DE202023106838U1 - System for analyzing the inhibitory property of an antiviral molecule using the hemagglutination principle - Google Patents
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Abstract
Ein System zur Analyse der Hemmungseigenschaft eines antiviralen Moleküls unter Verwendung des Hämagglutinationsprinzips , umfassend
ein Mischgefäß, das operativ mit einem Dilution Master verbunden ist, wobei der Dilution Master so konfiguriert ist, dass er automatisch 5 ml RBC mit 45 ml 1x PBS bei Raumtemperatur kombiniert und eine 1:100-Verdünnung der RBC-Suspension erzeugt;
eine Zentrifuge, die mit dem Mischgefäß verbunden ist und so konfiguriert ist, dass sie die verdünnten RBC 10 Minuten lang bei 25 °C mit 2,000 xg wäscht, und die außerdem mit einem Gefäß zum Verwerfen des Überstands und zum Suspendieren des RBC-Pellets mit 20 ml 1x PBS verbunden ist;
ein Hämozytometer, das operativ mit dem Dilution Master verbunden und so konfiguriert ist, dass es 10 µl Erythrozyten überträgt und die Erythrozyten in jedem der 4 Quadrate zählt, um das endgültige Erythrozytenvolumen zu berechnen;
eine 96-Well-Platte mit V-Boden, die mit dem Mischgefäß verbunden und für die Titration von viralem Antigen konfiguriert ist, wobei die Platte außerdem mit einem Verdünnungsapparat verbunden ist, wobei der Verdünnungsapparat so konfiguriert ist, dass er eine 4-fache Verdünnung mit 1x PBS durchführt, um eine 4-Hämagglutination vorzubereiten Einheiten (HAU) des Antigens;
einen Laborschüttler, der mit dem Verdünnungsgerät und der 96-Well-Platte mit V-Boden verbunden ist und so konfiguriert ist, dass er die Platte während des Hämagglutinationshemmungstests (HI-Tests) mischt;
ein Beobachtungsmodul, das mit der 96-Well-Platte mit V-Boden verbunden ist, um die Hämagglutinationshemmung visuell zu beurteilen. Wenn die Probe die Hämagglutination hemmt , erscheinen Erythrozyten als Punkt, nachdem sie auf den Boden einer Vertiefung gefallen sind.
a mixing vessel operatively connected to a Dilution Master, the Dilution Master configured to automatically combine 5 mL of RBC with 45 mL of 1x PBS at room temperature and produce a 1:100 dilution of the RBC suspension;
a centrifuge connected to the mixing vessel and configured to wash the diluted RBC at 2,000 xg for 10 minutes at 25°C and also equipped with a vessel for discarding the supernatant and suspending the RBC pellet at 20 ml 1x PBS;
a hemocytometer operatively connected to the Dilution Master and configured to transfer 10 µL of RBCs and count the RBCs in each of the 4 squares to calculate the final RBC volume;
a 96-well V-bottom plate connected to the mixing vessel and configured for titration of viral antigen, the plate also connected to a diluent, the diluent configured to provide a 4-fold dilution with 1x PBS to prepare a hemagglutination of 4 units (HAU) of the antigen;
a laboratory shaker connected to the dilution device and the 96-well V-bottom plate and configured to mix the plate during the hemagglutination inhibition (HI) test;
an observation module connected to the 96-well V-bottom plate to visually assess hemagglutination inhibition. If the sample inhibits hemagglutination, erythrocytes appear as a dot after falling to the bottom of a well.
Description
Gebiet der ErfindungField of invention
Die Erfindung ist auf dem Gebiet der Entwicklung antiviraler Arzneimittel angesiedelt und befasst sich insbesondere mit den Verfahren zur Bewertung der Hemmeigenschaften antiviraler Moleküle unter Verwendung des Hämagglutinationsprinzips . Das vorliegende System bietet neuartige Komponenten und Prozesse zur Verbesserung der Effizienz, Konsistenz und Objektivität des Hämagglutinationshemmungstests (HI) mit dem Ziel, die bei bestehenden Lösungen beobachteten Einschränkungen zu überwinden.The invention is in the field of antiviral drug development and is particularly concerned with the methods for evaluating the inhibitory properties of antiviral molecules using the hemagglutination principle. The present system provides novel components and processes to improve the efficiency, consistency and objectivity of the hemagglutination inhibition (HI) test with the aim of overcoming the limitations observed with existing solutions.
Hintergrundbackground
Die Entwicklung antiviraler Medikamente spielt eine entscheidende Rolle bei der Bekämpfung viraler Infektionen, und der weit verbreitete Hämagglutinationshemmungstest (HI) dient als Schlüsselmethode zur Bewertung der hemmenden Eigenschaften solcher Medikamente. Dennoch besteht Bedarf an einem standardisierten System, das das Testverfahren rationalisieren und die Präzision verbessern kann. In der aktuellen Entwicklung antiviraler Medikamente treten Herausforderungen in Bezug auf Konsistenz, Effizienz und Subjektivität auf. Der Hämagglutinationshemmtest (HI) hat sich als grundlegendes Instrument zur Beurteilung der hemmenden Eigenschaften potenzieller antiviraler Medikamente erwiesen. Bestehende Lösungen in diesem Bereich stehen jedoch häufig vor Herausforderungen in Bezug auf Konsistenz, Effizienz und Subjektivität. Aktuelle Methoden umfassen manuelle Schritte bei der Erythrozytenvorbereitung, der Virusantigen-Titration und dem HI-Test, was zu unterschiedlichen Ergebnissen und möglichen Fehlern bei der Handhabung führt. Das Fehlen standardisierter Prozesse in allen Labors erschwert die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse zusätzlich. Darüber hinaus ist die Interpretation der Ergebnisse in vielen bestehenden Systemen subjektiv, beruht auf manueller Beobachtung und führt zu einem gewissen Grad an Variabilität, die sich auf die Zuverlässigkeit der Daten auswirkt.The development of antiviral drugs plays a crucial role in combating viral infections, and the widely used hemagglutination inhibition (HI) test serves as a key method to evaluate the inhibitory properties of such drugs. However, there is a need for a standardized system that can streamline the testing process and improve precision. Challenges related to consistency, efficiency and subjectivity arise in the current development of antiviral drugs. The hemagglutination inhibition (HI) test has proven to be a fundamental tool for assessing the inhibitory properties of potential antiviral drugs. However, existing solutions in this area often face challenges in terms of consistency, efficiency and subjectivity. Current methods involve manual steps in RBC preparation, viral antigen titration and HI testing, resulting in variable results and possible handling errors. The lack of standardized processes in all laboratories makes the reproducibility of the results even more difficult. Furthermore, the interpretation of results in many existing systems is subjective, relies on manual observation, and introduces a certain degree of variability that affects the reliability of the data.
Derzeit eingesetzte Methoden zur Bewertung der Wirksamkeit antiviraler Medikamente basieren üblicherweise auf manuellen Verfahren, einschließlich Erythrozytenverdünnung, Virusantigentitration und dem HI-Test. Diese Methoden sind aufgrund der menschlichen Handhabung und Interpretation von Natur aus anfällig für Inkonsistenzen. Schwankungen in den Ergebnissen sind häufig auf Unterschiede in der Technik, der Ausrüstung und den Umgebungsbedingungen zurückzuführen, was es schwierig macht, die Ergebnisse verschiedener Studien zu vergleichen. Die bei der manuellen Beobachtung von HI-Reaktionen eingeführte Subjektivität erschwert die Interpretation der Ergebnisse zusätzlich und beeinträchtigt die Objektivität der Daten. Darüber hinaus schränkt der zeitaufwändige Charakter dieser manuellen Prozesse die Gesamteffizienz der Bemühungen zur Entwicklung antiviraler Arzneimittel ein. Bestehende Lösungen haben daher Schwierigkeiten, standardisierte, reproduzierbare und zeitnahe Ergebnisse zu liefern, was zu einem Bedarf an einem verbesserten System führt, das diese Einschränkungen berücksichtigt.Methods currently used to evaluate the effectiveness of antiviral drugs are usually based on manual procedures, including red cell dilution, viral antigen titration, and the HI test. These methods are inherently prone to inconsistencies due to human handling and interpretation. Variations in results are often due to differences in technique, equipment and environmental conditions, making it difficult to compare the results of different studies. The subjectivity introduced in the manual observation of HF responses further complicates the interpretation of the results and compromises the objectivity of the data. Furthermore, the time-consuming nature of these manual processes limits the overall efficiency of antiviral drug development efforts. Existing solutions therefore struggle to provide standardized, reproducible and timely results, leading to a need for an improved system that takes these limitations into account.
ZusammenfassungSummary
Das vorliegende System zur Analyse der Hemmungseigenschaft antiviraler Moleküle mithilfe des Hämagglutinationsprinzips zielt darauf ab, die bei bestehenden Lösungen beobachteten Einschränkungen zu mildern. Durch die Einführung spezifischer Komponenten wie dem Dilution Master, der 96-Well-Platte mit V-Boden und einem Laborschüttler rationalisiert und standardisiert die Erfindung entscheidende Schritte im Bewertungsprozess. Die Automatisierung reduziert die Variabilität und erhöht die Konsistenz, während das Beobachtungsmodul einen standardisierten Ansatz zur Ergebnisinterpretation bietet und so die Subjektivität verringert. Insgesamt bietet die Erfindung eine zuverlässigere und effizientere Plattform zur Bewertung der Wirksamkeit antiviraler Arzneimittel und geht damit auf die Herausforderungen ein, mit denen aktuelle Methoden auf diesem Gebiet konfrontiert sind.The present system for analyzing the inhibitory property of antiviral molecules using the hemagglutination principle aims to alleviate the limitations observed in existing solutions. By introducing specific components such as the Dilution Master, 96-well V-bottom plate, and a laboratory shaker, the invention streamlines and standardizes critical steps in the evaluation process. Automation reduces variability and increases consistency, while the observation module provides a standardized approach to result interpretation, reducing subjectivity. Overall, the invention provides a more reliable and efficient platform for evaluating the effectiveness of antiviral drugs, thereby addressing the challenges faced by current methods in this field.
Das vorliegende System überwindet bestehende Herausforderungen im Zusammenhang mit Methoden zur Bewertung antiviraler Arzneimittel durch die Einführung standardisierter Komponenten und automatisierter Prozesse. Dieses System bietet eine zuverlässigere und effizientere Plattform zur Beurteilung der Hemmeigenschaften antiviraler Moleküle mithilfe des Hämagglutinationsprinzips.The present system overcomes existing challenges associated with antiviral drug evaluation methods by introducing standardized components and automated processes. This system provides a more reliable and efficient platform to assess the inhibitory properties of antiviral molecules using the hemagglutination principle.
Die vorliegende Erfindung zielt darauf ab, ein System für ein System zur Analyse der Hemmeigenschaft eines antiviralen Moleküls unter Verwendung des Hämagglutinationsprinzips bereitzustellen . Das System umfasst: ein Mischgefäß, das operativ mit einem Dilution Master verbunden ist, wobei der Dilution Master so konfiguriert ist, dass er automatisch 5 ml RBC mit 45 ml 1x PBS bei Raumtemperatur kombiniert und eine 1:100-Verdünnung der RBC-Suspension erzeugt; eine Zentrifuge, die mit dem Mischgefäß verbunden ist und so konfiguriert ist, dass sie die verdünnten RBC 10 Minuten lang bei 25 °C mit 2,000 xg wäscht, und die außerdem mit einem Gefäß zum Verwerfen des Überstands und zum Suspendieren des RBC-Pellets mit 20 ml 1x PBS verbunden ist; Hämozytometer, das betriebsmäßig mit dem Dilution Master verbunden und so konfiguriert ist, dass es 10 µl Erythrozyten überträgt und die Erythrozyten in jedem der 4 Quadrate zählt, um das endgültige Erythrozytenvolumen zu berechnen; eine 96-Well-Platte mit V-Boden, die mit dem Mischgefäß verbunden und für die Titration von viralem Antigen konfiguriert ist, wobei die Platte außerdem mit einem Verdünnungsapparat verbunden ist, wobei der Verdünnungsapparat so konfiguriert ist, dass er eine 4-fache Verdünnung mit 1x PBS durchführt, um eine 4-Hämagglutination vorzubereiten Einheiten (HAU) des Antigens; einen Laborschüttler, der mit dem Verdünnungsgerät und der 96-Well-Platte mit V-Boden verbunden ist und so konfiguriert ist, dass er die Platte während des Hämagglutinationshemmungstests (HI-Tests) mischt; ein Beobachtungsmodul, das mit der 96-Well-Platte mit V-Boden verbunden ist, um die Hämagglutinationshemmung visuell zu beurteilen . Wenn die Probe die Hämagglutination hemmt , erscheinen Erythrozyten als Punkt, nachdem sie auf den Boden einer Vertiefung gefallen sind.The present invention aims to provide a system for analyzing the inhibitory property of an antiviral molecule using the hemagglutination principle. The system includes: a mixing vessel operatively connected to a Dilution Master, where the Dilution Master is configured to automatically combine 5 mL of RBC with 45 mL of 1x PBS at room temperature and produce a 1:100 dilution of the RBC suspension ; a centrifuge connected to the mixing vessel and configured to wash the diluted RBC at 2,000 xg for 10 minutes at 25°C and also equipped with a vessel for discarding the supernatant and suspending the RBC pellet at 20 ml 1x PBS; Hemocytometer operatively connected to the Dilution Master and configured to transfer 10 µL of RBCs and count the RBCs in each of the 4 squares to obtain the final calculate erythrocyte volume; a 96-well V-bottom plate connected to the mixing vessel and configured for titration of viral antigen, the plate also connected to a diluent, the diluent configured to provide a 4-fold dilution with 1x PBS to prepare a hemagglutination of 4 units (HAU) of the antigen; a laboratory shaker connected to the dilution device and the 96-well V-bottom plate and configured to mix the plate during the hemagglutination inhibition (HI) test; an observation module connected to the 96-well V-bottom plate to visually assess hemagglutination inhibition. If the sample inhibits hemagglutination, erythrocytes appear as a dot after falling to the bottom of a well.
In einer Ausführungsform umfasst der Verdünnungsmaster außerdem Mittel zum Übertragen von 50 µl des vorbereiteten Erythrozyten auf die 96-Well-Platte mit V-Boden während der Hämagglutinationstitration des viralen Antigens.In one embodiment, the dilution master further comprises means for transferring 50 µl of the prepared red cell to the 96-well V-bottom plate during the hemagglutination titration of the viral antigen.
In einer Ausführungsform umfasst die 96-Well-Platte mit V-Boden außerdem eine Abdeckung zum Inkubieren der Platte bei Raumtemperatur während eines Hämagglutinationshemmungstests (HI-Tests).In one embodiment, the 96-well V-bottom plate further includes a cover for incubating the plate at room temperature during a hemagglutination inhibition (HI) test.
In einer Ausführungsform sind der Dilution Master, die Zentrifuge und das Hämozytometer mechanisch synchronisiert, um den RBC-Vorbereitungsprozess zu optimieren.In one embodiment, the dilution master, centrifuge, and hemocytometer are mechanically synchronized to optimize the RBC preparation process.
Das Ziel der Erfindung besteht darin, die Effizienz, Konsistenz und Objektivität des Prozesses zur Bewertung antiviraler Arzneimittel zu verbessern. Durch die Automatisierung kritischer Schritte wie der Erythrozytenvorbereitung und -verdünnung minimiert das System die Variabilität und gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse in allen Experimenten und Laboren. Die Integration einer 96-Well-Platte mit V-Boden und einer Verdünnungsapparatur rationalisiert die Titration viraler Antigene und reduziert den zeitaufwändigen manuellen Umgang. Der Laborschüttler sorgt für eine gleichmäßige Durchmischung während des Hämagglutinationshemmtests (HI) und trägt so zur Ergebnissicherheit bei. Der Einbau eines optischen Beobachtungsmoduls ermöglicht eine standardisierte visuelle Beurteilung und reduziert die Subjektivität bei der Ergebnisinterpretation. Insgesamt besteht das Ziel der Erfindung darin, eine konsistente und standardisierte Plattform für die Bewertung antiviraler Arzneimittel zu schaffen, um letztendlich das Gebiet der virologischen Forschung voranzutreiben und zur Entwicklung wirksamerer antiviraler Therapien beizutragen.The aim of the invention is to improve the efficiency, consistency and objectivity of the antiviral drug evaluation process. By automating critical steps such as RBC preparation and dilution, the system minimizes variability and ensures reproducible results across experiments and laboratories. The integration of a 96-well V-bottom plate and dilution apparatus streamlines the titration of viral antigens and reduces time-consuming manual handling. The laboratory shaker ensures even mixing during the hemagglutination inhibition test (HI) and thus contributes to the reliability of the results. The installation of an optical observation module enables standardized visual assessment and reduces subjectivity in the interpretation of results. Overall, the aim of the invention is to create a consistent and standardized platform for evaluating antiviral drugs, ultimately advancing the field of virological research and contributing to the development of more effective antiviral therapies.
Um die Vorteile und Merkmale der vorliegenden Offenbarung weiter zu verdeutlichen, erfolgt eine detailliertere Beschreibung der Erfindung unter Bezugnahme auf spezifische Ausführungsformen davon, die in der beigefügten Zeichnung dargestellt sind. Es versteht sich, dass diese Zeichnung nur typische Ausführungsformen der Erfindung darstellt und daher nicht als deren Umfang einschränkend anzusehen ist. Die Erfindung wird anhand der beigefügten Zeichnung genauer und detaillierter beschrieben und erläutert.In order to further illustrate the advantages and features of the present disclosure, a more detailed description of the invention will be made with reference to specific embodiments thereof shown in the accompanying drawings. It is understood that this drawing represents only typical embodiments of the invention and is therefore not to be viewed as limiting its scope. The invention is described and explained in more detail and in more detail with reference to the accompanying drawing.
KURZBESCHREIBUNG DER FIGURBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURE
Diese und andere Merkmale, Aspekte und Vorteile der vorliegenden Offenbarung werden besser verständlich, wenn die folgende detaillierte Beschreibung unter Bezugnahme auf die beigefügte Zeichnung gelesen wird, in der gleiche Bezugszeichen gleiche Teile darstellen, wobei:
- Figure 1 veranschaulicht ein Blockdiagramm eines Systems zur Analyse der Hemmungseigenschaft eines antiviralen Moleküls unter Verwendung des Hämagglutinationsprinzips gemäß einer Ausführungsform der vorliegenden Offenbarung.
- Figure 1 illustrates a block diagram of a system for analyzing the inhibitory property of an antiviral molecule using the hemagglutination principle according to an embodiment of the present disclosure.
Darüber hinaus werden erfahrene Handwerker erkennen, dass Elemente in der Zeichnung der Einfachheit halber dargestellt sind und möglicherweise nicht unbedingt maßstabsgetreu gezeichnet wurden. Beispielsweise veranschaulichen die Flussdiagramme die Methode anhand der wichtigsten Schritte, die dazu beitragen, das Verständnis von Aspekten der vorliegenden Offenbarung zu verbessern. Darüber hinaus können im Hinblick auf die Konstruktion des Geräts eine oder mehrere Komponenten des Geräts in der Zeichnung durch herkömmliche Symbole dargestellt worden sein, und die Zeichnung zeigt möglicherweise nur die spezifischen Details, die für das Verständnis der Ausführungsformen der vorliegenden Offenbarung relevant sind um die Zeichnung nicht durch Details zu verdecken, die für den Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet, der Nutzen aus der Beschreibung hierin zieht, leicht ersichtlich sind.Additionally, experienced craftsmen will recognize that elements in the drawing are shown for convenience and may not necessarily have been drawn to scale. For example, the flowcharts illustrate the method through key steps that help improve understanding of aspects of the present disclosure. Additionally, in view of the construction of the device, one or more components of the device may have been represented in the drawing by conventional symbols, and the drawing may show only the specific details relevant to understanding the embodiments of the present disclosure around the drawing not to be obscured by details that would be readily apparent to one of ordinary skill in the art who would benefit from the description herein.
Detaillierte BeschreibungDetailed description
Um das Verständnis der Prinzipien der Erfindung zu fördern, wird nun auf die in der Zeichnung dargestellte Ausführungsform Bezug genommen und für deren Beschreibung eine spezifische Sprache verwendet. Es versteht sich jedoch, dass dadurch keine Einschränkung des Umfangs der Erfindung beabsichtigt ist, da Änderungen und weitere Modifikationen des dargestellten Systems und weitere Anwendungen der darin dargestellten Prinzipien der Erfindung in Betracht gezogen werden, wie sie einem Fachmann normalerweise in den Sinn kommen würden in der Technik, auf die sich die Erfindung bezieht.In order to promote understanding of the principles of the invention, reference will now be made to the embodiment shown in the drawings and specific language will be used to describe the same. It is to be understood, however, that this is not intended to limit the scope of the invention, since changes and further modifications to the system illustrated and further applications of the principles of the invention set forth therein are contemplated as would normally occur to one skilled in the art would come in the technology to which the invention relates.
Der Fachmann versteht, dass die vorstehende allgemeine Beschreibung und die folgende detaillierte Beschreibung beispielhaft und erläuternd für die Erfindung sind und diese nicht einschränken sollen.It will be understood by those skilled in the art that the foregoing general description and the following detailed description are exemplary and illustrative of the invention and are not intended to limit the same.
Verweise in dieser Spezifikation auf „einen Aspekt“, „einen anderen Aspekt“ oder eine ähnliche Sprache bedeuten, dass ein bestimmtes Merkmal, eine bestimmte Struktur oder ein bestimmtes Merkmal, das in Verbindung mit der Ausführungsform beschrieben wird, in mindestens einer Ausführungsform der vorliegenden Offenbarung enthalten ist. Daher beziehen sich die Formulierungen „in einer Ausführungsform“, „in einer anderen Ausführungsform“ und ähnliche Formulierungen in dieser Spezifikation möglicherweise, aber nicht unbedingt, auf dieselbe Ausführungsform.References in this specification to “an aspect,” “another aspect,” or similar language mean that a particular feature, structure, or characteristic described in connection with the embodiment is included in at least one embodiment of the present disclosure is included. Therefore, the phrases “in one embodiment,” “in another embodiment,” and similar phrases in this specification may, but not necessarily, refer to the same embodiment.
Die Begriffe „umfasst“, „umfassend“ oder andere Variationen davon sollen eine nicht ausschließliche Einbeziehung abdecken, sodass ein Prozess oder eine Methode, die eine Liste von Schritten umfasst, nicht nur diese Schritte umfasst, sondern möglicherweise andere Schritte nicht umfasst ausdrücklich aufgeführt oder diesem Prozess oder dieser Methode innewohnend sind. Ebenso schließen ein oder mehrere Geräte oder Subsysteme oder Elemente oder Strukturen oder Komponenten, denen „umfasst...a“ vorangestellt ist, nicht ohne weitere Einschränkungen die Existenz anderer Geräte oder anderer Subsysteme oder anderer Elemente oder anderer Strukturen aus andere Komponenten oder zusätzliche Geräte oder zusätzliche Subsysteme oder zusätzliche Elemente oder zusätzliche Strukturen oder zusätzliche Komponenten.The terms “includes,” “comprising,” or other variations thereof are intended to cover non-exclusive inclusion, such that a process or method that includes a list of steps not only includes those steps, but may include other steps not specifically listed or following this inherent in the process or method. Likewise, one or more devices or subsystems or elements or structures or components prefixed with "comprises...a" do not exclude, without further limitation, the existence of other devices or other subsystems or other elements or other structures from other components or additional devices or additional subsystems or additional elements or additional structures or additional components.
Sofern nicht anders definiert, haben alle hier verwendeten technischen und wissenschaftlichen Begriffe die gleiche Bedeutung, wie sie von einem Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet, zu dem diese Erfindung gehört, allgemein verstanden werden. Das hier bereitgestellte System, die Methoden und Beispiele dienen nur der Veranschaulichung und sollen nicht einschränkend sein.Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as generally understood by one of ordinary skill in the art to which this invention pertains. The system, methods and examples provided herein are for illustrative purposes only and are not intended to be limiting.
Ausführungsformen der vorliegenden Offenbarung werden im Folgenden ausführlich unter Bezugnahme auf die beigefügte Zeichnung beschrieben.Embodiments of the present disclosure are described in detail below with reference to the accompanying drawings.
In einer Ausführungsform umfasst der Verdünnungsmaster (104) außerdem Mittel zum Übertragen von 50 µl des vorbereiteten Erythrozyten auf die 96-Well-Platte (112) mit V-Boden während der Hämagglutinationstitration des viralen Antigens.In one embodiment, the dilution master (104) further includes means for transferring 50 µl of the prepared red cell to the 96-well V-bottom plate (112) during hemagglutination titration of the viral antigen.
In einer Ausführungsform umfasst die 96-Well-Platte (112) mit V-Boden außerdem eine Abdeckung (112a) zum Inkubieren der Platte bei Raumtemperatur während eines Hämagglutinationshemmungstests (HI).In one embodiment, the 96-well V-bottom plate (112) further includes a cover (112a) for incubating the plate at room temperature during a hemagglutination inhibition (HI) test.
In einer Ausführungsform sind der Dilution Master (104), die Zentrifuge (106) und das Hämozytometer (110) mechanisch synchronisiert, um den RBC-Vorbereitungsprozess zu optimieren.In one embodiment, the dilution master (104), centrifuge (106), and hemocytometer (110) are mechanically synchronized to optimize the RBC preparation process.
Die vorliegende Erfindung stellt ein System zur Bewertung der Hemmungseigenschaft antiviraler Moleküle bereit. Die Integration spezifischer Elemente wie dem Dilution Master und dem Beobachtungsmodul erhöht die Genauigkeit und Zuverlässigkeit des HI-Tests und macht ihn zu einem wertvollen Werkzeug bei der Entwicklung antiviraler Medikamente. Das vorliegende System rationalisiert den Testprozess und bietet eine effizientere und konsistentere Plattform für die antivirale Forschung und Entwicklung.The present invention provides a system for evaluating the inhibitory property of antiviral molecules. The integration of specific elements such as the Dilution Master and the Observation Module increases the accuracy and reliability of the HI test, making it a valuable one Tool in the development of antiviral drugs. The present system streamlines the testing process and provides a more efficient and consistent platform for antiviral research and development.
Das implementierte System beginnt mit der Vorbereitung der Erythrozyten, wobei 5 ml Erythrozyten mit 45 ml 1x PBS bei Raumtemperatur zur Verdünnung kombiniert werden. Anschließend werden die verdünnten Erythrozyten 10 Minuten lang bei 25 °C und 2,000 xg zentrifugiert und anschließend der Überstand verworfen. Das RBC-Pellet wird dann mit einem Anfangsvolumen von 20 ml 1x PBS suspendiert. Darüber hinaus werden 1:100-Verdünnungen durch die Kombination von 0.5 ml Erythrozytensuspension mit 49.5 ml 1x PBS erreicht. Ein Hämozytometer wird verwendet, um 10 µl Erythrozyten aus dieser Mischung zur Zählung in jedem der 4 Quadrate zu übertragen , und das Endvolumen an Erythrozyten wird anhand einer Formel berechnet, die im Manual for the Laboratory Diagnosis and Virological Surveillance of Influenza, WHO, enthalten ist.The implemented system begins with RBC preparation, combining 5 mL of RBCs with 45 mL of 1x PBS at room temperature for dilution. The diluted erythrocytes are then centrifuged for 10 minutes at 25 °C and 2,000 xg and the supernatant is then discarded. The RBC pellet is then suspended with an initial volume of 20 ml 1x PBS. In addition, 1:100 dilutions are achieved by combining 0.5 ml erythrocyte suspension with 49.5 ml 1x PBS. A hemocytometer is used to transfer 10 µL of RBCs from this mixture for counting in each of the 4 squares, and the final volume of RBCs is calculated using a formula contained in the Manual for the Laboratory Diagnosis and Virological Surveillance of Influenza, WHO .
Das System geht nahtlos zur Hämagglutinationstitration des viralen Antigens über, bei der 50 µl PBS in die 96 Vertiefungen mit V-Boden in den Spalten 2 bis 12 gegeben werden. Jede Vertiefung in den ersten Reihen erhält 100 µl einzelne Antigene und nachfolgende serielle 2- fache Verdünnungen werden mit einer Mehrkanalpipette durchgeführt. Nach dem Verwerfen der letzten 50 µl werden 50 µl der vorbereiteten Erythrozyten in jede Vertiefung gegeben und die Platte wird 30 Minuten bis 1 Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die erhaltenen Ergebnisse der Hämagglutinationseinheiten (HAU) werden sorgfältig aufgezeichnet.The system proceeds seamlessly to hemagglutination titration of the viral antigen, where 50 µL of PBS is added to the 96 V-bottom wells in columns 2 to 12. Each well in the first rows receives 100 µL of individual antigens and subsequent serial 2-fold dilutions are performed using a multichannel pipette. After discarding the last 50 µl, 50 µl of the prepared RBCs are added to each well and the plate is incubated at room temperature for 30 minutes to 1 hour. The obtained hemagglutination units (HAU) results are carefully recorded.
Um ein standardisiertes Antigen für den Hämagglutinationshemmungstest (HI) vorzubereiten, werden 4 Hämagglutinationseinheiten (HAU) des Antigens sorgfältig durch Verdünnung gewonnen. Das System integriert sich dann nahtlos in den HI-Test und beginnt mit der Zugabe von 25 µl PBS in die V-Boden-96-Wells in Spalte 2 bis 12. Anschließend werden 50 µl des antiviralen Arzneimittels, verdünnt mit PBS im Verhältnis 1: 10, wird in die Vertiefungen der Reihe A1 bis H1 gegeben. Eine zweifache Reihenverdünnung wird durchgeführt, indem 25 µl des antiviralen Arzneimittels von Spalte 1 auf Spalte 12 übertragen werden. Standardisiertes Antigen wird in alle Vertiefungen gegeben und die Platten werden 10 Sekunden lang mit einem Laborschüttler gemischt oder manuell gründlich geschüttelt. Anschließend werden die abgedeckten Platten 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert und anschließend 50 µl der vorbereiteten Erythrozyten in alle Vertiefungen gegeben. Die beobachtete Hämagglutinationshemmung wird aufgezeichnet, wobei das Vorhandensein eines Punktes, nachdem die Erythrozyten auf den Boden der Vertiefung gefallen sind, eine erfolgreiche Hemmung anzeigt. Diese Systemimplementierung gewährleistet einen effizienten Prozess zur Bewertung der Hemmeigenschaften antiviraler Moleküle.To prepare a standardized antigen for the hemagglutination inhibition (HI) test, 4 hemagglutination units (HAU) of the antigen are carefully obtained by dilution. The system then integrates seamlessly into the HI test and begins by adding 25 µl of PBS to the V-bottom 96 wells in columns 2 to 12. This is followed by 50 µl of the antiviral drug diluted with PBS in a ratio of 1: 10, is placed in the wells in rows A1 to H1. A 2-fold serial dilution is performed by transferring 25 µL of antiviral drug from column 1 to column 12. Standardized antigen is added to all wells and the plates are mixed for 10 seconds with a laboratory shaker or manually shaken thoroughly. The covered plates are then incubated for 30 minutes at room temperature and then 50 µl of the prepared erythrocytes are added to all wells. The observed hemagglutination inhibition is recorded, with the presence of a dot after the erythrocytes fall to the bottom of the well indicating successful inhibition. This system implementation ensures an efficient process for evaluating the inhibitory properties of antiviral molecules.
Das System zur Analyse der Hemmungseigenschaft eines antiviralen Moleküls mithilfe des Hämagglutinationsprinzips besteht aus mehreren Komponenten, die die genaue Durchführung des HI-Tests erleichtern sollen. Zu diesen Komponenten gehören ein Mischgefäß, eine Zentrifuge, ein Verdünnungsmaster, ein Hämozytometer , eine 96-Well-Platte mit V-Boden, ein Verdünnungsgerät und ein Laborschüttler.The system for analyzing the inhibitory property of an antiviral molecule using the hemagglutination principle consists of several components designed to facilitate the accurate performance of the HI test. These components include a mixing vessel, a centrifuge, a dilution master, a hemocytometer, a 96-well V-bottom plate, a dilution device, and a laboratory shaker.
Das System beginnt mit der Kombination von Erythrozyten und 1x PBS in einem Mischgefäß, gefolgt von einem Zentrifugationsschritt zum Waschen der verdünnten Erythrozyten. Der Überstand wird dann verworfen und das RBC-Pellet wird in 1x PBS suspendiert. Ein Verdünnungsmaster wird verwendet, um eine 1:100-Verdünnung der Erythrozytensuspension zu erzeugen, und ein Hämozytometer wird verwendet, um ein bestimmtes Volumen an Erythrozyten für die anschließende Zählung zu übertragen.The system begins with the combination of RBCs and 1x PBS in a mixing vessel, followed by a centrifugation step to wash the diluted RBCs. The supernatant is then discarded and the RBC pellet is suspended in 1x PBS. A dilution master is used to create a 1:100 dilution of the RBC suspension and a hemocytometer is used to transfer a specific volume of RBCs for subsequent counting.
Die 96-Well-Platte mit V-Boden wird für die Titration viraler Antigene verwendet. PBS wird in bestimmte Vertiefungen gegeben und Antigene werden hinzugefügt, um eine serielle Zweifachverdünnung zu initiieren. Dann werden vorbereitete Erythrozyten in jede Vertiefung gegeben und die Platte wird bei Raumtemperatur inkubiert. Die Ergebnisse werden aufgezeichnet und liefern wichtige Daten für nachfolgende Phasen.The 96-well V-bottom plate is used for titration of viral antigens. PBS is added to designated wells and antigens are added to initiate a serial two-fold dilution. Then prepared red cells are added to each well and the plate is incubated at room temperature. The results are recorded and provide important data for subsequent phases.
Für den Hämagglutinationshemmungstest (HI) wird ein Verdünnungsgerät verwendet, um standardisiertes Antigen mit einer bestimmten Hämagglutinationseinheit (HAU) herzustellen. Dieser Schritt ist entscheidend, um die Konsistenz in nachfolgenden Tests sicherzustellen.For the hemagglutination inhibition (HI) test, a dilution device is used to produce standardized antigen with a specific hemagglutination unit (HAU). This step is critical to ensure consistency in subsequent tests.
Beim HI-Test wird eine 96-Well-Platte mit V-Boden verwendet, um die hemmenden Eigenschaften des antiviralen Arzneimittels zu beurteilen. Mithilfe des Verdünnungsgeräts werden Reihenverdünnungen des Arzneimittels hergestellt und in alle Vertiefungen wird standardisiertes Antigen gegeben. Ein Laborschüttler sorgt für eine gründliche Durchmischung und die Platte wird bei Raumtemperatur inkubiert. Vorbereitete Erythrozyten werden hinzugefügt und die Ergebnisse werden beobachtet. Ein Beobachtungsmodul ermöglicht die visuelle Beurteilung der Hämagglutinationshemmung , wobei das Erscheinen von Erythrozyten als Punkt, nachdem sie auf den Boden einer Vertiefung gefallen sind, eine erfolgreiche Hemmung anzeigt.The HI test uses a 96-well V-bottom plate to assess the inhibitory properties of the antiviral drug. Using the dilution device, serial dilutions of the drug are made and standardized antigen is added to all wells. A laboratory shaker ensures thorough mixing and the plate is incubated at room temperature. Prepared RBCs are added and the results are observed. An observation module allows visual assessment of hemagglutination inhibition, with the appearance of erythrocytes as a dot after falling to the bottom of a well indicating successful inhibition.
Die Zeichnung und die vorstehende Beschreibung geben Beispiele für Ausführungsformen. Fachleute werden erkennen, dass eines oder mehrere der beschriebenen Elemente durchaus zu einem einzigen Funktionselement kombiniert werden können. Alternativ können bestimmte Elemente in mehrere Funktionselemente aufgeteilt werden. Elemente einer Ausführungsform können zu einer anderen Ausführungsform hinzugefügt werden. Beispielsweise können die Reihenfolgen der hier beschriebenen Prozesse geändert werden und sind nicht auf die hier beschriebene Weise beschränkt. Darüber hinaus müssen die Aktionen eines Flussdiagramms nicht in der gezeigten Reihenfolge implementiert werden; Es müssen auch nicht unbedingt alle Handlungen ausgeführt werden. Auch solche Handlungen, die nicht von anderen Handlungen abhängig sind, können parallel zu den anderen Handlungen durchgeführt werden. Der Umfang der Ausführungsformen wird durch diese spezifischen Beispiele keineswegs eingeschränkt. Zahlreiche Variationen, ob explizit in der Spezifikation angegeben oder nicht, wie z. B. Unterschiede in Struktur, Abmessung und Materialverwendung, sind möglich. Der Umfang der Ausführungsformen ist mindestens so breit wie durch die folgenden Ansprüche angegeben.The drawing and the description above provide examples of embodiments. Those skilled in the art will recognize that one or more of the elements described can certainly be combined into a single functional element. Alternatively, certain elements can be divided into several functional elements. Elements of one embodiment may be added to another embodiment. For example, the orders of the processes described herein may be changed and are not limited to the manner described herein. Additionally, the actions of a flowchart do not have to be implemented in the order shown; Not all actions necessarily have to be carried out. Even those actions that are not dependent on other actions can be carried out in parallel with the other actions. The scope of the embodiments is in no way limited by these specific examples. Numerous variations, whether explicitly stated in the specification or not, such as: B. Differences in structure, dimensions and material use are possible. The scope of the embodiments is at least as broad as indicated by the following claims.
Vorteile, andere Vorzüge und Problemlösungen wurden oben im Hinblick auf spezifische Ausführungsformen beschrieben. Die Vorteile, Vorzüge, Problemlösungen und alle Komponenten, die dazu führen können, dass ein Nutzen, ein Vorteil oder eine Lösung eintritt oder ausgeprägter wird, dürfen jedoch nicht als kritische, erforderliche oder wesentliche Funktion oder Komponente von ausgelegt werden einzelne oder alle Ansprüche.Advantages, other benefits, and solutions to problems have been described above with respect to specific embodiments. However, the advantages, benefits, solutions to problems and any components that may cause a benefit, advantage or solution to occur or become more pronounced should not be construed as a critical, necessary or essential function or component of any or all of the claims.
REFERENZENCREDENTIALS
- 100100
- Ein System Zur Analyse Der Hemmungseigenschaften Eines Antiviralen Moleküls Unter Verwendung Des Hämagglutinationsprinzip.A system for analyzing the inhibitory properties of an antiviral molecule using the hemagglutination principle.
- 102102
- Mischgefäßmixing vessel
- 104104
- VerdünnungsmeisterDilution Master
- 106106
- Zentrifugecentrifuge
- 108108
- SchiffShip
- 110110
- HämozytometerHemocytometer
- 112112
- 96 Well-Platte Mit V-Boden96 Well Plate With V-Bottom
- 114114
- VerdünnungsapparatDiluent
- 116116
- Ein LaborschüttlerA laboratory shaker
- 118118
- BeobachtungsmodulObservation module
Claims (5)
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