DE20312150U1 - System for determining beta-glucan in beverages, comprises buffered solution of dye that forms colored complex with beta-glucan, provides rapid results and uses standard instruments - Google Patents

System for determining beta-glucan in beverages, comprises buffered solution of dye that forms colored complex with beta-glucan, provides rapid results and uses standard instruments Download PDF

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Abstract

Detection system for determination of beta -glucan (I) in (a) beer, wine, fruit juices or their processing precursors, e.g. malt, wort, mash or young beer, or (b) other (I)-containing solutions, comprises 1-3 reagent solutions in volumes of 5-5000 ml, instructions and a pipetting scheme.

Description

1. Gegenstand der Endung1. Subject of the ending

Gegenstand der Erfindung ist ein Nachweissystem für gelöste β-Glucane in verschiedenen Flüssigkeiten, speziell Bier, Wein und Fruchtsaft sowie in allen Prozessvorstufen, wie z.B. Malz, Würze und Maische, Jungwein.The invention relates to a Detection system for dissolved β-glucans in different liquids, especially beer, wine and fruit juice as well as in all process stages, such as. Malt, seasoning and mash, young wine.

β-Glucane sind hochmolekulare Stoffe aus verzweigten und unverzweigten Glucose-Polymerketten (siehe Anlage 1). Sie können während der Bier- sowie der Wein- und Fruchtsaftfiltration zu deutlichen Einbußen in Qualität und Quantität führen. So wirken sie sich im Brauprozess negativ auf Läuterzeit, Extraktausbeute sowie die Stabilität des fertigen Bieres aus. Aber auch bei der Filtration von Weinen, Fruchtsäften, Würze und Bier stellen sie durch ihre Fähigkeit, plötzlich Gele und Filme zu bilden, ein erhebliches verfahrenstechnisches Problem dar. Dies wird besonders beim zunehmenden Einsatz von Sterilfiltrationen deutlich, da die eingesetzten Membranen schnell verblocken können.β-glucans are high molecular weight substances from branched and unbranched glucose polymer chains (see Attachment 1). You can while the beer, wine and fruit juice filtration losses in quality and quantity to lead. So they have a negative effect on refining time, extract yield and in the brewing process the stability of the finished beer. But also in the filtration of wines, Fruit juices, Seasoning and Beer make them by their ability suddenly Forming gels and films is a significant procedural one Problem. This becomes particularly apparent with the increasing use of sterile filtrations clear, since the membranes used can block quickly.

Die Prozessführung, insbesondere im Bereich der Filtration, kann daher wesentlich erleichtert und stabilisiert werden, wenn mit Hilfe eines einfach zu handhabenden Nachweissystems in kurzer Zeit Messwerte zur Verfügung gestellt werden können, anhand derer die Prozesssteuerung auf die aktuelle β-Glucan-Konzentration angepasst werden kann.Litigation, especially in the area filtration, can therefore be much easier and stabilized if with the help of an easy-to-use detection system measured values can be made available in a short time whose process control is adjusted to the current β-glucan concentration can be.

Mit der Erfindung wurde das Ziel verfolgt, ein Nachweissystem für den Parameter β-Glucan zu entwickeln, welches in der industriellen Anwendung einfach und kostengünstig zu handhaben ist und in kurzer Zeit eine Aussage über den β-Glucangehalt in verschiedenen Prozessstufen erlaubt.With the invention the goal became tracked, a detection system for the parameter β-glucan to develop which is simple and easy in industrial application economical is to be handled and in a short time a statement about the β-glucan content allowed in different process stages.

Weiterhin sollte ein Nachweissystem entwickelt werden, welches

  • – durch unterschiedliche Zusammensetzung der Reagenzlösung auf unterschiedliche Messaufgaben der Anwender angepasst werden kann
  • – in Verbindung mit allen optischen Messinstrumenten anwendbar ist, die eine Ermittlung der Extinktion nach dem Lambert-Beer'schen Gesetz zulassen
  • – einen der Praxis entsprechenden Messbereich aufweist und unempfindlich gegenüber den für die oben genannten Matrices typischen Inhaltstoffe ist.
Furthermore, a detection system should be developed which
  • - Can be adapted to different measuring tasks of the user by different composition of the reagent solution
  • - Can be used in conjunction with all optical measuring instruments that allow the absorbance to be determined in accordance with Lambert-Beer law
  • - Has a practical measuring range and is insensitive to the ingredients typical for the matrices mentioned above.

Die in Abhängigkeit von der Messaufgabe notwendigen Reagenzien sollten in ein bis zwei Reagenzlösungen stabilisierbar sein, um eine einfache Handhabung und einen automatisierten Einsatz des Nachweissystems zu ermöglichen.Depending on the measurement task necessary reagents should be stabilized in one or two reagent solutions to be easy to use and automated to use of the detection system.

2. Eingeführte Verfahren zur Bestimmung des β-Glucangehaltes2. Established procedures for determination of the β-glucan content

Neben enzymatischen Nachweisverfahren beruhen die derzeit häufigsten angewendeten Analysenmethoden auf dem Prinzip der Fließinjektionsanalyse (FIA) bzw. der Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC), mit denen das in den Proben enthaltene β-Glucan nach Komplexbildung mit einem fluoreszierenden Stoff (Calcofluor) detektiert wird. Diese Methoden benötigen spezielle, investitionsintensive Messapparaturen, über die nur wenige Labore oder Institute verfügen. Zudem ist diese Analytik relativ zeitaufwendig und benötigt kostenintensive Reagenzien und Hilfsmittel. In der Weinindustrie wird ein Fällungstest eingesetzt, der auf dem Prinzip beruht, dass β-Glucane nach Zugabe von Ethanol aus der Flüssigkeit ausfallen und einen Niederschlag bilden. Dieser Test kann nur qualitativ ausgewertet werden.In addition to enzymatic detection methods are currently the most common applied analysis methods on the principle of flow injection analysis (FIA) or high pressure liquid chromatography (HPLC), with which the β-glucan contained in the samples after complex formation is detected with a fluorescent substance (Calcofluor). This Need methods special, investment-intensive measuring equipment, through which only a few laboratories or institutes have. In addition, this is analytics relatively time consuming and requires expensive Reagents and aids. A precipitation test is being carried out in the wine industry used, which is based on the principle that β-glucans after the addition of ethanol from the liquid fail and form a precipitate. This test can only be qualitative be evaluated.

3. Vorteile für die industrielle Anwendung3. Advantages for the industrial application

Aus der industriellen Anwendung des photometrischen Nachweissystems, welches Gegenstand der Erfindung ist, ergeben sich für den Anwender folgende Vorteile gegenüber den auf dem Markt heute verfügbaren Verfahren:

  • – einfache Handhabbarkeit
  • – kurze Reaktionszeit
  • – Einsatz von standardisierten Laborgeräten und Labormaterialien
  • – geringer Investitionsbedarf
  • – geringe Störanfälligkeit
The industrial use of the photometric detection system, which is the subject of the invention, gives the user the following advantages over the methods currently available on the market:
  • - easy handling
  • - short response time
  • - Use of standardized laboratory equipment and laboratory materials
  • - low investment requirements
  • - low susceptibility to failure

Die Quantifizierung von β-Glucan kann mit Laborgrundkenntnissen durchgeführt werden und kann daher auch vom Betriebspersonal zur Prozesskontrolle eingesetzt werden. Da die Messwerte im Gegensatz zur heute etablierten Analytik innerhalb von 30 Minuten zur Verfügung stehen, kann eine β-Glucangelbildung frühzeitig erkannt werden und daraus resultierende verfahrenstechnische Probleme können vermieden oder reduziert werden. Da β-Glucan-Gele in der Getränkeindustrie verwendete Filtermaterialien soweit schädigen können, dass ein Austausch notwendig wird, ergibt sich daraus auch eine entsprechende betriebswirtschaftliche Dimension für die Getränkeproduzenten.The quantification of β-glucan can be carried out with basic laboratory knowledge and can therefore also be used by process personnel for process control. Since the measured values are available within 30 minutes, in contrast to today's established analytics, the formation of β-glucan can be recognized at an early stage and the resulting procedural problems can be avoided or reduced. As β-glucan gels can damage filter materials used in the beverage industry so far If an exchange becomes necessary, this also results in a corresponding business dimension for the beverage producers.

4. Durchführung des Nachweissystems.4. Implementation of the detection system.

Für die Anwendung des Nachweissystems im Labor werden folgende handelsübliche Laborgeräte und –materialien benötigt:

  • – Optisches Messinstrument zur Ermittlung der Extinktion nach dem Lambert-Beer'schen Gesetz bei Wellenlängen zwischen 350 und 800 nm, wie z.B. Photometer oder Mikrotiterplatten-Lesegeräte
  • – Im Falle der Anwendung eines Photometers: Küvettenhalter zur Aufnahme von 1x1cm bzw. 1x5cm Küvetten
  • – Im Fall der Anwendung eines Mikrotiterplattenlesegerätes: Mikrotiterplatten mit bis zu 96 Samples
  • – Im Fall der Anwendung eines Photometers: Pipetten, die die Zugabe von 2O0μl und 3 ml erlauben
  • – Im Fall der Anwendung eines Mikrotiterplattenlesegerätes: Pipetten, die die Zugabe von 20 μl und 300 μl erlauben
  • – Küvetten bzw. Mikrotiterplatten aus Kunststoffen, Glas oder anderer Materialien, die aufgrund ihrer Adsorptionseigenschaften für den genannten Wellenlängenbereich 350 bis 800 nm eingesetzt werden können
The following commercially available laboratory equipment and materials are required to use the detection system in the laboratory:
  • - Optical measuring instrument for determining the absorbance according to Lambert-Beer law at wavelengths between 350 and 800 nm, such as photometers or microtiter plate readers
  • - In the case of using a photometer: cuvette holder for holding 1x1cm or 1x5cm cuvettes
  • - In the case of using a microtiter plate reader: microtiter plates with up to 96 samples
  • - In the case of using a photometer: pipettes which allow the addition of 2O0μl and 3 ml
  • - In the case of using a microtiter plate reader: pipettes that allow the addition of 20 μl and 300 μl
  • - Cuvettes or microtiter plates made of plastics, glass or other materials that can be used due to their adsorption properties for the wavelength range from 350 to 800 nm

Im grundlegenden Lieferumfang des Nachweissystems sind enthalten:

  • – Die Reagenzlösung bzw. -lösungen in Gebindegrößen zwischen 5 ml und 5.000 ml
  • – Ein Pipettierschema, angepasst auf die jeweilige Messaufgabe
  • – Gebrauchsanweisung
  • – Eine Kurzinformation angepasst auf die jeweilige Messaufgabe
  • – 5 vorbereitete Standardlösungen mit 100, 200, 300, 400 und 500 mg β-Glucan pro Liter
The basic scope of delivery of the detection system includes:
  • - The reagent solution or solutions in container sizes between 5 ml and 5,000 ml
  • - A pipetting scheme, adapted to the respective measuring task
  • - Instructions for use
  • - Brief information adapted to the respective measurement task
  • - 5 prepared standard solutions with 100, 200, 300, 400 and 500 mg β-glucan per liter

Weiterhin können im Lieferumfang enthalten sein:

  • – Küvetten, die der Messaufgabe und der beim Kunden verfügbaren Analysentechnik hinsichtlich Größe und Geometrie entsprechen
  • – Mikrotiterplatten, die der Messaufgabe und der beim Kunden verfügbaren Analysentechnik hinsichtlich Größe und Geometrie entsprechen
  • – Andere speziell auf automatisierte Analysengeräte abgestimmte Gefäße
  • – Lösungen zur internen Qualitätskontrollen, z.B. nach dem Verfahren der Standardaddition
The scope of delivery may also include:
  • - Cuvettes that correspond to the measurement task and the analysis technology available to the customer in terms of size and geometry
  • - Microtiter plates that correspond to the measurement task and the analysis technology available to the customer in terms of size and geometry
  • - Other vessels specially designed for automated analysis devices
  • - Solutions for internal quality control, for example using the standard addition procedure

Die Durchführung des Nachweissystems ist für eine besondere Ausführungsform in Anlage 2 in Form eines Pipettierschemas grafisch dargestellt.The implementation of the detection system is for one special embodiment shown graphically in Appendix 2 in the form of a pipetting scheme.

Für diese Ausführungsform werden zur Aufnahme der Kalibrierkurve 6 Küvetten wie folgt vorbereitet (Anlage 2 Fig. 1):

Figure 00040001
For this embodiment, 6 cuvettes are prepared as follows for recording the calibration curve (Appendix 2 Fig. 1 ):
Figure 00040001

Anschließend werden in die Küvetten 1 bis 6 je 3ml der Reagenzlösung pipettiert (Anlage 2 Fig. 3). Die Reaktion des jeweiligen eingesetzten Farbstoffs mit dem β-Glucan zu einem detektierbaren Komplex erfolgt innerhalb von 30 Minuten (siehe Anlage 2 Fig. 4) bei Raumtemperatur. Anschließend wird bei der für die jeweilige Anwendung spezifischen Wellenlänge mit Küvette 1 der Nullwert des. Photometers aufgenommen (Anlage 2 Fig. 5). Mit den Küvetten 2 bis 6 werden die jeweiligen Extinktionswerte aufgenommen und vergleichbar mit der in Anlage 3 wiedergegeben Kalibrierkurve aufgetragen (Anlage 2 Fig. 6).Then 3 ml of the reagent solution are pipetted into the cuvettes 1 to 6 (Appendix 2 Fig. 3 ). The reaction of the respective dye used with the β-glucan to form a detectable complex takes place within 30 minutes (see Appendix 2 Fig. 4 ) at room temperature. The zero value of the photometer is then recorded at the wavelength specific to the respective application with cuvette 1 (Appendix 2 Fig. 5 ). The respective extinction values are recorded with cuvettes 2 to 6 and plotted in a manner comparable to the calibration curve shown in Appendix 3 (Appendix 2 Fig. 6 ).

Zur Bestimmung des β-Glucangehaltes in einer Probe werden 200 μl der Probe in einer Küvette vorgelegt (Anlage 2 Fig. 2) und anschließend mit 3ml der Reagenzlösung vermischt (Anlage 2 Fig. 3). Nach der Reaktionszeit von ebenfalls 30 Minuten bei Raumtemperatur (Anlage 2 Fig. 4), wird die Extinktion der Küvette im Photometer gegen den Nullwert ermittelt (Anlage 2 Fig. 5).To determine the β-glucan content in a sample, 200 μl of the sample are placed in a cuvette (Appendix 2 Fig. 2 ) and then mixed with 3 ml of the reagent solution (Appendix 2 Fig. 3 ). After the reaction time of also 30 minutes at room temperature (Appendix 2 Fig. 4 ), the absorbance of the cuvette in the photometer is determined against the zero value (Appendix 2 Fig. 5 ).

Anhand des Extinktionswertes der Probe kann der β-Glucan-Gehalt der Probe aus der Kalibrierkurve abgelesen werden (Anlage 2 Fig. 6).The β-glucan content of the sample can be read from the calibration curve based on the absorbance value of the sample (Appendix 2 Fig. 6 ).

Die Zusammensetzung der Reagenzlösung variiert mit der Messaufgabe. Grundbestandteile der Reagenzlösung sind:

Figure 00040002
The composition of the reagent solution varies with the measurement task. The basic components of the reagent solution are:
Figure 00040002

Die Farbstoffstammlösungen werden je nach Farbstoff auf der Basis von deionisiertem Wasser, Ethanol oder Methanol hergestellt. Der Farbstoffgehalt variiert zwischen 20 und 85 Gew.%. Es werden Triarylmethan-, Xanthen-, Venylsulfon- und Azofarbstoffe eingesetzt. Typische Beispiele sind:The dye stock solutions are depending on the dye based on deionized water, ethanol or methanol. The dye content varies between 20 and 85% by weight. Triaryl methane, xanthene, venyl sulfone and azo dyes. Typical examples are:

  • – Bis[4-(dimethylamino)-phenyl]phenylmethylium- bis [4- (dimethylamino) phenyl] phenylmethylium
  • – Bis[4-(dimethylamino)-phenyl]phenylmethan- bis [4- (dimethylamino) phenyl] phenylmethane
  • – Methylrosanilinium- methylrosanilinium
  • – 3,3',5,5'-Tetrabromphenolsulfonphthalein- 3,3 ', 5,5'-tetrabromophenolsulfonphthalein
  • – 5,5'-Dibromphenolsulfonphthalein- 5,5'-dibromophenol sulfone phthalein
  • – 3,3'-(4,4'-Biphenyldiylbisazo)bis(4-amino-1-naphthalinsulfonsäure-Dinatriumsalz- 3,3 '- (4,4'-biphenyldiylbisazo) bis (4-amino-1-naphthalenesulfonic acid disodium salt
  • – 4'-(Dimethylamino)-azobenzol-4-sulfonsäure-Natriumsalz- 4 '- (Dimethylamino) -azobenzene-4-sulfonic acid sodium salt
  • – 5,5'Dibrom-o-kresolsulfonphthalein- 5,5'-dibromo-o-cresol sulfone phthalein
  • – 3,3-Bis(4-hydroxyphenyl)-phthalid - 3,3-bis (4-hydroxyphenyl) phthalide
  • – Trichloressigsäure mit Coomassie®-Blue- Trichloroacetic acid with Coomassie ® -Blue

Je nach gestellter Messaufgabe des Anwenders wird die Reagenzlösung mit Puffersystemen ausgestattet, die den pH-Wert in der Messküvetten in einem Bereich zwischen pH 4 und pH 9 einstellen. Typische Puffersysteme sind:

  • – Tris[hydroxymethyl]aminomethan / Salzsäure
  • – Tris[hydroxymethyl]aminomethan / Maleinsäure / Natriumhydroxyd
  • – Citronensäuremonohydrat + Natriumhydroxid / Salzsäure
  • – KH-Phthalat / Salzsäure
  • – Essigsäure / Natriumacetat
  • – Bernsteinsäure / Natriumhydroxyd
Depending on the measurement task set by the user, the reagent solution is equipped with buffer systems that adjust the pH value in the measuring cuvettes in a range between pH 4 and pH 9. Typical buffer systems are:
  • - Tris [hydroxymethyl] aminomethane / hydrochloric acid
  • - Tris [hydroxymethyl] aminomethane / maleic acid / sodium hydroxide
  • - Citric acid monohydrate + sodium hydroxide / hydrochloric acid
  • - KH phthalate / hydrochloric acid
  • - acetic acid / sodium acetate
  • - succinic acid / sodium hydroxide

Die Standards können folgende Zusammensetzung haben:

Figure 00050001
The standards can have the following composition:
Figure 00050001

5. Vergleichsversuche5. Comparative experiments

Das Nachweissystem wurde im Labor unter verschiedenen Bedingungen getestet. Dabei wurde festgestellt, dass β-Glucane bis zu einem Molekulargewicht von 700.000 Dalton sicher nachgewiesen werden können. Die nachzuweisende Konzentration an β-Glucan in der Probenlösung kann zwischen 0,1 und 500 mg/l liegen. Die angegebene untere Nachweisgrenze ist zu erreichen, wenn ein entsprechend hochwertiges Analysegerät, wie z.B. ein Mikrotiterplatten-Lesegerät, eingesetzt wird.The detection system was in the laboratory tested under different conditions. It was found that β-glucans up to a molecular weight of 700,000 daltons can be. The concentration of β-glucan to be detected in the sample solution can are between 0.1 and 500 mg / l. The specified lower detection limit can be achieved if a correspondingly high-quality analysis device, e.g. a microtiter plate reader, is used.

Verschiedene Substanzen wurden auf mögliche Störeinflüsse untersucht. Bis zu denen im Folgenden angegebenen Konzentrationen wird das Nachweissystem nicht gestört.Different substances were found on possible Interferences examined. The detection system is used up to the concentrations specified below not bothered.

  • – Glucose bis zu einer Konzentration von 20 g / l - glucose up to a concentration of 20 g / l
  • – Pepton bis zu einer Konzentration von 20 g / l- Peptone up to a concentration of 20 g / l
  • – Stärke und andere α-Glucane bis zu einer Konzentration von 50 g / l- strength and other α-glucans up to a concentration of 50 g / l
  • – Ethanol bis 48 Vol.-%- ethanol up to 48 vol .-%

Zudem werden durch speziell gepufferte Lösungen die für die Messungen optimale lonenstärke und der optimale pH-Wert sichergestellt, so dass die Probenzusammensetzung keinen Einfluss auf das Messergebnis hat. Mithin ist eine zusätzliche Probenvorbehandlung nicht notwendig. Der Messbereich des Nachweissystems reicht bis zu β-Glucangehalten von 500 mg/l.In addition, through specially buffered solutions the for the measurements optimal ionic strength and ensures the optimal pH so that the sample composition has no influence on the measurement result. So there is an additional one Sample pretreatment not necessary. The measuring range of the detection system ranges up to β-glucan levels of 500 mg / l.

Die Reagenzlösungen sind bei Raumtemperatur über einen Zeitraum von 6 Monaten lagerstabil. Die mitgelieferten Standards sind bei +4 °C über einen Zeitraum von 2 Monaten lagerstabil.The reagent solutions are above a room temperature Stable for 6 months. The included standards are above +4 ° C Storage period of 2 months.

Unabhängige Vergleichs- und Paralleluntersuchungen wurden bei einem deutschen Brauereiinstitut, durch zwei namhafte deutsche Brauereien und durch einen internationalen Verband für die Standardisierung von Brauereianalytik durchgeführt. Alle Vergleichs- und Paralleluntersuchungen haben die gute Vergleichbarkeit des Nachweissystems mit den übliche FIA- und HPLC-Methoden bestätigt.Independent comparative and parallel studies were at a German brewery institute, by two well-known German breweries and through an international association for the standardization of Brewery analysis carried out. All comparative and parallel studies have good comparability of the detection system with the usual FIA and HPLC methods confirmed.

Claims (18)

Nachweissystem, bestehend aus ein bis drei Reagenzlösungen in Gebindegrößen zwischen 5 ml und 5.000 ml, Kurzinformation und Pipetierschema zur Bestimmung von β-Glucan in – Bier und all seinen Prozessvorstufen, wie Malz, Würze, Maische und Jungbier – Wein und all seinen Prozessvorstufen – Fruchtsaft und all seinen Prozessvorstufen – Weiteren Lösungen in denen β-Glucane enthalten sind.Detection system, consisting of one to three reagent solutions in Container sizes between 5 ml and 5,000 ml, brief information and pipetting scheme for determination of β-glucan in - Beer and all its preliminary stages, such as malt, wort, mash and green beer - wine and all its process stages - fruit juice and all its process precursors - further solutions in which β-glucans are included. Nachweissystem nach Anspruch 1, welches zudem – Küvetten, die der Messaufgabe und der beim Kunden verfügbaren Analysentechnik hinsichtlich Größe und Geometrie entsprechen, – Mikrotiterplatten, die der Messaufgabe und der beim Kunden verfügbaren Analysentechnik hinsichtlich Größe und Geometrie entsprechen, – andere speziell auf automatisierte Analysengeräte abgestimmte Gefäße sowie – Standardlösungen zur internen Qualitätskontrolle enthält.Detection system according to claim 1, which in addition - cuvettes, the measurement task and the analysis technology available to the customer with regard to Size and geometry correspond, - microtiter plates, the measurement task and the analysis technology available to the customer with regard to Size and geometry correspond, - other Vessels specially matched to automated analysis devices as well - Standard solutions for internal quality control contains. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 und 2, mit dem der β-Glucan-Gehalt in Verbindung mit optischen Analysegeräten ermittelt werden kann, die eine Bestimmung der Extinktion nach dem Lambert-Beer'schen Gesetz ermöglichen.Detection system according to claims 1 and 2, with which the β-glucan content can be determined in connection with optical analysis devices, which enable a determination of the extinction according to the Lambert-Beer law. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 3, welches in automatisierten Nachweisgeräten eingesetzt wird.Detection system according to claims 1 to 3, which in automated detection devices is used. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 4, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass β-Glucane mit einem Molekulargewicht bis zu 700.000 Dalton nachgewiesen werden können.Detection system according to claims 1 to 4, which thereby is characterized in that β-glucans with a molecular weight of up to 700,000 daltons can. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 5, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass β-Glucan-Gehalte zwischen 0,1 mg/l und 500 mg/l ermittelt werden können.Detection system according to claims 1 to 5, which thereby is characterized in that β-glucan levels between 0.1 mg / l and 500 mg / l can be determined. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 6, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass die Reagenzlösung folgende Zusammensetzung besitzt:
Figure 00070001
Detection system according to claims 1 to 6, which is characterized in that the reagent solution has the following composition:
Figure 00070001
 Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 7, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass je nach gestellter Messaufgabe in der Reagenzlösung Triarylmethan-, Xanthen-, Venylsulfon- und Azofarbstoffe zum Einsatr kommen, wie z.B. – Bis[4-(dimethylamino)-phenyl]phenylmethylium – Bis[4-(dimethylamino)-phenyl]phenylmethan – Methylrosanilinium – 3,3',5,5'-Tetrabromphenolsulfonphthalein – 5,5'-Dibromphenolsulfonphthalein – 3,3'-(4,4'-Biphenyldiylbisazo)bis(4-amino-1-naphthalinsulfonsäure-Dinatriumsalz – 4'-(Dimethylamino)-azobenzol-4-sulfonsäure-Natriumsalz – 5,5'Dibrom-o-kresolsulfonphthalein – 3,3-Bis(4-hydroxyphenyl)-phthalid – Trichloressigsäure mit Coomassie®-BlueDetection system according to claims 1 to 7, which is characterized in that, depending on the measurement task, triarylmethane, xanthene, venylsulfone and azo dyes are used in the reagent solution, such as - bis [4- (dimethylamino) phenyl] phenylmethylium - Bis [4- (dimethylamino) phenyl] phenylmethane - methylrosanilinium - 3,3 ', 5,5'-tetrabromophenolsulfonphthalein - 5,5'-dibromphenolsulfonphthalein - 3,3' - (4,4'-biphenyldiylbisazo) bis (4- amino-1-naphthalenesulfonic acid disodium salt - 4 '- (dimethylamino) -azobenzene-4-sulfonic acid sodium salt - 5,5'Dibromo-o-cresolsulfonphthalein - 3,3-bis (4-hydroxyphenyl) phthalide - trichloroacetic acid with Coomassie ® -Blue Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 8, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass die Farbstoffstammlösungen je nach Farbstoff auf der Basis von deionisiertem Wasser, Ethanol oder Methanol hergestellt werden und der Farbstoffgehalt zwischen 20 und 85 Gew.% variiert.Detection system according to claims 1 to 8, which thereby is marked that the dye stock solutions depending on the dye based on deionized water, ethanol or methanol and the dye content varies between 20 and 85 wt.%. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 9, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass je nach gestellter Messaufgabe der pH-Wert in der Messküvette durch Puffersysteme in einem Bereich zwischen pH 4 und pH 9 eingestellt wird und indem folgende Puffersysteme zum Einsatz kommen können: – Tris[hydroxymethyl]aminomethan / Salzsäure – Tris[hydroxymethyl]aminomethan / Maleinsäure / Natriumhydroxyd – Citronensäuremonohydrat + Natriumhydroxid / Salzsäure – KH-Phthalat / Salzsäure – Essigsäure / Natriumacetat – Bernsteinsäure / NatriumhydroxydDetection system according to claims 1 to 9, which thereby is marked that, depending on the measurement task, the pH value in the measuring cell adjusted in a range between pH 4 and pH 9 by buffer systems and by using the following buffer systems: - Tris [hydroxymethyl] aminomethane / Hydrochloric acid - Tris [hydroxymethyl] aminomethane / Maleic acid / Sodium hydroxide - Citric acid monohydrate + Sodium hydroxide / hydrochloric acid - KH phthalate / Hydrochloric acid - acetic acid / sodium acetate - succinic acid / sodium hydroxide Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 10, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass die Standardlösungen folgende Zusammensetzung haben können:
Figure 00080001
Detection system according to claims 1 to 10, which is characterized in that the standard solutions can have the following composition:
Figure 00080001
 Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 11, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass je nach gestellter Messaufgabe die Bildung des Farbkomplexes aus β-Glucan und eingesetztem Farbstoff bei pH-Werten zwischen pH 4 und 9 zustande kommt. Detection system according to claims 1 to 11, which thereby is marked that, depending on the measurement task, education of the color complex from β-glucan and dye used at pH values between pH 4 and 9 comes. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 12, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass die Extinktion bei Wellenlängen zwischen 350 und 800 nm gemessen werden kann.Detection system according to claims 1 to 12, which thereby is characterized in that the absorbance at wavelengths between 350 and 800 nm can be measured. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 13, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass keine Störungen bzw. Abweichungen des Messergebnisses auftreten, wenn in der Probe Glucose bis zu einer Konzentration von 20 g / l vorliegt.Detection system according to claims 1 to 13, which thereby is marked that no disturbances or deviations of the Measurement result occur when glucose up to one in the sample Concentration of 20 g / l is present. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 14, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass keine Störungen bzw. Abweichungen des Messergebnisses auftreten, wenn in der Probe Pepton bis zu einer Konzentration von 20 g / l vorliegt.Detection system according to claims 1 to 14, which thereby is marked that no disturbances or deviations of the Measurement result occur when in the sample peptone up to a Concentration of 20 g / l is present. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 15, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass keine Störungen bzw. Abweichungen des Messergebnisses auftreten, wenn in der Probe Stärke oder andere α-Glucane bis zu einer Konzentration von 50 g / l vorliegen.Detection system according to claims 1 to 15, which thereby is marked that no disturbances or deviations of the Measurement result occur when starch or other α-glucans in the sample at a concentration of 50 g / l. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 16, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass keine Störungen bzw. Abweichungen des Messergebnisses auftreten, wenn in der Probe Ethanol bis zu 48 Vol.-% vorliegt.Detection system according to claims 1 to 16, which thereby is marked that no disturbances or deviations of the Measurement results occur when ethanol in the sample up to 48 vol .-% is present. Nachweissystem nach den Ansprüchen 1 bis 17, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass die Reagenzlösung bei Raumtemperatur über einen Zeitraum von 6 Monaten und die Standardlösungen bei +4 °C über einen Zeitraum von 2 Monaten lagerstabil sind.Detection system according to claims 1 to 17, which thereby is characterized in that the reagent solution at room temperature over a Period of 6 months and the standard solutions at +4 ° C over one Are stable in storage for a period of 2 months.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110108818A (en) * 2019-05-31 2019-08-09 北京澳合药物研究院有限公司 A kind of high performance liquid chromatography and its application efficiently separating detection phthalide derivant

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