DE2301687A1 - METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS - Google Patents

METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS

Info

Publication number
DE2301687A1
DE2301687A1 DE2301687A DE2301687A DE2301687A1 DE 2301687 A1 DE2301687 A1 DE 2301687A1 DE 2301687 A DE2301687 A DE 2301687A DE 2301687 A DE2301687 A DE 2301687A DE 2301687 A1 DE2301687 A1 DE 2301687A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
bilirubin
reagent
serum
solution
sulfanilic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
DE2301687A
Other languages
German (de)
Inventor
Rudolf Dipl Chem Dr Fried
Joachim Dr Hoeflmayr
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CH Boehringer Sohn AG and Co KG
Original Assignee
CH Boehringer Sohn AG and Co KG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by CH Boehringer Sohn AG and Co KG filed Critical CH Boehringer Sohn AG and Co KG
Priority to DE2301687A priority Critical patent/DE2301687A1/en
Priority to FI3897/73A priority patent/FI55912C/en
Priority to AT874*BA priority patent/AT330366B/en
Priority to NL7400394A priority patent/NL7400394A/xx
Priority to NO740089A priority patent/NO139503C/en
Priority to IT47661/74A priority patent/IT1015804B/en
Priority to SE7400396A priority patent/SE414971B/en
Priority to FR7401025A priority patent/FR2325044A1/en
Priority to CH38374A priority patent/CH590477A5/xx
Priority to BE139752A priority patent/BE809672A/en
Priority to ES422249A priority patent/ES422249A1/en
Publication of DE2301687A1 publication Critical patent/DE2301687A1/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
    • G01N33/728—Bilirubin; including biliverdin

Description

Verfahren zur Bestimmung des Gesamtbilirubins in KörperflüssigkeitenMethod for determining total bilirubin in body fluids

Bilirubin ist ein Farbstoff im Blut, der auf den natürlichen Zerfall von Blutkörperchen zurückzuführen ist. Br wird über die Leber und Galle ausgeschieden. Während kleine Mengen Bilirubin im Serum durchaus normal sind, zeigen erhöhte Verte eine Störung in dem Ausscheidungssystem der Leber und Galle an.Bilirubin is a pigment in the blood that is caused by the natural breakdown of blood cells is. Br is excreted in the liver and bile. While small amounts of bilirubin in the serum are quite normal, elevated vertebrae indicate a disturbance in the excretory system of the liver and Bile on.

Ein schon lange bekanntes Verfahren zum Nachweis des Bilirubins im Serum ist die Koppelung dieser Substanz an diazotierte SuIfanilsäure. Man unterscheidet dabei zwischen Bilirubin, das sofort koppeln kann (= direktes Bilirubin) und demjenigen, das erst mit Hilfe eines Accelerators freigesetzt werden muß, um die Koppelungsreaktion eingehen zu können (= indirektes Bilirubin). Für die Hehrzahl der diagnostischen Fragen genügt jedoch die Bestimmung des gesamten Bilirubins. Han bestimmt also direktes und indirektes Bilirubin zusammen, indem man die Bestimmung in Anwesenheit eines Accelerators ausführt. Ein bekannter, häufig verwendeter Accelerator ist eine Lösung von Coffein und Hatriumbenzoat. A method for detecting bilirubin in serum that has long been known is the coupling of this substance to diazotized sulfanilic acid. One differentiates between bilirubin, which can couple immediately (= direct bilirubin) and the one that can only couple with help an accelerator must be released in order to enter into the coupling reaction (= indirect Bilirubin). For most of the diagnostic questions, however, it is sufficient to determine the total bilirubin. So Han determines direct and indirect bilirubin together by making the determination in the presence of a Accelerators running. A well-known, commonly used accelerator is a solution of caffeine and sodium benzoate.

Der Nachteil der bisher üblichen BilirubinbeStimmungen ist, daß fertige Lösungen von diazotierten SuIfanil-Gtlure nur kurze Zeit haltbar sind. Han muß daher die sogenannte Diazolösung vor der Bestimmung jedesmal frisch ansetzen: Entweder dadurch, daß man eine angesäuerte Lösung von Sulfanilsäure mit einer Lösung von ITatriumnitrit versetzt und das so vorbereitete "Diazoreagens" auf die Mischung von Accelerator und Serum einwirken läßt, oder daß man im Untersuchungsröhrchen zuerst eine kleine Menge des Diazoreagens durch Mischen von entsprechend kleinen Mengen Sulfanilsäure undThe disadvantage of the bilirubin determinations that have been customary up to now is that ready-made solutions of diazotized SuIfanil-Gtlure can only be kept for a short time. Han therefore has to use the so-called diazo solution each time before the determination Prepare fresh: Either by mixing an acidified solution of sulfanilic acid with a solution of I added sodium nitrite and the "diazo reagent" prepared in this way to act on the mixture of accelerator and serum, or that one in the test tube first a small amount of the diazo reagent by mixing correspondingly small amounts of sulfanilic acid and

409829/0547409829/0547

Natriumnitritlösung herstellt und darauf das Serum und den Accelerator zugibt. In jedem dieser Fälle ist mindestens ein eigener Arbeitsschritt (=Pipettierung) zur Herstellung des Diazoreagens notwendig.Prepares sodium nitrite solution and then adds the serum and accelerator. In each of these cases it is at least one separate work step (= pipetting) is necessary for the preparation of the diazo reagent.

Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß man mindestens eine Pipettierung einsparen kann, wenn man eine Goffeinlösung als Accelerator schon mit Sulfanilsäure vormischt und dieses haltbare Reagens durch Zusatz eines Tropfens llatriumnitritlösung in ein gebrauchsfertiges Farbreagens für eine GesamtbilirubinbeStimmung überführt. Diesem Reagens muß nur noch das zu untersuchende Serum zugesetzt v/erden, um die Koppelung des darin enthaltenen Bilirubins zum entsprechenden Azofarbstoff zu bewirken. Die IParbintensität der Probe stellt ein Maß für den Bilirubinspiegel des Serums dar. Die MöJ-ichkeit der Vormischung ist um so überraschender als die Mischung Accelerator und Natriumnitrat durch Zusatz von Sulfanilsäure nicht zur Bildung eines lcoppelungsfähigen Bilirubinreagens führt.Surprisingly, it has now been found that at least one pipetting can be saved if a gaffeine solution as an accelerator is premixed with sulfanilic acid and this durable reagent by adding a drop of sodium nitrite solution to a ready-to-use color reagent for total bilirubin determination convicted. Only the serum to be examined has to be added to this reagent, to bring about the coupling of the bilirubin contained therein to the corresponding azo dye. the I color intensity of the sample is a measure of the bilirubin level in the serum. The possibility of premixing is all the more surprising than the mixture accelerator and sodium nitrate due to the addition of sulfanilic acid not to the formation a bilirubin reagent capable of coupling.

Der Vorteil des erfindungsgemäßen Reagens und des damit möglichen Verfahren zur Bilirubinbestimmung beruht darauf, daß außer der Pipettierung des Serums nur die Vorlage einer abgemessenen Menge des Reagens notwendig ist, da die ITitritlösung aus einer Tropfflasche zugegeben werden kann. Hierbei mögliche Unterschiede in der Tropfengröße haben nur einen zu vernachlässigenden Einfluß auf das Resultat.The advantage of the reagent according to the invention and the method for bilirubin determination possible therewith is based on the fact that apart from the pipetting of the serum only the presentation of a measured amount of the reagent is necessary because the ITitrite solution from a dropper bottle can be added. Here, possible differences in the droplet size have only one that is negligible Influence on the result.

Dieses Verfahren bedeutet eine wesentliche Zeitersparnis und eine außerordentliche Erhöhung derThis method means a significant time saving and an extraordinary increase in

4098297054740982970547

Genauigkeit. Die Präzision kann auf diese Weise dreimal so genau erhalten v/erden. Dies drückt sich in der relativen Standardabweichung (=Variationskoeffizient) von + 0,60 $ für das erfindungsgemäße Verfahren aus, v/ährend sie für die üblichen Verfahren bei + 2,0 $5 bis + 3,0 ?° beträgt.Accuracy. The precision can be obtained three times as accurate in this way. This is expressed in the relative standard deviation (= coefficient of variation) of + 0.60 $ for the method according to the invention, while it amounts to + 2.0 $ 5 to + 3.0 ° for the usual methods.

Außerdem ist es möglich, das Reagens schon in abgemessener Menge in Pläschchen oder Küvetten zur Verfügung zu stellen, so daß der Benutzer nur einen Tropfen Nitritlösung zugeben und das zu untersuchende Serum einpipettieren muß. Die Verwendung dieses Reagens in Analysenautomaten bedeutet ebenfalls eine wesentliche Vereinfachung der zu errichtenden Vorrichtung zur Bestimmung des Bilirubins.It is also possible to have the reagent available in measured quantities in small bottles or cuvettes to provide so that the user only add a drop of nitrite solution and that to be examined Must pipette in serum. The use of this reagent in automatic analyzers also means a significant simplification the device to be set up to determine bilirubin.

Die Eichkurve verläuft bis über 20 mg Bilirubin/i00ml Serum geradlinig.The calibration curve runs up to over 20 mg bilirubin / 100 ml Serum straight forward.

Beispiel:Example:

Zur Herstellung des erfindungsgemäßen Bilirubinreagens werdenFor the preparation of the bilirubin reagent according to the invention will

1,3 - 2,2 vornehmlich 2,0 . 10""1MoI Coffein, 1,0 - 1,2 vornehmlich 1,4 . 10" Mol Sulfanilsäure 3,8 - 4,6 vornehmlich 4,2 . 10~ Mol Natriumbenzoat 2,5 . 10"1MoI Salzsäure und 1,5 - 2,0 vonöimlich 1,75 Mol Triaethanolamin in Wasser auf 1 Liter gelöst. 1.3 - 2.2 mainly 2.0. 10 "" 1 MoI caffeine, 1.0 - 1.2 primarily 1.4. 10 "moles of sulfanilic acid 3.8-4.6, mainly 4.2. 10 ~ moles of sodium benzoate 2.5. 10" 1 mole of hydrochloric acid and 1.5-2.0 of 1.75 moles of triethanolamine dissolved in water per 1 liter.

Dazu bereitet man eine ITatriumnitritlösung von 1-8,7 Mol, Die Durchführung der Analyse verläuft wie folgt: Bilirubinreagens 2,0 ml werden mit 1 Tropfen (0,05 ml) ITatriumnitritlösung gemischt und mit genau 0,2 ml Serum versetzt.To do this, one prepares a sodium nitrite solution of 1-8.7 mol, The analysis is carried out as follows: Bilirubin reagent 2.0 ml is added with 1 drop (0.05 ml) Mix the sodium nitrite solution and add exactly 0.2 ml of serum.

Der Serumleerwat zur Eliminierung der Eigenfarbe und einer eventuellen Trübung des Serums setzt sich aus 2,0 ml Bilirubinreagens und 0,2 ml Serum ohne der llatriumnitritlösung zusammen. Die Probe wird gegenThe serum empty water to eliminate its own color and a possible turbidity of the serum consists of 2.0 ml of bilirubin reagent and 0.2 ml of serum without the ll sodium nitrite solution together. The sample is against

409829/0547409829/0547

den Serumleerwert im Photometer bei Hg 546 innerhalb 3 Minuten nach Zugabe des Serums gemessen.the serum blank value in the photometer at Hg 546 within Measured 3 minutes after adding the serum.

Zur Berechnung des Bilirubingehalts wird die gemessene Extinktion mit dem experimentell gefundenen Paktor 13,2 multipliziert. Das Resultat ergibt den Bilirubinspiegel in mg/100 ml Serum.To calculate the bilirubin content, the measured absorbance is compared with that found experimentally Pactor 13.2 multiplied. The result is that Bilirubin levels in mg / 100 ml serum.

Berechnungsbeispiel: Extinktion = 0,128 0,128 . 13,2 = 1,69 mg/Bilirubin/100 ml SerumCalculation example: absorbance = 0.128 0.128. 13.2 = 1.69 mg / bilirubin / 100 ml serum

409829/0547409829/0547

Claims (4)

Patentansprüche:Patent claims: 1 J Verfahren zur Bestimmung des G-esamt-Bilirubins nach an sich bekannter Weise durch Koppelung des Bilirubins mit diazotierter Sulfanilsäure in Anwesenheit eines Accelerators dadurch gekennzeichnet, daß man als Reagens eine Mischung von Accelerator und Sulfanilsäure verwendet, die durch Zusatz eines Tropfens liitritlösung aktiviert wird.1 J Procedure for determining total bilirubin in a manner known per se by coupling the bilirubin with diazotized sulfanilic acid in the presence of an accelerator, characterized in that the reagent used is a mixture of accelerator and sulfanilic acid used, which is activated by adding a drop of liitrite solution. 2. Verfahren nach Anspruch 1 dadurch gekennzeichnet, daß man als Reagens eine Lösung von Coffein, Triaethanolamin, Natriumbenzoat und Sulfanilsäure verwendet .2. The method according to claim 1, characterized in that the reagent is a solution of caffeine, triethanolamine, Sodium benzoate and sulfanilic acid are used . 3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2 dadurch gekennzeichnet, daß man eine Natriumnitritlösung in einer Konzentration von 1 - 8,7 Mol verwendet.3. The method according to claim 1 and 2, characterized in that there is a sodium nitrite solution in one Concentration of 1 - 8.7 moles used. 4. Verfahren nach Anspruch 1-3 dadurch gekennzeichnet, daß man das Bilirubinreagens in abgemessenem Volumen in kleinen Pläschchen oder Küvetten zur Verfugung stellt, so daß der Benutzer es durch Zugabe eines Tropfens llatriumnitrit aktivieren kann und nur noch das Serum einpipettieren muß.4. The method according to claim 1-3, characterized in that the bilirubin reagent in measured volume available in small pellets or cuvettes, so that the user can activate it by adding a drop of sodium nitrite and only the serum must be pipetted in. 409829/0547409829/0547
DE2301687A 1973-01-13 1973-01-13 METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS Pending DE2301687A1 (en)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2301687A DE2301687A1 (en) 1973-01-13 1973-01-13 METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS
FI3897/73A FI55912C (en) 1973-01-13 1973-12-18 REAGENTS FOR THE COMPOSITION OF TOTALBILIRUBININNEHAOLLET I KROPPSVAETSKOR
AT874*BA AT330366B (en) 1973-01-13 1974-01-02 PROCEDURE FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN CONTENT IN BODY FLUIDS
NL7400394A NL7400394A (en) 1973-01-13 1974-01-11
NO740089A NO139503C (en) 1973-01-13 1974-01-11 REAGENTS FOR DETERMINATION OF A TOTAL BILIRUBINE CONTENT IN SULFANILIC ACID BASED LIQUIDS
IT47661/74A IT1015804B (en) 1973-01-13 1974-01-11 REAGENT FOR THE DETERMINATION OF THE TOTAL BILIRUBIN CONTENT IN THE BODY LIQUIDS
SE7400396A SE414971B (en) 1973-01-13 1974-01-11 REAGENT FOR DETERMINATION OF TOTAL CAR RUBIN CONTENT IN BODY WETS
FR7401025A FR2325044A1 (en) 1973-01-13 1974-01-11 Total bilirubin determination - by coupling with diazotized sulphanilic acid in the presence of an accelerator
CH38374A CH590477A5 (en) 1973-01-13 1974-01-11
BE139752A BE809672A (en) 1973-01-13 1974-01-11 METHOD OF DETERMINING THE CONTENT OF TOTAL BILIRUBIN IN HUMORS OF THE ORGANISM
ES422249A ES422249A1 (en) 1973-01-13 1974-01-12 Procedure to determine the total content of bilirubin in body liquids. (Machine-translation by Google Translate, not legally binding)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2301687A DE2301687A1 (en) 1973-01-13 1973-01-13 METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE2301687A1 true DE2301687A1 (en) 1974-07-18

Family

ID=5868966

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2301687A Pending DE2301687A1 (en) 1973-01-13 1973-01-13 METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS

Country Status (11)

Country Link
AT (1) AT330366B (en)
BE (1) BE809672A (en)
CH (1) CH590477A5 (en)
DE (1) DE2301687A1 (en)
ES (1) ES422249A1 (en)
FI (1) FI55912C (en)
FR (1) FR2325044A1 (en)
IT (1) IT1015804B (en)
NL (1) NL7400394A (en)
NO (1) NO139503C (en)
SE (1) SE414971B (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4412005A (en) * 1979-10-25 1983-10-25 Eastman Kodak Company Determination of total bilirubin

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3652222A (en) * 1969-04-07 1972-03-28 American Monitor Corp Bilirubin assay

Also Published As

Publication number Publication date
ES422249A1 (en) 1976-04-01
ATA874A (en) 1975-09-15
NO139503C (en) 1979-03-21
NL7400394A (en) 1974-07-16
AT330366B (en) 1976-06-25
CH590477A5 (en) 1977-08-15
FR2325044A1 (en) 1977-04-15
IT1015804B (en) 1977-05-20
FI55912C (en) 1979-10-10
BE809672A (en) 1974-07-11
FR2325044B1 (en) 1978-03-24
NO139503B (en) 1978-12-11
NO740089L (en) 1974-07-16
FI55912B (en) 1979-06-29
SE414971B (en) 1980-08-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2506115A1 (en) REAGENT FOR COLORIMETRIC DETERMINATION
DE2533458C2 (en) Method and reagent for the determination of total calcium in body fluids
DE2530036C3 (en) Method for the determination of urea in liquids
EP0203334A2 (en) Means and method for the determination of calcium
DE2149763C3 (en) Procedure for determining the level of hemoglobin in the blood
DE2262781A1 (en) METHOD FOR DETERMINATION OF INORGANIC PHOSPHATE IN ORGANIC LIQUIDS
EP0154152B1 (en) Method and reagent for the determination of nitrate ions
DE2751904C2 (en) Methods and means for the determination of creatinine in biological fluids
DE2256331C3 (en) Method for the quantitative colorimetric determination of uric acid
DE1773537B2 (en) Method for the quantitative determination of inorganic phosphate
DE2301687A1 (en) METHOD FOR DETERMINING TOTAL BILIRUBIN IN BODY FLUIDS
DE2759967C2 (en) Method for the quantitative determination of urea
DE2335350C2 (en) Determination of calcium
DE3103612A1 (en) "METHOD AND REAGENT FOR DETERMINING CHLORIDE IN BLOOD SERUM"
DE2225275A1 (en) Method for the quantitative determination of calcium
DE3046526A1 (en) DETERMINATION OF UREA
Salter et al. Serum'hormonal'iodine in relation to thyroid function and treatment with adrenocorticotrophic hormone (ACTH)
DE2221158C3 (en) Method for the determination of cholesterol
EP0044388A2 (en) Method for the determination of one or more parameters in samples
DE102012224334B4 (en) Method for determining the blood alcohol concentration by means of quantitative NMR spectroscopy
DE2263538A1 (en) URIC ACID DETERMINATION IN BLOOD SERUM
DE1953974A1 (en) Method for the determination of hemoglobin
EP0043483B1 (en) Plastic disposable measuring cuvette containing a reagent solution and its use for the determination of haemoglobin
DE2215089A1 (en) Chemical analysis test strip - providing a colour change
DE852312C (en) Procedure for testing kidney function