DE2129591A1 - Enzymes as plant growth regulators - Google Patents

Enzymes as plant growth regulators

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DE2129591A1 DE19712129591 DE2129591A DE2129591A1 DE 2129591 A1 DE2129591 A1 DE 2129591A1 DE 19712129591 DE19712129591 DE 19712129591 DE 2129591 A DE2129591 A DE 2129591A DE 2129591 A1 DE2129591 A1 DE 2129591A1
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Description

«ECHTSANWALTE U. Juni !971 «REAL LAWYERS & JUNE! 971

DR. JUR. DIPL-CHEM. WALTER BEIL
ALFRED HOEPPENER
DR. JUR. DIPL-CHEM. H-J. WOLFF
DR. JUR. HANS CHR. BEIL
DR. JUR. DIPL-CHEM. WALTER BEIL
ALFRED HOEPPENER
DR. JUR. DIPL-CHEM. HJ. WOLFF
DR. JUR. HANS CHR. AX

FRANKFURTAM MAJN-HOCHSTFRANKFURTAM MAJN-HOCHST ADELONSIRaSSE 5β ■ 'ADELONSIRaSSE 5β ■ '

Unsere Nummer 17 T48Our number 17 T48

The Procter & Gamble Company, Cincinnati, Ohio, USAThe Procter & Gamble Company, Cincinnati, Ohio, USA

Enzyme als PflanzenwachstumsregulatorenEnzymes as plant growth regulators

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Regulierung des Pflanzenwachstums, bei welchem Oxidase- oder Peroxidaseenzyme, gegebenenfalls in Kombination mit ihren entsprechenden Enzymsubäraten, auf Pflanzen aufgebracht werden.The invention relates to a method for regulating plant growth, in which oxidase or peroxidase enzymes, possibly in combination with their corresponding enzyme subarates, applied to plants.

Es ist seit langem bekannt, daß Äthylen ein wichtiges, das Pflanzenwachstum beeinflussendes und regulierendes Hormon ist; es wird außerdem angenommen, daß es eng mit dem Reifen von Früchten und Gemüsen sowie anderen, die Pflanzen betreffenden Erscheinungen, z.B. dem Abfallen von Früchten und Blättern, der Würzelentwicklung, der Entwicklung der Blüten, der Wachstumageschwindigkeit usw., verknüpft ist. Eine Herbeiführung dieser Erscheinungen mit Hilfe äußerlich angewandter Mittel wird im vorliegenden Zusammenhang als "Pflanzenwachstumsregulierung" bezeichnet; die zu diesem Zweck benutzten Mittel werden entsprechend "Pflanzenwachstumsregulatoren" genannt. Die EinwirkungIt has long been known that ethylene is an important hormone which influences and regulates plant growth; it is also believed to be closely related to the ripening of fruits and vegetables and others relating to plants Appearances, e.g. the falling of fruits and leaves, the development of roots, the development of flowers, the rate of growth etc., is linked. These phenomena can be brought about with the help of externally applied means referred to in the present context as "plant growth regulation"; the funds used for this purpose will be accordingly Called "plant growth regulators". The impact

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von Äthylengas auf wachsende Pflanzen und reifende Früchte ist eine bereits industriell durchgeführte Methode zur Pflanzen— Wachstumsregulierung.of ethylene gas on growing plants and ripening fruits an already industrially carried out method for planting— Growth regulation.

Man nimmt an, daß Äthylen auf natürliche Weise in den Pflanzen durch enymatische Einwirkung auf bestimmte Verbindungen, die in den Pflanzengeweben vorhanden sind, entsteht. So hat man nach Mitteln gesucht, mit welchen der Pflanzenstoffwechsel unter Kontrolle gebracht werden konnte, indem man die von der Pflanze produzierte Äthylenmenge erhöhte. Es kann angenommen v/erden, daß bestimmte Phosphonsäurederivate, z.B. 2-Chloräthylph.osphon-" säure, Äthylen freisetzen, wenn man sie mit den Pflanzengeweben in Berührung bringt, was dann zu einer schnellen und gleichmäßigen Entwicklung der Blüten sowie einer Fruchtreife bei erhöhten Ausbeuten führt, (vgl.: Südafrikanische Patentanmeldung 681 036, hinterlegt am 16.Februar 1968 von der Firma Amchem Products Inc.) Die Anwendung synthetischer Chemikalien wie 2-Chloräthylphosphonsäure auf Nutzpflanzen zur Erzielung bestimmter erwünschter physiologischer Effekte ist also bekannt; es wäre jedoch vom ökologischen Standpunkt wünschenswerter, wenn es möglich wäre, natürlich vorkommende, biologisch aktive und leicht biologisch abbaubare Substanzen zu diesem Zweck zu verwenden. It is believed that ethylene occurs naturally in plants by enzymatic action on certain compounds that are present in the plant tissues. So one has after Means sought by which the plant metabolism could be brought under control by taking that of the plant the amount of ethylene produced increased. It can be assumed that certain phosphonic acid derivatives, e.g. 2-chloroethylphosphonic " acid, ethylene release when brought into contact with the plant tissues, which then leads to a rapid and even Development of flowers as well as fruit ripeness leads to increased yields (see: South African patent application 681 036, deposited on February 16, 1968 by Amchem Products Inc.) The use of synthetic chemicals such as 2-Chloräthylphosphonsäure on crops to achieve certain the desired physiological effects are therefore known; however, it would be more desirable from an ecological standpoint if it would be possible to use naturally occurring, biologically active and easily biodegradable substances for this purpose.

Es ist bereits darauf hingewiesen worden, daß Enzyme, die natürlicherweise in Pflanzen vorkommen, an der biosynthetischen Bildung von Äthylen durch Katalyse von Umsetzungen bestimmter Substrate, die ebenfalls in den Pflanzen vorhanden sind, beteiligt sein können. Unter "Substrat" wird dabei im vorliegenden Zusammenhang eine chemische Verbindung verstanden, deren Umsetzung zu einer anderen Verbindung durch ein Enzym katalysiert wird. liebermann et al. haben in Nature 204 (1964), S. 343-34-5 der Vermutung Ausdruck gegeben, daß das Enzym Lipoxidase an der Bildung von Äthylen in Äpfeln beteiligt sein könnte, und zwar über eine Oxidation der Linolensäure zu einer"aktiven" Form, die dann zu Äthylen und anderen Verbindungen zersetzt wird.It has already been pointed out that enzymes that naturally occur in plants at the biosynthetic Formation of ethylene through catalysis of the conversion of certain substrates, which are also present in the plants, involved could be. In the present context, “substrate” is understood to mean a chemical compound and its conversion to another compound is catalyzed by an enzyme. liebemann et al. have in Nature 204, pp. 343-34-5 (1964) given the assumption that the enzyme lipoxidase could be involved in the formation of ethylene in apples, namely via an oxidation of linolenic acid to an "active" form, which is then broken down into ethylene and other compounds.

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Mapson et al. geben in Biochemical Journal 111 (1969), S. 413-418 als Erklärung für die natürliche Bildung von Äthylen in Blumenkohlpflanzen die Umsetzung von D-Glukose, die durch Grlukose-Oxidase aktiviert worden ist, mit atmosphärischem Sauerstoff zu HpOp an. Das HpO2 reagiert dann mit Methional weiter, wobei die Reaktion durch Peröxidase katalysiert wird; es entstehen Äthylen und andere Verbindungen. Die Anwendung derartiger Enzyme auf Pflanzen zur Erzielung einer Pflanzenwachstumsregulierung oder anderer Zwecke ist bisher jedoch noch nicht versucht worden·Mapson et al. give in Biochemical Journal 111 (1969), pp. 413-418, as an explanation for the natural formation of ethylene in cauliflower plants, the conversion of D-glucose, which has been activated by grlucose oxidase, with atmospheric oxygen to form HpOp. The HpO 2 then reacts further with methional, the reaction being catalyzed by peroxidase; ethylene and other compounds are formed. However, the use of such enzymes on plants to achieve plant growth regulation or other purposes has not yet been attempted.

Erfindungsgemäß wird infolgedessen ein Verfahren vorgeschlagen, welches die Regulierung des Pflanzenwachstums mit Hilfe von Enzymen erlaubt.According to the invention, a method is therefore proposed which regulates plant growth with the aid of Enzymes allowed.

Wie jetzt festgestellt werden konnte, ist es möglich, eine Regulierung des Pflanzenwachstums zu erreichen, indem man eine ausreichende Menge bestimmter Enzyme auf die Pflanzen aufbringt, Insbesondere hat sich gezeigt, daß Enzyme, welche mit den Pflanzensubstraten in einer solchen Weise reagieren, daß Äthylen oder ein Zwischenprodukt, welches schließlich zur Bildung von Äthylen führt, entsteht, als Pflanzenwachstums-Regulatoren auf die Pflanzen aufgebracht werden können. Die erfindungsgemäße Anwendung der Enzyme umfaßt das Aufbringen derselben auf Samen, Sämlinge, Wurzeln, bereits abgetrennte Früchte und die überirdischen Teile der wachsenden Pflanzen. Die Anwendung auf Samen und Wurzeln kann so durchgeführt werden, daß man dieselben mit dem Enzym vor dem Pflanzen behandelt oder indem man die Enzyme entweder vor oder nach dem Pflanzen auf den Boden aufbringt.As has now been established, regulation is possible to achieve plant growth by applying a sufficient amount of certain enzymes to the plants, In particular, it has been shown that enzymes which react with the plant substrates in such a way that ethylene or an intermediate which ultimately leads to the formation of Ethylene appears as a plant growth regulator the plants can be applied. The inventive use of the enzymes includes the application of the same to seeds, Seedlings, roots, already severed fruits and the unearthly Parts of the growing plants. The application to seeds and roots can be carried out by using the same treating the enzyme before planting or by applying the enzymes to the soil either before or after planting.

Durch die erfindungsgemäße Anwendung von Enzymen auf Pflanzen läßt sich das Pflanzenwachstum auf sehr unterschiedliche Weise regulieren, wobei Faktoren wie Art der Pflanze, Abschnitt des Wachstumszyklus der Pflanze zum Zeitpunkt der Aufbringung, Konzentration des aufgebrachten Enzymes, Anzahl der Behandlungen mit dem Enzym etc. eine Rolle spielen. Werden die erfindungsge-The application of enzymes to plants according to the invention allows the growth of plants in very different ways regulate, taking factors such as type of plant, section of the plant's growth cycle at the time of application, Concentration of the applied enzyme, number of treatments with the enzyme, etc. play a role. Are the inventive

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mäßen Enzyme in an eich "bekannter Weise auf die Pflanzen aufgebracht, so lassen sich folgende bemerkenswerte und industriell wertvolle Effekte erzielen: Anreiz und Verstärkung des Blühens, erhöhte Widerstandsfähigkeit gegen Krankheiten, Unterdrückung einer apikalen Dominanz, Auxin-Aktivität, erhöhte Verzweigung bei bestimmten Pflanzenarten, Zunahme des Proteingehaltes bei bestimmten Pflanzen, ErrfLaubungs- und Fruchtablösungseffekte, Verringerung des Lagerns bei Getreiden, Bohnen und Erbsen, unterbrechung der Ruhe bei Samen, Knollen und Rhizomen, frühes Reifen, vergrößerte Ausbeuten, erhöhte Irostbeständigkeit, verstärkte Bewurzelung etc. Es konnte außerdem festgestellt werden, P daß die erfindungsgemäßen Enzyme, wenn man sie auf bestimmte Pflanzen .in bestimmten Wachstumsstadien aufbringt, das Pflanzenwachstum verhindern oder vermindern, so daß man die Enzyme erfindungsgemäß auch als Mittel zur Unterdrückung eines unerwünschten Pflanzenwachstums verwenden kann.if enzymes were applied to the plants in a manner known to the following remarkable and industrially valuable effects can be achieved: incentive and intensification of flowering, increased disease resistance, suppression of apical dominance, auxin activity, increased branching in certain plant species, increase in protein content in certain plants, leaf and fruit detachment effects, Reduction of storage in grain, beans and peas, interruption of rest in seeds, tubers and rhizomes, early Tires, increased yields, increased resistance to rust, reinforced Rooting etc. It was also possible to establish that the enzymes according to the invention, if they are applied to certain Plants. In certain growth stages, the plant growth prevent or reduce, so that the enzymes according to the invention as a means for suppressing an undesired Can use plant growth.

Bei den erfindungsgemäß eingesetzten Enzymen handelt es sich um Peroxidase und bestimmte Oxidasen. Eine besonders brauchbare Oxidase ist Lipoxidase, von welcher man annimmt, daß sie mehrfach ungesättigte Fettsäuren und deren Ester, die das eis, cis-1,4--Pentadiensystem (z.B. Linolensäure, Linolsäure und Arachidonsäure sowie deren Ester) enthalten, in die entsprechenden Epk oxide oder Hydroperoxide umwandelt, die ihrerseits dann zu Äthylen oder anderen Produkten abgebaut werden. Ein weiteres, besonders gut brauchbares Oxidase-Enzym ist Glukose-Oxidase. ■Weitere brauchbare Oxidasen aind in der Tabelle I zusammengestellt, und zwar zusammen mit ihren entsprechenden Substraten. In der Tabelle sind auch Hinweise auf Handbücher über Enzyme enthalten, in welchen man sich über die Herkunft und die Herstellung der Enzyme unterrichten kann. Bei dem Hinweis A handelt es sich um das Werk "The Enzymes", erste Ausgabe, herausgegeben von Sumner und Myrback, Verlag Academic Press N.Y. (1950); der Hinweis B bezieht sich auf das Werk "The Enzymes", zweite Ausgabe, herausgegeben von Bayer, Lardy und Myrback, Verlag Academic Press N.Y. (1963); der Hinweis C bezieht sich schließlich auf das WerkThe enzymes used according to the invention are peroxidases and certain oxidases. A particularly useful one Oxidase is lipoxidase, which is believed to contain polyunsaturated fatty acids and their esters, which form the cis, cis-1,4-pentadiene system (e.g. linolenic acid, linoleic acid and arachidonic acid as well as their esters), in the corresponding Epk converts oxides or hydroperoxides, which in turn are then broken down into ethylene or other products. Another one, A particularly useful oxidase enzyme is glucose oxidase. ■ Other useful oxidases are listed in Table I, together with their respective substrates. The table also contains references to manuals on enzymes in which you can find out about the origin and manufacture of the enzymes. The note A acts it is "The Enzymes", first edition, edited by Sumner and Myrback, Academic Press N.Y. (1950); the Note B refers to The Enzymes, Second Edition, published by Bayer, Lardy and Myrback, Academic Press N.Y. (1963); Finally, note C relates to the work

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"iElie Enzyme Handbook", herausgegeben von Barman im Springer-Verlag N.Y. (1969). Diese Qxidase-Enzyme wirken vermutlich, wie Glukose-Oxidase, über die Bildung von H2Op, welches seinerseits das Substrat für Peroxidase bei der Synthese von Äthylen bildet. Bei der Peroxidase kann es sich um die handeln, die natürlicherweise in der Pflanze vorhanden ist, oder um eine, die auf die Pflanze gemäß der Erfindung aufgebracht worden ist."iElie Enzyme Handbook" edited by Barman at Springer-Verlag NY (1969). These oxidase enzymes presumably act like glucose oxidase through the formation of H 2 Op, which in turn forms the substrate for peroxidase in the synthesis of ethylene. The peroxidase can be that which is naturally present in the plant or one which has been applied to the plant according to the invention.

Tabelle ITable I.

Oxidasen, die als Pflanzenwachstums-Regularoren brauchbar sind, sowie deren entsprechende SubstrateOxidases, which act as plant growth regularors are useful, as well as their corresponding substrates

Enzymenzyme

D-Aminosäure-Oxidase
L-Aminosäure-Oxidase
Monoamin—Oxidase
Diamin-Oxidase
Xanthin-Oxidase
Aldehyd-Oxidase
ß-Galacto-Oxidase
ßlyc ollat-Oxi das e
Laetat-Oxidase.
D-amino acid oxidase
L-amino acid oxidase
Monoamine oxidase
Diamine oxidase
Xanthine oxidase
Aldehyde oxidase
ß-galacto-oxidase
ßlyc ollat-Oxi das e
Acetate oxidase.

SubstratSubstrate B.B. Bd.Vol. Lit.-Hinweis.Ref. Reference. S.634-648P.634-648 . 410-430. 410-430 D-Amino s äureD-amino acid B.B. Bd.Vol. VII,VII, S.611-634P.611-634 110110 L-Amino säureL-amino acid B.B. Bd.Vol. VII,VII, S.337-349Pp. 337-349 111111 MonoamineMonoamines B.B. Bd.Vol. VIII,VIII, S. 313-335Pp. 313-335 DiamineDiamines B.B. Bd.Vol. VIII,VIII, S.533-556Pp. 533-556 XanthinXanthine A.A. Bd.Vol. VII,VII, I, Part 1, 3.355I, Part 1, 3. 355 Aldehydaldehyde B.B. Bd.Vol. IV, SIV, p D-Galaotose.D-Galaotose. C.C. Bd.Vol. I, S.I, S. GlycollatGlycollate 0.0. Bd.Vol. I, S.I, S. 1-Lactat1-lactate

Lipoxidase, die erfindungagemäß als bevorzugtes Oxidase-Enzym verwendet wird, kann in bekannter Weise aus verschiedenen Pflanzen, wie Sojabohnen, grünen Erbsen und Weizen oder aus Mikroorganismen gewonnen werden. Am besten eignet sich für die Zwecke der Erfindung Lipoxidase, die aus Sojabohnen gewonnen worden ist. Sojabohnen—Lipoxidase ist ein gut bekanntes, handelsübliches und hochwirksames Produkt, welches bei erfindungsgemäßer Anwendung die unterschiedlichsten Wirkungen in Bezug auf .die Pflanzenregulierung hervorbringt. Die erfindungsgemäße Lipoxidaee, z.B. Sojabohnen-Iipoxidase, kann sowohl in reiner als auch in unreiner Form hergestellt werden, wobei die letztere Form wegen der leichteren Erhältlichkeit und der leichteren Hand-Lipoxidase, the preferred oxidase enzyme according to the invention Can be used in a known manner from various plants, such as soybeans, green peas and wheat, or from Microorganisms are obtained. Works best for that Purposes of the invention Lipoxidase obtained from soybeans has been. Soybean lipoxidase is a well known, commercially available one and highly effective product, which in the invention Application brings about a wide variety of effects in relation to plant regulation. The lipoxidae according to the invention, e.g. soybean lipoxidase, can be used in both pure and can also be produced in impure form, the latter form being easier to obtain and easier to handle.

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habung zu "bevorzugen ist. Reine kristalline Lipoxidase kann aus Gemüsen wie Sojabohnen oder grünen Erbsen, Erbsensamen, Weizen, grünen Bohnen, grünen Bohnen-Samen u.a. in bekannter Weise isoliert werden. Eine geeignete Extraktionsmethode für Sojabohnen-Lipoxidase besteht in der wässrigen Extraktion von Sojabohnenmehl bei pH 4,5, an welche sieh eine Ausfällung mit Ammoniumsulfat anschließt. Brauchbare Extraktionsmethoden sind in "The Enzymes" I.Ausgabe, II, Teil 1, S. 564-565 beschrieben.Habitation is to be preferred. Pure crystalline lipoxidase can be made from Vegetables such as soybeans or green peas, pea seeds, wheat, green beans, green bean seeds and others in a known manner to be isolated. A suitable extraction method for soybean lipoxidase consists in the aqueous extraction of soybean meal at pH 4.5, which is followed by a precipitate Ammonium sulfate follows. Extraction methods that can be used are described in "The Enzymes", 1st edition, II, part 1, pp. 564-565.

Handelsübliche Lipoxidase-Präparate enthalten üblicherweise die Lipoxidase in Kombination mit inerten Vehikelsubstanzen wie Kohlehydrate, als Bindemittel wirkenden Proteinen, anorganischen Salzen wie Calciumsulfat, Trypsin-Inhibitor, Proteasen u.a. In derartigen Präparaten macht die Lipoxidase nur eine geringere Menge aus; im allgemeinen beträgt ihr Anteil etwa 1 bis etwa 50 Qew.-fo des Präparates. Die verbleibenden 50 bis 99 $> bestehen aus den aufgeführten Vehikel subs tanz en. Handelsübliche, Lipoxidase enthaltende Präparate werden als Ausgangsmaterial für die erfindungsgemäße Lipoxidase bevorzugt, weil sie leichter erhältlich sind als reine kristalline Lipoxidase und weil sie eine zufriedenstellende Lipoxidase-Aktivität aufweisen.Commercially available lipoxidase preparations usually contain lipoxidase in combination with inert vehicle substances such as carbohydrates, proteins that act as binders, inorganic salts such as calcium sulfate, trypsin inhibitors, proteases, etc. In such preparations, lipoxidase only makes up a smaller amount; in general, their proportion is from about 1 to about 50 percent by weight of the preparation. The remaining $ 50 to $ 99> consist of the listed vehicle substances. Commercially available preparations containing lipoxidase are preferred as the starting material for the lipoxidase according to the invention because they are more easily available than pure crystalline lipoxidase and because they have a satisfactory lipoxidase activity.

Lipoxidase mikrobiellen Ursprungs, die für die Zwecke der Erfindung geeignet fet, umfaßt sowohl Bakterien- als auch Pilz» Lipoxidase, die aus Gärbrühen gewonnen wird. Beispiele für derartige Lipoxidasen sind solche, die mit Aspergillus soj-ae, Aspergillus flavus, Aspergillus glacus, Aspergillus niger, Aspergillus elegans, Rhizopus usamii, Rhizopus G. 34 Yamasake, Rhizopus dl 36 Yamazake, Rhizopus tritici, Penicillium rugulosum und Penicillium 15 (vgl. lukuba, Nippon Fayu Kayuku Kaishi 26, · 167, 1952) erhalten worden sind. Weiterhin brauchbar ist Lipoxidase, die mit Aspergillus parasiticus (ATOC 11906) und Aspergillus flavus (ATCC 1003) gewonnen worden ist; diese Stämme können aus der ständigen Sammlung "American Type Culture Collection" 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland, USA bezogen werden.Lipoxidase of microbial origin suitable for the purposes of the invention includes both bacterial and fungal lipoxidase obtained from fermentation broth. Examples of such lipoxidases are those which are associated with Aspergillus soj-ae, Aspergillus flavus, Aspergillus glacus, Aspergillus niger, Aspergillus elegans, Rhizopus usamii, Rhizopus G. 34 Yamasake, Rhizopus dl 36 Yamazake, Rhizopus tritici, Penicillium rugillium 15 and cf. . Lukuba, Nippon Fayu Kayuku Kaishi 26, · 167, 1952). Lipoxidase obtained with Aspergillus parasiticus (ATOC 11906) and Aspergillus flavus (ATCC 1003) can also be used; these strains are available from the American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland, USA.

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Eine weitere, gut geeignete Oxidase ist Glukose-Oxidase. Dieses Enzym kann in bekannter Weise aus Pflanzen wie Blumenkohl oder aus Mikroorganismen gewonnen werden. Eine für die Zwecke der Erfindung ebenfalls gut geeignete Glukose-Oxidase läßt sich mit Hilfe von Aspergillus niger gewinnen. A.niger-Glukoseoxidase ist ein bekanntes, handelsübliches und hochwirksames Produkt, wenn es erfindungsgemäß zur Regulierung des Wachstums verschiedener Pflanzen herangezogen wird«, Glukoseoxidase kann entweder in reiner oder in unreiner lorm gewonnen werden, wobei die Verwendung der letztgenannten 3Porm bevorzugt wird, weil diese leichter erhältlich und leichter zu handhaben ist. Heine kristalline Glukose-Oxidase kann beispielsweise mit Hilfe von Mikroorganismen wie Aspergillus niger, Penicillium Glaucum, Penicillium notatum und Penicillium amagasakiense i soliert werden. Eine brauchbare Extraktionsmethode für Glukoseoxidase besteht in der Adsorption und Elution von Bohmaterial an dem Harz Amberlite CG-50, an welche sich die Ausfällung mit Ammoniumsulfat anschließt.Another well-suited oxidase is glucose oxidase. This enzyme can be obtained in a known manner from plants such as cauliflower or obtained from microorganisms. A glucose oxidase which is also well suited for the purposes of the invention can be obtained with the help of Aspergillus niger. A.niger glucose oxidase is a well-known, commercially available and highly effective product when used according to the invention for regulating the Growth of various plants is used «, glucose oxidase can be obtained either in pure or in impure lorm The use of the latter 3-shape is preferred because it is easier to obtain and easier to handle is. Heine crystalline glucose oxidase can, for example, with the help of microorganisms such as Aspergillus niger, Penicillium Glaucum, Penicillium notatum and Penicillium amagasakiense i are isolated. A useful extraction method for glucose oxidase consists in the adsorption and elution of raw material on the resin Amberlite CG-50, to which the precipitation takes place Ammonium sulfate follows.

Entsprechende Extraktionsmethoden sind in dem Werke "The Enzymes?1 zweite Ausgabe, Band VII, S. 568-569 beschrieben. Handelsübliche Glukoseoxidase-Präparate enthalten normalerweise die Glukoseoxidase in Kombination mit inerten Vehikelsubstanzen wie Kohlehydrate, Proteine, anorganische Salze u.a. Der Anteil an Glukoseoxidase macht in solchen Präparaten etwa 1 bis etwa 50 Gew.-# aus· Die verbleibenden 50 bis 99 % bestehen aus den. weiter vorn bereits aufgezählten Vehikelsubstanzen. Die Verwendung handelsüblicher, Glukoseoxidase enthaltender Präparate wird der Verwendung reiner kristalliner Glukoseoxidase vorgezogen, weil erstere leichter erhältlich sind und dennoch eine gute Glukoseoxidase-Aktivität aufweisen.Corresponding extraction methods are described in the works "The Enzymes? 1 second edition, Volume VII, pp 568-569. Commercially available glucose oxidase preparations normally contain glucose oxidase in combination with inert vehicle substances such as carbohydrates, proteins, inorganic salts, etc. The proportion of glucose oxidase makes in such preparations about 1 to about 50 wt .- # of · The remaining 50 to 99 % consist of the vehicle substances already listed above. The use of commercially available preparations containing glucose oxidase is preferred to the use of pure crystalline glucose oxidase, because the former are more readily available and yet have good glucose oxidase activity.

Peroxidasen sind ebenfalls brauchbare Enzyme für die Zwecke der vorliegenden Erfindung. Es handelt sich bei ihnen ebenfalls um handelsübliche Präparate; diese können aus Pflanzen sowie aus tierischen oder mikrobiologischen Materialien gewonnen werden.Peroxidases are also useful enzymes for the purposes of present invention. They are also commercially available preparations; these can be made from plants as well animal or microbiological materials are obtained.

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Eine Beschreibung der Ausgangsmaterialien und der Herstellungsmethoden der verschiedenen Arten von Peroxidase finden sich in dem Werk "The Enzymes", zweite Ausgabe, Band VIII, S. 227-274.A description of the starting materials and the manufacturing methods the various types of peroxidase can be found in "The Enzymes", Second Edition, Volume VIII, pp. 227-274.

Für die praktische Anwendung.als PflanzenwaelBtums-Regulatoren werden die Enzyme gemäß der Erfindung zusammen mit inerten Trägermaterialien zu entsprechenden Präparaten verarbeitet. Unter einem 'Inerten Trägermaterial" wird im vorliegenden Zusammenhang ßin Lösungsmittel oder ein trockenes Streckmittel verstanden, welches selbst hinsichtlich der Pflanzenwachstumsregulierung keine Wirkung hat, welches sich gedoch zur Vermischung mit reinen Enzymen oder handelsüblichen, Enzyme enthaltenden Präparaten eignet. Mit Hilfe solcher Präparate lassen die Enzyme sich leicht auf die Pflanzen aufbringen. Die Präparate können als feste Substanzen, beispielsweise als Stäube, Körnchen oder netzbare Pulver, andererseits aber auch als Flüssigkeiten, z.B. lösungen und Aerosole vorliegen. Die festen Präparate enthalten das aktive Enzym im allgemeinen in Mengen von etwa 0,5 ppm bis etwa 5 Gew.- io\ die flüssigen Präparate enthalten die aktiven Enzyme gewöhnlich in Mengen von etwa 0,005 ppm bis etwa 50 000 ppm.For practical use as plant growth regulators, the enzymes according to the invention are processed together with inert carrier materials to form appropriate preparations. In the present context, an "inert carrier material" is understood to mean in a solvent or a dry extender which itself has no effect on plant growth regulation, but which is suitable for mixing with pure enzymes or commercially available preparations containing enzymes. With the aid of such preparations, the enzymes The preparations can be in the form of solid substances, for example as dusts, granules or wettable powders, but also as liquids, for example solutions and aerosols. The solid preparations generally contain the active enzyme in amounts of around 0, 5 ppm to about 5 wt io \ the liquid preparations containing the active enzymes usually in amounts of from about 0.005 ppm to about 50,000 ppm.

Stäube können hergestellt werden, indem man das Enzym mit einem festen inerten Trägermaterial wie Talkum, Ton, Kieselsäure, Pyrophylit u.a. vermahlt und vermischt. Körnige Präparate können hergestellt werden, indem man durch Imprägnieren in und auf granulierte Trägermaterialien wie Attapulgite oder Vermiculite mit einer Teilchengröße zwischen etwa 0,3 und 1,5 mm die Enzyme, im allgemeinen in Dispersion oder Lösung in einem geeigneten Lösungsmittel (z.B.Wasser) ein- bzw. aufbringt. Es ist auch möglich, ein inertes Trägermaterial mit den Verbindungen in Form netzbarer Pulver zu überziehen. Geeignete Methoden und Hilfsmittel zur Überführung der Enzyme in körnige Präparate sind beispielsweise in der USA-Patentaτ4-τΗ>€?- beschrieben. Da Sojabohnen-Lipoxidase bekanntlich in einer Menge von 0,1 bis 0,5 $> in Sojabohnenmehl vorkommt, ist es möglich,Dusts can be produced by grinding and mixing the enzyme with a solid, inert carrier material such as talc, clay, silica, pyrophylite, etc. Granular preparations can be produced by impregnating the enzymes in and on granulated carrier materials such as attapulgite or vermiculite with a particle size between about 0.3 and 1.5 mm, generally in dispersion or solution in a suitable solvent (e.g. water). or applies. It is also possible to coat an inert carrier material with the compounds in the form of wettable powders. Suitable methods and aids for converting the enzymes into granular preparations are described, for example, in the USA Patent 4-τΗ> €? -. Since soybean lipoxidase is known to be found in soybean meal in an amount of $ 0.1 to $ 0.5, it is possible

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nicht geröstetes Sojabohnenmehl direkt als granuläres Lipoxidase Präparat zu verwenden. Netzbare Pulver, die in Wasser oder Öl zu jeder "beliebigen Enzymkonzentration dispergiert werden können, lassen sich gewinnen, indem man Netzmittel in konzentrierte Staubpräparate einarbeitet.Unroasted soybean meal directly as a granular lipoxidase preparation to use. Wettable powders that can be dispersed in water or oil to "any desired enzyme concentration," can be obtained by incorporating wetting agents into concentrated dust preparations.

Das vorzugsweise für die Enzyme benutzte Trägermaterial ist Wasser. Einige der erfindungsgemäßen Enzyme sind ausreichend wasserlöslich, so daß sie direkt in diesem Lösungsmittel verwendet werden können. Häufig ist es auch möglich, diese wässrigen Enzymlösungen unter überatmosphärischem Druck zu Aerosolen zu dispergieren. Gewöhnlich ist das Enzym jedoch in Wasser nicht ausreichend löslich und muß mit Hilfe anderer Materialien löslich gemacht werden. Beispielsweise kann man die Enzyme löslich machen, indem man dem flüssigen Präparat ein wasserlösliches Salz in einer Menge des etwa O$5-bis etwa 20fachen, vorzugsweise des etwa 0,1- bis etwa Ifachen des Gewichtes des aktiven Enzyms zusetzt. Für diesen Zweck geeignete Salze sind wasserlösliche Alkali- und Erdalkalimetallsalze von anorganischen Säuren wie Chlorwasserstoffsäure, Salpetersäure und Schwefelsäure. Am besten geeignet für die Zwecke der Erfindung sind natriumchlorid und/oder Kaliumchlorid; ein flüssiges Enzympräparat, welches zur direkten Aufbringung auf Pflanzen geeignet ist, soll vorzugsweise etwa 0,005 bis etwa 50 000 ppm Enzym und etwa 0,0005 bis etwa 5 000 ppm Natriumchlorid und/oder Kaliumchlorid in Wasser enthalten. Zur Vereinfachung des Versands und der Handhabung von flüssigen Präparaten stellt man diese zunächst in einer etwa 100- bis 2 000-fachen Konzentration - bezogen auf die Konzentration bei der späteren Verwendung - her und verdünnt das Präparat auf die gewünschte Konzentration von 0,005 bis 50 000 ppm aktives Enzym erst kurz vor der Anwendung.The carrier material preferably used for the enzymes is water. Some of the enzymes of the present invention are sufficient water soluble so that they can be used directly in this solvent. Often it is also possible to use this watery To disperse enzyme solutions under superatmospheric pressure to form aerosols. Usually, however, the enzyme is not in water sufficiently soluble and must be made soluble with the help of other materials. For example, the enzymes can be made soluble make by adding a water-soluble salt to the liquid preparation in an amount of about 0.5 to about 20 times, preferably about 0.1 to about 1 times the weight of the active enzyme. Salts suitable for this purpose are water-soluble Alkali and alkaline earth metal salts of inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid and sulfuric acid. Preferably suitable for the purposes of the invention are sodium chloride and / or Potassium chloride; a liquid enzyme preparation which is suitable for direct application to plants should preferably be about Contain 0.005 to about 50,000 ppm enzyme and about 0.0005 to about 5,000 ppm sodium chloride and / or potassium chloride in water. To simplify the shipping and handling of liquid preparations, they are initially placed in an approx. 100 to 2,000 times the concentration - based on the concentration for later use - and dilutes the preparation to the Desired concentration of 0.005 to 50,000 ppm active enzyme just before use.

Zur Verbesserung der Ausbreitung der flüssigen Präparate auf der Pflanzenoberfläche und zur Vergrößerung der Eindringung des En«yms in das Pflanzengewebe kann man den flüssigen Präparaten auch oberflächenaktive Mittel zusetzen. Geeignete oberfläohen-To improve the spread of the liquid preparations on the The plant surface and to increase the penetration of the enzyme into the plant tissue can be added to the liquid preparations also add surfactants. Suitable surface

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- ίο -- ίο -

aktive Mittel sind beispielsweise solche vom anionischen, kationischen, nicht-ionischen, ampholytischen oder zwitterionischen Typ.active agents are, for example, those from the anionic, cationic, non-ionic, ampholytic or zwitterionic Type.

Beispiele für geeignete anionische oberflächenaktive Mittel sind die Hatriumsalze von 3?ettalkoholsulfaten mit 8 bis 18 Kohlenstoffatomen in der Kette sowie ETatriumsalze von Alkylbenzolsulfonaten mit 9 bis 15 Kohlenstoffatomen in der Alkylkette. Beispiele für geeignete nicht-ionische oberflächenaktive Mittel sind Polyäthylenoxid-Kondensate von Alkylphenolen, in welchen die Alkylkette etwa 6 bis 12 Kohlenstoffatome enthält und die ankondensierte Menge Äthylenoxid pro Mol Alkylphenol bei etwa 5 bis 25 Mol liegt, sowie Polyäthylenoxid-Kondensate von Sorbitanmonolaurat, in welchen etwa 10 bis 40 Mol Äthylenoxid je Mol Sorbitanmonolaurat ankondensiert sind. Beispiele für geeignete kationische oberflächenaktive Mittel sind quaternäre Dimethyldialkylammoniumsalze, in welchen die Alkylkette etwa 8 bia 18 Kohlenstoffatome enthält und das salzbildende Anion ein Halogen iSt. Beispiele für brauchbare ampholytische oberflächenaktive Mittel sind Derivate von aliphatischen sekundären oder tertiären Aminen, in welchen einer der aliphatischen Substituenten etwa 8 bis 18 Kohlenstoffatome enthält und ein weiterer eine anionische wasserlöslich machende Gruppe, z.B. ein Sulfat oder SuIfonat darstellt. Spezifische Beispiele für ampholytische oberflächenaktive Mittel sind Natrium-jj-dodecylaminopropionat und Natrium-3-dodecylaminopropansulfonat. Beispiele für geeignete zwitterionische oberflächenaktive Mittel sind Derivate von aliphatischen quaternären. Ammoniumverbindungen, in welchen einer der aliphatischen Substituenten etwa 8 bis 18 Kohlenstoffatome und ein anderer eine anionische wasserlöslich machende Gruppe enthält. Spezifische Beispiele für zwitterionische oberflächenaktive Mittel sind 3-(H,N-Dimethyl-H-hexadecylammonio)-propan-1— sulfonat und 3-(N,N-Dimethyl-N-hexadecylammonio)-2-hydroxypropan-1-sulfonat. Weitere geeignete oberflächenaktive Mittel sind in dem Werk "Detergents and Emulsifiers - 1969 Annual" der John W. McCutcheon Inc. beschrieben. Bei Verwendung in denExamples of suitable anionic surfactants are the sodium salts of fatty alcohol sulfates having 8 to 18 carbon atoms in the chain as well as sodium salts of alkylbenzenesulfonates with 9 to 15 carbon atoms in the alkyl chain. Examples of suitable nonionic surfactants are polyethylene oxide condensates of alkylphenols in which the alkyl chain contains about 6 to 12 carbon atoms and which condensed amount of ethylene oxide per mole of alkylphenol is about 5 to 25 moles, as well as polyethylene oxide condensates of sorbitan monolaurate, in which about 10 to 40 moles of ethylene oxide per mole of sorbitan monolaurate are condensed. Examples of suitable cationic surfactants are quaternary dimethyldialkylammonium salts, in which the alkyl chain contains about 8 to 18 carbon atoms and the salt-forming anion a halogen is. Examples of useful ampholytic surfactants Agents are derivatives of aliphatic secondary or tertiary amines in which one of the aliphatic substituents is about Contains 8 to 18 carbon atoms and another one an anionic water-solubilizing group, e.g. a sulfate or sulfonate represents. Specific examples of ampholytic surfactants are sodium jj-dodecylaminopropionate and sodium 3-dodecylaminopropanesulfonate. Examples of suitable zwitterionic surfactants are derivatives of aliphatic ones quaternary. Ammonium compounds, in which one of the aliphatic Substituents about 8 to 18 carbon atoms and one another contains an anionic water-solubilizing group. Specific examples of zwitterionic surfactants Remedies are 3- (H, N-Dimethyl-H-hexadecylammonio) -propane-1— sulfonate and 3- (N, N-dimethyl-N-hexadecylammonio) -2-hydroxypropane-1-sulfonate. Other suitable surface-active agents are in the work "Detergents and Emulsifiers - 1969 Annual" by John W. McCutcheon Inc. When used in the

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flüssigen Enzympräparaten, die erfindungsgemäß direkt auf
Pflanzen aufgebracht werden, soll das oberflächenaktive Mittel in Mengen von etwa 0,001 bis etwa 0,5 f°, vorzugsweise-etwa
0,0t bis etwa 0,1 Gew.-^ des Präparates vorhanden sein. Mengen über etwa 0,5 Gew.-^ stören die Enzymaktivität.
liquid enzyme preparations according to the invention directly on
When applied to plants, the surfactant should be in amounts of from about 0.001 to about 0.5 °, preferably-about
0.0t to about 0.1 wt .- ^ of the preparation may be present. Amounts above about 0.5 wt .- ^ disrupt the enzyme activity.

Die hier beschriebenen Enzyme sollten, wie dies bei allen
Pflanzenwachsturns-Regulatoren gebräuchlich ist, auf'die betreffenden Pflanzen in bestimmten optimalen Mengen (z.B. Gewicht pro Einheit an kultiviertem Boden) und in bestimmten Stufen des Wachsturnszyklus der Pflanze aufgebracht werden, wenn bei dieser eine bestimmte wachstumsregulierende Wirkung erzielt werden
soll. Die praktisch unbegrenzte Vielzahl der Pflanzenarten und die sehr unterschiedlichen Wirkungen, die sich an den Pflanzen zeigen können, machen es, nimmt man auch noch die unterschiedlichen klimatischen Bedingungen hinzu, die im Einzelfall angetroffen werden können, unmöglich, exakte Angaben über die im
Einzelfall anzuwendenden Mengen zu machen. Diese Mengen lassen sich aber vom Fachmann mit Hilfe üblicher Methoden sehr leicht ermitteln. Anhaltspunkte hinsichtlich der anzuwendenden Mengen kann man gewinnen, wenn man die Anwendung anderer, Äthylen
bildender Pflanzenwachstumsregulatoren betrachtet. In diesem
Zusammenhang wird noch einmal auf die weiter vorn bereits erwähnte Südafrikanische Patentanmeldung der Firma Amchem Products, Inc. sowie auf den Warenkatalog "ETHREL" derselben Firma hingewiesen. Ganz allgemein kann gesagt werden, daß die aufzubringende Menge - bei breitwürfiger Anwendung auf stehende Vegetation oder auf den Boden - bezogen auf das Gewicht des aktiven Enzyms, im Normalfall etwa 0, 23 bis 11,3 kg, vorzugsweise etwa 0,23
bis etwa 6,8 kg pro 4000 m (1 acre) beträgt. In vielen Fällen ist eine wiederholte Anwendung günstig. Wird eine flüssige
Lösung oder Dispersion zum Wässern von Bäumen oder Einweichen
von Samen oder Knollen verwendet, so soll die Konzentration an aktivem Enzym in der Flüssigkeit üblicherweise zwischen etwa
0,005 und etwa 50 000 Teilen pro Million liegen.
The enzymes described here should be like this with all
Plant growth regulators are commonly used to be applied to the plants concerned in certain optimal amounts (eg weight per unit of cultivated soil) and in certain stages of the plant's growth cycle if a certain growth-regulating effect is achieved in this
target. The practically unlimited number of plant species and the very different effects that can be seen in the plants make it impossible, if you also add the different climatic conditions that may be encountered in individual cases, to provide exact information about the im
To make the quantities to be used on a case-by-case basis. These amounts can, however, be determined very easily by the person skilled in the art with the aid of customary methods. You can get clues as to the quantities to be used by considering the use of other ethylene
forming plant growth regulators considered. In this
In connection with this, reference is again made to the above-mentioned South African patent application by Amchem Products, Inc. and to the "ETHREL" product catalog from the same company. Quite generally it can be said that the amount to be applied - when applied widely to standing vegetation or to the ground - is based on the weight of the active enzyme, normally about 0.23 to 11.3 kg, preferably about 0.23
to about 6.8 kg per 4000 m (1 acre). In many cases, repeated application is beneficial. Becomes a liquid
Solution or dispersion for watering trees or soaking
When used from seeds or tubers, the concentration of active enzyme in the liquid should usually be between about
0.005 and about 50,000 parts per million.

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In vielen Fällen läßt sich eine verbesserte Wirkung bezüglich der Pflanzenwachsturnsregulierung erzielen, wenn man zusammen mit dem Enzym gleichzeitig auch das ihm entsprechende Enzymsubstrat auf die Pflanze aufbringt. "Zusammen" bedeutet im vorliegenden Zusammenhang, daß das Enzym und das ihm entsprechende Substrat innerhalb von etwa 3 Stunden auf die Pflanze aufgebracht werden. Gegebenenfalls können das Enzym und das Substrat auch in demselben Präparat enthalten sein, so daß sie gleichzeitig auf die Pflanze aufgebracht werden. Die Menge an Substrat sollte' das etwa 0,01- bis 10-fache, vorzugsweise das etwa 0,1- bis etwa 5-fache des Gewichtes des eingesetzten Enzyms betragen. Es wird ".. angenommen, daß eine Erhöhung der Substratmenge für das.Enzym über die· Menge hinaus, die natürlicherweise in der Pflanze vorhanden ist, eine weitere Steigerung der Äthylenbildung und damit eine Steigerung der Pflanzenwachsturnsregulierung bewirkt.In many cases there can be an improved effect regarding to achieve plant growth regulation when working with the enzyme also applies the corresponding enzyme substrate to the plant at the same time. "Together" means herein Relation that the enzyme and its corresponding substrate are applied to the plant within about 3 hours. Optionally, the enzyme and the substrate can also be contained in the same preparation, so that they can act simultaneously on the Plant can be applied. The amount of substrate should be about 0.01 to 10 times, preferably about 0.1 to about 5 times the weight of the enzyme used. It is assumed that increasing the amount of substrate for the enzyme beyond the amount naturally present in the plant is, causes a further increase in the formation of ethylene and thus an increase in the regulation of plant growth.

Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung. In diesen Beispielen bestanden die Enzyme aus handelsüblichen Präparaten, die Vehikelsubstanzen enthielten. Die angegebenen Enzymkonzentrationen beziehen sich jedoch auf die Gewichtsmenge des aktiven Enzyms.The following examples serve to further illustrate the invention. In these examples the enzymes consisted of commercially available preparations containing vehicle substances. The specified However, enzyme concentrations refer to the amount by weight of the active enzyme.

Beispiel 1example 1

* Je 15 bis 20 Samenkörner von roten Radieschen (Early Scarlet Qlobe)'wurden in 4 Plastiktöpfe mit einem Durchmesser von 20,3 cm ,und einer Tiefe von 12,7 cm gepflanzt, die eine Mischung aus 1/3 Erde, 1/3 Torfmull und 1/3 Pearlitef die dann in einem Gewächshaus abgestellt wurden. Neun Tage nach dem Pflanzen wurden die aufgegangenen Pflanzen auf je 10 pro Topf ausgedünnt bzw. verzogen, wobei der räumliche Abstand der Pflanzen in den Töpfen etwa gleich gehalten wurde. Die Pflanzen wurden mit einem 7:40:6-N:P20n:K20-Dünger beim Pflanzen gedüngt und wurden dann täglich während des ganzen Verlaufes des Versuches mit so viel Wasser gewässert, daß der Boden durchfeuchtet wurde. Die Pflanzen in den 4 Töpfen wurden 3, 10, 14, 21 und 24 Tage nach dem Ver-· * 15 to 20 seeds of red radish (Early Scarlet Qlobe) 'were planted in 4 plastic pots with a diameter of 8 inches and a depth of 12.7 cm, which was a mixture of 1/3 soil, 1/3 Peat dust and 1/3 Pearlitef which were then placed in a greenhouse. Nine days after planting, the plants that had emerged were thinned or warped to 10 per pot, the spatial distance between the plants in the pots being kept approximately the same. The plants were fertilized with a 7: 40: 6 N: P 2 0n: K 2 0 fertilizer when planting and were then watered daily during the entire course of the experiment with enough water that the soil was moistened. The plants in the 4 pots were 3, 10, 14, 21 and 24 days after the

»enthielten"contained

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ziehen behandelt. Die Behandlung B wurde "bei 2 Topfen wiederholt, wogegen die Behandlungen A und C an je einem Topf vorgenommen wurden. Die Behandlungen waren folgende:pull treats. Treatment B was repeated "for 2 pots, whereas treatments A and C were carried out on one pot each. The treatments were as follows:

A. Behandlung mit Wasser, welches 58 ppm NaGl enthielt (Kontrolle) ,A. Treatment with water containing 58 ppm NaGl (control) ,

B. Behandlung mit Wasser, welches 58 ppm NaCl + 500 ppm Lipoxidase* enthielt,B. Treatment with water containing 58 ppm NaCl + 500 ppm Contained lipoxidase *,

C. Behandlung mit Wasser, welches 58 ppm NaCl + 500 ppm Lipoxidase* + 280 ppm linolsäure enthielt.C. Treatment with water containing 58 ppm NaCl + 500 ppm lipoxidase * + 280 ppm linoleic acid.

* Sojabohnen-Lipoxidase, welche von der Firma PL Biochemioals, Milwaukee, Wisconsin, USA bezogen worden war.* Soybean lipoxidase produced by PL Biochemioals, Milwaukee, Wisconsin, USA.

Die Behandlung wurde so durchgeführt, daß jeder Topf mit Pflanzen mit einem 100 ecm Anteil der Versuchslösung besprüht wurde, bis diese an den Blättern herunterlief; die Restmenge des Anteiles wurde dem Boden zugesetzt. Die Radieschen wurden 7 Tage nach der letzten Anwendung der Versuchslösung geerntet. Die Pflanzen wurden gewaschen, die Spitzen wurden abgeschnitten und die Radieschen und das Laub von jedem Topf wurden zusammen gewogen, worauf das durchschnittliche Frischgewicht pro Pflanze berechnet wurde. Die Radieschen und das Laub wurden dann 16 Stunden lang bei 105 C in einem Ofen gehalten und anschließend wieder gewogen, um das Trockengewicht zu bestimmen. Die Ergebnisse (in Gramm) sind in der Tabelle II enthalten, und zwar zusammen mit den berechneten prozentualen Erhöhungen, die sich bei der Behandlung mit den zu prüfenden Lösungen gegenüber dem Kontrollversuch ergaben. The treatment was carried out so that each pot with plants was sprayed with a 100 ecm portion of the test solution until it ran down the leaves; the remaining amount of the portion was added to the soil. The radishes were harvested 7 days after the last application of the test solution. The plants were washed, the tips were cut off, and the radishes and foliage from each pot were weighed together, whereupon the average fresh weight per plant was calculated. The radishes and foliage were then 16 hours long held in an oven at 105 C and then reweighed to determine dry weight. The results (in grams) are included in Table II along with the calculated percentage increases with treatment with the solutions to be tested compared to the control experiment.

Tabelle IITable II

Fri'schgewicht TrockengewichtFri'sch weight dry weight

Durchschnitt/Pflanze Durchsohnitt/PflanzeAverage / plant average / plant

(g) (g) (g) (g)

Behandlung Wurzel Laub Wurzel LaubTreatment root foliage root foliage

A (Kontrolle) 2,75 6,06 0,155 0,380A (control) 2.75 6.06 0.155 0.380

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-H--H-

Frischgewicht Trockengewicht Durch.sciin.itt/Pf lanze Durchschnitt/Pflanze U) UI Fresh Weight Dry Weight Avg.sciin.itt / Plant Avg / Plant U) UI

Behandlung Wurzel Laub Wurzel LaubTreatment root foliage root foliage

*B (Enzym) 5,0 (82$); 6,99 (15$) 0,260 (68$) 0,460* B (enzyme) 5.0 ($ 82); $ 6.99 ($ 15) .0.260 ($ 68) .460

G (Enzym + 5,24(90$) 6,73 (11$) 0,280 (80$) 0,440 (16$) Substrat)G (Enzyme + $ 5.24 ($ 90) $ 6.73 ($ 11) $ 0.280 ($ 80) $ 0.440 ($ 16) Substrate)

^kombinierte Ergebnisse aus mehreren Behandlungen^ combined results from multiple treatments

Die Ergebnisse erläutern deutlich die das Pflanzenwachstum regulierende Wirkung von Lipoxidase sowie die etwas größere Wirkung, die bei Anwendung von Lipoxidase zusammen mit ihremLinolsäure-Substrat erzielt wird. Dabei ist darauf hinzuweisen, daß sowohl das Enzym als auch das Enzym + Substrat in erster Linie das Pflanzenwachstum in dem wertvollen Wurzelteil der Radieschenpflanze und nicht im Lau derselben verstärkten. Die Trockengewichts-Ergebnisse beweisen weiterhin, daß durch die Behandlungen tatsächlich eine Erhöhung des Gewebegewichtes eingetreten ist und nicht nur eine Erhöhung der Wasseraufnahme.The results clearly explain the regulating plant growth Effect of lipoxidase as well as the somewhat greater effect of using lipoxidase together with its linoleic acid substrate is achieved. It should be noted that both the enzyme and the enzyme + substrate are primarily the Increased plant growth in the valuable root part of the radish plant and not in the course of it. The dry weight results also prove that the treatments actually increased the weight of the tissue and not just an increase in water intake.

Praktisch die gleichen Ergebnisse werden erzielt, wenn das Enzym bei der Behandlung B eine der folgenden Oxidasen ist: D-Aminosäure-Oxidase, L-Aminosäure-Oxidase, Monoamin-Oxidase, Diamin-Oxidase, Xanthin-Oxidase, Aldehyd-Oxidase, ß-Galaetosidase, Glycollat-Oxidase oder Lactat-Oxidase. Entsprechende Ergebnisse lassen sich auch erzielen, wenn bei der Behandlung C eine der folgenden Enzym/Substrat-Kombinationen anstelle von Lipoxidase/ Mnolsäure verwendet werden: Glufcose-Oxidase/D-Glukose, D-Aminosäure-Oxidase/D-Alanin, L-Aminosäure-Oxidase/L-Alanin, Monoamin-Oxidase/Propylamin, Diamin-Oxidase/1,5-Diaminopropan, Xanthin-Oxidase/Xanthin, Aldehyd-Oxidase/Benzaldehyd, ß-Galactosidase/ D-galactose, Glycollat-Oxidase/Äthylglycollat, Lactat-Oxidase/ Ithyllactat.Virtually the same results are obtained when the enzyme in treatment B is one of the following oxidases: D-amino acid oxidase, L-amino acid oxidase, monoamine oxidase, Diamine oxidase, xanthine oxidase, aldehyde oxidase, ß-galaetosidase, Glycollate Oxidase or Lactate Oxidase. Corresponding results can also be achieved if, in treatment C, one of the The following enzyme / substrate combinations can be used instead of lipoxidase / malic acid: glufcose oxidase / D-glucose, D-amino acid oxidase / D-alanine, L-amino acid oxidase / L-alanine, monoamine oxidase / propylamine, Diamine oxidase / 1,5-diaminopropane, xanthine oxidase / xanthine, Aldehyde oxidase / benzaldehyde, ß-galactosidase / D-galactose, glycolate oxidase / ethyl glycollate, lactate oxidase / Ethyl lactate.

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Beispiel 2Example 2

Je 2-5 bis 30 Samen von weißen Rettichen (White Icicle variety) wurden in 32 Tontöpfe mit einem Durchmesser von 20,3 om gepflanzt. 10 Tage nach dem Pflanzen wurden die aufgegangenen Pflanzen auf 10 pro Topf verzogen, wobei die räumlichen Abstände zwischen den Pflanzen in den Töpfen etwa gleich gehalten wurden; die Töpfe wurden dann in 2 Gruppen mit je 16 Töpfen eingeteilt. Die Pflanzen wurden mit 20;20:2(VNrP2O5:K3O-Dünger (2,2 g/Topf) am 24. und 31. Tag nach dem Pflanzen gedüngt und danach täglich mit so viel Wasser gewässert, daß der Boden durchfeuchtet wurde. Kontroll- und Versuchsbehandlungen wie nachstehend beschrieben wurden an den beiden Gruppen von Pflanzen jeweils am 1o, 17., 21. und 28. Tag nach dem Pflanzen vorgenommen.2-5 to 30 seeds of white radishes (White Icicle variety) were planted in 32 clay pots with a diameter of 20.3 om. 10 days after planting, the emerged plants were moved to 10 per pot, the spatial distances between the plants in the pots being kept approximately the same; the pots were then divided into 2 groups of 16 pots each. The plants were fertilized with 20; 20: 2 (VNrP 2 O 5 : K 3 O fertilizer (2.2 g / pot) on the 24th and 31st day after planting and then watered daily with enough water that the Control and experimental treatments as described below were applied to the two groups of plants on days 10, 17, 21 and 28 after planting, respectively.

Kontrolle: 58 ppm NaCl in Wasser Versuch: 58 ppm NaCl + 500 ppm Lipoxidase* in WasserControl: 58 ppm NaCl in water Experiment: 58 ppm NaCl + 500 ppm lipoxidase * in water

♦Sojabohnen-Lipoxidase, bezogen von der !Firma Pl Bi ο chemicals..♦ Soybean lipoxidase, obtained from! Company Pl Bi ο chemicals ..

Die Behandlungen wurden so durchgeführt, daß man jeden Topf mit einem 100 ccm-Anteil einer Lösung besprühte, bis diese an den Blättern herunterliefj der Rest des Teiles wurde auf den Boden gegeben. Die Rettiche wurden 4 Tage nach der letzten Behandlung geerntet. Die Pflanzen wurden gewaschen, die Oberteile wurden abgeschnitten und die Rettiche und das Laub von den Pflanzen wurden zusammen gewogen, so daß man auf diese Weise das Frischgewicht pro Pflanze berechnen konnte. Die Rettiche und das Laub wurden dann 24 Stunden bei 1050C in einem Ofen gehalten, worauf anschließend das Trockengewicht gbestimmt wurde. Die Ergebnisse (in Gramm) sind in Tabelle III zusammengestellt, und zwar zusammen mit der berechneten prozentualen Gewichtszunahme, die sich bei den Versuchsbehandlungen im Vergleich zu der Kontroll» behandlung ergab.The treatments were carried out by spraying each pot with a 100 cc portion of a solution until it ran down the leaves and the remainder of the portion was placed on the floor. The radishes were harvested 4 days after the last treatment. The plants were washed, the tops were cut off, and the radishes and foliage from the plants were weighed together so that the fresh weight per plant could be calculated. The radishes and the leaves were kept for 24 hours at 105 0 C in an oven, whereupon then the dry weight was gbestimmt. The results (in grams) are summarized in Table III, together with the calculated percentage weight increase that resulted from the test treatments compared to the control treatment.

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Tabelle ΙΣΙTable ΙΣΙ

Frischgewicht TrockengewichtFresh weight dry weight

Durchschnitt/Pflanze Durch schnitt/PflanzeAverage / plant Average / plant

()() iß}eat}

Behandlung T/urzel Laub Wurzel LaubTreatment of root foliage root foliage

Kontrolle 24,2 57,2 1,7 3,7 Enzym 31,0(28^) 63,0(11/0 2,0(18$) 4,1(1150Control 24.2 57.2 1.7 3.7 Enzyme 31.0 (28 ^) 63.0 (11/0 $ 18.0) 4.1 (1150

Die Ergebnisse erläutern deutlich die das Pflanzenwachstum regulierende Wirkung der lipoxidase bei weißen Rettichen. Das Enzym bewirkte auch hier vor allem eine Zunahme des Wachstums im wertvollen Wurzelteil der Pflanze, und zwar stärker als im Laub. Die Ergebnisse der Trockengewichtsmessungen zeigen weiterhin, daß es sich tatsächlich um eine Gewichtszunahme des Gewebes und nicht nur um eine erhöhte Wasseraufnahme handelt.The results clearly explain the regulating plant growth Effect of lipoxidase on white radishes. Here, too, the enzyme mainly caused an increase in the growth of the valuable Root part of the plant, stronger than in the foliage. The results of the dry weight measurements further show that it is actually an increase in the weight of the tissue and not just an increase in water absorption.

Eine bevorzugte Stimulierung des Wurzelwachstums im Gegensatz zur Stimulierung des Laubwachstums, wie sie bei dem vorliegenden Versuch erreicht werden konnte, ist insbesondere im Fall von Rettichen wichtig, weil hier die Wurzel der wertvolle und verwendbare Teil der Pflanze ist, Eine Stimulierung des Wurzelwachstums ist aber auch ganz allgemein bei anderen Pflanzen günstig' und erstrebenswert, weil hierdurch der Stsamt-Gesundheitszustand der Pflanze verbessert wird; die Pflanzen können leichter Trockenperioden überstehen, weil ihnen mehr Bodenfeuchtigkeit zugänglich ist.A preferred stimulation of root growth as opposed to stimulation of foliage growth as in the present one Attempt could be achieved is particularly important in the case of radishes, because here the root is valuable and usable It is part of the plant, but the stimulation of root growth is also quite general in other plants favorable 'and worth striving for, because this improves the state of health the plant is improved; the plants can survive dry periods more easily because they have more soil moisture is accessible.

Beispiel 3Example 3

Gleiche Mengen "Merion Bluegrass" (Riedgras) wurden auf die Oberflächen von gedüngter Erde in zwei Töpfen, die mit A und B bezeichnet waren, gesät; jeder Topf wies einen Durchmesser von 30,5 cm auf und besaß eine Tiefe von 30,5 cm. Die Töpfe wurden, in Abständen bewässert, so daß der Boden in einem schwach feuchtenEqual amounts of "Merion Bluegrass" (sedge) were added to the Surfaces of fertilized soil in two pots, labeled A and B were marked, sown; each pot was 30.5 cm in diameter and 30.5 cm in depth. The pots were watered at intervals so that the soil in a weakly moist

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Zustand gehalten wurde. Nachdem das Gras in "beiden Topfen "begonnen hatte zu wachsen, wurden in Abständen von 7 Tagen folgende Behandlungen durchgeführt, und zwar jeweils mit je 100 com lösung pro Anwendung:Condition was maintained. After the grass started in "both pots" had to grow, the following treatments were carried out at intervals of 7 days, each with 100 com solution per application:

A. 58 ppm NaOl in WasserA. 58 ppm NaOL in water

B. 58 ppm NaCl + 500 ppm Lipoxidase in Wasser.B. 58 ppm NaCl + 500 ppm lipoxidase in water.

Sechs Wochen nach der ersten Anwendung der Lösungen wurden die Töpfe von der Erde abgebrochen und die Würzelstruktur in der Erde wurde untersucht. Es zeigte sich, daß das Gras in dem Topf, der mit Lipoxidase behandelt worden war, eine sehr viel stärkere Wurzelstruktur entwickelt hatte als das Gras, welches in dem Topf gewachsen war, welcher nur die Kontrollbehandlung erhalten hatte.Six weeks after the first application of the solutions, the pots were broken off from the earth and the root structure in the Earth was examined. It was found that the grass in the pot that had been treated with lipoxidase was a great deal had developed stronger root structure than the grass grown in the pot which was the control treatment only had received.

Beispiel 4Example 4

8 Tomatenpflanzensämlinge der Sorte Hutgers mit etwa gleicher Größe wurden in einem Gewächshaus einzeln in Töpfe mit einem Durchmesser von 25,4 cm gepflanzt. Alle Pflanzen wurden am Anfang mit 7:40:6-NtPoOCtKpOBünger gedüngt und dann noch weitere dreimal im Verlauf des Versuohes mit 5:10:5-N:P2O^K2O-Dünger. Die Temperatur wurde zwischen 12,8 und 18,30C gehalten; alle Pflanzen wurden täglich mit ao viel Wasser bewässert, daß der Boden durchfeuchtet wurde. Die eingetopften Pflanzen wurden in 4 Gruppen von je 2 eingeteilt und am Tag nach dem Pflanzen und dann in 7tägigen Abständen innerhalb der folgenden 98 Tage wie folgt behandelt:Eight tomato plant seedlings of the Hutgers variety of approximately the same size were individually planted in a greenhouse in pots with a diameter of 25.4 cm. All plants were initially fertilized with 7:40: 6 NtPoOCtKpO fertilizer and then three more times in the course of the experiment with 5: 10: 5 N: P 2 O ^ K 2 O fertilizer. The temperature was kept between 12.8 and 18.3 ° C .; all plants were watered daily with a lot of water so that the soil was moistened. The potted plants were divided into 4 groups of 2 each and treated as follows on the day after planting and then at 7-day intervals over the following 98 days:

Kontrolle 58 ppm NaOl in WasserControl 58 ppm NaOL in water

T-1 58 ppm NaQl + 50 ppm Lipoxidase* in WasserT-1 58 ppm NaQl + 50 ppm lipoxidase * in water

T-2 58 ppm NaCl + 500 ppm Lipoxidase* in WasserT-2 58 ppm NaCl + 500 ppm lipoxidase * in water

T-3 58 ppm NaCl + 2000 ppm Lipoxidase* in WasserT-3 58 ppm NaCl + 2000 ppm lipoxidase * in water

■ ♦Sojabohnen-Lipoxidase, bezogen von der Firma PL Biochemie als a ■ ♦ Soybean lipoxidase, obtained from PL Biochemie as a

10 9 8 5 2/186110 9 8 5 2/1861

Die Lösungen wurden jeweils in Mengen von 100 ecm auf die Pflanzen aufgesprüht, bis diese sorgfältig benetzt waren; der Rest der 100 ecm wurde auf den Boden gegossen. Grüne Früchte zeigten sich zuerst 21 Tage nach Beginn des Experimentes an den Pflanzen, die eine Lipoxidase-Behandlung erhielten« Reife Tomaten konnten von den mit lipoxidase behandelten Pflanzen erstmals am 82.Tag des Versuches und erst etwa 2 Wochen später von den Kontrollpflanzen geerntet werden. Der Versuch wurde am 137.Tag (d.h. 55 Tage, nachdem die ersten reifen Tomaten geerntet worden waren) beendet. Die Ergebnisse des Versuches sind in der Tabelle IV zusammengestellt.The solutions were each in amounts of 100 ecm on the Plants sprayed until they were thoroughly wetted; the rest of the 100 cc was poured onto the floor. Green fruits First, 21 days after the start of the experiment, the plants that had received lipoxidase treatment showed “ripe tomatoes” could of the plants treated with lipoxidase for the first time on the 82nd day of the experiment and only about 2 weeks later from the control plants are harvested. The trial was started on day 137 (i.e. 55 days after the first ripe tomatoes were harvested had been ended. The results of the experiment are shown in Table IV.

Behandlungtreatment

Tabelle IVTable IV

Tage nach Kumulative der ersten Zahl reifer Ernte TomatenDays after cumulative of the first number of ripe harvest tomatoes

Kumulatives Kumulatives Gesamtgewicht Durchschnittsgewicht Cumulative Total Cumulative Weight Average Weight

Kontrollecontrol 3030th 88th 564 Gramm564 grams 7171 GrammGram IlIl IlIl T7IT 7 I. 3030th 1212th 1693 a 1693 a 141141 IlIl IlIl T-2T-2 3030th 1515th 1609 ■1609 ■ 107107 IlIl T-3T-3 3030th 1414th 1032 "1032 " 7474 IlIl Kontrollecontrol 3737 1717th 1059 "1059 " * 62* 62 IlIl T-1T - 1 3737 1414th 1921 "1921 " 137137 IlIl T-2T-2 3737 2121 1881 "1881 " 9090 ItIt T-3T-3 3737 2020th 1219 "1219 " 6161 ItIt Kontrollecontrol 5555 3737 1556 "1556 " 4242 ItIt T-1T-1 5555 2323 2172 n 2172 n 9494 T-2T-2 5555 3434 2461 »2461 » 7373 T-3T-3 5555 4444 1821 ■1821 ■ 4141

Aus den vorstehenden Werten ergibt sich deutlich eine vergrößerte Gesamtausbeute bei jeder Konzentration der Lipoxidase-Behandlung an Früchten, wobei das Optimum bei etwa 50 ppm zu liegen scheint... Die Mpoxidase-Behandlung beschleunigte auch das Einsetzen der Reife.The above values clearly show an enlarged Total yield at each concentration of lipoxidase treatment on fruits, the optimum seems to be around 50 ppm ... The Mpoxidase treatment also accelerated the onset the maturity.

10 9 8 5 2/186110 9 8 5 2/1861

Beispiel 5Example 5

Reife grüne Avokadofrüehte wurden von einem örtlichem Händler besorgt und bei 16°C bis zur Benutzung gelagert. Einige der Früchte wurden eine Stunde in eine wässrige Lösung von 500 ppm Lipoxidase (Sojabohnen-Lipoxidase von der Firma PL Biochemicals), die mit 58 ppm NaCl löslich gemacht worden war, getaucht. Me Früchte wurden dann in einen geschlossenen Exsikkator gelegt, der mit Trenndeckeln ausgerüstet war. Entsprechende Fruchtproben, die nicht mit Lipoxidase-Lösung behandelt worden waren, wurden gleichzeitig zur Kontrolle in Exsikkatoren gelegt. Aus dem Versuchs-Exsikkator sowie aus tLen Kontroll-Exsikkatoren wurden periodisch Gasproben abgezogen und auf ihren Äthylen-Gehalt mit Hilfe der Gas-Chromatographie geprüft» Die durch diese Messungen ermittelten Werte der Ä-fchylenbildung nach einer Stunde und nach 18 Stunden im Exsikkator sind in Tabelle V angegeben, und zwar in Mikroliter Äthylen pro Kilogramm Frucht pro Stunde.Ripe green avocado fruits were purchased from a local trader concerned and stored at 16 ° C until use. Some of the fruits were immersed in a 500 ppm aqueous solution for one hour Lipoxidase (soybean lipoxidase from PL Biochemicals), which had been solubilized with 58 ppm NaCl, immersed. Me fruits were then placed in a closed desiccator, which was equipped with separating lids. Corresponding fruit samples that had not been treated with lipoxidase solution, were simultaneously placed in desiccators for control. From the test desiccator and from the control desiccators gas samples were taken periodically and checked for their ethylene content checked with the help of gas chromatography »The values of the α-fchylene formation determined by these measurements after Hour and after 18 hours in the desiccator are given in Table V, in microliters of ethylene per kilogram of fruit per hour.

Tabelle VTable V

Äthylen-Entwicklung aus AvokadosEthylene evolution from avocados

1 h 18 h1 h 18 h

Unbehandelte FruchtUntreated fruit

Wiederholung 1 0 /Ul C3H4AgA 0,068 /Ul C3H4AgA Wiederholung 2 0 /ul C3H4AgA 0,091 /ul O2H4AeA mit Lipoxidase behandelte FruchtRepetition 1 0 / Ul C 3 H 4 AgA 0.068 / Ul C 3 H 4 0 2 AgA repetition / ul C 3 H 4 AgA 0,091 / ul O 2 H 4 AeA treated fruit lipoxidase

Wiederholung 1 0,25 /ul C3H4AgA 0,29 /Ul C3H4AgA Wiederholung 2 0,24 /Ul C3H4AgA 0,31 /ul C3H4AgARepeat 1 0.25 / µL C 3 H 4 AgA 0.29 / µL C 3 H 4 AgA Repeat 2 0.24 / µL C 3 H 4 AgA 0.31 / µL C 3 H 4 AgA

Aus den Werten ergibt sich deutlich die erhöhte Äthylenbildung, die in den von der Pflanze bereits abgetrennten Früchten eintritt, wenn diese mit Lipoxidase behandelt werden. Die um das vierfache erhöhte Äthylenbildung in den mit Lipoxidase behandelten Früchten nach 18 Stunden war -son einer deutlichenThe values clearly show the increased formation of ethylene that occurs in the fruits that have already been separated from the plant, if these are treated with lipoxidase. The fourfold increase in ethylene formation in those treated with lipoxidase Fruits after 18 hours was a distinct one

109&52/1861109 & 52/1861

naeit tief jprpiEro-tt &.&.- der efeaasafctenaeit deep jprpiEro-t t &. & .- der efeaasafcte

,. Me,. Me

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öpffe·.- iaifc einem: Büirolnnessfe^ von 20 cm: wu^deir $ßi 2B: Ms, 25; Söitsa vsm Tätern- HaüesssMeto: (EöKly Scarlet öiobe) sät:., fO- 3fege spite* wtiMeß: üfe Bfläiiaem auf |e; 1Ö i Bzw» TeriEogeii*. Alle EOjaaaen \ wurstem: beim Ef Ian2©ä^ m±t>öpffe .- iaifc a: Büirolnnessfe ^ of 20 cm: wu ^ deir $ ßi 2B: Ms, 25; Söitsa vsm perpetrators- HaüesssMeto: (EöKly Scarlet öiobe) sät:., FO- 3fege spite * wtiMeß: üfe Bfläiiaem auf | e; 1Ö i or »TeriEogeii *. All EOjaaaen \ wurstem: at Ef Ian2 © ä ^ m ± t>

g gt: vm& dieam täiglioH, wahrend; tes geisamteug gt: vm & diam daily, during; tes geisamteu

f lKei3.atif%s: fes ^ersiiofeere mit so-, Vi^e^L Waeser· gewässei^t, . aaß ΈοΜβϊϊχ gixt;: torofiffeaefötet· wst^. Begin&eiidL am %O+TMg:.xisxsk: &em ¥reretBEt\ Mte Eflaazeit eirmraOD wcEöli&atiliicJii· im ?©jöiaiutf dieai föi.g; 4^ lösfeea- wite föigtl iSeHaisiöijft.. assiei; iCD^f©^ wtiMes' mit; ^.fe: tüCi cent: f lKei3.atif% s: fes ^ ersiiofeere with so-, Vi ^ e ^ L Waeser · gewäßi ^ t,. aaß ΈοΜβϊϊχ gixt ;: torofiffeaefotten · wst ^. Begin & eiidL on % O + TMg : .xisxsk: & em ¥ reretBEt \ Mte Eflaazeit eirmraOD wcEöli & atiliicJii · im? © jöiaiutf dieai föi.g; 4 ^lösfeea- wite föigtl iSeHaisiöijft .. assiei; iCD ^ f © ^ wtiMes'with; ^ .fe: tüCi cent:

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Bestiinmt4. Bi<e; Br^elßiÄS^i; itt §üamm:», eiiii^ iir imä ^waarr gjissmmm: mitr denDetermines 4 . Bi <e; Br ^ elßiÄS ^ i; itt §üamm: », eiiii ^ iir imä ^ waarr gjissmmm: mitr den

Vj diiee süeK sarisßbeis efeit: eaifiKätiiigß:gemäß iti teseeac iiVj diiee süeK sarisßbeis efeit: eaifiKätiiigß : according to iti teseeac ii

Tabelle VITable VI

Rote RadieschenRed radishes

Frischgewi clrfc !TrockengewichtFresh weight clrfc! Dry weight

Durchschnitt/Pflanze Durchschnitt/PflanzeAverage / Plant Average / Plant

Behandlung Wurzel Laub Wurzel LaubTreatment root foliage root foliage

Wasser, Kontrol- 2,82 3,01 0,18 0,25Water, control 2.82 3.01 0.18 0.25

Glukose-Oxidase 4,25(50$) 2,83(-6$) 0,25(39$) 0,23(-Glucose Oxidase 4.25 ($ 50) 2.83 (-6 $) 0.25 ($ 39) 0.23 (-

Die Werte zeigen deutlich, daß Glukose-Oxidase eine wachstumsregulierende Wirkung besitzt; sie zeigen insbesondere, daß Glukose-Oxidase vor allem das Wachstum des Wurzelteiles der Pflanze begünstigt, und zwar stärker als die des Laubes. Die Trockengewichts-Ergebnisse beweisen weiterhin, daß durch die Glukose-Oxidase-Behandlung eine tatsächliche Vergrößerung des Gewichtes des Wurzelgewebes erreicht wurde, und nicht nur eine Erhöhung der Wasseraufnahme.The values clearly show that glucose oxidase regulates growth Has an effect; they show in particular that glucose oxidase is mainly the growth of the root part of the Plant favors, and more so than that of the foliage. The dry weight results further demonstrate that the Glucose oxidase treatment actually increases the size of the Weight of the root tissue was reached, and not just an increase in water absorption.

Die bisherigen Beispiele liefern d«n Beweis für die Fähigkeit der Enzyme, positive Wirkungen in Bezug auf die Pflanzenwachstumsregulierung, d.h. größere Fruchtbildung, verstärktes Wurzelwachstum und frühe Reife, hervorzurufen. Die folgenden Beispiele sollen im Gegensatz dazu zeigen, daß die Enzyme, insbesondere bei Anwendung in bestimmten Konzentrationen, auch negative Wirkungen hinsichtlich der Pflanzenwachstumsregulierung bei bestimmten Pflanzenarten haben können; infolgedessen kann die Erfindung auch dazu dienen, das Wachstum bestimmter Pflanzen zu verringern oder zu unterdrücken. Welche Mengen zur Erzielung eines ppsitiven oder negativen Einflusses auf die Wachstumsregulierung im Einzelfall notwendig sind, kann ohne Vorversuche nicht gesagt werden; diese Vorversuche lassen sich jedoch leicht in bekannter V/eise durchführen.The previous examples provide proof of the ability of the Enzymes, positive effects on plant growth regulation, i.e. greater fruiting, increased root growth and early ripeness. The following examples in contrast, are intended to show that the enzymes, especially when used in certain concentrations, also can have negative effects on plant growth regulation in certain plant species; as a result, can the invention also serve to reduce or suppress the growth of certain plants. What amounts to achieve a positive or negative influence on growth regulation are necessary in individual cases, cannot be said without preliminary experiments; however, these preliminary tests can be carried out easily Carry out in a known manner.

109852/1881109852/1881

Beispiel 7Example 7

Erben (Pisum sativum von Alaska) wurden vor dem Pflanzen 3,5 Stunden in einer 0,1$igen HgC^-iosung sterilisiert. In 12 Τοη-töpfe mit einem Durchmesser von 15 cm wurden je 4 Erbsen pro Topf eingesät. Alle Pflanzen wurden während des Versuches täglich bewässert, indem man den Boden durchfeuchtete. Sobald alle Pflanzen die ersten Blüten zeigten, wurden sie in zwei Gruppen A und B eingeteilt, die einaal wöchentlich wie folgt behandelt wurden:Heirs (Pisum sativum from Alaska) were 3.5 before planting Sterilized in a 0.1% HgC ^ solution for hours. In 12 Τοη pots With a diameter of 15 cm, 4 peas were sown per pot. All plants were daily during the experiment watered by soaking the soil. As soon as all the plants showed the first flowers, they were divided into two groups A and B divided, which were treated once a week as follows:

A. 58 ppm FaCl in WasserA. 58 ppm FaCl in water

B. 58 ppm NaCl + 500 ppm Lipoxidäse* in WasserB. 58 ppm NaCl + 500 ppm lipoxidase * in water

*Sojabohnen-Lipoxidase, bezogen von der Firma PL Biochemie als.* Soybean lipoxidase, obtained from PL Biochemie as.

Zur Behandlung wurde jeder Topf mit einem 100 ccm-Anteil der entsprechenden Lösung besprüht, bis die Pflanzen gut befeuchtet waren; der Rest der 100 ecm wurde auf den Boden gegossen. Erbsen enthaltende Hülsen wurden am 36., 43. und 49. Tag nach Beginn der Behandlung geerntet. Das Gesamtgewicht der geernteten Hülsen von den Pflanzen, die die Kontrollbehandlung erfahren hatten, betrug 179,9 gj im Vergleich dazu lag das Gewicht für die mit Lipoxidäse behandelten Pflanzen bei 117,9 g. Durch die LipoxitlaBe-Behandlung der Erbsenpflanzen ließ sich also in den geprüften Konzentrationen eine 35$ige Abnahme der Ausbeute erreichen.Each pot was treated with a 100 ccm portion of the corresponding Solution sprayed until the plants were well moistened; the rest of the 100 cc was poured onto the floor. peas pods containing were harvested on the 36th, 43rd and 49th days after the start of treatment. The total weight of the pods harvested of the plants that had received the control treatment was 179.9 gj compared with the weight for those with Lipoxidase treated plants at 117.9 g. With the LipoxitlaBe treatment of the pea plants, a 35% decrease in yield could be achieved in the concentrations tested.

Beispiel 8Example 8

In 4 Tontöpfe mit einem Durchmesser von 20 cm wurden je 20 bis 25 rote Radieschensamen (Early Scarlet Globe) eingesät. 10 Tage nach dem Säen wurden die Pflanzen auf je 10 pro Topf verzogen. Alle Pflanzen wurden beim Pflanzen mit 7:40:6-Ή:Έ20^:K2O gedüngt und dann täglich während des gesamten Verlaufes des Versuches mit so viel Wasser bewässert, daß der Boden durchfeuchtet war. Beginnend am 10.Tag nach dem Pflanzen wurden die Pflanzen20 to 25 red radish seeds (Early Scarlet Globe) were sown each in 4 clay pots with a diameter of 20 cm. 10 days after sowing, the plants were pulled to 10 per pot. All plants were fertilized during planting with 7:40 : 6-Ή: Έ 2 0 ^: K 2 O and then watered daily during the entire course of the experiment with enough water that the soil was moistened. Starting on day 10 after planting, the plants became

109852/1861109852/1861

einmal wöchentlich in den, folgenden 4 Wochen wie folgt "brehandelte 2 ESpf e wurden, mit It)O com einer wässrigen Lösung foesprffirfcr die 80 ppm lieEcet-feioh-Peroxtaase (iianm Research li^orairoisfcBaas.,, Orangeburg,, Hew Yorifc,. IFSA), enthielt. Bis anderen tireiäeni ait· 100 ecm Wasser "oesiKPatiti, 4 Tage; Bach ά&τ once a week in the, following 4 weeks as prime follows brehandelte "2 ESpf e were com with It) O r foesprffirfc an aqueous solution containing 80 ppm lieEcet-feioh-Peroxtaase (iianm Research li ^ orairoisfcBaas. ,, ,, Orangeburg Hew Yorifc, . IFSA), contained. Until other tireinern i ait · 100 ecm of water "oesiKPatiti, 4 days ; Bach ά & τ

wurden die Pflansea; geBrntei* Die EÜLaiiaea wurden waschen,, die Oberteile aBgeschßitteB und die Radieschen und- dae Iiatih von jedem Topf wurden zusammen gewogen» worauf man das !•rischgewicht pro Pflanze fereehnete.. Die; Hadiesoiieii und· dös Laub wurden dann 24 Stunden "bei 1O5°C in einen Ofen gelegt'*, worauf man anschließend, das: Epockengewichti "bestiiBiEite;*, Die Irgebnisse, in Gramm,, sind in iaBelXe ¥11 zusammengestellt^ und zwar zusammen mit den gewicht sprozentualen Unter schieden, di« sieh feei der erfindungsgeitäfien Behandlung im Terglseich sur Köntroll-"behandlung ergeben.became the Pflansea; geBrntei * The EÜLaiiaea were Wash the tops and the radishes and dae Iiatih from each pot were weighed together "on what one that ! • Average weight per plant removed .. The; Hadiesoiieii and dös Leaves were then "placed in an oven at 105 ° C for 24 hours," whereupon one then, the: Epockengewichti "bestiiBiEite; *, the results, in grams ,, are put together in iaBelXe ¥ 11 ^ namely together with the weight percentage differences, that is, see Feei of the treatment according to the invention in the Terglseich sur Köntroll- "treatment result.

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Behandlung Wurzel EauSb ¥ur«el:Treatment of the root EauSb ¥ ur «el:

Kontrolle, 2,82 %Q1\ 0tm 0,25tControl, 2.82 % Q1 \ 0 t m 0.25 t

Peroxidase 1Peroxidase 1

Die Ergebnisse zeigen, daß das Berosälässe^Enzym in den untere suchten EonzLentratiaiien, eüiec negative Wirfemg auf diars Wachstum der Wurzeln und des Itauües· von rotesi Eaöiesehesti hat«.The results show that the Berosälaß ^ enzyme in the lower We looked for centrifugal factors, eüiec negative effects on the growth of the roots and the Itauües · from rotesi Eaöiesehesti hat «.

Bedapieä. 9Bedapieä. 9

itt 4 Tontöpf.«· mit; eineiBif BrnriohmiesÄer: von ZQ am mxF&&BL jjät 20 25 weifi& RettiohsaBiien: (iKhitfeiee Ecdiai:©) «iögef«ätv« 10 Tj&g»: nach; desritt 4 clay pots. «· with; einiBif BrnriohmiesÄer: from ZQ am mxF && BL jjät 20 25 weifi & RettiohsaBiien: (iKhitfeiee Ecdiai: ©) «iögef« ätv «10 Tj & g»: after; desr

Säen wurden die'Pflanzen auf je 10 pro Topf verzogen. Alle Pflanzen wurden mit 7:40:6-ItPpOc:KpO beim Pflanzen gedüngt und dann täglich während des gesamten Verlaufes des Versuches mit so viel Wasser bewässert, daß der Boden gut durchfeuchtet war. Beginnend am 10.Tag nach dem Pflanzen wurden alle Pflanzen einmal pro Woche für die folgenden 4 Wochen wie folgt behandelt: 2 Töpfe wurden mit 100 ecm einer "wässrigen Lösung besprüht, die 93 ppm Giukose-Oxidase (wie im Beispiel 6 beschrieben) enthielt,, Die anderen beiden Töpfe wurden mit 100 ecm Wasser besprüht. 4 Tage nach der letzten Anwendung wurden die Pflanzen geerntete Die Pflanzen wurden gewaschen, die Oberteile wurden abgeschnitten ™ und die Rettiche und das Laub von jedem Topf wurden zusammen gewogen, worauf man das Frischgewicht pro Pflanze berechnetes Die Rettiche und das Laub wurden dann 24 Stunden bei 105°C in einen Ofen gelegt, worauf man das Trockengewicht bestimmte. Die Ergebnisse, in Gramm, sind in Tabelle VIII zusammengestellt, und wiederum zusammen mit den gewichtsprozentualen Unterschieden9 die sich bei der erfindungsgemäßen Behandlung im Vergleich zu der Kontrollbehandlung ergeben.The plants were sown to 10 per pot. All plants were fertilized with 7:40: 6-ItPpOc: KpO during planting and then irrigated daily during the entire course of the experiment with enough water that the soil was well moistened. Starting on the 10th day after planting, all plants were treated once a week for the following 4 weeks as follows: 2 pots were sprayed with 100 ecm of an "aqueous solution" containing 93 ppm of glucose oxidase (as described in Example 6), The other two pots were sprayed with 100 cc of water, the plants were harvested 4 days after the last application, the plants were washed, the tops were cut off and the radishes and foliage from each pot were weighed together and the fresh weight per The radishes and foliage were then placed in an oven at 105 ° C. for 24 hours, after which the dry weight was determined The results, in grams, are summarized in Table VIII, and again together with the weight percentage differences 9 that arise in result in treatment according to the invention compared to the control treatment.

Tabelle VIIITable VIII

Weiße RetticheWhite radishes

Prischgewicht TrockengewichtBasic weight dry weight

Durchschnitt/Pflanze Durchschnitt/Pflanze (*) ' (*) Average / Plant Average / Plant (*) '(* )

Behandlung Wurzel Laub Wurzel LaubTreatment root foliage root foliage

Wasser,Kontrolle 4,13 5,51 0,23 0,43Water, control 4.13 5.51 0.23 0.43

Glukose-Oxidase 2,90(-30#) 5,83(6$) 0,1S(-22$) O945(5$)Glucose Oxidase 2.90 (-30 #) 5.83 ($ 6) 0.1S (-22 $) O 9 45 (5 $)

Die vorstehenden Werte zeigen, daß Glukose-Oxidase in den geprüften Konzentrationen eine negative Wirkung auf das Wachstum der Wurzeln von weißen Rettichen hat.The above values show that glucose oxidase is present in the tested Concentrations has a negative effect on the growth of the roots of white radishes.

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Beispiel 10Example 10

Kürbis (Acorn squash) wurde im Freien in parallelen Reihen* gepflanzt. Etwa 4 Wochen nach dem Pflanzen (länge der Ranken etwa 0,6 m) wurde eine Reihe einzelner Kürbispflanzen mit einer Lösung besprüht, die 7,4 g pro Liter Lipoxidase enthielt ( das entspricht etwa 500 ppm aktiver Lipoxidase); die wässrige Behandlungslösung enthielt auch noch 0,1 $ "Tween 20" als Emulgator. Die Pflanzen wurden besprüht, bis die Lösung herunterlief, d.h. mit etv/a 10 bis 20 ml pro Pflanze. Die Kontrollpflanzen wurden nicht behandelt. Beim Ernten wurden die Kürbisse mit der gleichen Anzahl von Behandlungen und die Kontrollpflanzen abgenommen und gewogen. Die Kontrollpflanzen lieferten 16,2 kg reifen Kürbis, die mit Lipoxidase behandelten Pflanzen dagegen 21,1 kg reifen Kürbis. Diese Ergebnisse zeigen deutlich, daß durch die Lipoxidase eine Erhöhung der geernteten Kürbismenge erreicht werden konnte.Pumpkin (Acorn squash) was planted outdoors in parallel rows *. About 4 weeks after planting (length of the tendrils about 0.6 m), a number of individual pumpkin plants with a Sprayed solution containing 7.4 g per liter of lipoxidase (equivalent to about 500 ppm active lipoxidase); the aqueous treatment solution Also contained $ 0.1 "Tween 20" as an emulsifier. The plants were sprayed until the solution ran down, i. E. with about 10 to 20 ml per plant. The control plants were not treated. When harvesting, the pumpkins were made with the same Number of treatments and the control plants removed and weighed. The control plants provided 16.2 kg of ripe pumpkin, the plants treated with lipoxidase, on the other hand, 21.1 kg of ripe pumpkin. These results clearly show that by the lipoxidase an increase in the amount of pumpkin harvested could be achieved.

Gartenkürbissamen (Jack-o'Lantern) wurden auf 5 Hügel gepflanzt, und zwar je 4 Pflanzen pro Hügel; nachdem die Ranken etwa 0,6 m lang waren, wurden sie mit Lipoxidase besprüht (7,4 g pro Liter; 500 ppm aktive Lipoxidase; 0,1 ^S "Tween 20" in Wasser), und zwar in der bereits beschriebenen Weise. 5 Hügel mit Kontrollpflanzen, die ebenfalls je 4 Pflanzen pro Hügel trugen, wurden mit Wasser behandelt. Nach dieser einmaligen Behandlung ließ man die Kürbisse reifen; bei der Ernte lieferten die Kontrollpflanzen 654 kg reifen Kürbis, wogegen die mit Lipoxidase behandelten Pflanzen 1035 kg reifen Kürbis lieferten.Pumpkin seeds (Jack-o'Lantern) were planted on 5 hills, namely 4 plants per hill; after the tendrils were about 0.6 m long, they were sprayed with lipoxidase (7.4 g per liter; 500 ppm active lipoxidase; 0.1 ^ S "Tween 20" in water), namely in the manner already described. 5 mounds with control plants, each of which also carried 4 plants per mound, were filled with water treated. After this one-time treatment, the pumpkins were allowed to ripen; the control plants yielded at harvest 654 kg of ripe pumpkin, whereas the lipoxidase-treated plants yielded 1035 kg of ripe pumpkin.

Die vorstehend beschriebene Arbeitsweise wurde bei Sojabohnen, Zuckerrüben, Zuckerrohr,' Kiefern, Ananas und Chrysanthemen wiederholt. Bei den Sojabohnen erhöhte sich die Gesamtausbeute als Folge der Lipoxidase-Behandlung. Bei Zuckerrüben und Zuckerrohr,' die mit Lipoxidase behandelt worden waren, konnte ein erhöhter Zuckergehalt festgestellt werden. Bei den Kiefern konnte als Folge der Lipoxidase-Behandlung eine Zunahme der Callulose-The procedure described above was applied to soybeans, sugar beets, sugar cane, pines, pineapples and chrysanthemums repeated. In the case of soybeans, the overall yield increased as a result of the lipoxidase treatment. With sugar beets and sugar cane, ' who had been treated with lipoxidase, an increased sugar content could be determined. With the pines could as a result of the lipoxidase treatment an increase in callulose

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Bildung festgestellt werden. Bei Ananas wurde Lipoxidase-Lösung in die Kronenblätter gegossen, was zu einer Zunahme der Blüten führte. Bei den Chrysanthemen wurde durch die Anwendung von Lipoxidase-Lösungen eine verstärkte Verzweigung "beobachtet.Education to be noted. In the case of pineapple, lipoxidase solution was used poured into the petals, which led to an increase in flowers. In the case of chrysanthemums, the application of Increased branching "observed in lipoxidase solutions.

Beispiel 11Example 11

Karottensamen wurden in einer Reihe in einem Feld gesät. Nachdem die Samen etwa 5 Wochen in der Erde waren (Pflanzengröße etwas 7,6 TdIs 12,7 cm) wurden die Pflanzen mit einer Mischung von lipoxidase in Wasser "besprüht (7,4 g Lipoxidase pro liter; ca. 500 ppm aktive Lipoxidase; 0,1 Gew.-^ "Tween 20" als Emulgator). Die Behandlung wurde an einer 12 m langen Reihe mit 5 Wochen alten Karottenpflanzen wie folgt durchgeführt: die ersten 3 m der Reihe wurden mit Lipoxidase-Lösung besprüht, die nächsten 3 m blieben unbehandelt; weitere 3 m wurden mit Lipoxidase besprüht und die letzten 3 m der Reihe wurden nicht behandelt. Bei der Ernte ergaben die nicht behandelten Karotten ein Durchschnittsgewicht von 757 g pro 0,3 m der Reihe. Die mit Lipoxidase behandelten Karotten ergaben 826 g/0,3 m Reihe. Diese Ergebnisse zeigen, daß Lipoxidase in den verwendeten Konzentrationen eine erhebliche Steigerung der Fruchtmenge bei Karotten schon nach einmaliger Behandlung der Pflanzen herbeiführt.Carrot seeds were sown in a row in a field. After the seeds have been in the ground for about 5 weeks (plant size a bit 7.6 TdIs 12.7 cm) the plants were treated with a mixture of lipoxidase in water "sprayed (7.4 g lipoxidase per liter; approx. 500 ppm active lipoxidase; 0.1 wt .- ^ "Tween 20" as an emulsifier). The treatment was carried out on a 12 m long row of 5 week old carrot plants as follows: the first 3 m the row were sprayed with lipoxidase solution, the next 3 m remained untreated; another 3 m were sprayed with lipoxidase and the last 3 m of the row were not treated. When harvested, the untreated carrots gave an average weight of 757 g per 0.3 m of row. The lipoxidase treated carrots gave 826 g / 0.3 m row. These results show that lipoxidase in the concentrations used already resulted in a considerable increase in the amount of fruit in carrots causes a single treatment of the plants.

Gurken wurden in einem Gewächshaus gepflanzt, die man dort bis zu dem "3-volle-Blätter-Stadium" reifen ließ. Zu diesem Zeitpunkt wurden 6 Pflanzen mit Wasser besprüht, 6 Pflanzen mit einer 0,1 gewiclrfcsprozentigen Lösung von "Tween 20" und 6 Pflanzen mit einer wässrigen Lösung, die 1 g pro Liter Glukose-Oxidase (ca. 95 ppm aktive Glukose-Oxidase) und 0,1 fo "Tween 20" enthielt. Die innerhalb einer Zeitspanne von 12 Wochen an den Pflanzen gebildeten Blüten wurden gezählt und die Anzahl der weiblichen Blüten bestimmt. (Die weiblichen Blüten sind die, welche Gurken bilden.) Bei der Wasser-Kontrollbehandlung waren 24,2 fo der Blüten weiblich; bei der "Tween 20"-Kontrollbehandlung waren 31 $ der Blüten weiblich; bei der Glukose-Oxidase-BehandlungCucumbers were planted in a greenhouse and allowed to ripen to the "3 full leaf stage". At this point in time 6 plants were sprayed with water, 6 plants with a 0.1 percent by weight solution of "Tween 20" and 6 plants with an aqueous solution containing 1 g per liter of glucose oxidase (approx. 95 ppm of active glucose oxidase) and 0.1 fo "Tween 20". The flowers formed on the plants within a period of 12 weeks were counted and the number of female flowers was determined. (The female flowers are those which produce cucumbers.) In the water control treatment, 24.2% of the flowers were female; in the "Tween 20" control treatment, 31% of the flowers were female; in glucose oxidase Beh a MINATION

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waren 48 CJ> der Blüten weiblich. Diese Daten zeigen deutlich, daß durch die Glukose-Oxidase-Behandlung in den angegebenen Konzentrationen die Zahl der weiblichen Blüten an den Gurkenpflanzen wesentlich erhöht werden konnte.48 C J> of the flowers were female. These data clearly show that the number of female flowers on the cucumber plants could be increased significantly by the glucose oxidase treatment in the specified concentrations.

Beispiel 12Example 12

Apfelbäume (Red Delicious) wurden willkürlich aus zwei ReihenApple trees (Red Delicious) were arbitrarily made from two rows

—5 wachsender Bäume ausgewählt und mit wässrigen 1 χ 10 , molaren Lipoxidase-Lösungen behandelt, die auch 0,5 $ "Tween 20" enthielten. Eine weitere Gruppe von Apfelbäumen wurde mit einer Mischung behandelt, die aus 1 χ 10 molarer Glukose-Oxidase (ca. 95 ppm aktives Enzym) und 0,5 "Tween 20" bestand«, Kontrollgruppen von Apfelbäumen wurden mit 0,5 $ "Tween 20" in Yfasser bzw. gar nicht behandelt. Die Behandlung wurde so durchgeführt, daß die Yersuchslösungen und die Kontroll-Lösungen einmal 13 Tage vor der Ernte bis zur vollständigen Benetzung, d.h. bis zum Ablaufen von den Blättern, aufgebracht wurde. Bei der Ernte wurden Lehren verwendet, mit denen die Kraft gemessen wurde, die nötig war, um die Frucht von dem Baum zu trennen. Im Durchschnitt war bei den mit "Tween 20" behandelten Äpfeln und bei den nicht behandelten Äpfeln eine Kraft von etwa 1,4 kg erforderlich, um einen Apfel von dem Baum zu entfernen. Die Früchte, die mit Lipoxidase- und Glukose-Oxidase-Lösungen behandelt worden waren, erforderten eine geringere Kraft zur Entfernung vom Baum als die Kontrollfrüchte. Glukose-Oxidase und lipoxidase verringern also in den angewandten Konzentrationen bei wachsenden Äpfeln die Kraft, die erforderlich ist, diese von den B-äumen abzulösen.—5 growing trees selected and treated with aqueous 1 × 10 molar lipoxidase solutions which also contained 0.5 $ "Tween 20". Another group of apple trees was treated with a mixture consisting of 1 × 10 molar glucose oxidase (approx. 95 ppm active enzyme) and 0.5 ° "Tween 20", control groups of apple trees were given 0.5% "Tween 20" in Yfasser or not dealt with at all. The treatment was carried out in such a way that the test solutions and the control solutions were applied once 13 days before harvest until they were completely wetted, ie until the leaves had run off. Doctrines were used at harvest to measure the force required to separate the fruit from the tree. On average, the "Tween 20" treated apples and the untreated apples required about 1.4 kg of force to remove an apple from the tree. The fruits treated with lipoxidase and glucose oxidase solutions required less force to remove from the tree than the control fruits. Glucose oxidase and lipoxidase in the applied concentrations reduce the force required to detach them from the trees in growing apples.

Die vorstehend beschriebene Arbeitsweise wurde mit lösungen, die lipoxidase und Glukose-Oxidase in entsprechenden Konzentrationen enthielten, wiederholt,und zwar bei Zitrusfruchtbäumen, d.h. Organgenbäumen, limonenbäumen, Zitronenbäumen, Manda-rinenbäumen und Grapefruitbäumen; in jedem Fall ließen sich die Früchte leichter vom Baum abtrennen. Entsprechende Ergebnisse, d.h. eine leichtere Abtrennung der Früchte ließen sich auch bei Steinobst erreichen, wenn diese mit wässrigen lipoxidase- oder Glukose-The procedure described above was carried out with solutions containing lipoxidase and glucose oxidase in appropriate concentrations contained, repeatedly, on citrus trees, i.e. Orange trees, lemon trees, lemon trees, mandarin trees and grapefruit trees; in either case, the fruit was easier to separate from the tree. Corresponding results, i.e. a Easier separation of the fruits could also be achieved with stone fruits if they were treated with aqueous lipoxidase or glucose

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Oxidase-Lösungen behandelt wurden; entsprechende Versuche wurden bei Kirschen, Pfirsichen, Aprikosen sowie bei Weintrauben und Oliven durchgeführt. Auch bei Kernfruchtbäumen und -büschen ließen sich entsprechende Effekte hinsichtlich der Ablösung der Früchte erzielen. Beispielsweise läßt sich bei Birnbäumen, Pflaumenbäumen und Granatapfelbäumen bei einer Behandlung mit wässrigen lösungen sowohl mit Lip'oxidase als auch mit- Glukose-Oxidase (jeweils 50 000 ppm in wässriger Lösung) etwa 2 Wochen vor der Ernte eine erhebliche Verminderung der Kraft erreichen, die notwendig ist, um die entsprechenden Früchte von den Zweigen abzutrennen.Oxidase solutions have been treated; Corresponding tests were carried out on cherries, peaches, apricots as well as on grapes and olives. Corresponding effects with regard to the detachment of the fruit could also be achieved in pome trees and bushes. For example, in the case of pear trees, plum trees and pomegranate trees, when treated with aqueous solutions with both lipid oxidase and glucose oxidase (50,000 ppm in each case in aqueous solution), a considerable reduction in strength can be achieved about 2 weeks before harvest is necessary to separate the corresponding fruits from the branches.

Die vorstehend beschriebene Art der Anwendung sowohl von Lipoxidase als auch von Glukose-Oxidase auf Nußbäume wie Walnußbäume, Pecannußbäume und Macadamiannußbäume etwa 14 Tage vor der Ernte führte ebenfalls zu einer erheblichen Verringerung der Kräfte, die notwendig sind, um die reifen Früchte von den Zweigen abzulösen.The type of application described above both by lipoxidase as well as glucose oxidase on nut trees such as walnut trees, pecan trees and macadamias about 14 days before the Harvesting also resulted in a significant reduction in the forces necessary to remove the ripe fruit from the branches to replace.

Die Anwendung von wässrigen Lösungen von Lipoxidase bzw. Glukose-Oxidase auf Kornfrüchte wie Weizen, Roggen, Reis und Hafer in einem V/achs turns stadium der Pflanze, in welchem diese etwa 20 cm hoch sind,(etwa 2 Wochen nach dem die Spitzen über dem Boden erscheinen) führt zu einer erheblichen Erhöhung der Kornmenge, die geerntet werden kann.The application of aqueous solutions of lipoxidase or glucose oxidase on grain crops such as wheat, rye, and rice Oats in a V / achs turns stage of the plant, in which they are about 20 cm high, (about 2 weeks after the tips are over appearing on the ground) leads to a significant increase in the amount of grain that can be harvested.

Beispiel 13Example 13

Für die Versuche wurden 4 behandelte Gummibäume und 4 nicht behandelte Kontrollbäume der Art Hevea Brasiliensis verwendet. Ein 5 cm großer Bereich unter dem Zapfschnitt wurde freigescharrt; an dieser Stelle wurden die Versuchschemikalien aufgebracht. Die Enzyme wurde in 40$igem Glycerin gelöst, und zwar in einer Konzentration von 2,5 $ aktivem Enzym. Die Testlösungen wurden auf die erwähnte Stelle gestrichen. Nachdem die aufgebrachte Lösung getrocknet war, wurde Palmöl über die stelle gestrichen, die Bäume wurden gezapft und der Latex wurde von4 treated rubber trees and 4 untreated control trees of the species Hevea Brasiliensis were used for the experiments. A 5 cm area under the tenon was scratched free; at this point the test chemicals were applied. The enzyme was dissolved in 40% glycerin, namely at a concentration of 2.5 $ active enzyme. The test solutions were deleted at the place mentioned. After the applied solution dried, palm oil was put over the spot painted, the trees were tapped and the latex was made of

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jedem Baum nach, einem vorher "bestimmten Schema eingesammelt. Der Kautschuk wurde aus dem Latex abgetrennt und getrocknet. Folgende Ergebnisse wurden erzielt, die die Erhöhung der Produktion, basierend auf den Trockenkautschuk-Analysen, beweisen.collected from each tree according to a predetermined scheme. The rubber was separated from the latex and dried. The following results have been achieved, which increase production, based on the dry rubber analyzes.

Behandlungtreatment durchschnitt
liche Ausbeute
(g)
pro Baum/Zapf
stelle
average
lich yield
(G)
per tree / tap
Job
% Erhöhung % Increase Zeit nach der
Anwendung
(Wochen)
Time after
use
(Weeks)
Glukose-OxidaseGlucose oxidase 153,1153.1 8888 22 Kontrollecontrol 81,381.3 LipoxidaseLipoxidase 185,7185.7 128128 11 Kontrollecontrol 81,681.6 Ascorbiiisäure-
Oxidase
Ascorbic acid
Oxidase
176,7176.7 7777 22
Kontrollecontrol 40,840.8 PeroxidasePeroxidase 138,4138.4 7070 22 Kontrollecontrol 81,381.3

Aus den vVerten ergibt sich deutlich, daß eine Erhöhung des Gummiflusses eintritt, wenn die Bäume mit Lipoxidase- bzw. Glukose-Oxidase-Enzymen gemäß der Erfindung behandelt werden,The vVerts clearly show that an increase in the Rubber flow occurs when the trees are exposed to lipoxidase resp. Glucose oxidase enzymes are treated according to the invention,

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Claims (8)

PatentansprücheClaims 1. Verfahren zur Pflanzenwachstums-Regulierung, dadurch gekennzeichnet, daß man die Pflanzen mit einem Enzym aus der Gruppe der Peroxidase, Lipoxidase, Glukose-Oxidase, Monoamin-Oxidase, Diamin-Oxidase, Xanthin-Oxidase, Aldehyd-Oxidase, ß-GsLactosidase, Glycollat-Oxidase und Lactat-Oxidase behandelt. 1. A method for plant growth regulation, characterized in that that the plants with an enzyme from the group of peroxidase, lipoxidase, glucose oxidase, monoamine oxidase, Diamine oxidase, xanthine oxidase, aldehyde oxidase, ß-Gslactosidase, glycollate oxidase and lactate oxidase. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Lipoxidase ist.2. The method according to claim 1, characterized in that the enzyme is lipoxidase. 3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Glukose-Oxidase ist.3. The method according to claim 1, characterized in that the Enzyme is glucose oxidase. 4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Peroxidase ist.4. The method according to claim 1, characterized in that the enzyme is peroxidase. 5. Verfahren zur Pflanzenwachstums-Regulierung, dadurch gekennzeichnet, daß man die Pflanzen mit einem der Enzyme gemäß Anspruch 1 zusammen mit dem dem gewählten Enzym entsprechenden Substrat, welches in der etwa 0,01- bis etwa 10-fachen Menge des Gewichtes an Enzym verwendet wird, behandelt.5. A method for regulating plant growth, characterized in that that the plants with one of the enzymes according to claim 1 together with the enzyme corresponding to the selected Substrate which is used in about 0.01 to about 10 times the amount by weight of the enzyme. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das ) Enzym und das Substrat gleichzeitig aufgebracht werden.6. The method according to claim 5, characterized in that the ) enzyme and the substrate are applied simultaneously. 7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Lipoxidase ist und daß das Substrat aus Linolsäure, Linolensäure oder Arachidonsäure besteht.7. The method according to claim 6, characterized in that the enzyme is lipoxidase and that the substrate consists of linoleic acid, Linolenic acid or arachidonic acid. 8. Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Lipoxidase ist und daß das Substrat aus Linolsäure besteht, welche in der etwa 0,1- bis 5-fachen Menge des Gewichtes an Enzym verwendet wird.8. The method according to claim 7, characterized in that the enzyme is lipoxidase and that the substrate is made of linoleic acid which is used in about 0.1 to 5 times the amount of the weight of enzyme. Für The Procter & Gamble Company, v Cincinnati, Ohio, USAFor The Procter & Gamble Company, v Cincinnati, Ohio, USA 109852/1861109852/1861 RechtsanwaltLawyer
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