen unter Erhalt der Seitenschutzgruppen der übrigen Aminosäurereste abspaltbar sein. Für A kommen daher protonensolvolytisch spaltbare Gruppen, für C solche, die hydrierbar sind bzw. protonensolvolytisch unter sehr milden Bedingungen gespalten werden können, in Frage.The protecting groups A and C of the radical U of the compounds of the formula II and III must preserve the side protecting groups of the remaining amino acid residues be cleavable. For A, therefore, there are proton-solvolytic cleavable groups, for C those that can be hydrogenated or proton solvolytic under very mild conditions can be split into question.

Die N-geschützten Peptide der allgemeinen Formel II und III werden nach den üblichen Verfahren der Peptidchemie entweder stufenweise oder durch Fragmentkondensation hergestellt. Für die Synthese der Zwischenprodukte2 die zu Peptiden der allgemeinen Formel II führen, kommen als N-Schutzgruppe die oben genannten Reste in Frage, bevorzugt der Boc- und der Ddz-Rest. Auch nach der Festkörpertechnik nach Merrifield können die Verbindungen II und III hergestellt werden.The N-protected peptides of the general formula II and III are according to the usual methods of peptide chemistry, either in stages or by fragment condensation manufactured. For the synthesis of the intermediates2 to peptides of the general Formula II lead, the above-mentioned radicals come into consideration as N-protective groups, preferably the Boc and the Ddz residue. You can also use the solid-state technique according to Merrifield the compounds II and III are prepared.

Zur Kondensation dienen die bekannten Verfahren der Peptidchemie, bevorzugt die DCCI-, DCCI/HOBt-, DCCI/HOSu-Methode, die Methode der gemischten oder symmetrischen Anhydride oder die der aktivierten Ester (vgl. Jakubke-Jeschkeit) oder die Azidmethode.The known processes of peptide chemistry are used for condensation, prefers the DCCI, DCCI / HOBt, DCCI / HOSu method, the method of the mixed or symmetrical anhydrides or those of the activated esters (see Jakubke-Jeschkeit) or the azide method.

Bei der Synthese der Zwischenprodukte, die zu Peptiden der allgemeinen Formel III führen, wird nach- der Festkörpertechnik als der der der Bpoc- oder Ddz-Rest verwendet. Beim Anfügen der N-terminalen Aminosäure kann auch der Z-Rest benützt werden, der bei der klassischen Synthese und der Synthese nach der unten erwähnten Liquid-Phase-Methode auch für die Zwischenprodukte eingesetzt werden kann.In the synthesis of intermediates that lead to peptides of general Formula III lead, is based on the solid-state technique as that of the Bpoc or Ddz radical used. When adding the N-terminal amino acid, the Z residue can also be used that of the classical synthesis and the synthesis according to the one mentioned below Liquid phase method can also be used for the intermediate products.

Eine besonders vorteilhafte Ausführungsform ist die als Liquid-Phase-Synthese bekannte Technik nach M. Mutter und E. Bayer, Angew. Chem. 86, 101 (1974) mit Polyäthylenglykol (PEG) oder Polypropylenglykol als hochmolekulare Esterkomponente.A particularly advantageous embodiment is that as liquid phase synthesis known technique according to M. Mutter and E. Bayer, Angew. Chem. 86, 101 (1974) with polyethylene glycol (PEG) or polypropylene glycol as a high molecular weight ester component.

Diese Methode hat den Vorteil, daß nach beendeter Synthese bereits ein Peptid der allgemeinen Formel II vorliegt, da die Bindung zwischen der Carboxylgruppe des Peptids und PEG eine ß-Alkoxyäthylesterbindung ist. Diese PEG-Ester sind während der Synthese einerseits hinreichend stabil, andererseits jedoch aktiv genug, um erfindungsgemäß nach Entfernung der Aminoschutzgruppe A des Restes U in entsprechender Verdünnung und in alkalischem Milieu die intramolekulare Aminolyse zum cyclischen Peptid der allgemeinen Formel I, in der die Drittfunktionen noch geschützt sind, in hoher Ausbeute zu erlauben. Die gleichzeitig von PEG abgelösten Peptide werden am einfachsten durch Gelchromatographie von PEG getrennt und in an sich bekannter Weise von den Schutzgruppen befreit. Geht man von Peptiden der Formel II aus, erfolgt die Abspaltung durch Behandeln mit HBr in Eisessig, HF oder heißer Trifluoressigsäure, vorteilhaft in Anwesenheit eines Kationenfängers wie z.B. Anisol oder Thiophenol oder aber durch katalytische Hydrierung..This method has the advantage that after the synthesis is complete a peptide of the general formula II is present because the bond between the carboxyl group of the peptide and PEG one ß-alkoxyethyl ester bond is. These PEG esters are on the one hand sufficiently stable during the synthesis, but on the other hand are active enough to, according to the invention, after removal of the amino protective group A of the radical U in appropriate dilution and intramolecular aminolysis in an alkaline environment to the cyclic peptide of the general formula I, in which the third functions are still are protected to allow in high yield. The simultaneously replaced by PEG Peptides are most easily separated from PEG by gel chromatography and in an freed from the protective groups in a known manner. Assuming peptides of the formula II, the cleavage takes place by treatment with HBr in glacial acetic acid, HF or hotter Trifluoroacetic acid, advantageously in the presence of a cation scavenger such as anisole or thiophenol or by catalytic hydrogenation ..

Geht man von Peptiden der Formel III aus, so genügt zum Abspalten der Schutzgruppen nach erfolgter Cyclisierungsreaktion Behandlung mit Trifluoressigsäure oder HCl in Dioxan oder Eisessig, vorteilhaft in Gegenwart von Anisol oder Thiophenol, um zu Verbindungen der allgemeinen Formel I zu gelangen. Das oben geschilderte Verfahren stellt nur eine besonders geeignete Variante zur Herstellung der Ausgangsstoffe dar.If one starts out from peptides of the formula III, it is sufficient to split off of the protective groups after the cyclization reaction has taken place, treatment with trifluoroacetic acid or HCl in dioxane or glacial acetic acid, advantageously in the presence of anisole or thiophenol, in order to arrive at compounds of the general formula I. The procedure outlined above represents only a particularly suitable variant for the production of the starting materials represent.

Die erfindungsgemäßen Peptide der allgemeinen Formel I sind Arzneimittel, welche die Ausschüttung von Hormonen wie Wachstumshormon oder Glukagon hemden. Sie eignen sich daher zur Behandlung von Akromegalie und BLabetes mellitus.The peptides of the general formula I according to the invention are medicaments, which inhibit the release of hormones such as growth hormone or glucagon. she are therefore suitable for the treatment of acromegaly and Babetes mellitus.

Sie können parenteral-lnd intranasal gegeben werden.They can be given parenterally and intranasally.

Entsprechende Zubereitungen enthalten in Abhängigkeit von der Applikationsart pro Dosis etwa 0,1 bis 20 mg einer der erfindungsgemäßen Verbindungen Zubereitungen zur parenteralen Verabreichung enthalten daneben einen Puffer, z.B. einen Phosphatpuffer, der das pH zwischen etwa 3,5 und 7 halten soll, ferner Natriumchlorid, Mannit oder Sorbit zur Einstellung der Isotonie. Die Zubereitungen können in gefriergetrockneter oder gelöster Form vorliegen. Lösungen enthalten einen antibakteriell wirkenden Zusatz, z.B. 0,2 -0,3% 4-Hydroxybenzoesäureester.Corresponding preparations contain depending on the type of application per dose about 0.1 to 20 mg of one of the compounds according to the invention for parenteral administration also contain a buffer, e.g. a phosphate buffer, which should keep the pH between about 3.5 and 7, also sodium chloride, mannitol or Sorbitol to adjust isotonicity. The preparations can be freeze-dried or in dissolved form. solutions contain an antibacterial effective additive, e.g. 0.2-0.3% 4-hydroxybenzoic acid ester.

Soll die an sich schon verlängerte Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen noch gesteigert werden, so kann ein Depotzusatz verwendet werden. Als Zusatz eignen sich z.B. 0,1 - 1% Zink++ in Verbindung mit 0,5 - 5% Protamin (z.B. als Sulfat), letztere Zubereitung als Lösung von pH 3,5 bis etwa 6,5 oder als Suspension von etwa pH 7,5 bis 8,0.Should the already prolonged effect of the compounds according to the invention can still be increased, a depot additive can be used. Suitable as an additive e.g. 0.1 - 1% zinc ++ in connection with 0.5 - 5% protamine (e.g. as sulfate), the latter preparation as a solution from pH 3.5 to about 6.5 or as a suspension of about pH 7.5 to 8.0.

Ein intranasal wirkendes Präparat erhält man z.B. dadurch, daß man Peptide der Formel I bzw. ihre Salze mit physiologisch unbedenklichen Säuren in einer wässrigen Pufferlösung von pH 4 bis 7,2 löst und einen Isotonie-erzeugenden Stoff zusetzt. Der wässrigen Lösung wird zweckmäßig ein polymeres Haftmittel und/oder ein Konservierungsmittel zufügt.An intranasally acting preparation is obtained, for example, by Peptides of the formula I or their salts with physiologically harmless acids in an aqueous buffer solution of pH 4 to 7.2 dissolves and produces an isotonicity Fabric clogs. The aqueous solution is expediently a polymeric adhesive and / or adding a preservative.

Als Einzeldosis wendet man 0,1 bis 20 mg Peptid, bevorzugt 0,5 bis 10 mg an. Diese Einzeldosis ist bei wässrigen Lösungen in etwa 0,05 ml, bei Gelees in etwa 0,05 g enthalten.As a single dose, 0.1 to 20 mg of peptide, preferably 0.5 to 10 mg. This single dose is around 0.05 ml for aqueous solutions and around 0.05 ml for jellies contained in about 0.05 g.

Intranasal wirkende Präparate können die erfindungsgemäßen Peptide auch in Form einer öligen Suspension oder einer fetthaltigen Salbe enthalten.Intranasally acting preparations can contain the peptides according to the invention also contained in the form of an oily suspension or a fatty ointment.

Man erhält solche Präparate dadurch, daß man a) ein Peptid der Formel I oder seine Salze in einem Öl, ggf.Such preparations are obtained by a) a peptide of the formula I or its salts in an oil, possibly

unter Zusatz grenzflächenaktiver Stoffe mit einem HLB-Wert (HLB ~ hydrophilic-lipophilic-balance) unter 10 und ggf. unter Zusatz von Aluminiumstearat als Quellmittel suspendiert oder b) Peptide der Formel I oder ihre Salze in einer weichen, streichbaren Fettgrundlage suspendiert und ggf. einen grenzflächenaktiven Stoff mit einem HLB-Wert unter 10 zugibt oder c) aus einer weichen, streichbaren Fettgrundlage, einem grenzflächenaktiven Stoff mit einem HLB-Wert unter 10 und der Lösung von Peptiden der Formel I oder einem ihrer Salze in Wasser eine Emulsions-Salbe herstellt. with the addition of surface-active substances with an HLB value (HLB ~ hydrophilic-lipophilic-balance) below 10 and possibly with the addition of aluminum stearate suspended as swelling agent or b) peptides of the formula I or their salts in a soft, spreadable fat base suspended and optionally a surface-active Adding substance with an HLB value below 10 or c) from a soft, spreadable fat base, a surfactant with an HLB value 10 and the solution of peptides of the formula I or one of their salts in water Manufactures emulsion ointment.

Die Zubereitungen können außerdem ein Konservierungsmittel enthalten.The preparations can also contain a preservative.

Die Einzeldosis an Peptiden der Formel 1 liegt zwischen 0,1 mg und 20 mg, bevorzugt zwischen 0,5 und 5 mg. Diese Einzeldosis ist in 0,05 bis 0,1 g der erfindungsgemäßen Zubereitung enthalten.The single dose of peptides of formula 1 is between 0.1 mg and 20 mg, preferably between 0.5 and 5 mg. This single dose is in 0.05 to 0.1 g contain the preparation according to the invention.

Die folgenden Beispiele erläutern die Herstellung der erfindungsgemäßen Peptide und deren Zubereitungen zur parenteralen oder intranasalen Verabreichung.The following examples illustrate the preparation of the inventive Peptides and their preparations for parenteral or intranasal administration.

Folgende Abkürzungen werden verwendet: Boc - tert.-Butyloxycarbonyl-Bpoc = 2-(p-Biphenylyl)-isopropyloxycarbonyl-Adoc = Adamantyloxycarbonyl Amc = tert. -Amyloxycarbonyl-Ddz = , -Dimethyl-3, 5-dimethoxybenzyloxycarbonyl-Ibc = Isobornyloxycarbonyl-But = tert.-Butyl-Bzl - Benzyl--ONSu = N-Hydroxysuccinimidester -OBt = N-Hydroxbenzotriazolester -ONp = Nitrophenylester -OTcp = Trichlorpilenylester DCCI = Dicyclohexylcarbodiimid PEG (10)= Polyäthylenglykol vom Molgewicht 10 000 DMF = Dimethylformamid THF = Tetrahydrofuran Darüber hinaus werden die für die Aminosäurederivate geltenden Regeln nach JUPAC - JUB, J.Biol. Chem. 247, S.977-983 (1972) angewandt.The following abbreviations are used: Boc - tert-butyloxycarbonyl-Bpoc = 2- (p-biphenylyl) -isopropyloxycarbonyl-Adoc = adamantyloxycarbonyl Amc = tert. -Amyloxycarbonyl-Ddz =, -Dimethyl-3, 5-dimethoxybenzyloxycarbonyl-Ibc = isobornyloxycarbonyl-But = tert-butyl-Bzl - benzyl - ONSu = N-hydroxysuccinimide ester -OBt = N-hydroxbenzotriazol ester -ONp = nitrophenyl ester -OTcp = trichloropilenyl ester DCCI = dicyclohexylcarbodiimide PEG (10) = polyethylene glycol with a molecular weight of 10,000 DMF = dimethylformamide THF = tetrahydrofuran In addition, the rules applicable to amino acid derivatives according to JUPAC - JUB, J.Biol. Chem. 247, pp.977-983 (1972) was used.

Beispiel 1 CH2-CO-Lys-Ásn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 CH2 - ( CH2 )2 CH2 a) Veresterung von Poloäthylenglskol mit Boc-Ser(Bzl)-OH unter Verwendung von DCCI und HOBt ( 1 a ) 20 g PEG (10) (4 mmol Hydroxylgruppen) werden in 60 ml warmem DMF gelöst, mit 3 g (10 mmol) Boc-Ser(Bzl)-OH, 1,35 g (10 mmol) HOBt und 2,2 g (10,7 mmol) DCCI versetzt und 24 h bei 550C gerührt. Nach dem Erkalten wird der ausgefallene Niederschlag abfiltriert, das Lösungsmittel weitgehend abdestilliert und das Produkt durch Zutropfen von etwa 300 ml Äther gefällt, wobei auf OOC abgekühlt wird.example 1 CH2-CO-Lys-Ásn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 CH2 - (CH2) 2 CH2 a) Esterification of poloäthylenglskol with Boc-Ser (Bzl) -OH using DCCI and HOBt (1 a) 20 g of PEG (10) (4 mmol of hydroxyl groups) are dissolved in 60 ml of warm DMF, with 3 g (10 mmol) Boc-Ser (Bzl) -OH, 1.35 g (10 mmol) HOBt and 2.2 g (10.7 mmol) DCCI were added and the mixture was stirred at 550 ° C. for 24 h. After cooling, the deposited precipitate is filtered off, the solvent is largely distilled off and the product is precipitated by adding dropwise about 300 ml of ether, cooling to OOC.

Der Niederschlag wird abfiltriert, in 100 ml warmem Alkohol gelöst und das Produkt durch Zusatz von ca. 100 ml Äther erneut gefällt. Die letzte Fällung wird ggf. wiederholt. The precipitate is filtered off and dissolved in 100 ml of warm alcohol and the product is precipitated again by adding approx. 100 ml of ether. The last felling will be repeated if necessary.

Die Beladung an Aminosäure beträgt nach Aminosäureanalyse 0,14 mmol/g Ausbeute: 19,5 g b) Boc-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-OPEG (10) ( 1 b ) 18,9 g (2.65 mmol) Boc-Ser(Bzl)-OPEG (10) werden in 100 ml 1,2 N HCl/Eisessig bei Raumtemperatur gelöst. Nach 30 min, wird die Lösung am Rotationsverdampfer eingeengt und das Produkt H-Ser(Bzl)-OPEG (io) mit kaltem Äther gefällt. Der Niederschlag wird abfiltriert, mit Äther gründlich gewaschen, in wenig Methylenchlorid gelöst und erneut mit Äther gefällt. Das pulvrige Produkt wird nach Trocknen im Exsicctor in 50 ml DMF gelöst, die Lösung mit 2,0 g (6,5 mmol) Boc-Thr(Bzl)-OH 880 mg (6,5 mmol) HOBt, 1,45 g (7 mmol) DCCI und 0,4 ml (3,2 mmol) N-Äthylmorpholin versetzt. Die Lösung wird 12 h bei Raumtemperatur gerührt, filtriert und zur Trockne eingedampft. Nun wird in ca. 50 ml Elethylenchlorid aufgenommen, das Produkt mit Äther ausgefällt, abfiltriert und der Fällungsvorgang nochmals wiederholt. The amino acid loading is 0.14 mmol / g according to the amino acid analysis Yield: 19.5 g b) Boc-Thr (Bzl) -Ser (Bzl) -OPEG (10) (1b) 18.9 g (2.65 mmol) Boc-Ser (Bzl) -OPEG (10) are dissolved in 100 ml of 1.2 N HCl / glacial acetic acid at room temperature. After 30 min, the solution is concentrated on a rotary evaporator and the product H-Ser (Bzl) -OPEG (io) felled with cold ether. The precipitate is filtered off, thoroughly washed with ether washed, dissolved in a little methylene chloride and precipitated again with ether. The powdery one After drying in a desicctor, the product is dissolved in 50 ml of DMF, the solution with 2.0 g (6.5 mmol) Boc-Thr (Bzl) -OH 880 mg (6.5 mmol) HOBt, 1.45 g (7 mmol) DCCI and 0.4 ml (3.2 mmol) of N-ethylmorpholine are added. The solution is 12 h at room temperature stirred, filtered and evaporated to dryness. Now is in about 50 ml of ethylenechloride recorded, the product is precipitated with ether, filtered off and the precipitation process is repeated again.

Ausbeute: 18,3 g Aminosäureanalyse: Thr 1,0 Ser 0,96 c) Boc-Trp-Lys(Z) -Thr-Phe-Thr(Bzl) -Ser(Bzl)-OPEG (10) ( 1 c ) 18 g (1,5 mmol) 1b werden in 100 ml 1,2 N HCl/Eisessig gelöst und wie unter b) behandelt. Yield: 18.3 g Amino acid analysis: Thr 1.0 Ser 0.96 c) Boc-Trp-Lys (Z) -Thr-Phe-Thr (Bzl) -Ser (Bzl) -OPEG (10) (1 c) 18 g (1.5 mmol) 1b are in 100 ml Dissolved 1.2 N HCl / glacial acetic acid and treated as under b).

Das trockene Produkt wird in 50 ml DMF gelöst, die Lösung mit 4,15 g (5 mmol) Boc-Trp-Lys(Z)-Thr-Phe-OH (hergestellt nach Patentanmeldung P 24 16 048.3 (HOE 74/F 094)), 1,35 g (10 mmol) HOBt, 1,i g (5,35 mmol)'DCCI und 0,4 ml (3,2 mmol) N-Äthylmorpholin versetzt. Die Mischung wird 12 h bei Raumtemperatur gerührt, dann vom ausgefallenen Dicyclohexylharnstoff befreit und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in ca. 100 ml Methanol gelöst und mit 300 ml Äther versetzt, wobei das Produkt nach Abkühlen auf OOC nach 30 min. The dry product is dissolved in 50 ml of DMF, the solution with 4.15 g (5 mmol) Boc-Trp-Lys (Z) -Thr-Phe-OH (prepared according to patent application P 24 16 048.3 (HOE 74 / F 094)), 1.35 g (10 mmol) HOBt, 1.1 g (5.35 mmol) 'DCCI and 0.4 ml (3.2 mmol) N-ethylmorpholine added. The mixture is stirred at room temperature for 12 h, then freed from the precipitated dicyclohexylurea and evaporated to dryness. Of the The residue is dissolved in approx. 100 ml of methanol and treated with 300 ml of ether, whereby the product after cooling to OOC after 30 min.

quantitativ ausfällt. Der Niederschlag wird filtriert und der Fällungsvorgang wiederholt. is quantitative. The precipitate is filtered and the precipitation process repeated.

Ausbeute: 21,7 g d) tert.-Butoxvcarbonyl-W-aminoheptansäure Boc-Ahs-OH ( 1 d ) 24,5 g (194 mmol)o ;Aminoheptansäurelactam werden in 150 ml 20%iger Salzsäure 12 h unter Rückfluß gekocht. Nach dem Erkalten wird mit Natronlauge neutralisiert, mit 150 ml Dioxan und 30 ml Boc-Azid versetzt und unter pH-Stat-Bedingungen bei pH 12 bei Raumtemperatur 12 h lang gerührt. Die alkalische Lösung wird dreimal mit Äther extrahiert, die wässrige Lösung wird mit Salzsäure auf pH 2,5 gebracht und dreimal mit Essigester extrahiert. Der Essigesterextrakt wird über Na2S04 getrocknet und das Lösungsmittel abgedampft, wobei ein öliger Rückstand zurückbleibt, der aus Cyclohexan unter Zusatz von wenig Äther kristallisiert. Yield: 21.7 g of d) tert-butoxycarbonyl-W-aminoheptanoic acid Boc-Ahs-OH (1 d) 24.5 g (194 mmol) o; Aminoheptanoic acid lactam are dissolved in 150 ml of 20% hydrochloric acid Boiled under reflux for 12 h. After cooling, it is neutralized with sodium hydroxide solution, mixed with 150 ml of dioxane and 30 ml of Boc-azide and under pH-stat conditions at pH 12 stirred at room temperature for 12 hours. The alkaline solution is used three times Ether extracted, the aqueous solution is brought to pH 2.5 with hydrochloric acid and extracted three times with ethyl acetate. The ethyl acetate extract is dried over Na2S04 and the solvent evaporated, leaving an oily residue which consists of Cyclohexane crystallized with the addition of a little ether.

Ausbeute: 26 g (550/0 d. Th.) Fp.: 54-550C. Yield: 26 g (550/0 of theory). Mp .: 54-550C.

e) tert.-Butoxycarbonyl- t -aminoheptansäure-trichlorphenvlester, Boc-Ahs-OTcp ( 1 e ) 6,13 g (25 mmol) Boc-Ahs-OH 1G werden in 40 ml THF gelöst, mit 5 g (25mmol) Trichlorphenol und 5,4 g (26 mmol) DCCI versetzt und 15 h bei Raumtemperatur gerührt. Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und das Filtrat zur Trockne eingedampft. Der ölige Rückstand kristallisiert aus Cyclohexan unter Zusatz von Petroläther.e) tert-butoxycarbonyl-t -aminoheptanoic acid trichlorophenyl ester, Boc-Ahs-OTcp (1 e) 6.13 g (25 mmol) of Boc-Ahs-OH 1G are dissolved in 40 ml of THF, 5 g (25 mmol) of trichlorophenol and 5.4 g (26 mmol) of DCCI are added and the mixture is at room temperature for 15 h touched. The precipitated dicyclohexylurea is filtered off and the filtrate evaporated to dryness. The oily residue crystallizes out from cyclohexane Addition of petroleum ether.

Ausbeute: 6,7 g (63% d.Th.) Fp.: 63-650C f) Boc-hhs-Lss(Z)-Asn-Phe-Phe-OH ( 1 f ) 3,44 g (5 mmol) H-Lys(Z)-Asn-Phe-Phe-OH (hergestellt nach Patentanmeldung P 24 16 048.3 (HOE 74/F 094)) werden in 40 ml DMF gelöst. Der Lösung werden 2,3 g (5,2 mmol) Boc-Ahs-OTcp, 675 mg (5 mmol) HOBt und 0,65 ml N-Äthylmorpholin zugefügt. Nach 2 h wird das Lösungsmittel abgezogen und der Rückstand mehrmals mit Äther digeriert. Nun wird in DMF gelöst und mit kalter KHS04 gefällt, gut verrieben, filtriert und mit Wasser gründlich gewaschen. Das so erhaltene Produkt wird über P 205 im Vakuum getrocknet. Yield: 6.7 g (63% of theory) mp: 63-650C f) Boc-hhs-Lss (Z) -Asn-Phe-Phe-OH (1 f) 3.44 g (5 mmol) H-Lys (Z) -Asn-Phe-Phe-OH (manufactured according to patent application P 24 16 048.3 (HOE 74 / F 094)) are dissolved in 40 ml of DMF. The solution will be 2.3 g (5.2 mmol) of Boc-Ahs-OTcp, 675 mg (5 mmol) of HOBt and 0.65 ml of N-ethylmorpholine were added. After 2 h the solvent is drawn off and the residue is digested several times with ether. It is now dissolved in DMF and precipitated with cold KHS04, triturated well, filtered and washed thoroughly with water. The product obtained in this way is vacuumed over P 205 dried.

Ausbeute 4,5 g (98%) Fp.: 193-1 950C g) Boc-Ahs-Lvs(Z)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Ezl)-OPEG (10) ( 1 g ) 20 g (2,8 mmol) 1c werden wie unter c) beschrieben-behandelt, Jedoch unter Zusatz von 1 g Thiophenol. Yield 4.5 g (98%) m.p .: 193-1.950C g) Boc-Ahs-Lvs (Z) -Asn-Phe-Phe-Trp-Lys (Z) -Thr-Phe-Thr (Bzl) -Ser (Ezl) -OPEG (10) (1 g) 20 g (2.8 mmol) 1c are treated as described under c), however with the addition of 1 g of thiophenol.

Die Eagplung mit Boc-Ahs-Lys(Z)-Asn-Phe-Phe-OH wird wie c) durchgeführt. The coupling with Boc-Ahs-Lys (Z) -Asn-Phe-Phe-OH is carried out as in c).

Ausbeute: 32,5 g h) H-Ahs-Lys(Z)-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys(Z)-Thr-Phe-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-OPEG (10) ( 1 h ) 20 g ig werden nach Beschreibung c) unter gleichzeitigem Zusatz won 1 g Thiophenol behandelt. Yield: 32.5 g h) H-Ahs-Lys (Z) -Asn-Phe-Phe-Trp-Lys (Z) -Thr-Phe-Thr (Bzl) -Ser (Bzl) -OPEG (10) (1 h) 20 g ig are according to description c) with the simultaneous addition of won Treated 1 g of thiophenol.

Ausbeute: 19,7 g i) F s-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-ThrSer ( I1n=-2 ) 10 g (0,5 mmol) Peptidhydrochlorid-polyäthylenglykolester werden in 70 ml Pyridin gelöst und unter kräftigem Rühren einer Lösung von 0,2 ml N-Äthylmorpholin in 3 1 absolutem Pyridin innerhalb von 4 Tagen zugetropft. Nach weiteren 3 Tagen wird das Lösungsmittel entfernt und der Rückstand zweimal mit je 30 ml Wasser verrieben. Das wasserunlösliche Material (0,3 g) wird in Chloroform/Methanol über eine LH-20 Sephadex-Säule (4x200 cm) chromatographiert. Die peptidhaltige, ninhydrinnegative, polyäthylenglykolfreie Fraktion wird eingeengt und in Methanol mit Pd/BaS04 katalytisch hydriert. Während der Hydrierung wird der pH-Wert mit HCl/ Methanol bei 4,5 konstant gehalten. Nach Entfernen des Lösungsmittels wird über eine CM-Cellulose-Säule (2x90 cm) mit einem Ammoniumacetat-Gradienten steigender Molarität chromatographiert. Die Hauptfraktion wird gesammelt und gefriergetrocknet.Yield: 19.7 g i) F s-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-ThrSer (I1n = -2) 10 g (0.5 mmol) of peptide hydrochloride polyethylene glycol ester are dissolved in 70 ml of pyridine and, while stirring vigorously, a solution of 0.2 ml of N-ethylmorpholine in 3 l of absolute pyridine is added dropwise over the course of 4 days. After a further 3 days, the solvent is removed and the residue is triturated twice with 30 ml of water each time. The water-insoluble material (0.3 g) is chromatographed in chloroform / methanol over an LH-20 Sephadex column (4x200 cm). The peptide-containing, ninhydrin-negative, polyethylene glycol-free fraction is concentrated and catalytically hydrogenated in methanol with Pd / BaS04. During the hydrogenation, the pH is kept constant at 4.5 with HCl / methanol. After the solvent has been removed, chromatography is carried out on a CM cellulose column (2 × 90 cm) with an ammonium acetate gradient of increasing molarity. The main fraction is collected and freeze-dried.

Ausbeute: 120 mg, Aminosäureanalyse korrekt. Yield: 120 mg, amino acid analysis correct.

Beispiel 2 CH2-CO-Lys-Ala-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 CH2 ( CH2 )2 CH2 -10 g (1,4 mmol) H-Ser(Bzl)-OPEG (10) (Beispiel 1) werden in 30 ml DMF gelöst und mit einer Lösung von 3 mmol Boc-Thr(Bzl)-OBt und 0,26 ml N-Äthylmorpholin versetzt.Example 2 CH2-CO-Lys-Ala-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 CH2 (CH2) 2 CH2 -10 g (1.4 mmol) of H-Ser (Bzl) -OPEG (10) (Example 1) are dissolved in 30 ml of DMF and mixed with a solution of 3 mmol of Boc-Thr (Bzl) -OBt and 0.26 ml N-ethylmorpholine added.

Boc-Thr(Bzl)-OBt wird wie folgt unmittelbar vor der Reaktion zubereitet: 930 mg (3 mmol) Boc-Thr(Bzl)-OH, 405 mg (3 mmol) HOBt und 650 mg (3,15 mmol) DCCI werden bei OOC in 8 ml DMF gelöst, nach 10 min. auf Raumtemperatur gebracht und eine Stunde lang gerührt. Dann wird der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff abfiltriert,und der entstandene OBt-Ester kann für die Reåktion verwendet werden.Boc-Thr (Bzl) -OBt is prepared immediately before the reaction as follows: 930 mg (3 mmol) Boc-Thr (Bzl) -OH, 405 mg (3 mmol) HOBt and 650 mg (3.15 mmol) DCCI are dissolved in 8 ml of DMF at OOC, brought to room temperature after 10 min and stirred for an hour. Then the precipitated dicyclohexylurea is filtered off, and the resulting OBt ester can be used for the reaction can be used.

Die Reaktion ist nach 12 h beendet und das Lösungsmittel wird am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wird in wenig Methylenchlorid aufgenommen, das Produkt mit Äther gefällt, abfiltriert und der Fällungsvorgang nochmals wiederholt. The reaction is over after 12 h and the solvent is on Rotary evaporator removed. The residue is taken up in a little methylene chloride, the product was precipitated with ether, filtered off and the precipitation process repeated again.

Ausbeute: 9,6 g Aminosäureanalyse: Thr 1.0 Ser 0.95 Zur Abspaltung der Boc-Schutzgruppe wird das getrocknete Produkt in 50 ml 1,2 N HCl/Eisessig gelöst, eine halbe Stunde bei Raumtemperatur gerührt, das Lösungsmittel am Rotationsverdampfer eingeengt und das Produkt mit kaltem Äther gefällt. Der Niederschlag wird abfiltriert, mit Äther gründlich gewaschen, in wenig Methylenchlorid gelöst und erneut mit Äther gefällt. Yield: 9.6 g Amino acid analysis: Thr 1.0 Ser 0.95 For cleavage the Boc protective group, the dried product is dissolved in 50 ml of 1.2 N HCl / glacial acetic acid, Stirred for half an hour at room temperature, the solvent on a rotary evaporator concentrated and the product precipitated with cold ether. The precipitate is filtered off, Washed thoroughly with ether, dissolved in a little methylene chloride and again with ether pleases.

Folgende Aminosäurederivate werden nach dem vorangehenden Beispiel in der gegebenen Reihenfolge umgesetzt: Boc-Phe, Boc-Thr(Bzl), Boc-Lys(Pz), Boc-Try, Boc-Phe, Boc-Phe, Boc-Ala, Boc-Lys(Pz) und Boc-Ahs-OTcp. The following amino acid derivatives are made according to the previous example implemented in the given order: Boc-Phe, Boc-Thr (Bzl), Boc-Lys (Pz), Boc-Try, Boc-Phe, Boc-Phe, Boc-Ala, Boc-Lys (Pz) and Boc-Ahs-OTcp.

Boc-Aps-OTcp wird durch Zusatz von HOBt in situ in den entsprechenden OBt-Ester überführt (Chem. Ber. 106 (1973), s. 3626)). Boc-Aps-OTcp is converted into the corresponding in situ by adding HOBt OBt ester transferred (Chem. Ber. 106 (1973), p. 3626)).

Das Produkt der Formel (II) mit n = 2 und Y = Ala erhält man, indem man die Reaktionsschritte gemäß 1 i) anwendet. The product of formula (II) with n = 2 and Y = Ala is obtained by the reaction steps according to 1 i) are used.

Beispiel 3 CH2-CO-Orn-Ala-Phe-Phe-Trp-Orn-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH 1 ~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~ 12 CH2 ( OH2 -CH2 Es wird nach Beispiel 2 verfahren, jedoch wird zur Herstellung des Zwischenproduktes der allgemeinen Formel II in den Positionen 2 und 7 Boc-Orn(Z) eingeführt.Example 3 CH2-CO-Orn-Ala-Phe-Phe-Trp-Orn-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH 1 ~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~~~~~ 12 CH2 (OH2 -CH2 The procedure is as in Example 2, except that Boc-Orn (Z) is introduced in positions 2 and 7 to prepare the intermediate of the general formula II.

Die Aminosäureanalyse des Endproduktes ist korrekt. The amino acid analysis of the final product is correct.

Beispiel 4 CH2-CO-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 CH2 ( CH2 )2 CH2 Es wird nach Beispiel 2 verfahren, jedoch werden in Position 2,3 und 6 die Derivate Boc-Arg.HCl, Boc-Gly und Boc-Tyr(Bzl) eingesetzt.Example 4 CH2-CO-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 CH2 (CH2) 2 CH2 The procedure is as in Example 2, but the derivatives Boc-Arg.HCl, Boc-Gly and Boc-Tyr (Bzl) are used in positions 2, 3 and 6.

Parenteral zu verabreichende Zubereitung-an: Beispiel 5 Man löst 50 mg eines Peptids der Formel I in 50 ml bidest.Preparation to be administered parenterally: Example 5 Dissolve 50 mg of a peptide of the formula I in 50 ml redist.

Wasser und versetzt mit 10 ml 1N Phosphatpuffer pH 4.5 dann gibt man die errechnete Menge XaCl zur Isotonie zu und füllt mit Wasser auf 100 ml auf. Water and mixed with 10 ml of 1N phosphate buffer pH 4.5 then there add the calculated amount of XaCl to isotonicity and make up to 100 ml with water.

Nach Sterilfiltration wir 2 in Ampullen zu 1 oder 2 ml abgefällt und lyophilisiert.After sterile filtration we dropped 2 in ampoules of 1 or 2 ml and lyophilized.

Beispiel 6 Man stellt eine Lösung nach Beispiel 7 her, gibt aber vor dem Auffüllen mit Wasser 0.25 g 4-Hydroxybenzoesäuremethylester zu. Nach Sterilfiltration wird in Ampullen zu 1 oder 2 ml abgefüllt.Example 6 A solution is prepared according to Example 7, but pretends adding 0.25 g of methyl 4-hydroxybenzoate to make up with water. After sterile filtration is filled into 1 or 2 ml ampoules.

Beispiel 7 Man löst 10 g Zinksulfat in 100 ml 1-proz. Essigsäure, die mit Natronlauge auf pH 5 gestellt wird. Getrennt werden 50 g Protajninsulfat und 2 g 4-Hydroxybenzoesäuremethylester in 700 ml Nasser gelöst, wobei das pH ebenfalls auf 5 gestellt wird.Example 7 Dissolve 10 g of zinc sulfate in 100 ml of 1 percent. Acetic acid, which is adjusted to pH 5 with sodium hydroxide solution. 50 g of protajnine sulfate are separated and 2 g of 4-hydroxybenzoic acid methyl ester dissolved in 700 ml of water, the pH also being is set to 5.

+Xn vereinigt die beiden Lösungen, gibt die Lösung von 1 g eines Peptids der Formel I in Wasser zu und füllt mit Wasser auf 1.0 1 auf. Nach Sterilfiltration wird in Ampullen zu 1 oder 2 ml abgefüllt.+ Xn combines the two solutions, gives the solution of 1 g of a peptide of formula I in water and fills up to 1.0 l with water. After sterile filtration is filled into 1 or 2 ml ampoules.

Beispiel 8 Man stellt eine Lösung nach Beispiel -7 her, ersetzt jedoch den 4-Hydroxybenzoesäureester durch 15 g Benzylalkohol und fällt vor dem Auffüllen durch Wasser nach Sterilfiltration eine Suspension aus, indem man unter Rühren Natronlauge bis pH 7.8 zugibt. Dann füllt man mit Wasser auf 1.o 1 auf und verteilt die Suspension auf~Ampullen zu 1 oder 2 ml.Example 8 A solution is prepared according to Example -7, but replaces the 4-hydroxybenzoic acid ester by 15 g of benzyl alcohol and falls before topping up with water after sterile filtration, a suspension is made by adding sodium hydroxide solution with stirring until pH 7.8 is added. Then it is made up to 1.o 1 with water and the suspension is distributed to ~ ampoules of 1 or 2 ml.

Beispiel 9 In 8 1 destilliertem Wasser werden ohne zu erwärmen 1,2 g NaH2P04 . 2 H2O, 66,29 gya2HP04, 25 g Natriumchlorid und 100 g Benzylalkohol gelöst Dann wird 500 g Polyvinylpyrrolidon mit eine A -Wert von 85 bis 59 (z.B. Kollidon(R) 90 der Firma BASF) zugegeben und unter Rühren gelöst. Zuletzt werden 200 g eines Peptids der Formel I gelöst. Mit destilliertem Wasser wird auf 10 1 aufgefüllt. Die Lösung wird filtriert.Example 9 In 8 1 of distilled water are 1,2 g NaH2P04. 2 H2O, 66.29 gya2HP04, 25 g sodium chloride and 100 g benzyl alcohol dissolved Then 500 g of polyvinylpyrrolidone with an A value of 85 to 59 (e.g. Kollidon (R) 90 from BASF) was added and dissolved with stirring. Finally, 200 g become one Peptide of the formula I dissolved. It is made up to 10 l with distilled water. The solution is filtered.

Beispiel 10 10 g Benzylalkohol werden mit 2-Octyldodecanol (z.B. Eutanol (R)G Henkel u. Cie, Düsseldorf) auf 0,990 1 aufgefüllt. Dazu gibt man 10 g mikrofeines Peptid der Formel I und homogenisiert.Example 10 10 g of benzyl alcohol are mixed with 2-octyldodecanol (e.g. eutanol (R) G Henkel u. Cie, Düsseldorf) made up to 0.990 1. Add 10 g of microfine Peptide of the formula I and homogenized.

Beispiel 11 40 g mikrofeines Peptid der Formel I und 10 g Benzylalkohol werden mit einem Triglyceridgemisch von gesättigten Pflanzenfettsäuren mittlerer Kettenlänge (z.B.Example 11 40 g of microfine peptide of the formula I and 10 g of benzyl alcohol become medium with a triglyceride mixture of saturated vegetable fatty acids Chain length (e.g.

Miglyol (R), Dynamit Nobel, Köln), auf 1 1 aufgefüllt und homogenisiert.Miglyol (R), Dynamit Nobel, Cologne), made up to 1 1 and homogenized.

Beispiel 12 In o,6 Liter eines Triglyceridgemisches von gesättigten Pflanzenfettsäuren mittlerer Kettenlänge (z.B. Miglyol ) 812) werden 20 g eines Gemisches aus Aluminium-di- und monostearaten (z.B. Alugel(R) ) 44M) suspendiert. Die Suspension wird auf 1500C erhitzt und 15 Minuten beidieser Temperatur gehalten. Dann läßt man auf Raumtemperatur abkühlen. In der Mischung aus 0,3 1 des obigen Triglyceridgemisches und 10 g Benzylalkohol werden 60'g mikrofeines Peptid der Formel I suspendiert. Beide Teilmengen werden vereinigt und das Endvolumen mit Triglyceridgemisch von gesättigten Pflanzenfettsäuren mittlerer Kettenlänge auf 1 1 gebracht.Example 12 In 0.6 liters of a triglyceride mixture of saturated Medium chain vegetable fatty acids (e.g. Miglyol) 812) become 20 g of one Mixture of aluminum di- and monostearates (e.g. Alugel (R)) 44M) suspended. The suspension is heated to 1500 ° C. and held at this temperature for 15 minutes. Then allowed to cool to room temperature. In the mixture of 0.3 1 of the above Triglyceride mixture and 10 g of benzyl alcohol are 60 g of microfine peptide of the formula I suspended. Both portions are combined and the final volume with triglyceride mixture of saturated vegetable fatty acids of medium chain length brought to 1 1.

Beispiel 13 100 g wasserfreies Lanolin und 440 g Vaseline werden zusammengeschmelzen, Zu der erkalteten Schmelze gibt man eine Suspension von 100 g mikrofeinem Peptid der Formel I in 350 g flüssigem Paraffin. Zum Schluß werden 10 g Benzylalkohol dazugegeben und die Salbe homogenisiert.-Beispiel 14 Zu- einer Suspension von 10 mg eines Peptids der Formel I und 10 mg Sorbitanoleat gibt man in einen Druckbehälter entweder im Kältefüllverfahren vor dem Verschließen des Behälters oder im Druckfüllverfahren nach dem Verschließen des Behälters eine Mischung aus 60 mg 1,2,2-Trifluortrichloiäthan (z.B. Frigen(R) 113), 120 mg Trichlormethan (z.B. Frigen(R) 11 ) und 800 mg Dichlordifluorme than/l ,2, 2-Tetrafluor-dichloräthan (z.B. Frigen (R) 12/114) wie 60 : 40.Example 13 100 g of anhydrous lanolin and 440 g of petroleum jelly are melted together, to the cooled melt is given a suspension of 100 g of microfine peptide Formula I in 350 g of liquid paraffin. Finally, 10 g of benzyl alcohol are added and the ointment is homogenized. Example 14 To a suspension of 10 mg of a peptide of the formula I and 10 mg of sorbitan oleate are placed in a pressure vessel either in the Cold filling process before closing the container or in the pressure filling process after closing the container a mixture of 60 mg 1,2,2-trifluorotrichloiethan (e.g. Frigen (R) 113), 120 mg trichloromethane (e.g. Frigen (R) 11) and 800 mg dichlorodifluorme than / l, 2, 2-tetrafluoro-dichloroethane (e.g. Frigen (R) 12/114) like 60:40.

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h e:

1. Peptides of the general formula I CH2-CO-XY-Phe-Phe-WX-Thr-Phe-Thr-Ser-NH-CH2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (I) CH2 (CH2) n CH2

in which W stands for tryptophan, tyrosine, phenylalanine or pentamethylphenylalanine, X stands for lysine, ornithine or arginine and Y stands for asparagine, alanine or glycine and n is 1-3.

2. Peptides of the general formula II A-U-X (B) -Y-Phe-Phe-W-X (B) -Thr (V) -Phe-Thr (V) -Ser (V) - R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (11) in the A for the amino protecting group tert-buty (Boc), tert-amyl- (Amc), isobornyl- (Ibc), 2- (p-biphenylyl) -isopropyl- (Bpoc), adamantyl- (Adoc), 4-methoxybenzyl- or α, α-dimethyl-3,5-dimethoxybenzyl- (Ddz) -oxycarbonyl- or for hydrogen, U is a straight-chain W-amino acid with 6-8 C atoms and W, X and Y have the meaning given above, B for the chlorine, if applicable, Nitro or p-phenylazo substituted benzyloxycarbonyl radical or - if X arginine is - is hydrogen, V is hydrogen or optionally methoxy or nitro substituted benzyl radical and R is hydrogen, an active ester, hydroxyl or hydrazide means.

3. Peptides of the general formula III C-U-X (D) -Y-Phe-Phe-W-X (D) -Thr (But) -Phe-Thr (But) -Ser (But) -R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (III) in the C for the amino protecting group Benzyl- (Z), S, -dimethyl-3,5-dimethoxybenzyl- (Ddz) or 2- (biphenylyl) -isopropyl- (Bpoc) -oxycarbonyl or represents hydrogen, U, W, X and Y have the meaning given above, D for the tert-butyloxycarbonyl radical or - if X is arginine - for hydrogen is, But is the tert-butyl radical and R is as defined in claim 2 owns.

4. Process for the preparation of the peptides of the general formula I. characterized in that a) peptides of the general formula IIa H-U-X (B) -Y-Phe-Phe-W-X (B) -Thr (V) Phe-Thr (V) -Ser (V) -R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10s 11 (II a) in the U a straight-chain Q -amino acid with 6-8 C-atoms and W, X, and Y have the abovementioned meaning, B for the benzyloxycarbonyl radical optionally substituted by chlorine, nitro or p-phenylazo or - if X is arginine - stands for hydrogen, V stands for hydrogen or a possibly through Methoxy or nitro substituted benzyl radical and R the radical of an activated ester or peptides of the general formula III a H-U-X (D) -Y-Phe-Phe-W-X (D) -Thr (But) -Phe-Thr (But) Ser (Butt) -R 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 (IIIa) in eer U, W, X, Y and R the meaning given above have, D for the tert-butyloxycarbonyl radical or - if X is arginine for hydrogen stands, and But means the tert-butyl radical, in an organic solvent at a peptide concentration of about 0.001% to about 3%, optionally in the presence of one 1-4 times the molar excess of a tertiary or quaternary organic base stirs at about 0-600C or b) peptides of the general formula II a or III a in which R represents the hydroxyl group, in an organic solvent in the stated concentrations using dicyclohexylcarbodi -imide, if necessary in Anweserdleit an N-hydroxy compound or c) peptides of the general formula II a or III a in which R stands for the hydrazide group, in an organic solvent under acidic conditions with about 1 equivalent of tert-butyl nitrite at low temperature converts into the corresponding azide, this in the presence of excess tertiary brings organic base to the above-mentioned dilution, at temperatures of 0-30 ° C stirs and from the products obtained according to a) to c) the protective groups in the usual way Way splits off.

5. Medicaments consisting of or containing peptides according to claim 1.

6. Process for the production of pharmaceuticals consisting of or containing a peptide according to claim 1, characterized in that a peptide according to claim 1, optionally together with conventional pharmaceutical excipients, buffer solutions and / or antibacterial additives, in a suitable for therapeutic purposes Application forw brings.

7. Pharmaceutical preparation for nasal application, marked by a content of a) a peptide according to claim 1 or its physiologically compatible Salt b) an aqueous buffer solution of pH 4 to 7.2 c) isotonic additive d) if necessary a Preservative e) optionally a polymeric adhesive substance.

8. Process for the manufacture of a pharmaceutical preparation for nasal application, characterized in that an aqueous buffer solution an isotonic additive, possibly a preservative and / or possibly a adds polymeric adhesive substance and therein a peptide according to claim 1 or physiologically thereof compatible salt dissolves.

9. Pharmaceutical preparation for nasal application marked by a content of a peptide according to claim 1 or its physiologically compatible Salt as an active ingredient in the form of an oily suspension or fatty ointment.

10 .. Process for the production of a pharmaceutical preparation for Nasal application, characterized in that a) an oil that gg £. a preservative, a surfactant with an HLB below 10.

and / or contains aluminum stearates as swelling agents, e microfine Peptide according to claim 1 or its physiologically tolerable salt adds and optionally filled with a halogenated hydrocarbon in a pressurized gas pack, or b) one soft, spreadable greasy base ointment, if necessary, a preservative and / or a surface substance with an HLB value below 10 contains microfine peptide according to claim 1 or its physiologically acceptable salt is added and homogenized or c) a soft, spreadable emulsion ointment, which may be

a preservative and / or a surfactant with an HLB value below 10 contains an aqueous solution of a peptide according to claim 1 or that of its physiologically acceptable salt is added as an active ingredient and homogenized.

-Pharmaceutical preparations with a protracted effect, marked by containing a) a peptide according to claim 1 b) an aqueous solution of water-soluble zinc salt c) optionally an aqueous protamine sulfate solution.

1Z.Process for the production of a pharmaceutical preparation with protracted action, characterized in that a) an aqueous solution of a peptide according to claim 1 b) an aqueous solution of water-soluble zinc salt and c) optionally an aqueous protamine sulfate solution or ammonium phosphate solution with one another combined and the resulting solution is adjusted to a pH of 3.5 to 6.5.

13 The method according to claim 13, characterized in that the according to claim 13 obtained from the three or two components a) to c) or a) and b) Solution converted into a suspension by adjusting the pH to 7.5 to 8.