DE202008013313U1 - labeling reagents - Google Patents

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings

Abstract

Chelat der Formel (I), das für Markierung von bioaktiver Substanz in Lösung geeignet ist,

Figure 00000001
dadurch gekennzeichnet, dass
– n 1 oder 2 ist,
– A eine reaktive Gruppe für Bindung an die bioaktive Substanz, gewählt aus einer Gruppe bestehend aus Isothiocyanat, Bromoacetamido, Jodoacetamido, Maleimid, 4,6-Dichior-1,3,5-triazinyl-2-amino, Pyridyldithiol, Thioester, Aminooxy, Azid, Alkyn, Hydrazid, Amino, Carboxylsäure, Ester oder Säurehalid ist,
– Z1 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z2 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z3 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z4 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z5 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe, eine Carboxamidogruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält,
– Z6 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z7 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z8 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
– Z9 eine Elektronen abgebende...Chelate of formula (I) suitable for labeling bioactive substance in solution,
Figure 00000001
characterized in that
- n is 1 or 2,
A is a reactive group for binding to the bioactive substance selected from a group consisting of isothiocyanate, bromoacetamido, iodoacetamido, maleimide, 4,6-dichloro-1,3,5-triazinyl-2-amino, pyridyldithiol, thioester, aminooxy, Azide, alkyne, hydrazide, amino, carboxylic acid, ester or acid halide,
Z 1 is hydrogen or an electron donating group,
Z 2 is hydrogen or an electron donating group,
Z 3 is hydrogen or an electron donating group,
Z 4 is an electron donating group,
Z 5 is a substituent containing a carboxylic acid group, a phosphoric acid group, a carboxamido group or a sulfonic acid group,
Z 6 is hydrogen or an electron donating group,
Z 7 is hydrogen or an electron donating group,
Z 8 is hydrogen or an electron donating group,
- Z 9 an electron donating ...

Description

GEBIET DER ERFINDUNGFIELD OF THE INVENTION

Vorliegende Erfindung betrifft neue Markierungsreagenzien, die an bioaktive Substanzen entweder in Lösung oder an die Oberfläche eines festen Trägers gebunden werden können.This The invention relates to novel labeling reagents which are bioactive Substances either in solution or on the surface a solid carrier can be bound.

HINTERGRUND DER ERFINDUNGBACKGROUND OF THE INVENTION

Die Publikationen und das sonstige Material, worauf hier verwiesen wird, werden zur Veranschaulichung des Hintergrundes der Erfindung verwendet, und insbesondere dienen die Fälle, auf die hier Bezug genommen wird, zur Bereitstellung weiterer Details bezüglich der Technik.The Publications and other material referred to here are used to illustrate the background of the invention, and in particular, the cases referred to herein serve will provide further details regarding the Technology.

Von einem lumineszierenden Lanthanidchelat werden verschiedene physikalische und chemische Sondereigenschaften erwartet. Das Molekül sollte sowohl im Grund- als auch im angeregten Zustand thermodynamisch, kinetisch und photochemisch stabil sein. Die Energieübertragung vom Liganden auf das Zentralion sollte schnell und effektiv sein. Das Chelat sollte oft auch wasserlöslich sein. Das Chelat sollte seine positiven Eigenschaften auch noch nach seiner Kopplung an ein bioaktives Molekül beibehalten. Ein gutes Markierungsreagens verändert nicht die Eigenschaften der von ihm gebundenen bioaktiven Substanz.From A luminescent lanthanide chelate becomes various physical and special chemical properties are expected. The molecule should be thermodynamically, both in the ground and in the excited state, be kinetically and photochemically stable. The energy transfer from the ligand to the central ion should be fast and effective. The chelate should often be water-soluble. The chelate should its positive properties even after its coupling retained on a bioactive molecule. A good labeling reagent does not change the properties of his bound bioactive substance.

Bei zahlreichen Anwendungen ist eine kovalente Bindung des Markierungsmoleküls an die bioaktive Substanz notwendig. Bei der Markierung der Zielmoleküle, wie Proteine, Oligonukleotide und Oligopeptide, werden oft Isothiocyanat-, N-Hydroxysuccinimid-, Haloacetamid-, Dichlortriazin- oder Maleimidderivate eines Chelats verwendet. Da die Markierungsreaktion oft einen Überschuss an aktiviertem Markierungsreagens erfordert, können arbeitsintensive Reinigungsverfahren nicht vermieden werden.at numerous applications is a covalent binding of the tag molecule necessary to the bioactive substance. In the labeling of the target molecules, such as proteins, oligonucleotides and oligopeptides, are often isothiocyanate, N-hydroxysuccinimide, haloacetamide, dichlorotriazine or maleimide derivatives a chelate used. Because the labeling reaction is often a surplus At activated labeling reagent can be labor-intensive Cleaning procedure can not be avoided.

Die Reinigungsprobleme können bei Durchführung der Markierungsreaktion auf der Oberfläche der festen Phase vermieden werden. Dann kann ein Großteil der Verunreinigungen durch Waschen entfernt werden, wenn das Biomolekülkonjugat noch an seinem festen Träger haftet. Eine Vielzahl von Reagenzien, die eine Kopplung von Lanthanidchelaten an bioaktive Substanzen auf oben genannte Art und Weise ermöglichen, sind bereits der Öffentlichkeit zugänglich gemacht worden.The Cleaning problems may occur when performing the Labeling reaction on the surface of the solid phase be avoided. Then a lot of the contaminants be removed by washing when the biomolecule conjugate still adheres to its solid support. A variety of Reagents that couple lanthanide chelates to bioactive ones Enable substances in the above manner are already made available to the public Service.

Die Markierung in Lösung ist bei großen bioaktiven Substanzen, wie Proteinen, unvermeidbar. Dann sollte die Markierungsreaktion möglichst effektiv und ortsspezifisch sein.The Labeling in solution is at large bioactive Substances, such as proteins, unavoidable. Then the labeling reaction should be be as effective and site specific as possible.

Es ist beobachtet worden, dass die Elektronen abgebenden Gruppen eines Phenylringes die lichtphysikalischen Eigenschaften bestimmter, von 4-Phenyl-2,6-bis[N,N-di(carboxyalkyl)aminoalkyl]pyridinen abgeleiteter Lanthanid(III)chelaten verbessern ( US 4 761 481 ). Später ist beobachtet worden, dass oben genannte Eigenschaften durch Chelatisieren mehrerer aromatischer Gruppen an ein Lanthanidion verbessert werden können (US Patentanmeldung 11/004 061). Dies steigert ebenfalls die Stabilität der Chelatstruktur. Andererseits könnten aromatische Chromophoren auch die Wasserlöslichkeit des Chelats vermindern.It has been observed that the electron-donating groups of a phenyl ring improve the light-physical properties of certain lanthanide (III) chelates derived from 4-phenyl-2,6-bis [N, N-di (carboxyalkyl) aminoalkyl] pyridines ( US 4,761,481 ). Later, it has been observed that the above properties can be improved by chelating a plurality of aromatic groups to a lanthanide ion (US Patent Application 11 / 004,061). This also increases the stability of the chelate structure. On the other hand, aromatic chromophores could also reduce the water solubility of the chelate.

DARSTELLUNG DER ERFINDUNGPRESENTATION OF THE INVENTION

Hauptsächliches Ziel vorliegender Erfindung ist es, aus 4-Phenylpyridin abgeleitete Markierungsreagenzien zur Verwendung bereit zu stellen, welche die Markierung bioaktiver Substanzen sowohl in Lösung als auch auf der Oberfläche eines festen Trägers mittels beständiger Oligonukleotid- und Oligopeptidsynthetisatoren ermöglichen. Die Wasserlöslichkeit der erfindungsgemäßen Moleküle hat durch Zusatz von einer oder einer Mehrzahl von Carboxylsäure-, Phosphorsäure- oder Sulfonsäuregruppen an die Chromophoren verbessert werden können. Die so erhaltenen Biokonjugate eignen sich besonders gut zur Bestimmung basierend auf zeitlich getrennter Fluoreszenz.Cardinal The aim of the present invention is derived from 4-phenylpyridine Labeling reagents for use, which the Labeling of bioactive substances both in solution and on the surface of a solid support by means of stable oligonucleotide and oligopeptide synthesizers enable. The water solubility of the invention Has molecules by addition of one or a plurality of carboxylic acid, phosphoric acid or sulfonic acid groups can be improved to the chromophores. The thus obtained Bioconjugates are particularly well-suited for determination on temporally separated fluorescence.

Die charakteristischen Merkmale der Erfindung gehen aus den Schutzansprüchen 1 und 4 hervor. Vorliegende Erfindung betrifft also ein Chelat, das für die Markierung einer bioaktiven Substanz in Lösung geeignet ist und die Strukturformel (I) aufweist

Figure 00030001
und worin

  • – n 1 oder 2 ist,
  • – A eine reaktive Gruppe für Bindung an die bioaktive Substanz ist, ausgewählt aus einer Gruppe bestehend aus Isothiocyanat, Bromoacetamido, Jodoacetamido, Maleimid, 4,6-Dichlor-1,3,5-triazinyl-2-amino, Pyridyldithiol, Thioester, Aminooxy, Azid, Alkyn, Hydrazid, Amino, Carboxylsäure, Ester oder Säurehalid,
  • – Z1 Wasserstoffoder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z2 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z3 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z4 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z5 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe, eine Carboxamidogruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält,
  • – Z6 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z7 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z8 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z9 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z10 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe, eine Carboxamidogruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält,
  • – Z11 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z12 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z13 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z14 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z15 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält,
  • – X ein Linker ist, der aus einem bis zehn Teilen gebildet ist, von welchen jeder aus einer Gruppe bestehend aus Phenyl, Alkyl mit 1–12 Kohlenstoffatomen, Ethyndiyl (-C≡C-), Ethendiyl, Ether (-O-), Thioether (-S-), Amid (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH-CO- und -NR'-CO-), Carbonyl (-CO-), Ester (-COO- und -OOC-), Disulfid (-SS-), Sulfonamid (-SO2-NH-, -NH-SO2-, -NR'-SO2- und -SO2-NR'-), Sulfon (-SO2-), Phosphat (-O-PO2-O-), Diaza (-N=N-) und aus einem tertiären Amin (-NR'-) gewählt ist, wobei R' ein Alkyl mit weniger als fünf Kohlenstoffatomen ist und ein Wasserstoffatom der Grundstruktur ersetzt.
The characteristic features of the invention emerge from the claims 1 and 4. The present invention thus relates to a chelate which is suitable for the labeling of a bioactive substance in solution and has the structural formula (I)
Figure 00030001
and in which
  • - n is 1 or 2,
  • A is a reactive group for binding to the bioactive substance selected from a group consisting of isothiocyanate, bromoacetamido, iodoacetamido, maleimide, 4,6-dichloro-1,3,5-triazinyl-2-amino, pyridyldithiol, thioester, aminooxy , Azide, alkyne, hydrazide, amino, carboxylic acid, ester or acid halide,
  • Z 1 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 2 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 3 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 4 is an electron donating group,
  • Z 5 is a substituent containing a carboxylic acid group, a phosphoric acid group, a carboxamido group or a sulfonic acid group,
  • Z 6 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 7 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 8 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 9 is an electron donating group,
  • Z 10 is a substituent containing a carboxylic acid group, a phosphoric acid group, a carboxamido group or a sulfonic acid group,
  • Z 11 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 12 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 13 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 14 is an electron donating group,
  • Z 15 is a substituent containing a carboxylic acid group, a phosphoric acid group or a sulfonic acid group,
  • X is a linker formed from one to ten parts each of which is selected from the group consisting of phenyl, alkyl of 1-12 carbon atoms, ethynediyl (-C≡C-), ethenediyl, ether (-O-), Thioethers (-S-), amides (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH-CO- and -NR'-CO-), carbonyl (-CO-), esters (-COO- and -) OOC-), disulfide (-SS-), sulfonamide (-SO 2 -NH-, -NH-SO 2 -, -NR'-SO 2 - and -SO 2 -NR'-), sulfone (-SO 2 - ), Phosphate (-O-PO 2 -O-), diaza (-N = N-), and selected from a tertiary amine (-NR'-) wherein R 'is an alkyl of less than five carbon atoms and a hydrogen atom replaced the basic structure.

Die Erfindung betrifft auch ein Markierungsreagens mit der Formel (II), das zur Markierung von Biomolekülen auf der Oberfläche eines festen Trägers geeignet ist

Figure 00040001
und worin

  • – n 1 oder 2 ist,
  • – R -COOR'' oder -CONHR'' ist, wobei R'' ein Alkyl oder Phenyl oder Benzyl mit 1–4 Kohlenstoffatomen ist, wobei das Phenyl oder Benzyl substituiert oder unsubstituiert ist,
  • – Z1 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z2 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z3 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z4 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z5 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäureestergruppe, eine Sulfonsäureestergruppe, eine Phosphorsäureestergruppe, eine Sulfonsäuregruppe oder eine Carboxamidogruppe enthält,
  • – Z6 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z7 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z8 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z9 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z10 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäureestergruppe, eine Sulfonsäureestergruppe, eine Phosphorsäureestergruppe, eine Sulfonsäuregruppe oder eine Carboxamidogruppe enthält,
  • – Z11 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z12 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z13 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z14 eine Elektronen abgebende Gruppe ist,
  • – Z15 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäureestergruppe, eine Sulfonsäureestergruppe, eine Phosphorsäureestergruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält,
  • – X ein Linker ist, der aus einem bis zehn Teilen gebildet ist, von welchen jeder aus einer Gruppe bestehend aus Phenyl, Alkyl mit 3–12 Kohlenstoffatomen, Ethyndiyl (-C≡C-), Ethendiyl (-C=C-), Ether (-O-), Thioether (-S-), Amid (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH-CO- und -NR'-CO-), Carbonyl (-CO-), Ester (-COO- und -OOC-), Disulfid (-SS-), Sulfonamid (-SO2-NH-, -NH-SO2-, -NR'-SO2- und -SO2-NR'-), Sulfon (-SO2-), Phosphat (-O-PO2-O-), Diaza (-N=N-) und aus einem tertiären Amin (-NR'-) gewählt ist, wobei R' ein Alkyl mit weniger als fünf Kohlenstoffatomen ist und ein Wasserstoffatom der Grundstruktur ersetzt,
  • – A eine reaktive Gruppe für Bindung an die bioaktive Substanz ist, ausgewählt aus einer Gruppe bestehend aus Carboxylsäure oder deren Salz, Säurehalid, Ester oder einem Aminosäurerest -CH(NHR2)R3, worin R2 eine vorübergehende Schutzgruppe und R3 Carboxylsäure oder deren Salz, Säurehalid oder ein aktiver Ester ist, oder A ist -E-O-PZ-O-R4 worin ein Sauerstoffatom wahlweise durch ein Schwefelatom ersetzt ist,
  • – Z Chlor oder NR5R6 ist,
  • – R4 eine Schutzgruppe ist,
  • – R5 und R6 Alkylgruppen sind,
  • – E nicht anwesend oder ein Radikal einer Purin- oder Pyrimidinbase ist, das an das Sauerstoffatom gebunden ist, entweder i) durch die Kohlenwasserstoffkette, die mit einer geschützten Hydroxyethylgruppe substituiert ist, oder ii) durch einen Furan- oder Pyranring oder durch deren modifizierte Derivate, die eine Oligonukleotidsynthese ermöglichen.
The invention also relates to a labeling reagent of the formula (II) which is suitable for labeling biomolecules on the surface of a solid support
Figure 00040001
and in which
  • - n is 1 or 2,
  • R is -COOR "or -CONHR", where R "is an alkyl or phenyl or benzyl having 1-4 carbon atoms, where the phenyl or benzyl is substituted or unsubstituted,
  • Z 1 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 2 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 3 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 4 is an electron donating group,
  • Z 5 is a substituent containing a carboxylic acid ester group, a sulfonic acid ester group, a phosphoric acid ester group, a sulfonic acid group or a carboxamido group,
  • Z 6 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 7 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 8 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 9 is an electron donating group,
  • Z 10 is a substituent containing a carboxylic acid ester group, a sulfonic acid ester group, a phosphoric acid ester group, a sulfonic acid group or a carboxamido group,
  • Z 11 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 12 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 13 is hydrogen or an electron donating group,
  • Z 14 is an electron donating group,
  • Z 15 is a substituent containing a carboxylic acid ester group, a sulfonic acid ester group, a phosphoric acid ester group or a sulfonic acid group,
  • X is a linker formed from one to ten parts each of which is selected from the group consisting of phenyl, alkyl of 3-12 carbon atoms, ethynediyl (-C≡C-), ethenediyl (-C = C-), Ethers (-O-), thioethers (-S-), amides (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH-CO- and -NR'-CO-), carbonyl (-CO-), Esters (-COO- and -OOC-), disulfide (-SS-), sulfonamide (-SO 2 -NH-, -NH-SO 2 -, -NR'-SO 2 - and -SO 2 -NR'-) , Sulfone (-SO 2 -), phosphate (-O-PO 2 -O-), diaza (-N = N-) and is selected from a tertiary amine (-NR'-), wherein R 'is an alkyl with less is five carbon atoms and replaces a hydrogen atom of the basic structure,
  • A is a reactive group for binding to the bioactive substance selected from a group consisting of carboxylic acid or its salt, acid halide, ester or an amino acid residue -CH (NHR 2 ) R 3 , where R 2 is a transient protecting group and R 3 is carboxylic acid or their salt, acid halide or an active ester, or is A. -EO-PZ-OR 4 wherein an oxygen atom is optionally replaced by a sulfur atom,
  • Z is chlorine or NR 5 R 6 ,
  • R 4 is a protecting group,
  • R 5 and R 6 are alkyl groups,
  • E is not present or is a radical of a purine or pyrimidine base attached to the oxygen atom that is, either i) by the hydrocarbon chain substituted with a protected hydroxyethyl group, or ii) by a furan or pyran ring, or by their modified derivatives enabling oligonucleotide synthesis.

DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNGDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Das Lanthanid Ln ist vorzugsweise Terbium, Dysprosium, Europium oder Samarium. Besonders vorteilhafte Lanthanide sind Terbium und Dysprosium.The Lanthanide Ln is preferably terbium, dysprosium, europium or Samarium. Particularly advantageous lanthanides are terbium and dysprosium.

Die Elektronen abgebenden Gruppen Z1, Z2, Z3, Z4, Z6, Z7, Z8, Z9, Z11, Z12, Z13 und/oder Z14 sind vorzugsweise lineare oder verzweigte Alkylgruppen wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl, n-Butyl, sek-Butyl, t-Butyl oder Alkoxygruppen wie Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, i-Propoxy, n-Butoxy, sek-Butoxy oder t-Butoxy. An die Alkyl- und Alkoxygruppen können auch andere Gruppen, wie Hydroxygruppen, Aminogruppen, Carboxamidogruppen, Carboxylsäuregruppen und deren Ester, Phosphorsäuregruppen und deren Ester oder Sulfonsäuregruppen und deren Ester gebunden sein.The electron donating groups Z 1 , Z 2 , Z 3 , Z 4 , Z 6 , Z 7 , Z 8 , Z 9 , Z 11 , Z 12 , Z 13 and / or Z 14 are preferably linear or branched alkyl groups such as methyl, Ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, sec-butyl, t-butyl or alkoxy groups such as methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, sec-butoxy or t-butoxy. Other groups such as hydroxy groups, amino groups, carboxamido groups, carboxylic acid groups and their esters, phosphoric acid groups and their esters or sulfonic acid groups and their esters may also be bonded to the alkyl and alkoxy groups.

Der Linker X haftet am chromophoren Teil, am chelatierenden Teil oder am zyklischen Teil des Moleküls.Of the Left X adheres to the chromophore part, the chelating part or at the cyclic part of the molecule.

Sind die Substituenten Z5, Z10 und/oder Z15 Gruppen, die eine Carboxylsäuregruppe enthalten, stellt eine Carboxymethoxygruppe eine vorteilhafte Gruppe dar.When the substituents Z 5 , Z 10 and / or Z 15 are groups containing a carboxylic acid group, a carboxymethoxy group is an advantageous group.

Enthalten die Substituenten Z5, Z10 und/oder Z15 Carboxylsäureester, stellt -OCH2COO-t-Bu, -OCH2COOEt, -OCH2COOMe oder -OCH2COOCH2Ph eine vorteilhafte Gruppe dar.If the substituents Z 5 , Z 10 and / or Z 15 contain carboxylic acid esters, -OCH 2 COO-t-Bu, -OCH 2 COOEt, -OCH 2 COOMe or -OCH 2 COOCH 2 Ph represents an advantageous group.

Die Gruppe R'' ist vorzugsweise Methyl, Ethyl, Allyl, Benzyl oder tert-Butyl. Ist das oben definierte A ein Säurehalid, ist das bevorzugteste Halid Chlorid. Ist das oben definierte A ein Carboxylsäureester, ist der genannte Ester vorzugsweise N-Hydroxysuccinimid, p-Nitrophenol- oder Pentafluorphenolester.The Group R "is preferably methyl, ethyl, allyl, benzyl or tert-butyl. If the above-defined A is an acid halide, the most preferable one is Halide chloride. If A defined above is a carboxylic acid ester, the said ester is preferably N-hydroxysuccinimide, p-nitrophenol or pentafluorophenol ester.

Die vorübergehende Schutzgruppe R2 ist vorzugsweise Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc), Nitrobenzensulfonyl (Ns), tert-Butoxycarbonyl (Boc) oder 1-1-Dioxobenzo[b]thiophen-2-ylmethyloxycarbonyl (Bsmoc).The temporary protecting group R 2 is preferably fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc), nitrobenzenesulfonyl (Ns), tert-butoxycarbonyl (Boc) or 1-1-dioxobenzo [b] thiophen-2-ylmethyloxycarbonyl (Bsmoc).

Ist R3 ein aktiver Ester einer Carboxylsäure, ist der genannte Ester vorzugsweise N-Hydroxysuccinimid, p-Nitrophenol- oder Pentafluorphenol.R 3 is an active ester of a carboxylic acid, the said ester preferably N-hydroxysuccinimide, p-nitrophenol, or pentafluorophenol.

Ist R3 ein Säurehalogenid einer Carboxylsäure, ist das genannte Halogenid vorzugsweise Chlorid oder Fluorid.When R 3 is an acid halide of a carboxylic acid, said halide is preferably chloride or fluoride.

Die Schutzgruppe R4 ist vorzugsweise Cyanoethyl. Die Alkylgruppen R5 und R6 sind vorzugsweise Isopropylgruppen. Ist A -E-O-PZ-O-R4, ist es vorzugsweise gewählt aus den Gruppen

Figure 00070001
worin – die Bindungsstelle des Linkers X und DTMr eine Dimethoxytritylgruppe ist.The protecting group R 4 is preferably cyanoethyl. The alkyl groups R 5 and R 6 are preferably isopropyl groups. When A is -EO-PZ-OR 4 , it is preferably selected from the groups
Figure 00070001
wherein - the binding site of the linker X and DTMr is a dimethoxytrityl group.

Die zu markierende bioaktive Substanz ist beispielsweise ein Oligopeptid, Oligonukleotid, Polypeptid, Polynukleotid, Protein, Oligosaccharid, Polysaccharid, Phospholipid, PNA, LNA, Antikörper, Hapten, Arzneimittel, Molekül, das an einen Rezeptor bindet, oder Lektin.The bioactive substance to be labeled is, for example, an oligopeptide, oligonucleotide, polypeptide, Polynucleotide, protein, oligosaccharide, polysaccharide, phospholipid, PNA, LNA, antibody, hapten, drug, molecule that binds to a receptor, or lectin.

Die Erfindung wird mittels des folgenden, nicht einschränkenden experimentellen Teils veranschaulicht.The Invention is by means of the following, non-limiting experimental part illustrated.

EXPERIMENTELLER TEILEXPERIMENTAL PART

Die Erfindung wird mittels folgender Beispiele näher erläutert.The Invention will be explained in more detail by means of the following examples.

BeispieleExamples

Beispiel 1. Herstellung von ChromophorenExample 1. Preparation of Chromophores

Die Synthese der als Ausgangssubstanz verwendeten Verbindungen 1a und 4a geht aus der Publikation [ US 5 055 578 ] hervor. Verbindung 1b und 4b wurden mit dem gleichen Verfahren hergestellt, wobei als Ausgangssubstanz 2,6-Dimethoxy-4-hydroxybenzaldehyd verwendet wurde. Die Diester 1a und 1b wurden mit Natriumborohydrid zu Methanolen 2a und 2b reduziert, wie in der Publikation [ Anal. Chem, 2003, 75, 3173 ] beschrieben. Bromisierung mit Phosphortribromid in trockenem DMF ergab die Bromide 3a und 3b. Das Verfahren ist in der Publikation [ Bioconjugate Chem. 2005, 16, 700 ] beschrieben.The synthesis of the compounds 1a and 4a used as starting substance is based on the publication [ US 5 055 578 ]. Compounds 1b and 4b were prepared by the same procedure using 2,6-dimethoxy-4-hydroxybenzaldehyde as the starting material. The diesters 1a and 1b were reduced with sodium borohydride to methanol 2a and 2b, as described in the publication [ Anal. Chem, 2003, 75, 3173 ]. Bromination with phosphorus tribromide in dry DMF gave the bromides 3a and 3b. The method is described in the publication [ Bioconjugate Chem. 2005, 16, 700 ].

Die Carboxylsäuregruppe der Verbindungen 4a und 4b wurden mit N-Hydroxysuccinimid in Anwesenheit von DCC zu aktivem Ester umgewandelt. Als Lösungsmittel wurde Dichlormethan eingesetzt. Nach der Reaktion wurde Aminoethylanilin zugegeben, wobei die Verbindungen 5a und 5b entstanden. Teilweise Reduzierung mit Natriumborohydrid, wie oben dargestellt, ergab die Alkohole 6a und 6b, deren aromatische Aminogruppe mithilfe eines Anhydrids der Trifluoressigsäure geschützt wurde, und die daraus resultierenden Verbindungen 7a und 7b wurden zu den Verbindungen 8a und 8b bromiert.The Carboxylic acid group of the compounds 4a and 4b were with N-hydroxysuccinimide converted to active ester in the presence of DCC. The solvent used was dichloromethane. To Aminoethylaniline was added to the reaction, the compounds 5a and 5b emerged. Partial reduction with sodium borohydride, As shown above, the alcohols 6a and 6b gave their aromatic Amino group using an anhydride of trifluoroacetic acid was protected, and the resulting connections 7a and 7b were brominated to compounds 8a and 8b.

Figure 00090001
Figure 00090001

Beispiel 2. Herstellung von TerbiumchelatenExample 2. Preparation of Terbium Chelates

Verbindung 8a wurde mit Di-tert-Butylester der [1,4,7]Triazazyklonan-1,4-dicarboxylsäure umgesetzt, wie in Publikation [US Patentanmeldung 11/004 061] beschrieben. Die Boc-Gruppen des Produkts 9 wurden durch eine Säurebehandlung entfernt und das resultierende Produkt mit Verbindung 3a in Anwesenheit von Kaliumcarbonat zu Produkt 10 alkyliert. Die Benzylgruppen wurden durch Hydratisieren entfernt [ US 5 055 578 ], wonach die Methylester und die Trifluoracetamidogruppe basenkatalytisch hydrolysiert wurden. Die Behandlung mit Terbiumcitrat ergab das Chelat 11, das mit Thiophosgen zur Verbindung 12 aktiviert wurde. Eine detaillierte Beschreibung des Verfahrens findet sich in Publikation [US Patentanmeldung 11/004 061].Compound 8a was reacted with di-tert-butyl ester of [1,4,7] triazacyclonane-1,4-dicarboxylic acid as described in Publication [US Patent Application 11 / 004,061]. The Boc groups of product 9 were removed by acid treatment and the resulting product was alkylated with compound 3a in the presence of potassium carbonate to give product 10. The benzyl groups were removed by hydration [ US 5 055 578 ], after which the methyl ester and the trifluoroacetamido group were hydrolyzed by base catalysis. Treatment with terbium citrate gave chelate 11, which was activated with thiophosgene to compound 12. A detailed description of the process can be found in Publication [US Patent Application 11 / 004,061].

Figure 00100001
Figure 00100001

Beispiel 3. Herstellung eines Oligonukleotidmarkierungsreagenses.Example 3. Preparation of an Oligonucleotide Labeling Reagent.

Verbindung 15 wurde unter Verwendung der in Publikation [US Patentanmeldung 11/004 061] beschriebenen Verfahren hergestellt. Kurz gesagt wurden die Nosylgruppen der Verbindung 13 mit Thiophenol in Anwesenheit einer Base entfernt. Die freien sekundären Aminogruppen wurden mit Verbindung 3b unter Verwendung von Kaliumcarbonat als Base alkylisiert. Die Tritylgruppe wurde mit einer Jodbehandlung entfernt [ J. Org. Chem. 1998, 63, 6021 ], wonach die freie Hydroxygruppe in trockenem Acetonitril mit 1H-Tetrazol als Katalysator phosphityliert wurde.Compound 15 was prepared using the methods described in Publication [US Patent Application 11 / 004,061]. Briefly, the nosyl groups of compound 13 were removed with thiophenol in the presence of a base. The free secondary amino groups were with compound 3b under Use of potassium carbonate as a base alkylated. The trityl group was removed with an iodine treatment [ J. Org. Chem. 1998, 63, 6021 ], after which the free hydroxy group was phosphitylated in dry acetonitrile with 1H-tetrazole as catalyst.

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Zitierte PatentliteraturCited patent literature

  • - US 4761481 [0007] - US 4761481 [0007]
  • - US 5055578 [0024, 0026] US 5055578 [0024, 0026]

Zitierte Nicht-PatentliteraturCited non-patent literature

  • - Anal. Chem, 2003, 75, 3173 [0024] - anal. Chem, 2003, 75, 3173 [0024]
  • - Bioconjugate Chem. 2005, 16, 700 [0024] - Bioconjugate Chem. 2005, 16, 700 [0024]
  • - J. Org. Chem. 1998, 63, 6021 [0027] J. Org. Chem. 1998, 63, 6021 [0027]

Claims (14)

Chelat der Formel (I), das für Markierung von bioaktiver Substanz in Lösung geeignet ist,
Figure 00120001
dadurch gekennzeichnet, dass – n 1 oder 2 ist, – A eine reaktive Gruppe für Bindung an die bioaktive Substanz, gewählt aus einer Gruppe bestehend aus Isothiocyanat, Bromoacetamido, Jodoacetamido, Maleimid, 4,6-Dichior-1,3,5-triazinyl-2-amino, Pyridyldithiol, Thioester, Aminooxy, Azid, Alkyn, Hydrazid, Amino, Carboxylsäure, Ester oder Säurehalid ist, – Z1 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z2 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z3 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z4 eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z5 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe, eine Carboxamidogruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält, – Z6 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z7 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z8 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z9 eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z10 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe, eine Carboxamidogruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält, – Z11 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z12 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z13 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z14 eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z15 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäuregruppe, eine Phosphorsäuregruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält, – X ein Linker ist, der aus einem bis zehn Teilen gebildet ist, von welchen jeder aus einer Gruppe bestehend aus Phenyl, Alkyl mit 1–12 Kohlenstoffatomen, Ethyndiyl (-C≡C-), Ethendiyl (-C=C-), Etter (-O-), Thioether (-S-), Amid (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH-CO- und -NR'-CO-), Carbonyl (-CO-), Ester (-COO- und -OOC-), Disulfid (-SS-), Sulfonamid (-SO2-NH-, -NH-SO2- , -NR'-SO2- und -SO2-NR'-), Sulfon (-SO2-), Phosphat (-O-PO2-O-), Diaza (-N=N-) und aus einem tertiären Amin (-NR'-) gewählt ist, wobei R' ein Alkyl mit weniger als fünf Kohlenstoffatomen ist und ein Wasserstoffatom der Grundstruktur ersetzt, – Ln Terbium, Dysprosium, Samarium oder Europium ist.Chelate of formula (I) suitable for labeling bioactive substance in solution,
Figure 00120001
characterized in that - n is 1 or 2, - A is a reactive group for binding to the bioactive substance selected from a group consisting of isothiocyanate, bromoacetamido, iodoacetamido, maleimide, 4,6-dichloro-1,3,5-triazinyl 2-amino, pyridyldithiol, thioester, aminooxy, azide, alkyn, hydrazide, amino, carboxylic acid, ester or acid halide, - Z 1 is hydrogen or an electron donating group, - Z 2 is hydrogen or an electron donating group, - Z 3 is hydrogen or an electron donating group, - Z 4 is an electron donating group, - Z 5 is a substituent which contains a carboxylic acid group, a phosphoric acid group, a carboxamido group or a sulfonic acid group, - Z 6 is hydrogen or an electron donating group, Z 7 is hydrogen or an electron donating group, Z 8 is hydrogen or an electron donating group, Z 9 is an electron donating group, Z 10 is a substitute is Zent which contains a carboxylic acid group, a phosphoric acid group, a carboxamido group or a sulfonic acid group, - Z 11 is hydrogen or an electron donating group, - Z 12 is hydrogen or an electron donating group, - Z 13 is hydrogen or an electron donating group, - Z 14 is an electron donating group, - Z 15 is a substituent containing a carboxylic acid group, a phosphoric acid group or a sulfonic acid group, - X is a linker formed from one to ten parts, each of which is selected from a group consisting of Phenyl, alkyl of 1-12 carbon atoms, ethynediyl (-C≡C-), ethenediyl (-C = C-), etter (-O-), thioether (-S-), amide (-CO-NH-, - CO-NR'-, -NH-CO- and -NR'-CO-), carbonyl (-CO-), esters (-COO- and -OOC-), disulfide (-SS-), sulfonamide (-SO 2 -NH-, -NH-SO 2 -, -NR'-SO 2 - and -SO 2 -NR'-), sulfone (-SO 2 -), phosphate (-O-PO 2 -O-), diaza ( -N = N-) and selected from a tertiary amine (-NR'-) where R 'is an alkyl of less than five carbon atoms and replaces a hydrogen atom of the parent, - Ln is terbium, dysprosium, samarium or europium. Chelat nach Schutzanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass Z1, Z2, Z3, Z4, Z6, Z7, Z8, Z9, Z11, Z12, Z13 und/oder Z14 Methyl, Ethyl, i-Propyl, n-Propyl, n-Butyl, sek-Butyl, t-Butyl, Methoxy, Ethoxy, i-Propoxy, n-Propoxy oder tert-Butoxy ist.Chelate for protection claim 1, characterized in that Z 1 , Z 2 , Z 3 , Z 4 , Z 6 , Z 7 , Z 8 , Z 9 , Z 11 , Z 12 , Z 13 and / or Z 14 methyl, ethyl, i-propyl, n-propyl, n-butyl, sec-butyl, t-butyl, methoxy, ethoxy, i-propoxy, n-propoxy or tert-butoxy. Chelat nach Schutzanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Substituent Z5, Z10 und/oder Z15 Carboxymethoxy ist.Chelate for protection claim 1, characterized in that the substituent Z 5 , Z 10 and / or Z 15 Car boxymethoxy is. Markierungsreagens mit der Formel (II), das zur Markierung einer bioaktiven Substanz auf der Oberfläche eines festen Trägers geeignet ist
Figure 00140001
dadurch gekennzeichnet, dass – n 1 oder 2 ist, – R -COOR'' oder -CONHR'' ist, wobei R'' ein Alkyl oder Phenyl oder Benzyl mit 1–4 Kohlenstoffatomen ist, wobei das Phenyl oder Benzyl substituiert oder unsubstituiert ist, – Z1 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z2 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z3 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z4 eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z5 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäureestergruppe, eine Sulfonsäureestergruppe, eine Phosphorsäureestergruppe, eine Sulfonsäuregruppe oder eine Carboxamidogruppe enthält, – Z6 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z7 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z8 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z9 eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z10 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäureestergruppe, eine Sulfonsäureestergruppe, eine Phosphorsäureestergruppe, eine Sulfonsäuregruppe oder eine Carboxamidogruppe enthält, – Z11 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z12 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z13 Wasserstoff oder eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z14 eine Elektronen abgebende Gruppe ist, – Z15 ein Substituent ist, der eine Carboxylsäureestergruppe, eine Sulfonsäureestergruppe oder eine Sulfonsäuregruppe enthält, – X ein Linker ist, der aus einem bis zehn Teilen gebildet ist, von welchen jeder aus einer Gruppe bestehend aus Phenyl, Alkyl mit 1–12 Kohlenstoffatomen, Ethynyldiyl (-C≡C-), Ethylendiyl (-C=C-), Ether (-O-), Thioether (-S-), Amid (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH-CO- und -NR'-CO-), Carbonyl (-CO-), Ester (-COO- und -OOC-), Disulfid (-SS-), Sulfonamid (-SO2-NH-, -NH-SO2-, -NR'-SO2- und -SO2-NR'-), Sulfon (-SO2-), Phosphat (-O-PO2-O-), Diaza (-N=N-) und aus einem tertiären Amin (-NR'-) gewählt. ist, wobei R' ein Alkyl mit weniger als fünf Kohlenstoffatomen ist und ein Wasserstoffatom der Grundstruktur ersetzt, – A eine reaktive Gruppe für Bindung an das Biomolekül ist, ausgewählt aus einer Gruppe bestehend aus Carboxylsäure oder deren Salz, Säurehalid, Ester oder einem Aminosäurerest -CH(NHR2)R3, worin R2 eine vorübergehende Schutzgruppe und R3 Carboxylsäure oder deren Salz, Säurehalid oder ein aktiver Ester ist, oder A ist -E-O-PZ-O-R4 worin ein Sauerstoffatom wahlweise durch ein Schwefelatom ersetzt ist, – Z Chlor oder NR5R6 ist, – R4 eine Schutzgruppe ist, – R5 und R6 Alkylgruppen sind, – E nicht anwesend oder ein Radikal einer Purin- oder Pyrimidinbase ist, das an ein Sauerstoffatom gebunden ist, entweder i) durch eine Kohlenwasserstoffkette, die mit einer geschützten Hydroxyethylgruppe substituiert ist, oder ii) durch einen Furan- oder Pyranring oder durch deren modifizierte Derivate, die eine Oligonukleotidsynthese ermöglichen.Labeling reagent of the formula (II), which is suitable for labeling a bioactive substance on the surface of a solid support
Figure 00140001
characterized in that - n is 1 or 2, - R is -COOR "or -CONHR", wherein R "is an alkyl or phenyl or benzyl of 1-4 carbon atoms wherein the phenyl or benzyl is substituted or unsubstituted - Z 1 is hydrogen or an electron donating group, - Z 2 is hydrogen or an electron donating group, - Z 3 is hydrogen or an electron donating group, - Z 4 is an electron donating group, - Z 5 is a substituent, Z 6 is hydrogen or an electron-donating group, - Z 7 is hydrogen or an electron-donating group, - Z 8 is hydrogen or an electron-donating group, Z 6 is hydrogen or an electron-donating group, Z 9 is an electron donating group, Z 10 is a substituent containing a carboxylic acid ester group, a sulfonic acid ester group, a phosphoric acid Z 11 is hydrogen or an electron donating group, - Z 12 is hydrogen or an electron donating group, - Z 13 is hydrogen or an electron donating group, - Z 14 is an electron donating group - Z 15 is a substituent containing a carboxylic acid ester group, a sulfonic acid ester group or a sulfonic acid group, - X is a linker formed from one to ten parts, each of which is selected from a group consisting of phenyl, alkyl of 1-12 carbon atoms Ethynyldiyl (-C≡C-), ethylenediyl (-C = C-), ether (-O-), thioether (-S-), amide (-CO-NH-, -CO-NR'-, -NH -CO- and -NR'-CO-), carbonyl (-CO-), esters (-COO- and -OOC-), disulfide (-SS-), sulfonamide (-SO 2 -NH-, -NH-SO 2 -, -NR'-SO 2 - and -SO 2 -NR'-), sulfone (-SO 2 -), phosphate (-O-PO 2 -O-), diaza (-N = N-) and from a tertiary amine (-NR'-) chosen. where R 'is an alkyl of less than five carbon atoms and replaces a hydrogen atom of the basic structure, - A is a reactive group for binding to the biomolecule selected from a group consisting of carboxylic acid or its salt, acid halide, ester or an amino acid residue, CH (NHR 2 ) R 3 , wherein R 2 is a transient protecting group and R 3 is carboxylic acid or its salt, acid halide or active ester, or A. -EO-PZ-OR 4 wherein an oxygen atom is optionally replaced by a sulfur atom, Z is chloro or NR 5 R 6 , R 4 is a protecting group, R 5 and R 6 are alkyl groups, E is not present or is a radical of a purine or pyrimidine base bonded to an oxygen atom, either i) by a hydrocarbon chain which is substituted by a protected hydroxyethyl group, or ii) by a furan or pyran ring or by their modified derivatives which allow oligonucleotide synthesis. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennnzekhnet, dass R'' tert-Butyl, Methyl, Ethyl, Allyl oder Benzyl ist.Labeling reagent for protection claim 4, characterized gekennnzekhnet that R '' tert-butyl, methyl, ethyl, allyl or benzyl is. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Substituenten Z5, Z10 und/oder Z15 -OCH2COO-t-Bu, -OCH2COOEt, -OCH2COOMe oder -OCH2COOCH2Ph ist.Labeling reagent for protection claim 4, characterized in that the substituents Z 5 , Z 10 and / or Z 15 is -OCH 2 COO-t-Bu, -OCH 2 COOEt, -OCH 2 COOMe or -OCH 2 COOCH 2 Ph. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass Z1, Z2, Z3, Z4, Z6, Z7, Z8, Z9, Z11, Z12, Z13 und/oder Z14 Methyl Ethyl, i-Propyl, n-Propyl, n-Butyl, sek-Butyl, t-Butyl, Methoxy, Ethoxy, i-Propoxy, n-Propoxy oder tert-Butoxy ist.Labeling reagent for protection claim 4, characterized in that Z 1 , Z 2 , Z 3 , Z 4 , Z 6 , Z 7 , Z 8 , Z 9 , Z 11 , Z 12 , Z 13 and / or Z 14 methyl ethyl, i Propyl, n-propyl, n-butyl, sec-butyl, t-butyl, methoxy, ethoxy, i-propoxy, n-propoxy or tert-butoxy. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die vorübergehende Schutzgruppe R2 Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc), Nitrobenzensulfonyl (Ns), tert-Butoxycarbonyl (Boc) oder 1-1-Dioxobenzo[b]thiophen-2-ylmethyloxycarbonyl (Bsmoc) ist.Labeling reagent according to protection claim 4, characterized in that the temporary protecting group R 2 is fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc), nitrobenzenesulfonyl (Ns), tert-butoxycarbonyl (Boc) or 1-1-dioxobenzo [b] thiophen-2-ylmethyloxycarbonyl (Bsmoc). Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppe R4 Cyanoethyl ist.Labeling reagent according to protection claim 4, characterized in that the protective group R 4 is cyanoethyl. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Alkylgruppe R5 und R6 Isopropyl ist.Labeling reagent according to protection claim 4, characterized in that the alkyl group R 5 and R 6 is isopropyl. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass A -E-O-PZ-O-R4 ist und es vorzugsweise gewählt ist aus den Gruppen
Figure 00160001
worin – die Bindungsstelle des Linkers X und DTMr eine Dimethoxytritylgruppe ist.Labeling reagent according to protection Claim 4, characterized in that A is -EO-PZ-OR 4 and it is preferably selected from the groups
Figure 00160001
wherein - the binding site of the linker X and DTMr is a dimethoxytrityl group. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4–11, dadurch gekennzeichnet, dass R'' Methyl, Ethyl, tert-Butyl, Allyl oder Benzyl ist.Labeling reagent according to protection claim 4-11, characterized in that R "is methyl, ethyl, tert-butyl, allyl or benzyl. Chelat nach Schutzanspruch 1–3, dadurch gekennzeichnet, dass die bioaktive Substanz ein Oligopeptid, Oligonukleotid, Polypeptid, Polynukleotid, Protein, Oligosaccharid, Polysaccharid, Phospholipid, PNA, LNA, Antikörper, Hapten, Arzneimittel, Molekül, das an einen Rezeptor bindet, oder Lektin ist.Chelate for protection claim 1-3, by in that the bioactive substance is an oligopeptide, oligonucleotide, Polypeptide, polynucleotide, protein, oligosaccharide, polysaccharide, Phospholipid, PNA, LNA, antibodies, hapten, drugs, Molecule that binds to a receptor or is lectin. Markierungsreagens nach Schutzanspruch 4–12, dadurch gekennzeichnet, dass die bioaktive Substanz ein Oligopeptid, Oligonukleotid, Polypeptid, Polynukleotid, Protein, Oligosaccharid, Polysaccharid, Phospholipid, PNA, LNA, Antikörper, Hapten, Arzneimittel, Molekül, das an einen Rezeptor bindet, oder Lektin ist.Labeling reagent according to protection claims 4-12, characterized in that the bioactive substance is an oligopeptide, oligonucleotide, polypeptide, polynucleotide, protein, oligosaccharide, polysaccharide, Phos pholipid, PNA, LNA, antibody, hapten, drug, molecule that binds to a receptor, or lectin.
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4761481A (en) 1985-03-18 1988-08-02 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Substituted pyridine derivatives
US5055578A (en) 1987-11-06 1991-10-08 Baxter Diagnostics Inc. Fluorescent poly(arylpyridine) rare earth chelates

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4761481A (en) 1985-03-18 1988-08-02 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Substituted pyridine derivatives
US5055578A (en) 1987-11-06 1991-10-08 Baxter Diagnostics Inc. Fluorescent poly(arylpyridine) rare earth chelates

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anal. Chem, 2003, 75, 3173
Bioconjugate Chem. 2005, 16, 700
J. Org. Chem. 1998, 63, 6021

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