DE202004005694U1 - Apparatus for testing a liquid, and especially for the detection of microorganisms in water has suction connections at a frame with an adaptor for a filter holder with a membrane - Google Patents

Apparatus for testing a liquid, and especially for the detection of microorganisms in water has suction connections at a frame with an adaptor for a filter holder with a membrane Download PDF

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Abstract

Apparatus to test a liquid, and especially water for the presence of microorganisms, has one or more suction connections at a frame, with an adaptor over them with a mounted filter holder with a cellulose acetate or polymer filter membrane. A removable funnel is on the filter holder. A DNA bonding column is between the suction connections and the adaptor.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Gerätesystem zur Flüssigkeitsuntersuchung.The present invention relates to device system for fluid testing.

Der effiziente Nachweis von Keimen in Trink- und Brauchwasser sowie in wassertechnischen Anlagen ist in vielen Bereichen notwendig: Sicherung der kommunalen Wasserversorgung, Infektionsschutz in Hotels, Krankenhäuser, Schulen, Schwimmbäder, Saunaanlagen, Seniorenheime, Wohnkomplexe und Privathaushalte, industrielle Anlagen, Wasser für die Lebensmittelproduktion, Grünanlagenbewässerung sowie anfallendes Kondenswasser, z.B. in Klimaanlagen und Raumluftbefeuchtern.The efficient detection of germs in drinking and industrial water as well as in water engineering systems necessary in many areas: securing the municipal water supply, Protection against infection in hotels, hospitals, schools, swimming pools, sauna facilities, Retirement homes, residential complexes and private households, industrial plants, Water for food production, green area irrigation and accumulating condensate, e.g. in air conditioners and room humidifiers.

Herkömmliche Methoden zur Wasseruntersuchung auf Belastungen durch Mikroorganismen basieren auf dem kulturellen Nachweis der vergleichsweise einfach zu detektierenden Fäkalkeime, wie z.B. Echerichia coli. Man ging davon aus, dass die Abwesenheit dieser Indikatorkeime auch die Abwesenheit von anderen Krankheitserregern bedeutet. Diese Annahme war nur für kaltes Wasser, jedoch nicht für Warmwasser oder Prozesswasser gültig.Conventional methods for water analysis on exposure to microorganisms are based on the cultural Detection of the comparatively easy to detect faecal germs, such as e.g. Echerichia coli. It was believed that the absence of this Indicator germs include the absence of other pathogens means. This assumption was only for cold water, but not for hot water or process water valid.

Neue gesetzliche Grundlagen verlangen nun auch den direkten Nachweis anderer Keime, so z.B. seit 1998 die ISO-Norm 11371-2 für Legionellen oder die im Januar 2003 in Deutschland in Kraft getretene TrinkwV2001. Danach wird das Probenwasser über einen offenen Filter filtriert, der Filter entnommen und auf einen Keim-spezifischen Nährboden gelegt. Die Nährböden werden dann über mehrere Tage bebrütet, bis die Keime zu sichtbaren Kolonien herangewachsen sind. Die Nährstoffversorgung soll dabei durch Diffusion durch die Filtermembran gewährleistet werden.Demand new legal bases now also the direct detection of other germs, e.g. since 1998 the ISO standard 11371-2 for legionella or the TrinkwV2001, which came into force in Germany in January 2003. Then the sample water is over a Open filter filtered, the filter removed and placed on a germ-specific fertile soil placed. The breeding grounds are then over incubated for several days, until the germs have grown into visible colonies. The nutrient supply should be ensured by diffusion through the filter membrane become.

Modernere Verfahren gehen ebenfalls von einer Anreicherung der Keime durch Filtration aus. Die Oberfläche der Filtrationsmembran wird dann mit einem Wattestab abgestrichen, der Wattestab in einer Pufferlösung ausgespült und mit dem Eluat ein immunologischer Nachweis mit Farbumschlag (z.B. BINAX 45 Minute EQUATE Environmental Legionella Test, Binax, USA) oder ein Nukleinsäurenachweis auf Basis der Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) durchgeführt (MicroDetect® legionella spp. DNA Detection kit, IQ Products, Niederlande).More modern processes also assume that the germs are enriched by filtration. The surface of the filtration membrane is then wiped off with a cotton swab, the cotton swab is rinsed out in a buffer solution and the eluate is used for immunological detection with a color change (e.g. BINAX 45 Minute EQUATE Environmental Legionella Test, Binax, USA) or a nucleic acid detection based on the polymerase chain reaction (PCR) (MicroDetect ® legionella spp. DNA Detection kit, IQ Products, Netherlands).

Ein molekularbiologisches Verfahren nutzt Gensonden zum Nachweis von Wasserkeimen. Nach einer Vorkultivierung in Nährbouillons wird ein Aliquot in einem speziellen Reaktionsgefäß mit einem Fluoreszenzfarbstoff markierten Oligonukleotid inkubiert. Die gefärbten Mikroorganismen müssen dann mit einem Fluoreszenzphotometer optisch detektiert werden (ScanVit-Produkte, Vermicon AG, Deutschland) .A molecular biological process uses gene probes to detect water germs. After pre-cultivation in nutrient bouillons an aliquot in a special reaction vessel with a Fluorescent dye-labeled oligonucleotide incubated. The colored microorganisms have to then optically detected with a fluorescence photometer (ScanVit products, Vermicon AG, Germany).

Keines dieser Verfahren und Gerätesysteme erfüllt die Anforderungen hinsichtlich einer hohen Sensitivität, hohen Reproduzierbarkeit, eines schnellen Ergebnisses und der geforderten Quantifizierung der Wasserkeime.None of these processes and device systems meet the Requirements regarding high sensitivity, high Reproducibility, a quick result and the required Quantification of water germs.

Das Kulturverfahren z.B. für Legionellen wird durch ISO 11371-2 beschrieben. Das Verfahren erlaubt eine semiquantitative Auswertung nach frühestens 10 Tagen. Die Auswertung der Kolonien wird häufig durch Kontaminationen erschwert. Obwohl Kulturplatten kommerziell angeboten werden, sind vergleichbare und reproduzierbare Ergebnisse bei diesem Verfahren selten.The culture process e.g. for legionella is described by ISO 11371-2. The method allows a semi-quantitative Evaluation after earliest 10 days. The evaluation of the colonies is often due to contamination difficult. Although culture plates are offered commercially, they are comparable and reproducible results are rare with this procedure.

Die Abnahme der Keime von der Membranoberfläche hingegen kann nicht quantitativ erfolgen und verschlechtert dadurch deutlich die Nachweisgrenze. Ein immunologischer Färbetest der filtrierten Keime birgt weiterhin den Nach teil, dass z.B. für den Legionellennachweis nur die Spezies Legionella pneumophila Serogruppe 1 nachgewiesen wird, die jedoch nur 50 bis 60 % aller Legionelleninfektionen hervorruft.The removal of the germs from the membrane surface, however cannot be done quantitatively and therefore deteriorates significantly the detection limit. An immunological staining test of the filtered germs still has the disadvantage that e.g. for the Legionella proof only the species Legionella pneumophila serogroup 1 is detected, which however only causes 50 to 60% of all Legionella infections.

Bei der Verwendung der PCR als Nachweismethode können Keime Gruppen- und Spezies-spezifisch und sehr sensitiv nachgewiesen werden. Das Problem ist jedoch, dass für die PCR üblicherweise nur 2 bis 10 µl Probenvolumen eingesetzt werden können. Die gesetzlich geforderten Nachweisgrenze von wenigen Keimen pro 100 ml Wasser kann bei einer direkten Entnahme aus der Probe ohne vorherige Konzentrierung nicht erreicht werden. Das geforderte Probenvolumen von 100 ml bzw. 1 Liter muss vor der Analyse um den Faktor 1:10.000 konzentriert werden, ohne die enthaltenen Keime bzw. deren DNA zu verlieren.When using PCR as a detection method can Germs specific to groups and species and detected very sensitively become. The problem, however, is that usually only 2 to 10 µl sample volume for PCR can be used. The legally required detection limit of a few germs per 100 ml of water can be taken directly from the sample without previous concentration cannot be achieved. The required sample volume of 100 ml or 1 liter must be before the analysis by a factor of 1: 10,000 be concentrated without losing the germs contained or their DNA.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Vorrichtung zur Flüssigkeitsuntersuchung zu liefern.The invention has for its object a Liquid inspection device to deliver.

Die Aufgabe wird gelöst durch ein Gerätesystem, bei dem sich an einem Rahmen ein oder mehrere Ansaugstutzen befinden auf die über einen Adapter ein Filterhalter mit Filtrationsmembran befestigt ist, wobei sich auf dem Filterhalter ein abnehmbarer Trichter befindet.The task is solved by a device system, where one or more intake manifolds are located on a frame on the over an adapter attached to a filter holder with a filtration membrane with a removable funnel on the filter holder.

Das Gerätesystem kann für die molekularbiologische Untersuchung von Wasser auf Mikroorganismen verwendet werden. Hierzu ist die Filtration von Wasser oder wässrigen Lösungen möglich. Die abgeschiedenen Mikroorganismen werden dabei direkt in den Komponenten der Absaugbank aufgeschlossen. Durch eine Umgestaltung der Komponenten in der Absaugbank wird dann freigesetzte Ribonukleinsäure gebunden, gewaschen und konzentriert eluiert.The device system can be used for molecular biological Examination of water for microorganisms can be used. For this it is possible to filter water or aqueous solutions. The separated microorganisms are unlocked directly in the components of the suction bench. By redesigning the components in the suction bench released ribonucleic acid bound, washed and concentrated eluted.

Durch das Gerätesystem der vorliegenden Erfindung werden die Vorteile der PCR-Technologie für Wasseruntersuchungen durch eine reproduzierbare Probenaufarbeitung effizient nutzbar gemacht.By the device system of the present invention will take advantage of PCR technology for water testing reproducible sample processing efficiently used.

Das Gerätesystem besteht aus einer multifunktionalen Absaugeinheit, die in einem ersten Arbeitsschritt die Filtration von 100 bis 1000 ml Wasser ermöglicht. In einem zweiten Schritt wird der Trichter abgenommen.The device system consists of a multifunctional suction unit in a first step enables the filtration of 100 to 1000 ml of water. In a second step the funnel is removed.

Zwischen Ansaugstutzen und Adapter ist vorzugsweise eine DNS-Bindungssäule einsteckbar angeordnet. Ein Vorteil der vorliegenden Erfindung ist, dass das Gerätesystem derart umgestaltet werden kann, dass der Adapter von der Absaugbank genommen wird und auf eine DNS-Bindungssäule, sogenanntes Spin Column, gesteckt wird. Der Filterhalter wird mit einem kleineren Trichter versehen und auf den Adapter gesteckt. Unter Vakuum wird nun das Lysat mit Equilibrierungs- und Waschpuffer durch die Filtermembran in die DNS-Bindungsmatrix gespült, die in der DNS-Bindungssäule immobilisiert vorliegt. In Abhängigkeit von der Beschaffenheit der für die Lyse verwendeten Begleitchemikalien und Equilibrierungsreagenzien können beliebige DNS-Bindungsmaterialien verschiedener Hersteller verwendet werden. Durch Variation des Adapters und des Adaptersitzes auf der Absaugbank ist das Gerätesystem für DNS-Bindungssäulen verschiedener Hersteller offen.A DNA binding column is preferably inserted between the intake manifold and the adapter. An advantage of the present invention is that the device system can be redesigned in such a way that the adapter is removed from the suction bench and placed on a DNA binding column, known as a spin column. The filter holder is provided with a smaller funnel and placed on the adapter. Under vacuum, the lysate is then washed with equilibration and washing buffer through the filter membrane into the DNA binding matrix, which is immobilized in the DNA binding column. Depending on the nature of the accompanying chemicals and equilibration reagents used for the lysis, any DNA binding materials from different manufacturers can be used. By varying the adapter and the adapter seat on the suction bench, the device system for DNA binding columns from different manufacturers is open.

Die DNS-Bindungssäule wird aus dem Gerätesystem entnommen und nach Zugabe geringer Volumina an Elutionspuffer durch Zentrifugation der DNS eluiert. Diese DNS enthält bis zu 50 % der Gesamt-DNS-Menge der ursprünglichen Wasserprobe in z.B. 100 µl Elutionspuffer.The DNA binding column becomes the device system removed and after adding small volumes of elution buffer Centrifugation of the DNA eluted. This DNA contains up to 50% of the total amount of DNA the original Water sample in e.g. 100 µl Elution buffer.

Der Nachweis der Mikroorganismen erfolgt in Abhängigkeit vom gewählten PCR-System spezifisch für die einzelnen Keime, z.B. für coliforme Bakterien, Staphylokokken, Enterobakterien, oder Enterokokken. Dazu werden 5 µl des gewonnenen Extraktes für den Nachweis eines Keims eingesetzt und bei Vorhandensein des Keims durch Vervielfältigung spezifischer DNS-Abschnitte sichtbar gemacht. Dabei bietet sich vor allem die real-time PCR als quantitative Methode an, da auch das Gerätesystem eine reproduzierbare und quantitative Extraktion erlaubt. Die Nachweisgrenze liegt dabei um das 100fache höher als bei Kultur- und den Wischverfahren, da nahezu alle in der Wasserprobe enthaltenen Keime in die Analyse eingehen. Die vorhandene DNS der Keime wird direkt nachgewiesen. Auf das zeitaufwendige Anwachsen der Keime kann verzichtet werden.The detection of microorganisms takes place depending from the chosen one PCR system specific for the individual germs, e.g. For coliform bacteria, staphylococci, enterobacteria, or enterococci. 5 µl of the extract obtained for detection of a germ and in the presence of the germ by reproducing more specific DNS sections made visible. Above all, this offers real-time PCR as a quantitative method, as is the device system reproducible and quantitative extraction allowed. The limit of detection is 100 times higher than with culture and wiping processes, since almost all of them are in the water sample included germs in the analysis. The existing DNS of the Germs are detected directly. The time-consuming growth the germ can be dispensed with.

Mit Hilfe des Gerätesystems können bis zu 20 verschiedene Wasserkeime gleichzeitig in einem Liter Probenwasser nachgewiesen werden. Das Kulturverfahren benötigt für jeden nachzuweisenden Keim je 1 Liter des Probenwassers sowie verschiedenen Nährböden und Kulturbedingungen.With the help of the device system, up to 20 different ones can be used Water germs detected simultaneously in one liter of sample water become. The culture process needed for each germ to be detected per 1 liter of the sample water and various Culture media and Culture conditions.

Die Filtrationsmembran ist bevorzugt eine hydrophile Filtrationsmembran.The filtration membrane is preferred a hydrophilic filtration membrane.

Vorzugsweise besteht die Filtrationsmembran aus Celluloseacetat(Cac, Sartorius, Göttingen), Polysulphon (Seitz Schenk Filtersystems GmbH, Bad Kreuznach, Deutschland und ELIPSA GmbH, Berlin, Deutschland), Peptidylglycin (PAM, alpha-amidiert; Enka AG, Wuppertal, Deutschland), Nylon (Schleicher & Schuell GmbH, Dassel, Deutschland), Polyester (PES; ELIPSA GmbH, Berlin, Deutschland), hydrophylisiertes Polypropylen (HPP; Pall Corp., East Hills, USA) oder Diglicidylether-dimethacrylat (GMA; ELIPSA GmbH, Berlin, Deutschland) mit Poren von 0,1 bis 1 µm, z.B. 0,1, 0,2 oder 0,45 µm, je nach Beschaffenheit der Wasserprobe.The filtration membrane is preferably present Made from cellulose acetate (Cac, Sartorius, Göttingen), polysulphone (Seitz Schenk Filtersystems GmbH, Bad Kreuznach, Germany and ELIPSA GmbH, Berlin, Germany), peptidylglycine (PAM, alpha-amidated; Enka AG, Wuppertal, Germany), nylon (Schleicher & Schuell GmbH, Dassel, Germany), Polyester (PES; ELIPSA GmbH, Berlin, Germany), hydrophylized Polypropylene (HPP; Pall Corp., East Hills, USA) or diglicidyl ether dimethacrylate (GMA; ELIPSA GmbH, Berlin, Germany) with pores of 0.1 to 1 µm, e.g. 0.1, 0.2 or 0.45 µm, depending on the nature of the water sample.

Die Porengröße der zur Filtration verwendeten Membran ist zur Rückhaltung von Mikroorganismen geeignet. Die Filtrationsmembran wird jedoch so ausgewählt, dass Nukleinsäure nicht oder in nur geringem Maße absorbiert oder zurückhält sowie gegen chaotrophe und alkoholische Reagenzien und lysierende Enzyme innert ist.The pore size used for filtration Membrane is for containment of microorganisms. The filtration membrane, however selected so that nucleic acid not or only to a small extent absorbs or retains as well against chaotrophic and alcoholic reagents and lysing enzymes is inside.

Die Filtrationsmembran weist vorzugsweise eine geringe DNS-Bindungsaffinität auf, um in der Probe enthaltene freie DNS, z.B. von abgestorbenen Bakterien, nicht zu detektieren. Diese Membran kann zur Abscheidung verschiedenster nachzuweisender Organismen verwendet werden. Die Membran ist gegenüber den verwendeten Reagenzien chemisch innert.The filtration membrane preferably has one low DNA binding affinity free DNA contained in the sample, e.g. of dead bacteria, not detectable. This membrane can be used for the most diverse deposition organisms to be detected. The membrane is opposite used reagents chemically inert.

Der Filterhalter besitzt vorzugsweise über der Filtrationsmembran ein Reservoir für die Aufnahme von Reagenzien. Er wird derart gewählt, das über der Filtrationsmembran ein Reservoir von bis zu 1 ml mit Reagenzien befüllt werden kann. Dieses Reservoir wird mit einem Lysepuffer gefüllt, der Tenside und Enzyme (z. B. Proteinase K und/oder Lysozym) enthält. Die Mikroorganismen auf der Membran werden durch diese Reagenzien zerstört und die in den Mikroorganismen enthaltene DNS freigesetzt. Die Reaktionsbedingungen erlauben die Lyse von unterschiedlichsten Mikroorganismen, wie z.B. Gram(+)- und Gram(-)-Bakterien, aber auch von Protozoen.The filter holder preferably has over the Filtration membrane is a reservoir for the uptake of reagents. He is chosen that about the Filtration membrane a reservoir of up to 1 ml with reagents filled can be. This reservoir is filled with a lysis buffer, which Contains surfactants and enzymes (e.g. proteinase K and / or lysozyme). The Microorganisms on the membrane are destroyed by these reagents and the released DNA contained in the microorganisms. The reaction conditions allow the lysis of various microorganisms, e.g. Gram (+) and Gram (-) bacteria, but also from protozoa.

Bevorzugt ist der Adapter für die Verbindung eines Filterhalters mit einer DNS-Bindungssäule oder einem Ansaugstutzen ausgebildet. Die Verbindung zwischen Adapter und Filterhalter oder DNS-Bindungssäule wird durch eine Steck-, Schraubverbindung oder durch einen Bajonettverschluss hergestellt.The adapter for connecting one is preferred Filter holder with a DNA binding column or an intake port educated. The connection between adapter and filter holder or DNA binding column is by a plug, screw connection or by a bayonet lock manufactured.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist ein Kontrollkeim enthalten. Dabei wird die Wasserprobe mit einem Kontrollkeim versetzt, dessen DNS bei einem fehlerfreien Ablauf des Systems im Detektionssystem ein spezifisches Signal gibt, wodurch falsch-negative Ergebnisse ausgeschlossen werden können.In a preferred embodiment The invention includes a control seed. The water sample with a control germ, the DNA of which is free from errors Sequence of the system in the detection system gives a specific signal, whereby false negative results can be excluded.

Der Kontrollkeim verhält sich bei der Filtration und Lyse wie die zu detektierenden Wasserkeime.The control germ behaves in filtration and lysis like the water germs to be detected.

Vorzugsweise ist der Kontrollkeim im bearbeiteten Untersuchungsmaterial nachweisbar. Der besondere Vorteil des Systems ist, dass durch die Zugabe eines Kontrollkeims, der ein Kontrollplasmid enthält, sämtliche Prozessschritte des Systems überprüft werden können. So kann z.B. der Wasserprobe E. coli mit definierter Konzentration beigefügt werden. Diese Keime enthalten ein Kontrollplasmid, das neben dem eigentlichen Zielkeim in der PCR ein weiteres Signal gibt (Multiplex-PCR), wenn Filtration, Aufschluss und Extraktion des Systems fehlerfrei erfolgt sind.The control germ is preferably detectable in the processed test material. The special one The advantage of the system is that by adding a control germ, which contains a control plasmid, all Process steps of the system are checked can. For example, the E. coli water sample with a defined concentration enclosed become. These germs contain a control plasmid, which is next to the gives the actual target germ in the PCR another signal (multiplex PCR), if the filtration, digestion and extraction of the system are error-free have taken place.

Ein weiterer Vorteil des Systems ist, dass das gewonnene Probenmaterial direkt in die PCR eingesetzt werden kann. Bei den Wischverfahren können Substanzen aus der Probe in den PCR-Ansatz gelangen und die Reaktion inhibieren. Ein weiterer Arbeitsschritt zur Aufreinigung des Probenmaterials wird dann notwendig.Another advantage of the system is that the sample material obtained can be used directly in the PCR. In the wiping process substances from the sample can enter the PCR mixture and inhibit the reaction. A further step for the purification of the sample material is then necessary.

Die notwendige Arbeitszeit für den Nachweis dieser 20 verschiedenen Wasserkeime beträgt ca. 25 Minuten. Herkömmliche Verfahren benötigen einen vergleichbaren Arbeitsaufwand, jedoch für den Nachweis von nur einem Wasserkeim. Das Ergebnis steht mit dem Gerätesystem bereits nach 3,5 Stunden fest und nicht erst nach Tagen, wodurch bei Belastungen sofort gehandelt werden kann und Erkrankungen vermieden werden können.The necessary working time for the proof of this 20 different water germs is about 25 minutes. conventional Need procedures a comparable workload, but for the proof of only one Water germ. The result is already available after 3.5 hours with the device system firm and not only after days, which means that the action is immediate can be and diseases can be avoided.

Das beschriebene System weist keine freie DNA abgestorbener Keime nach. Diese DNA wird beim ersten Waschschritt von der Filtrationsmembran in das Abwasser freigesetzt. Die PCR-Nachweismodule sind mit 99 % extrem spezifisch und weisen nur den gewünschten Keim nach. Die Probleme bei herkömmlichen Verfahren mit Kontaminationen durch andere Wasserkeime werden mit dem Gerätesystem gelöst.The system described has none free DNA of dead germs. This DNA is used in the first washing step released from the filtration membrane into the wastewater. The PCR detection modules are extremely specific with 99% and only show the desired one Germinate. The problems with conventional Procedures with contamination from other water germs are included the device system solved.

Im folgenden wird die Erfindung anhand von Figuren näher beschreiben. Im einzelnen zeigt:The invention is explained below of figures closer describe. In detail shows:

1: einen Aufbau des Gerätesystems für die Filtration, 1 : a structure of the device system for filtration,

2: einen Aufbau des Gerätesystems für die DNS-Extraktion, 2 : a structure of the device system for DNA extraction,

3: das Ergebnis einer Legionellenuntersuchung mit quantitativer real-time PCR und 3 : the result of a Legionella examination with quantitative real-time PCR and

4: das Ergebnisse für den Nachweis von Legionella pneumophila unter Beigabe einer Prozesskontrolle. 4 : the results for the detection of Legionella pneumophila with the addition of a process control.

1 zeigt den Aufbau des Gerätesystems 1 für die Filtration. Dabei sind in einem Rahmen 2 (hier einer Arbeitsbank) Ansaugstutzen 3 angebracht, an denen sich ein Ventil 12 befindet. Ein Filterhalter 4 ist über einen Adapter 5 mit dem Ansaugstutzen 3 verbunden. Auf den Filterhalter 4 ist ein Trichter 6 aufgesetzt mit dem die zu untersuchende Flüssigkeit auf die Filtrationsmembran 7 geleitet wird. 1 shows the structure of the device system 1 for filtration. Are in a frame 2 (here a workbench) intake manifold 3 attached to which there is a valve 12 located. A filter holder 4 is via an adapter 5 with the intake manifold 3 connected. On the filter holder 4 is a funnel 6 with which the liquid to be examined is placed on the filtration membrane 7 is directed.

Der Filterhalter 4 besteht aus einem Oberteil 8 und einem Unterteil 9, die miteinander verbunden werden können und durch einen Dichtungsring 10, z.B. aus Silikon, abgedichtet sind. In dem Filterhalter 4 befindet sich die Filtrationsmembran 7.The filter holder 4 consists of a top 8th and a bottom 9 that can be connected together and by a sealing ring 10 , for example made of silicone, are sealed. In the filter holder 4 is the filtration membrane 7 ,

Die 2 zeigt das Gerätesystem 1 für die DNS-Extraktion. Hierbei ist zwischen dem Ansaugstutzen 3 und dem Adapter 5 eine DNS-Bindungssäule 11 zwischengeschaltet.The 2 shows the device system 1 for DNA extraction. Here is between the intake manifold 3 and the adapter 5 a DNA binding column 11 interposed.

Die 3 zeigt das Ergebnis einer Legionellenuntersuchung mit quantitativer real-time PCR. In der 3 ist dabei die Anzahl der Zyklen (X-Achse) gegen die Fluoreszenz (Y-Achse) aufgetragen worden. In 3 zeigen a, b und c Einzelansätze einer Wasserprobe mit einer Legionellenkonzentration entsprechend der Nachweisgrenze des Gerätesystems 1 (60 Genome/100ml) und d und e zeigen Einzelansätze einer Probe mit einer üblicherweise beobachteten Legionellenkonzentration (1000 Genome/100ml) in verunreinigtem Wasser.The 3 shows the result of a Legionella examination with quantitative real-time PCR. In the 3 the number of cycles (X-axis) was plotted against the fluorescence (Y-axis). In 3 show a, b and c individual batches of a water sample with a legionella concentration corresponding to the detection limit of the device system 1 (60 genomes / 100ml) and d and e show single batches of a sample with a commonly observed legionella concentration ( 1000 Genome / 100ml) in contaminated water.

Die 4 zeigt das Ergebnis für den Nachweis von Legionella pneumophila unter Beigabe einer Prozesskontrolle, mit konventioneller PCR. Das System enthielt dabei ein Kontrollplasmid zur Kontrolle der Arbeitsschritte (A: 100bp Größenabstand; B: Negativkontrolle; C: Positivkontrolle; D: 1000 Keime/ml; E: 100 Keime/ml; F: 10 Keime/ml; G: 1 Keim/ml; I: Prozesskontrolle; L: Legionella pneumophilia).The 4 shows the result for the detection of Legionella pneumophila with the addition of a process control, with conventional PCR. The system contained a control plasmid to control the work steps (A: 100 bp size difference; B: negative control; C: positive control; D: 1000 germs / ml; E: 100 germs / ml; F: 10 germs / ml; G: 1 germ / ml; I: process control; L: Legionella pneumophilia).

Claims (9)

Gerätesystem (1) zur Flüssigkeitsuntersuchung, da durch gekennzeichnet, dass sich an einem Rahmen (2) ein oder mehrere Ansaugstutzen (3) befinden auf die über einen Adapter (5) ein Filterhalter (4) mit Filtrationsmembran (7) befestigt ist, wobei sich auf dem Filterhalter (4) ein abnehmbarer Trichter (6) befindet.Device system ( 1 ) for fluid analysis, as it is characterized by the fact that a frame ( 2 ) one or more intake manifolds ( 3 ) are on the via an adapter ( 5 ) a filter holder ( 4 ) with filtration membrane ( 7 ) is attached, with the filter holder ( 4 ) a removable funnel ( 6 ) is located. Gerätesystem (1) nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass zwischen Ansaugstutzen (3) und Adapter (5) eine DNS-Bindungssäule (11) einsteckbar angeordnet ist.Device system ( 1 ) according to claim 1, characterized in that between the intake manifold ( 3 ) and adapter ( 5 ) a DNA binding column ( 11 ) is arranged to be insertable. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtrationsmembran (7) eine hydrophile Filtrationsmembran (7) ist.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 or 2, characterized in that the filtration membrane ( 7 ) a hydrophilic filtration membrane ( 7 ) is. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtrationsmembran aus Celluloseacetat, Polysulphon, Peptidylglycin, Ny-lon, Polyester, hydrophylisiertes Polypropylen oder Diglicidylether-dimethacrylat besteht.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 to 3, characterized in that the filtration membrane consists of cellulose acetate, polysulfone, peptidylglycine, Ny-ion, polyester, hydrophylized polypropylene or diglicidyl ether dimethacrylate. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtrationsmembran (7) eine geringe DNS-Bindungsaffinität aufweist.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 to 4, characterized in that the filtration membrane ( 7 ) has a low DNA binding affinity. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass der Filterhalter (4) über der Filtrationsmembran (7) ein Reservoir für die Aufnahme von Reagenzien besitzt.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 to 5, characterized in that the filter holder ( 4 ) over the filtration membrane ( 7 ) has a reservoir for the reception of reagents. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass der Adapter (5) für die Verbindung eines Filterhalters (4) mit einer DNS-Bindungssäule (11) oder einem Ansaugstutzen (3) ausgebildet ist.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 to 6, characterized in that the adapter ( 5 ) for connecting a filter holder ( 4 ) with a DNA binding column ( 11 ) or an intake manifold ( 3 ) is trained. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass ein Kontrollkeim enthalten ist.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 to 7, characterized in that a control germ is contained. Gerätesystem (1) nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass der Kontrollkeim im bearbeiteten Untersuchungsmaterial nachweisbar ist.Device system ( 1 ) according to one of claims 1 to 8, characterized in that the control germ is detectable in the processed test material.
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